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HBsAg Elisa - DIAsource Immunoassays

1. SAV PIPETTE WASH Simbolos utilisados Consultar las instrucciones de uso Limitaci n de temperatura l Fecha de caducidad E Codigo de lote g l N mero de cat logo Control Producto sanitario jara diagn stico in vitro Fabricante Contenido suficiente para lt n gt ensayos Soluci n de lavado concentrada Calibrador cero Calibrador Control Trazador Trazador Trazador concentrada Trazador concentrada Tubos Tampon de incubacion Acetonitrilo Suero Diluyente de Muestra l Tamp n de diluci n Antisuero Inmunoadsorbente iluyente de calibrador luci n de Reconstitucion Glicol Polietileno l Soluci n de extracci n Soluci n de eluci n Cartuchos Bond Elut Silica Soluci n de Pre tratamiento Soluci n de Neutralizaci n Tamp n de trazador 7 Placa de microvaloraci n HRP Conjugado HRP Conjugado HRP Conjugado concentrada HRP Conjugado concentrada Tampon de Conjugado Crom gena TMB concentrada Soluci n Crom gena TMB Tamp n de sustrato Soluci n de Parada Suero de Incubaci n Tamp n i AP Conjugado Sustrato PNPP i Concentrado de conjugado de biotina Agente de precipitaci n Concentrado avidina HRP Tamp n de ensayo Conjugado de biotina Anticuerpo espec fico Estreptavidina HRP Concentrado Uni n no espec fica Segundo anticuerpo Tamp n de Acidificaci n Distribuidor Bandejas de incubaci n Soluci n de PMSF Protege
2. BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PEG EXTR ELU GEL PRE NEUTR TRACEUR Ab Ag Ab Ag CONJ CHROM CHROM AGENT HRP BUF ACID DIST TRAY PMSF A STRIP SUB EXTR CART SAV PIPETTE WASH Symboles utilis s Consulter les instructions d utilisation Temp rature de conservation Utiliser jusque Num ro de lot R f rence de catalogue Contr le Dispositif m dical de diagnostic in vitro Fabricant Contenu suffisant pour lt n gt tests Solution de lavage concentr e Calibrateur z ro Calibrateur Contr le Traceur Traceur Traceur concentr Traceur concentr Tubes Tampon d incubation Ac tonitrile S rum Diluant du sp cimen Tampon de dilution Antis rum Immunoadsorbant Diluant de calibrateur Solution de reconstitution Glycol Poly thyl ne Solution d extraction Solution d elution Cartouches Bond Elut Silica Solution de pr traitement Solution de neutralisation Tampon traceur Microplaque de titration E HRP Conjugu HRP Conjug
3. 110627 1 6 REMARQUES La longueur d onde de r f rence du photom tre utiliser peut varier entre 620 nm et 690 nm Toutefois l utilisateur doit valider le photom tre par rapport HBsAg Elisa 2 Inactivation incompl te du virus de l h patite B apr s un traitement la chaleur 60 C pendant 10 heures J Infect Dis 138 242 244 7 BIBLIOGRAPHIE 1 2 3 Blumberg BS Alter HJ Visnich S A new antigen in leukemia sera JAMA 1965 191 101 106 Dane DS Cameron CH Briggs M Virus like particles in serum of patients with Australia antigen associated hepatitis Lancet 1970 1 695 698 Aach RD Grisham JW Paker CW Detection of Australia antigen by radioimmunoassay Proc Natl Acad Sci USA 1971 68 1056 1060 Kim CY Tikes JG Purification and biophysical characterization of hepatitis antigen J Clin Invest 1973 52 1176 1186 Wolters G Kuijpers LP Kacaki J Schuurs AH Enzyme linked immunosorbent assay for hepatitis B surface antigen J Infect Dis 1977 136 Suppl 311 377 Shih JW Cote PJ Jr Dapolito GM Gerin JL Production of monoclonal antibodies against hepatitis B surface antigen HBsAg by somatic cell hybrids J Virol Methods 1980 1 257 273 Hoofnagle JH Di Bisceglie AM Serologic diagnosis of acute and chronic viral hepatitis Semin Liver Dis 1991 11 73 83 Date de r vision 2011 06 27 N de catalogue KAPG4SGE3 N de PI 1701153 N de r vision 11
4. Peroxidasa tamp n con estabilizadores de prote nas 2 Conservantes 1 vial ax ure Gentamicina 0 003 y Timerosal 0 01 8 ml Tinci n rojo fenol Suero humano inactivado positivo para HBsAg Control Positivo pero no reactivo con anti VHC y anti VIH 1 2 GB HBsAg diluido en tamp n con estabilizadores de 1 vial prote nas contro n Conservantes 1 5 ml Gentamicina 0 003 y Timerosal 0 01 Suero no reactivo para VHB Control Negativo marcadores anti VHC y f 4 HB anti VHI 1 2 diluido en tamp n con 1 vial estabilizadores de prote nas Conservantes 2 ml Gentamicina 0 003 y Timerosal 0 01 TMB ni S e 0 6 mg ml de 3 3 5 5 tetrametilbenzidina TMB 1 vial 5 concentrado pe en una base org nica con DMSO 12 ml Tamp n del 6 S strato Tamp n de cido c trico con 0 03 H202 1 vial SUB BUF 12 ml Soluci n de Lavado Conc 20 S Tamp n concentrado de fosfato con Tween 20 1 vial D 58m Soluci n de Parada l vial 8 an IN acido sulf rico 12 al OTROS MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SUMINISTRADOS ITEMS Componentes 1 Micropipetas y puntas de 50u1 y 100 ul 2 Incubadora o ba o maria con control de temperatura a 37 C 3 Equipo para lavado de placas 4 Lector de microplacas ELISA Longitud de onda dual 450nm con longitud de onda de referencia de 620 690nm ancho de banda 10nm 5 Un analizador EIA de microplacas totalmente a
5. Validity of Test Runs 5 7 1 NC should be lt 0 1 otherwise the test is invalid 5 7 2 PC should be 20 6 otherwise the test is invalid 5 7 3 P N Value must be 0 5 otherwise the test is invalid NOTE Negative Control absorbance value must be less than or equal to 0 100 after subtracting the blank 5 8 Interpretation of Results 5 8 1 Specimens with absorbance values LESS than the Cutoff Value are NON REACTIVE and are considered NEGATIVE for HBsAg 5 8 2 Specimens with absorbance value GREATER than or EQUAL to the Cutoff Value are considered INITIALLY REACTIVE The original specimens must be retested in duplicate 5 8 3 If both absorbance values in the retest are less than the cutoff value the specimens are considered NEGATIVE for HBsAg If in the retest at least one of the two absorbance values is GREATER than or EQUAL to the Cutoff Value then the specimens are considered as repeated HBsAg positive The repeated positive specimen shall be confirmed with validated confirmatory reagents Catalogue Nr KAPG4SGE3 PI number 1701153 Revision Nr 110627 1 5 9 Troubleshooting If the result cannot be reproduced perform a preliminary troubleshooting by checking the possibilities listed below 5 9 1 Improper washing procedure 5 9 2 Contamination with positive specimen 5 9 3 Wrong volume of sample conjugate or substrates 5 9 4 Contamination of the well rim with conjugate 5 9 5 Improper specimen such as hemolyzed s
6. anticuerpos anti nucleares ANA o anticuerpos anti mitocondria AMA y muestras de mujeres embarazadas no interfirieron con el ensayo HBsAg ELISA 5 11 Caracter sticas del Ensayo 5 11 1 Especificidad Diagnostica Resultados de la Evaluaci n Europea del Desempe o del HBsAg ELISA de DIAsource La Reacividad del Donante Negativo para VHB y Muestras Cl nicas No Total de muestras DIAsource HBsAg Elisa N Neg IR RR Confirmado Falso Positivo NHB eme lalala 0 2 muestra cl nica VHB negativo Gest de donante 5501 5479 22 22 0 22 Total 5714 5690 24 24 0 24 IR inicialmente reactivo RR reactivo repetido Especificidad diagn stica 5690 5714 99 58 5 11 2 Sensibilidad Diagn stica 1 La sensibilidad diagn stica determinada en evaluaciones Europeas de desempe o produjeron los siguientes resultados Muestra No de muestras Reactivas Sensibilidad Suero HBsAg positivo 400 400 100 Sensibilidad diagn stica 400 400 100 2 La evaluaci n del Panel de Sensibilidad para HBsAg BBI USA produjo los siguientes resultados Panel No De miembros del Resultados Catalogo Nr KAPG4SGE3 PI Numero 1701153 Revisi n Nr 110627 1 panel Panel de Sensibilidad para HBsAg Pao Equivalente a o mejor que la BBI PHA807 iad cia uci competencia W La evaluaci n del Panel de Desempe o con una
7. suivants chantillon Nbre R actifs Sensibilit d chantillons S rums HBsAg positifs 400 400 100 Sensibilit diagnostique 400 400 100 2 L valuation de HBsAg Sensitivity Panel PHA807 BBI Etats Unis a donn les r sultats suivants Panel Nbre de membres du R sultats panel Panel de sensibilit HBsAg TR Equivalents ou meilleurs que PHA807 BBD FOOT les concurrents 3 L valuation de l HBsAg Mixed Titer Performance Panel PHA205 BBI tats Unis a donn les r sultats suivants Nbre de membres du panel Panel R sultats Panel de performance d un m lange deities HBsAg PHADOS PHAI0S 01 095 _ AUS ommenlels quedes BBI concurrents 4 L valuation du HBsAg Mixed Titer Performance Panel VHA601 BBI Etats Unis a donn les r sultats suivants Nbre de membres du Panel R sultats panel Panel de performance d un m lange de Rencontre les r sultats du titres HBsAg VHA601 BBI VE see BBI escompt s 5 L valuation du HBsAg Mixed Titer Performance Panel QHA711 BBI Etats Unis a donn les r sultats suivants Nbre de membres du panel Panel R sultats Panel de performance d un m lange de Rencontre les r sultats du titres HBsAg QHA711 BBD QHATI1 0106 BBI escompt s 6 R sultats du test avec PINTS HBsAg Subtype Panel Les r sultats de l valuation d montrent que l ensemble
8. 0 7541 0 0857 11 36 1 PS 1 32 2 2766 0 1571 6 90 1 PS 1 64 1 3159 0 1168 8 88 2 PC 1 32 0 9671 0 0358 3 70 2 PS 1 32 2 7325 0 1025 3 75 2 PS 1 64 1 5822 0 0888 5 61 3 PC 1 32 0 9669 0 0909 9 40 3 PS 1 32 2 6088 0 2367 9 07 3 PS 1 64 1 6502 0 1499 9 08 The calculated CV s ranged between 3 7 and 11 36 acceptable value for an immunoassay in microtiter plate format 2 Inter assay reproducibility The precision evaluation experiments were performed over 10 operating days is using five serum samples with borderline positive and clearly above cutoff value HBsA g levels Standard Coefficient of Sample TD Mean Deviation Variation F1 10 0 0609 0 0185 30 41 F2 10 0 0770 0 0189 24 56 F3 10 0 1000 0 0245 24 51 F4 10 0 1786 0 0462 25 87 F5 10 0 6107 0 1412 23 12 The calculated CV s ranges between 30 4 for an HBsAg negative sample and 23 1 for an HBsAg low positive sample acceptable values for the inter assay imprecision of an immunoassay in microtiter plate format 5 11 7 Antigen Excess High dose hook effect This was performed testing a serum sample with a very high HBsAg concentration of 125 mg L in serial dilution with the DIAsource HBsAg Elisa assay No high dose hook effect was observed 5 11 8 Traceability The DIAsource HBsAg Master Calibrator has been calibrated against the British Working Standard for HBsAg NIBSC Code 01 476 006 using the HBsAg Eli
9. 006 l aide de l essai HBsAg Elisa L efficacit relative rapport de l talon de travail HBsAg britannique par rapport HBsAg Master Calibrator de DIAsource est de 4 081 3 853 4 325 IC 95 La concentration du contr le positif de l essai HBsAg Elisa a t d termin e par rapport HBsAg Master Calibrator de DIAsource et a t tablie 42 Ul ml 20 5 12 Repr sentation graphique de la proc dure de test Ajouter 50 ul des contr les 3 X NC 2 X PC et ajouter 50 ul de chaque chantillon aux puits Garder un puits pour le blanc Ajouter 50 ul de solution Anti HBs peroxydase chaque puits de r action sauf au blanc Incuber la plaque 37 1 C pendant 80 minutes Laver la plaque Choisir l une des deux m thodes suivantes pour la r action enzymatique avec coloration Y Ny M langer des volumes Ajouter 50 ul de identiques de chromog ne chromog ne TMB TMB concentr et de tampon concentr aux puits puis du substrat Ajouter 100 ul ajouter 50 ul de tampon du de la solution obtenue aux substrat Bien m langer puits doucement Incuber temp rature ambiante pendant 30 minutes Y sa Ajouter 100 ul d acide sulfurique 1N chaque puits y D terminer l absorbance l aide d une longueur d onde de lecture de 450 nm avec une longueur d onde de r f rence entre 620 et 690 nm N de catalogue KAPG4SGE3 N de PI 1701153 N de r vision
10. 1 10 Avant d liminer les chantillons et les kits de r actifs usag s dans les ordures m nag res ils doivent tre trait s conform ment la proc dure locale de traitement des d chets biologiques potentiellement dangereux ou comme suit Les d chets liquides et solides doivent tre st rilis s par autoclave 121 C pendant au moins 30 minutes N de catalogue KAPG4SGE3 N de PI 1701153 N de r vision 110627 1 Les d chets solides peuvent galement tre incin r s Les d chets liquides non acides peuvent tre trait s l aide d hypochlorite de sodium dilu une concentration finale de 1 Les d chets liquides acides doivent tre neutralis s avant traitement l aide d hypochlorite de sodium tel que mentionn ci dessus et doivent tre st rilis s pendant 30 minutes pour obtenir une d sinfection effective 5 1 11 La solution d arr t est un irritant pour la peau les yeux les voies respiratoires et les muqueuses viter le contact de la solution d arr t avec la peau et les muqueuses En cas de contact laver imm diatement et abondamment l eau En cas d inhalation respirer imm diatement de l air frais et consulter un m decin en cas de douleur 5 1 12 Le chromog ne TMB concentr contient un solvant organique inflammable risques d effets graves irr versibles en cas d inhalation contact avec la peau ou ingestion Le chromog ne TMB concentr contient du sulfox
11. 10849911 Fax 32 10 84 99 90 BUT DU DOSAGE L HBsAg Elisa est un kit de diagnostic d essai immuno enzymatique pour la d tection qualitative in vitro de l antig ne de surface de l h patite B HBsAg dans le s rum ou le plasma humain h parin citrat ou sur EDTA RESUME ET EXPLICATION DU TEST L antigene de surface de l h patite B HBsAg est le premier marqueur qui appara t dans le sang suite une infection par le virus de l h patite B HBV quelques jours ou semaines avant la manifestation des sympt mes cliniques Il s agit d un polypeptide lipoprot ique qui constitue l enveloppe externe du virus HB La d tection de I HBsAg dans le s rum ou le plasma humain indique une infection par HBV en cours aigu ou chronique La recherche de marqueurs HBV suppl mentaires est n cessaire pour d finir le stade pr cis de la pathologie Les essais HBsAg sont utilis s non seulement pour diagnostiquer les infections par l HBV mais galement pour surveiller la progression de la pathologie et l efficacit du traitement antiviral L HBsAg Elisa est un test rapide servant la d tection qualitative de la pr sence de l HBsAg dans un chantillon de s rum ou de plasma h parin citrat ou sur EDTA Ce test utilise des anticorps monoclonaux et polyclonaux cochons d Inde afin de d tecter de fa on s lective des niveaux lev s d HBsAg dans le s rum ou le plasma Les chantillons qui ne r agiss
12. 7 2 a A A ll AA Somme 13 Moyenne 13 30 0 4jour Synth se de l valuation de l ensemble des panels de s roconversion test s Les r sultats ont montr que HBsAg Elisa est quasiment quivalent l essai de r f rence En moyenne le test HBsAg Elisa a seulement 0 4 jour de retard par rapport l essai de r f rence dans les 30 panels de s roconversion test s 5 11 3 Mutants 1 Panel mutant Un panel de mutants dans le PreCore de l h patite B de Teragenix tats Unis a t test L HBsAg Elisa peut d tecter les r sultats pour un rapport de dilution du panel de 1 2 ou 1 5 Ce panel contient 3 chantillons de Promoteur Core A1762 G1764 de type sauvage mutant dans le codon 28 de la r gion PreCore infection de type sauvage 4 chantillons de Promoteur Core A1762 G1764 de type sauvage mutant dans le codon28 de la r gion PreCore 2 chantillons de Promoteur Core T1762 A1754 MUTANT A1762 G1754 infection m lang e de type sauvage N de catalogue KAPG4SGE3 N de PI 1701153 N de r vision 110627 1 2 chantillons mutants Le taux de d tection de HBsAg Elisa est 17 21 soit un meilleur r sultat que le kit de r f rence 14 21 Mutation HBsAg Elisa A rde Mutation HBsAg Elisa r pde r f rence r f rence Int Int Int Int 113A114 positif positif C137W positif n gatif n gatif n gatif positif positif n gatif n gatif positif positi
13. HBsAg Elisa KIT 2 to 8 C Once open 1 month Es Original 18 months HBsAg Positive Control 2 to 8 C Once open 1 month iginal 1 th HB Negative Control 2 to 8 C Shen non Once open 1 month Original 24 months Anti HBs Plate 2 to 8 C Once open 1 month iginal 1 th Anti HBs HRPO Conjugate Solution 2 to 8 C GUETTA aus Once open 1 month Original 24 months Concentrated Washing Solution 20X Room temp Once open 1 month R temp Diluted 2d 20X Diluted Washing Solution SDa EP aes ae 2 to 8 C Diluted 1 week iginal 24 th Chromogenic TMB concentrate 2 to 8 C Ones sae Once open 1 month Substrate buffer 2 to 8 C Origina Fons Once open 1 month TMB substrate mixture Room temp Mixture 6 hours Original 24 months IN Sulfuric Acid Room temp Once open 1 month 5 Instructions for Use 5 1 Warnings 5 1 1 This reagent kit is for professional use only 5 1 2 This reagent kit is for in vitro diagnosis only 5 1 3 Bring all kit reagents and samples to room temperature 20 to 30 C and mix carefully before use 5 1 4 5 1 5 5 1 6 5 1 7 5 1 8 5 1 9 5 1 10 Do not use reagent beyond its expiration date Do not interchange reagents between different lots Do not put pipette in mouth Do not smoke or eat in areas where specimens or reagents are handled All kit components and specimens should be regarded as potential health hazards It should be used and discarded according to
14. Initial 24 mois Tampon du substrat 2 8 C i Apr s ouverture 1 mois M lange substrat TMB Temp M lange 6 heures ambiante Original 24 moi Acide sulfurique 1N Temp Tems pen ambiante Apres ouverture 1 mois 5 Mode d emploi 5 1 Avertissements 5 1 1 Ce kit de r actifs est uniquement a usage professionnel 5 1 2 Ce kit de r actifs est uniquement destin un diagnostic in vitro 5 1 3 Placer l ensemble des r actifs du kit et des chantillons 4 temp rature ambiante 20 30 C et m langer soigneusement avant utilisation 5 1 4 Ne pas utiliser les r actifs apr s la date d expiration 5 1 5 Ne pas changer les r actifs entre diff rents lots 5 1 6 Ne pas porter la pipette la bouche 5 1 7 Ne pas fumer ou manger dans les zones o des chantillons ou des r actifs sont manipul s 5 1 8 Tous les composants du kit et les chantillons doivent tre consid r s comme potentiellement dangereux pour la sant Ils doivent tre utilis s et limin s conform ment aux proc dures de s curit de votre laboratoire Ces proc dures de s curit incluent probablement le port de gants de protection et viter de produire des a rosols 5 1 9 Les chantillons potentiellement infectieux et les d versements ou fuites non acides doivent tre minutieusement nettoy s l aide d hypochlorite de sodium 5 ou trait s selon votre proc dure de contr le des risques biologiques potentiels 5
15. Variedad de T tulos para HBsAg PHA205 BBI USA produjo los siguientes resultados Panel No De miembros del Resultados panel Panel de Desempe o con una Variedad de T tulos para HBsAg PHA205 01 25 BBI PHA205 4 La evaluaci n del Panel de Desempe o con una Variedad de T tulos para HBsAg VHA601 BBI USA produjo los siguientes resultados Equivalente a o mejor que la competencia Panel No De miembros del Resultados panel Panel de Desempe o con una Variedad de Alcanz los resultados T tulos para HBsAg BBI VHA601 A esperados por BBI 5 La evaluaci n del Panel de Desempe o con una Variedad de T tulos para HBsAg QHA711 BBI USA produjo los siguientes resultados Panel No De miembros del Resultados panel Panel de Desempe o con una Variedad de Alcanz los resultados T tulos para HBsAg BBI QHA711 OAOT esperados por BBI Resultado del Panel INTS de Subtipos de HBsAg El resultado de la evaluaci n demuestra que todos los serotipos conocidos de HBsAg subtipos de HBsAg disponibles en el panel INTS de subtipos de HBsAg pueden ser detectados tanto por e Elisa HBsAg como por el ensayo de referencia hasta las diluciones 10 x 10 x mm 7 Tabla de resumen de la evaluaci n de todos los paneles de seroconversi n Resultados HBsAg Positivos Desde la Fecha de la Primera Toma de Mu
16. after heat treatment at 60 C for 10 hours J Infect Dis 138 242 244 7 BIBLIOGRAPHY 1 Blumberg BS Alter HJ Visnich S A new antigen in leukemia sera JAMA 1965 191 101 106 2 Dane DS Cameron CH Briggs M Virus like particles in serum of patients with Australia antigen associated hepatitis Lancet 1970 1 695 698 3 Aach RD Grisham JW Paker CW Detection of Australia antigen by radioimmunoassay Proc Natl Acad Sci USA 1971 68 1056 1060 4 Kim CY Tikes JG Purification and biophysical characterization of hepatitis antigen J Clin Invest 1973 52 1176 1186 5 Wolters G Kuijpers LP Kacaki J Schuurs AH Enzyme linked immunosorbent assay for hepatitis B surface antigen J Infect Dis 1977 136 Suppl 311 377 6 Shih JW Cote PJ Jr Dapolito GM Gerin JL Production of monoclonal antibodies against hepatitis B surface antigen HBsAg by somatic cell hybrids J Virol Methods 1980 1 257 273 7 Hoofnagle JH Di Bisceglie AM Serologic diagnosis of acute and chronic viral hepatitis Semin Liver Dis 1991 11 73 83 Revision date 2011 06 27 Catalogue Nr KAPG4SGE3 PI number 1701153 Revision Nr 110627 1 1 2 3 HBsAg Elisa C Pour la d tection qualitative in vitro de l antig ne de surface de l h patite B HBsAG dans le s rum ou le plasma humain KAPG45GE3 DIAGNOSTIC IN VITRO 0344 DIAsource ImmunoAssays SA Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgique T l 32
17. d onde de lecture 450 nm avec une longueur d onde de r f rence entre 620 et 690 nm Utiliser le puits du blanc pour d finir le z ro du spectrophotom tre REMARQUE La couleur du puits du blanc doit tre incolore jaune clair sinon les r sultats du test sont invalides Blanc du substrat la valeur de l absorbance doit tre inf rieure 0 100 5 6 Calculs des r sultats 5 6 1 Calcul du NC absorbance moyenne du contr le n gatif Exemple N d chantillon Absorbance 1 0 022 2 0 025 3 0 023 NC 0 022 0 025 0 023 3 0 023 Le NCx doit tre lt 0 1 sinon le test n est pas valide 5 6 2 Calcul du PC absorbance moyenne du contr le positif Exemple N d chantillon Absorbance 1 1 432 2 1 508 PC 1 432 1 508 2 1 470 Le PC doit tre 0 6 sinon le test n est pas valide 5 6 3 Calcul de la valeur P N P N PC NC Exemple NC 0 024 PC 1 470 P N 1 470 0 024 1 446 N de catalogue KAPG4SGE3 N de PI 1701153 N de r vision 110627 1 La valeur P N doit tre 20 5 sinon le test n est pas valide 5 6 4 Calcul de la valeur du seuil de positivit Valeur du seuil de positivit NC 0 025 Exemple Valeur du seuil de positivit 0 023 0 025 0 048 5 7 Validit des runs de tests 5 7 1 Le NC doit tre lt 0 1 sinon le test n est pas valide 5 7 2 Le PC doit tre 0 6 sinon le test n est pas valide 5 7 3 La valeur P
18. e par ajout d acide sulfurique La densit optique de la couleur d velopp e est lue 450 nm l aide d un photom tre adapt avec une longueur de r f rence comprise entre 620 et 690 nm Le principe du test est galement d crit ci dessous A chantillon contenant de PHBsAg 1 Puits d une plaque Anti HBs chantillon HBsAg Anti HBs peroxydase complexe sandwich anti HBs HBsAge Anti HBs peroxydase 2 Complexe sandwich solution du substrat TMB coloration bleu clair bleu 3 Ajouter de l acide sulfurique pour arr ter la coloration Lire la DO 450 nm longueur d onde de r f rence entre 620 et 690 nm N de catalogue KAPG4SGE3 N de PI 1701153 N de r vision 110627 1 B Echantillon sans HBsAg 1 Puits d une plaque Anti HBs chantillon sans HBsAg Anti HBs peroxydase Anti HBs sur le puits 2 Anti HBs sur le puits solution du substrat TMB couleur incolore bleu clair 3 Ajouter de l acide sulfurique pour arr ter la coloration Lire la DO 450 nm longueur d onde de r f rence entre 620 et 690 nm 4 DESCRIPTION DU MATERIEL FOURNI e Les articles 1 6 dans le tableau des r actifs suivant doivent tre r frig r s entre 2 et 8 C La solution de lavage D 20X et la solution d arr t de la r action peuvent tre stock es entre 2 et 30 C ART Qt par ICL Composants Description 9
19. from pregnant women did not interfere with the HBsAg Elisa assay 5 11 Performance Characteristics 5 11 1 Diagnostic Specificity Results from the European Performance Evaluation for DIAsource HBsAg Elisa Reactivity of HBV Negative Donor and Clinical Specimens Total No of Specimens DIAsource HBsAg Elisa N Neg IR RR Confirmed False Positive HB Y RENE ligis lori alia 0 2 clinical specimen HBV negative 5501 5479 22 22 0 22 donor specimen Total 571415690124 24 0 24 IR initial reactive RR repeat reactive Diagnostic specificity 5690 5714 99 58 5 11 2 Diagnostic Sensitivity 1 The diagnostic sensitivity determined in the European performance evaluations yielded the following results Sample No of sample Reactive Sensitivity HBsAg positive sera 400 400 100 Diagnostic sensitivity 400 400 100 2 The evaluation of the HBsAg Sensitivity Panel PHA807 BBI USA yielded the following results Panel No of panel members Results BBI HBsAg Sensitivity Panel CATES Equivalent to or better than PHA807 ES al the competitors Catalogue Nr KAPG4SGE3 PI number 1701153 Revision Nr 110627 1 W The evaluation of the HBsAg Mixed Titer Performance Panel PHA205 BBI USA yielded the following results Panel No of panel members Results BBI HBsAg Mixed Titer re Equivalent to or bet
20. is shown also in the following figure A Specimen containing HBsAg 1 Plate well Anti HBs specimen HBsAg Anti HBs peroxidase Anti HBs HBsAg Anti HBs peroxidase sandwich complex 2 Sandwich complex TMB substrate solution Light blue to blue color 3 Add sulfuric acid to stop the color development Read OD at 450nm reference wavelength 620 690 nm B Specimen without HBsAg Catalogue Nr KAPG4SGE3 PI number 1701153 Revision Nr 110627 1 1 Plate well Anti HBs specimen no HBsAg Anti HBs peroxidase Anti HBs on the well 2 Anti HBs on the well TMB substrate solution Colorless to light blue color 3 Add sulfuric acid to stop the color development Read OD at 450nm reference wavelength 620 690 nm 4 DESCRIPTION OF MATERIALS PROVIDED e Item 1 6 in the following reagent table should be refrigerated at 2 8 C Washing Solution D 20X and stop solution can be stored at 2 30 C cae Components Description gt res Anti HBs Plate Microtiter plate coated with mouse 1 monoclonal anti HBs 1 plate Polyclonal Anti HBs HRPO Anti HBs conjugate diluted in buffer with Peroxidase protein stabilizers 2 Solution Preservatives 1 bottle 0 003 Gentamycin and 8 ml a ue 0 01 Thimerosal Dye phenol red Inactivated human serum positive HBsAg Positive for HBsAg but non reactive for anti 3 Control HCV and anti H
21. l activit de la peroxydase 2 Les s rums partiellement coagul s et les chantillons avec une contamination bact rienne ne doivent pas tre utilis s 5 3 Conditions de stockage et stabilit des r actifs 5 3 1 Le kit doit tre conserv entre 2 et 8 C Ne pas congeler 5 3 2 Les barrettes de la plaque doivent tre utilis es dans le mois suivant l ouverture du sachet en aluminium d origine Les barrettes non utilis es doivent tre conserv es dans le sachet en aluminium qui doit tre solidement ferm 5 3 3 Replacer les r actifs entre 2 et 8 C imm diatement apr s utilisation 5 3 4 La solution de lavage concentr e 20X peut tre conserv e temp rature ambiante pour viter la cristallisation car les kits sont conserv s et exp di s entre 2 et 8 C Si des cristaux se sont form s avant utilisation r chauffer la solution dans un bain marie 37 C jusqu dissolution des cristaux 5 4 Proc dure de lavage de la plaque 5 4 1 Pr paration de la solution de lavage Diluer la solution de lavage concentr e 20X avec de l eau distill e ou d sionis e pour obtenir une dilution 1 20 Ne pas utiliser d eau du robinet 5 4 2 Lavage de la plaque a Pour un laveur de plaques avec fonction d aspiration du trop plein 6 cycles avec au moins 0 5 ml de tampon de lavage par puits par cycle ou b Pour un laveur de plaques sans fonction d aspiration du trop plein 8 cycles av
22. 0627 1 1 2 3 4 HBsAg Elisa C Para la detecci n cualitativa del ant geno de superficie de la hepatitis B S HBsA g en suero o plasma humano KAPG45GE3 PARA USO DE DIAGN STICO IN VITRO 0344 DIAsource ImmunoAssays SA Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium Tel 32 10 84 99 11 Fax 32 10 84 99 90 USO PREVISTO El kit de diagnostico HBsAg ELISA es un inmunoensayo enzim tico in vitro para la detecci n cualitativa del ant geno de superficie de la hepatitis B HBsAg en suero o plasma humano heparina citrato o EDTA RESUMEN Y EXPLICACI N DEL ENSAYO El ant geno de superficie de la hepatitis B HBsAg es el primer marcador que aparece en la sangre despu s de la infecci n con el virus de la hepatitis B VHB algunos d as o semanas antes que se manifiesten los s ntomas cl nicos Es un polip ptido lipoprote na que forma la envoltura externa del virus de HB La detecci n de HBsAg en suero humano o plasma indica que hay una infecci n de VHB aguda o cr nica en curso El ensayo HBsAg se usa no solo para diagnosticar infecciones con VHB sino tambi n para monitorizar el curso de la enfermedad y la eficiencia de la terapia anti viral HBsAg ELISA es un ensayo r pido para la detecci n cualitativa de la presencia de HBsAg en la muestra de suero o plasma heparina citrato EDTA El ensayo utiliza anticuerpos monoclonales y policlonales anti cobaya para detectar selectivamente niveles alto
23. 1 36 valeur acceptable pour un essai immuno enzymatique sous forme de plaque de microtitration 2 Reproductibilit inter essai N de catalogue KAPG4SGE3 N de PI 1701153 N de r vision 110627 1 Les essais pour l valuation de la pr cision ont t r alis s sur 10 jours l aide de cinq chantillons de s rum avec un taux d HBsAg peine positif et un taux nettement sup rieur au seuil de positivit ID 2 Coefficient de chantillon N Moyenne Ecart type variation F1 10 0 0609 0 0185 30 41 F2 10 0 0770 0 0189 24 56 F3 10 0 1000 0 0245 24 51 F4 10 0 1786 0 0462 25 87 F5 10 0 6107 0 1412 23 12 Le CV calcul variait entre 30 4 pour un chantillon HBsAg n gatif et 23 1 pour un chantillon HBsAg faiblement positif valeurs acceptables pour l impr cision inter essai d un essai immuno enzymatique sous forme de plaque de microtitration 5 11 7 Exc s d antig ne effet crochet Hook effect dose lev e Cette tude a t r alis e en testant avec l essai HBsAg Elisa de DIAsource des dilutions en s rie d un chantillon de s rum ayant une concentration tr s lev e en HBsAg de 125 mg l Aucun effet crochet dose lev e n a t observ 5 11 8 Tra abilit L HBsAg Master Calibrator de DIAsource a t calibr par rapport a l talon de travail HBsAg britannique British Working Standard for HBsAg NIBSC Code 01 476
24. 6 t ests ES Plaque anti HBs NAT wong 1 Plaque de microtitration tapiss e ipay d anti HBs monoclonaux de souris Conjugu polyclonal anti HBs Solution de HRPO dilu dans un tampon avec peroxydase anti stabilisateurs des prot ines 2 HBs Conservateurs 1 flacon 0 003 de Gentamycine et 8 ml a m 0 01 de Thim rosal Colorant rouge de ph nol S rum humain inactiv positif pour Contr le HBsAg l HbsAg mais non r actif pour positif l anti HCV et l anti HIV1 2 dilu dans un tampon avec stabilisateurs 1 flacon 3 conor n des prot ines Conservateurs 0 003 de 1 5 ml Gentamycine et 0 01 de Thim ro sal S rum non r actif aux marqueurs Contr le HB HBV anti HCV et anti HIV 1 2 n gatif dilu dans un tampon avec 1 flacon 4 coNTRoL L stabilisateurs des prot ines E Conservateurs 0 003 de 20ml Gentamycine et 0 01 de Thim ro L sal Chromog ne TMB 0 6 mg ml de 5 concentr 3 3 5 5 t tram thylbenzidine 1 flacon ROM TMB TMB dans une base organique 12 ml eee Bee avec du DMSO Tampon du 6 substrat Tampon citrate contenant 0 03 1 flacon d H202 12 ml SUB BUF Solution de lavage 7 conc 20X Tampon phosphate concentr avec 1 flacon du Tween 20 58 ml Solution d arr t 1 flacon 8 Acide sulfurique 1N 12 ml e AUTRE MAT RIEL REQUIS MAIS NON FOURNI ARTICLES Composants 1 Des micropipettes de 50 ul 100 ul et des embouts sont n cessaires 2 Bain marie ou incu
25. 9 24 56 F3 10 0 1000 0 0245 24 51 F4 10 0 1786 0 0462 25 87 FS 10 0 6107 0 1412 23 12 Los CV calculados var an entre 30 4 para una muestra HBsAg negativa y 23 1 para una muestra HBsAg positiva d bil valores aceptables para la imprecisi n entre ensayos de un inmunoensayo que utiliza microplacas 5 11 7 Exceso de Anticuerpo Dosis alta Efecto de Gancho Esto se llev a cabo con una muestra de suero con una concentraci n muy alta de HBsAg de 125 mg L en diluciones seriadas con el ensayo HBsAg ELISA de DIAsource No se observ el efecto gancho por dosis alta 5 11 8 Seguimiento El Calibrador Maestro HBsAg de DIAsource ha sido calibrado con el British Working Standard para HBsAg C digo NIBSC 01 476 006 usando el ensayo HBsAg ELISA La potencia relativa raz n del British Working Standard para HBsAg versus el Calibrador Maestro HBsAg de DIAsource es 4 081 3 853 4 325 Intervalo de Confianza 95 La concentraci n del control positivo del ensayo HBsAg ELISA se ha determinado contra el Calibrador Maestro HBsAg de DIAsource y fue establecida en 42 IU ml 20 Catalogo Nr KAPG4SGE3 PI Numero 1701153 Revisi n Nr 110627 1 5 12 Diagrama de Flujo del Procedimiento del Ensayo Agregue 50 ul de controles 3 x CN 2 x CP y Agregue 50 ul de cada muestra en los pocillos Reserve 1 pocillo para blanco y Agregue 50 ul de Soluci n de anti HBs Peroxidasa en cada pocillo excepto el blanco
26. B se detiene agregando cido sulf rico La densidad ptica del color que se ha generado se mide con un fot metro adecuado a 450 nm con una longitud de onda de referencia seleccionada de 620 a 690 nm El principio del ensayo descrito anteriormente se ilustra tambi n enel siguiente diagrama A Muestra que contiene HBsAg 1 Placa Anti HBs muestra HBsAg Anti HBs peroxidasa HBsAg Anti HBs Anti HBs peroxidasa complejo de s ndwich 2 Complejo de s ndwich soluci n de sustrato TMB color de azul a celeste 3 Agregue cido sulf rico para detener el desarrollo del color Lea la DO a 450nm 620 690 nm B Muestra sin HBsAg 1 Placa Anti HBs muestra sin HBsAg Anti HBs peroxidasa Anti HBs en los pocillos 2 Anti HBs en los pocillos soluci n de sustrato TMB Incoloro a azul claro 3 Agregue cido sulf rico para detener el desarrollo del color gt Lea la DO a 450nm 620 690 nm DESCRIPCI N DE LOS MATERIALES PROPORCIONADOS Catalogo Nr KAPG4SGE3 PI Numero 1701153 Revisi n Nr 110627 1 eltems 1 6 en la siguiente tabla de reactivos deben mantenerse refrigerados entre 2 y 8 C La Soluci n de Lavado 20X y la soluci n de parada pueden almacenarse entre 2 y 30 C ITEMS Componentes Descripci n Cant para 96 ensayos Anti HBs Placa Microplaca recubierta con anti HBs monoclonal 1 de rat n 1 placa Soluci n Anti Conjugado Anti HBs HRPO policlonal diluido en HBs
27. DA HBsAg Elisa KAPG4SGE3 0344 LOT 110627 3 HBsAg Elisa C For in vitro qualitative detection of hepatitis B surface antigen HBsAG in en human serum or plasma KAPG45GE3 IN VITRO DIAGNOSTIC USE 0344 DIAsource ImmunoAssays SA Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium Tel 32 10 8499 11 Fax 32 10 84 99 90 1 INTENDED USE HBsAg Elisa is an enzyme immunoassay diagnostic kit for in vitro qualitative detection of hepatitis B surface antigen HBsAg in human serum or plasma heparin citrate or EDTA 2 SUMMARY AND TEST EXPLANATION The hepatitis B surface antigen HBsAg is the first marker that appears in the blood following infection with hepatitis B virus HBV some days or weeks before clinical symptoms manifest It is a lipoprotein polypeptide which constitutes the external envelope of the HB virus The detection of HBsAg in human serum or plasma indicates an ongoing HBV infection either acute or chronic Testing of additional HBV markers is needed to define the specific disease state HBsAg assays are used not only to diagnose HBV infections but also to monitor the course of the disease and the efficacy of antiviral therapy HBsAg Elisa is a fast test for the qualitative detection of the presence of HBsAg in serum or plasma heparin citrate or EDTA specimen The test utilizes monoclonal and polyclonal anti guinea pig antibodies to selectively detect elevated levels of HBsAg in serum or plas
28. IV 1 2 diluted in 1 bottle buffer with protein stabilizers CoNTroL n Preservatives 0 003 Gentamycin 1 5 ml and 0 01 Thimerosal Serum non reactive for HBV HB Negative markers anti HCV and 4 Control anti HIV 1 2 diluted in buffer with 1 bottle protein stabilizers Preservatives 0 003 Gentamycin 2 0 ml and 0 01 Thimerosal Chromogenic 0 6 mg ml of 5 TMB concentrate 3 3 5 5 tetramethylbenzidine 1 bottle curom tus conc TMB in an organic base with 12 ml cross ram conc QUE Substrate buffer Citrate Acid Buffer containing 1 bottle 6 0 03 H202 12 ml Conc Washing 7 Soon AX Concentrated 1 bottle Phosphate buffer with Tween 20 58 ml Stop Solution 8 IN sulfuric acid Boone a OTHER REQUIRED MATERIALS BUT NOT PROVIDED ITEMS Components 1 50ul 100ul micropipettes and tips are needed 2 Water bath or incubator with temperature control at 37 C 3 Plate washing equipment 4 ELISA Microwell Reader 4 Dual wavelength 450nm with 620 690nm as reference wavelength bandwidth 10nm 5 Fully automatic EIA micro plate analyzer is optional User should validate the automatic EIA micro plate analyzer in combination with the kit 4 1 Storage condition and Stability of the kit and components Catalogue Nr KAPG4SGE3 PI number 1701153 Revision Nr 110627 1 Kit components Storage temp State Stability Original 18 months
29. Incube a 37 1 C por 80 minutos y Lave la placa Escoja uno de los dos m todos siguientes para general el color Y y Mezcle vol menes Agregue 50 ul de TMB iguales de TMB cromog nico cromog nico concentrado a los concentrado y tamp n pocillos y y luego de sustrato Agregue agregue 50 ul de 100 ul de la soluci n Tamp n de Sustrato Mezcle bien Incube a temperatura ambiente por 30 minutos Agregue 1N cido sulf rico a cada pocillo l Determine la absorbancia usando 450 nm como longitud de onda para la lectura con un longitud de onda de referencia de 620 690nm 6 NOTAS 1 La longitud de onda de referencia del espectrofot metro puede ser de 620nm a 690nm Sin embargo el usuario debe validar el foto metro en conjunto con este kit antes de su uso 2 Inactivaci n incompleta del virus de la hepatitis B despu s de tratamiento con calor a 60 C por 10 horas J Infect Dis 138 242 244 7 BIBLIOGRAFIA 1 2 3 Blumberg BS Alter HJ Visnich S A new antigen in leukemia sera JAMA 1965 191 101 106 Dane DS Cameron CH Briggs M Virus like particles in serum of patients with Australia antigen associated hepatitis Lancet 1970 1 695 698 Aach RD Grisham JW Paker CW Detection of Australia antigen by radioimmunoassay Proc Natl Acad Sci USA 1971 68 1056 1060 Kim CY Tikes JG Purification and biophysical characterization of hepatitis antigen J Cli
30. N doit tre 0 5 sinon le test n est pas valide REMARQUE Contr le n gatif la valeur de l absorbance doit tre inf rieure ou gale 0 100 apr s avoir soustrait le blanc 5 8 Interpr tation des r sultats 5 8 1 Les chantillons pr sentant des valeurs d absorbance INF RIEURES la valeur du seuil de positivit sont NON REACTIES et sont consid r s comme NEGATIES pour l HBsAg 5 8 2 Les chantillons pr sentant des valeurs de l absorbance SUP RIEURES ou GALES la valeur du seuil de positivit sont consid r s comme INITIALEMENT REACTIES Les chantillons d origine doivent tre test s nouveau en doublon 5 8 3 Si les deux valeurs d absorbance du nouveau test sont inf rieures la valeur du seuil de positivit les chantillons sont consid r s comme N GATIFS pour HBsAg Si dans le nouveau test au moins l une des deux valeurs d absorbance est SUP RIEURE ou GALE la valeur du seuil de positivit les chantillons sont consid r s comme positifs pour l HBsAg r it r s Les chantillons positifs r it r s seront confirm s l aide de r actifs de confirmation valid s 5 9 R solution des probl mes Si le r sultat ne peut tre reproduit r aliser une proc dure de contr le pr liminaire en v rifiant les possibilit s ci dessous 5 9 1 Proc dure de lavage inappropri e 5 9 2 Contamination avec un chantillon positif 5 9 3 Volume incorrect d chantill
31. ative _ P120L positive positive C139Y positive positive _ R1221 negative negative KI4IE positive positive _ R122T positive positive _ P142L G145R negative negative ERA positive positive P142L positive positive T123N positive positive D144G positive negative _ 122RA 123 negative negative G145K positive negative Detection Rate 5 11 4 25 same day fresh positive samples HBsAg Elisa detected 25 same day fresh positive samples The criteria of the chapter 3 1 9 of the 2009 886 EC was fulfilled 5 11 5 Analytical Sensitivity Detection Rate positive positive 9 10 Standard Material Calculated Sensitivity WHO 2 international Standard 0 03 IU mL PEI standard Subtype ad 0 08 PET U mL PEI standard Subtype ay 0 09 PET U mL WHO Second International Standards for HBsAg subtype adw2 genotype A NIBSC code 00 588 5 11 6 Precision 1 Intra assay reproducibility positive 6 11 Catalogue Nr KAPG4SGE3 PI number 1701153 Revision Nr 110627 1 Intra assay precision was determined using one positive control sample and two patient serum samples of different HBsAg concentration slightly above the cutoff level and at medium level which were analyzed in replicates of 20 in a single run over 3 days Standard Coefficient of R n Sample TD Mean Deviation Variation 1 PC 1 32
32. bateur avec contr le de la temp rature 37 C 3 Mat riel de lavage de la plaque N de catalogue KAPG4SGE3 N de PI 1701153 N de r vision 110627 1 Lecteur de microplaques ELISA 4 Longueur d onde double 450 nm avec longueur d onde de r f rence entre 620 et 690 nm bande passante de 10 nm Un analyseur de microplaque pour EIA totalement automatique est facultatif 5 L utilisateur doit valider l analyseur automatique de microplaque pour EIA par rapport au kit 4 1 Conditions de stockage et stabilit du kit et des composants Kit composants Tempi de tat Stabilit stockage oinal 1 E Kit HBsAg Elisa 42248 C ne PON Apr s ouverture 1 mois oe E Original 18 mois Contr le HBsAg positif 2 8 C z Apres ouverture 1 mois x paie R Original 18 mois Contr le HB n gatif 2 8 C x Apr s ouverture 1 mois Original 24 moi Plaque anti HBs 2 8 C A ae Apres ouverture 1 mois 2 ae Original 18 mois Solution du conjugu Anti HBs HRPO 2 8 C Apr s ouverture 1 mois Original 24 moi Solution de lavage concentr e 20X Temp 2 scl ee ambiante Apres ouverture 1 mois Temp 2 i Dil 2 Solution de lavage dilu e 20X ambiante ue eee 2 8 C Dilu e 1 semaine Original 24 moi Chromog ne TMB concentr 2 8 C x nema ee Apr s ouverture 1 mois K
33. de otro modo el ensayo es inv lido 5 7 3 Valor de P N debe ser 20 5de otro modo el ensayo es inv lido NOTA Control Negativo la absorbancia debe ser menor o igual a 0 100 despu s de restar el blanco 5 8 Interpretaci n de los Resultados 5 8 1 Las muestras con absorbancias MENORES que el Valor de Corte son NO REACTIVAS y se consideran NEGATIVAS para HBsAg 5 8 2 Las muestras con absorbancias MAYORES o IGUALES al Valor del Corte se consideran INICIALMENTE REACTIVAS Las muestras originales deben ser repetidas en duplicado 5 8 3 Si ambos valores de absorbancia al repetir son menores que el valor de corte las muestras se consideran NEGATIVAS para HBsAg Catalogo Nr KAPG4SGE3 PI Numero 1701153 Revisi n Nr 110627 1 Si al repetir al menos uno de los dos valores de absorbancia es MAYOR o IGUAL al Valor del Corte entonces la muestra se considera como un HBsAg positivo repetido La muestra positiva repetida debe ser confirmada con reactivos de confirmaci n validados 5 9 Soluci n de Problemas Si el resultando no puede ser reproducido una soluci n preliminar podr a obtenerse revisando las posibilidades mencionadas a continuaci n 5 9 1 Procedimiento de lavado inadecuado 5 9 2 Muestra contaminada con positivo 5 9 3 Volumen de muestra conjugado o sustrato equivocado 5 9 4 Contaminaci n del borde del pocillo con conjugado 5 9 5 Muestra inadecuada p ej suero o plasma hemolizados muestra con precipitado muestra no sufici
34. des s rotypes HBsAg connus sous types HBsAg disponibles dans le panel des sous types HBsAg INTS peuvent tre d tect s aussi bien par HBsAg Elisa que par Pessai de r f rence des dilutions pouvant aller jusqu 10 10 x 7 Tableau de synth se de l valuation de l ensemble des panels de s roconversion test s N de catalogue KAPG4SGE3 N de PI 1701153 N de r vision 110627 1 R sultat HBsAg positif compter de la date du premier pr l vement sanguin a ms Essai HBsAg de Diff rence de jours MOM ID du panel r f rence a oe sa de pr l vement Pe de E A en jours A B membres du panel PHM907 ay 50 50 0 0 PHM916 ay 62 65 3 1 PHM920 ad 26 26 0 0 PHM921 ad 0 0 0 0 PHM930 ad 3 3 0 0 PHM933 ad 7 9 2 1 PHM934 ad 0 0 0 0 PHM935A ad 9 21 12 3 PHM 33B 231 217 14 1 ad NabiSB0411 6 6 0 0 PHM903 ad 6 10 4 1 PHM904 ad 7 18 11 1 PHM906 ad 137 0 137 1 PHM909 ad 9 9 0 0 PHM910 ad 35 18 17 1 PHM912 ad 42 0 42 7 PHM914 ad 0 146 146 1 PHM915 Gad 12 28 16 5 eM nal 36 gt 43 gt 7 gt 2 ind PHM918 ad 7 7 0 0 PHM923 ay 15 21 6 1 PHM924 ad 29 35 6 1 PHM925 ind 8 14 6 1 PHM926 Gnd 13 15 2 1 PHM927 ind 4 7 3 1 PHM928 ad 9 9 0 0 PHM929 ad 14 18 2 1 PHM931 ind 19 21 2 1 PHM932 ad 61 61 0 0 PHM935A ad 21 28
35. e sorte qu elle soit scell e herm tiquement 5 5 6 Incuber la plaque de r action dans un bain marie ou un incubateur 37 1 C pendant 80 minutes 5 5 7 la fin de la p riode d incubation retirer et jeter la bande adh sive et laver la plaque selon le paragraphe 5 4 Proc dure de lavage de la plaque 5 5 8 S lectionner l une des deux m thodes suivantes pour la coloration A M langer imm diatement avant utilisation des volumes identiques de chromog ne TMB concentr et de tampon du substrat dans un r cipient propre Ajouter 100 ul de la solution du m lange chaque puits y compris au blanc B Ajouter tout d abord 50 pl de chromog ne TMB concentr puis ajouter 50 ul de tampon du substrat chaque puits y compris au blanc Bien m langer avec pr caution REMARQUE Le chromog ne TMB concentr doit tre incolore bleu clair sinon il faut le jeter Le m lange de chromog ne TMB concentr et de tampon du substrat doit tre utilis dans les 30 minutes apr s le m lange Le m lange doit tre tenu l cart de toute lumi re intense 5 5 9 Recouvrir la plaque d un couvercle noir et incuber temp rature ambiante pendant 30 minutes 5 5 10 Stopper la r action en ajoutant 100 ul de solution d arr t chaque puits y compris au blanc 5 5 11 D terminer l absorbance des contr les et des chantillons dans les 30 minutes avec un spectrophotom tre de pr cision 450 620 690 nm longueur
36. ec au moins 0 35 ml de tampon de lavage par puits par cycle 5 4 3 S cher en retournant la plaque et en la tapotant fermement sur du papier absorbant Une trop grande quantit de tampon de lavage r siduel entra nera des r sultats erron s AVERTISSEMENT un lavage insuffisant entra nera des r sultats erron s N de catalogue KAPG4SGE3 N de PI 1701153 N de r vision 110627 1 5 5 Proc dure du test 5 5 1 Placer tous les r actifs et chantillons 4 temp rature ambiante 20 30 C avant l essai R gler le bain marie ou l incubateur 37 1 C 5 5 2 Garder un puits pour le blanc Ajouter 50 ul de chaque contr le ou d chantillon dans les puits appropri s de la plaque de microtitration 3 contr les n gatifs et 2 contr les positifs REMARQUE a Utiliser un embout de pipette propre pour chaque pr l vement afin d viter la contamination crois e b Chaque plaque doit avoir respectivement des contr les n gatifs des contr les positifs et un puits pour le blanc c Ne pas utiliser la valeur du seuil de positivit tablie pour d autres plaques d HBsAg Elisa 5 5 3 Ajouter 50 ul de solution de peroxydase anti HBs chaque puits sauf au blanc REMARQUE Ne pas toucher la paroi des puits de la plaque pour viter la contamination 5 5 4 Tapoter doucement la plaque 5 5 5 Retirer le support de protection de la bande adh sive et la placer en appuyant sur la plaque de r action d
37. ent pas l HBsAg Elisa sont consid r s comme n gatifs pour HBsAg Les chantillons qui r agissent doivent tre test s nouveau en doublon Si la r action positive se r p te la r activit pour l HBsAg de l chantillon doit tre confirm e par des r actifs de confirmation valid s Seuls les chantillons positifs confirm s sont consid r contenir de l HBsAg DESCRIPTION DU TEST L HBsAg Elisa est un essai immuno enzymatique en phase solide ELISA enzyme linked immuno sorbent assay bas sur le principe du sandwich La phase solide de la plaque de microtitration est compos e de puits en polystyr ne tapiss s d anticorps monoclonaux de souris sp cifiques de HBsAg par ailleurs un anticorps polyclonal de cochon d Inde purifi par chromatographie d affinit est utilis pour pr parer le conjugu anti HBs peroxydase de raifort dans la phase liquide Lorsqu un chantillon de s rum ou de plasma contenant des HBsAg est ajout avec l anticorps anti HBs conjugu contenant de la peroxydase aux puits tapiss s d anticorps anti HBs et incub un complexe anticorps HBsAg anticorps peroxydase se forme sur les puits Apr s lavage de la plaque de microtitration pour liminer le mat riel non li une solution du substrat TMB est ajout e aux puits et la plaque est incub e Une couleur appara t proportionnelle la quantit d HBsAg li s aux anti HBs La r action peroxydase TMB est stopp
38. entemente mezclada antes del uso 5 9 6 Tiempo o temperatura de incubaci n equivocados 5 9 7 Cabeza y agujas de la lavadora para dispensar aspirar total o parcialmente obstruidas 5 9 8 Aspiraci n insuficiente 5 10 Limitaciones e Interferencias 5 10 1 Este kit de reactivos es para ser usado con muestras de suero o plasma humano individual 5 10 2 El kit no ha sido validado par uso con muestras de cad ver 5 10 3 Un resultado negativo para HBsAg sin otra evidencia no debe ser usado para excluir una infecci n por VHB 5 10 4 Sustancias que podr an interferir Los siguientes resultados se obtuvieron en los respectivos experimentos 1 Nose ha observado interferencia con diferentes anticoagulantes tales como heparina con litio K EDTA citrato de sodio 2 Muestras que han sido tratadas con calor 60 C 10 horas resultaron con t tulos de HBsAg disminuidos 3 Nose detect reacci n cruzada al usar muestras de pacientes con a otras infecciones VHA VEB CMV VHS VZV Borreliosis de Lyme VHC VHI b con otras enfermedades tales como insuficiencia renal cr nica hemodi lisis hepatitis autoinmune cirrosis hep tica y c con algunos anticuerpos tales como HAMA GAD IA2 APS 4 Las muestras que contienen substancias que podr an interferir P ej Triglic ridos lipemia hemoglobina hemolisis bilirrubina ictericia componentes de la inmunoglobulina monoclonal niveles altos de anticuerpos autoinmunes factor reumatoide FR
39. erum or plasma specimen containing sediments and specimen not thoroughly mixed before use 5 9 6 Wrong incubation time or temperature 5 9 7 Obstructed or partial obstructed washer aspirate dispense head and needles 5 9 8 Insufficient aspiration 5 10 Limitations and Interferences 5 10 1 This reagent kit is to be used for un pooled human serum or plasma only 5 10 2 The reagent kit has not been validated for use with cadaveric samples 5 10 3 A negative HBsAg result without other evidence should not be used to exclude an HBV infection 5 10 4 Interfering Substances The following results were obtained in respective experiments 1 No interferences with different anticoagulants such as lithium heparin EDTA citrate have been observed 2 Heat treated specimens 60 C 10 hours exhibited diminished HBsAg titer 3 No cross reactivity was detected using specimens deriving from patients with a other infections by HAV EBV CMV HSV VZV Lyme Borreliosis HCV HIV b other disease states such as chronic renal failure hemodialysis autoimmune hepatitis liver cirrhosis and c presence of certain antibodies like HAMA GAD IA2 APS 4 Samples containing potential interfering substances e g triglycerides lipemia hemoglobin hemolysis bilirubin icterus monoclonal immunoglobulin components elevated levels of autoimmune antibodies rheumatoid factor RF antinuclear antibodies ANA or antimitochondrial antibodies ANA and samples
40. estra Ensayo HBsAg Elisa HBsAg Diferencia en d as a ID Panel de referencia B en d as de toma de muestra de muestra No A en d as A B De miembro del panel PHM907 ay 50 50 0 0 PHM916 ay 62 65 3 1 PHM920 ad 26 26 0 0 PHM92 1 ad 0 0 0 0 PHM930 ad 3 3 0 0 PHM933 ad 7 9 2 1 PHM934 ad 0 0 0 0 PHM935A ad 9 21 12 3 PHM935B ad 231 217 14 1 NabiSB0411 6 6 0 0 PHM903 ad 6 10 4 1 PHM904 ad 7 18 11 1 PHM906 ad 137 0 137 1 PHM909 ad 9 9 0 0 PHM910 ad 35 18 17 1 PHM912 ad 42 0 42 7 PHM914 ad 0 146 146 1 Catalogo Nr KAPG4SGE3 PI Numero 1701153 Revisi n Nr 110627 1 PHM915 ind 12 28 16 5 PHM917 ind 36 gt 43 gt 1 gt 2 PHM918 ad 7 7 0 0 PHM923 ay 15 21 6 1 PHM924 ad 29 35 6 1 PHM925 ind 8 14 6 1 PHM926 ind 13 15 2 1 PHM927 ind 4 7 3 1 PHM928 ad 9 9 0 0 PHM929 ad 14 18 2 1 PHM93 1 ind 19 21 2 1 PHM932 ad 61 61 0 0 PHM935A ad 21 28 7 2 General SUCRE TS Promedio 13 30 0 4 d as Resumen de la evaluaci n se todos los paneles de seroconversi n usados Los resultados han demostrado que Elisa HBsAg es casi equivalente al ensayo de referencia En promedio el ensayo Elisa HBsAg est solo 0 4 d as m s atr s en los 30 paneles de seroconversi n usados en comparaci n con el ensayo de referencia 5 11 3 Mutantes 1 Panel de mutantes Se examin un panel mutante pre
41. f positif n gatif positif positif positif positif positif positif positif positif d tection d tection 5 11 4 25 chantillons positifs frais du m me jour L HBsAg Elisa a d tect 25 chantillons positifs frais du m me jour Les crit res du chapitre 3 1 9 de la 2009 886 CE ont t satisfaits 5 11 5 Sensibilit analytique talons Sensibilit calcul e 2 talon international de l OMS 0 03 Ul ml Etalon PEI sous type ad 0 08 PEI U ml Etalon PEI sous type ay 0 09 PEI U ml Seconds talons internationaux de POMS pour HBsAg sous type adw2 g notype A code NIBSC 00 588 5 11 6 Pr cision 1 Reproductibilit intra essai La pr cision intra essai a t d termin e l aide d un chantillon de contr le positif et de deux chantillons de s rum de patient de diff rentes concentrations en HBsAg taux l g rement sup rieur au niveau du seuil de positivit et taux moyen qui ont t analys s 20 fois en un seul run sur 3 jours ID Coefficient de seme chantillon Moyenne Ecart type variation 1 PC 1 32 0 7541 0 0857 11 36 1 PS 1 32 2 2766 0 1571 6 90 1 PS 1 64 1 3159 0 1168 8 88 2 PC 1 32 0 9671 0 0358 3 70 2 PS 1 32 2 7325 0 1025 3 75 2 PS 1 64 1 5822 0 0888 5 61 3 PC 1 32 0 9669 0 0909 9 40 3 PS 1 32 2 6088 0 2367 9 07 3 PS 1 64 1 6502 0 1499 9 08 Le CV calcul variait entre 3 7 et 1
42. ind 12 28 16 5 PHM917 ind 36 gt 43 gt 7 gt 2 PHM918 ad 7 7 0 0 PHM923 ay 15 21 6 1 PHM924 ad 29 35 6 1 PHM925 ind 8 14 6 1 PHM926 ind 13 15 2 1 PHM927 ind 4 7 3 1 PHM928 ad 9 9 0 0 PHM929 ad 14 18 2 1 PHM931 ind 19 21 2 1 PHM932 ad 61 61 0 0 PHM935A ad 21 28 7 2 ese ail A RES Sum 13 QE Average 13 30 0 4 days Catalogue Nr KAPG4SGE3 PI number 1701153 Revision Nr 110627 1 Summary of the evaluation of all tested seroconversion panels The results have shown that the HBsAg Elisa is nearly equivalent to the reference assay On average the HBsAg Elisa test is only 0 4 days later in the 30 tested seroconversion panels in comparison to the reference assay 5 11 3 Mutants 1 Mutant Panel A Hepatitis B Pre Core Mutant panel of Teragenix USA was tested HBsAg Elisa can detect the results while panel s dilution ratio is 1 2 or 1 5 This panel consists of 3 samples Core Promoter A1762 G1764 wild type PreCore codon 28 mutant wild type infection of 4 samples Core Promotor A1762 G1764 wild type PreCore codon 28 mutant of 2 samples Core Promotor T1762 A1754 MUTANT A1762 G1754 wild type mixed infection 2 Mutant samples The detection rate of HBsAg Elisa is 17 21 which is better than reference kit s 14 21 Mutation HbsAg Elisa aes Mutation HbsAg Elisa ag a Int Int Int Int 113A114 positive positive C137W positive neg
43. kit de reactivos es s lo para uso de diagn stico in vitro Procure que todos los reactivos del kit y las muestras alcancen temperatura ambiente 20 to 30 C y m zclelos cuidadosamente antes de usar No use reactivos despu s de su fecha de caducidad No intercambie reactivos entre lotes diferentes No pipetee con la boca No fume o coma en zonas donde se manipulan muestras o reactivos Todos los componentes y muestras del kit deben considerarse potencialmente peligrosos para la salud Deben usarse y eliminarse de acuerdo con los procedimientos de seguridad del laboratorio del usuario Estos procedimientos de seguridad probablemente incluir n el uso guantes de protecci n y evitar la generaci n de aerosoles Las muestras potencialmente infecciosas y derrames o goteos que no contienen cidos deben ser limpiados concienzudamente con hipoclorito de sodio al 5 o tratado de acuerdo con las pr cticas del laboratorio para el control de un potencial riesgo biol gico 5 1 10 Antes de eliminar los desechos de las muestras usadas y reactivos del kit como desechos generales estos deben ser tratados de acuerdo con el procedimiento local para desecho con potencial riesgo biol gico o tratado como sigue Tanto los desechos s lidos como los l quidos deben ser autoclavados a 121 C por lo menos por 30 minutos El desecho s lido tambi n se puede incinerar El desecho l quido no cido puede tratarse con hipoclorito de sodio diluido a una concen
44. logue number Control In vitro diagnostic medical device Manufacturer Contains sufficient for lt n gt tests Wash solution concentrated Zero calibrator Calibrator Control Tracer Tracer Tracer concentrated Tracer concentrated Tubes Incubation buffer Acetonitrile Serum j Specimen diluent Dilution buffer Antiserum Tamunoadsorbent Calibrator diluent Reconstitution solution Polyethylene glycol Extraction solution Elution solution Bond Elut Silica cartridges Pre treatment solution l Neutralization solution E Tracer buffer Microtiterplate i HRP Conjugate HRP Conjugate HRP Conjugate concentrate HRP Conjugate concentrate Conjugate buffer Chromogenic TMB concentrate Chromogenic TMB solution Substrate buffer Stop solution ncubation serum Buffer AP Conjugate Substrate PNPP Biotin conjugate concentrate Precipitating Agent Avidine HRP concentrate Assay buffer Biotin conjugate f Specific Antibody Streptavidin HRP concentrate Non specific binding 2nd Antibody Acidification Buffer Distributor ncubation trays PMSF solution Protect from light Dot Strip Substrate Extraction Buffer Concentrate Cartridge Streptavidin HRP E Pipette Wash buffer Revision nr 140723 P I Number 1701000 ACETONITRILE SERUM SPE
45. ma Specimens which are non reactive by HBsAg Elisa are considered negative for HBsAg Specimens with positive reaction should be retested in duplicate In case of a reactive repeat reaction the specimen should be confirmed for HBsAg reactivity with validated confirmatory reagents Only confirmed positive specimens are considered to contain HBsAg 3 TEST DESCRIPTION HBsAg Elisa is a solid phase enzyme immunoassay ELISA enzyme linked immuno sorbent assay based on the sandwich principle The solid phase of the microtiter plate is made of polystyrene wells coated with mouse monoclonal antibodies specific for HBsAg whereas guinea pig polyclonal antibody purified by affinity chromatography is used to prepare the anti HBs peroxidase horseradish conjugate in the liquid phase When a serum or plasma specimen containing HBsAg is added to the anti HBs antibody coated wells together with the peroxidase conjugated anti HBs antibody and incubated an antibody HBsAg antibody peroxidase complex will form on the wells After washing the microtiter plate to remove unbound material a solution of TMB substrate is added to the wells and incubated A color develops in proportion to the amount of HBsAg boud to Anti HBs The peroxidase TMB reaction is stopped by addition of sulfuric acid The optical density of developed color is read with a suitable photometer at 450nm with a selected reference wavelength within 620 to 690nm The test principle
46. n Invest 1973 52 1176 1186 Wolters G Kuijpers LP Kacaki J Schuurs AH Enzyme linked immunosorbent assay for hepatitis B surface antigen J Infect Dis 1977 136 Suppl 311 377 Shih JW Cote PJ Jr Dapolito GM Gerin JL Production of monoclonal antibodies against hepatitis B surface antigen HBsAg by somatic cell hybrids J Virol Methods 1980 1 257 273 Hoofnagle JH Di Bisceglie AM Serologic diagnosis of acute and chronic viral hepatitis Semin Liver Dis 1991 11 73 83 Fecha de revisi n 2011 06 27 Catalogo Nr KAPG4SGE3 PI Numero 1701153 Revisi n Nr 110627 1 P I Number 1701000 ACETONITRILE SERUM ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PEG EXTR ELU GEL PRE NEUTR TRACEUR Ab Ag Ab Ag CONJ CHROM CHROM AGENT HRP BUF ACID DIST TRAY PMSF STRIP SUB EXTR CART SAV PIPETTE WASH Used symbols Consult instructions for use Storage temperature Use by Batch code Cata
47. nce r nale h modialyse h patite auto immune cirrhose du foie et c pr sence de certains anticorps tels que HAMA GAD IA2 APS 4 Les chantillons contenant des substances pouvant provoquer des interf rences par ex triglyc rides lip mie h moglobine h molyse bilirubine ict re composants d immunoglobuline monoclonale niveaux lev s d anticorps auto immuns facteur rhumatoide FR anticorps antinucl aires ANA ou anticorps antimitochondriaux AMA et les chantillons provenant de femmes enceintes n ont pas provoqu N de catalogue KAPG4SGE3 N de PI 1701153 N de r vision 110627 1 d interf rences avec l essai HBsAg Elisa 5 11 Performance 5 11 1 Sp cificit diagnostique R sultats de l valuation europ enne de la performance pour HBsAg Elisa de DIAsource R activit des chantillons Donneur et Clinique HBV n gatifs Nbre total d chantillons HBsAg Elisa de DIAsource N N g IR RR Confirm Faux positif HBV n gatif chantillon clinique Sl hc lc Nice 0 a HBV n gatif chantillon donneur 23013473122 22 2 ae Total 5714 5690 24 24 0 24 TR initialement r actif RR r actif r it r Sp cificit diagnostique 5690 5714 99 58 5 11 2 Sensibilit diagnostique 1 La sensibilit diagnostique d termin e dans les valuations europ enne de la performance a donn les r sultats
48. nuclear de hepatitis B de Teragenix EE UU HBsAg Elisa puede detectar los resultados si la relaci n de la diluci n del panel es 1 2 o 1 5 Este panel consiste de 3 muestras de promotor del n cleo basal A1762 G1764 tipo silvestre Infecci n tipo silvestre mutante precursor nuclear cod n 28 de 4 muestras de promotor del n cleo basal A1762 G1764 tipo silvestre Mutante precursor nuclear cod n 28 de 2 muestras de promotor del n cleo basal T1762 A1754 infecci n mixta tipo silvestre MUTANTE A1762 G1754 2 Muestras mutantes La tasa de detecci n de HBsAg Elisa es de 17 21 que es mejor que la del kit de referencia 14 21 Mutaci n HBsAg Elisa Il de Mutaci n HBsAg Elisa ok de referencia referencia Int Int Int Int 113A114 positivo positivo C137W_ positivo negativo P120L positivo positivo C139Y positivo positivo R1221 negativo negativo K141E positivo positivo R122T positivo positivo P142L G145R negativo negativo positivo negativo positivo negativo positivo positivo positivo positivo positivo positivo positivo positivo detecci n detecci n Catalogo Nr KAPG4SGE3 PI Numero 1701153 Revisi n Nr 110627 1 5 11 4 25 muestras frescas tomadas el mismo dia HBsAg Elisa detect 25 muestras frescas tomadas el mismo d a Se cumplieron los preceptos del cap tulo 3 1 9 del 2009 886 EC 5 11 5 Sensibilidad anal tica Material est nda
49. on du conjugu ou du substrat 5 9 4 Contamination du bord du puits avec un conjugu 5 9 5 chantillon inappropri par exemple s rum ou plasma h molys chantillon contenant des s diments et chantillons insuffisamment m lang s avant utilisation 5 9 6 Dur e ou temp rature d incubation incorrecte 5 9 7 T te et aiguilles d aspiration distribution du laveur obstru es ou partiellement obstru es 5 9 8 Aspiration insuffisante 5 10 Limites et interf rences 5 10 1 Ce kit de r actifs doit tre uniquement utilis pour du s rum ou du plasma humain non mis en pool 5 10 2 Ce kit de r actifs n a pas t valid pour une utilisation avec des chantillons pr lev s sur des cadavres 5 10 3 Un r sultat HBsAg n gatif sans autre preuve ne doit pas tre utilis pour exclure une infection par HBV 5 10 4 Substances provoquant des interf rences Les r sultats suivants ont t obtenus lors d exp rimentations respectives 1 Aucune interf rence avec diff rents anticoagulants tels que l h parine de lithium EDTA le citrate n a t observ e 2 Les chantillons trait s par la chaleur 60 C 10 heures ont pr sent une diminution du titre d HBsAcg 3 Aucune r activit crois e n a t d tect e sur des chantillons provenant de patients pr sentant a d autres infections par HAV EBV CMV HSV VZV Lyme Borreliosis HCV HIV b d autres tats pathologiques tels qu insuffisa
50. ontrols and 2 Positive Controls NOTE a Use a clean pipette tip for each sampling to avoid cross contamination b Each plate needs respective negative controls positive controls and blank well c Do not use any cut off value established for other plates of HBsAg Elisa 5 5 3 Add 50 ul of Anti HBs Peroxidase Solution to each well except the blank NOTE Do not touch the wall of the plate wells to prevent contamination 5 5 4 Gently tap the plate 5 5 5 Remove the protective backing from the Adhesive Slip and press it onto the reaction plate so that it is tightly sealed 5 5 6 Incubate the reaction plate at 37 1 C in a water bath or incubator for 80 minutes 5 5 7 At the end of the incubation period remove and discard the Adhesive Slip and wash the plate in accordance with 5 4 Plate Washing Procedure 5 5 8 Select one of the following two methods for color development Catalogue Nr KAPG4SGE3 PI number 1701153 Revision Nr 110627 1 A Mix equal volumes of Chromogenic TMB concentrate and Substrate Buffer in a clean container immediately prior to use Add 100 pl of the mixture solution to each well including the blank well B Add 50ul of Chromogenic TMB concentrate first and then add 50 ul of Substrate buffer into each well including the blank Mix well carefully NOTE Chromogenic TMB concentrate should be colorless to light blue otherwise it should be discarded The mixture of Chromogenic TMB concentrate and Subst
51. posible para evitar hem lisis Cualquier part cula presente en la muestra por ej gl bulos rojos co gulos de fibrina deben removerse antes de usar 5 2 3 Las muestras deben almacenarse de 2 a 8 C y evitar inactivaci n por calor para minimizar el deterioro Para almacenar por periodos largos las muestras se deben congelar por debajo de 20 C No se recomienda almacenarlas en congeladores que se auto descongelan 5 2 4 Las muestras congeladas deben ser descongelados completamente y mezcladas en forma homog nea antes del ensayo 5 2 5 Evite congelar y descongelar en forma sucesiva 5 2 6 ADVERTENCIA 1 La muestra no debe contener compuestos de azida que puedan inhibir la actividad de la peroxidasa en el conjugado 2 Muestras de suero coaguladas y muestras con contaminaci n bacteriana no deben ser usadas 5 3 Almacenaje y estabilidad de los componentes 5 3 1 El kit debe almacenarse entre 2 y 8 C No congelar 5 3 2 Las tiras de las placas debes usarse dentro de 2 meses despu s de abrir la bolsa original de aluminio Las tiras no usadas deben permanecer en la bolsa de aluminio firmemente sellada 5 3 3 Almacene los reactivos nuevamente entre 2 y 8 C inmediatamente despu s de su uso 5 3 4 El concentrado x20 de la soluci n de lavado es almacenado y transportado entre 2 y 8 C lo que puede causar cristalizaci n Si hay precipitado de cristales antes del uso caliente la soluci n en un ba o mar a a 37 C has
52. r Sensibilidad calculada 2 Est ndar Internacional WHO 0 03 U mL Est ndar PEI subtipo ad 0 08 PEI U mL Estandar PEI subtipo ay 0 09 PEI U mL 2 Est ndar Internacional WHO para HBsAg subtipo adw2 genotipo A c digo NIBSC 00 588 5 11 6 Precisi n 1 Repetibilidad intra ensayo La precisi n intra ensayo se determin usando una muestra de control positivo y dos sueros de pacientes con distinta concentraci n de HBsAg levemente por sobre el nivel de corte y a nivel medio las que fueron analizadas en 20 repeticiones en un ensayo nico por 3 d as Ensayo ID de muestra Promedio Mesran Fee o Est ndar Variaci n 1 PC 1 32 0 7541 0 0857 11 36 1 PS 1 32 2 2766 0 1571 6 90 1 PS 1 64 1 3159 0 1168 8 88 2 PC 1 32 0 9671 0 0358 3 70 2 PS 1 32 2 7325 0 1025 3 75 2 PS 1 64 1 5822 0 0888 5 61 3 PC 1 32 0 9669 0 0909 9 40 3 PS 1 32 2 6088 0 2367 9 07 3 PS 1 64 1 6502 0 1499 9 08 El CV calculado vari entre 3 7 y 11 36 valor aceptable para un inmunoensayo que utiliza microplacas 2 Reproducibilidad entre ensayos Los experimentos de evaluaci n de la precisi n se realizaron durante 10 d as h biles usando cinco muestras de suero con niveles de HBsAg positivos lim trofes y claramente sobre el valor de corte ID de Desviaci n Coeficiente de N Promedio AA muestra Est ndar Variaci n Fl 10 0 0609 0 0185 30 41 F2 10 0 0770 0 018
53. r de la luz Tries Dot Sustrato Concentrado de tamp n de extracci n Cartucho Estreptavidina HRP Pipeta E Tamp n de lavado Revision nr 140723
54. rate buffer should be used within 30 minutes after mix The mixture should be kept away from intense light 5 5 9 Cover the plate with a black cover and incubate at room temperature for 30 minutes 5 5 10 Stop the reaction by adding 100 ul of stop solution to each well including the blank 5 5 11 Determine the absorbance of Controls and test specimens within 30 minutes with a precision spectrophotometer at 450 620 690nm 450nm reading wavelength with 620 690 nm reference wavelength Use the blank well to blank spectrophotometer NOTE The color of the blank should be colorless to light yellow otherwise the test results are invalid Substrate blank absorbance value must be less than 0 100 5 6 Calculations of Results 5 6 1 Calculation of the NC Mean Absorbance of Negative Control Example Sample No Absorbance 1 0 022 2 0 025 3 0 023 NC 0 022 0 025 0 023 3 0 023 NCx should be lt 0 1 otherwise the test is invalid 5 6 2 Calculation of the PC Mean Absorbance of Positive Control Example Sample No Absorbance 1 1 432 2 1 508 PC 1 432 1 508 2 1 470 PC should be 20 6 otherwise the test is invalid 5 6 3 Calculation of the P N Value P N PC NC Example NC 0 024 PC 1 470 P N 1 470 0 024 1 446 P N Value must be 20 5 otherwise the test is invalid 5 6 4 Calculation of the Cutoff Value Cutoff Value NC 0 025 Example Cutoff Value 0 023 0 025 0 048 5 7
55. s 5 5 10 Detenga la reacci n agregando 100 ul de soluci n de parada en cada pocillo incluyendo el blanco 5 5 11 Determine la absorbancia de los controles y muestras dentro de 30 minutos con un fot metro de precisi n a 450 620 690 nm Longitud de onda de 450 nm para la lectura con 620 690 nm de longitud de onda de referencia Use el blanco para blanquear el fot metro noi El color del blanco debe ser de incoloro a amarillento p lido de otro modo el ensayo es inv lido En este caso el ensayo debe ser repetido Blanco Sustrato la absorbancia debe ser menor de 0 100 5 6 Calculo de los resultados del ensayo 5 6 1 C lculo de la CN Absorbancia promedio del Control Negativo Ejemplo Muestra No Absorbancia 1 0 022 2 0 025 3 0 023 CN 0 022 0 025 0 023 3 0 023 CNx debe ser 0 1de otro modo el ensayo es inv lido 5 6 2 C lculo de CP Absorbancia Promedio del Control Positivo Ejemplo Muestra No Absorbancia 1 1 432 2 1 508 CP 1 432 1 508 2 1 470 CPx debe ser 20 6de otro modo el ensayo es inv lido 5 6 3 Calculo del Valor P N P N PC NC Ejemplo NC 0 024 PC 1 470 P N 1470 0 024 1 446 El valor P N debe ser 20 5de otro modo el ensayo es inv lido 5 6 4 C lculo del Valor de Corte Valor de Corte NC 0 025 Ejemplo Valor de corte 0 023 0 025 0 048 5 7 Validez de los Ensayos 5 7 1 CN debe ser lt 0 1de otro modo el ensayo es inv lido 5 7 2 CP debe ser 20 6
56. s de HBsAg en suero o plasma Las muestras que no son reactivas con HBsAg ELISA se consideran negativas para HBsAg Las muestras con una reacci n positiva deben ser repetidas en duplicado En caso de obtener un resultado reactivo en una repetici n la muestra debe ser confirmada para la reactividad con HBsAg usando reactivos de confirmaci n validados Se considera que solo las muestras positivas confirmadas contienen HBsAg DESCRIPCI N DEL ENSAYO HBsAg Elisa es un inmunoensayo enzim tico de fase s lida ELISA enzyme linked immunosorbent assay basado en principio del s ndwich La fase s lida de la microplaca est formada por pocillos de poliestireno recubiertos con anticuerpos monoclonales de rat n espec ficos para HBsAg en cambio el anticuerpo policlonal de cobayo purificado por cromatograf a de afinidad se usa para preparar el conjugado de anti HBs peroxidasa r bano picante en fase l quida Cuando una muestra de suero o plasma que contiene HBsAg se agrega a un pocillo recubierto con anticuerpos anti HBs junto con el anticuerpo anti HBs conjugado con peroxidasa y se incuban se formar un complejo anticuerpo HBsAg anticuerpo pocillo recubierto en el pocillo Despu s de lavar la microplaca para eliminar el material que no se ha unido se agrega una soluci n de sustrato TMB a lo pocillos y se incuba El color se desarrolla proporcionalmente a la cantidad de HBsAg que se ha unido al Anti HBs La reacci n peroxidasa TM
57. s of the plate should be used within one month after opening the original aluminum foil bag The unused strips should be kept in the aluminum foil bag and taped tightly 5 3 3 Return reagents to 2 to 8 C immediately after use 5 3 4 Washing Solution 20X Concentrate can be stored at room temperature to avoid crystallization because the kits are stored and shipped at 2 to 8 C If crystals have been precipitated before use warm up the solution at 37 C in a water bath until the crystals dissolve 5 4 Plate Washing Procedure 5 4 1 Preparation of washing solution Dilute Washing Solution 20X Concentrate with distilled or de ionized water to obtain a 1 20 dilution Do not use tap water 5 4 2 Plate washing a For plate washer with overflow aspirating function 6 cycles with at least 0 5 ml washing buffer per well per cycle or b For plate washer without overflow aspirating function 8 cycles with at least 0 35 ml washing buffer per well per cycle 5 4 3 Blot dry by inverting the plate and tapping firmly onto absorbent paper Too much residual wash buffer will cause false results WARNING Improper washing will cause false results 5 5 Test Procedure 5 5 1 Bring all reagents and specimens to room temperature 20 to 30 C before assay Adjust water bath or incubator to 37 1 C 5 5 2 Reserve one well for blank Add 50 ul of each control or specimen to appropriate wells of the microtiter plate 3 Negative C
58. sa assay The relative potency ratio of the British Working Standard for HBsAg versus the DIAsource HBsAg Master Calibrator is 4 081 3 853 4 325 95 CI The concentration of the Positive Control of HBsAg Elisa assay has been determined against the DIAsource HBsAg Master Calibrator and was established with 42 IU ml 20 Catalogue Nr KAPG4SGE3 PI number 1701153 Revision Nr 110627 1 5 12 Flow chart of the test procedure Add 50 ul of controls 3 X NC 2 X PC and add 50ul of each specimen into wells Reserve one well for blank y Add 50 ul of Anti HBs Peroxidase Solution into each reaction well except one blank Incubate the plate at 37 1 C for 80 minutes Wash the plate Choose one of the following two methods for enzymatic reaction with color development PS N Mix equal volumes of Add 50 ul of Chromogenic Chromogenic TMB TMB concentrate to wells concentrate and Substrate and then add 50 ul of buffer Add 100 ul of the Substrate buffer Mix well mixed solution to wells gently Incubate at R T for 30 minutes Add 100ul of IN sulfuric acid into each well Determine absorbance using 450 nm as reading wavelength with 620 690nm reference wavelength Y e e K 6 NOTES The reference wavelength of the photometer to be used can be 620 nm to 690 nm However the user should validate the photometer in combination with HBsAg Elisa before use 2 Incomplete inactivation of hepatitis B virus
59. ta que los cristales se disuelvan 5 4 Procedimiento de lavado de placas 5 4 1 Preparaci n de la soluci n de lavado Diluya la soluci n de Lavado x20 con agua destilada o desionizada a una diluci n de 1 20 No use agua del grifo 5 4 2 Lavado de las placas a Para un lavador de placas con funci n de aspiraci n de desborde 6 ciclos de por lo menos 0 5 ml de tamp n de lavado por pocillo por ciclo o b Para un lavador sin la funci n de aspiraci n de desborde 8 ciclos de por lo menos 0 35ml de tamp n de lavado por pocillo por ciclo 5 4 3 Seque invirtiendo la placa sobre un papel absorbente y golpe ndola en rgicamente Si queda demasiado tamp n de lavado residual podr a causar resultados falsos ADVERTENCIA Un lavado inadecuado causar resultados falsos 5 5 Procedimiento del Ensayo 5 5 1 Aseg rese de que todos los reactivos y muestras alcancen temperatura ambiente 20 a 30 C antes del ensayo Ajuste el ba o mar a o incubadora a 37 1 C 5 5 2 Reserve un pocillo para el blanco Agregue 50ul de cada control o muestra a los pocillos correspondientes en la placa donde ocurrir la reacci n 3 Controles Negativos y 2 Controles Positivos A NOTA a Use una punta nueva de pipeta para cada muestra para evitar contaminaci n cruzada b Cada placa necesita sus propios controles negativos positivos y pocillos blancos c No use el valor de corte establecido para otras placas de HBsAg Elisa 5 5 3 Agreg
60. ter than the Performance Panel PHA205 AA competitors 4 The HBsAg Mixed Titer Performance Panel VHA601 BBI USA evaluation yielded the following results Panel o o panel Results members BBI HBsAg Mixed Titer Performance Met BBI s expected Panel VHA601 NERO E00 Lt 5 The evaluation of the HBsAg Mixed Titer Performance Panel QHA711 BBI USA yielded the following results Panel Doo ae Results members BBI HBsAg Mixed Titer Performance Met BBI s expected Panel QHA711 RE e mn INTS HBsAg Subtype Panel Test Result The results of the evaluation demonstrate that all known HBsAg serotypes HBsAg subtypes available in the INTS HBsAg subtype panel can be detected by both HBsAg Elisa and the reference assay up to 10 x 10 x dilutions 7 Summary table of the evaluation of all tested seroconversion panels HBsAg Positive Result From Date of First Blood Collection ds A ada HBsAg Elisa Pro Bleed leed A in days B in days A B cae er PHM907 ay 50 50 0 0 PHM916 ay 62 65 3 1 PHM920 ad 26 26 0 0 PHM921 ad 0 0 0 0 PHM930 ad 3 3 0 0 PHM933 ad 7 9 2 1 PHM934 ad 0 0 0 0 PHM935A ad 9 21 12 3 PHM DB 231 217 14 1 ad NabiSB0411 6 6 0 0 PHM903 ad 6 10 4 1 PHM904 ad 7 18 11 1 PHM906 ad 137 0 137 1 PHM909 ad 9 9 0 0 PHM910 ad 35 18 17 1 PHM912 ad 42 0 42 7 PHM914 ad 0 146 146 1 PHM915
61. thyl sulfoxide an irritant to skin and mucous membranes 5 1 13 Although all human sourced material are tested non reactive for Anti HCV and Anti HIV and inactivated at 56 C for one hour the reagent shall be handled as potential infectious material 5 2 Specimen Collection and Preparation for Analysis Catalogue Nr KAPG4SGE3 PI number 1701153 Revision Nr 110627 1 5 2 1 No special preparation of the patient is required prior to blood collection Blood should be collected by approved medical techniques 5 2 2 Either serum or plasma specimens can be used with this test kit Whole blood specimen should be separated as soon as possible in order to avoid hemolysis Any particulates e g fibrin clots erythrocytes contained in the specimen should be removed prior to use 5 2 3 Specimens must be stored at 2 to 8 C and avoid heat inactivation to minimize deterioration For long term storage they should be frozen below 20 C Storage in self defrosting freezer is not recommended 5 2 4 Frozen specimens must be thoroughly thawed and mixed homogenously before test 5 2 5 Avoid multiple freeze thaw procedures WARNING 1 The specimen must not contain any compounds of AZIDE which inhibits the peroxidase activity 2 Incompletely coagulated sera and microbial contaminated specimens should not be used 5 3 Storage conditions and Stability of Reagents 5 3 1 The kit must be stored at 2 to 8 C Do not freeze 5 3 2 Strip
62. traci n final de 1 Los desechos cidos deben ser neutralizados antes de tratarlos con hipoclorito de sodio como se mencion antes y debe mantenerse por 30 minutos para obtener una desinfecci n efectiva 5 1 11 La soluci n de parada es irritante para los ojos la piel v as respiratorias y membranas mucosas Evite el contacto de la soluci n de parada con la piel y membranas mucosas En caso de contacto lave con copiosa cantidad de agua inmediatamente En caso de inhalaci n proporcione aire fresco y busque ayuda m dica en caso de molestias 5 1 12 El TMB cromog nico concentrado contiene un disolvente org nico que es inflamable peligro de efectos graves irreversibles por inhalaci n contacto con la piel o ingesti n El TMB cromog nico concentrado contiene dimetil sulf xido un irritante para la piel y membranas mucosas 5 1 13 A pesar de que todo el material de origen humano ha resultado no reactivo para anti VHC y Anti VIH y ha sido a 7 inactivado a 56 C por una hora el reactivo debe manipularse como material potencialmente infeccioso Catalogo Nr KAPG4SGE3 PI Numero 1701153 Revisi n Nr 110627 1 5 2 Toma de Muestra y Preparaci n para el An lisis 5 2 1 El paciente no requiere preparaci n especial antes de la toma de la muestra La sangre debe ser tomada con t cnicas m dicas aprobadas 5 2 2 Con este kit se puede usar suero o plasma La muestra de sangre total debe separarse lo antes
63. u HRP Conjugu concentr HRP Conjugu concentr Tampon conjugu Chromog ne TMB concentr Solution chromog ne TMB Tampon substrat Solution d arr t S rum d incubation Tampon AP Conjugu Tampon PNPP Biotine conjugu concentr Agent de pr cipitation Avidine HRP concentr Tampon de test Biotine conjugu Anticorps sp cifique Concentr streptavidine HRP Liant non sp cifique Second anticorps Tampon d acidification Distributeur Plaque d incubation Solution PMSF Conserver l abri de la lumi re Bandelette de dots J Substrat Tampon d extraction concentr Cartouche Streptavidine peroxydase de raifort j Pipette Tampon de lavage Revision nr 140723 P I Number 1701000 ACETONITRILE SERUM SPE BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PEG EXTR ELU GEL PRE NEUTR TRACEUR Ab Ag Ab Ag CONJ CHROM CHROM AGENT HRP BUF ACID DIST TRAY PMSF A STRIP SUB EXTR CART
64. ue 50 ul de soluci n de anti HBs Peroxidasa a cada pocillo excepto a el blanco NOTA No toque la pared del pocillo para evitar contaminaci n 5 5 4 Golpee la placa suavemente 5 5 5 Retire el dorso protector de la cubierta autoadhesiva y presi nela sobre la placa de modo que quede sellada firmemente 5 5 6 Incube la placa a 37 1 C en ba o mar a o una incubadora por 80 minutos 5 5 7 Al finalizar el periodo de incubaci n retire y elimine la cubierta autoadhesiva y lave la placa siguiendo 5 4 PROCEDIMIENTO DE LAVADO DE PLACAS 5 5 8 Seleccione uno de los dos m todos siguientes para desarrollar el color Catalogo Nr KAPG4SGE3 PI Numero 1701153 Revisi n Nr 110627 1 A Mezcle vol menes iguales de TMB cromog nico concentrado y Tamp n de sustrato en un recipiente limpio inmediatamente antes de usar Agregue 100 ul de la soluci n de la mezcla a cada pocillo incluyendo el pocillo blanco B Agregue primero 50 ul de TMB cromog nico concentrado y luego agregue 50 ul de Tamp n del sustrato a cada pocillo incluyendo el blanco Mezcle suavemente A NOTA El TMB crom gencio concentrado debe ser entre incoloro y celeste de otro modo debe ser eliminado La mezcla de TMB cromog nico concentrado con tamp n del sustrato debe usarse dentro de 30 minutos a partir del momento de la mezcla La mezcla debe protegerse de la luz intensa 5 5 9 Cubra la placa con la cubierta negra e incube a temperatura ambiente por 30 minuto
65. utom tico es opcional El usuario debe validar el equipo en conjunto con el kit Catalogo Nr KAPG4SGE3 PI Numero 1701153 Revisi n Nr 110627 1 4 1 CONDICIONES DE ALMACENAJE Y ESTABILIDAD DEL KIT Y SUS COMPONENTES Kit componentes Condici n de Estado Estabilidad almacenaje Original 18 HBsAg ELISA kit 2 to 8 C ee a Una vez abierto 1 mes LE Original 18 meses Control positivo HBsAg 2 to 8 C Una vez abierto 1 mes E Original 18 meses Control Negativo HB 2 to 8 C Una vez abierto 1 mes Original 24 meses Placa Anti HBs 2 to 8 C Una vez abierto 1 mes ho Original 18 meses Soluci n Conjugado Anti HBs HRPO 2 to 8 C Una vez abierto 1 mes ba Original 24 meses Soluci n de Lavado Concentrada 20x Temp ambiente Una vez abierto 1 mes T bient Diluid 2 di Soluci n de Lavado Diluida 20x re 2 to 8 C Diluido 1 semana ns Original 24 meses TMB cromog nico concentrado 2 to 8 C Una vez abierto 1 mes Original 24 Tamp n del sustrato 2 to 8 C eee oe Una vez abierto 1 mes Mezcla de Soluci n de Sustrato TMB Temp ambiente Mezcla 6 horas re 3 Original 24 meses IN cido sulf rico Temp ambiente E Una vez abierto 1 mes 5 INSTRUCCIONES DE USO 5 1 Advertencias 5 1 1 5 1 2 5 1 3 5 1 4 5 1 5 5 1 6 5 1 7 5 1 8 5 1 9 Este kit de reactivos es s lo para uso profesional Este
66. yde de dim thyle un irritant pour la peau et les muqueuses 5 1 13 Bien que tous les chantillons d origine humaine soient test s non r actifs pour l anti HCV et l anti HIV et ont t inactiv s 56 C pendant une heure le r actif doit tre manipul comme une substance potentiellement 2 infectieuse 5 2 Collecte et pr paration des chantillons pour analyse 5 2 1 Aucune pr paration sp ciale du patient n est requise avant une prise de sang Le sang doit tre pr lev par des techniques m dicales approuv es 5 2 2 Des chantillons de s rum ou de plasma peuvent tre utilis s avec ce kit de test Les chantillons de sang total doivent tre s par s au plus t t pour viter l h molyse Toute particule par ex caillots de fibrine rythrocytes contenue dans l chantillon doit tre retir e avant utilisation 5 2 3 Les chantillons doivent tre stock s entre 2 et 8 C et viter l inactivation par la chaleur pour minimiser la d t rioration Pour un stockage de longue dur e ils doivent tre congel s en dessous de 20 C Un stockage en cong lateur d givrage automatique n est pas recommand 5 2 4 Les chantillons congel s doivent tre enti rement d congel s et m lang s de fa on homog ne avant le test 5 2 5 viter les proc dures de cong lation d cong lation multiples AVERTISSEMENT 1 L chantillon ne doit contenir aucun compos d AZOTURE qui inhibe
67. your laboratory s safety procedures Such safety procedures probably include the wearing of protective gloves and avoiding the use of aerosols Potential infectious specimens and non acid containing spills or leakages should be wiped up thoroughly with 5 sodium hypochlorite or treated in accordance with your practice for potential bio hazard control Prior to disposing used specimens and kit reagents as general waste it should be treated in accordance with the local practice of potential bio hazardous waste or treated as follows Both liquid and solid waste should be autoclaved at 121 C for at least 30 minutes Solid waste can also be incinerated Non acidic liquid waste can be treated with sodium hypochlorite diluted to a final concentration of 1 Acidic liquid wastes must be neutralized before treatment with sodium hypochlorite as mentioned above and should stand for 30 minutes to obtain effective disinfection 5 1 11 Stop Solution is an irritant to skin eyes respiratory tract and mucous membranes Avoid contact of the stop 5 1 12 solution with skin and mucous membranes In case of contact flush immediately with abundant amounts of water In case of inhalation find fresh air and seek medical attention in case of pain Chromogenic TMB concentrate contains organic solvent which is flammable danger of serious irreversible effects through inhalation in contact with skin and if swallowed Chromogenic TMB concentrate contains dime

HBsAg Elisa - DIAsource Immunoassays

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