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GammaCoat® Plasma Renin Activity

1. O PRA pH 6 0 GammaCoat yia
2. KIT TO 515 EDTA
3. 100 va 24 PRA
4. PRA Av PRA PRA EPEUVNT G 27 30 14 KIT PRA
5. in vitro NRC 94 6 7 1 H ETTIONNAONEVO
6. Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts CDC 22 1976 1999 45 EE R20 21 22 R32 Ze S28 ro
7. 7 1 7 2 37 2 C 7 3 7 4 1 2 3 5 mL 7 5 100 mL 7 6 10 100 500 1000 pL 7 7 7 8 12 x 75 95 9 7 9 7 10 7 11 7 12 8 1 8 2 8 3 vortex
8. C HCV HIV Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 1999 Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 93
9. 2 0 mL va 2 8 C 20 C 2 mL BSA O 0 2 0 8 3 0 10 0 50 0 ng mL DiaSorin O
10. H TO H WG GammaCoat 90 3
11. 5 IU mL dev 5 Ta H PH To pH
12. in vitro 5 IN VITRO eykekpiu vn FDA HBsAg HCV HIV 1 2 Av
13. WG KIT vouoyp gnua PRA 14 1 24 PRA 24wpou II
14. pH pH H GammaCoat 91 4 ME TO KIT 1 100 5 100 1 10 mL 5 10 mL
15. 2 27 C 4 3 11X rou 100 mL 10 mL 0 1 4 4 5 mL EDTA 0 1 WG 4 5 1 mL
16. To aipa 20 C PRA 2 8 C 20 C 20 21 AINOAU NEVA
17. ad libitum 8 10 Ill PRA TO TO 101 Il PRA HE Na 1 mEq 24wpo ng mL hr 0 30 16 34 7 52 30 75 5 91 1 82 75 150 2 12 0 68
18. 9 2 GammaCoat 1 2 Bo 1 2 va 2325 ng 0 1 mL T1 T2 1 2 I 0 ng mL A 0 3 4 0 2 ng mL B 0 02 5 6 0 8 ng mL C 0 08 7 8 3 0 ng mL D 0 30 9 10 10 0 ng mL E 1 0 11 12
19. H D Rodbard 1978 5 H 0 018 15 2 H H ng mL hr ng mL hr 20 1 6 0 16 10 0 A 20 6 2 0 28 4 6 B 20 1
20. 45 5 mL ro TO vortex 100 mL 2 8 C KIT 1 lt 1 ug mL I 5 mL 4 2 Oi 12 x 75
21. ng 37 ng 4 12 PRA 12 1 12 2 12 3 12 4 12 5 H PRA ng mL hr ng mL hr 4 37 ng ng 37 ng 4 C 0 1 mLc S B I 1 0 mLg 0 1mLg 0 01mL Wimax 1 0mLs 100 re 1 5 ng 37 ng 4 1 11mL 0 1mLc 1 00 mL PRA 1 5 PRA 7
22. PRA TOU 520 PRA 3 mL 0 1 4 7 A F
23. up otpwpa ayyeiorevoivn I dyyeloreveryn Il H Il in vivo H Il LOPES Il Ol Il
24. KIT 1999 45 EE R11 16 S43
25. PMSF R23 24 25 ro S36 S45 R35 826 S37 39 125 2 uCi 74 CA 1533 10 Ci 370 kBq CA 1553 125
26. PRA 2 KAI H 40 000 TOU 2 TO H TOU NETATPETTTIKOU OKTATTETTTIOIO Il Il H
27. KIT RIA 25 GammaCoat Tou GammaCoat O PRA H 3 1 To pH 3 2 To 3 3 3 4 3 5 3 6 in vitro PH
28. 20 27 C AEN TO va 3 5
29. 22 2 97 11 11 1 11 2 CPM CPM ng 1 ng
30. PMSF 4 6 3 0 mL 2 8 C 10 1 0 mL 20 C 2 8 C 92 To 20 C H 2 8 C
31. HE 125 10 BA O
32. TH ANATPEZTE 103 REFERENCES BIBLOGRAPHIE LITERATUR BIBLIOGRAF A BIBLIOGRAFIA REFER NCIAS REFERENSER BIBAIOF PAQIA 1 Haber et al J Clin Endocrinol Metab 29 1349 1969 2 Yalow R S and S A Berson in Principles of Competitive Protein Binding Assays Odell amp Daughaday eds Lippincott Philadelphia Ch 1 1971 3 Osmond D H et al Clin Biochem 7 52 1974 4 Sealy J E and J H Laragh Am J Med 55 303 1973 5 Catt K and J Douglas in Nuclear Medicine In Vitro Rothfeld ed Lippincott Philadelphia Ch 21 1974 6 Abe K et al Jap Circ J Eng Summary 36 697 1972 7 McDonald J M and G A Fischer Am J Clin Path 59 858 1973 8 Viol G W et al Clin Biochem 5 251 1972 9 Katz F H and J A Smith Clin Chem 18 528 1972 10 Favre L et al Biochem Biophys Acta 302 102 1973 11 Laragh J H et al Am J Med 52 633 1972 12 Corvol P et al Ann Endocr Paris 34 57 1973 13 Cohen E L et al J Lab Clin Med 77 1025 1971 14 Heise C M Clin Chem 21 447 1975 15 Fahrney D E and A M Gold J Am Chem Soc 85 997 1963 16 Kodish M E and F H Katz J Lab Clin Med 83 705 1974 17 Goodfriend T L in Methods in Investigative Diagnostic Endocrin
33. 13 1 13 2 13 3 13 4 13 5 13 6 13 7 13 8 13 9 H OKINAOTIKOUG 2 27 C O
34. ad libitum 75 150 mEq 24wpo 150 mEq 24 wpo 30 75 mEq 24wpo O 30 mEg 24wpo PRA PRA
35. va av 37 4 37 4 9 1 4 37 Kal
36. V PRA 1 ng mL hr 2 36 1 23 6 92 2 76 H PRA PRA PRA 40 mg SUR ONS 102 15 15 1 H
37. 1 0 3053 10 1 0 3056 11 5 0 1307 12 5 0 1232 13 37 C 3149 0 97 14 37 C 3053 1 01 poc 0 99 15 4 C 8674 0 20 16 4 C 8607 0 20 0 20 5 85 17 X 37 C 4362 0 41 18 X 37 C 4459 0 40 0 41 19 X 4 C 8546 0 08 20 X 4 C 8557 0 08 0 08 2 44 99 15 000 7 500 x 4 C Renin Activity Control 4 C Renin Activity Control 37 C 0 02 0 08 0 3 1 0 5 0 Angiotension ng tube ZXHMA 1 13
38. I 50 0 ng mL F 5 0 13 14 37 C 15 16 4 C 17 18 X 37 C 19 20 X 4 C 96 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 a 100 uL B 100 uL 37 4 4 Y 100 uL 37 4 4 1 0 mL roug
39. KIT pH 6 0 pH pH 5 7 pH 6 0 pH 7 o pevivn 1 1517 PMSF
40. Patient X 4 C o O 7 500 Renin Activity Control 4 C Renin Activity Control 37 C 0 0 02 0 08 0 3 1 0 5 0 Angiotension ng tube FIGUR 1 13 METODBEGR NSNINGAR Procedurm ssiga 13 1 13 2 13 3 13 4 13 5 13 6 13 7 13 8 13 9 Plastp sen med oanv nda r r med bel ggning m ste f rslutas noggrant och f rvaras vid 2 27 C Vattenniv n m ste h llas ver ytan p l sningen i r ren utan att r ren b rjar flyta Anv ndaren m ste vara medveten om att felaktiga resultat kan bero p att proverna f rvarats eller hanterats felaktigt Man m ste vara mycket noga med att isbadet h ller r tt temperatur under provtagning och fortsatt provhantering Frysta prover skall tinas snabbt till rumstemperatur och blandas omsorgsfullt innan de pipetteras Det har visat sig att heparin h mmar reninreaktionen i halter p 5 IE mL f ljaktligen b r heparin ej anv ndas som koagulationsh mmande medel i blodprov dar plasmareninaktiviteten skall analyseras Hemolyserade prover inneh ller angiotensinaser och b r ej anv ndas Publicerade data uppvisade evidens f r att man inte kan f ruts tta linearitet f r angiotensin bildningen under en f rutbest md bildningstid ven om den ar s kort som 30 minuter eller s lang som 18 timmar Avvikelse fr n en r t linje kan vara regel snarare n undantag ven vid kontrollerad buffring vid vilket pH som helst Det kan vara
41. 1 0 mL 37 10 uL PMSF 100 UL pH 6 0 1 0 mL 1 500 ul 4 8 4 37 37 C 8 5 4 90 PRA 1 0 ng mL hr
42. 11x 1 5 mL 3 5 mL PMSF 1 1 mL 2 mL 1 9 mL 2 3 mL 6 2 mL 12 2 mL A F 2 5 mL 10 5 ML KIT 2 8 C KIT 4 1 551 I
43. Tragador antigeno marcado com I Sp relement antigen betecknad med 1 Avriy vo onpaop vo pe 251 Tamp o Buffert Calibrador Kalibrator Radioactivo Radioaktiv Facilmente inflamavel Mycket brandfarligt Nocivo Skadligt T xico Giftigt Corrosivo Fr tande E ce DiaSorin Inc 1951 Northwestern Avenue For Customer Service in the P O Box 285 U S and Canada Call Toll Free Stillwater MN 55082 0285 U S A 800 328 1482 In the United Kingdom Call 44 118 9364200 FAX 44 118 9792061 Phone 651 439 9710 FAX 651 779 7847 CA60410 PRINTED IN U S A
44. 37 C Control de actividad de renina 37 C Control de actividad de renina 4 C Control de actividad de renina 4 C Muestra de plasma de paciente 37 C Muestra de plasma de paciente 37 C Muestra de plasma de paciente 4 C Muestra de plasma de paciente 4 C 47 Angiotensina CPM unida ng tubo 29242 28992 13617 13048 13163 12625 11305 11291 6991 7110 3053 3056 1307 1232 3149 3053 Prom 8674 8607 Prom 4362 4459 Prom 8546 8557 Prom Nivel 0 99 0 20 0 20 0 20 0 41 0 40 0 41 0 08 0 08 0 08 PRA Final ng mL hr 5 85 2 44 Curva de calibraci n tipica No utilizar para calcular desconocidos 15 000 Patient X 4 C o O 7 500 Renin Activity Control 4 C Renin Activity Control 37 C 0 0 02 0 08 0 3 1 0 5 0 Angiotension ng tube FIGURA 1 13 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Procedimiento 13 1 13 2 13 3 13 4 13 5 13 6 13 7 13 8 13 9 Las bolsas de pl stico de los tubos recubiertos deben cerrarse bien si se guardan tubos no utilizados y almacenarse a 2 27 C El nivel del agua debe mantenerse por encima de la soluci n de los tubos sin permitir que stos floten El usuario debe saber que los resultados pueden ser err neos si las muestras de los pacientes se almacenan o manejan de modo incorrecto Debe prestarse una atenci n estricta al mantenimiento de la temperatura del agua hela
45. 6 frascos 2 mL 12 frascos 2 mL Tragador da angiotensina 2 frascos 5 mL 10 frascos 5 mL Numero de testes ARMAZENAMENTO Ao ser recebido o kit deve ser armazenado a 2 8 C Depois de abrir armazene cada reagente tal como recomendado a seguir Os reagentes n o devem ser utilizados ap s o prazo de validade no r tulo O prazo de validade do kit indicado no r tulo externo e corresponde ao prazo de validade do tra ador 66 N o misture reagentes de lotes diferentes 4 1 51 Tragador da Angiotensina reagente liofilizado Reconstitua frasco do Tracador da Angiotensina 125 adicionando 5 mL de agua purificada Misture bem invertendo ou misturando cuidadosamente o frasco Adicione o conteudo de dois frascos do tragador a 100 mL de tamp o do ensaio O reagente tracador tamp o est vel a 2 8 C at ao prazo de validade do kit Depois da reconstituic o cada frasco cont m cerca de 1 uCi de tragador lt 1 ug mL de Angiotensina em 5 mL de salina de tamp o fosfato com albumina s rica bovina e timerosal adicionados como conservantes 4 2 Tubos Revestidos a Soro Anti Angiotensina de Coelho reagente pronto a usar Os tubos de 12 x 75 mm s o revestidos com soro anti angiotensina de coelho grau lt 1 ug tubo e est o embalados num saco de pl stico Armazene a 2 27 C 4 3 Concentrado Tamp o do Ensaio da Angiotensina 11X reagente concentrado Adicione a totalidade do conte do do frasco de concentrado tamp o do en
46. A sensibilidade da curva do calibrador definida como o valor simples mais pequeno pass vel de ser distinguido de zero Uma estimativa estat stica da concentra o m nima detect vel sensibilidade foi calculada de acordo com o m todo de D Rodbard 1978 para trinta r plicas no ponto zero da curva do calibrador A sensibilidade calculada foi de 0 018 ng tubo 15 2 Precis o A precis o intra ensaio foi determinada a partir da m dia de vinte ensaios simult neos por amostra A precis o inter ensaio foi determinada a partir da m dia de duplicados para vinte ensaios individuais Amostra da Precis o N mero de M dia Desvio Coeficiente Intra ensaio Ensaios ng mL hr de Variac o ng mL hr Conjunto de Plasma A 20 1 6 0 16 10 0 Conjunto de Plasma B 20 6 2 0 28 4 6 Conjunto de Plasma C 20 17 9 1 68 9 4 Amostra da Precis o Numero de M dia Desvio Coeficiente Inter Ensaio Amostras ng mL hr Faarao de Varia o ng mL hr Conjunto de Plasma A 20 1 6 0 09 5 6 Conjunto de Plasma B 20 10 7 0 82 7 6 Conjunto de Plasma C 20 15 2 1 04 6 8 15 3 Grau de afinidade A afinidade calculada constante do antisoro deste kit de aproximadamente 3 x 1019 litros mole 15 4 Especificidade Analitica Os dados da reactividade cruzada do antisoro usado neste kit s o expressos como a rela o da concentra o da angiotensina para a concentra o de subst ncia de reac o cruzada a 50 da inibi o da liga o maxima
47. Composto Reactividade Cruzada Angiotensina 100 Tetradecap ptido 0 02 Angiotensina Il lt 0 03 Angiotensina lt 0 03 Substrato da renina sintetica CONSULTE A ULTIMA PAGINA PARA OBTER REFERENCIAS 77 GAMMACOAT PLASMA RENIN ACTIVITY RADIOIMMUNOASSAY KIT 1 AVSEDD ANV NDNING F R DIAGNOSTISKT BRUK IN VITRO GammaCoat 21 Plasma Renin Activity Radioimmunoassay Kit r avsedd att anv ndas f r kvantitativ best mning av plasmareninaktiviteten PRA genom radioimmunoassay av bildat angiotensin 2 SAMMANFATTNING OCH F RKLARING Renin r ett proteolytiskt enzym med en molekylvikt p cirka 40 000 som fris tts fr n de juxtaglomerul ra cellerna i njuren Dess substrat r ett alfa 2 globulin som bildas i levern och enzymet verkar i cirkulationen genom att klyva detta substrat s att dekapeptiden angiotensin I bildas Angiotensin I klyvs snabbt genom aktiviteten av konvertasenzym fr mst i lungorna D rvid bildas den biologiskt aktiva oktapeptiden angiotensin Il Angiotensin bryts i sin tur snabbt ner till inaktiva peptidfragment av en grupp plasma och v vnadsenzymer som kallas angiotensinaser De metaboliska stegen i renin angiotensinsystemet illustreras nedan reninsubstrat renin apgiotensin I konvertas a giotensin Il angiotensinaser igaktiva peptidfragment Angiotensin Il har en extremt kort halveringstid in vivo men det r den mest kraftfulla vasopressor man k nner till Angioten
48. Hur man antecknar data Anv nd inte detta diagram f r att ber kna ok nda prover CPM M ngd R r Inneh ll bunden Angiotensin nr ir ren aktivitet ng r r T Totalaktivitet Berett sp r mne 29242 T2 Totalaktivitet Berett sp r mne 28992 1 Angiotensin I blank 0 ng r r 13617 Angiotensin blank 0 ng r r 13048 3 Angiotensin I kalibreringsl sning 0 02 ng r r 13163 4 Angiotensin I kalibreringsl sning 0 02 ng r r 12625 5 Angiotensin I kalibreringsl sning 0 08 ng r r 11305 6 Angiotensin I kalibreringsl sning 0 08 ng r r 11291 7 Angiotensin I kalibreringsl sning 0 3 ng r r 6991 8 Angiotensin I kalibreringsl sning 0 3 ng r r 7110 9 Angiotensin I kalibreringsl sning 1 0 ng r r 3053 10 Angiotensin I kalibreringsl sning 1 0 ng r r 3056 11 Angiotensin I kalibreringsl sning 5 0 ng r r 1307 12 Angiotensin I kalibreringsl sning 5 0 ng r r 1232 13 Reninaktivitetskontroll 37 C 3149 0 97 14 Reninaktivitetskontroll 37 C 3053 1 01 medel 0 99 15 Reninaktivitetskontroll 4 C 8674 0 20 16 Reninaktivitetskontroll 4 C 8607 0 20 medel 0 20 17 Plasmaprov Patient X 37 C 4362 0 41 18 Plasmaprov Patient X 37 C 4459 0 40 medel 0 41 19 Plasmaprov Patient X 4 C 8546 0 08 20 Plasmaprov Patient X 4 C 8557 0 08 medel 0 08 85 Slutligt PRA ng mL h 5 85 2 44 Typisk kalibreringskurva Anv nd inte detta diagram f r att ber kna ok nda prov 15 000
49. heures apr s furos mide 40 mg per os 24 15 CRITERES DE QUALITE 15 1 Sensibilite analytique La sensibilit de la courbe d etalonnage est d finie comme la plus petite valeur unique pouvant tre distingu e de z ro Une estimation statistique de la concentration minimum d tectable sensibilit a t calcul e selon la methode de D Rodbard 1978 5 pour trente r p titions au point z ro de la courbe d talonnage La sensibilit calcul e est de 0 018 ng tube 15 2 Pr cision La pr cision intra dosage a t d termin e en calculant la moyenne de vingt dosages simultan s par chantillon La pr cision inter dosage a t d termin e en calculant la moyenne des doubles pour vingt dosages diff rents Echantillon pour la d termination de la Nombre de Moyenne Ecart type Coefficient de pr cision intra dosage dosages ng ml h ng ml h variation Pool de plasmas A 20 1 6 0 16 10 0 Pool de plasmas B 20 6 2 0 28 4 6 Pool de plasmas C 20 17 9 1 68 9 4 Echantillon pour la determination de la Nombre de Moyenne Ecart type Coefficient de pr cision inter dosage dosages ng ml h ng ml h variation Pool de plasmas A 20 1 6 0 09 5 6 Pool de plasmas B 20 10 7 0 82 7 6 Pool de plasmas C 20 15 2 1 04 6 8 15 3 Avidit La constante d affinit calcul e de l antiserum utilis dans cette trousse est d environ 3x 1010 litres mole 15 4 Sp cificit analytique Les donn es concernant la r a
50. kare S37 39 Anv nd l mpliga skyddshandskar samt skyddsglas gon eller ansiktsskydd REAGENS SOM INNEH LLER JOD 125 Satsen inneh ller radioaktivt material som ej verstiger 2 74 kBq sats CA 1533 eller 10 uCi 370 kBq sats CA 1553 jod 125 Adekvata f rsiktighets tg rder m ste vidtas och god laboratoriepraxis f ljas vid f rvaring hantering och kassering av detta material F r mottagningar och institutioner som tar emot radioisotoper under en allm n licens Detta radioaktiva material f r endast tas emot f rv rvas gas och anv ndas av l kare veterin rer med praktik inom veterin rmedicin kliniska laboratorier eller sjukhus och f r endast anv ndas f r kliniska tester in vitro eller laboratorietester in vitro vilka ej inneb r n gon inv rtes eller utv rtes administrering av materialet eller av str lning fran det till m nniskor eller djur F r mottagande f rv rv innehav anv ndning och verl telse g ller de regler och den allm nna licens som utf rdats av den amerikanska Nuclear Regulatory Commission eller av den stat med vilken kommissionen har ing tt ett avtal f r ut vande av regulatorisk myndighet 1 Radioaktivt material far endast f rvaras p en speciellt avsedd plats 2 Endast auktoriserad personal f r ha tillg ng till radioaktivt material 81 3 Pipettera aldrig radioaktivt material med munnen Undvik att ata eller dricka i lokaler dar radioaktivt material anv nds 5 Y
51. s toxique S28 Apr s un contact avec la peau laver imm diatement grande eau 16 REACTIFS CONTENANT DU THIMEROSAL Certains r actifs de cette trousse contiennent du thim rosal lequel contient un compos a base de mercure L elimination du mercure l mentaire du mercure inorganique des oxydes de mercure et des compos s base de mercure doit se faire conform ment toutes les r glementations locales r gionales et f d rales AVERTISSEMENT Ce produit contient un produit chimique connu dans l Etat de Californie comme responsable d anomalies cong nitales ou d autres dommages int ressant la reproduction D claration des risques relatifs aux substances dangereuses des communaut s europ ennes Directive du conseil 1999 45 EC R actifs contenant de l thanol R11 Hautement inflammable S16 Tenir l cart de sources d inflammation Interdiction de fumer S43 En cas d incendie utiliser une poudre extinctrice ou du gaz carbonique R actifs contenant du PMSF R23 24 25 Toxique en cas d inhalation d ingestion et de contact avec la peau S36 Porter des v amp tements de protection adaptes S45 En cas d accident ou de malaise consulter immediatement un medecin Reactifs contenant de l hydroxyde de potassium R35 Provoque de graves br lures 926 En cas de contact oculaire rincer imm diatement et abondamment avec de l eau et consulter un m decin S37 39 Portez des g
52. 1533 oder 10 Ci 370 kBq Kit CA 1553 Jod 125 Bei der Lagerung Handhabung und Entsorgung dieses Materials sind entsprechende Vorsichtsma nahmen und gute Laborpraktiken einzuhalten F r rzte bzw Institutionen welche im Rahmen einer Generallizenz Radioisotope erhalten Entgegennahme Erwerb Besitz und Verwendung dieses radioaktiven Materials sind nur rzten veterin rmedizinisch t tigen Tier rzten klinischen Laboren oder Krankenh usern und nur f r klinische In vitro Tests oder In vitro Labortests gestattet bei denen kein interner oder externer Kontakt des Materials oder seiner Strahlung mit Menschen oder Tieren stattfindet Entgegennahme Erwerb Besitz Verwendung und Weitergabe des Materials unterliegen den Vorschriften und der Generallizenz der US Nuclear Regulatory Commission US amerikanische Strahlenschutzbeh rde bzw des Staates mit dem diese Beh rde ein Abkommen zur Aus bung ihrer berwachungsfunktion abgeschlossen hat 1 Die Lagerung des radioaktiven Materials ist auf einen speziell daf r bestimmten Bereich zu beschr nken Der Zugang zu radioaktivem Material ist nur befugten Personen zu gestatten Radioaktives Material nicht mit dem Mund pipettieren Im vorgesehenen radioaktiven Arbeitsbereich nicht essen oder trinken Versch ttetes Material aufwischen und Bereich anschlie end mit alkalischem Reinigungsmittel oder radiologischer Dekontaminationsl sung waschen Alle benutzten Glasbeh lter vor dem Waschen
53. 2 H padievepy 3 4 5 Oi va H
54. 40 mL hr x ng X PRA 0 41 0 08 ng x 7 40 mL hr PRA 2 44 ng mL hr 98 Ap CPM ng dok PRA ng mL hr 29242 T2 28992 1 I 0 ng ok ow 13617 I 0 13048 3 0 02 ng Sok 13163 4 0 02 ng Sok 12625 5 0 08 11305 6 ayyeiotevoivng 0 08 ng Sok 11291 7 0 3 ng Sok 6991 8 0 3 ng ok owA 7110 9
55. Angiotensin ng tube AV AV AV AV Level 0 08 PRA Final ng mL hr 5 85 2 44 Typical Calibrator Curve Do not use to calculate unknowns 15 000 CPM 7 500 Renin Activity Control 4 C Patient X 4 C Renin Activity Control 37 C 0 0 02 0 08 0 3 1 0 5 0 Angiotension ng tube FIGURE 1 13 LIMITATIONS OF THE PROCEDURE Procedural 13 1 The coated tube plastic bag should be closed securely when storing unused tubes and maintained at 2 27 C 13 2 The water level must be kept above that of the solution in the tubes without allowing the tubes to float 13 3 The user should note that erroneous results can be caused by improper handling of patient samples 13 4 Strict attention must be given to the maintenance of ice water temperature during collection and subsequent handling of samples 13 5 Frozen samples should be thawed rapidly to room temperature and mixed thoroughly before pipetting 13 6 Heparin has been noted to inhibit the renin reaction at concentrations of 5 IU mL and therefore heparin should not be used as an anticoagulant in blood samples to be assayed for plasma renin activity 5 13 7 Hemolyzed specimens contain angiotensinases and should not be used 13 8 Published data presented evidence that linearity of angiotensin generation during a predetermined generation period even as short as thirty minutes or as long as eighteen hours cannot be ass
56. Effet de la position Moyenne 1 ng ml h Couch 1 24 1 09 Debout 2 63 1 32 14 3 Stimulation par la furos mide L valuation clinique du syst me r nine angiotensine n cessite ventuellement une evaluation de la variation de l activit de la r nine plasmatique suite a une stimulation L effet de la furos mide sur le syst me r nine angiotensine d tect par la variation de l activit de la r nine plasmatique a t d termin comme suit par une tude r sum e au TABLEAU V On observe une augmentation significative des valeurs de l activit de la renine plasmatique apr s stimulation par la furos mide TABLEAU V Stimulation par la furos mide Moyenne 1 ng ml h Avant stimulation 2 36 1 23 Apres stimulation 6 92 2 76 REMARQUE Une monographie d crivant en detail ensemble de l valuation peut tre obtenue sur demande en contactant notre service clientele Cette monographie reprend les r sultats des tudes suivantes 1 aldosterone urinaire vs activit amp de la r nine plasmatique 2 tudes de la r nine au niveau de la veine r nale chez des patients souffrant d hypertension r novasculaire 3 D termination de l activit de la r nine plasmatique chez des patients an phriques 4 R sultats de l activit de la r nine plasmatique chez des patients sous h modialyse 5 profil de la r nine chez des patients atteints d hypertension essentielle
57. Maio de 1999 ou edi o actual REAGENTES COM AZIDA DE S DIO CUIDADO Alguns reagentes presentes neste kit cont m azida de s dio A azida de s dio pode reagir com chumbo ou cobre para formar azidas de metal altamente explosivo Ao eliminar lave com grande quantidade de gua para impedir a forma o de azida Para mais informa es consulte Descontamina o de drenos de pias de laborat rios para remover sais de azidas no Manual Guia Gest o de Seguran a N CDC 22 emitido pelos Centros de Controlo e Preven o de Doen as Atlanta GA 1976 Frases de Risco de Subst ncias Perigosas da Comunidade Europeia Directiva do Conselho 1999 45 EC R20 21 22 Nocivo pela inala o em contacto com a pele e se ingerido R32 O contacto com cidos liberta g s muito t xico S28 Ap s contacto com a pele lave imediatamente com gua em abund ncia REAGENTES COM TIMEROSAL Alguns reagentes neste kit cont m timerosal o qual inclui um composto de merc rio A elimina o do merc rio elementar do merc rio inorg nico dos xidos de merc rio e de compostos de merc rio deve ser feita em conformidade com as normas locais e nacionais ADVERT NCIA Este produto cont m um elemento qu mico considerado pelo Estado da Calif rnia como causador de defici ncias nascen a ou de outros danos reprodutivos Frases de Risco de Subst ncias Perigosas da Comunidade Europeia Directiva do Conselho 1999 45 EC Reagentes com Etan
58. Zahl entsprechend ge ndert werden 12 5 Berechnung der Maleinat Generation ng 37 ng A 1 11 m 0 1mlc 1 00 ml 1 5 Stunden PRA 7 40 ml h x Netto ng Beispiel Plasmaprobe des Patienten X PRA 0 41 0 08 ng x 7 40 ml h PRA 2 44 ng ml h PRA 33 TABELLE Aufzeichnung der Daten Nicht zur Berechnung unbekannter Proben verwenden Angiotensin I PRA R hrchen Inhalt 1 M Stufe Final Nr R hrchen Gebunden ng R hrch ng ml h Totalaktivit t R hrchen Tracer Puffer 29242 T2 Totalaktivit t R hrchen Tracer Puffer 28992 1 Angiotensin Blank 0 ng R hrchen 13617 Angiotensin Blank 0 ng R hrchen 13048 3 Angiotensin Kalibrator 0 02 ng R hrchen 13163 4 Angiotensin Kalibrator 0 02 ng R hrchen 12625 5 Angiotensin I Kalibrator 0 08 ng R hrchen 11305 6 Angiotensin Kalibrator 0 08 ng R hrchen 11291 7 Angiotensin I Kalibrator 0 3 ng R hrchen 6991 8 Angiotensin Kalibrator 0 3 ng R hrchen 7110 9 Angiotensin Kalibrator 1 0 ng R hrchen 3053 10 Angiotensin Kalibrator 1 0 ng R hrchen 3056 11 Angiotensin Kalibrator 5 0 ng R hrchen 1307 12 Angiotensin Kalibrator 5 0 ng R hrchen 1232 13 Renin Aktivit tskontrolle 37 C 3149 0 97 14 Renin Aktivit tskontrolle 37 C 3053 1 01 Mittel 0 99 15 Renin Aktivit tskontrolle 4 C 8674 0 20 16 Renin Aktivit tskontrolle 4 C 8607 0
59. angiotensina 1251 reactivo liofilizado Reconstituya el vial del trazador de angiotensina 5l con 5 mL de agua purificada Mezcle bien el vial invirtiendolo mezclando suavemente en v rtex Agregue el contenido de dos viales de trazador a 100 mL de tamp n de ensayo El reactivo del tamp n del trazador es estable a 2 8 C hasta la fecha de caducidad del equipo Tras la reconstituci n cada vial contiene aproximadamente 1 Ci de trazador angiotensina lt 1 ug mL en 5 mL de soluci n salina tamponada de fosfato con albumina de suero bovino con thimerosal afiadido como conservante 4 2 Tubos recubiertos de suero de conejo antiangiotensina reactivo listo para su uso Tubos de 12 x 75 mm recubiertos con suero de conejo antiangiotensina titular lt 1 ug tubo y empaquetados en una bolsa de pl stico Almacene a 2 27 C 4 3 Concentrado de tampon de ensayo angiotensina 11X reactivo concentrado Agregue todo el contenido del vial de concentrado de tamp n de ensayo a 100 mL de agua purificada y mezcle bien Cada vial contiene 10 mL de tamp n fosfato con azida s dica al 0 1 como conservante 4 4 Tampon de generaci n de maleato de angiotensina reactivo listo para su uso Cada vial contiene 5 mL de tamp n maleato EDTA sodio sulfato de neomicina y colorante azul inerte con azida s dica al 0 1 como conservante 4 5 Fluoruro de fenilmetilsulfonilo reactivo listo para su uso Cada vial contiene 1 mL de fluoruro de fenilmetils
60. as detected by change in PRA was determined as shown by a study summarized in TABLE V There was a significant rise in PRA values with furosemide stimulation TABLE V Furosemide Stimulation Mean 1 S D ng mL hr Pre stimulation 2 36 1 23 Post stimulation 6 92 2 76 NOTE A monograph detailing the entire evaluation is available upon request by contacting Customer Service The monograph contains the results of the following studies urine aldosterone vs PRA renal vein renin studies in patients with renovascular hypertension PRA determination in anephric patients PRA results in patients on hemodialysis renin profiling of patients with essential hypertension five hrs after furosemide 40 mg p o ARONA 11 15 SPECIFIC PERFORMANCE CHARACTERISTICS 15 1 Analytical Sensitivity The sensitivity of the calibrator curve is defined as the smallest single value which can be distinguished from zero A statistical estimation of the minimal detectable con centration sensitivity was calculated according to the method of D Rodbard 1978 for thirty replicates at the zero point of the calibrator curve The calculated sensitivity is 0 018 ng tube 15 2 Precision The intra run precision was determined from the mean of twenty simultaneous assays per sample The inter run precision was determined from the mean of the average of duplicates for twenty separate runs Intra Run Number of Mean als Coefficient o
61. conservare a 20 C Una porzione pu essere conservata in bagno di ghiaccio o in frigorifero a 2 8 C se l analisi viene eseguita immediatamente Il controllo ricostituito deve essere conservato congelato a 20 C e si mantiene stabile per almeno due mesi Lo scongelamento deve avvenire in bagno di ghiaccio o in frigorifero a 2 8 C e il controllo ricostituito non deve essere ricongelato dopo lo scongelamento Sono state osservate variazioni a carico dell ARP in seguito all analisi ripetuta del plasma congelato dopo diversi periodi di conservazione Ne consegue che l utilizzo di plasma congelato conservato quale controllo per la determinazione dell ARP potrebbe produrre risultati non attendibili Il controllo dell attivit della renina viene utilizzato abitualmente durante la generazione dell angiotensina e durante l analisi radioimmunologica producendo un indice di controllo della qualit affidabile per l intera analisi Ulteriori informazioni sono fornite nella sezione Controllo di qualit In seguito alla ricostituzione ciascuna fiala contiene 3 ml di plasma umano elaborato con lo 0 1 di sodio azide 4 7 Calibratori angiotensina A F reagente liofilizzato NOTA La prova in bianco e i calibratori sono utilizzati soltanto nella porzione di analisi radioimmunologica e non devono essere soggetti alla generazione di angiotensina Ricostituire ogni fiala con 2 0 ml di acqua purificata e mescolare bene prima dell uso La prova i
62. de 4 Fondo del promedio de 37 Generado ng neto ng 37 ng 4 12 2 Tama o de la muestra ensayada en tubo recubierto C 0 1 mLc 12 3 Diluci n de la muestra S por tamp n de generaci n B e inhibidor 1 10 mLg 0 1mLg 0 01mL 1 11 mlpinal 10 mLs 1 00 ML inicial 12 4 Tiempo de generaci n de angiotensina 1 5 horas NOTA Si se ha alterado el tiempo de generaci n deber n hacerse los cambios adecuados en este n mero 12 5 C lculo de generaci n de maleato ng 37 ng x 1 11 me 0 1mLc 1 00 mL 1 5 horas PRA 7 40 mL hora x ng neto Ejemplo Muestra de plasma de paciente X PRA 7 40 mL hora x ng neto PRA 2 44 ng mL hora PRA 46 Registro de los datos No utilizar para calcular desconocidos Tubo 2 Contenido de los tubos Cuentas totales Trazador Tamp n Cuentas totales Trazador Tamp n Blanco de angiotensina Blanco de angiotensina Calibrador de angiotensina Calibrador de angiotensina Calibrador de angiotensina Calibrador de angiotensina Calibrador de angiotensina Calibrador de angiotensina Calibrador de angiotensina Calibrador de angiotensina Calibrador de angiotensina Calibrador de angiotensina O ng tubo O ng tubo 0 02 ng tubo 0 02 ng tubo 0 08 ng tubo 0 08 ng tubo 0 3 ng tubo 0 3 ng tubo 1 0 ng tubo 1 0 ng tubo 5 0 ng tubo 5 0 ng tubo Control de actividad de renina
63. e quindi sottoposti nuovamente ad analisi calcoli devono essere corretti in base agli eventuali cambiamenti nella durata della produzione 8 5 Al termine del periodo di produzione trasferire la serie 37 di campioni nel bagno di ghiaccio se l analisi deve essere eseguita immediatamente oppure nel freezer insieme alla serie 4 per un analisi futura 57 9 PROCEDURA DI ANALISI La procedura dell analisi comprende la preparazione di una curva di calibratore da cui verr interpolato il contenuto di angiotensina in entrambe le serie 37 e 4 La serie di background la serie 4 viene quindi sottratta dai campioni della generazione 37 corrispondenti 9 1 9 2 Aspettare che il reagente del buffer tracciante raggiunga la temperatura ambente e mescolare bene prima dell uso Mantenere la prova in bianco e i calibratori il controllo generato e i campioni dei pazienti generati in un bagno di ghiaccio e mescolare bene prima dell uso Etichettare una serie di provette con rivestimento Gamma in duplicato attenendosi allo schema seguente Con alcuni programmi di riduzione dati potrebbero essere necessari i conteggi totali T1 T2 e provette Bo 1 2 ma questi possono essere omessi se la curva di calibratore tracciata su carta per grafici semilogaritmica 3 25 Provetta Codice Angiotensina N Contenuto delle provette Lettera ng 0 1 ml T4 T2 Conteggi totali Buffer tracciante 1 2 Angiotensina prova in bianco O ng ml A 0 3 4 Ang
64. endroit 9 7 Compter tous les tubes dans un compteur gamma pendant une minute la fen tre tant correctement r gl e pour l iode 125 9 8 Calculer les r sultats Se reporter la section R sultats 10 CONTR LE DE QUALIT Un contr le de l activit de la r nine est joint la trousse Consulter l tiquette du flacon pour conna tre la valeur nominale Le contr le doit tre soumis l tape de production avant le dosage Chaque laboratoire doit appliquer des contr les plusieurs niveaux pour v rifier les performances du dosage Les contr les doivent tre trait s comme des valeurs d terminer Des diagrammes de contr le de qualit doivent tre conserv s pour suivre les performances des contr les Des m thodes statistiques appropri es doivent tre utilis es pour valuer les tendances Chaque laboratoire doit tablir ses propres limites de performances acceptables 2 11 R SULTATS 11 1 Enregistrer le nombre de coups par minute CPM li s de chaque tube 11 2 Reporter les CPM li s pour les talons d angiotensine axe vertical en fonction du nombre de nanogrammes ng d angiotensine ajout s par tube axe horizontal sur du papier semi logarithmique 11 3 Tracer la courbe la plus pr cise possible Pour un exemple de donn es typiques se reporter au TABLEAU I La FIGURE 1 illustre une courbe d talonnage typique 11 4 Indiquer les CPM li s pour chaque tube correspondant chaque chantillon
65. fondo serie 4 de las muestras de generaci n 37 correspondientes 9 1 Deje que el reactivo tamp n trazador alcance la temperatura ambiente y mezcle bien antes de utilizarlo Mantenga los blancos calibradores control generado y muestras del paciente generadas en un ba o de hielo y mezcle bien antes de utilizarlos 44 9 2 Etiquete por duplicado un juego de tubos GammaCoat de acuerdo con el programa siguiente Los tubos de cuentas totales T1 T2 y Bo 1 2 pueden ser necesarios para ciertos programas de reducci n de datos pero se pueden omitir si la curva de calibraci n se va a trazar en un papel milimetrado semilogaritmico 3 Tubo C digo Angiotensina 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 n Contenido de los tubos letra ng 0 1 mL T1 T2 Cuentas totales Trazador Tamp n 1 2 Blanco de angiotensina Ong mL A 0 3 4 Calibrador de angiotensina 0 2 ng mL B 0 02 5 6 Calibrador de angiotensina 0 8 ng mL C 0 08 7 8 Calibrador de angiotensina 3 0 ng mL D 0 30 9 10 Calibrador de angiotensinal 10 0 ng mL E 1 0 11 12 Calibrador de angiotensina 50 0 ng mL F 5 0 13 14 Control de actividad de renina generaci n 37 C 15 16 Control de actividad de renina generaci n 4 C 17 18 Paciente X generaci n 37 C 19 20 Paciente X generaci n 4 C Con una pipeta suministre en los tubos duplicados correspondientes a 100 uL de cada calibrador o blanco de angiotensina I b 100 uL de control de activid
66. immediately In caso di incidente o di malessere richiedere immediatamente l intervento di un medico Reagenti contenenti idrossido di potassio R35 Causes severe burns Provoca ustioni gravi S26 In case of contact with eyes rinse immediately with plenty of water and seek medical advice In caso di contatto con gli occhi sciacquare immediatamente gli occhi e la pelle con acqua abbondante e rivolgersi a un medico S37 39 Wear suitable gloves and eye face protection Indossare guanti protettivi adatti e protezione per occhi viso REAGENTI CONTENENTI IODIO 125 Questo kit contiene materiali radioattivi che non superano i 2 Ci 74 kBq kit CA 1533 o 10 Ci 370 kBq kit CA 1553 di iodio 125 Adottare precauzioni adeguate e le buone pratiche di laboratorio per la conservazione la manipolazione e lo smaltimento di questo materiale Per i professionisti o gli istituti che utilizzano radioisotopi con una licenza generale Questo materiale radioattivo pu essere consegnato acquisito conservato e usato unicamente da personale medico veterinari abilitati alla pratica di medicina veterinaria laboratori clinici o ospedali e unicamente per test in vitro clinici o di laboratorio che non prevedano la somministrazione interna o esterna del materiale o di radiazioni da esso derivanti su persone o animali L acquisto il possesso la conservazione l uso e il trasferimento sono soggetti alle norme e alla licenza generale della Nuclear Regula
67. kann in ein Eisbad gestellt oder bei 2 8 C gek hlt werden falls der Test sofort ausgef hrt wird Die verd nnte Kontrolle muss f r die Lagerung bei 20 C eingefroren werden und bleibt f r mindestens zwei Monate stabil Die Kontrolle in einem Eisbad oder in einem K hlschrank bei 2 8 C auftauen verd nnte Kontrollen d rfen nach dem Auftauen nicht wieder eingefroren werden Bei wiederholten Tests mit eingefrorenem Plasma mit unterschiedlichen Lagerzeiten konnten Variationen bei der PRA beobachtet werden 2 Die Verwendung von eingefrorenem Plasma zur Kontrolle bei der PRA Bestimmung kann daher zu unzuverl ssigen Ergebnissen f hren Die Renin Aktivit tskontrolle wird routinem ig bei der Angiotensin Generation eingesetzt ebenso wie beim Radioimmunoassay und liefert einen zuverl ssigen Index der Qualit tskontrolle f r den gesamten Test Weitere Informationen finden Sie im Abschnitt der Qualit tskontrolle Nach der Rekonstitution enth lt jedes Fl schchen 3 ml behandeltes Humanplasma mit 0 1 Natriumazid 4 7 Angiotensin Kalibratoren A F lyophilisiertes Reagenz HINWEIS Blindproben und Kalibratoren werden nur in dem Radioimmunoassay Teil benutzt und d rfen nicht der Angiotensin Generation unterzogen werden Jedes Fl schchen mit 2 0 ml destilliertem Wasser verd nnen und vor dem Gebrauch gut mischen Blindproben und Kalibratoren m ssen dann in einem Eisbad vor dem Test gek hlt werden Sie k nnen bei 2 8 C bis zu
68. limite Mindesthaltbar Fecha de i Expiration Date d utilisation keitsdatum caducidad Data di scadenza Manufacturer Fabricant Hersteller Fabricante Fabbricante Consult Instructions les Gebrauchsanwei Consultare le for Use ie sung beachten istruzioni per luso d utilisation uso In vitro diagnostic Diagnostic in vitro Invitro Diagn stico In Diagnostica in vitro Diagnostikum vitro Lot No No de lot Chargen Nr N mero de lote Lotto n Temperature Limitation de 2 Limitaci n de Limite della n Temperaturbereich limitation temperature temperatura temperatura Inhibiteur Inhibidor Enzymatic inhibitor enzymatique Enzyminhibitor enzimatico Inibitore enzimatico phenylmethylsulpho solution de Phenylmethylsulfony soluci n de soluzione di fluoruro nyl fluoride solution phenylmethylsulphon I fluorid L sung fenilmetilsulfonil fenilmetilsulfonile yl fluorure fluoruro Solid phase Phase solide Fase solida Cannule Coated tubes Tubes enduits n con rivestimento Testr hrchen recubiertos Traceur antigene Tracer 5l Trazador antigeno Tracciatore antigene Tracer antigen labelled with 291 marqu l iode 5 markiertes Antigen etiquetado con etichettato con I Buffer Tampon Puffer Tamp n Tampone Calibrator Etalon Kalibrator Calibrador Calibratore Radioactive Radioactif Radioaktiv Radiactivo Radioattivo Highly flammable Facilement Leichtentz ndlich Facilment Fa
69. nale manifeste Chaque sujet a t soumis a un r gime alimentaire a teneur connue en sodium et en potassium Apr s une p riode d quilibrage des chantillons de plasma pour la determination de l activite de la r nine plasmatique et d urine de 24 heures ont t obtenus Les r sultats de ces tudes sont r sum s au TABLEAU Les donn es ont t divis es en quatre sous groupes en fonction du niveau d excr tion sod e observ consommation de sel ad libitum 75 a 150 mEq 24 h r gime compl ment en sel 150 mEq 24 h et deux r gimes a teneur limit e en sel Il est possible dans des conditions cliniques normales d obtenir de l g res r ductions de l excr tion de sodium jusqu 30 75 mEq 24h Le plus faible niveau d excretion de sodium O 30 mEq 24 h est inhabituel et n cessite une limitation s v re de la consommation de sodium La relation inverse attendue entre l activit de la r nine plasmatique et l excr tion urinaire de sodium a t observ e Comme la teneur en sel dans le r gime alimentaire varie selon les r gions il est conseill chaque laboratoire d tablir ses propres donn es de l activit de la r nine plasmatique en fonction de l excr tion de sodium Au cours de l valuation clinique de cette trousse des chantillons ont t obtenus de sujets adultes ambulatoires ou hospitalis s exempts de toute pathologie cardio vasculaire ou r nale manifeste Ces sujets consommaie
70. o uso de plasma congelado armazenado como controlo nas determina es da ARP poder levar obten o de resultados pouco fi veis O Controlo da Actividade da Renina utilizado de forma rotineira durante a gera o da Angiotensina bem como o radioimunoensaio constituindo se como um indicador de controlo de qualidade fi vel para a totalidade do ensaio Consulte a sec o do Controlo de Qualidade para obter mais informa es Depois da reconstitui o cada frasco cont m 3 mL de plasma humano processado com 0 1 de azida de s dio 4 7 Calibradores da Angiotensina I A F reagente liofilizado NOTA as amostras em branco e os calibradores s o usados apenas em parte do radioimunoensaio e n o devem ser submetidos gera o de angiotensina Reconstitua cada frasco com 2 0 mL de gua purificada e misture bem antes de usar As amostras em branco e os calibradores dever o posteriormente ser congelados num banho de gelo antes de serem ensaiados Podem ser armazenados a 2 8 C durante um m ximo de duas semanas e a 20 C no caso de per odos de armazenamento mais prolongados Depois da reconstitui o cada frasco cont m 2 mL de angiotensina BSA em salina tamp o de fosfato Os calibradores s o calibrados a 0 0 2 0 8 3 0 10 0 e 50 0 ng mL respectivamente Os calibradores da Actividade da Renina Plasm tica da DiaSorin s o calibrados utilizando o lote principal da produ o actual Os calibradores do kit demonstram permuta
71. ojos l vense inmediatamente con abundante agua y solicitese asistencia m dica inmediata S37 39 Utilice guantes y protecci n facial ocular adecuada REACTIVOS CON CONTENIDO DE YODO 125 Este equipo contiene material radiactivo que no excede de 2 Ci 74 kBq CA 1533 o de 10 uCi 370 kBq equipo CA 1553 de yodo 125 Para almacenar manejar y desechar este material deben adoptarse las precauciones necesarias y pr cticas de laboratorio correctas Para facultativos o instituciones que reciben radiois topos con licencia gen rica Este material radiactivo s lo deben recibirlo adquirirlo poseerlo y utilizarlo m dicos veterinarios que practiquen la medicina veterinaria laboratorios cl nicos u hospitales y s lo para pruebas in vitro cl nicas o de laboratorio que no conlleven la administraci n interna o externa del material ni su radiaci n a seres humanos ni animales Su recepci n adquisici n posesi n uso y transferencia se rigen por la normativa y la licencia gen rica de la Comisi n Reguladora Nuclear del estado en el que la Comisi n haya llegado a un acuerdo para el ejercicio de su autoridad reguladora 1 El almacenamiento del material radiactivo debe limitarse a un rea destinada espec ficamente a tal efecto 2 El acceso a materiales radiactivos debe estar limitado a personal autorizado nicamente 3 No recoja material radiactivo con la pipeta usando la boca No coma ni beba dentro de las reas destinadas a
72. purificada Banho de gua a temperatura constante 37 2 C Banho de gua gelada Pipetas volum tricas 1 2 3 e 5 mL Cilindro graduado 100 mL Pipetas de precis o 10 100 500 e 1000 uL Contador gama Tubos de pl stico ou de vidro 12 x 75 mm para a gera o da angiotensina Suportes para tubos de ensaio Misturador de v rtice opcional Aspirador de gua opcional Papel absorvente com suporte de pl stico opcional 8 PROCEDIMENTO DE GERA O DA ANGIOTENSINA 8 1 8 2 8 3 8 4 8 5 Transfira 1 0 mL de plasma para um tubo de pl stico ou de vidro sem revestimento assinalado com o numero de identifica o e o sufixo 37 Adicione 10 uL da solu o de PMSF e 100 uL do tamp o da gera o de maleato pH 6 0 a cada al quota de 1 0 mL do passo 1 Misture bem e coloque em banho de gelo Transfira 500 uL de plasma do passo dois para um tubo arrefecido correspondente assinalado com o sufixo 4 Coloque os tubos da s rie 37 num banho de gua a 37 C Mantenha a s rie de tubos 4 em banho de gelo Proceda ao ensaio do tamp o da gera o de maleato durante 90 minutos Tem sido sugerido que poss vel gerar amostras de pacientes com valores de ARP inferiores a 1 0 ng mL hr numa incuba o de dezoito horas podendo ser novamente ensaiados Os c lculos devem ser ajustados a qualquer altera o que ocorra durante o per odo da gera o No final do per odo da gera o transfira a s
73. s apropiada para las personas con hipertensi n esencial Se ha descrito el radioinmunoensayo para angiotensina y su aplicaci n como un ndice de la actividad de renina en plasma El procedimiento del equipo GammaCoat para determinar la actividad de renina en plasma se ha adaptado a partir de este m todo 3 PRINCIPIOS DEL ENSAYO El procedimiento se basa en los principios de uni n competitivos del radioinmunoensayo En el equipo GammaCoat para RIA de actividad de renina en plasma 25 se ha inmovilizado el anticuerpo en la pared inferior interna del tubo de GammaCoat La determinaci n de PRA comprende la incubaci n inicial de plasma para generar angiotensina seguida de la cuantificaci n de angiotensina mediante radioinmunoensayo La generaci n de angiotensina en el sistema de sustrato humano est regida por 3 4 pH de la incubaci n 3 2 grado de diluci n del plasma 3 3 elecci n de los inhibidores de enzimas 39 4 3 4 factores desconocidos de cada muestra de plasma como la concentraci n del nivel de sustrato de renina 3 5 duraci n de la incubaci n 3 6 temperatura de incubaci n pH de generaci n indice de generaci n de angiotensina in vitro es dependiente del pH Este equipo de procedimiento utiliza un pH de generaci n de 6 0 el pH habitual de las muestras tras la adici n de un tamp n de pH 5 7 La ventaja de la incubaci n a pH 6 0 en lugar del pH 7 fisiol gico se basa en que produce u
74. sale per questa popolazione valori pi elevati degli individui ricoverati si possono spiegare con le alterazioni nell assunzione di sale nella dieta imposta dal cibo dell ospedale stress indotto dall ambiente ospedaliero o altri fattori indeterminati 62 TABELLA II ARP con assunzione limitata di sale Na Escreto Media 1 S D mEq 24 ore ng ml ora 0 30 16 34 7 52 30 75 5 91 1 82 75 150 2 12 0 68 gt 150 0 85 0 46 TABELLA III ARP con assunzione di sale ad libitum Media 1 S D ng ml ora Ambulatoriali nella norma casuali 1 67 0 83 Non ambulatoriali nella norma 3 30 1 85 14 2 Effetti della postura Una valutazione accurata dei valori dell ARP soggetta alla conoscenza da parte del medico della postura dell individuo poich i valori dell ARP sono influenzati dalla posizione Gli effetti derivanti dall assunzione di una posizione eretta dopo una notte di sonno trascorsa in posizione supina sono illustrati nella TABELLA IV TABELLA IV Effetti della postura Media 1 S D ng ml ora Posizione supina 1 24 1 09 Posizione eretta 2 63 1 32 14 3 Stimolazione da parte del furosemide La valutazione clinica del sistema renina angiotensina pu richiedere una valutazione del cambiamento dell ARP dopo una stimolazione Gli effetti del furosemide sul sistema renina angiotensina rilevati dal cambiamento dell ARP sono stati determinati come illustra uno studio riassunto nella TABELLA V In seguito alla stimo
75. schchen ca 1 Ci Tracer 1 ug ml Angiotensin in 5 ml Phosphat gepufferter Kochsalzl sung mit bovinem Serumalbumin mit Thimerosal als Konservierungsmiittel 4 2 Mit Hase Anti Angiotensin Serum beschichtete R hrchen gebrauchsfertiges Reagenz 12 x 75 mm R hrchen sind mit Hase Anti Angiotensin Serum Titer lt 1 ug R hrchen beschichtet und in einem Plastikbeutel verpackt Bei 2 27 C aufbewahren 4 3 Angiotensin Testpuffer Konzentrat 11X konzentriertes Reagenz Den gesamten Inhalt des Fl schchens mit konzentriertem Testpufferkonzentrat zu 100 ml destilliertem Wasser geben und gut mischen Jedes Fl schchen enth lt 10 ml Phosphatpuffer mit 0 1 Natriumazid als Konservierungsmittel 4 4 Angiotensin Maleinat Generationspuffer gebrauchsfertiges Reagenz Jedes Fl schchen enth lt 5 ml Maleinatpuffer Natrium EDTA Neomycinsulfat und inerten blauen Farbstoff mit 0 1 Natriumazid als Konservierungsmittel 4 5 Angiotensin Phenylmethylsulfonyl Fluorid gebrauchsfertiges Reagenz Jedes Fl schchen enth lt 1 ml Phenylmethylsulfonyl Fluorid PMSF in Athanol 4 6 Renin Aktivitatskontrolle lyophilisiertes Reagenz Vor dem Gebrauch mit 3 0 ml destilliertem Wasser durch Pipettieren bei 2 8 C verd nnen Das Fl schchen f r 10 Minuten in ein Eisbad stellen und vorsichtig vortexen oder gr ndlich mischen 1 0 ml Portionen in vorgek hlte Glas oder Kunststoffr hrchen abf llen Fest verschlie en und bei 20 C aufbewahren Ein Aliquot
76. trabajos radiactivos 5 Las reas donde puedan producirse derrames deben enjugarse y despu s lavarse con un detergente alcalino o una soluci n descontaminante radiol gica Todo recipiente de vidrio utilizado debe enjuagarse completamente con agua antes de lavarse con otros recipientes de laboratorio Para facultativos o instituciones que reciben radiois topos con licencia espec fica La recepci n uso transferencia y eliminaci n de los materiales radiactivos se rigen por la normativa y las condiciones de la licencia en cuesti n ADVERTENCIA Este producto contiene una sustancia qu mica conocida por el Estado de California como causante de c ncer ATENCI N La radiactividad impresa en el interior del paquete puede diferir ligeramente de la impresa en la etiqueta de la caja y en la del vial del trazador La etiqueta de la caja y la del trazador indican la cantidad real de radiactividad en la fecha de la calibraci n mientras que el impreso del interior del paquete indica la radiactividad te rica del equipo 6 RECOLECCI N Y PREPARACI N DE LA MUESTRA La actividad de renina en plasma es m s alta por la ma ana debido a la variaci n en la liberaci n de renina que se produce durante el d a y por tanto las muestras deben tomarse regularmente a la misma hora 8 Recoja una muestra de sangre venosa de forma as ptica en un tubo de vidrio vac o que contenga EDTA Las muestras deber n ser recogidas transportadas y centrifuga
77. uso e transfer ncia est o sujeitos aos regulamentos e licen a geral da Comiss o Reguladora Nuclear dos Estados Unidos do estado com o qual a Comiss o entrou em acordo para o exerc cio da autoridade reguladora 1 O armazenamento de qualquer material radioactivo deve ser limitado a uma rea especificamente designada O acesso a materiais radioactivos deve ser limitado apenas a pessoal autorizado N o pipete material radioactivo por via oral N o coma nem beba nas reas designadas para trabalho radioactivo As reas onde possam ocorrer fugas devem ser limpas e lavadas com detergente lcali ou solu o de descontamina o radiol gica Qualquer vidro usado deve ser enxaguado completamente em gua antes de lavar qualquer outro material de vidro do laborat rio Para m dicos ou institui es que recebem r dio is topos sob uma licen a espec fica A recep o uso transfer ncia e elimina o de materiais radioactivos est o sujeitos aos regulamentos e condi es de sua licen a espec fica ADVERT NCIA Este produto cont m um elemento qu mico que provoca cancro segundo o Estado da Calif rnia ATEN O O s mbolo de radioactividade impresso na embalagem pode ser ligeiramente diferente do s mbolo impresso no r tulo da caixa e no r tulo do frasco do tra ador O r tulo da caixa e do frasco do tra ador indicam a quantidade real de radioactividade na data de calibragem enquanto a embalagem indica a radioactivida
78. zwei Wochen und bei 20 C f r l ngere Zeit aufbewahrt werden Nach der Rekonstitution enth lt jedes Fl schchen 2 ml Angiotensin BSA in Phosphat gepufferter Kochsalzl sung Die Kalibratoren werden auf 0 0 2 0 8 3 0 10 0 und 50 0 ng ml geeicht Die Kalibratoren der DiaSorin Plasma Reninaktivit t werden mithilfe der Mastercharge der laufenden Produktion geeicht Die Kitkalibratoren sind mit Patientenproben austauschbar wenn sie mit Reagenzien verwendet werden und dieser diagnostische In vitro Test wie empfohlen durchgef hrt wird 28 5 WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN NUR ZUR IN VITRO DIAGNOSTIK Nicht f r internen oder externen Gebrauch bei Menschen oder Tieren REAGENZIEN MIT MATERIAL HUMANEN URSPRUNGS Dieses Produkt ist als potenzieller Infektionserreger zu behandeln Alle in der Herstellung dieses Produktes verwendeten Serum bzw Plasma spendeeinheiten wurden nach einer in den Vereinigten Staaten von der Bundesbeh rde FDA genehmigten Methode getestet und f r nicht reaktiv auf Hepatitis B Oberfl chenantigen HBsAg Hepatitis C Antik rper HCV und Antik rper f r HIV 1 2 befunden Obwohl diese Methode u erst genau ist bietet sie keine Gew hr daf r dass alle infizierten Einheiten identifiziert werden k nnen Dieses Produkt kann auch Material humanen Ursprungs enthalten f r welches es noch kein genehmigtes Testverfahren gibt Da keine der zur Zeit bekannten Testmethoden absolute Gew hr f r die Abwesenh
79. 2 sind m glicherweise f r bestimmte Datenreduktionsprogramme erforderlich k nnen jedoch ausgelassen werden wenn die Eichkurve auf halblogarithmischem Millimeterpapier aufgetragen wird 23 25 R hrchen Code Angiotensin Nr R hrcheninhalt Buchst ng O 1 ml T1 T2 Totalaktivit t R hrchen Tracer Puffer 1 2 Angiotensin Blank 0 ng ml A 0 3 4 Angiotensin Kalibrator 0 2 ng ml B 0 02 5 6 Angiotensin Kalibrator 0 8 ng ml C 0 08 7 8 Angiotensin Kalibrator 3 0 ng ml D 0 30 9 10 Angiotensin Kalibrator 10 0 ng ml E 1 0 11 12 Angiotensin Kalibrator 50 0 ng ml F 5 0 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 13 14 Renin Aktivit tskontrolle 37 C Generation 15 16 Renin Aktivit tskontrolle 4 C Generation 17 18 Patient X 37 C Generation 19 20 Patient X 4 C Generation In die entsprechenden doppelten R hrchen pipettieren a 100 pl von jedem Angiotensin Blank oder Kalibrator b 100 pl von den 37 und 4 Generationsreihen der Renin Aktivit tskontrolle in die entsprechende Gruppe von 4 R hrchen c 100 ul von den 37 und 4 Generationsreihen der Patientenproben in die entsprechende Gruppe von 4 R hrchen Zu jedem R hrchen sofort 1 0 ml Tracer Puffer Reagenz geben einschlie lich der Totalaktivit t R hrchen Reagenzien durch vorsichtiges Vortexen jedes R hrchens mischen Alle R hrchen bei Raumtemperatur 20 27 C drei Stunden lang inkubieren Mit Ausnahme der Totalakti
80. 2 7 6 Mischplasma C 20 15 2 1 04 6 8 15 3 Avidit t Die berechnete Affinit tskonstante des Antiserumkits betr gt ca 3 x 109 Liter Mol 15 4 Analytische Spezifit t Die Kreuzreaktivit t des in diesem Kit verwendeten Antiserums wird ausgedr ckt als das Verh ltnis der Angiotensin Konzentration zur Konzentration der kreuzreaktiven Substanz bei 50 Inhibierung der maximalen Bindung Verbindung Kreuzreaktivit t Angiotensin 100 Tetradekapeptid 0 02 Angiotensin Il lt 0 03 Angiotensin Ill lt 0 03 Synthetisches Reninsubstrat LITERATURANGABEN FINDEN SIE AUF DER LETZTEN SEITE 38 EQUIPO GAMMACOAT PARA RADIOINMUNOENSAYO DE ACTIVIDAD DE RENINA EN PLASMA 1 USO INDICADO PARA UTILIZACION EN DIAGNOSTICOS IN VITRO equipo GammaCoat 725 tiene como finalidad la determinaci n cuantitativa de la actividad de renina en plasma PRA mediante radioinmunoensayo de angiotensina generada 2 RESUMEN Y EXPLICACI N La renina es una enzima proteol tica con peso molecular aproximado de 40 000 liberada por la c lulas yuxtaglomerulares del ri n La enzima act a en la circulaci n general para separar su sustrato una globulina alfa 2 sintetizada por el h gado para producir angiotensina decapeptidica La angiotensina se separa r pidamente por la actividad de la enzima conversora principalmente en los pulmones en angiotensina Il octapept dica biol gicamente activa A su vez la angiotensina Il se degrada r pid
81. 20 Mittel 0 20 5 85 17 Plasmaprobe Patient X 37 C 4362 0 41 18 Plasmaprobe Patient X 37 C 4459 0 40 Mittel 0 41 19 Plasmaprobe Patient X 4 C 8546 0 08 20 Plasmaprobe Patient X 4 C 8557 0 08 Mittel 0 08 2 44 34 Typische Eichkurve Nicht zur Berechnung unbekannter Proben verwenden 15 000 x 4 C o O 7 500 Renin Activity Control 4 C Renin Activity Control 37 C 0 0 02 0 08 0 3 1 0 5 0 Angiotension ng tube ABBILDUNG 1 13 GRENZEN DES VERFAHRENS Anmerkungen zum Verfahren 13 1 Der Kunststoffbeutel sollte f r die Lagerung von ungebrauchten R hrchen bei 2 27 C fest verschlossen werden 13 2 Der Wasserpegel muss ber dem der L sung in den R hrchen gehalten werden Die R hrchen d rfen dabei nicht schwimmen 13 3 Eine unsachgem e Lagerung und Handhabung von Proben kann zu falschen Ergebnissen f hren 13 4 Die Eiswassertemperatur muss w hrend der Entnahme und der folgenden Handhabung der Proben streng berwacht werden 13 5 Eingefrorene Proben m ssen schnell auf Raumtemperatur aufgetaut und vor dem Pipettieren gr ndlich gemischt werden 13 6 Es wurde beobachtet dass Heparin die Reninreaktion bei Konzentrationen von 5 IE ml hemmt Heparin sollte daher nicht als Antikoagulanz bei Blutproben verwendet werden die f r den Test der Plasma Renin Aktivit t bestimmt sind 13 7 H molysierte Proben enthalten Angiotensinasen und sollte daher nicht verwend
82. 4 VALORES ESPERADOS A avalia o clinica deste kit da ARP foi efectuada por um investigador independente sendo os resultados descritos resumidamente nesta 5 Os dados apresentados destinam se a servir como forma de orientac o para utilizador deste Devido as varia es na popula o de pacientes os utilizadores s o aconselhados a estabelecer os seus pr prios dados por exemplo ARP vs Nomograma da Excre o de S dio 14 1 Efeito da Ingest o de Sal As amostras de plasma e as recolhas de urina de 24 horas foram obtidas de indiv duos adultos normais sem qualquer doen a cardiovascular ou renal aparente Cada indiv duo foi submetido a uma dieta de conte do rico em s dio e em pot ssio Ap s um per odo de equil brio foram recolhidas as amostras de plasma da ARP e as amostras de urina de 24 horas Os resultados desses estudos s o apresentados na TABELA Il Os dados foram divididos em quatro subgrupos com base no intervalo da excre o de s dio observado ingest o de sal ad libitum 75 150 mEq 24 hrs dieta suplementada com sal 150 mEq 24 hrs e duas dietas sem sal poss vel em circunst ncias cl nicas de rotina obter redu es modestas na excre o de s dio para 30 75 mEq 24 hrs O intervalo inferior da excre o de s dio de 0 30 mEq 24 hrs pouco habitual e requer uma restri o severa da ingest o de s dio Observou se a rela o inversa prevista entre a ARP e a excre o de s dio pela u
83. 500 et 1000 7 7 Compteur gamma 7 8 Tubes en plastique ou en verre de 12 x 75mm pour la production d angiotensine 7 9 Portoirs pour tubes essai 7 10 Agitateur m langeur de type vortex facultatif 7 11 Aspirateur d eau facultatif 7 12 Papier absorbant doubl d une pellicule plastique facultatif 8 PROC DURE DE PRODUCTION D ANGIOTENSINE I 8 1 Transf rer 1 0 ml de plasma dans un tube en verre ou en plastique non enduit marqu du num ro d identification et du suffixe 37 8 2 Ajouter 10 ul de solution de PMSF et 100 ul de tampon de production mal ate pH 6 0 chaque aliquot de 1 0 ml de l tape 1 Bien m langer et placer dans un bain de glace 8 3 Transf rer 500 ul du plasma de l tape 2 dans un tube r frig r correspondant marqu du suffixe 4 18 8 4 8 5 Placer la serie de tubes 37 dans un bain marie 37 C Laisser la serie de tubes 4 dans un bain de glace Laisser se derouler la production en tampon mal ate pendant 90 minutes On a mis l hypoth se que des chantillons de patient ayant des valeurs de Pactivit de la r nine plasmatique inf rieures a 1 0 ng ml h pouvaient tre incub s pendant dix huit heures pour la production puis dos s nouveau Les calculs doivent tre ajust s pour toute modification du temps de production A la fin de la p riode de production transf rer la s rie d chantillons 37 soit dans un bain de glace si le dosage doit avoir lieu imm diate
84. 7 9 1 68 9 4 ng mL hr ng mL hr 20 1 6 0 09 5 6 A 20 10 7 0 82 7 6 B 20 15 2 1 04 6 8 15 3 H TOU TOU rrep rrou 3 x 1019 A tpa mole 15 4 WG 50 100 0 02 Il 0 03 0 03
85. 8 ng x 7 40 ml ora ARP 2 44 ng ml ora ARP 59 TABELLA I Registrazione dei dati Non usare per calcolare campioni non noti Livello di angiotensinal ARP Provetta Contenuto CPM ng finale N delle provette limite provetta ng ml ora Conteggi totali buffer tracciante 29242 T2 Conteggi totali buffer tracciante 28992 1 Angiotensina prova in bianco 0 ng provetta 13617 Angiotensina prova in bianco 0 ng provetta 13048 3 Angiotensina Calibratore 0 02 ng provetta 13163 4 Angiotensina Calibratore 0 02 ng provetta 12625 5 Angiotensina Calibratore 0 08 ng provetta 11305 6 Angiotensina Calibratore 0 08 ng provetta 11291 7 Angiotensina Calibratore 0 3 ng provetta 6991 8 Angiotensina Calibratore 0 3 ng provetta 7110 9 Angiotensina Calibratore 1 0 ng provetta 3053 10 Angiotensina Calibratore 1 0 ng provetta 3056 11 Angiotensina Calibratore 5 0 ng provetta 1307 12 Angiotensina Calibratore 5 0 ng provetta 1232 13 Controllo attivit renina 37 C 3149 0 97 14 Controllo attivit renina 37 C 3053 1 01 Media 0 99 15 Controllo attivit renina 4 C 8674 0 20 16 Controllo attivit renina 4 C 8607 0 20 Media 0 20 5 85 17 Campione di plasma del paziente X 37 C 4362 0 41 18 Campione di plasma del paziente X 37 C 4459 0 40 Media 0 41 19 Campione di plasma del paziente X 4 C 8546 0 08 20 Campi
86. DC 22 utgiven av Centers for Disease Control and Prevention Atlanta USA 1976 Europeiska Gemenskapens Riskfraser for farliga preparat EU kommissionens direktiv 1999 45 EC R20 21 22 Farligt vid inandning hudkontakt och f rt ring R32 Utvecklar mycket giftig gas vid kontakt med syra 28 Vid kontakt med huden tvatta genast med mycket vatten REAGENS SOM INNEHALLER TIMEROSAL Vissa reagens i satsen inneh ller timerosal dar en kvicksilverf rening ingar Metalliskt kvicksilver oorganiska kvicksilverf reningar kvicksilveroxider och organiska kvicksilverf reningar m ste kasseras i strikt verensst mmelse med alla lokala och nationella regler VARNING Produkten inneh ller en kemikalie som enligt staten Kalifornien r k nd f r att orsaka missbildningar eller annan reproduktiv skada Europeiska Gemenskapens Riskfraser f r farliga preparat EU kommissionens direktiv 1999 45 EC Reagens som inneh ller etanol R11 Mycket brandfarligt S16 F rvaras tskilt fran ant ndningsk llor R kning f rbjuden S43 Vid brandsl ckning anv nd pulver eller koldioxid Reagens som inneh ller PMSF R23 24 25 Giftigt vid inandning hudkontakt och f rt ring S36 Anv nd l mpliga skyddskl der S45 Vid olycksfall illam ende eller annan p verkan kontakta omedelbart l kare Reagens som inneh ller kaliumhydroxid R35 Starkt fr tande S26 Vid kontakt med gonen spola genast med mycket vatten och kontakta l
87. GammaCoat Plasma Renin Activity 125 RIA Kit For the quantitative determination of plasma renin activity PRA by the radioimmunoassay of generated angiotension Instruction Manual Manuel d Instructions Testanleitung Manual de Instrucciones Manuale di Istruzioni Manual de instru es Bruksanvisning Catalog No REF KAT NR N de Cat logo Numero di Catalogo N de Cat logo Katalognummer CA 1533 CA 1553 DiaSorin Stillwater Minnesota 55082 0285 U S A TABLE OF CONTENTS A ara Ra ER Page 1 Francais lb dbz a ee 13 Deutsch 26 ei c eine een 39 Italiano 02 Portugu s 65 IC 78 NS ner ME a a e 90 GAMMACOAT PLASMA RENIN ACTIVITY RADIOIMMUNOASSAY KIT 1 INTENDED USE FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE The GammaCoat 15 Plasma Renin Activity Radioimmunoassay Kit is to be used for the quantitative determination of plasma renin activity PRA by the radioimmunoassay of generated angiotensin 2 SUMMARY AND EXPLANATION Renin a proteolytic enzyme with a molecular weight of approximately 40 000 is released from the juxtaglomerular cells of the kidney The enzyme acts in general circulation to cleave its substrate an alpha 2 globulin synthesized by the liver to produce the deca peptide angi
88. H d incubation 3 2 degr de dilution du plasma 3 3 choix des inhibiteurs enzymatiques 3 4 facteurs inconnus dans chaque chantillon individuel de plasma par exemple la concentration en substrat de la r nine 3 5 dur e d incubation 3 6 temp rature d incubation pH de production La vitesse de production de l angiotensine in vitro est fonction du pH La proc dure utilis e dans cette trousse fonctionne un pH de production de 6 0 le pH habituel des chantillons apr s addition de tampon pH 5 7 L avantage d une incubation pH 6 0 plut t qu au pH physiologique de 7 est un doublement de la vitesse de production de l angiotensine qui engendre une meilleure sensibilit pour les chantillons faible teneur en r nine Cette optimisation permet un raccourcissement du temps de production Choix de l inhibiteur enzymatique Un grand nombre de substances peuvent tre utilis es pour inhiber la conversion enzymatique de l angiotensine en angiotensine Il et pour emp cher la d gradation prot olytique au cours de la production d angiotensine 1 15 L inhibiteur utilis dans cette proc dure est le fluorure de ph nylm thylsulfonyle PMSF Effet de la dilution du plasma La dilution du plasma est viter car la r action de la r nine est tributaire du substrat la concentration de substrat de la r nine qui est habituellement pr sente dans le plasma L effet d une dilution du substrat est observable tout
89. HAFTAR VID RORVAGGARNA AVLAGSNAS PA KORREKT SATT KAN MAN FA D LIG REPRODUCERBARHET OCH FELAKTIGA VARDEN Om man v ljer att suga bort vatskan m ste man se till att plastspetsen pa sugen vidr r botten pa det belagda r ret och att all vatska sugs bort Om man v ljer att dekantera skall man lata r ren sta upp och ned och droppa av i 3 5 minuter Knacka r ren mot absorberande papper f r att fa bort all vidhaftande vatska och v nd dem sedan r tt igen 9 7 R kna alla r r 1 minut i en gammar knare med f nstret korrekt inst llt f r jod 125 9 8 Ber kna resultaten Se avsnittet Resultat 10 KVALITETSKONTROLL En reninaktivitetskontroll medf ljer i satsen Se etiketten pa flaskan f r dess nominella varde Kontrollen maste genomga inkubering f r angiotensinbildning innan den k rs i assayen Varje laboratorium b r anv nda kontroller med flera olika nivaer f r att folja upp testets prestanda Kontrollerna skall behandlas som ok nda prov Man b r kontinuerligt f ra in kontrollvardena i ett diagram f r att kunna f lja hur val kontrollerna ligger Lampliga statistiska metoder skall anv ndas f r att utv rdera trenderna Varje enskilt laboratorium b r fastst lla godtagbara prestandagr nser 11 RESULTAT 11 1 Anteckna den bundna aktiviteten i CPM f r varje r r 11 2 Plotta bunden aktivitet CPM f r kalibreringsl sningarna lodr t axel mot m ngden tillsatt angiotensin ng per r r v gr t axel p ett lin l
90. O 7 500 Renin Activity Control 4 C Renin Activity Control 37 C 0 0 02 0 08 0 3 1 0 5 0 Angiotension ng tube FIGURE 1 13 LIMITES DU DOSAGE Au niveau de la proc dure 13 1 13 2 13 3 13 4 13 5 13 6 13 7 13 8 13 9 Le sac en plastique contenant les tubes enduits doit tre soigneusement referm pour conserver les tubes non utilis s et maintenu une temp rature de 2 a 27 C Le niveau d eau doit tre maintenu au dessus du niveau de la solution dans les tubes mais sans que les tubes ne flottent L utilisateur doit garder en m moire qu une manipulation des chantillons de patients peut engendrer des r sultats erron s On accordera une attention toute particuli re au maintien de la temp rature du bain de glace au cours du pr l vement et de la manipulation ult rieure des chantillons Les chantillons congel s doivent tre d congel s rapidement temp rature ambiante et bien m lang s avant de les pipeter On a constat que l h parine inhibe la r action de la r nine des concentrations de 5 Ul ml par cons quent on ne doit pas utiliser d heparine comme anticoagulant pour les chantillons de sang destin s au dosage de l activit de la r nine plasmatique 5 Les chantillons h molys s contiennent des angiotensinases et ne doivent pas tre utilis s Les donn es publi es indiquent qu il n est pas possible d affirmer la lin arit de la production d angiotensine au cou
91. Prov f r intraseriell Antal Medelv rde Standardavvikelse Variationskoefficient ae assayer ng mL h ng mL h precision PlasmapoolA 20 1 6 0 16 10 0 PlasmapoolB 20 6 2 0 28 4 6 PlasmapoolC 20 17 9 1 68 9 4 Prov f r Antal Medelv rde Standardavvikelse ons p interseriell Variationskoefficient vs assayer ng mL h ng mL h precision PlasmapoolA 20 1 6 0 09 5 6 PlasmapoolB 20 10 7 0 82 7 6 PlasmapoolC 20 15 2 1 04 6 8 15 3 Aviditet Den ber knade affinitetskoefficienten f r satsens antiserum r cirka 3 x 10 liter mol 15 4 Analytisk specificitet Data f r korsreaktiviteten f r det antiserum som anv nds i satsen uttrycks som kvoten mellan koncentrationen av angiotensin och koncentrationen av det korsreagerande mnet vid 50 h mning av maximal bindning F rening korsreaktivitet Angiotensin 100 Tetradekapeptid 0 02 Angiotensin Il lt 0 03 Angiotensin Ill lt 0 03 Syntetiskt reninsubstrat F R REFERENSER H NVISAS TILL SISTA SIDAN 89 KIT GAMMACOAT 1 VITRO To GammaCoat 25
92. a REAGENTI FORNITI CON IL KIT Provette rivestite di siero di coniglio anti 1 sacchetto 100 5 sacchetti 100 angiotensina provette provette Buffer per analisi dell angiotensina 11x 1 fiala 50 ml 6 fiale 1 ml Buffer per la generazione di maleato per 1 fiala 50 ml 2 fiale 5 ml angiotensina PMSF per angiotensina 1 fiala 50 ml 2 fiale 1 ml Controllo per l attivit della renina 1 fiala 50 ml 6 fiale 1 ml Calibratori dell angiotensina A F 6 fiale 1 ml 6 fiale 1 ml Tracciante dell angiotensina 2 fiale 5 ml 2 fiale 5 ml Numero di test CONSERVAZIONE Il kit deve essere conservato a 2 8 C Dopo l apertura conservare ogni reagente attenendosi alle raccomandazioni seguenti reagenti non devono essere utilizzati dopo la data di scadenza La data di scadenza del kit indicata sull etichetta esterna e si riferisce alla data di scadenza del tracciante Non si devono mescolare reagenti di lotti diversi 53 41 25 Tracciante dell angiotensina reagente liofilizzato Ricostituire la fiala di reagente di tracciante dell angiotensina I 1 aggiungendo 5 ml di acqua purificata Mescolare bene capovolgendo la fiala o agitandola su vortex Aggiungere il contenuto di due fiale di tracciante a 100 ml di buffer per analisi Il reagente del buffer tracciante stabile a 2 8 C fino alla data di scadenza del kit In seguito alla ricostituzione ciascuna fiala contiene circa 1 uCi tracciante 1 ug ml di angiotensina in 5 ml d
93. a U S FDA approved method and found non reactive for the presence of HBsAg antibody to HCV and antibody to HIV 1 2 While these methods are highly accurate they do not guarantee that all infected units will be detected This product may also contain other human source material for which there is no approved test Because no known test method can offer complete assurance that hepatitis B virus hepatitis C virus HCV Human Immunodeficiency Virus HIV or other infectious agents are absent all products containing human source material should be handled in accordance with good laboratory practices using appropriate precautions as described in the Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed May 1999 or current edition REAGENTS CONTAINING SODIUM AZIDE CAUTION Some reagents in this kit contain sodium azide Sodium azide may react with lead or copper plumbing to form highly explosive metal azides On disposal flush with a large volume of water to prevent azide build up For further information refer to Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts in the Manual Guide Safety Management No CDC 22 issued by the Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 European Communities Hazardous Substance Risk Phrases Council Directive 1999 45 EC R20 21 22 Harmful by inhalation in contact with skin and
94. a fra i duplicati per 20 cicli di analisi separate Campione per d Numero di Media Deviazione Coefficiente di precisione fra pi nd standard tok bet analisi ng ml ora variazione cicli di analisi ng ml ora Vasca di plasma A 20 1 6 0 16 10 0 Vasca di plasma B 20 6 2 0 28 4 6 Vasca di plasma C 20 17 9 1 68 9 4 Campione per le Numero di Media Deviazione Coefficiente di precisione fra pi NT standard Rs RENEE a analisi ng ml ora variazione cicli di analisi ng ml ora Vasca di plasma A 20 1 6 0 09 5 6 Vasca di plasma B 20 10 7 0 82 7 6 Vasca di plasma C 20 15 2 1 04 6 8 15 3 Avidit La costante dell affinit calcolata dell antisiero del presente kit approssimativamente di 3 x 1010 litri mole 15 4 Specificit analitica dati sulla reattivit incrociata dell antisiero utilizzato in questo kit sono espressi come rapporto di concentrazione di angiotensina rispetto alla concentrazione della sostanza reagente incrociata ad inibizione del 50 di legame massimo Composto di reattivit incrociata Angiotensina 100 Tetradecapeptide 0 02 Angiotensina Il lt 0 03 Angiotensina III lt 0 03 Substrato di renina sintetica FARE RIFERIMENTO ALL ULTIMA PAGINA PER LA BIBLIOGRAFIA 64 KIT DE RADIOIMUNOENSAIO DA ACTIVIDADE DA RENINA PLASM TICA GAMMACOAT 1 USO INDICADO PARA USO DIAGN STICO IN VITRO O kit de radioimunoensaio da actividade da renina plasm tica GammaCoat 7251 foi concebido par
95. a ser usado na determina o quantitativa da actividade da renina plasm tica ARP atrav s do radioimunoensaio da angiotensina gerada 2 RESUMO E EXPLICA O A renina uma enzima proteol tica com um peso molecular de cerca de 40 000 libertada pelas c lulas justaglomerulares renais A enzima actua na circula o geral para separar o seu substrato uma globulina alfa 2 sintetizada pelo f gado de forma a produzir a angiotensina decap ptida A angiotensina separada rapidamente pela actividade de enzimas conversoras principalmente nos pulm es para a angiotensina Il octap ptida biologicamente activa Por sua vez a angiotensina Il degradada rapidamente em fragmentos p ptidos inactivos pelas enzimas presentes no plasma e nos tecidos designadas como angiotensinases A passagem metab lica do sistema renina angiotensina descrita a seguir substrato de renina renina abgiotensina I enzima conversora apgiotensina Il angiotensinases fragmentos peptidos inactivos A angiotensina ll possui uma meia vida in vivo extremamente curta mas vasopressor mais potente conhecido A angiotensina Il desempenha um papel importante em diversas formas da hipertens o bem como na regulac o da press o arterial Al m disso a angiotensina Il foi considerada como sendo a principal influenciadora da secre o de aldosterona por parte da gl ndula adrenal As dificuldades t cnicas associadas medi o dos n veis da angiotens
96. actives avec la bouche Ne pas manger ni boire dans les zones de travail radioactives En cas de d versement de produits radioactifs dans une zone nettoyer la zone puis la laver l aide d une produit d tergent base d alcali ou d une solution de d contamination radioactive Tout article en verre utilis doit tre entierement lav l eau avant de le laver avec les autres articles en verre du laboratoire ARN 17 Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence sp cifique La r ception l utilisation le transfert et l limination de produits radioactifs sont soumis aux r glementations et conditions de votre licence sp cifique AVERTISSEMENT Ce produit contient un produit chimique connu dans l Etat de Californie comme tant canc rig ne ATTENTION La radioactivit indiqu e sur la notice d utilisation peut tre l g rement diff rente de celle indiqu e sur l tiquette de la bo te et sur l tiquette du flacon du traceur Les tiquettes de la bo te et du flacon du traceur indiquent la dose r elle de radioactivit la date de calibrage alors que la notice d utilisation indique la radioactivit th orique de la trousse 6 PR L VEMENT ET PR PARATION DES CHANTILLONS L activit de la r nine plasmatique est maximale le matin en raison des variations diurnes de la lib ration de r nine et les chantillons doivent tre syst matiquement pr lev
97. ad de renina del conjunto de generaci n 37 y 4 en el grupo de 4 tubos apropiado 100 uL de cada muestra de pacientes del conjunto de generaci n 37 y 4 en el grupo de 4 tubos apropiado Agregue inmediatamente 1 0 mL de reactivo trazador tamp n a cada tubo incluidos los de cuentas totales Mezcle los reactivos mezclando suavemente en v rtex cada tubo por separado Incube todos los tubos a temperatura ambiente 20 27 C durante 3 horas Aspire o decante todos los tubos excepto los de cuentas totales EN EL CASO DE QUE NO SE ELIMINE DE FORMA CORRECTA LA DISOLUCI N ADHERIDA LA DUPLICACI N PUEDE RESULTAR INSUFICIENTE Y LOS VALORES INCORRECTOS Si se utiliza la t cnica de aspiraci n compruebe que la punta de pl stico del tubo de aspiraci n toca la parte inferior del tubo recubierto y que se extrae todo el l quido Si se utiliza la t cnica de decantaci n permita que los tubos drenen en posici n invertida durante 3 a 5 minutos Golpee suavemente los tubos sobre un papel absorbente para eliminar todo el l quido adherido antes de colocar los tubos hacia arriba Determine el n mero de cuentas de todos los tubos en un contador gamma durante 1 minuto con la ventana ajustada de forma apropiada para yodo 125 Calcule los resultados Consulte la secci n Resultados 10 CONTROL DE CALIDAD El equipo contiene un control de actividad de renina Consulte el valor nominal en la etiqueta del vial Someta el c
98. adounidense y han dado resultados negativos para la presencia de AgsHB anticuerpos de VHC y anticuerpos de VIH 1 2 Aunque estos m todos son altamente precisos no puede garantizarse que se detecten todas las unidades infectadas Este producto tambi n puede contener otros materiales de origen humano para los cuales no existe prueba homologada Dado que ning n m todo de prueba puede ofrecer una seguridad total de la ausencia del virus de la hepatitis B VHB de la hepatitis C VHC el virus de inmunodeficiencia humana VIH u otros agentes infecciosos todos los productos que contengan material de origen humano se deben manejar de acuerdo con las pr cticas de laboratorio correctas utilizando las precauciones adecuadas que se describen en Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed mayo 1999 o actual REACTIVOS CON CONTENIDO DE AZIDA S DICA PRECAUCI N Algunos reactivos de este equipo contienen azida s dica La azida s dica puede reaccionar con las ca er as de plomo y cobre y formar azidas met licas altamente explosivas Al desecharlo enjuague con abundante agua para evitar que se acumule la azida Para obtener informaci n adicional consulte Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts en el manual Guide Safety Management N CDC 22 publicado por Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 Advertencias establecidas en la Comunidad Europea sobre el riesgo de sustancias
99. amente en fragmentos pept dicos inactivos debido a la acci n de las enzimas presentes en el plasma y los tejidos conocidas como angiotensinasas La v a metab lica del sistema de renina angiotensina se describe m s adelante sustrato de renina renina giotensina enzima conversora giotensina angiotensinasas fipgmentos pept dicos inactivos La angiotensina Il tiene una vida media in vivo extremadamente corta pero es el m s potente de los vasopresores conocidos El papel de la angiotensina Il es fundamental en diversas formas de hipertensi n y para la regulaci n de la presi n sangu nea Adem s se ha establecido la angiotensina Il como la influencia principal para la secreci n de aldosterona por la gl ndula suprarrenal Diversas dificultades t cnicas asociadas a las mediciones de los niveles de angiotensina Il en sangre han retrasado la aceptaci n general de este ensayo en los laboratorios cl nicos Dado que los niveles de angiontensina son una representaci n directa de la actividad de renina en plasma su determinaci n es una pr ctica adoptada ampliamente para evaluar el sistema de renina angiotensina en los estados de enfermedad La medici n de la actividad de renina en plasma en pacientes hipertensos constituye una ayuda importante para el diagn stico diferencial de aldosteronismo primario y secundario La estimaci n de la actividad de renina es igualmente valiosa para determinar el pron stico y la terapia m
100. angiotensina 50 0 ng mL F 5 0 13 14 Controlo da actividade da renina gera o a 37 C 15 16 Controlo da actividade da renina gera o a 4 C 17 18 Paciente X gera o a 37 C 19 20 Paciente X gera o a 4 C Pipete para os tubos duplicados adequados a 100 uL de cada amostra em branco ou calibrador da angiotensina l b 100 uL do controlo de actividade da renina dos conjuntos de gera o 37 e 4 ao grupo adequado de 4 tubos c 100 uL de cada amostra do paciente dos conjuntos de gera o 37 e 4 ao grupo adequado de 4 tubos Adicione imediatamente 1 0 mL de reagente tra ador tamp o a cada tubo incluindo os de Contagem Total Misture os reagentes agitando cuidadosamente cada tubo Incube todos os tubos temperatura ambiente 20 27 C durante tr s horas Aspire ou decante todos os tubos excepto os de Contagem Total A N O REMO O DA SOLU O ADERENTE DE FORMA ADEQUADA PODER RESULTAR NUMA REPRODU O DEFICIENTE E EM VALORES FALSOS Se utilizar a t cnica de aspira o certifique se de que a ponta pl stica do tubo de aspira o entra em contacto com o fundo do tubo revestido e de que a totalidade do l quido retirada Se utilizar a t cnica de decanta o permita que os tubos sequem numa posi o invertida durante 3 a 5 minutos Passe os tubos por papel absorvente para retirar qualquer l quido que possa ter permanecido no interior antes de colocar os tubos di
101. anti Angiotensin Coated Tubes 1 bag 100 tubes 5 bags 100 tubes Angiotensin Assay Buffer 11x 1 vial 10 mL 5 vials 10 mL Angiotensin Maleate Generation Buffer 1 vial 5 mL 3 vials 5 mL Angiotensin PMSF 1 vial 1 mL 2 vials 1 mL Renin Activity Control 1 vial 3 mL 2 vials 3 mL Angiotensin Calibrators A F 6 vials 2 mL 12 vials 2 mL Angiotensin Tracer 2 vials 5 mL 10 vials 5 mL Number of tests STORAGE Upon receipt the kit should be stored at 2 8 C After opening store each reagent as recommended below Reagents should not be used past the expiration date on the label The expiration date of the kit is reported on the external label and corresponds to the expiration date of the tracer Reagents from different batches must not be mixed 4 1 51 Angiotensin I Tracer lyophilized reagent Reconstitute the 25 Angiotensin Tracer vial by adding 5 mL purified water Mix well by inverting or gently vortexing the vial Add the contents of two tracer vials to 100 mL of assay buffer The tracer buffer reagent is stable at 2 8 C until the kit expiration date Upon reconstitution each vial contains approximately 1 tracer 1 ug mL Angiotensin in 5 mL of phosphate buffered saline with bovine serum albumin with thimerosal added as a preservative 4 2 Rabbit Anti Angiotensin Serum Coated Tubes ready to use reagent 12 x 75 mm tubes are coated with rabbit anti angiotensin serum titer 1 ug tube and packed in a plastic bag Store
102. ants et des lunettes un masque de protection adapt s REACTIFS CONTENANT DE L IODE 125 Cette trousse contient un produit radioactif qui ne d passe pas 2 74 kBq trousse CA 1533 ou 10 Ci 370 kBq trousse CA 1553 d iode 125 Les pr cautions appropri es et les bonnes pratiques de laboratoire doivent tre respect es pour la conservation la manipulation et l limination de ce produit Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence g n rale Ce produit radioactif peut tre recu r ceptionn d tenu et utilis uniquement par des m decins des v t rinaires et des centres de recherche dans le cadre de la pratique de la m decine v t rinaire des laboratoires cliniques ou des h pitaux et uniquement pour des analyses cliniques ou de laboratoire in vitro n impliquant pas l administration interne ou externe du produit ni par rayonnement l homme ou l animal Sa r ception son acquisition sa d tention son utilisation et son transfert sont soumis aux r glementations et la licence g n rale de l U S Nuclear Regulatory Commission de l tat avec lequel la Commission a conclu un accord pour l exercice de l autorit r glementaire 1 Le produit radioactif doit tre conserv dans son r cipient d origine un endroit d sign L acc s aux produits radioactifs doit tre limit au personnel autoris uniquement Ne pas pipeter des solutions radio
103. ar utv rderats av en oberoende forskare och resultaten sammanfattas i detta avsnitt Presenterade data r avsedda som en v gledning f r anv ndaren P grund av variationerna mellan olika patientpopulationer rekommenderar vi att anv ndarna uppr ttar egna data exempelvis ett nomogram f r PRA natriumuts ndring 14 1 Effekter av saltintag Plasmaprover och 24 timmarsurin insamlades fr n friska vuxna f rs kspersoner utan synbar hj rtk rl eller njursjukdom Varje f rs ksperson sattes p en diet med k nt natrium och kaliuminneh ll Efter en j mviktningsperiod insamlades plasmaprover f r PRA och 24 timmarsurinprov Resultaten fr n dessa studier redovisas i TABELL II Data delades in i fyra undergrupper baserat p observerade natriumuts ndringsv rden saltintag ad libitum 75 150 mEq 24 h diet med salttillskott 150 mEq 24 h och tv dieter med saltrestriktioner Under kliniska f rh llanden kan man stadkomma m ttliga reduktioner av natriumuts ndringen till 30 75 mEq 24 h Det l gre intervallet f r natriumuts ndring 0 30 mEq 24 h r ovanligt och kr ver str nga restriktioner f r natriumintag Det f rv ntade omv nda sambandet mellan PRA och natriumuts ndringen i urin observerades Eftersom saltm ngden i kosten varierar regionalt rekommenderar vi att varje enskilt laboratorium tar fram data f r PRA vs natriumuts ndring Under den kliniska utv rderingen av denna sats insamlades prov fr n ambulanta eller
104. areduktionsprogram men kan ven uteslutas om kalibreringskurvan plottas p lin log papper 3 25 R r Kod Angiotensin Inneh ll i r ren bokstav ng 0 1 mL T1 T2 Totalaktivitet Berett sp r mne 2 Angiotensin blank O ng mL A 0 4 Angiotensin I kalibreringsl snng 0 2 ng mL B 0 02 6 Angiotensin I kalibreringsl6sning 0 8 ng mL C 0 08 8 Angiotensin I kalibreringsl sning 3 0 ng mL D 0 30 9 10 Angiotensin I kalibreringsl sning 10 0 ng mL E 1 0 11 12 Angiotensin I kalibreringsl sning 50 0 ng mL F 5 0 13 14 Reninaktivitetskontroll 37 C angiotensinbildning 15 16 Reninaktivitetskontroll 4 C angiotensinbildning 17 18 Patient X 37 C angiotensinbildning 19 20 Patient X 4 C angiotensinbildning 9 4 9 5 Pipettera till respektive dubbelprovsr r a 100 uL av varje angiotensin I blank eller kalibreringsl sning b 100 reninaktivitetskontroll som genomg tt angiotensinbildning vid 37 C respektive 4 C Tv r r f r vardera temperaturen ger en grupp p fyra r r 100 uL fran 37 r ret respektive 4 r ret f r varje patientprov Tv r r f r vardera ger en grupp p fyra r r Tills tt genast 1 0 mL berett sp r mnesreagens till varje r r inklusive totalaktivitetsr ren Blanda reagensen genom att f rsiktigt vortexa varje r r Inkubera alla r r vid rumstemperatur 20 27 C i tre timmar 83 9 6 Sug bort eller dekantera vatskan i alla r r utom totalaktivitet OM INTE LOSNING SOM
105. as an anti coagulant See Procedural Limitations section for additional precautions and information 7 MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 7 1 Purified water 7 2 Constant temperature water bath 37 2 C 7 3 Ice water bath 7 4 Volumetric pipets 1 2 3 and 5 mL 7 5 Graduated cylinder 100 mL 7 6 Precision pipets 10 100 500 and 1000 uL 7 7 Gamma counter 7 8 Plastic or glass tubes 12 x 75 mm for angiotensin generation 7 9 Test tube racks 7 10 Vortex mixer optional 7 11 Water aspirator optional 7 12 Plastic backed absorbent paper optional 8 ANGIOTENSIN I GENERATION PROCEDURE 8 1 Transfer 1 0 mL of plasma to an uncoated glass or plastic tube marked with the identifying number and the suffix 37 8 2 Add 10 pL of the PMSF solution and 100 uL of the maleate generation buffer pH 6 0 to each 1 0 mL aliquot from step 1 Mix well and place in ice bath 8 3 Transfer 500 of the plasma from step two to a corresponding chilled tube marked with the suffix 4 8 4 Place the 37 series of tubes into a 37 C water bath Maintain the 4 series of tubes in an ice bath Run the maleate buffer generation for 90 minutes It has been suggested that patient samples with PRA values less than 1 0 ng mL hr may be generated in an eighteen hour incubation and then reassayed Calculations must be adjusted for any change in generation time 8 5 At the end of the generation period transfer the 37 series of samples either to t
106. at 2 27 C 4 3 Angiotensin Assay Buffer Concentrate 11X concentrated reagent Add the entire contents of the assay buffer concentrate vial to 100 mL purified water and mix well Each vial contains 10 mL of phosphate buffer with 0 1 sodium azide as a preservative 4 4 Angiotensin Maleate Generation Buffer ready to use reagent Each vial contains 5 mL of maleate buffer sodium EDTA neomycin sulfate and inert blue coloring with 0 1 sodium azide as a preservative 4 5 Angiotensin Phenylmethylsulfonyl Fluoride ready to use reagent Each vial contains 1 mL of phenylmethylsulfonyl fluoride PMSF in ethanol 4 6 Renin Activity Control lyophilized reagent Reconstitute before use by pipetting 3 0 mL purified water at 2 8 C Keep vial in an ice bath for 10 minutes and gently vortex or swirl to mix thoroughly Aliquot 1 0 mL portions into pre chilled glass or plastic tubes Seal tightly and store at 20 C One aliquot may be kept in an ice bath or refrigerated at 2 8 C if the assay is performed at this time The reconstituted control must be stored frozen at 20 C and is stable for at least two months Thawing must be done in an ice bath or in a refrigerator at 2 8 C and the reconstituted control must not be refrozen after thawing Variations in PRA have been observed upon repeated assay of frozen plasma after various periods of storage Thus the use of stored frozen plasma as a control in PRA determinations may lead to unreliable resul
107. ata di calibrazione mentre il materiale informativo della confezione indica la radioattivit teorica del kit gt 56 6 RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Il picco massimo dell attivit della renina plasmatica si registra al mattino poich essa variabile durante il giorno e i campioni devono essere raccolti regolarmente in quel momento della giornata Un campione di sangue venoso viene prelevato con tecnica asettica utilizzando una provetta di vetro evacuata contenente EDTA campioni possono essere raccolti trasportati e centrifugati a temperatura ambiente ll sangue pu rimanere a temperatura ambiente fino a sei ore prima della centrifugazione senza presentare un accumulo significativo di angiotensina l Dopo avere centrifugato il sangue il plasma pu essere conservato congelato fino al momento dell analisi campioni si conservano congelati a 20 C per un massimo di un mese meglio evitare i cicli di congelamento scongelamento che possono verificarsi nei freezer con sbrinamento automatico Sono state osservate variazioni a carico dell ARP a causa sia della conservazione a 2 8 C sia della conservazione prolungata a 20 C 29 21 Prima di eseguire l analisi i campioni congelati devono essere scongelati rapidamente e riportati a temperatura ambiente bene evitare l uso di campioni emolizzati lipemici o itterici Non utilizzare l eparina come anti coagulante Consultare la sezione Limiti della procedura per ulter
108. ats kan plasma f rvaras i frys tills den testas Proverna kan f rvaras frysta vid 20 C i upp till en m nad Undvik cykler med upptining och frysning ven s dana som kan f rekomma i sj lvavfrostande frysar Man har observerat variationer i PRA orsakade b de av f rvaring vid 2 8 C och av l ngvarig f rvaring vid 20 C 21 F re assay m ste de frysta proverna snabbt tinas till rumstemperatur Hemolyserade lipemiska eller ikteriska prover eller prover med citrattillsats b r ej anv ndas Anv nd ej heparin som koagulationsh mmande medel Se avsnittet Metodbegr nsningar f r ytterligare f rsiktighets tg rder och upplysningar 7 EJ TILLHANDAHALLEN MEN N DV NDIG MATERIEL 7 1 Renat vatten 7 2 Vattenbad med en konstant temperatur p 37 2 C 7 3 Isbad 7 4 Vollpipetter 1 2 3 och 5 mL 7 5 Matglas 100 mL 7 6 Precisionspipetter 10 100 500 och 1000 uL 7 7 Gammar knare 7 8 Plast eller glasr r 12 x 75 mm f r bildning av angiotensin 7 9 Provr rsst ll 7 10 Vortexblandare ej obligatoriskt 7 11 Vattensug ej obligatoriskt 7 12 Absorberande papper med plastad baksida ej obligatoriskt gt 82 8 PROCEDUR FOR ANGIOTENSIN I BILDNING 8 1 8 2 8 3 8 4 8 5 Pipettera 1 0 mL plasma till ett glas eller plastr r utan antikroppbelaggning R ret skall vara markt med patientidentifiering plus suffixet 37 Tills tt 10 uL PMSF l sning och 100 uL maleatbuffert pH 6 0 ti
109. bad legen 8 3 500 uL des Plasmas von Schritt zwei in das betreffende gek hlte und mit Suffix 4 markierte R hrchen berf hren 8 4 Die 37 Reihen von R hrchen in ein 37 C warmes Wasserbad stellen Die 4 Reihen von R hrchen in einem Eisbad aufbewahren Die Maleinat Puffergeneration f r 90 Minuten laufen lassen Es wird empfohlen Patientenproben mit PRA Werten unter 1 0 ng ml h in einer achtzehnst ndigen Inkubation zu generieren und dann erneut zu testen Die Berechnungen m ssen bei jeder nderung der Generationszeit neu durchgef hrt werden 8 5 Nach der Beendigung der Generation die 37 Reihen Proben entweder in ein Eisbad stellen falls der Assay sofort vorgenommen wird oder zusammen mit den 4 Reihen Proben f r zuk nftige Tests in einem Tiefk hlschrank aufbewahren 9 TESTVERFAHREN Das Testverfahren umfasst die Vorbereitung einer Eichkurve aus der der unbekannte Angiotensin Gehalt in den 37 und den 4 Reihen Proben interpoliert wird Der Background 4 Reihen wird dann von den entsprechenden 37 Generationsproben abgezogen 9 1 Das Tracer Pufferreagenz bei Raumtemperatur stehen lassen und vor dem Gebrauch gut mischen Die Blindproben und Kalibratoren die generierte Kontrolle und die generierten Patientenproben in einem Eisbad abstellen und vor dem Gebrauch gut mischen 31 9 2 Einen Satz GammaCoat R hrchen in doppelter Ausf hrung nach dem folgenden Schema beschriften Totalaktivit t T1 T2 und Bo R hrchen 1
110. bazione iniziale del plasma volta a generare angiotensina seguita dalla quantificazione dell angiotensina mediante analisi radioimmunologica La produzione di angiotensina nel sistema del substrato umano dettata da 3 1 pH dell incubazione 3 2 entit della diluizione del plasma 3 3 scelta degli agenti inibitori enzimatici 52 4 3 4 fattori sconosciuti presenti in ciascun campione individuale di plasma quali la concentrazione del livello del substrato di renina 3 5 durata dell incubazione 3 6 temperatura dell incubazione Il pH per la generazione Il rapporto di generazione dell angiotensina in vitro dipende dal pH La procedura del presente kit adotta un pH per la generazione pari a 6 0 il consueto pH dei campioni dopo l aggiunta del buffer a pH 5 7 Il vantaggio di un incubazione a pH 6 0 piuttosto che a pH fisiologico 7 risulta nel raddoppio del rapporto di generazione dell angiotensina con conseguente migliore sensibilit per campioni a basso contenuto di renina Come conseguenza dell ottimizzazione possono essere utilizzati tempi pi brevi per la generazione Scelta dell inibitore dell enzima Pu essere utilizzata tutta una serie di agenti atti a bloccare la conversione enzimatica dell angiotensina in angiotensina ll nonch a prevenire il degrado proteolitico durante la produzione di angiotensina 1 517 Il fenilmetilsulfonil fluoruro PMSF l inibitore utilizzato nella presente procedura Effetti
111. bilidade com amostras do paciente quando usados com reagentes e um procedimento operacional deste teste de diagn stico in vitro tal como recomendado 67 5 AVISOS E PRECAU ES PARA USO DIAGN STICO VITRO N o recomendado para o uso interno ou externo em seres humanos ou animais REAGENTES COM MATERIAL DE FONTE HUMANA Trate como se fossem potencialmente infecciosos Cada unidade de doador de soro plasma usada na prepara o deste produto foi testada por um m todo aprovado pela FDA e determinado como sendo n o reactivo para a presen a de HBsAg anticorpo para HCV e anticorpo para HIV 1 2 Embora estes m todos sejam bastante precisos n o garantem que todas as unidades infectadas sejam detectadas Este produto tamb m pode conter outros materiais de origem humana para os quais n o h teste aprovado Como nenhum m todo de teste conhecido pode oferecer seguran a total em rela o aus ncia do v rus da hepatite B do v rus da hepatite C HCV do v rus da Imunodefici ncia Humana VIH ou de outros agentes infecciosos todos os produtos que cont m materiais de origem humana devem ser manuseados de acordo com boas pr ticas laboratoriais usando as precau es adequadas tal como descrito no Manual dos Centros Americanos para Controlo e Preven o de Doen as e Institutos Nacionais de Sa de Bioseguran a em Laborat rios Microbiol gicos e Biom dicos Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed
112. ciamento sono stati raccolti i campioni di plasma per l ARP e i campioni di urina delle 24 ore risultati delle analisi sono illustrati nella TABELLA II dati sono stati suddivisi in quattro sottogruppi sulla base del range di sodio escreto osservato assunzione di sale ad libitum 75 150 mEq 24 ore dieta con supplemento di sale 150 mEq 24 ore e due diete con limitazione del sale In circostanze cliniche di routine possibile ottenere riduzioni modeste nell escreto di sodio fino a 30 75 mEq 24 ore Il range inferiore di escreto di sodio 0 30 mEq 24 ore insolito e necessita di una limitazione severa dell assunzione di sodio stata osservata la relazione inversa prevista fra ARP ed escreto di sodio nell urina Poich il contenuto di sale nell alimentazione varia di zona in zona si suggerisce di sviluppare dati relativi al rapporto ARP escreto di sodio nei singoli laboratori Durante la valutazione clinica del kit in oggetto sono stati procurati campioni provenienti da adulti ricoverati o che frequentavano ambulatori medici apparentemente privi di patologie cardiovascolari o renali Questi individui assumevano sale ad libitum e non stata intrapresa nessuna azione per controllare le loro attivit Tutti i campioni sono stati ottenuti fra le ore 8 00 e le ore 10 00 dati derivanti dall osservazione di questi campioni sono illustrati nella TABELLA Ill Essi rientrano nel range di ARP osservato per individui con assunzione normale di
113. cilment inflammable inflamable infiammabile Harmful Nocif Gesundheits Nocivo Nocivo sch dlich Toxic Toxique Giftig T xico Tossico Corrosive Corrosif tzend Corrosivo Corrosivo 1U9 SYMBOLS USED WITH DEVICES CONTINUED ON NEXT PAGE CONTINUED FROM PREVIOUS PAGE SYMBOLS USED WITH DEVICES Portugu amp s Svenska Conformidade com as normas europeias Europeisk verensst mmeise Zuuu ppwon Prazo de validade Utg ngsdatum Fabricante Tilverkare Consulte as instru es de utiliza o Se bruksanvisningen Diagn stico in vitro Diagnostik in vitro In vitro N do lote Batch nummer Limite de temperatura Temperatur begr nsning Inibidor enzim tico solug o de fluoreto de fenilmetilsulfonil Fase s lida Tubos revestidos Enzymatisk inhibitor fenylmetylsulfonyl fluoridl sning Solid fas Belagda r r
114. ctivit crois e de l antis rum utilis dans cette trousse sont exprim es comme le rapport entre la concentration d angiotensine et la concentration de la substance pr sentant une r action crois e 50 d inhibition de la liaison maximum Compos de r activit crois e Angiotensine 100 Tetradecapeptide 0 02 Angiotensine II lt 0 03 Angiotensine lt 0 03 Substrat synth tique de la r nine CONSULTER LA DERNIERE PAGE POUR LES REFERENCES 25 GAMMACOAT PLASMA RENIN RADIOIMMUNOASSAY KIT 1 VERWENDUNGSZWECK NUR ZUR IN VITRO DIAGNOSTIK Der GammaCoat 25 Plasma Renin Activity Radioimmunoassay Kit dient der quantitativen Bestimmung der Plasma Renin Aktivit t PRA mit dem Radio immunoassay des generierten Angiotensin 2 ZUSAMMENFASSUNG UND ERKL RUNG Renin ein proteolytisches Enzym mit einem Molekulargewicht von ca 40 000 wird von den juxtaglomerul ren Zellen der Niere freigesetzt Das Enzym wirkt im K rperkreislauf und spaltet sein Substrat ein von der Leber aufgebautes Alpha 2 Globulin um das Dekapeptid Angiotensin zu produzieren Angiotensin wird schnell durch die Aktivit t der Converting Enzyme vornehmlich in den Lungen in das biologisch aktive Oktapeptid Angiotensin Il gespalten OriginAngiotensin Il wird wiederum durch die im Plasma und in den Geweben vorhandenen Enzyme die als Angiotensinasen bekannt sind schnell in inaktive Peptid Fragmente abgebaut Der m
115. da durante la recogida y el manejo posterior de las muestras Antes de la dosificaci n con pipeta descongele r pidamente las muestras congeladas a temperatura ambiente y m zclelas bien Se ha observado que la herapina inhibe la reacci n de renina en concentraciones de 5 IU mL por lo tanto no se debe utilizar heparina como anticoagulante en muestras de sangre destinadas a ensayo para determinar la actividad de renina en plasma Los espec menes hemolizados contienen angiotensinasas y no deben ser utilizados Los datos publicados muestran evidencia de que no es posible asumir la linealidad de la generaci n de angiotensina durante un per odo de generaci n determinado incluso en un espacio tan breve como 30 minutos o tan largo como 18 horas El punto de partida de la linealidad debe ser la regla antes que la excepci n incluso con el empleo de tampones controlados con cualquier pH Es posible que otros factores distintos del pH puedan influenciar la linealidad de la generaci n de angiotensina Hasta que tales variables sean totalmente controlables no parece necesario anticipar caracter sticas de no linealidad Si no se obtienen los valores de control adecuados puede ser debido a manipulaciones imprecisas tratamiento inadecuado o deterioro de los reactivos Para cada serie de ensayos debe establecerse una curva de calibraci n basada en los valores adecuados para los calibradores Interpretaci n Para una interpretaci n precisa d
116. das a temperatura ambiente La sangre puede mantenerse a temperatura ambiente durante seis horas antes de la centrifugaci n sin que se produzca un aumento significante de angiotensina I Una vez centrifugada la sangre puede congelar y almacenar el plasma hasta el momento del ensayo Las muestras pueden mantenerse congeladas a 20 C durante un mes Deben evitarse los ciclos de congelaci n descongelaci n que pueden producirse en congeladores con desescarchado autom tico Se han observado variaciones de PRA tanto en el almacenamiento a 2 8 C como en el almacenamiento prolongado a 20 20 21 gt 43 7 9 Antes del ensayo descongele rapidamente las muestras congeladas a temperatura ambiente Debe evitarse el uso de muestras hemolizadas lip amp micas ictericas o citradas No utilice heparina como anticoagulante Consulte la secci n Limitaciones al procedimiento para obtener m s informaci n o instrucciones MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 7 1 7 2 7 3 7 4 7 5 7 6 7 7 7 8 79 7 10 7 11 7 12 Agua purificada Bafio de agua a temperatura constante de 37 2 C Ba o de agua con hielo Pipetas volum tricas 1 2 3 y 5 mL Cilindro graduado 100 mL Pipetas de precisi n 10 100 500 y 1 000 uL Contador gamma Tubos de pl stico o vidrio 12 x 75 mm para generaci n de angiotensina Gradilla de tubos de prueba Mezclador v rtex opcional Aspirador de agua opcional Papel abs
117. de te rica no kit 6 RECOLHA E PREPARA O DO ESP CIME A actividade da renina plasm tica mais elevada de manh devido varia o diurna na liberta o da renina devendo as amostras ser recolhidas regularmente nessa altura do dia feita a recolha de uma amostra de sangue venoso assepticamente utilizando um tubo de vidro evacuado com EDTA As amostras podem ser recolhidas transportadas e centrifugadas temperatura ambiente O sangue pode assentar temperatura ambiente durante um m ximo de seis horas antes da centrifuga o sem que ocorra uma acumula o significativa de angiotensina Ap s a centrifuga o do sangue o plasma pode ser armazenado congelado at ao ensaio As amostras devem ser congeladas a 20 C durante um m s Os ciclos de congela o descongela o que podem ocorrer nos congeladores com descongela o autom tica devem ser evitados Observaram se varia es na ARP as quais se ficaram a dever ao armazenamento a 2 8 C e a um armazenamento prolongado a 20 C 20 21 Antes do ensaio as amostras congeladas devem ser descongeladas rapidamente temperatura ambiente Evite o uso de amostras lip micas ict ricas ou com citratos N o utilize a heparina como anticoagulante Consulte a sec o Limita es do Procedimento para ver as precau es e informa es adicionais ARON 69 7 MATERIAIS NECESS RIOS N O FORNECIDOS 74 7 2 7 3 7 4 7 5 7 6 7 7 7 8 79 7 10 7 11 7 12 Agua
118. della diluizione del plasma La diluizione del plasma deve essere evitata poich la reazione della renina substrato dipendente alla concentrazione del substrato di renina che generalmente presente nel plasma Gli effetti della diluizione del substrato possono essere osservati ad ogni intervallo durante la generazione ed effetti pi marcati si osservano in presenza di una diluizione maggiore Durata della generazione Per determinare l attivit enzimatica dovrebbe essere scelto l intervallo di tempo pi breve possibile per ottenere la stima migliore della velocit iniziale della reazione e per ridurre al minimo il consumo del substrato L analisi radioimmunologica dell angiotensina sufficientemente sensibile da consentire di determinare l ARP avvalendosi delle condizioni ottimizzate della generazione di angiotensina a pH 6 0 Il metodo del GammaCoat Plasma Renin Activity Kit caratterizzato da un tempo di generazione inferiore poich il campione di plasma diluito meno possibile portato ad un pH ottimale ed analizzato con un inibitore efficace dal pH prescelto stato suggerito che campioni a livello basso possono essere quantificati generando i campioni per diciotto ore e quindi eseguendo l analisi Durata dell analisi radioimmunologica Con il metodo GammaCoat Plasma Renin Activity Kit la durata dell incubazione dell analisi radioimmunologica di tre ore risultati sono disponibili entro la stessa giornata lavorativ
119. digen Bewertung ist auf Anfrage beim Kundendienst erh ltlich Die Monographie enth lt die Ergebnisse der folgenden Untersuchungen Harnaldosteron gegen PRA Nierenvenen Reninstudien bei Patienten mit renovaskul rer Hypertonie PRA Bestimmung bei anephrischen Patienten PRA Ergebnisse bei H modialyse Patienten Reninprofile von Patienten mit prim rer Hypertonie f nf Stunden nach Furosemid 40 mg p o a pons 37 15 TESTCHARAKTERISTIKA 15 1 Analytische Sensitivit t Die Sensitivit t der Eichkurve wird als der kleinste erkennbare von Null verschiedene Wert festgelegt Die statistische Sch tzung der kleinsten nachweisbaren Konzentration Sensitivit t wurde nach der Methode von D Rodbard 1978 f r drei ig Replikate am Nullpunkt der Eichkurve berechnet Die berechnete Sensitivit t betr gt 0 018 ng R hrchen 15 2 Wiederholgenauigkeit Die Intra Assay Pr zision wurde aus dem Mittelwert von 20 gleichzeitigen Assays pro Probe bestimmt Die Inter Assay Pr zision wurde aus dem Mittelwert der Duplikate f r 20 getrennte Serien bestimmt Intra Assay Anzahl der Mittelwert Variations Pr zisions Probe Assays ng ml h koeffizient ng ml h Mischplasma A 20 1 6 0 16 10 0 Mischplasma B 20 6 2 0 28 4 6 Mischplasma C 20 17 9 1 68 9 4 Intra Assay Anzahl der Mittelwert AS Und Variations Pr zisions Probe Assays ng ml h koeffizient ng ml h Mischplasma A 20 1 6 0 09 5 6 Mischplasma B 20 10 7 0 8
120. e Contenu CPM d angiotensine finale n des tubes li s ng tube ng ml h Activite totale traceur tampon 29242 T2 Activit totale traceur tampon 28992 1 Blanc Angiotensine O ng tube 13617 Blanc Angiotensine 0 ng tube 13048 3 Etalon Angiotensine 0 02 ng tube 13163 4 Etalon Angiotensine 0 02 ng tube 12625 5 Etalon Angiotensine 0 08 ng tube 11305 6 Etalon Angiotensine 0 08 ng tube 11291 7 Etalon Angiotensine 0 3 ng tube 6991 8 Etalon Angiotensine 0 3 ng tube 7110 9 Etalon Angiotensine 1 0 ng tube 3053 10 Etalon Angiotensine 1 0 ng tube 3056 11 Etalon Angiotensine 5 0 ng tube 1307 12 Etalon Angiotensine 5 0 ng tube 1232 13 Contr le de l activit de la r nine 37 C 3149 0 97 14 Contr le de l activit de la r nine 37 C 3053 1 01 Moy 0 99 15 Contr le de l activit de la r nine 4 C 8674 0 20 16 Contr le de l activit de la r nine 4 C 8607 0 20 Moy 0 20 5 85 17 Echantillon de plasma du patient X 37 C 4362 0 41 18 Echantillon de plasma du patient X 37 C 4459 0 40 Moy 0 41 19 Echantillon de plasma du patient X 4 C 8546 0 08 20 Echantillon de plasma du patient X 4 C 8557 0 08 Moy 0 08 2 44 21 Courbe d talonnage typique A ne pas utiliser pour calculer les valeurs d terminer 15 000 Patient X 4 C o
121. e Per dati tipici fare riferimento alla TABELLA La FIGURA 1 illustra una curva di calibratore tipica 11 4 Localizzare il legame CPM per ogni provetta corrispondente ad ogni campione sull asse verticale e seguire la linea orizzontale che interseca la curva di calibrazione Nel punto di intersezione leggere i ng di angiotensina sull asse orizzontale Per ciascun campione e controllo determinare i ng medi per la serie 37 e 4 12 ATTIVIT DELLA RENINA PLASMATICA ARP L attivit della renina plasmatica ARP si esprime in ng ml ora di angiotensina generata Le correlazioni matematiche seguenti hanno lo scopo di ottenere il dato ng ml ora 12 1 Sottrarre il valore medio per la serie 4 background dal valore medio per la serie 37 generata Netto ng ng 37 ng 4 12 2 Dimensioni del campione analizzato nella provetta rivestita C 0 1 mlc 12 3 Diluizione del campione S per effetto del buffer di generazione B e dell inibitore 1 10 mls 0 1mlg 0 01ml 111mlrinale 1 0 mls 100 mliniziale 12 4 Tempo necessario per la generazione dell angiotensina I 1 5 ore NOTA Se viene modificato il tempo necessario per la generazione la modifica corrispondente deve essere apportata a questo numero 12 5 Calcolo della generazione del maleato ng 37 ng a 1 11ml 0 1mlc 1 00 ml 1 5 ore ARP 7 40 ml ora x ng netto Esempio Campione di plasma del paziente X ARP 0 41 0 0
122. e regulations and conditions of your specific license WARNING This product contains a chemical known to the State of California to cause cancer ATTENTION Radioactivity printed in the package insert may be slightly different from the radioactivity printed on the box label and on the tracer vial label The box label and the tracer vial label indicate the actual amount of radioactivity at the calibration date where the package insert indicates the theoretical radioactivity of the kit 6 COLLECTION AND PREPARATION SPECIMEN Plasma renin activity is highest in the morning because of diurnal variation in renin release and samples should be collected regularly at that time 18 19 A venous blood sample is collected aseptically using an evacuated glass tube containing EDTA Samples may be collected transported and centrifuged at room temperature Blood can sit at room temperature for as long as six hours before centrifugation without significant accumulation of angiotensin After centrifugation of the blood plasma can be stored frozen until assayed Samples may be frozen at 20 C up to one month Freeze thaw cycles which can occur in self defrosting freezers should be avoided Variations in PRA have been observed both due to storage at 2 8 C and to prolonged storage at 20 C 20 21 Prior to assay frozen samples should be thawed rapidly to room temperature Hemolyzed lipemic icteric or citrated samples should not be used Do not use heparin
123. e agit au niveau de la circulation g n rale par clivage de son substrat une alpha 2 globuline synth tis e par le foie pour donner naissance un d capeptide l angiotensine L angiotensine est rapidement cliv e sous l effet d une enzyme de conversion principalement au niveau des poumons en un octapeptide biologiquement actif l angiotensine Il A son tour l angiotensine est rapidement d grad e en fragments peptidiques inactifs par des enzymes pr sentes dans le plasma et les tissus d sign es sous le nom d angiotensinases La voie m tabolique du syst me r nine angiotensine est d crite ci dessous substrat de la r nine r nine abgiotensine I enzyme de conversion a giotensine Il angiotensinases figgments peptidiques inactifs L angiotensine Il a une demi vie extr mement br ve in vivo mais elle est le plus puissant agent vasopresseur connu L angiotensine Il joue un r le essentiel dans diff rentes formes d hypertension ainsi que dans la r gulation de la tension art rielle En outre il a t d montr que l angiotensine est la substance ayant la plus forte influence sur la s cr tion d aldost rone par la glande surr nale Les difficult s techniques associ es la mesure des concentrations en angiotensine Il dans le sang ont retard l acceptation g n rale de ce dosage en laboratoire clinique Comme les taux d angiotensine refl tent directement l activit de la renine plasmatiq
124. e dose les antagonistes de l angiotensine les contraceptifs oraux ou un traitement aux oestrogenes et les antagonistes des min ralocorticoides L utilisation de diatrizoate par exemple lors d une r nographie peut galement affecter les valeurs de l activit de la r nine plasmatique Si Pon omet de prendre en consid ration la contribution pharmacologique des m dicaments que prend le patient cela risque d aboutir a une interpr tation incorrecte des valeurs de l activit de la r nine plasmatique Diverses conditions cliniques y compris une grossesse normale affectent l activit de la renine plasmatique Ces facteurs ont t brievement d crits dans des articles de revue publi s par divers chercheurs 7 30 14 VALEURS DE R F RENCE L valuation clinique de cette trousse APR a t r alis e par un chercheur ind pendant et les r sultats sont brievement r sum s dans cette section Les donn es pr sent es sont destin es a servir de guide a Putilisateur de cette trousse En raison de la variabilit parmi les populations de patient il est conseill aux utilisateurs de d terminer leurs propres donn es par exemple nomogramme de l activit de la r nine plasmatique en fonction de l excr tion de sodium par le patient 14 1 Effet de la consommation de sel Des chantillons de plasma et d urine de 24 heures ont t obtenus chez des sujets adultes normaux exempts de toute pathologie cardio vasculaire ou r
125. e los resultados del ensayo es cr tico considerar ciertas variables fisiol gicas como la postura del paciente la ingesta de sodio o la excreci n de sodio en orina durante 24 horas Otros factores importantes que deben tenerse en cuenta son la edad sexo y raza del paciente 48 Los cambios de PRA pueden verse afectados por un espectro de f rmacos incluidos diureticos agentes bloqueadores de adrenergicos vasodilatadores anti hipertensores grandes dosis de progesterona antagonistas de angiotensina Il anticonceptivos orales terapia con estr genos y antagonistas de mineralocorticoides El uso de diatrizoato como en la renografia puede afectar tambien los valores de PRA Si no se tiene en cuenta la contribuci n farmacol gica derivada de la ingesta de farmacos del paciente se puede producir una interpretaci n err nea de los valores de PRA valor de PRA puede verse afectado por otras condiciones clinicas incluido el embarazo normal Estos factores se han manifestado de forma concisa en la revisi n de art culos publicados por varios investigadores 7 90 14 VALORES PREVISTOS La evaluaci n cl nica de este equipo PRA ha sido llevada a cabo por investigadores independientes los resultados obtenidos se resumen brevemente en esta secci n Los datos presentados tienen como finalidad servir de guia para el usuario de este equipo Debido a las varianzas en la poblaci n de pacientes es conveniente que los usuarios establezcan da
126. ed to block enzymatic conversion of angiotensin to angiotensin and to prevent proteolytic degradation during generation of angio tensin 1 517 Phenylmethylsulfonyl fluoride PMSF is the inhibitor used in this procedure Effects of Plasma Dilution Plasma dilution should be avoided since the renin reaction is substrate dependent at the concentration of renin substrate which usually exists in plasma The effects of substrate dilution can be seen at all intervals during generation and more marked effects are seen at higher dilution Length of Generation The shortest practical time should be employed for determination of enzyme activity to provide the best estimate of initial velocity of the reaction and to minimize substrate consumption The radioimmunoassay of angiotensin is sensitive enough to permit PRA determination using optimized conditions of angiotensin generation at pH 6 0 The GammaCoat Plasma Renin Activity Kit method offers a reduced generation time because the plasma sample is minimally diluted buffered at an optimized pH and run with an inhibitor which is effective at the selected pH It has been suggested that low level samples can be quantified by generating the samples for eighteen hours and then assaying Length of Radioimmunoassay The GammaCoat Plasma Renin Activity Kit method uses a three hour radioimmunoassay incubation Results are available within the same working day REAGENTS PROVIDED IN THE KIT Rabbit
127. eit des Hepatits B Virus HBV Hepatitis C Virus HCV des erworbenen Immundefekt Syndroms HIV oder anderer Infektionserreger bieten kann sind alle Produkte mit Komponenten humanen Ursprungs unter Einhaltung guter Laborpraktiken und entsprechender Vorsichtsma nahmen laut Empfehlungen des Leitfadens der Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Biosicherheit in mikrobiologischen und biomedizinischen Laboren 4 Auflage Mai 1999 oder aktuelle Auflage als potenzielle infekti se Substanzen zu behandeln REAGENZIEN MIT NATRIUMAZID VORSICHT Einige Reagenzien in diesem Kit enthalten Natriumazid das gegebenenfalls mit Blei oder Kupferleitungen reagieren und h chst explosive Metallazide bilden kann Zur Entsorgung mit reichlichst Wasser nachsp len um Azidaufbau zu vermeiden Weitere Informationen finden Sie im Abschnitt Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts Dekontaminierung von Abfl ssen in Laborsp lbecken zur Entsorgung von Azidsalzen des Handbuches Safety Management Sicherheitsma nahmen Nr CDC 22 herausgegeben von Centers for Disease Control and Prevention US Krankheitsforschungszentren Atlanta Bundesstaat Georgia 1976 Europ ische Gemeinschaften Gefahrenbezeichnungen f r gef hrliche Stoffe Richtlinie 1999 45 EG R 20 21 22 Gesundheitssch dlich beim Einatmen Verschlucken und Ber hrung mit der Haut R 32 Entwickelt bei Ber hrung mit S ure seh
128. endet eine dreist ndige Radioimmunoassay Inkubation Ergebnisse k nnen am gleichen Arbeitstag erzielt werden 4 KITREAGENZIEN Hase Anti Angiotensin 1 Beutel 100 R hrchen 5 Beutel 100 R hrchen beschichtete R hrchen Angiotensin Testpuffer 11x 1 Fl schchen 10 ml 5 Fl schchen 10 ml Angiotensin Maleinat 1 Fl schchen 5 3 Fl schchen 5 ml Generationspuffer Angiotensin PMSF 1 Fl schchen 1 2 Fl schchen 1 ml Reninaktivit t Kontrolle 1 Fl schchen 3 ml 2 Fl schchen 3 ml Angiotensin Kalibratoren A F 6 Fl schchen 2 ml 12 Fl schchen 2 ml Angiotensin Tracer 2 Flaschchen 5 ml 10 Fl schchen 5 ml Anzahl der Tests LAGERUNG Der Kit sollte bei 2 8 C aufbewahrt werden Nach dem ffnen jedes Reagenz entsprechend den u a Anleitungen lagern Die Reagenzien d rfen nach dem Verfallsdatum nicht verwendet werden Das Verfallsdatum des Kits ist auf dem u eren Etikett angebracht und entspricht dem Verfallsdatum des Tracers Reagenzien aus verschiedenen Chargen d rfen nicht vermischt werden 27 4 1 551 Angiotensin I Tracer lyophilisiertes Reagenz Das Fl schchen 25 Angiotensin Tracer mit 5 ml destilliertem Wasser verd nnen Durch Umdrehen gut mischen oder das Fl schchen vorsichtig vortexen Den Inhalt von zwei Fl schchen Tracer zu 100 ml Testpuffer zugeben Das Tracer Puffer Reagenz bleibt bei 2 8 C bis zum Verfallsdatum des Kits stabil Nach der Rekonstitution enth lt jedes Fl
129. erum plasma som anv nts f r beredning av produkten har testats med en metod godkand av USA s lakemedelsverk FDA och befunnits negativ vad g ller f rekomst av HBsAg antikroppar mot HCV och antikroppar mot HIV 1 2 Aven om dessa metoder ar mycket tillf rlitliga utg r de ingen garanti for att samtliga infekterade enheter uppt cks Produkten kan ven inneh lla annat material av humant ursprung f r vilket det inte finns n got godk nt test Eftersom ingen k nd testmetod kan ge en fullst ndig garanti f r att det inte f rekommer hepatit B virus hepatit C virus HCV humant immunbristvirus HIV eller andra infekti sa agens skall alla produkter 80 som inneh ller material av humant ursprung hanteras i enlighet med god laboratoriepraxis och med l mpliga f rsiktighets tg rder se handboken Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories fran U S Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 4 e upplagan maj 1999 eller aktuell upplaga REAGENS SOM INNEHALLER NATRIUMAZID FORSIKTIGT Vissa reagens i satsen inneh ller natriumazid Natriumazid kan reagera med bly och koppar i avloppsledningarna och bilda h gexplosiva metallazider Nar reagensen kasseras maste man spola efter med stora mangder vatten for att f rhindra att azid ackumuleras For ytterligare information hanvisar vi till avsnittet Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts i handboken Safety Management No C
130. ess rio antecipar as caracter sticas de n o linearidade A incapacidade de obter valores adequados do controlo poder indicar manipula es imprecisas manuseamento inadequado ou a deteriora o dos reagentes necess rio estabelecer uma curva do calibrador para cada ensaio baseada nos valores adequados para calibradores Interpretativas essencial que as vari veis fisiol gicas tais como a postura do paciente e a ingest o de s dio ou a excre o de s dio pela urina durante 24 horas sejam levadas em considera o para efectuar uma interpreta o precisa dos resultados dos ensaios A idade o sexo e a ra a tamb m s o factores importantes a considerar 74 As altera es na ARP podem ser afectadas por um largo espectro de f rmacos incluindo diur ticos agentes bloqueadores adren rgicos vasodilatadores anti hipertensos doses grandes de progestinas antagonistas da angiotensina Il contraceptivos orais ou terapias com estrog nio e antagonistas mineralocorticoides Ouso de diatrizoato como por exemplo na renografia tamb m pode afectar os valores da ARP O facto de n o ser tida em considera o a contribui o farmacol gica da ingest o de f rmacos pelo paciente pode levar a uma interpreta o errada dos valores da ARP Diversas condi es cl nicas incluindo a gravidez normal afectam a ARP Estes factores foram sucintamente descritos em artigos de revistas publicados por diversos investigadores 1
131. et werden 13 8 Ver ffentlichte Daten zeigen deutlich dass Linearit t der Angiotensin Generation w hrend einer vorbestimmten Generationsdauer selbst von drei ig Minuten bis zu einer Dauer von achtzehn Stunden nicht vorausgesetzt werden kann Linearit t als Ausgangspunkt mag eher die Regel als die Ausnahme selbst bei kontrolliertem Puffern mit jedem pH darstellen Wahrscheinlich beeinflussen andere Faktoren als pH die Linearit t bei der Angiotensin Generation Solange solche Variablen nicht eindeutig kontrollierbar sind scheint es notwendig zu sein nicht lineare Merkmale vorauszusetzen 13 9 Werden nicht die entsprechenden Kontroll Werte erreicht kann dies auf eine ungenaue Manipulation eine falsche Handhabung oder den Verfall der Reagenzien hindeuten F r jede Serie muss eine Eichkurve mit den entsprechenden Werten erstellt werden Erl uterungen Es ist von entscheidender Bedeutung dass physiologische Variablen wie die Haltung des Patienten die Natriumaufnahme oder die Na Ausscheidung ber Harn w hrend 24 Stunden bei einer sorgf ltigen Auswertung der Testergebnisse ber cksichtigt werden Alter Geschlecht und Rasse sind weitere wichtige Faktoren bei der Bewertung 35 nderungen der PRA k nnen durch eine breites Spektrum von Arzneimitteln bedingt sein einschlie lich Diuretika adrenergische Hemmstoffe Vasodilatatoren Antihypertensiva hohe Dosen von Progestativa Angiotensin Antagonisten Ovulationshemmern ode
132. etabolische Leitweg des Renin Angiotensin Systems wird auf folgende Weise beschrieben Reninsubstrat Renin Apgiotensin Converting Enzyme Abgiotensin Il Angiotensinasen Igaktive Peptide Fragmente Angiotensin Il hat eine u erst kurze In vitro Halbwertzeit ist jedoch einer der bekanntesten Vasodepressoren Angiotensin Il spielt eine Schl sselrolle bei verschiedenen Formen von Hypertonie und bei der Blutdruckregulierung Zus tzlich wird Angiotensin besonders f r die Beeinflussung der Aldosteronsekretion durch die Nebenniere eingesetzt Technische Schwierigkeiten bei der Messung des Angiotensin Il Spiegels im Blut haben die allgemeine Annahme des Assays durch die klinischen Laboratorien verz gert Da die Angiotensin Spiegel direkt die Plasma Renin Aktivit t widerspiegeln wurde die Bestimmung der Plasma Renin Aktivit t weitgehend f r die Untersuchung des Renin Angiotensin Systems im Krankheitsfall herangezogen Die Messung der Plasma Renin Aktivit t bei hohem Blutdruck ist eine wichtige Hilfe bei der Differentialdiagnose des primar ren und sekundar ren Aldosteronismus Die Bewertung der Reninaktivit t ist auch wertvoll bei der Festlegung der Prognose und der geeignetsten Therapie bei Patienten mit essentieller Hypertonie Ein Radioimmunoassay f r Angiotensin und seine Anwendung als Index der Plasma Renin Aktivit t wurde bereits beschrieben Das Verfahren des GammaCoat Kit zur Bestimmung der Plasma Renin Aktivi
133. f Precision Sample Assays ng mL hr ng mLihr Variation Plasma Pool A 20 1 6 0 16 10 0 Plasma Pool B 20 6 2 0 28 4 6 Plasma Pool C 20 17 9 1 68 9 4 Inter Run Number of Mean al Coefficient of Precision Sample Assays ng mL hr ng mLihr Variation Plasma Pool A 20 1 6 0 09 5 6 Plasma Pool B 20 10 7 0 82 7 6 Plasma Pool C 20 15 2 1 04 6 8 15 3 Avidity The calculated affinity constant of this kits antiserum is approximately 3 x 10 liters mole 15 4 Analytical Specificity Data on the cross reactivity of the antiserum used in this kit are expressed as the ratio of angiotensin concentration to the cross reacting substance concentration at 50 inhibition of maximum binding Compound Cross Reactivity Angiotensin 100 Tetradecapeptide 0 02 Angiotensin II lt 0 03 Angiotensin III lt 0 03 Synthetic renin substrate REFER TO LAST PAGE FOR REFERENCES 12 TROUSSE DE DOSAGE RADIO IMMUNOLOGIQUE GAMMACOAT ACTIVIT DE LA RENINE PLASMATIQUE 1 INDICATION POUR USAGE DIAGNOSTIQUE IN VITRO La trousse de dosage radio immunologique GammaCoat 125 Activit de la r nine plasmatique permet d effectuer la d termination quantitative de l activit de la r nine plasmatique ARP par dosage radio immunologique de l angiotensine produite 2 R SUM ET COMMENTAIRE La r nine une enzyme prot olytique dont le poids mol culaire est de l ordre de 40 000 est lib r e par les cellules juxtaglom rulaires du rein Cette enzym
134. f r ndringen efter stimulering Effekten av furosemid p renin angiotensinsystemet p visad som en f r ndring av PRA best mdes i en studie som sammanfattas i TABELL V Det f rel g en signifikant h jning av PRA vardena vid furosemidstimulering TABELL V Furosemidstimulering Medelvarde 1 S D ng mL h Fore stimulering 2 36 1 23 Efter stimulering 6 92 2 76 OBS En monografi med alla detaljer kring hela utvarderingen kan pa beg ran erhallas fran var kundtjanst Monografin innehaller resultat fran foljande studier urin aldosteron vs PRA studier av renin i njurvenerna pa patienter med renovaskular hypertension PRA best mningar pa anefriska patienter PRA resultat fran patienter pa hemodialys reninprofilering av patienter med essentiell hypertension 5 h efter furosemid 40 mg p o OR ON 88 15 SPECIFIKA PRESTANDA 15 1 Analytisk k nslighet Kalibreringskurvans k nslighet definieras som det l gsta enskilda v rde som kan sarskiljas fran noll En statistisk uppskattning av den l gsta p visbara halten k nsligheten ber knades med metoden enligt D Rodbard 1978 f r 30 replikat vid kalibreringskurvans nollpunkt Den ber knade k nsligheten r 0 018 ng r r 15 2 Precision Den intraseriella precisionen best mdes fr n medelv rdet av 20 samtidiga tester av varje prov Den interseriella precisionen best mdes fran det genomsnittliga medelv rdet f r dubbelprov vid 20 separata k rningar
135. fter contact with skin wash immediately with plenty of water Dopo il contatto con la pelle lavare immediatamente con abbondante acqua REAGENTI CONTENENTI THIMEROSAL ETILMERCURIOTIOSALICILATO DI SODIO Alcuni reagenti del presente kit contengono thimerosal etilmercuriotiosalicilato di sodio contenente a sua volta un composto a base di mercurio Lo smaltimento del mercurio allo stato di elemento inorganico di ossidi di mercurio e composti di mercurio deve essere effettuato in piena conformit con tutte le normative locali statali e federali AVVERTENZA questo prodotto contiene una sostanza chimica nota nello Stato della California perch provoca difetti alla nascita o altri problemi di natura riproduttiva Frasi di rischio per sostanze pericolose della Comunit Europea Direttiva del Consiglio 1999 45 CE Reagenti contenenti etanolo R11 Highly flammable Altamente infiammabile S16 Keep away from sources of ignition No smoking Tenere lontano da fonti di ignizione Non fumare S43 In case of fire use dry chemical or carbon dioxide In caso di incendio usare agenti chimici essicati o anidride carbonica 55 Reagenti contenenti PMSF R23 24 25 Toxic by inhalation in contact with skin and if swallowed Tossico per inalazione per contatto con la pelle ed ingestione S36 Wear suitable protective clothing Indossare indumenti protettivi adatti S45 In case of accident or if you feel unwell seek medical advice
136. g och radioimmunoassay och fungerar d som en tillf rlitlig kontrollindikator pa hela assayen Se avsnittet Kvalitetskontroll f r ytterligare information Efter rekonstituering inneh ller varje flaska 3 mL behandlad human plasma med 0 1 natriumazid 4 7 Kalibreringsl sningar med angiotensin A F frystorkat reagens OBS Blank och kalibreringsl sningar anv nds endast i radioimmunoassaydelen och skall inte inkuberas f r angiotensin I bildning Rekonstituera varje flaska med 2 0 mL renat vatten och blanda val f re anv ndning Blank och kalibreringsl sningar skall sedan kylas i ett isbad innan de k rs i assayen De kan f rvaras vid 2 8 C i upp till tv veckor och vid 20 C vid l ngre tids f rvaring Efter rekonstituering inneh ller varje flaska 2 mL angiotensin med BSA i PBS buffert Kalibreringsl sningarna r kalibrerade till 0 0 2 0 8 3 0 10 0 respektive 50 0 ng mL Kalibreringsl sningarna i satsen kalibrerades med hj lp av den aktuella produktionshuvudbatchen Kalibreringsl sningarna i satsen kan betraktas som likv rdiga med patientprover n r de anv nds med de reagens och metodanvisningar om rekommenderas f r detta diagnostiska in vitro test 5 _ VARNINGAR OCH FORSIKTIGHETSATGARDER FOR DIAGNOSTISKT BRUK IN VITRO Ej avsett for vare sig invartes eller utvartes bruk pa manniskor eller djur REAGENS SOM INNEHALLER MATERIAL AV HUMANT URSPRUNG Behandlas som potentiellt smittfarligt Varje donerad enhet s
137. ge der Krankenhausumgebung oder anderen unbestimmten Faktoren zugeschrieben werden TABELLE Il PRA mit eingeschr nktem Salzkonsum Na Exkretion Mittelwert 1 SD mEq 24 h ng ml h 0 30 16 34 7 52 30 75 5 91 1 82 75 150 2 12 0 68 2150 0 85 0 46 36 TABELLE III PRA mit uneingeschr nktem Salzkonsum Mittelwert 1 SD ng ml h Zuf llige ambulante Normalwerte 1 67 0 83 Nicht ambulante Normalwerte 3 30 1 85 14 2 Auswirkung der Haltung Eine sorgf ltige Beurteilung der PRA Werte h ngt von der klinischen Kenntnis der Haltung des Patienten ab da diese die PRA Werte beeinflusst Die Auswirkung einer aufrechten Haltung nach einem n chtlichen Schlaf in R ckenlage wird in TABELLE IV gezeigt TABELLE IV Auswirkung der Haltung Mittelwert 1 SD ng m h R ckenlage 1 24 1 09 Aufrecht Haltung 2 63 1 32 14 3 Furosemid Stimulation Die klinische Einsch tzung des Renin Angiotensin Systems kann die Bewertung der PRA nderung nach der Stimulation erfordern Die Wirkung von Furosemid auf das Renin Angiotensin System die durch die nderung der PRA festgestellt wird wurde entsprechend der in TABELLE V zusammengefassten Untersuchung bestimmt Bei der Furosemid Stimulation wurde ein betr chtlicher Anstieg der PRA Werte nachgewiesen TABELLE V Furosemid Stimulation Mittelwert 1 SD ng ml h Pr Stimulation 2 36 1 23 Post Stimulation 6 92 2 76 HINWEIS Eine Monographie mit der vollst n
138. giotensin in Angiotensin Il eingesetzt werden und zur Verhinderung des proteolytischen Abbaus von Angiotensin w hrend der Generation 7 Als Hemmstoff wird bei dieser Methode Phenylmethylsulfonylfluorid PMSF eingesetzt Auswirkungen der Plasmaverd nnung Plasmaverd nnung sollte vermieden werden da die Renin Reaktion von der normalerweise im Plasma vorhandenen Konzentration des Reninsubstrats abh ngig ist Die Auswirkungen der Substratverd nnung k nnen w hrend der Generation in allen Intervallen beobachtet werden und treten bei h herer Verd nnung noch st rker hervor Generationsdauer Die Enzymtatigkeit sollte in der k rzest m glichen Zeit bestimmt werden um die Anfangsgeschwindigkeit der Reaktion einsch tzen und den Substratverbrauch minimieren zu k nnen Der Radioimmunoassay f r Angiotensin ist ausreichend empfindlich f r die PRA Bestimmung mithilfe optimierter Generationsbedingungen f r Angiotensin mit pH 6 0 Das Verfahren des GammaCoat Plasma Renin Activity Kit bietet eine reduzierte Generationszeit da die Plasmaprobe nur geringf gig verd nnt und auf einem optimierten pH Wert gepuffert wird und der Test mit einem Hemmstoff abl uft der in dem gew hlten pH Bereich wirksam ist Es wird empfohlen Proben mit niedrigem Spiegel durch Generieren der Proben f r achtzehn Stunden zu quantifizieren und anschlie end zu testen Dauer des Radioimmunoassays Die Methode des GammaCoat Plasma Renin Activity Kit verw
139. gt 150 0 85 0 46 Ill PRA ad libitum 1 ng mL hr 1 67 0 83 Mn 3 30 1 85 14 2 H PRA Tn oi PRA MINAKA IV NINAKAZ IV 1 ng mL hr 1 24 1 09 2 63 1 32 143 H PRA PRA
140. guardar tubos n o utilizados mantendo o a uma temperatura de 2 27 C O nivel da gua deve ser mantido acima do nivel de solu o nos tubos sem permitir que os tubos flutuem O utilizador deve ter em considera o que os resultados incorrectos podem ser provocados pelo manuseamento inadequado das amostras do paciente Dever estar muito atento manuten o da temperatura da gua gelada durante a recolha e subsequente manuseamento das amostras As amostras congeladas devem ser rapidamente descongeladas temperatura ambiente e bem misturadas antes de se proceder pipetagem Verificou se que a heparina inibe a reac o da renina em concentra es de 5 IU mL por essa raz o n o deve utilizar heparina como anticoagulante nas amostras de sangue a serem ensaiadas para a actividade da renina plasm tica Os esp cimes hemolisados cont m angiotensinases n o devendo por isso ser utilizados Dados publicados demonstraram que a linearidade da gera o de angiotensina durante um per odo de gera o pr determinado tenha uma dura o curta de trinta minutos ou uma dura o mais prolongada de dezoito horas n o pode ser assumida O afastamento da linearidade poder ser a regra e n o a excep o mesmo sob um tamponamento controlado em qualquer pH Poder suceder que outros factores al m do pH possam influenciar a linearidade da gera o da angiotensina At que tais vari veis sejam realmente controladas parece ser nec
141. gue destinati all analisi dell attivit della renina plasmatica 5 campioni emolizzati contengono angiotensinasi e non devono essere utilizzati Dati pubblicati hanno dimostrato che la linearit della generazione dell angiotensina durante un periodo di generazione predeterminato che pu essere dell ordine di trenta minuti come pure arrivare a diciotto ore non pu essere data per certa Lo scostamento da un andamento lineare pu essere la regola piuttosto che l eccezione anche in presenza di buffer controllato a qualsivoglia pH possibile che altri fattori oltre al pH influenzino la linearit della generazione dell angiotensina Fino a quando queste variabili non saranno interamente controllabili necessario attendersi caratteristiche prive di linearit L impossibilit di ottenere valori di controllo appropriati pu essere segno di manipolazione non adeguata trattamento improprio o deterioramento dei reagenti Per ogni ciclo di analisi deve essere ottenuta una curva di calibratore basata su valori appropriati dei calibratori 61 Interpretativi estremamente importante che le variabili fisiologiche quali la postura del paziente e o l assunzione di sodio o l escreto di sodio nell urina delle 24 ore siano presi in considerazione per interpretare accuratamente i risultati dell analisi Anche et sesso e razza sono fattori importanti che devono essere presi in considerazione Cambiamenti nell ARP possono essere influenza
142. he ice bath ifthe assay is to be performed immediately or to the freezer along with the 4 series for future assay 9 ASSAY PROCEDURE The assay procedure includes the preparation of a calibrator curve from which the unknown angiotensin content in both the 37 and 4 series samples is interpolated The background 4 series is then subtracted from the corresponding 37 generation samples 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 Allow tracer buffer reagent to reach ambient temperature and mix well before using Maintain blank and calibrators generated control and generated patient samples in an ice bath and mix well before using Label a set of GammaCoat tubes in duplicate according to the following scheme Total Counts T1 T2 and Bo tubes 1 2 may be required for certain data reduction programs but may be omitted if the calibrator curve is plotted on semi logarithmic graph paper Tube Code Angiotensin No Contents of Tubes Letter ng 0 1 mL T1 T2 Total Counts Tracer Buffer 1 2 Angiotensin Blank 0 ng mL A 0 3 4 Angiotensin Calibrator 0 2 ng mL B 0 02 5 6 Angiotensin Calibrator 0 8 ng mL 0 08 7 8 Angiotensin Calibrator 3 0 ng mL D 0 30 9 10 Angiotensin Calibrator 10 0 ng mL E 1 0 11 12 Angiotensin Calibrator 50 0 ng mL F 5 0 13 14 Renin Activity Control 37 C Generation 15 16 Renin Activity Control 4 C Generation 17 18 Patient X 37 C Generation 19 20 Patient 4 C Generation Pipet
143. i soluzione salina corretta con fosfato con albumina di siero bovino con l aggiunta di thimerosal etilmercuriotiosalicilato di sodio quale conservante 4 2 Provette rivestite di siero di coniglio anti angiotensina reagente pronto per l uso Provette da 12 x 75 mm sono rivestite di siero di coniglio anti angiotensina titolo lt 1 ug provetta e imballate in un sacchetto di plastica Conservare a 2 27 C 4 3 Concentrato del buffer per analisi dell angiotensina 11X reagente concentrato Aggiungere l intero contenuto della fiala di concentrato del buffer per analisi a 100 ml di acqua purificata e mescolare bene Ogni fiala contiene 10 ml di buffer di fosfato insieme allo 0 1 di sodio azide quale conservante 4 4 Buffer per la generazione di maleato per angiotensina reagente pronto per l uso Ogni fiala contiene 5 ml di buffer di maleato EDTA di sodio solfato di neomicina e colorante blu inerte con lo 0 1 di sodio azide quale conservante 4 5 Fenilmetilsulfonil fluoruro per angiotensina reagente pronto all uso Ogni fiala contiene 1 ml di fenilmetilsulfonil fluoruro PMSF in etanolo 4 6 Controllo per l attivit della renina reagente liofilizzato Ricostituire prima dell uso dispensando 3 0 ml di acqua purificata a 2 8 C Tenere la fiala in un bagno di ghiaccio per 10 minuti e agitare delicatamente su vortice per mescolare bene Suddividere le porzioni da 1 0 ml nelle provette di vetro o di plastica pre raffreddate Sigillare bene e
144. if swallowed R32 Contact with acids liberates very toxic gas S28 After contact with skin wash immediately with plenty of water REAGENTS CONTAINING THIMEROSAL Some reagents in this kit contain thimerosal which contains a mercury compound Disposal of elemental mercury inorganic mercury mercury oxides and mercury com pounds should be done in strict compliance with all local state and federal regulations WARNING This product contains a chemical known to the State of California to cause birth defects or other reproductive harm European Communities Hazardous Substance Risk Phrases Council Directive 1999 45 EC Reagents Containing Ethanol R11 Highly flammable S16 Keep away from sources of ignition No smoking S43 In case of fire use dry chemical or carbon dioxide Reagents Containing PMSF R23 24 25 Toxic by inhalation in contact with skin and if swallowed S36 Wear suitable protective clothing S45 In case of accident or if you feel unwell seek medical advice immediately Reagents Containing Potassium Hydroxide R35 Causes severe burns S26 In case of contact with eyes rinse immediately with plenty of water and seek medical advice S37 39 Wear suitable gloves and eye face protection REAGENTS CONTAINING IODINE 125 This kit contains radioactive materials which do not exceed 2 74 kBq kit CA 1533 or 10 uCi 370 kBq kit CA 1553 of iodine 125 Appropriate precautions and good labora
145. ina no sangue retardaram a aceita o geral do seu ensaio nos laborat rios cl nicos Como os n veis da angiotensina s o uma representa o directa da actividade da renina plasm tica a determina o da actividade da renina plasm tica foi adoptada em larga escala como o meio de avaliar o sistema renina angiotensina nos v rios estados das doen as A medi o da actividade da renina plasm tica nos hipertensos constitui um aux lio importante nos diferentes diagn sticos do aldosteronismo prim rio e secund rio A estimativa da actividade da renina tamb m de grande utilidade na determina o do progn stico e das terapias mais adequadas para indiv duos que sofram de hipertens o essencial Foi descrito um radioimunoensaio da angiotensina e a respectiva aplica o como indicadores da actividade da renina plasm tica O procedimento do kit GammaCoat para a determina o da actividade da renina plasm tica uma adapta o desse m todo 3 PRINC PIOS DO ENSAIO O procedimento baseia se nos princ pios de liga o competitiva do radioimunoensaio No Kit RIA da Actividade da Renina Plasm tica GammaCoat l o anticorpo imobilizado na parede inferior interna do tubo GammaCoat A determina o da ARP envolve uma incuba o inicial de plasma para gerar a angiotensina seguida por uma quantifica o da angiotensina atrav s do radioimunoensaio A gera o da angiotensina no sistema do substrato humano regulada
146. ine avec du thim rosal comme conservateur 4 2 Tubes enduits de s rum anti angiotensine de lapin r actif pr t l emploi Les tubes de 12 x 75mm sont enduits de s rum anti angiotensine de lapin titre lt 1 ug tube et emball es dans une poche plastique Les conserver entre 2 et 27 C 4 3 Tampon concentr pour dosage de l angiotensine 11X r actif concentr Ajouter la totalit du contenu du flacon de tampon de dosage concentr 100 ml d eau purifi e et bien m langer Chaque flacon contient 10 ml de tampon phosphate avec 0 1 d azoture de sodium comme conservateur 44 Tampon mal ate pour la production d angiotensine r actif pr t l emploi Chaque flacon contient 5 ml de tampon mal ate EDTA sodique sulfate de n omycine et colorant bleu inerte avec 0 1 d azoture de sodium comme conservateur 4 5 Fluorure de ph nylm thylsulfonyle pour angiotensine r actif pr t l emploi Chaque flacon contient 1 ml de fluorure de ph nylm thylsulfonyle fluoride PMSF dans de l thanol 4 6 Contr le de l activit de la r nine r actif lyophilis Reconstituer avant l emploi en pipetant 3 0 ml d eau purifi e entre 2 et 8 C Placer le flacon dans un bain de glace pendant 10 minutes et m langer d licatement au vortex ou agiter pour bien m langer R partir en portions de 1 0 ml portions dans des tubes en verre ou en plastique pr alablement refroidis Fermer herm tiquement et conserver 20 C On pe
147. into the appropriate duplicate tubes a 100 uL of each angiotensin blank or calibrator b 100 uL of the 37 and 4 generation set renin activity control to the appropriate group of 4 tubes c 100 uL of each 37 and 4 generation set patient sample to the appropriate group of 4 tubes Immediately add 1 0 mL of tracer buffer reagent to each tube including Total Counts Mix reagents by gently vortexing each tube Incubate all tubes at room temperature 20 27 C for three hours Aspirate or decant all tubes except Total Counts FAILURE TO REMOVE ADHERING SOLUTION ADEQUATELY MAY RESULT IN POOR REPLICATION AND SPURIOUS VALUES If the aspirating technique is used be sure that the plastic tip of the aspirating tube touches the bottom of the coated tube and that all liquid is removed If the decanting technique is used allow the tubes to drain in an inverted position for 3 5 minutes Tap the tubes on absorbent paper to remove any adhering liquid before placing them upright Count all tubes in a gamma counter for one minute with the window suitably adjusted for iodine 125 Calculate results Refer to Results section 10 QUALITY CONTROL One Renin Activity Control is provided in the kit See vial label for nominal value The control must undergo generation before assaying Each laboratory should utilize controls at several levels to monitor assay performance The controls should be treated as unknowns Quality co
148. iori precauzioni e informazioni 7 MATERIALI NECESSARI NON FORNITI 7 1 Acqua purificata 7 2 Bagno di acqua a temperatura costante 37 2 C 7 3 Bagno di acqua ghiacciata 7 4 Pipette volumetriche da 1 2 3 e 5 ml 7 5 Cilindro graduato 100 ml 7 6 Pipette di precisione da 10 100 500 e 1000 pl 7 7 Contatore a raggi gamma 7 8 Provette di plastica o vetro da 12 x 75 mm per la generazione di angiotensina 7 9 Portaprovette per test 7 10 Miscelatore vortex facoltativo 7 11 Aspiratore di acqua facoltativo 7 12 Carta assorbente con retro in plastica facoltativo 8 PROCEDURA PER LA PRODUZIONE DI ANGIOTENSINA I 8 1 Trasferire 1 0 ml di plasma in una provetta priva di rivestimento di vetro o plastica contrassegnata con il numero di identificazione e il suffisso 37 8 2 Aggiungere 10 ul della soluzione di PMSF e 100 ul del buffer per la generazione di maleato pH 6 0 a ciascuna porzione da 1 0 ml di cui al passo 1 Mescolare bene e collocare nel bagno di ghiaccio 8 3 Trasferire 500 yl di plasma di cui al passo 2 in una provetta raffreddata corrispondente contrassegnata con il suffisso 4 8 4 Disporre la serie 37 di provette nel bagno di acqua a 37 C Lasciare la serie 4 di provette nel bagno di ghiaccio Procedere con la generazione del buffer di maleato per 90 minuti stato suggerito che campioni di pazienti con valori dell ARP inferiori a 1 0 ng ml ora possono essere generati durante un incubazione di 18 ore
149. iotensina Calibratore 0 2 ng ml B 0 02 5 6 Angiotensina Calibratore 0 8 ng ml C 0 08 7 8 Angiotensina Calibratore 3 0 ng ml D 0 30 9 10 Angiotensina Calibratore 10 0 ng ml E 1 0 11 12 Angiotensina Calibratore 50 0 ng ml F 5 0 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 13 14 Controllo dell attivit della renina Generazione a 37 C 15 16 Controllo dell attivit della renina Generazione a 4 C 17 18 Paziente X Generazione a 37 C 19 20 Paziente X Generazione a 4 C Dispensare nelle provette duplicate appropriate a 100 pl di prova in bianco o calibratore di angiotensina b 100 yl del controllo dell attivit della renina generazione 37 e 4 nel gruppo appropriato di 4 provette 100 ul di campione paziente della serie di generazione 37 e 4 nel gruppo appropriato di 4 provette Aggiungere immediatamente 1 0 ml di reagente del buffer tracciante in ciascuna provetta compresa quella relativa ai conteggi totali Mescolare i reagenti delicatamente ponendo ogni provetta su vortex Lasciare in incubazione tutte le provette a temperatura ambiente 20 27 C per tre ore Aspirare o lasciar decantare tutte le provette eccetto quelle per il conteggio totale UNA RIMOZIONE NON CORRETTA DELLA SOLUZIONE DI ADERENZA PU ESSERE CAUSA DI REPLICAZIONE SCADENTE E DI VALORI ERRATI Se si impiega la tecnica di aspirazione controllare che la punta in plastica dell aspiratore tocchi il fondo della pro
150. it t Impulse pro Minute I M f r jedes R hrchen notieren 11 2 Auf halblogarithmischem Millimeterpapier die gebundene Aktivit t I M f r Angiotensin Kalibratoren vertikale Achse gegen die pro R hrchen zugesetzten Nanogramme ng Angiotensin horizontale Achse auftragen 11 3 Die bestpassende Kurve zeichnen F r typische Daten siehe TABELLE ABBILDUNG 1 zeigt eine typische Eichkurve 11 4 F r das einer Probe entsprechende R hrchen die gebundene Aktivit t I M auf der vertikalen Achse ermitteln und einer die Eichkurveschneidenden horizontalen Linie folgen Beim Schnittpunkt die Nanogramme ng Angiotensin auf der horizontalen Achse ablesen F r jede Probe und Kontrolle die durchschnittlichen ng 37 und die durchschnittlichen ng 4 bestimmen 12 PLASMA RENIN AKTIVIT T PRA Die Plasma Renin Aktivit t PRA wird in ng ml h des generierten Angiotensin ausgedr ckt Die folgenden rechnerischen Korrekturen dienen dazu den Wert ng mi h zu erhalten 12 4 Den Durchschnittswert 4 Background von dem Mittelwert 37 generiert abziehen Netto ng ng 37 ng 4 12 2 Gr e der im beschichteten R hrchen getesteten Probe C 0 1 mlc 12 3 Verd nnung der Probe S mit Generationspuffer B und Inhibitor 1 10 mlg 0 1mlg 0 01ml 111mlgng 1 0 mls 100 mlAusgang 12 4 Dauer der Angiotensin Generation 1 5 Stunden HINWEIS Bei nderung der Dauer der Generationszeit muss diese
151. l hypertension A radioimmunoassay for angiotensin and its application as an index of plasma renin activity has been described The GammaCoat Kit procedure for determining plasma renin activity is adapted from this method 3 PRINICIPLES OF THE ASSAY The procedure is based on competitive binding principles of radioimmunoassay In the GammaCoat 25 Plasma Renin Activity RIA Kit the antibody is immobilized onto the lower inner wall of the GammaCoat tube The PRA determination involves an initial incubation of plasma to generate angiotensin I followed by quantitation of angiotensin by radioimmunoassay The generation of angiotensin in the human substrate system is governed by 3 1 pH of the incubation 3 2 extent of plasma dilution 3 3 choice of enzyme inhibitors 3 4 unknown factors in each individual plasma sample such as concentration of the renin substrate level 3 5 length of incubation 3 6 temperature of incubation 4 Generation pH The generation rate of angiotensin in vitro is pH dependent This kit procedure uses a generation pH of 6 0 the usual pH of samples after addition of pH 5 7 buffer The advantage of incubation at pH 6 0 rather than the physiologic pH 7 is the twofold greater rate of generation of angiotensin with correspondingly better sensitivity for low renin samples As a result of optimization shorter generation times may be utilized Selection of Enzyme Inhibitor A variety of agents can be employ
152. lazione a base di furosemide stato registrato un aumento considerevole dei valori dell ARP TABELLA V Stimolazione con furosemide Media 1 S D ng ml ora Pre stimolazione 2 36 1 23 Post stimolazione 6 92 2 76 NOTA Una monografia che illustra in dettaglio l intera valutazione disponibile su richiesta presso il nostro Centro assistenza clienti La monografia contiene i risultati degli studi seguenti 1 Aldosterone nell urina in relazione all ARP 2 Studi sulla renina nella vena renale in pazienti affetti da ipertensione renovascolare 3 Determinazione dell ARP in pazienti anefrici 4 Risultati dell ARP in pazienti in emodialisi 5 Profilo della renina in pazienti con ipertensione essenziale Cinque ore dopo furosemide 40 mg per os 63 15 CARATTERISTICHE SPECIFICHE DELLE PERFORMANCE 15 1 Sensibilit analitica La sensibilit della curva di calibratore definita come il valore individuale pi piccolo che sia distinguibile da zero stata calcolata una stima statistica della concentrazione minima rilevabile sensibilit in base al metodo di D Rodbard 1978 per trenta replicati in corrispondenza del punto zero della curva di calibratore La sensibilit calcolata di 0 018 ng provetta 15 2 Precisione La precisione fra pi cicli di analisi stata determinata calcolando la media fra 20 analisi simultanee per campione La precisione fra cicli di analisi stata determinata calcolando la medi
153. lisation Les blancs et les talons doivent ensuite tre refroidis dans un bain de glace avant le dosage On peut les conserver entre 2 et 8 C pendant un maximum de deux semaines et 20 C pendant de plus longues p riodes Apr s reconstitution chaque flacon contient 2 ml d angiotensine I BSA dans une solution saline de tampon phosphate Les talons sont calibr s 0 0 2 0 8 3 0 10 0 et 50 0 ng ml respectivement Les talons d activit de la r nine plasmatique DiaSorin sont calibr s au moyen du lot de production de r f rence actuel Les talons de la trousse d montrent leur commutabilit avec les chantillons des patients lorsqu ils sont utilis s avec des r actifs et selon le mode d emploi de ce dosage diagnostique in vitro comme recommand 5 AVERTISSEMENTS ET PR CAUTIONS POUR USAGE DIAGNOSTIQUE N VITRO Non pr vu pour une utilisation interne ou externe sur l homme ou l animal REACTIFS CONTENANT DES PRODUITS D ORIGINE HUMAINE Les traiter comme potentiellement infectieux Chaque don de s rum plasma intervenant dans la pr paration de ce produit a t test par une m thode agr e par la FDA et s est av r non r actif pour la pr sence d antigene HBsAg d anticorps anti VHC et d anticorps anti VIH1 et 2 M me si ces m thodes sont extr mement pr cises elles ne garantissent pas la d tection de tous les dons infect s Ce produit peut galement contenir d autres produits d origine humaine pour le
154. ll varje 1 0 mL prov fran steg 1 Blanda val och placera i isbad Pipettera 500 uL av plasman fran steg 2 till ett motsvarande kylt ror markt med suffixet 4 Placera r ren i 37 serien i ett vattenbad vid 37 C Lat r ren i 4 serien sta kvar i isbadet Lat angiotensinbildning i maleatbufferten paga i 90 minuter Det har f reslagits att patientprover med PRA v rden under 1 0 ng mL h kan k ras med en angiotensinbildning som far paga i 18 timmar och darefter testas p nytt Vid alla ndringar av angiotensinbildningstiden m ste ber kningarna justeras N r bildningsinkuberingen r avslutad flyttar man r ren i 37 serien till isbadet om assayen skall k ras genast alternativt till frys tillsammans med r ren i 4 serien f r assay vid ett senare tillf lle 9 TESTPROCEDUR assayproceduren ing r framtagning av en kalibreringskurva i vilken man avl ser den ok nda angiotensin I halten f r r ren i bade 37 serien och 4 serien Bakgrundsv rdena r ren i 4 serien subtraheras sedan fran motsvarande v rden f r r ren i 37 serien 9 1 9 2 Lat det beredda sp r mnesreagenset anta rumstemperatur och blanda det val f re anv ndning L t blank och kalibreringsl sningar samt kontroll och patientprover som genomg tt angiotensinbildning st p isbad och blanda dem val f re anv ndning Mark upp GammaCoat r r f r dubbelprover enligt f ljande schema R ren f r totalaktivitet T1 T2 och Bo 1 2 kan kr vas f r vissa dat
155. m Test gelagert werden Proben k nnen bei 20 C bis zu einem Monat eingefroren Bon 30 werden Einfrieren und Auftauen in Tiefk hlschr nken mit automatischer Abtauung sind zu vermeiden Unterschiede konnten bei der PRA nach Aufbewahrung bei 2 8 C und nach l ngerer Lagerung bei 2 8 C beobachtet werden 2 Gefrorene Proben vor dem Test bei Raumtemperatur auftauen Es sollten keine h molysierten lip mischen ikterischen oder Citrat Proben verwendet werden Heparin nicht als Antikoagulanz verwenden Siehe Abschnitt Grenzen des Verfahrens f r zus tzliche Vorsichtsma nahmen und Informationen 7 ZUS TZLICH BEN TIGTE MATERIALIEN DIE NICHT ZUM LIEFERUMFANG GEH REN 7 1 Destilliertes Wasser 7 2 Wasserbad gleichm iger Temperatur 37 2 C 7 3 Eiswasserbad 7 4 Messpipetten 1 2 3 und 5 ml 7 5 Messzylinder 100 ml 7 6 Prazisionspipetten 10 100 500 und 1000 pL 7 7 Gammamesser 7 8 Kunststoff oder Glasr hrchen 12 x 75 mm f r die Angiotensin Generation 7 9 Testr hrchenst nder 7 10 Vortex Mixer optional 7 11 Wassersauger optional 7 12 Kunststoffbeschichtetes Saugpapier optional 8 ANGIOTENSIN I GENERATIONSVERFAHREN 8 1 1 0 ml Plasma in ein unbeschichtetes Glass oder Kunststoffr hrchen geben das mit der Kennnummer und dem Suffix 37 versehen ist 8 2 10 ul PMSF L sung und 100 ul Maleinat Generationspuffer pH 6 0 jedem 1 0 ml Aliquot ab Schritt 1 zugeben Gut mischen und in ein Eis
156. mano procesado con azida s dica al 0 1 4 7 Calibradores de angiotensina A F reactivo liofilizado NOTA Los blancos y calibradores se utilizan s lo en la parte de radioinmunoensayo y no deben utilizarse durante la generaci n de angiotensina Reconstituya cada vial con 2 0 mL de agua purificada y mezcle bien antes de utilizarlo Los blancos y calibradores deben enfriarse en un bafio de hielo antes del ensayo Pueden almacenarse a 2 8 C un m ximo de dos semanas y a 20 C para almacenamientos mas prolongados 41 Tras la reconstituci n cada vial contiene 2 mL de angiotensina BSA en soluci n salida tamponada con fosfato Los calibradores est n calibrados a 0 0 2 0 8 3 0 10 0 y 50 0 ng mL respectivamente Para la calibraci n de los calibradores de actividad de renina en plasma de DiaSorin se ha utilizado el lote maestro de producci n actual Los calibradores del equipo han demostrado tener conmutabilidad con muestras de pacientes cuando se utilizan con los reactivos y el procedimiento recomendados para esta prueba de diagn stico in vitro 5 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES PARA UTILIZACI N EN DIAGN STICOS N VITRO No debe destinarse al uso interno o externo en seres humanos ni animales REACTIVOS CON MATERIAL DE ORIGEN HUMANO Tr tense como potencialmente infecciosos Todas las unidades de suero plasma de donante usados en la preparaci n de este producto se han comprobado mediante un m todo aprobado por la FDA est
157. ment soit au cong lateur avec les tubes de la s rie 4 en vue d un dosage ult rieur 9 PROCEDURE DE DOSAGE La proc dure de dosage comprend la pr paration de la courbe d talonnage a partir de laquelle la teneur en angiotensine a d terminer dans les chantillons des s ries 37 et 4 est interpol e On soustrait ensuite le bruit de fond s rie 4 des tubes de production de la s rie 37 correspondants 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 Laisser le r actif traceur tampon s quilibrer temp rature ambiante et bien melanger avant utilisation Garder les blancs et les talons les contr les de production et les chantillons de patients apr s production dans un bain de glace et bien m langer avant utilisation Etiqueter une s rie de tubes GammaCoat par paires selon le sch ma suivant Des tubes Activit totale T1 T2 et Bo 1 2 peuvent s averer n cessaires pour certains programmes de traitement de donn es mais peuvent tre omis si l on trace la courbe d talonnage sur papier semi logarithmique 3 25 Tube Code Angiotensine n Contenu des tubes alphab tique ng 0 1 ml T1 T2 Activit totale traceur tampon 1 2 Blanc Angiotensine 0 ng ml A 0 3 4 Etalon Angiotensine 0 2 ng ml B 0 02 5 6 Etalon Angiotensine 0 8 ng ml C 0 08 7 8 Etalon Angiotensine 3 0 ng ml D 0 30 9 10 Etalon Angiotensine 10 0 ng ml E 1 0 11 12 Etalon Angiotensine 50 0 ng ml F 5 0 13 14 Contr le de l activit de la r nine prod
158. mit anderen Laborbeh ltern aus Glas gr ndlichst mit Wasser sp len F r rzte oder Einrichtungen die im Rahmen einer Sondergenehmigung Radioisotope erhalten Entgegennahme Gebrauch Weitergabe und Entsorgung radioaktiven Materials unterliegen den Vorschriften und Bedingungen der jeweiligen Sondergenehmigung WARNHINWEIS Dieses Produkt enth lt eine Chemikalie die nach Angaben des US Bundesstaates Kalifornien krebserregend ist ACHTUNG Die auf der Packungsbeilage angegebene Radioaktivit t kann von der auf dem Etikett des Kartons und des Tracer Fl schchens angegebenen etwas abweichen Sowohl das Etikett des Kartons als auch das Etikett des Tracer Fl schchens geben den tats chlichen Wert der Radioaktivit t am Kalibrationsdatum an w hrend die Packungsbeilage die theoretische Radioaktivit t darstellt 6 PROBENGEWINNUNG UND VORBEREITUNG Die Plasma Renin Aktivit t ist aufgrund der Variation in der Reninaussch ttung w hrend des Tages am Morgen am h chsten und Proben sollten daher zu dieser Zeit genommen werden 8 Ven ses Blut unter aseptischen Bedingungen in ein luftleeres R hrchen mit EDTA abnehmen Die Proben k nnen bei Zimmertemperatur abgenommen transportiert und zentrifugiert werden Blut kann vor dem Zentrifugieren bis zu sechs Stunden bei Zimmertemperatur abgestellt werden ohne dass sich eine signifikante Akkumulation von Angiotensin einstellt Nach dem Zentrifugieren des Bluts kann das Plasma eingefroren bis zu
159. moment au cours de la production et cet effet est le plus marqu pour des dilutions plus importantes Dur e de production On doit utiliser le temps le plus court possible pour la d termination de l activit enzymatique afin d obtenir la meilleure estimation de la vitesse initiale de la r action et de r duire la consommation de substrat Le dosage radio immunologique de l angiotensine est suffisamment sensible pour permettre la d termination de l activit de la r nine plasmatique sous des conditions optimis es de production d angiotensine pH 6 0 La m thode de la trousse GammaCoat Activit de la r nine plasmatique permet un temps de production r duit parce que l chantillon de plasma est dilu au minimum tamponn un pH optimis et analys en pr sence d un inhibiteur qui est efficace au pH s lectionn On a mis l hypoth se que des chantillons faible concentration peuvent tre quantifi s en laissant produire les chantillons pendant dix huit heures avant de proc der au dosage Dur e du dosage radio immunologique La m thode de la trousse GammaCoat Activit de la r nine plasmatique utilise une incubation de trois heures pour le dosage radio immunologique Les r sultats sont disponibles dans la journ e 14 4 R ACTIFS FOURNIS DANS LA TROUSSE Tubes enduits d anticorps anti angiotensine de lapin Tampon pour dosage de l angiotensine 11x Tampon mal ate pour la production d angi
160. n bianco e i calibratori devono quindi essere raffreddati in bagno di ghiaccio prima di condurre l analisi Possono essere conservati a 2 8 C per un massimo di due settimane e a 20 C per periodi pi lunghi In seguito alla ricostituzione ogni fiala contiene 2 ml di angiotensina albumina di siero bovino in soluzione salina con l aggiunta di fosfato calibratori sono tarati rispettivamente per 0 0 2 0 8 3 0 10 0 e 50 0 ng ml calibratori DiaSorin per l attivit della renina plasmatica sono tarati mediante il lotto master di produzione corrente I calibratori del kit dimostrano commutabilit con i campioni del paziente se usati con reagenti e con la procedura operativa di questo test diagnostico in vitro secondo le raccomandazioni pertinenti 54 5 AVVERTENZE E PRECAUZIONI PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO Non per uso interno o esterno su animali o persone REAGENTI CONTENENTI MATERIALE DI ORIGINE UMANA Trattare come potenzialmente infettivi Ogni unit di siero plasma da donatore usata nella preparazione di questo prodotto stata sottoposta a test secondo una metodica approvata dalla FDA statunitense e trovata non reattiva per la presenza di HBsAg anticorpi ad HCV ed anticorpi ad HIV 1 2 Anche se questi metodi sono estremamente accurati non garantita la localizzazione di tutte le unit infette Questo prodotto pu inoltre contenere altro materiale di provenienza umana per il quale non esiste un test approvato Poich ne
161. n indice de generaci n de angiotensina dos veces mayor y con una sensibilidad equivalente m s apropiada para las muestras de renina baja Como resultado de esta optimizaci n pueden utilizarse tiempos de generaci n mas cortos Elecci n del inhibidor de la enzima Se puede utilizar una variedad de agentes para bloquear la conversi n de angiotensina en angiotensina Il y para evitar la degradaci n proteol tica durante la generaci n de angiotensina 1 517 En este procedimiento se ha utilizado fluoruro de fenilmetilsulfonilo PMSF como inhibidor Efectos de la diluci n del plasma Debe evitarse la diluci n del plasma ya que la reacci n de la renina es sustratodependiente de la concentraci n del sustrato de renina que existe normalmente en el plasma Los efectos de la diluci n del sustrato se pueden observar en todos los intervalos durante la generaci n a una diluci n mayor se han observado efectos m s marcados Duraci n de la generaci n Se debe emplear el tiempo de pr ctica m s corto posible para determinar la actividad de la enzima a fin de proporcionar la mejor estimaci n de la velocidad inicial de la reacci n y minimizar el consumo del sustrato El radioinmunoensayo de angiotensina es lo bastante sensible como para permitir la determinaci n de PRA con condiciones optimizadas de generaci n de angiotensina a pH 6 0 El m todo GammaCoat del equipo de actividad de renina en plasma ofrece un tiempo de generaci n red
162. neration 1 5 hours NOTE If length of generation time is altered then the corresponding change must be made in this number 12 5 Maleate Generation Calculation E 37 ng a E 157 me 0 1 mLc 1 00 mL 1 5 hr PRA 7 40 mL hr x net ng Example Patient X Plasma Sample PRA 0 41 0 08 ng x 7 40 mL hr PRA 2 44 ng mL hr PRA TABLE Recording the Data Do not use to calculate unknowns Tube No T2 1 SONDA 10 11 12 13 15 16 17 18 19 20 Contents of Tubes Total Counts Tracer Buffer Total Counts Tracer Buffer Angiotensin Blank 0 ng tube Angiotensin Blank 0 ng tube Angiotensin Calibrator 0 02 ng tube Angiotensin Calibrator 0 02 ng tube Angiotensin Calibrator 0 08 ng tube Angiotensin Calibrator 0 08 ng tube Angiotensin Calibrator 0 3 ng tube Angiotensin Calibrator 0 3 ng tube Angiotensin Calibrator 1 0 ng tube Angiotensin Calibrator 1 0 ng tube Angiotensin Calibrator 5 0 ng tube Angiotensin Calibrator 5 0 ng tube Renin Activity Control 37 C Renin Activity Control 37 C Renin Activity Control 4 C Renin Activity Control 4 C Patient X Plasma Sample 37 C Patient X Plasma Sample 37 C Patient X Plasma Sample 4 C Patient X Plasma Sample 4 C CPM Bound 29242 28992 13617 13048 13163 12625 11305 11291 6991 7110 3053 3056 1307 1232 3149 3053 8674 8607 4362 4459 8546 8557
163. ngar A F 6 flaskor 2 mL 12 flaskor 2 mL Angiotensinsparamne 2 flaskor a5 mL 10 flaskor a 5 mL Antal test F RVARING O ppnad f rpackning f rvaras vid 2 8 C Oppnade reagens f rvaras enligt anvisningarna f r varje reagens nedan Reagensen f r ej anv ndas efter det utgangsdatum som anges pa etiketten Utgangsdatum f r satsen anges p etiketten p ytterf rpackningen och motsvarar utg ngsdatum f r sp r mnet Reagens fr n skilda batcher f r ej blandas 4 1 Sp r mne I angiotensin I frystorkat reagens Rekonstituera flaskan med l angiotensin genom att tills tta 5 mL renat vatten Blanda v l genom att v nda p flaskan eller vortexa den f rsiktigt Tills tt inneh llet i sp r mnesflaskor till 100 mL assaybuffert Blandningen av sp r mne och buffert ar stabil vid 2 8 C fram till utg ngsdatum f r satsen Efter rekonstituering inneh ller varje flaska cirka 1 Ci sp r mne 1 pg mL angiotensin i 5 mL PBS buffert med bovint serumalbumin med timerosal som konserveringsmedel 79 4 2 Assayr r belagda med kaninserum mot angiotensin I reagens f rdigt f r anv ndning 12 x 75 mm r ren ar belagda med kaninserum mot angiotensin titer lt 1 ug r r och f rpackade i en plastp se F rvaras vid 2 27 C 4 3 Koncentrat for angiotensinassaybuffert 11X koncentrerat reagens Tills tt hela innehallet i flaskan med koncentrat till 100 mL renat vatten och blanda v l Varje flaska i
164. nneh ller 10 ml fosfatbuffert med 0 1 natriumazid som konserveringsmedel 4 4 Maleatbuffert for angiotensinbildningssteget reagens f rdigt f r anv ndning Varje flaska inneh ller 5 mL maleatbuffert natrium EDTA neomycinsulfat och inert bl tt f rg mne samt 0 1 natriumazid som konserveringsmedel 4 5 Fenylmetylsulfonylfluorid f r angiotensin reagens f rdigt f r anv ndning Varje flaska innehaller 1 mL of fenylmetylsulfonylfluorid PMSF i etanol 4 6 Reninaktivitetskontroll frystorkat reagens Rekonstitueras f re anv ndning genom pipettering av 3 0 mL renat vatten med en temperatur av 2 8 C L t flaskan st i isbad i 10 minuter och vortexa eller sv ng runt den f rsiktigt Pipettera upp portioner 1 0 mL till i f rv g kylda glas eller plastr r F rslut r ren noga och f rvara vid 20 C En portion kan sparas i isbad eller i kylskap vid 2 8 C om assayen skall k ras vid detta tillf lle Den rekonstituerade kontrollen m ste f rvaras fryst vid 20 C och r stabil i minst tv m nader Upptiningen m ste ske i isbad eller kylsk p vid 2 8 C och den rekonstituerade kontrollen f r inte frysas p nytt efter upptining Man har sett variationer i PRA vid upprepade assayer p fryst plasma efter varierande lagringstider 2 F ljaktligen kan resultaten bli otillf rlitliga nar man anv nder fryst plasma som kontroll vid PRA m tningar Reninaktivitetskontrollen anv nds rutinm sigt vid bade angiotensin l bildnin
165. nsina 10 08 ng tubo Calibrador da Angiotensina 10 08 ng tubo Calibrador da Angiotensina 10 3 ng tubo Calibrador da Angiotensina 10 3 ng tubo Calibrador da Angiotensina 1 0 ng tubo Calibrador da Angiotensina 11 0 ng tubo Calibrador da Angiotensina 15 0 ng tubo Calibrador da Angiotensina 15 0 ng tubo Controlo da Actividade da Renina 37 C Controlo da Actividade da Renina 37 C Controlo da Actividade da Renina 4 C Controlo da Actividade da Renina 4 C Amostra de Plasma X do Paciente 37 C Amostra de Plasma X do Paciente 37 C Amostra de Plasma X do Paciente 4 C Amostra de Plasma X do Paciente 4 73 Nivel de CPM Angiotensina Ligado ng tubo 29242 28992 13617 13048 13163 12625 11305 11291 6991 7110 3053 3056 1307 1232 3149 3053 M d 0 99 8674 0 20 8607 0 20 M d 0 20 4362 0 41 4459 0 40 M d 0 41 8546 0 08 8557 0 08 M d 0 08 ARP Final ng mL hr 5 85 2 44 Curva do calibrador tipica N o utilize para calcular esp cimes desconhecidos 15 000 Patient X 4 C o O 7 500 Renin Activity Control 4 C Renin Activity Control 37 C 0 0 02 0 08 0 3 1 0 5 0 Angiotension ng tube FIGURA 1 13 LIMITACOES DO PROCEDIMENTO Processuais 13 1 13 2 13 3 13 4 13 5 13 6 13 7 13 8 13 9 O saco de pl stico do tubo revestido deve ser fechado de forma segura sempre que
166. nt du sel ad libitum et aucune tentative n a eu lieu en vue de contr ler leurs activit s Tous les chantillons ont t pr lev s entre 8 heures et 10 heures du matin Les donn es r sultant de ces observations sont reprises au TABLEAU III Elle se situent dans la plage d activit de la r nine plasmatique observ e pour des sujets ayant des apports normaux en sel parmi cette population Les valeurs plus lev es chez les sujets hospitalis s peuvent tre attribu es aux modifications des apports alimentaires de sel impos s par la nourriture distribu e en milieu hospitalier au stress induit par l environnement hospitalier ou d autres facteurs ind termin s 23 TABLEAU II Activit de la r nine plasmatique avec consommation limit e de sel Excretion de Nat Moyenne 1 mEq 24 h ng ml h 0 30 16 34 7 52 30 75 5 91 1 82 75 150 2 12 0 68 2150 0 85 0 46 TABLEAU Ill Activit de la r nine plasmatique avec consommation de sel a volont Moyenne 1 ng ml h Sujets normaux ambulatoires pris au hasard 1 67 0 83 Sujets normaux non ambulatoires 3 30 1 85 14 2 Effet de la position Une valuation correcte des valeurs de l activit de la r nine plasmatique n cessite que le clinicien connaisse la position du sujet car les valeurs de l APR sont affect es par la position L effet de supposer une position debout apr s une nuit de sommeil en position couch e est d crit au TABLEAU IV TABLEAU IV
167. ntrol charts should be maintained to follow the performance of the controls Appropriate statistical methods should be used to evaluate trends Acceptable performance limits should be ascertained for the individual laboratory 2 11 RESULTS 11 1 Record the counts per minute CPM bound for each tube 11 2 Plot the CPM bound for angiotensin calibrators vertical axis versus nanograms ng of angiotensin added per tube horizontal axis on semi logarithmic graph paper 11 3 Draw the best fitting curve For typical data refer to TABLE FIGURE 1 illustrates a typical calibrator curve 11 4 Locate the CPM bound for each tube which corresponds to each sample on the vertical axis and follow a horizontal line intersecting the calibrator curve At the point of intersection read ng angiotensin from the horizontal axis For each sample and control determine the average ng 37 and average ng 4 12 PLASMA RENIN ACTIVITY PRA Plasma renin activity PRA is expressed as ng mL hr of generated angiotensin The following mathematical corrections are made to obtain ng mL hr 12 1 Subtract the average 4 value Background from the average 37 Generated Net ng ng 37 ng 4 12 2 Size of sample assayed in coated tube C 0 1 mLc 12 3 Dilution of sample S by generation buffer B and inhibitor 1 10 mLg 0 1mLg 0 01mL _ 144ML inal 1 0 mL 100 ML initial 12 4 Time of angiotension I ge
168. o eixo horizontal Para cada amostra e controlo determine os ng m dios de 37 e os ng m dios de 4 12 ACTIVIDADE DA RENINA PLASM TICA ARP A actividade da renina plasm tica ARP expressa em ng mL hr de angiotensina gerada Efectuam se as seguintes correc es matem ticas para obter os ng mL hr 12 4 Subtraiao valor 4 m dio Base ao valor 37 m dio Gerado ng l quido ng 37 ng 4 12 2 Tamanho da amostra ensaiada no tubo revestido C 0 1 mLc 12 3 Diluig amp o da amostra S pelo tamp o B e pelo inibidor I de gera o 10 mLg 0 1mLg 0 01mL 111mLpinai 1 0 mLs 1 00 ML Inicial 12 4 Tempo de gera o da angiotensina 1 5 horas NOTA Se a dura o do tempo de gera o for alterada tamb m dever efectuar a altera o correspondente neste n mero 12 5 C lculo da Gera o de Maleato ng 37 ng 3 1 11 me 0 1mLc 1 00 mL 1 5hr ARP 7 40 mL hr x ng l quido Exemplo Amostra de Plasma X do Paciente ARP 0 41 0 08 ng x 7 40 mL hr ARP 2 44 ng mL hr ARP 72 TABELAI Registo dos Dados N o utilize para calcular esp cimes desconhecidos Tubo 2 Conteudo dos Tubos Contagem Total Tragador Tamp o Contagem Total Tragador Tamp o Branco da Angiotensina 0 ng tubo Branco da Angiotensina 0 ng tubo Calibrador da Angiotensina 10 02 ng tubo Calibrador da Angiotensina 10 02 ng tubo Calibrador da Angiote
169. o m dico em relac o postura do sujeito uma vez que os valores da ARP s o afectados pela posi o O efeito de assumir uma posi o erecta ap s uma noite de sono na posi o de supino indicado na TABELA IV TABELA IV Efeito Posicional D S 1 M dio ng mL hr Supino 1 24 1 09 Erecto 2 63 1 32 14 3 Estimulag o com Furosemida A avalia o clinica do sistema renina angiotensina pode requerer a avalia o da altera o da ARP ap s a estimula o O efeito da furosemida no sistema renina angiotensina tal como detectado pela alterac o da ARP foi determinado da forma demonstrada por um estudo resumido na TABELA V Verificou se um aumento significativo nos valores da ARP devido estimulac o com furosemida TABELAV Estimulag o com Furosemida D S 1 Medio ng mL hr Pr estimula o 2 36 1 23 P s estimula o 6 92 2 76 NOTA Est dispon vel atrav s de pedido para a Assist ncia a Clientes uma monografia com detalhes de toda a avaliag o A monografia inclui os resultados dos seguintes estudos aldosterona na urina vs ARP estudos da renina na veia renal em pacientes com hipertens o renovascular determinac o da ARP em pacientes an fricos resultados da ARP em pacientes sujeitos a hemodi lise perfil da renina em pacientes com hipertens o essencial cinco horas ap s a furosemida 40 mg p o non 76 15 CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE DESEMPENHO 15 1 Sensibilidade Analitica
170. og papper 11 3 Rita in den kurva som passar b st till punkterna F r ett typiskt exempel p m tdata h nvisar vi till Tabell I FIGUR 1 visar en typisk kalibreringskurva 11 4 Ga in p den lodr ta axeln vid CPM v rdet f r varje prov och f lj en v gr t linje tills den sk r kalibreringskurvan Fr n den punkt d r linjen sk r kurvan g r man ner och l ser av ng angiotensin I p den v gr ta axeln Best m medelv rdena i ng f r de b da 37 r ren respektive de b da 4 r ren f r varje prov och kontroll 12 PLASMARENINAKTIVITETEN PRA Plasmareninaktiviteten PRA uttrycks som ng mL h bildat angiotensin I Utf r f ljande matematiska korrigeringar f r att fa fram ng mL h 12 1 Subtrahera medelv rdet f r 4 bakgrunden fr n medelv rdet f r 37 nybildat Netto ng 37 ng 4 ng 12 2 Volym f r provet som testades i r ret med bel ggning C 0 1 mLc 12 3 Utsp dning av provet S fran maleatbuffert B och h mmare I 10 mLg 0 1mLg 0 01mL _ M1mLsiutiig 1 0 mLs 1 00 ML initial 12 4 Tid f r angiotensin I bildningen 1 5 h OBS Om tiden f r bildningsinkubationen ndras m ste denna siffra ndras p motsvarande s tt 84 12 5 Ber kning av bildat angiotensin i maleatbufferten ng 37 ng 1 11 0 1mLc 1 00 mL 1 5h PRA 7 40 mL h x netto ng Exempel Plasmaprovet f r patient X PRA 0 41 0 08 ng x 7 40 mL h PRA 7 2 44 ng mL h PRA TABELL I
171. ol R11 Altamente inflam vel S16 Mantenha afastado de fontes de igni o N o fumar S43 Em caso de fogo use um extintor qu mico a seco ou de di xido de carbono Reagentes com PMSF R23 24 25 T xico pela inala o em contacto com a pele e se ingerido S36 Use roupas de protec o adequadas S45 Em caso de acidente ou no caso de se sentir mal procure um m dico imediatamente 68 Reagentes Com Hidr xido de Pot ssio R35 Provoca queimaduras graves S26 Em caso de contacto com os olhos lave imediatamente com gua em abund ncia e procure aconselhamento m dico S37 39 Utilize luvas adequadas e protec o para os olhos cara REAGENTES COM IODO 125 Este kit contem material radioactivo que n o excede 2 uCi 74 kBq kit CA 1533 ou 10 uCi 370 kBq kit CA 1553 de iodo 125 Devem ser tomadas todas as precau es apropriadas e usadas boas praticas laboratoriais no armazenamento manuseamento e eliminac o deste material Para m dicos ou institui es que recebem r dio is topos sob uma licen a geral Este material radioactivo pode ser recebido adquirido possu do e usado apenas por m dicos veterin rios na pr tica da medicina veterin ria laborat rios cl nicos e hospitais e apenas para testes laboratoriais ou testes cl nico in vitro que n o envolvam administra o interna ou externa do material ou a radia o deste para seres humanos ou animais A sua recep o aquisi o posse
172. ology Peptide Hormones Berson amp Yalow eds American Elsevier N Y 1158 1168 1973 18 Gordon R D et al J Clin Invest 45 1587 1966 19 Katz F H et al J Clin Endocr Metab 40 125 1975 20 Osmond D H et al Can J Physiol Pharmacol 51 705 1973 21 Sealey J E Clin Chem 37 1811 1819 1991 22 Tonks D B Clin Chem 9 217 1963 23 Rodbard D et al J Clin Endocr 28 1412 1968 24 Rodbard D and J E Lewald Acta Endocr Copenhagen 147 79 1970 25 Rodbard D Clin Chem 20 1255 1974 26 Rodbard D and D M Hutt in Radioimmunoassay amp Related Procedures in Medicine Int Atomic Energy Agency Vienna 165 192 1974 27 Laragh J H in Methods in Investigative amp Diagnostic Endocrinology Peptide Hormones Berson amp Yalow eds Am Elsevier N Y 28 1174 1184 1973 28 Vagnucci A H and A P Shapiro Metabolism 23 273 1974 29 Oparil S and E Haber N Eng J Med 291 446 1974 30 Brunner H R et al in Hypertension Manual Laragh ed Yorke Med Books 71 86 1974 31 Rodbard D Analytical Biochemistry 90 1 1978 English SYMBOLS USED WITH DEVICES Frangais Deutsch Espa ol Italiano European Conformity Conformit aux CE Konformit ts Conformidad Conformit europea normes europ ennes kennzeichnung europea Date
173. one di plasma del paziente X 4 C 8557 0 08 Media 0 08 2 44 60 Curva di calibratore tipica Non usare per calcolare campioni non noti 15 000 Patient X 4 C o O 7 500 Renin Activity Control 4 C Renin Activity Control 37 C 0 0 02 0 08 0 3 1 0 5 0 Angiotension ng tube FIGURA 1 13 LIMITI DELLA PROCEDURA Relativi alla procedura 13 1 13 2 13 3 13 4 13 5 13 6 13 7 13 8 13 9 Il sacchetto di plastica contenente le provette rivestite deve essere chiuso accuratamente per la conservazione delle provette non utilizzate e mantenuto alla temperatura di 2 27 C Il livello dell acqua deve essere mantenuto al di sopra di quello della soluzione contenuta nelle provette senza consentire alle provette di galleggiare L utilizzatore deve essere consapevole del fatto che risultati errati possono essere originati dal trattamento non idoneo dei campioni dei pazienti necessario prestare la massima attenzione alla temperatura dell acqua ghiacciata che deve essere mantenuta alla gradazione prescritta durante la raccolta e il trattamento successivo dei campioni I campioni congelati devono essere scongelati rapidamente a temperatura ambiente e mescolati con cura prima di essere dispensati stato notato che l eparina inibisce la reazione della renina a concentrazioni di 5 IU ml di conseguenza l eparina non deve essere utilizzata quale anticoagulante nei campioni di san
174. ontrol a generaci n antes del ensayo Cada laboratorio debe utilizar controles a diferentes niveles para supervisar el resultado del ensayo Los controles deben tratarse como desconocidos Deben realizarse gr ficos de control de calidad para seguir el resultado de los controles as como utilizarse m todos estad sticos apropiados para evaluar las tendencias Cada laboratorio debe determinar los limites de resultados aceptables 23 45 11 RESULTADOS 11 1 Registre las cuentas por minuto CPM unidas para cada tubo 11 2 Trace la uni n de CPM para calibradores de angiotensina eje vertical frente a los nanogramos ng de angiotensina afiadidos a cada tubo eje horizontal en un papel milimetrado semilogaritmico 11 3 Dibuje la curva que mejor se ajuste Para ver los datos t picos consulte la TABLA I La FIGURA 1 muestra una curva de calibraci n tipica 11 4 Localice la uni n de CPM de cada tubo correspondiente a cada muestra en el eje vertical y siga una linea horizontal que interseccione con la curva de calibraci n En el punto de intersecci n lea la angiotensina ng del eje horizontal Por cada muestra y control determine el ng promedio de 37 y el ng promedio de 4 12 ACTIVIDAD DE RENINA EN PLASMA PRA La actividad de renina en plasma PRA se expresa como ng mL hr de angiotensina generada Para obtener ng mL hr se han aplicado las correcciones matematicas siguientes 12 1 Reste el valor promedio
175. orbente con reverso de pl stico opcional PROCEDIMIENTO DE GENERACI N DE ANGIOTENSINA 8 1 8 2 8 3 8 4 8 5 Transfiera 1 0 mL de plasma a un tubo de pl stico o vidrio no recubierto marcado con el n mero de identificaci n y el sufijo 37 Agregue 10 uL de la soluci n PMSF y 100 uL del tamp n de generaci n de maleato pH 6 0 a cada al cuota de 1 0 mL del paso 1 Mezcle bien y col quelos en un ba o de hielo Transfiera 500 uL del plasma del paso 2 al tubo enfriado correspondiente marcado con el sufijo 4 Coloque los tubos de la serie 37 en un ba o de agua a 37 C Mantenga los tubos de la serie 4 en un ba o de hielo Lleve a cabo la generaci n del tamp n de maleato durante 90 minutos Se ha sugerido que las muestras de pacientes con valores de PRA inferiores a 1 0 ng mL hr se deben generar en una incubaci n de 18 horas y ser sometidas a ensayo de nuevo Los c lculos deber n ajustarse para reflejar cualquier cambio en el tiempo de generaci n Al final del per odo de generaci n transfiera la serie de muestras 37 a un ba o de hielo si el ensayo se va a realizar inmediatamente o al congelador que contiene la serie 4 si el ensayo se va a efectuar en el futuro PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO El procedimiento de ensayo incluye la preparaci n de una curva de calibraci n a partir de la cual se interpola el contenido de angiotensina desconocido de las muestras de las series 37 y 4 A continuaci n se sustrae el
176. otensin Angiotensin is cleaved rapidly by the activity of converting enzyme primarily in the lungs to the biologically active octapeptide angiotensin II In turn angiotensin II is degraded rapidly to inactive peptide fragments by enzymes present in plasma and tissues known as angiotensinases The metabolic pathway of the renin angiotensin system is described below renin substrate renin akgiotensin I converting enzyme abgiotensin Il angiotensinases inactive peptide fragments Angiotensin Il has an extremely short in vivo half life but it is the most potent vaso pressor known Angiotensin Il plays a key role in several forms of hypertension as well as in blood pressure regulation In addition angiotensin Il has been established as the major influence on aldosterone secretion by the adrenal gland Technical difficulties associated with the measurement of angiotensin Il levels in blood have retarded general acceptance of its assay in the clinical laboratory Since angio tensin levels are a direct representation of plasma renin activity the determination of plasma renin activity has been adopted widely to evaluate the renin angiotensin system in disease states Measurement of plasma renin activity in hypertensives is an important aid in the differential diagnosis of primary and secondary aldosteronism Estimation of renin activity is also valuable in determining the prognosis and most appropriate therapy for persons with essentia
177. otensine PMSF pour angiotensine Contr le de l activit de la r nine Etalons Angiotensine A F Traceur Angiotensine 1 sac 100 tubes 1 flacon 10 ml 1 flacon 5 ml 1 flacon 1 ml 1 flacon 3 ml 6 flacons 2 ml 2 flacons 5 ml 5 sacs 100 tubes 5 flacons 10 ml 3 flacons 5 ml 2 flacons 1 ml 2 flacons 3 ml 12 flacons 2 ml 10 flacons 5 ml Nombre de dosages 100 500 CONSERVATION Des r ception la trousse doit tre stock e entre 2 et 8 C Apr s ouverture conserver chaque r actif comme indiqu ci dessous Les r actifs ne doivent pas tre utilis s au del de la date de p remption indiqu e sur l tiquette La date de p remption de la trousse figure sur l tiquette ext rieure et correspond a celle du traceur Les r actifs de lots diff rents ne doivent pas tre m lang s 4 1 Traceur Angiotensine 251 r actif lyophilis Reconstituer le flacon de traceur Angiotensine 125 en y ajoutant 5 ml d eau purifi e Bien m langer en retournant le flacon ou en le m langeant d licatement au vortex Ajouter le contenu de deux flacons de traceur 100 ml de tampon de dosage Le r actif tampon traceur est stable entre 2 et 8 C jusqu a la date de p remption de la trousse Apr s reconstitution chaque flacon contient environ 1 de traceur lt 1 ug ml d angiotensine 1 dans 5 ml de solution saline de tampon phosphate contenant de la s rumalbumine bov
178. peligrosas Directiva del Consejo 1999 45 CE R 20 21 22 Nocivo por inhalaci n por ingesti n y en contacto con la piel R 32 En contacto con cidos libera gases altamente t xicos S28 En caso de contacto con la piel l vese inmediatamente con abundante agua REACTIVOS CON CONTENIDO DE THIMEROSAL Algunos reactivos de este equipo contienen thimerosal el cual contiene un componente de mercurio La eliminaci n de mercurio elemental inorg nico xidos de mercurio o compuestos de mercurio deber seguir rigurosamente toda la normativa local estatal y federal al respecto ADVERTENCIA Este producto contiene una sustancia qu mica conocida en el estado de California como causante de malformaciones cong nitas o de da os a los rganos reproductores Advertencias establecidas en la Comunidad Europea sobre el riesgo de sustancias peligrosas Directiva del Consejo 1999 45 CE Reactivos con contenido de etanol R11 Altamente inflamable S16 Mant ngase alejado de fuentes de ignici n No fumar S43 En caso de incendio utilicense productos qu micos secos o di xido de carbono 42 Reactivos con contenido de PMSF R23 24 25 T xico por inhalaci n por ingesti n y en contacto con la piel S36 Utilicese ropa de protecci n adecuada S45 En caso de accidente o malestar ac dase inmediatamente al medico Reactivos con contenido de hidr xido de potasio R35 Causa quemaduras graves S26 En caso de contacto con los
179. pen unterteilt die auf dem Umfang der beobachteten Natriumexkretion basieren beliebiger Salzkonsum 75 150 mEq 24 Stunden Salzerg nzende Di t 150 mEq 24 Stunden und zwei salzlose Di ten Es ist bei normalen klinischen Zust nden m glich bescheidene Reduzierungen der Natriumexkretion zu erzielen bis 30 75 mEq in 24 Stunden Der untere Bereich der Natriumexkretion von 0 30 mEq 24 Stunden ist ungew hnlich und erfordert eine strenge Beschr nkung der Natriumeinnahme Das vorausgesagte umgekehrte Verh ltnis zwischen PRA und Natriumexkretion wurde festgestellt Da der Salzgehalt der Speisen regional unterschiedlich ist ist es angebracht wenn die Daten von PRA gegen Natriumexkretion von den betreffenden lokalen Labors ausgearbeitet werden Im Verlauf der klinischen Auswertung des Kits wurden Proben von ambulant behandelten und station ren Patienten des Krankenhauses ohne sichtbaren kardiovaskul re oder renale St rungen genommen Diese Personen unterlagen keinen Beschr nkungen beider beliebigen Salzeinnahme und es wurden keine Anstrengungen unternommen ihre T tigkeiten einzuschr nken Alle Proben wurden zwischen 8 00 und 10 00 morgens genommen Die Daten dieser Untersuchungen finden sich in TABELLE Ill Sie fallen unter den PRA Bereich der f r Personen mit normalem Salzkonsum f r diese Population festgestellt wurde Die h heren Werte der station ren Patienten k nnen der nderung des Salzgehalts durch die Krankenkost dem Stress infol
180. per l analisi radioimmunologica dell attivit della renina plasmatica GammaCoat 5I serve per la determinazione quantitativa dell attivit della renina plasmatica ARP mediante l analisi radioimmunologica dell angiotensina generata 2 SOMMARIO E SPIEGAZIONI La renina un enzima proteolitico del peso molecolare approssimativo di 40 000 viene rilasciata dalle cellule iuxtaglomerulari del rene L enzima agisce nella circolazione generale allo scopo di scindere il suo substrato una globulina alfa 2 sintetizzata dal fegato per produrre il decapeptide angiotensina L angiotensina scissa rapidamente dall attivit dell enzima convertente principalmente nei polmoni nell angiotensina un ottapeptide biologicamente attivo A sua volta l angiotensina Il degrada velocemente in frammenti peptidici inattivi per azione di enzimi presenti nel plasma e nei tessuti noti con il nome di angiotensinasi Il percorso metabolico del sistema renina angiotensina viene descritto di seguito substrato di renina renina abgiotensina I enzima convertente apgiotensina Il angiotensinasi frammenti peptidici inattivi L angiotensina Il caratterizzata da una emivita in vivo estremamente breve ma la sostanza vasopressoria pi potente conosciuta L angiotensina Il esplica la sua funzione in numerose forme di ipertensione nonch nella regolazione pressoria nel sangue stato inoltre riscontrato che l angiotensina Il la sostanza che influi
181. por 3 4 pH da incuba o 3 2 extens o da dilui o do plasma 3 3 escolha dos inibidores da enzima 65 4 3 4 factores desconhecidos em cada amostra individual de plasma tais como a concentrac o do nivel de substrato da renina 3 5 dura o da incuba o 3 6 temperatura da incuba o pH da Gera o A taxa de gera o da angiotensina in vitro depende do pH Este procedimento usa um pH de gera o de 6 0 o pH normal das amostras ap s a adi o de pH 5 7 tamp o A vantagem da incuba o com um pH 6 0 em vez de um pH 7 fisiol gico a taxa duplicada superior de gera o da angiotensina com a correspondente sensibilidade melhorada em amostras com baixos n veis de renina Como resultado dessa optimiza o poss vel utilizar tempos de gera o mais reduzidos Selec o do Inibidor da Enzima poss vel utilizar diversos agentes para bloquear a convers o enzim tica da angiotensina em angiotensina Il e para evitar a degrada o proteol tica durante a gera o da angiotensina 1 1517 O fluoreto de fenilmetilsulfonil PMSF o inibidor usado neste procedimento Efeitos da Dilui o do Plasma A dilui o do plasma deve ser evitada porque a reac o da renina dependente do substrato na concentra o do substrato de renina normalmente existente no plasma Os efeitos da dilui o do substrato podem ser observados em todos os intervalos durante a gera o sendo os efeitos mais marcados vis
182. r Ostrogentherapien und Mineralocorticoid Antagonisten Die Verwendung von Kontraststoffen wie sie in der Renographie benutzt werden kann ebenfalls die PRA Werte verf lschen Wird der pharmakologische Beitrag der Arzneimitteleinnanme des Patienten vernachl ssigt kann dies zu einer Fehlinterpretation der PRA Werte f hren Verschiedene klinische Bedingungen einschlie lich normaler Schwangerschaft beeinflussen die PRA Diese Faktoren sind eingehend in Artikeln die von Forschern in Fachzeitschriften ver ffentlicht wurden behandelt worden 27 20 14 ERWARTETE WERTE Die klinische Auswertung des PRA Kits wurde von einem unabh ngigen Pr fer vorgenommen und die Ergebnisse werden in diesem Abschnitt zusammengefasst Die vorgelegten Daten sind als Leitfaden f r den Benutzer dieses Kits anzusehen Aufgrund der Unterschiede in der Zusammensetzung der Patientenpopulation sind die Benutzer angehalten ihre eigenen Daten zu erstellen zum Beispiel PRA gegen Natriumexkretion Nomogramm 14 1 Auswirkung der Salzeinnahme Plasmaproben und Urinproben ber 24 Stunden wurden von normalen Erwachsenen ohne sichtbare kardiovaskul re oder renale St rungen genommen Jede Person erhielt eine Di t mit bekanntem Natrium und Kaliumgehalt Nach einer Zeit zur Herstellung des Gleichgewichts wurden Plasmaproben f r PRA und Urinproben w hrend 24 Stunden genommen Die Ergebnisse dieser Untersuchungen finden sich in TABELLE Il Die Daten wurden in vier Untergrup
183. r giftige Gase S28 Bei Ber hrung mit der Haut sofort mit viel Wasser abwaschen REAGENZIEN MIT THIMEROSAL Einige Reagenzien in diesem Kit enthalten Thimerosal das wiederum eine Quecksilberverbindung enth lt Quecksilberelemente anorganisches Quecksilber Quecksilberoxide und verbindungen m ssen in strikter bereinstimmung mit allen lokalen staatlichen und Bundesvorschriften entsorgt werden WARNHINWEIS Dieses Produkt enth lt eine Chemikalie die nach Angaben des US Bundesstaates Kalifornien Fehlgeburten oder andere angeborene Defekte verursachen kann Europ ische Gemeinschaften Gefahrenbezeichnungen f r gef hrliche Stoffe Richtlinie 1999 45 EG Ethanol enthaltende Reagenzien R11 Leicht entz ndlich S16 Von Z ndquellen fernhalten Nicht rauchen S43 Zum L schen Trockenl schmittel oder Kohlendioxid verwenden PMSF enthaltende Reagenzien R23 24 25 Giftig beim Einatmen bei Ber hrung mit der Haut und beim Verschlucken S36 Bei der Arbeit geeignete Schutzkleidung tragen S45 Bei Unfall oder Unwohlsein sofort einen Arzt zuziehen 29 Kaliumhydroxid enthaltende Reagenzien R35 Kann schwere Ver tzungen verursachen S26 bei Kontakt mit den Augen mit viel Wasser sp len und den Arzt aufsuchen S37 39 Bei der Arbeit geeignete Handschuhe sowie einen geeigneten Augen und Gesichtsschutz tragen REAGENZIEN MIT JOD 125 Dieser Kit enth lt radioaktives Material mit maximal 2 uCi 74 kBq Kit CA
184. recisi n intraserie se determin a partir del promedio de 20 ensayos simult neos por muestra La precisi n interserie se determin a partir del promedio de los duplicados para 20 series independientes Muestra para Numero de Media Desviaci n Coeficiente precisi n est ndar ani intr s rie pruebas ng mL hora ng mL hora de variaci n Pool de plasma A 20 1 6 0 16 10 0 Pool de plasma B 20 6 2 0 28 4 6 Pool de plasma C 20 17 9 1 68 9 4 Muestra para Numero de Media Desviaci n Coeficiente precisi n estandar den intersena pruebas ng mL hora ng mL hora de variaci n Pool de plasma A 20 1 6 0 09 5 6 Pool de plasma B 20 10 7 0 82 7 6 Pool de plasma C 20 15 2 1 04 6 8 15 3 Avidez La afinidad constante calculada del antisuero del equipo es aproximadamente de 3 x 1010 litros mol 15 4 Especificidad analitica Los datos de la reactividad cruzada del antisuero utilizado en este equipo se expresan como la proporci n de concentraci n de angiotensina por la concentraci n de la sustancia de reacci n cruzada con un 50 de inhibici n de uni n maxima Compuesto reactividad cruzada Angiotensina 100 Tetradecap ptido 0 02 Angiotensina Il lt 0 03 Angiotensina III lt 0 03 Sustrato de renina sint tica CONSULTE LA BIBLIOGRAFIA EN LA PAGINA 51 KIT PER L ANALISI RADIOIMMUNOLOGICA DELL ATTIVIT DELLA RENINA PLASMATICA GAMMACOAT 1 USO PREVISTO PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO Il Kit
185. reitos Conte todos os tubos num contador gama durante um minuto com a janela devidamente ajustada para iodo 125 Calcule os resultados Consulte a sec o Resultados 10 CONTROLO DE QUALIDADE fornecido um Controlo da Actividade da Renina com este kit Consulte o r tulo do frasco para verificar o seu valor nominal O controlo deve ser submetido gera o antes do ensaio Cada laborat rio deve utilizar controlos em diversos n veis para monitorizar desempenho do ensaio Os controlos devem ser tratados como esp cimes desconhecidos Devem ser mantidas tabelas de controlo da qualidade para acompanhar o desempenho dos controlos Devem se usar m todos estat sticos adequados para avaliar as tend ncias Os limites aceit veis de desempenho devem ser verificados para cada laborat rio individual 2 71 11 RESULTADOS 11 1 Registe as contagens por minuto CPM ligadas a cada tubo 11 2 Marque as CPM ligadas aos calibradores da angiotensina eixo vertical em relac o aos nanogramas ng de angiotensina adicionados por tubo eixo horizontal em papel de grafico semi logaritmico 11 3 Desenhe a curva que melhor se adequar Para obter os dados t picos consulte a TABELA I A FIGURA 1 ilustra uma curva do calibrador t pica 11 4 Localize a CPM ligada a cada tubo que corresponda a cada amostra do eixo vertical e siga uma linha horizontal que cruze a curva do calibrador No ponto do cruzamento leia os ng de angiotensina n
186. rie 37 de amostras para um banho de gelo no caso de efectuar o ensaio imediatamente ou para o congelador juntamente com a s rie 4 para futuros ensaios 9 PROCEDIMENTO DO ENSAIO O procedimento do ensaio inclui a prepara o de uma curva do calibrador da qual ser interpolado o conte do da angiotensina desconhecida presente nas amostras das series 37 e 4 A base s rie 4 depois subtra da s amostras de gera o 37 correspondentes 9 1 9 2 Permita que o reagente tra ador tamp o atinja a temperatura ambiente e misture bem antes de usar Mantenha as amostras em branco e os calibradores os controlos gerados e as amostras dos pacientes geradas num banho de gelo e misture bem antes de usar Rotule um conjunto de tubos GammaCoat em duplicado de acordo com o esquema seguinte Podem ser necess rios tubos de contagens totais T1 T2 e Bo 1 2 para determinados programas de redu o de dados mas poder o ser omitidos se a curva do calibrador for marcada em papel de gr fico semi logar tmico 28 70 Tubo Letra do Angiotensina 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 N Conteudo dos tubos C digo ng 0 1 mL T4 T2 Contagens Total Tra ador Tamp o 1 2 Amostra em branco da angiotensina Ong mL A 0 3 4 Calibrador da angiotensina I 0 2 ng mL B 0 02 5 6 Calibrador da angiotensina 0 8 ng mL C 0 08 7 8 Calibrador da angiotensina 3 0 ng mL D 0 30 9 10 Calibrador da angiotensina 10 0 ng mL E 1 0 11 12 Calibrador da
187. rina Como o conte do do sal nas dietas varia de regi o para regi o aconselh vel que os dados da ARP vs a excre o de s dio sejam desenvolvidos pelos laborat rios individualmente Durante o percurso de avalia o cl nica deste kit as amostras foram recolhidas a adultos hospitalizados ou ambulat rios sem qualquer doen a cardiovascular ou renal aparente Esses adultos encontravam se numa situa o de ingest o de sal ad libitum n o tendo sido feito qualquer esfor o para controlar as suas actividades Todas as amostras foram obtidas entre as 8 da manh e as 10 da manh Os dados obtidos nessas observa es s o apresentados na TABELA IIl Situam se dentro do intervalo de ARP observado nos indiv duos com uma ingest o de sal normal para esta popula o Os valores mais elevados verificados nos indiv duos hospitalizados pode ser atribu do s altera es diet ticas de sal impostas pela alimenta o hospitalar pelo stress induzido pelo ambiente hospitalar ou por outros factores indeterminados TABELA II ARP com Ingest o de Sal Restrita Na Excre o D S 1 M dio mEq 24 hr ng mL hr 0 30 16 34 7 52 30 75 5 91 1 82 75 150 2 12 0 68 gt 150 0 85 0 46 75 TABELA III ARP com Ingest o de Sal ad libitum D S 1 Medio ng mL hr Normais Ambulat rios Aleat rios 1 67 0 83 Normais n o ambulat rios 3 30 1 85 14 2 Efeito Posicional A avalia o precisa dos valores da ARP depende do conhecimento d
188. rs d une p riode de production d termin e m me aussi br ve que trente minutes ou aussi longue que dix huit heures Un cart par rapport la lin arit pourrait bien tre la r gle plut t qu une exception m me dans des conditions tampon contr l es n importe quel pH Il pourrait y avoir d autres facteurs que le pH susceptibles d influencer la lin arit de la production d angiotensine Aussi longtemps que ces variables ne sont pas parfaitement contr lables il semble n cessaire de s attendre des caract ristiques non lin aires Si Pon ne parvient pas obtenir des valeurs correctes pour les contr les la manipulation a peut tre t impr cise ou incorrecte ou les r actifs ont pu tre endommag s Une courbe d talonnage bas e sur les valeurs ad quates des talons doit tre tablie pour chaque dosage 22 Au niveau de l interpr tation Il est essentiel de prendre en consid ration des variables physiologiques comme la position du patient et sa consommation de sodium ou son excr tion urinaire de sodium en 24 heures pour une interpretation exacte des r sultats du dosage L ge le sexe et la race sont galement d importants facteurs dont il faut tenir compte L activit de la r nine plasmatique peut varier sous l effet d un grand nombre de m dicaments notamment les diur tiques les inhibiteurs des r cepteurs adr nergiques les vasodilatateurs les anti hypertenseurs les progestagenes fort
189. s ce moment 8 Un chantillon de sang veineux est pr lev de mani re aseptique au moyen d un tube en verre sous vide contenant de Les chantillons peuvent tre pr lev s transport s et centrifug s temp rature ambiante Le sang peut demeurer a temp rature ambiante pendant jusqu six heures avant d tre centrifug sans qu il y ait d accumulation significative d angiotensine Apr s centrifugation du sang le plasma peut tre congel jusqu au moment du dosage Les chantillons peuvent tre congel s 20 C pendant un maximum d un mois Les cycles r p t s de cong lation d cong lation tels qu ils peuvent se produire dans des cong lateurs d givrage automatique doivent tre vit s Des variations de l activit de la r nine plasmatique ont t observ es tant suite au stockage entre 2 et 8 C qu apr s un stockage prolong 20 C 21 Avant le dosage d congeler rapidement les chantillons congel s temp rature ambiante Ne pas utiliser d chantillons h molys s lip miques ict riques ou citrat s Ne pas utiliser d h parine comme anticoagulant Voir la section Limites du dosage pour des pr cautions et des informations suppl mentaires 7 MAT RIEL REQUIS MAIS NON FOURNIS 7 1 Eau purifiee 7 2 Bain marie temp rature constante 37 2 C 7 3 Bain de glace 7 4 Pipettes volum triques 1 2 3 et 5 ml 7 5 Cylindre gradu 100 ml 7 6 Pipettes de pr cision 10 100
190. s att andra faktorer n pH kan p verka lineariteten hos angiotensin I bildningen Tills det gar att kontrollera dessa variabler verkar det n dv ndigt att r kna med en icke linj r karakteristik Icke korrekta v rden f r kontrollen kan tyda p bristande noggranhet vid pipetteringen felaktig hantering eller f r gamla reagens En kalibreringskurva skall ritas upp f r varje k rning baserad p v rdena f r kalibreringsl sningarna Tolkningsm ssiga F r att tolka assyresultaten korrekt r det viktigt att ta h nsyn till fysiologiska variabler som patientens kroppst llning och antingen intaget natrium eller dygnsuts ndringen av natrium i urinen lder k n och ras r ocks viktiga faktorer att ta h nsyn till F r ndringar i PRA kan framkallas av ett spektrum av l kemedel tex diuretika adrenerga blockerare vasodilatorer antihypertensiva stora doser av progestiner angiotensin Il antagonister perorala antikonceptionsmedel eller strogenbehandling samt mineralkortikoidantagonister Anv ndning av diatrizoat vid exempelvis renografi kan ocks p verka PRA v rdena Om man underl ter att ta h nsyn till farmakologiska effekter fran patientens l kemedel kan detta leda till en felaktig tolkning av PRA v rdena 86 Olika kliniska tillst nd inklusive en normal graviditet p verkar ocks PRA Dessa faktorer finns sammanfattade i versiktsartiklar av flera forskare 27 20 14 F RV NTADE V RDEN Denna PRA sats h
191. saio a 100 mL de gua purificada e misture bem Cada frasco cont m 10 mL de tamp o fosfato com 0 1 de azida de s dio como conservante 4 4 Tamp o da Gera o de Maleato de Angiotensina reagente pronto a usar Cada frasco cont m 5 mL de tamp o de maleato EDTA de s dio sulfato de neomicina e corante azul inerte com 0 1 de azida de s dio como conservante 4 5 Fluoreto de fenilmetilsulfonil da Angiotensina reagente pronto a usar Cada frasco cont m 1 mL de fluoreto de fenilmetilsulfonil PMSF em etanol 4 6 Controlo da Actividade da Renina reagente liofilizado Fa a a reconstitui o antes de utilizar pipetando 3 0 mL de gua purificada a 2 8 C Mantenha o frasco num banho de gelo durante 10 minutos e misture ou agite cuidadosamente para misturar totalmente Estabele a uma al quota de por es de 1 0mL em tubos de pl stico ou de vidro previamente congelados Aperte bem e armazene a 20 C Pode manter uma al quota em banho de gelo ou no frigor fico a 2 8 C se o ensaio for efectuado nesse momento O controlo reconstitu do deve ser armazenado congelado a 20 C ficando est vel pelo menos durante dois meses A descongela o deve ser efectuada num banho de gelo ou num frigor fico a 2 8 C e o controlo reconstitu do n o deve ser novamente congelado ap s a descongela o Foram observadas varia es na ARP durante a repeti o de ensaios de plasma congelado ap s diversos per odos de armazenamento Por essa raz o
192. sce maggiormente sulla secrezione di aldosterone da parte della ghiandola surrenale Difficolt tecniche associate alla misurazione dei livelli dell angiotensina Il nel sangue sono responsabili del ritardo con cui l analisi relativa stata accettata nei laboratori clinici Poich i livelli di angiotensina II rispecchiano direttamente l attivit della renina plasmatica la determinazione dell attivit della renina plasmatica stata adottata diffusamente per valutare il sistema renina angiotensina in condizioni patologiche La misurazione dell attivit della renina plasmatica nei casi di ipertensione un ausilio importante nella diagnosi differenziale dell aldosteronismo primario e secondario La valutazione dell attivit della renina preziosa anche nella determinazione della prognosi e della terapia pi opportuna per individui affetti da ipertensione essenziale Sono state descritte un analisi radioimmunologica dell angiotensina e le sue applicazioni quali indici dell attivit della renina plasmatica La procedura relativa al kit GammaCoat per la determinazione dell attivit della renina plasmatica stata adattata sulla base di questo metodo 3 PRINICIPI DELL ANALISI La procedura si basa sui principi del legame competitivo dell analisi radioimmunologica Nel GammaCoat 125 Plasma Renin Activity RIA Kit l anticorpo immobilizzato sulla parete interna inferiore della provetta GammaCoat La determinazione dell ARP prevede una incu
193. sin Il spelar en nyckelroll vid flera former av hypertension liksom vid den fysiologiska blodtrycksregleringen Dessutom har man kunnat visa att angiotensin II utg r den viktigaste faktorn vid regleringen av binjurens aldosteronsekretion De tekniska sv righeter som r f renade med m tningar av angiotensin Il halterna i blod har gjort att att de kliniska laboratorierna har v ntat med att godk nna n got test f r det Eftersom halterna av angiotensin direkt speglar reninaktiviteten i plasma har man i stor utstr ckning valt att anv nda m tning av plasmareninaktiviten f r att bed ma renin angiotensinsystemet vid sjukdomstillstand M tning av plasmareninaktiviteten hos patienter med hypertension ar ett viktigt hj lpmedel f r differentialdiagnostik av prim r och sekund r aldosteronism En uppskattning av reninaktivieten ar ven v rdefull f r bed mning av prognos f r och l mpligaste behandling av patienter med essentiell hypertension En radioimmunoassay f r angiotensin och dess anv ndning som ett index p plasmareninaktiviteten har beskrivits tidigare GammaCoat Kit metoden f r best mning av plasmareninaktiviteten r en anpassning av denna assay 3 ANALYSPRINCIP Testet ar baserat p principen med kompetitiv bindning i en radioimmunoassay GammaCoat 125 Plasma Renin Activity RIA Kit ar antikroppen immobiliserad p den nedre delen av innerv ggen i GammaCoat r ren Vid PRA analysen inkuberas f rst plasma s at
194. sjukhusintagna vuxna utan synbar hj rtk rl eller njursjukdom Dessa patienter fick inta salt ad libitum och man vidtog inte n gra tg rder f r att reglera deras aktiviteter Alla prov togs mellan 8 00 och 10 00 Data fr n dessa observationer terfinns i TABELL De faller inom det PRA omr de som iakttogs f r personer med normalt saltintag f r denna population De h gre v rdena f r personer intagna p sjukhus kan tillskrivas de f r ndringar i saltintag som f ljer med stork ksmat den stress som sjukhusmilj n ut var eller andra ej fastst llda faktorer TABELL II PRA med restriktioner f r saltintag Na uts ndring Medelv rde 1 S D mEq 24 h ng mL h 0 30 16 34 7 52 30 75 5 91 1 82 75 150 2 12 0 68 2150 0 85 0 46 TABELL III PRA med salt ad libitum Medelv rde 1 S D ng mL h Slumpm ssigt utvalda ambulanta normalpersoner 1 67 0 83 Icke ambulanta normalpersoner 3 30 1 85 87 14 2 Effekt av kroppsst llning F r en korrekt bed mning av PRA v rdena kr vs det att l karen har k nnedom om patientens kroppsst llning eftersom v rdena p verkas av denna Effekten av att resa sig till st ende efter en natts s mn i liggande st llning framg r av TABELL IV TABELL IV Effekt av kroppsst llning Medelv rde 1 S D ng mL h Liggande 1 24 1 09 St ende 2 63 1 32 14 3 Furosemidstimulering F r en klinisk bed mning av renin angiotensinsystemet kan det kr vas att man m ter PRA
195. squels il n existe aucun test agr Comme aucune m thode de test connue ne peut offrir l assurance compl te de l absence du virus de l h patite B du virus de l h patite C VHC du virus de l immunod ficience humaine VIH ou d autres agents infectieux tous les produits d origine humaine doivent tre manipul s conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire en prenant les pr cautions appropri es d crites dans le document des Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 edition mai 1999 ou derni re dition REACTIFS CONTENANT DE L AZOTURE DE SODIUM ATTENTION Certains r actifs de cette trousse contiennent de l azoture de sodium L azoture de sodium peut r agir avec la plomberie en plomb ou en cuivre et donner naissance des azotures fortement explosifs Lors de leur limination rincer grande eau pour emp cher l accumulation d azoture Pour plus d informations consulter Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts dans le manuel Guide Safety Management N CDC 22 publi par les Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 D claration des risques relatifs aux substances dangereuses des communaut s europ ennes Directive du conseil 1999 45 CE R 20 21 22 Nocif en cas d inhalation d ingestion et de contact avec la peau R 32 Un contact avec les acides d gage un gaz tr
196. ssuna metodologia di test approvata pu offrire garanzia completa sull assenza del virus dell epatite B dell epatite C HCV del virus di immunodeficienza HIV o di altri agenti infettivi tutto il materiale di provenienza umana deve essere trattato in conformit con le buone pratiche di laboratorio adottando le precauzioni appropriate come descritto nei manuale dei Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories quarta edizione Maggio 1999 o edizione corrente REAGENTI CONTENENTI SODIO AZIDE ATTENZIONE Alcuni reagenti di questo kit contengono sodio azide La sodio azide pu reagire con componenti in piombo o rame e formare quindi azidi metalliche altamente esplosive AI momento dello smaltimento lavare con abbondante acqua al fine di evitare la formazione di azide Per ulteriori informazioni consultare Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts nel manuale Guide Safety Management No CDC 22 pubblicato dai Centri per il controllo e la Prevenzione delle malattie di Atlanta GA Frasi di rischio per sostanze pericolose della Comunit Europea Direttiva del Consiglio 1999 45 CE R20 21 22 Harmful by inhalation in contact with skin and if swallowed Dannoso per inalazione per contatto con la pelle ed ingestione R32 Contact with acids liberates very toxic gas Il contatto con acidi libera gas altamente tossico S28 A
197. sur l axe vertical et suivre une ligne horizontale jusqu au point d intersection avec la courbe d talonnage Au point d intersection lire le nombre de nanogrammes d angiotensine sur l axe horizontal Pour chaque chantillon et chaque contr le d terminer le nombre moyen de nanogrammes 37 et le nombre moyen de nanogrammes 4 12 ACTIVIT DE LA R NINE PLASMATIQUE ARP L activit de la r nine plasmatique ARP est exprim e en ng ml h d angiotensine produite Les corrections math matiques suivantes sont effectu es pour obtenir des ng ml h 12 1 Soustraire la valeur moyenne 4 bruit de fond de la valeur moyenne 37 production ng net ng 37 ng 4 12 2 Taille de l chantillon dos en tube enduit C 0 1 mlc 12 3 Dilution de l chantillon S par le tampon de production B et l inhibiteur 1 10 mlg 0 1mlg 0 01ml 411mlpinal 1 0 mls 1 00 Ml nitial 20 12 4 Temps de production de l angiotensine 1 5 heures REMARQUE En cas de modification du temps de production ce chiffre doit tre modifi en cons quence 12 5 Calcul de la production en tampon mal ate ng 37 ng e 1 11 m 0 1mlc 1 00 ml 1 5 heures PRA 7 40 ml h x ng net Exemple Echantillon de plasma du patient X PRA 0 41 0 08 ng x 7 40 ml h PRA 7 2 44 ng ml h PRA TABLEAU I Enregistrement des donn es A ne pas utiliser pour calculer les valeurs d terminer Niveau ARP Tub
198. t t wurde von dieser Methode abgeleitet 3 TESTPRINZIPIEN Das Verfahren basiert auf den Prinzipien der kompetitiven Bindung des Radioimmunoassays Bei dem GammaCoat 25 Plasma Renin Activity RIA Kit wird der Antik rper auf der unteren Innenwand des GammaCoat R hrchens immobilisiert Die PRA Bestimmung umfasst eine initiale Plasmainkubation zur Erzeugung von Angiotensin der eine Ma analyse des Angiotensin mittels Radioimmunoassay folgt Die Aussch ttung von Angiotensin im menschlichen Substratsystem wird geregelt durch 3 1 pH der Inkubation 3 2 Umfang der Plasmaverd nnung 3 3 Wahl der Enzyminhibitoren 3 4 unbekannte Faktoren in jeder individuellen Plasmaprobe wie z B die Konzentration des Reninsubstratspiegels 3 5 Inkubationsdauer 3 6 Inkubationstemperatur 26 pH Generation Die In vitro Generationsrate von Angiotensin h ngt von der pH Konzentration ab Dieses Kit Verfahren verwendet eine pH Generation von 6 0 die normale pH Konzentration von Proben nach Zugabe eines pH 5 7 Puffers Der Vorteil einer Inkubation mit pH 6 0 statt der physiologischen pH 7 Konzentration ist die zweifach h here Generationsrate von Angiotensin mit der entsprechenden besseren Sensitivit t f r Proben mit niedrigem Reningehalt Als Ergebnis der Optimierung k nnen k rzere Generationszeiten verwendet werden Auswahl der Enzyminhibitoren Eine Vielzahl von Wirkstoffen kann f r die Hemmung der enzymatischen Konversion des An
199. t angiotensin bildas och d refter sker en kvantitativ best mning av angiotensin med radioimmunoassay Bildningen av angiotensin i humansubstrat systemet styrs av 3 1 pH vid inkubationen 3 2 plasmans utsp dningsgrad 3 3 val av enzymh mmare 3 4 okanda faktorer i varje enskilt plasmaprov s som halten av reninsubstrat 3 5 inkubationens varaktighet 3 6 inkubationstemperatur 78 4 pH vid angiotensinbildning Hastigheten f r angiotensin l bildningen in vitro ar pH beroende denna sats anv nds ett pH pa 6 0 vilket ar det pH som i allmanhet rader i proverna efter tillsats av bufferten med pH 5 7 F rdelen med att inkubera vid pH 6 0 i st llet f r det fysiologiska pH 7 ar att man far en dubbelt sa snabb bildning av angiotensin vilket i motsvarande grad f rb ttrar k nsligheten for prover med lag reninaktivitet Som ett resultat av denna optimering racker det med en kortare inkubationstid f r bildning av angiotensin Val av enzymhammare En rad olika substanser kan anv ndas f r att blockera den enzymatiska omvandlingen av angiotensin till angiotensin och f rhindra proteolytisk nedbrytning under bildningen av angiotensin 1 1517 denna sats anv nds fenylmetylsulfonylfluorid PMSF Effekter av plasmaspadning Man bor undvika att sp da plasmaproverna eftersom reninreaktionen ar substratberoende vid den reninhalt som vanligen rader i plasma Effekterna av substratspadning kan ses vid alla inter
200. terior a la simulaci n efecto de la furosemida en el sistema de renina angiotensina como se ha detectado por los cambios de PRA se ha determinado mediante un estudio cuyo resumen se refleja en la TABLA V Se produjo un incremento significante en los valores de PRA con la estimulaci n de furosemida TABLAV Estimulaci n de furosemida Media 1 D E ng mL horas Pre estimulaci n 2 36 1 23 Post estimulaci n 6 92 2 76 NOTA Si desea obtener el documento monogr fico en el que se detalla todo el proceso de evaluaci n solicitelo al servicio al cliente El monogr fico contiene los resultados de los estudios siguientes aldosterina en orina frente a PRA estudios de renina venosa renal en pacientes con hipertensi n renovascular determinaci n de PRA en pacientes an fricos resultados de PRA en pacientes sometidos a hemodi lisis perfil de renina en pacientes con hipertensi n esencial cinco horas tras furosemida 40 mg p o a PON 50 15 CARACTERISTICAS ESPECIFICAS RESULTADO 15 1 Sensibilidad analitica La sensibilidad de la curva de calibraci n se define como el valor independiente mas pequefio distinto de cero Se calcul una estimaci n estadistica de la concentraci n minima que puede detectarse sensibilidad de acuerdo con el m todo de D Rodbard 1978 5 para treinta r plicas en el punto cero de la curva de calibraci n La sensibilidad calculada es de 0 018 ng tubo 15 2 Precision La p
201. ti da una serie di farmaci compresi diuretici agenti bloccanti adrenergici vasodilatatori antiipertensivi grandi dosi di progestine antagonisti dell angiotensina contraccettivi per bocca o estrogeni e antagonisti mineralcorticoidi L uso di diatrizoato come nella renografia pu inoltre influenzare i valori dell ARP Qualora non venga tenuta in considerazione l influenza farmacologica derivante dall assunzione di farmaci da parte del paziente si potrebbe giungere ad un errata interpretazione dei valori dell ARP Numerose condizioni cliniche compresa una comune gravidanza influenzano l ARP Questi fattori sono stati delineati brevemente in articoli pubblicati da numerosi ricercatori 27 30 14 VALORI PREVISTI La valutazione clinica del kit per ARP in oggetto stata effettuata da un ricercatore indipendente e i risultati sono riassunti brevemente nella sezione presente dati presentati intendono guidare l utilizzatore del causa della variabilit della popolazione di pazienti si suggerisce agli utilizzatori di produrre dati propri per esempio ARP in relazione al normogramma dell escreto di sodio 14 1 Effetti dell assunzione di sale campioni di plasma e la raccolta dell urina delle 24 ore sono stati ottenuti da individui adulti normali privi di segni evidenti di patologie cardiovascolari o renali Ad ogni individuo era stata assegnata una dieta di cui erano noti il contenuto di sodio e potassio Dopo un periodo di bilan
202. tor dar spill kan f rekomma skall torkas av och d refter reng ras med ett alkaliskt reng ringsmedel eller radiologisk dekontamineringsl sning Alla glasvaror som anv nds m ste sk ljas noga med vatten innan de diskas tillsammans med andra glasvaror f r laboratoriebruk F r mottagningar och institutioner som tar emot radioisotoper under en specifik licens N r ni tar emot anv nder verl ter och kasserar radioaktivt material g ller reglerna och villkoren i er specifika licens VARNING Produkten inneh ller en kemikalie som enligt staten Kalifornien r k nd f r att orsaka cancer OBSERVERA Den radioaktivitet som anges p bipacksedeln kan skilja sig n got fr n den aktivitet som anges p etiketterna p kartongen och p flaskan med sp r mnet Etiketterna p kartongen och p flaskan med sp r mnet anger den verkliga radioaktivitetsm ngden vid kalibreringsdatum medan bipacksedeln anger den teoretiska radioaktiviteten f r satsen 6 PROVTAGNING OCH PROVHANTERING P grund av dygnsvariationen f r reninfris ttning r plasmareninaktiviteten h gst p f rmiddagen och proverna b r regelm ssigt tas vid denna tidpunkt Anv nd aseptisk teknik och tag venprover i r r av vacutaineryp med EDTA tillsats Proverna kan tas transporteras och centrifugeras vid rumstemperatur Blodet kan st vid rumstemperatur i upp till sex timmar f re centrifugering utan signifikant ackumulering av angiotensin I Sedan blodet centrifuger
203. tors 7 30 14 EXPECTED VALUES Clinical evaluation of this PRA kit was performed by an independent investigator and results are summarized briefly in this section The data presented are intended as a guide for the user of this kit Because of variances in patient population users are advised to establish their own data for example PRA vs Sodium Excretion Nomogram 14 1 Effect of Salt Intake Plasma samples and 24 hour urine collections were obtained from normal adult subjects without apparent cardiovascular or renal diseases Each subject was placed on a diet of known sodium and potassium content After an equilibration period plasma samples for PRA and 24 hour urine samples were obtained The results of these studies are contained in TABLE The data were divided into four subgroups based on the range of sodium excretion observed ad libitum salt intake 75 150 mEq 24 hrs salt supple mented diet 150 mEq 24 hrs and two salt restricted diets It is feasible in routine clinical circumstances to obtain modest reductions in sodium excretion to 30 75 mEq 24 hrs The lower range of sodium excretion 0 30 mEq 24 hrs is unusual and requires severe restriction of sodium intake The predicted inverse relationship between PRA and urine sodium excretion was observed Since dietary salt content varies regionally it is suggested that PRA vs sodium excretion data be developed by the individual laboratory During the course of clinical eval
204. tory Commission statunitense dello stato con cui la Commissione ha stipulato un accordo per l esercizio dell autorit normativa 1 La conservazione del materiale radioattivo deve essere limitata ad un area specificatamente designata 2 L accesso ai materiali radioattivi deve essere limitato esclusivamente al personale autorizzato 3 Non usare la bocca per versare con la pipetta materiale radioattivo Non mangiare o bere nelle aree di lavoro designate per materiale radioattivo 5 Le zone dove possono verificarsi perdite devono essere pulite quindi lavate con detergente alcalino o soluzione per la decontaminazione radiologica Tutti gli oggetti in vetro usati devono essere accuratamente risciacquati con acqua prima di lavarli con altri oggetti in vetro del laboratorio Per i professionisti o gli istituti che utilizzano radioisotopi con una licenza specifica L acquisto l uso il trasferimento e lo smaltimento di materiali radioattivi sono soggetti alle norme e alle condizioni della licenza specifica AVVERTENZA questo prodotto contiene una sostanza chimica nota nello Stato della California perch provoca il cancro ATTENZIONE La radioattivit stampata sulle istruzioni allegate alla confezione pu essere leggermente diversa dalla radioattivit stampata sull etichetta della scatola e sull etichetta della fiala di tracciante L etichetta sulla scatola e sulla fiala di tracciante indicano la quantit effettiva di radioattivit alla d
205. tory practices should be used in the storage handling and disposal of this material For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a general license This radioactive material may be received acquired possessed and used only by physicians veterinarians in the practice of veterinary medicine clinical laboratories or hospitals and only for in vitro clinical or laboratory tests not involving internal or external administration of the material or the radiation therefrom to human beings or animals Its receipt acquisition possession use and transfer are subject to the regulations and the general license of the U S Nuclear Regulatory Commission or of the state with which the Commission has entered into an agreement for the exercise of regulatory authority 1 Storage of radioactive material should be limited to a specifically designated area 2 Accessto radioactive materials must be limited to authorized personnel only 3 Do not pipette radioactive material by mouth 4 Do not eat or drink within designated radioactive work areas 5 Areas where spills may occur should be wiped up then washed with an alkali detergent or radiological decontamination solution Any glassware used must be rinsed completely with water before washing with other laboratory glassware For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a specific license The receipt use transfer and disposal of radioactive materials are subject to th
206. tos em dilui es mais elevadas Dura o da Gera o Deve se empregar o tempo pr tico mais curto na determina o da actividade enzim tica de forma a fornecer a melhor estimativa da velocidade inicial da reac o e a minimizar o consumo de substrato O radio imuno ensaio da angiotensina suficientemente sens vel para permitir a determina o da ARP utilizando condi es optimizadas de gera o da angiotensina a um pH 6 0 O m todo do Kit da Actividade da Renina Plasm tica GammaCoat oferece uma dura o de gera o mais reduzida porque a amostra do plasma dilu da ao m nimo tamponada a um pH optimizado e ensaiada com um inibidor eficaz no pH seleccionado H sugest es de que poss vel quantificar amostras com n veis baixos atrav s da gera o de amostras durante dezoito horas e posterior ensaio Dura o do Radioimunoensaio O m todo do Kit da Actividade da Renina Plasm tica GammaCoat utiliza uma incuba o do radioimunoensaio de tr s horas Os resultados ficam dispon veis no mesmo dia til REAGENTES FORNECIDOS NO KIT Tubos revestidos a anti Angiotensina 1 saco 100 tubos 5 sacos 100 tubos de Coelho Tamp o de Ensaio da Angiotensina 1 frasco 10 mL 5 frascos 10 mL 11x Tamp o da Gera o de Maleato de 1 frasco 5 mL 3 frascos 5 mL Angiotensina PMSF da Angiotensina 1 frasco 1 mL 2 frascos 1 mL Controlo da actividade da renina 1 frasco 3 mL 2 frascos 3 mL Calibradores da Angiotensina A F
207. tos propios por ejemplo PRA frente a Nomograma de excreci n de sodio 14 1 Efecto de la ingesta de sal Las muestras de plasma y las recogidas de orina durante 24 horas proceden de sujetos adultos normales sin trastornos cardiovasculares ni renales aparentes Cada sujeto estuvo sometido a una dieta con niveles conocidos de potasio y sodio Tras un per odo de equilibrio se tomaron las muestras de plasma y orina de 24 horas para la determinaci n de PRA Los resultados de estos estudios se reflejan en la TABLA II Los datos se dividieron en cuatro subgrupos basados en el rango de excreci n de sodio observado ingesta de sal ad libitum 75 150 mEq 24 horas dieta con suplemento de sal 150 mEq 24 horas y dos dietas con sal restringida En circunstancias de rutina cl nica es factible obtener reducciones modestas de sal en la excreci n de sodio hasta 30 75mEq 24 horas El rango m s bajo de excreci n de sodio 0 30 mEq 24 horas es inusual y requiere la restricci n severa de la ingesta de sodio Se ha observado la relaci n inversa prevista entre PRA y la excreci n de sodio en orina Dado que el contenido en sal de la dieta var a seg n las regiones se sugiere que cada laboratorio desarrolle sus propios datos sobre PRA frente a excreci n de sodio En el transcurso de la evaluaci n cl nica de este equipo se obtuvieron muestras procedentes de adultos ambulatorios u hospitalizados sin trastornos cardiovasculares ni renales aparentes Tales suje
208. tos tuvieron ingestas de sodio ad libitum y no se realiz ning n esfuerzo para controlar sus actividades Todas las muestras se obtuvieron entre las 8 AM y las 10 AM Los datos de estas observaciones se reflejan en la TABLA III Se encuentran dentro del rango de PRA observado para sujetos con ingesta de sal normal para esta poblaci n Los valores m s altos en sujetos hospitalizados pueden deberse a las alteraciones en sal de la dieta impuestas por la alimentaci n del centro hospitalario o a otros factores no determinados TABLA II PRA con ingesta de sal restringida Na Excreci n Media 1 D E mEq 24 horas ng mL horas 0 30 16 34 7 52 30 75 5 91 1 82 75 150 2 12 0 68 gt 150 0 85 0 46 49 TABLA III PRA con ingesta de sodio ad libitum Media 1 D E ng mL horas Sujetos ambulatorios normales aleatorios 1 67 0 83 Suejos normales no ambulatorios 3 30 1 85 14 2 Efecto de la posici n La determinaci n precisa de los valores de PRA depende del conocimiento clinico sobre la postura del paciente ya que la posici n de ste influye sobre los valores de PRA efecto de asumir una posici n erecta tras una noche de suefio en posici n supina se refleja en la TABLA IV TABLA IV Efecto de la posici n Media 1 D E ng mL horas Supina 1 24 1 09 Erecta 2 63 1 32 14 3 Estimulaci n de furosemida La valoraci n clinica del sistema de renina angiotensina puede precisar la evaluaci n del cambio de PRA pos
209. ts The Renin Activity Control is utilized routinely during Angiotensin generation as well as radioimmunoassay providing a reliable quality control index for the entire assay Refer to Quality Control section for more information Upon reconstitution each vial contains 3 mL of processed human plasma with 0 1 sodium azide 4 7 Angiotensin Calibrators A F lyophilized reagent NOTE Blank and calibrators are used only in the radioimmunoassay portion and must not undergo angiotensin generation Reconstitute each vial with 2 0 mL of purified water and mix well before use Blank and calibrators should then be chilled in an ice bath before assaying They may be stored at 2 8 C up to two weeks and at 20 C for longer storage Upon reconstitution each vial contains 2 mL of angiotensin I BSA in phosphate buffered saline Calibrators are calibrated at 0 0 2 0 8 3 0 10 0 and 50 0 ng mL respectively The DiaSorin Plasma Renin Activity calibrators are calibrated using the current production master lot The kit calibrators demonstrate commutability with patient samples when used with reagents and operating procedure of this in vitro diagnostic test as recommended 5 WARNINGS AND PRECAUTIONS FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE Not for internal or external use in humans or animals REAGENTS CONTAINING HUMAN SOURCE MATERIAL Treat as potentially infectious Each serum plasma donor unit used in the preparation of this product has been tested by
210. uation of this kit samples were obtained from ambulatory or hospitalized adults without apparent cardiovascular or renal disease These subjects were on ad libitum salt intakes and no effort was made to control their activities All samples were obtained between 8 AM and 10 AM The data from these observations are contained in TABLE They fall within the range of PRA observed for subjects on normal salt intake for this population The higher values of hospitalized subjects may be ascribed to dietary salt alterations imposed by institutional food stress induced by hospital environment or other undetermined factors TABLE Il PRA with Restricted Salt Intake Na Excretion Mean 1 S D mEq 24 hr ng mL hr 0 30 16 34 7 52 30 75 5 91 1 82 75 150 2 12 0 68 gt 150 0 85 0 46 TABLE III PRA with ad libitum Salt Intake Mean 1 S D ng mL hr Non Ambulatory Normals 3 30 1 85 10 14 2 Positional Effect Accurate assessment of PRA values depends on the clinician s knowledge of the subject s posture since PRA values are affected by position The effect of assuming an erect position after a night of supine sleep is indicated in TABLE IV TABLE IV Positional Effect Mean 1 S D ng mL hr Supine 1 24 1 09 Erect 2 63 1 32 14 3 Furosemide Stimulation Clinical assessment of the renin angiotensin system may require evaluation of PRA change after stimulation The effect of furosemide on the renin angiotensin system
211. ucido al estar la muestra de plasma minimamente diluida tamponada a un pH optimizado y procesada con un inhibidor que es eficaz al pH seleccionado Se ha sugerido que las muestras de bajo nivel se pueden cuantificar generando las muestras durante 18 horas y procediendo despu s a su ensayo Duraci n del radioinmunoensayo El equipo GammaCoat de actividad de renina en plasma utiliza una incubaci n de radioinmunoensayo de tres horas Los resultados est n disponibles en el mismo d a de trabajo REACTIVOS SUMINISTRADOS CON EL EQUIPO Tubos recubiertos de suero de conejo 1 bolsa 100 tubos 5 bolsas 100 tubos antiangiotensina Tamp n de ensayo angiotensina 11x 1 vial 10 mL 5 viales 10 mL Tamp n de generaci n de maleato de 1 vial 5 mL 3 viales 5 mL angiotensina PMSF angiotensina 1 vial 1 mL 2 viales 1 mL Control de actividad de renina 1 vial 3 mL 2 viales 3 mL Calibradores de angiotensina A F 6 viales 2 mL 12 viales 2 mL Trazador de angiotensina 2 viales 5 mL 10 viales 5 mL N mero de pruebas 40 ALMACENAMIENTO Tras su recepci n el equipo debe almacenarse a 2 8 C Una vez abiertos almacene los reactivos como se recomienda a continuaci n Los reactivos no deben utilizarse despu s de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta La fecha de caducidad del equipo se indica en la etiqueta externa y se corresponde con la fecha de caducidad del trazador No deben mezclarse reactivos de diferentes lotes 4 1 Trazador de
212. uction a 37 C 15 16 Contr le de l activit de la r nine production a 4 C 17 18 Patient X production 37 C 19 20 Patient X production 4 C Pipeter dans les paires de tubes appropri es a 100 pl de blanc ou d etalon Angiotensine b 100 pl du contr le de l activit de la r nine de la s rie de production 37 et 4 dans la s rie de tubes 4 correspondante 100 pl d chantillon patient de la s rie de production 37 et 4 dans la s rie de tubes 4 correspondante Ajouter imm diatement 1 0 ml de r actif traceur tampon dans chaque tube ycompris les tubes Activit totale M langer les reactifs en agitant d licatement chaque tube au vortex Incuber tous les tubes temp rature ambiante 20 27 C pendant trois heures 19 9 6 Aspirer ou d canter tous les tubes l exception de l activit totale UNE LIMINATION DE LA SOLUTION ADH RANT AUX PAROIS RISQUE D ENGENDRER UNE MAUVAISE REPRODUCTIBILITE OU DES VALEURS ERRONEES Si l on utilise la technique par aspiration s assurer que l embout en plastique de l aspirateur est en contact avec le fond de l prouvette enduite et que tout le liquide est bien limin Si l on utilise la technique par d cantation laisser les tubes l envers pendant 3 5 minutes afin qu ils se vident bien Tapoter les tubes sur du papier absorbant pour liminer le liquide qui y adh re avant de replacer les tubes l
213. ue la d termination de l activit de la r nine plasmatique a t largement adopt e pour l valuation du syst me r nine angiotensine lors de maladies La mesure de l activit de la r nine plasmatique chez les patients hypertendus apporte une contribution importante dans le diagnostic diff rentiel de l aldost ronisme primaire et secondaire L estimation de l activit de la r nine est galement utile pour d terminer le pronostic et le traitement le plus appropri chez les personnes atteintes d hypertension essentielle Un dosage radio immunologique de l angiotensine et son application en tant qu indice de l activit de la r nine plasmatique ont t d crits La proc dure de d termination de l activit de la r nine plasmatique plasma au moyen de la trousse GammaCoat est adapt e de cette m thode 3 PRINCIPES DU DOSAGE La proc dure est bas e sur les principes de liaison comp titive du dosage radio immunologique Dans la trousse de dosage radio immunologique GammaCoat 121 Activit de la r nine plasmatique l anticorps est immobilis sur la partie inf rieure de la paroi du tube GammaCoat La d termination de l activit de la r nine plasmatique n cessite une incubation initiale du plasma pour produire de l angiotensine suivie de la quantification de l angiotensine par dosage radio immunologique La production d angiotensine dans le syst me de substrat humain d pend des param tres suivants 13 3 1 p
214. ulfonilo PMSF en etanol 4 6 Control de actividad de renina reactivo liofilizado Reconstituya antes de utilizar dosificando con pipeta 3 0 mL de agua purificada a 2 8 C Mantenga el vial en un ba o de hielo durante 10 minutos y mezcle suavemente en v rtex o agitador para mezclarlo a fondo Distribuya partes alicuotas de 1 0 mL en tubos de plastico o vidrio enfriados previamente Selle firmemente y almacene a 20 C Si el ensayo se va a realizar en este momento puede mantener una parte alicuota en bafio de hielo o refrigerada a 2 8 C El control reconstituido debe almacenarse congelado a 20 C y es estable durante dos meses como minimo Los ciclos de congelaci n descongelaci n se deben realizar en un bafio de hielo o en refrigerador a 2 8 C el control reconstituido no debe ser recongelado de nuevo tras el ciclo de congelaci n descongelaci n Se han observado variaciones de PRA tras el ensayo repetido de plasma congelado despu s de varios per odos de almacenamiento 2 Por lo tanto el uso de plasma congelado como control en las determinaciones de PRA puede producir resultados no fiables control de actividad de renina se utiliza durante la generaci n de angiotensina I asi como en radioinmunoensayo siempre que se proporcione un indice de control de calidad fiable durante todo el proceso Para obtener m s informaci n consulte la secci n Control de calidad Tras la reconstituci n cada vial contiene 3 mL de plasma hu
215. umed Departure from linearity may be the rule rather than the exception even under controlled buffering at any pH It may be that factors other than pH can influence the linearity of angiotensin generation Until such variables are truly controllable it seems necessary to anticipate non linearity characteristics 13 9 Failure to obtain appropriate control values may indicate imprecise manipulations improper handling or deterioration of reagents A calibrator curve based on the appropriate values for calibrators must be established for every run Interpretive It is critical that physiological variables such as the patient s posture and either sodium intake or 24 hour urinary sodium excretion be considered for accurate interpretation of assay results Age sex and race are also important factors for consideration Changes in PRA can be affected by a spectrum of drugs including diuretics adrenergic blocking agents vasodilators anti hypertensives large doses of progestins angiotensin Il antagonists oral contraceptives or estrogen therapy and mineralocorticoid anta gonists Use of diatrizoate as in renography can also affect PRA values Failure to take into account the pharmacological contribution of the patient s drug intake may lead to the misinterpretation of PRA values Various clinical conditions including normal pregnancy affect PRA These factors have been outlined concisely in review articles published by several investiga
216. ut conserver un aliquot dans un bain de glace ou au r frig rateur entre 2 et 8 C si le dosage a lieu imm diatement Le contr le reconstitu doit tre congel 20 C et est stable pendant au moins deux mois La d cong lation doit s effectuer dans un bain de glace ou au r frig rateur entre 2 et 8 C et le contr le reconstitu ne peut pas tre recongel apr s d cong lation 15 Des variations de l activit de la r nine plasmatique ont t observ es lors du dosage r p t de plasma congel apr s diff rentes dur es de stockage Par cons quent l utilisation de plasma congel comme contr le lors de la d termination de l activit de la r nine plasmatique risque de fournir des r sultats non fiables Le contr le d activit de la r nine est utilis en routine lors de la production d angiotensine ainsi que lors du dosage radio immunologique et fournit un indice de contr le de qualit fiable pour ensemble du dosage Se reporter la section Contr le de qualit pour plus d informations Apr s reconstitution chaque flacon contient 3 ml de s rum humain trait contenant 0 1 d azoture de sodium 4 7 Etalons angiotensine A F r actif lyophilis REMARQUE Les blancs et les talons sont utilis s uniquement au cours de l tape de dosage radio immunologique et ne doivent pas subir la production d angiotensine Reconstituer chaque flacon avec 2 0 ml d eau purifi e et bien m langer avant uti
217. vall under bildandet av angiotensin och speciellt vid h gre sp dningsgrader Tid for angiotensin I bildning Kortast m jliga inkubationstid b r anv ndas f r bestamningen av enzymaktiviteten Pa det viset far man den basta uppskattningen av reaktionens initialhastighet och minimerar substratf rbrukningen Radioimmunoassayen f r angiotensin r tillr ckligt k nslig f r att m jligg ra en PRA bestamning med optimerade betingelser f r angiotensin I bildning vid pH 6 0 F ljande faktorer g r att det med GammaCoat Plasma Renin Activity Kit r cker med en kortare tid f r angiotensin I bildning plasmaprovet ar minimalt utsp tt det ar buffrat till ett optimalt pH och det k rs med en h mmare som har god effekt vid det valda pH Det har f reslagits att man skulle kunna kvantifiera laga halter genom att inkubera proverna i 18 timmar och sedan k ra en assay Tid f r radioimmunoassayen GammaCoat Plasma Renin Activity Kit beh ver tre timmar f r radioimmunoassay inkubationen Resultaten blir klara samma arbetsdag REAGENS I F RPACKNINGEN Assayr r belagda med 1 p se 100 r r 5 p sar 100 r r kaninantikroppar mot angiotensin Buffert f r angiotensinassay 11x 1 flaska 10 mL 5 flaskor 10 mL Maleatbuffert f r 1 flaska 5 mL 3 flaskor 5 mL angiotensinbildningssteget Angiotensin PMSF 1 flaska 1 mL 2 flaskor 1 mL Reninaktivitetskontroll 1 flaska 3 mL 2 flaskor 3 mL Angiotensinkalibreringsl sni
218. vetta rivestita e che tutto il liquido venga rimosso Se si usa la tecnica di decantazione lasciar svuotare le provette in posizione capovolta per 3 5 minuti Battere le provette su carta assorbente per eliminare eventuali liquidi di aderenza prima di riportare le provette in posizione verticale Contare tutte le provette in un contatore a raggi gamma per 1 minuto con la finestra opportunamente regolata per iodio 125 Calcolare i risultati Fare riferimento alla sezione Risultati 58 10 CONTROLLO DI QUALIT Il kit dotato di un controllo dell attivit della renina Si veda l etichetta della fiala per il valore nominale Il controllo deve essere sottoposto a generazione prima dell analisi Ogni laboratorio dovrebbe utilizzare controlli a vari livelli per monitorare le performance controlli devono essere considerati come campioni non noti Conservare le tabelle per il controllo della qualit al fine di verificare le performance dei controlli Adottare metodi statistici adeguati per valutare i trend Limiti accettabili per le performance verranno stabiliti da ogni singolo laboratorio 2 2 11 RISULTATI 11 1 Registrare i conteggi per minuto CPM per ogni provetta 11 2 Tracciare il valore CPM per i calibratori dell angiotensina asse verticale in rapporto ai nanogrammi ng di angiotensina aggiunti in ogni provetta asse orizzontale su carta per grafici semi logaritmici 11 3 Tracciare la miglior curva di interpolazion
219. vit t R hrchen alle R hrchen aspirieren oder dekantieren WENN DIE L SUNG NICHT VOLLST NDIG ENTFERNT WIRD KANN DIES ZU EINER SCHLECHTEN REPLIKATION UND FALSCHEN WERTEN F HREN Bei der Aspirationstechnik muss sichergestellt werden dass die Kunststoffspitze des Saugers den Boden des beschichteten R hrchens ber hrt und dass die gesamte Fl ssigkeit entfernt wird Bei der Dekantationstechnik sollten die R hrchen 3 5 Minuten lang umgedreht werden damit die Fl ssigkeit abflieRen kann Die R hrchen auf Saugpapier ausschlagen um die Fl ssigkeit zu entfernen bevor die R hrchen aufrecht hingestellt werden Alle R hrchen in einem Gammaz hler 1 Minute messen Dabei muss das Fenster f r Jod 125 entsprechend angepasst werden Berechnen Sie die Ergebnisse Siehe Abschnitte Ergebnisse 32 10 QUALIT TSKONTROLLE Der Kit enth lt eine Renin Aktivit tskontrolle Der Nennwert ist auf dem Fl schchenetikett angegeben Die Kontrolle muss vor dem Test der Generation unterzogen werden Jedes Labor sollte Kontrollen bei mehreren Konzentrationen verwenden um die Leistung des Assays zu berwachen Die Kontrollen sollten als unbekannte Proben behandelt werden Um die Leistung der Kontrollen zu berwachen sollten Qualit tskontrolltabellen gef hrt werden Die Trends sollten mit Hilfe geeigneter statistischer Methoden ausgewertet werden Jedes Labor sollte akzeptable Leistungsgrenzen festlegen 23 11 ERGEBNISSE 11 1 Die gebundene Aktiv

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