RosetteSep™ HLA Total Lymphocyte Enrichment Cocktail ENGLISH
Contents
1. 1 604 877 0713 e mail info stemcell com 30175 Hannover e Germany CE IVD 29672 Version 2 1 0 March 2012 Page 9 of 15 ITALIANO RosetteSep HLA Cocktail di arricchimento linfocita totale 15263HLA 10 mL Per l etichettatura di 250 mL di sangue intero 15283HLA 40 mL Per l etichettatura di 1000 mL di sangue intero USO PREVISTO I cocktail di arricchimento cellulare RosetteSep sono destinati all arricchimento in vitro di sottoinsiemi cellulari specifici da fonti di cellule umane compreso il sangue intero Esclusivamente per utilizzo diagnostico professionale in vitro DESCRIZIONE DEL PRODOTTO RosetteSep HLA Cocktail di arricchimento N 15223HC 1 di linfociti Questo cocktail contiene una combinazione di anticorpi monoclonali di topo e ratto Gli anticorpi sono uniti in Complessi di anticorpi tetramerici TAC bispecifici i quali vengono diretti contro gli antigeni delle superfici cellulari in cellule ematopoietiche umane CD16 CD36 CD66b e glicoforina A su globuli rossi La sottoclasse di anticorpi monoclonali di topo IgG Tenere presente che questo prodotto un reagente biologico per cui non possibile caratterizzarlo o quantificarlo interamente Una qualche variabilit inevitabile PRINCIPIO DI METODO Il cocktail di anticorpi RosetteSep correla in modo incrociato le cellule indesiderate del sangue umano intero a globuli rossi multipli cos da formare immunorosette Ci2. DENSITE mL 1 1 1 5 5 2 2 3 14 3 3 3 14 4 4 4 14 5 5 15 50 10 10 15 50 15 15 15 50 For Technical Assistance Tel 1 604 877 0713 e mail info stemcell com Centrifuger pendant 20 minutes 1 200 x g cf Notes temp rature ambiante 15 25 C sans frein R cup rer les cellules enrichies du milieu de gradient de densit l interface plasma Il est parfois difficile de voir les cellules l interface notamment lorsque l enrichissement concerne tres peu de cellules Il est recommand de retirer une partie du milieu de gradient de densit avec les cellules enrichies afin de garantir une r cup ration optimum Laver les cellules enrichies une premi re fois avec du PBS 2 FBS R p ter Utiliser les cellules enrichies selon les besoins Nous recommandons de lyser les chantillons enrichis avec du chlorure d ammonium afin d liminer les globules rouges r siduels pr alablement l analyse cytom trie de flux ceci peut tre r alis durant une tape du lavage Les globules rouges r siduels peuvent interf rer avec des tests ult rieurs Les cellules ind sirables sont li s aux globules rouge formant Milieu de gradient de densit DIAGRAMME DE PROTOCOLE ROSETTESEPTM Les num ros renvoient aux tapes de la section Manipulation et Mode d emploi mb RosetteSep des rosettes grace au 9 complexe d anticorps t tram riques Plas
3. aumenta la densit delle cellule rosettate indesiderate in modo che si granulino con gli globuli rossi liberi quando sono centrifugate su un mezzo di densit galleggiante come Ficoll Paque PLUS Catalogo 07917 07957 07967 Ficoll PaqueT PREMIUM Catalogo 07908 07968 o RosetteSep DM L Catalogo 15705 Le cellule desiderate non sono mai etichettate con anticorpi e vengono raccolte facilmente come popolazione altamente arricchita all interfaccia tra il plasma e il mezzo di densit galleggiante CONTROLLI DI QUALIT I cocktail di arricchimento cellulare RosetteSep sono prodotti in modo asettico in base a dei processi altamente controllati e componenti pretestati Ogni lotto di cocktail di arricchimento cellulare RosetteSep sottoposto a test sulla sterilit conformi agli standard USP e a test di rendimento sul controllo qualit in analisi di separazione cellulare in cui viene usato del sangue umano intero LIMITAZIONI Il prodotto ha il marchio CE nell Unione Europea in conformit alla Direttiva 98 79 CE per i Dispositivi Diagnostici n Vitro ed conforme ai suoi requisiti Si possono applicare ulteriori termini e condizioni CONSERVAZIONE Conservare a 2 8 C Questo prodotto pu essere spedito a 15 25 C ma deve essere messo in frigorifero alla ricezione Non congelare STABILIT Prodotto stabile a 2 8 C fino alla data di scadenza indicata nell etichetta PRECAUZIONI 1 Solo
4. A 4 Vorsicht In Vitro F r Lagerung beiliegende Diagnostisches innerhalb der Dokumentation Medizinprodukt Temperaturgrenzen beachten STERILE A ud EC REP Aseptische Hersteller Autorisierter Verarbeitung Identifikation H ndler innerhalb Name amp der EU Addresse CE Zeichen tal STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com MDSS GmbH Schiffgraben 41 For Technical Assistance Tel 1 604 877 0713 e mail info stemcell com 30175 Hannover e Germany IVD CE 29672 Version 2 1 0 March 2012 Page 15 of 15
5. Volumi consigliati e dimensioni dei tubi SANGUE PBS 2 FBS MEZZO DI DIMENSIONI INTERO mL mL DENSIT mL TUBO mL 1 1 1 5 5 2 2 3 14 3 3 3 14 4 4 4 14 Mezzo di densit 5 5 15 50 10 10 15 50 15 15 15 50 5 Centrifugare per 20 minuti a 1200 x g cfr Note a temperatura ambiente 15 25 C con il freno disattivato 6 Togliere le cellule arricchite dal mezzo di densit interfaccia plasma SS Talvolta difficile vedere le cellule nell interfaccia in particolare quando si arricchiscono cellule molto rare Si consiglia di rimuovere parte del mezzo di densit insieme alle cellule arricchite onde assicurare una ripresa ottimale Plasma 7 Lavare una volta le cellule arricchite con PBS 2 FBS Ripetere Cellule arricchite 3 Utilizzare le cellule arricchite se lo si desidera Consigliamo di lisare i Mezzo di densit campioni arricchiti con cloruro di ammonio onde rimuovere i globuli rossi residui prima dell analisi citometrica di flusso questa operazione pu Globuli rossi e cellule essere effettuata durante il lavaggio o se i globuli residui interferiranno indesiderate rosettate con le analisi successive 6 8 Cellule arricchite non OSO rosettate e ud STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com 29672 For Technical Assistance MDSS GmbH Version 2 1 0 Tel 1 604 877 0713 Schiffgraben 41 C March 201
6. anti CD19 n de cat logo 10509 Los linfocitos son CD3 o CD19 Tenga en cuenta que las c lulas NK CD3 CD16 se eliminan durante el procedimiento de RosetteSepTM Resultados tipicos Estos resultados se presentan a modo ilustrativo nicamente Se han obtenido utilizando muestras de individuos adultos normales y sanos Los resultados de muestras de pacientes pueden variar N DE CATALOGO TIPO DE C LULA ENRIQUECIDA PUREZA Total de linfocitos 6 15263HLA 15283HLA Linfocitos T CD3 y B CD19 gt 80 ASISTENCIA T CNICA Si necesita asistencia t cnica env enos un correo electr nico a info Ostemcell com o llame al 1 604 877 0713 Para m s informaci n entre en www stemcell com MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover Germany REF LOT z N mero de cat logo C digo de lote Usar hasta o de referencia MM AAAA A D 4 Precauci n Equipo m dico Conservar consultar los para diagn stico dentro del rango documentos in vitro de temperaturas adjuntos STERILE A ud EC REP Procesamiento Identificaci n del Representante As ptico fabricante nombre y domicilio autorizado para la Comunidad Europea CE Marca CE tal STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com MDSS GmbH Schiffgraben 41 For Technical Assistance Tel
7. at room temperature 15 25 C Dilute sample with an equal volume of PBS 2 FBS and mix gently Layer the diluted sample on top of the density medium OR 5 t Unwanted cells are crosslinked to a Layer the density medium underneath the diluted sample red blood cells rosetted with Be careful to minimize mixing of the density medium and sample RosetteSep Tetrameric Antibody Complexes See Table 1 for volume recommendations With 50 mL conical tubes we suggest using 15 mL of density medium to make removal of the enriched layer after centrifugation easier 2 Table 1 Recommended Volumes and Tube Sizes WHOLE BLOOD PBS 2 DENSITY MEDIUM TUBE SIZE mL FBS mL mL mL 4 1 1 1 5 5 2 2 3 14 3 3 3 14 4 4 4 14 5 5 15 50 10 10 15 50 15 15 15 50 Density medium 5 Centrifuge for 20 minutes at 1200 x g see Notes at room temperature 15 25 C with the brake off 6 Remove the enriched cells from the density medium plasma interface Sometimes it is difficult to see the cells at the interface especially when very rare cells are enriched It is advisable to remove some of the density medium along with the enriched cells in order to ensure optimal recovery 7 Wash enriched cells once with PBS 2 FBS Repeat Use enriched cells as desired We recommend that enriched samples are lysed with ammonium chloride to remove residual red blood cells prior to fl
8. e mail info stemcell com 30175 Hannover e Germany 29672 Version 2 1 0 March 2012 IVD CE Page 10 of 15 INDICAZIONI DI UTILIZZO PROCEDURA ROSETTESEPTM Accertarsi che il campione di sangue il mezzo consigliato il mezzo numeri si riferiscono ai passi di Indicazioni di utilizzo di densit cfr Materiali speciali richiesti ma non forniti e la centrifuga siano a temperatura ambiente 15 25 C Ei 1 Aggiungere il cocktail RosetteSep HLA a 40 uL mL di sangue intero 1 ad es per 2 mL di sangue intero aggiungere 80 uL di cocktail Mescolare bene RosetteSep Se si utilizzano campioni diversi dal sangue intero fresco consultare le Note Incubare per 20 minuti a temperatura ambiente 15 25 C Bene alzano Diluire il campione con un volume uguale di PBS 2 FBS e mescolare correlate in modo incrociato ai delicatamente globuli rossi rosettate per mezzo t o 3 3 ness NEI di Complessi di anticorpi 4 RE il campione diluito sopra il mezzo di densit tetramerici RosetteSep Sistemare il mezzo di densit sotto il campione diluito Fare attenzione a minimizzare la mescolatura del mezzo di densit e del 2 campione Cfr Tabella 1 per le raccomandazioni sui volumi Con i tubi conici da 50 mL suggeriamo di utilizzare 15 mL di mezzo di densit onde 4 facilitare la rimozione dello strato arricchito dopo la centrifuga Tabella 1
9. enrichissement en lymphocytes totaux 15263HLA 10mL Pour un marquage 250 mL de sang total 15283HLA 40mL Pour un marquage 1 000 mL de sang total UTILISATION CONSEILL E Les cocktails d enrichissement en cellules RosetteSep sont destin s l enrichissement in vitro de sous populations de cellules sp cifiques tir es de sources cellulaires humaines dont le sang total R serv uniquement un usage de diagnostic in vitro professionnel CARACTERISTIQUES DU PRODUIT Cocktail d enrichissement en lymphocytes N 15223HC 1 totaux HLA RosetteSep Ce cocktail contient une combinaison d anticorps monoclonaux de souris et de rat Ces anticorps sont li s de fa on former des complexes anticorps t tram riques TACs bisp cifiques dirig s contre les antigenes de surface cellulaire des cellules h matopo tiques humaines CD16 CD36 CD66b et la Glycophorin A des globules rouges Les anticorps monoclonaux de souris utilis s sont de sous type IgG Il est noter que ce produit tant un r actif biologique il ne peut donc tre enti rement caract ris ou quantifi De ce fait nous ne pouvons exclure une certaine variabilit PRINCIPE DE LA METHODE Le cocktail d anticorps RosetteSep permet la liaison des cellules ind sirables du sang total humain aux globules rouges GR formant ainsi des rosettes Ces derni res augmentent la densit des cellules ind sirables rosettes de sorte former un culot a
10. pas utiliser le cocktail en cas de fuite du contenu des flacons Tout cocktail inutilis doit tre jet conform ment aux proc dures de laboratoire standard relatives aux liquides non dangereux 3 Ce produit doit tre manipul par du personnel qualifi selon les bonnes pratiques de laboratoire Une fois ce produit ajout aux cellules humaines la suspension doit tre consid r e comme potentiellement un danger biologique La manipulation des r actifs et l limination des d chets doivent respecter l ensemble de la r glementation locale tatique ou nationale 4 Ce produit est potentiellement irritant pour les yeux le syst me respiratoire et la peau Ce produit peut galement tre dangereux en cas d ingestion Eviter toute exposition cutan e le contact avec les yeux l inhalation et l ingestion MATERIEL SPECIAL N CESSAIRE NON FOURNI Milieu de gradient de densit Le milieu de gradient de densit fait r f rence au Ficoll PaqueTM PLUS R f rence N 07917 07957 07967 Ficoll PaqueTM PREMIUM R f rence N 07908 07968 ou RosetteSep DM L R f rence N 15705 Milieu recommand Tampon Dulbecco phosphate salin avec 2 de S rum f tal bovin PBS 2 FBS R f rence N 07905 Ficoll Ficoll Paque PLUS et Ficoll Paque PREMIUM sont des marques commerciales de GE Healthcare Limited tal STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell c
11. 16 NK cells are removed during the RosetteSep procedure Typical Results These results are for illustrative purposes only They were obtained using samples from normal healthy adults Results from individual patient samples may vary CATALOG CELL TYPE ENRICHED PURITY Total Lymphocytes 15263HLA 15283HLA T CD3 amp B CD19 Cells gt 80 TECHNICAL ASSISTANCE For technical support please contact us by email at info stemcell com or call 1 604 877 0713 For more information please visit www stemcell com MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover Germany REF Catalog or reference number LOT Batch code z Use by MM YYYY A Caution consult accompanying documents IVD In Vitro Diagnostic Medical Device For storage within temperature limits STERILE A Aseptic Processing tl Manufacturers identification name amp address EC REP Authorized EC representative in the European Community CE CE Mark tal STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com MDSS GmbH Schiffgraben 41 For Technical Assistance Tel 1 604 877 0713 e mail info stemcell com 30175 Hannover e Germany IVD CE 29672 Version 2 1 0 March 2012 Page 3 of 15 FRAN AIS RosetteSep HLA Cocktail d
12. 2 e mail info stemcell com 30175 Hannover e Germany Page 11 of 15 NOTE Campioni diversi dal sangue intero Anche se RosetteSep ottimizzato per l uso con il sangue intero possibile arricchire le cellule da altre fonti come crosta campioni di leucaferesi La concentrazione di cellule nucleate nel campione non deve superare 5 x 10 cellule mL e i globuli rossi devono essere presenti nel rapporto di almeno 30 50 globuli rossi per cellula nucleata Conversione di g in RPM Per convertire g in rpm usare la seguente formula RPM RF _ 1 118 x10 x raggio In cui RCF forza centrifuga relativa 9 RPM velocit centrifuga in giri al minuto Raggio raggio del rotore in cm Valutazione della purezza possibile misurare la purezza dei linfociti tramite la citometria a flusso dopo aver macchiato con anticorpi coniugati con fluorocromo contro CD3 ad es FITC anti CD3 Catalogo 10402 CD19 ad es PE anti CD19 Catalogo 10509 linfociti sono CD3 o CD19 si prega di notare che le cellule CD3 CD16 NK sono rimosse durante la procedura RosetteSep Risultati tipici seguenti risultati sono a scopo puramente illustrativo Sono stati ottenuti utilizzando campioni di adulti normali sani risultati relativi ai singoli campioni di pazienti possono variare TIPO DI CELLULA CATALOGO ARRICCHITA PUREZZA 15263HLA Linfociti totali 380 15283HLA cellule T CD3 amp B CD19 6 A
13. Les lymphocytes correspondent soit CD3 soit CD19 Noter que les cellules CD3 CD16 NK sont d pl te s pendant la proc dure RosetteSepTM R sultats typiques Ces r sultats sont uniquement donn s titre d illustration Ils ont t obtenus l aide d chantillons provenant d adultes normaux en bonne sant Les r sultats peuvent varier d un chantillon de donneur un autre E 5 TYPE DE CELLULES 2 REFERENCE N ENRICHIES PURETE Lymphocytes totaux 15263HLA 15283HLA cellules T CD3 et B CD19 gt 80 ASSISTANCE TECHNIQUE Pour joindre l Assistance technique veuillez nous contacter par email l adresse info stemcell com ou par t l phone au num ro 1 604 877 0713 Pour de plus amples informations www stemcell com veuillez visiter le site MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover Germany REF LOT Reference du Numero de lot Utiliser jusque catalogue MM AAAA A i PES Dispositif m dical Limites de Attention voir i 5 notice de diagnostic temp ratures i In vitro d instructions STERILE A ud EC RER Methode de Fabriquant nn i st rilisation utilisant hi pr a des techniques SMINANaUie d asepsie Europ enne Marquage CE tal STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com MDSS GmbH Schiffgraben 41 For T
14. Medio de densidad los pasos descritos en Plasma a C lulas enriquecidas US Medio de densidad Eritrocitos y c lulas no DA deseadas rosetadas 8 C lulas enriquecidas no rosetadas 940 dai ud STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com For Technical Assistance MDSS GmbH Tel 1 604 877 0713 Schiffgraben 41 30175 Hannover e Germany cE me 29672 Version 2 1 0 March 2012 Page 8 of 15 NOTAS Muestras de sustancias que no sean sangre total Aunque RosetteSep se ha optimizado para su uso con sangre total tambi n pueden enriquecerse c lulas procedentes de otras fuentes p ej muestras de capa leucocitaria leucaf resis La concentraci n de c lulas nucleadas en la muestra no debe exceder de 5 x 10 c lulas mL y la presencia de eritrocitos debe ser en una proporci n de al menos 30 a 50 por cada c lula nucleada Conversi n de g a RPM Para convertir g a rpm utilice la f rmula siguiente RCF RPM _ 1 118 x 10 x Radio Donde RCF fuerza centr fuga relativa g RPM velocidad de centrifugado en revoluciones por minuto Radio radio del rotor en cm Evaluaci n de la pureza Se puede medir la pureza de los linfocitos por medio de citometr a de flujo despu s de la tinci n con anticuerpos anti CD3 conjugados con un fluorocromo p ej FITC anti CD3 n de cat logo 10402 y CD19 p ej PE
15. SSISTENZA TECNICA Per assistenza tecnica contattarci per e mail all indirizzo info stemcell com o telefonare al numero 1 604 877 0713 Per ulteriori informazioni visitare www stemcell com MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover Germany REF Numero di catalogo o di riferimento LOT Lotto z Usare da MM AAAA AN Attenzione consultare i documenti allegati IVD Dispositivo medico diagnostico in vitro Conservare entro il range di temperatura STERILE A In sterilit sl ID del produttore nome e indirizzo EC REP Rappresentante autorizzato EC dalla Comunit Europea CE Marchio CE tal STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com 29672 For Technical Assistance MDSS GmbH IVD ivo Version 2 1 0 Tel 1 604 877 0713 Schiffgraben 41 C March 2012 e mail info stemcell com 30175 Hannover e Germany Page 12 of 15 DEUTSCH RosetteSep HLA Cocktail zur Anreicherung von T u B Lymphozyten 15263HLA 10 mL 15283HLA 40 mL Zur Markierung von 1000 mL Vollblut INTENDIERTE ANWENDUNG RosetteSep Cocktails zur Zellanreicherung wurden zur in vitro Zur Markierung von 250 mL Vollblut Anreicherung spezifischer Zell Populationen aus humanen erythrocytenhaltigen Probenmaterial einschlie lich Vollblut hergestellt Nu
16. TECHNOL E RosetteSep HLA Total Lymphocyte Enrichment Cocktail REF 15263HLA 10mL For labeling 250 mL of whole blood REF 15283HLA 40mL For labeling 1000 mL of whole blood ENGLISH INTENDED USE RosetteSep cell enrichment cocktails are designed for the in vitro enrichment of specific cell subsets from human cell sources including whole blood For professional in vitro diagnostic use only PRODUCT SPECIFICATIONS RosetteSep HLA Total Lymphocyte 15223HC 1 Enrichment Cocktail This cocktail contains a combination of mouse and rat monoclonal antibodies These antibodies are bound in bispecific Tetrameric Antibody Complexes TACs which are directed against cell surface antigens on human hematopoietic cells CD16 CD36 CD66b and glycophorin A on red blood cells The mouse monoclonal antibody subclass is IgG It should be kept in mind that this product is a biological reagent and as such cannot be completely characterized or quantified Some variability is unavoidable PRINCIPLE OF METHOD The RosetteSep antibody cocktail crosslinks unwanted cells in human whole blood to multiple red blood cells RBCs forming immunorosettes This increases the density of unwanted rosetted cells so that they pellet along with the free RBCs when centrifuged over a buoyant density medium such as Ficoll Paque PLUS Catalog 07917 07957 07967 Ficoll Paque PREMIUM Catalog 07908 07968 or RosetteSep DM L Catal
17. al irritant to eyes respiratory system and skin This product may also be harmful if ingested Avoid exposure through skin eye contact inhalation and ingestion SPECIAL MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED Density Medium Density medium refers to Ficoll Paque PLUS 07917 07957 07967 Ficoll PaqueTd PREMIUM 07908 07968 or RosetteSep DM L Catalog 15705 Recommended Medium Dulbecco s Phosphate Buffered Saline with 2 Fetal Bovine Serum PBS 2 FBS Catalog 07905 Catalog Catalog Ficoll Ficoll Paque PLUS and Ficoll Paque PREMIUM are trademarks of GE Healthcare Limited tal STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com 29672 For Technical Assistance MDSS GmbH IVD IVD Version 2 1 0 Tel 1 604 877 0713 Schiffgraben 41 C March 2012 30175 Hannover e Germany e mail info O stemcell com Page 1 of 15 HANDLING AND DIRECTIONS FOR USE ROSETTESEP PROCEDURE Ensure that blood sample recommended medium density medium Numbers refer to steps in Handling and Directions for Use see Special Materials Required but Not Provided and centrifuge are all at room temperature 15 25 C 1 Add RosetteSep HLA Cocktail at 40 pL mL of whole blood e g for 1 2 mL of whole blood add 80 uL of cocktail Mix well Ifusing samples other than fresh whole blood see Notes ll RosetteSep Incubate 20 minutes
18. blut hinzugeben z B bei 2 mL Vollblut 80 uL Cocktail hinzugeben Gut mischen Falls keine Vollblut Proben verwendet werden lesen Sie bitte den Abschnitt Anmerkungen 20 Minuten bei Zimmertemperatur 15 25 C inkubieren Probe mit einem gleichen Volumen von PBS mit 2 FBS verd nnen und vorsichtig mischen Antik rperkomplexe mit den roten ep Blutk rperchen quervernetzt in 4 Die verd nnte Probe auf dem Dichtemedium aufschichten ODER Das Dichtemedium unter die verd nnte Probe schichten Vermeiden Sie dabei die Vermischung von Dichtemedium und Probe Empfohlene Volumina siehe Tabelle 1 Bei der Verwendung von 50 mL konische R hren empfehlen wir mindestens 15 mL Dichtemedium um das Abnehmen der Interphase nach dem Zentrifugieren zu vereinfachen Tabelle 1 Empfohlene Volumina und R hrchengr en VOLLBLUT PBS 2 DICHTEMEDIUM ROHRCHEN mL FBS mL mL GR SSE mL 1 1 1 5 5 2 2 3 14 3 3 3 14 4 4 4 14 5 5 15 50 10 10 15 50 15 15 15 50 5 20 Minuten bei 1200 x g siehe Anmerkungen bei Zimmertemperatur 15 25 C ohne Bremse zentrifugieren 6 Zielzellen vom Dichtemedium entfernen Interphase Mitunter ist es schwierig die Zellen in der Interphase zu erkennen besonders wenn sehr seltene Zellen angereichert werden Es empfiehlt sich die Interphase gro z gig mit einem Teil des Dichtemediums aufzunehmen um eine optimale Gewinnung zu gew hrleisten Angereich
19. chtlinien einzuhalten 4 Dieses Produkt kann Reizungen der Augen des Atemsystems und der Haut verursachen Das Produkt kann beim Verschlucken sch dlich sein Der Kontakt durch die Haut Augenkontakt Einatmung und orale Aufnahme sollten vermieden werden NOTWENDIGE ABER NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTENE SONDERMATERIALIEN Dichtemedium Dichtemedium bezieht sich auf Ficoll Paque PLUS Katalognr 07917 07957 07967 Ficoll Paque PREMIUM Katalognr 07908 07968 bzw RosetteSep DM L Katalognr 15705 Empfohlenes Medium Dulbeccos Phosphat Kochsalzl sung mit 2 fetalem Rinderserum PBS 2 FBS Katalognr 07905 Ficoll Ficoll Paque PLUS und Ficoll Paque PREMIUM sind Marken der GE Healthcare Limited tal STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com 29672 For Technical Assistance MDSS GmbH IVD Version 2 1 0 Tel 1 604 877 0713 Schiffgraben 41 C March 2012 e mail info stemcell com 30175 Hannover e Germany Page 13 of 15 HANDHABUNG UND ROSETTESEP VERFAHREN ANWENDUNGSHINWEISE Die Zahlen beziehen sich auf die unter Handhabung und Stellen Sie sicher dass die Blutprobe das empfohlene Medium das Anwendungshinweise angegebenen Schritte Dichtemedium siehe Notwendige aber nicht im Lieferumfang enthaltene Sondermaterialien und die Zentrifuge Zimmertemperatur 15 25 C haben 1 RosetteSep HLA Cocktail zu 40 pL mL Voll
20. echnical Assistance Tel 1 604 877 0713 e mail info stemcell com 30175 Hannover e Germany CE IVD 29672 Version 2 1 0 March 2012 Page 6 of 15 ESPANOL RosetteSep de linfocitos totales 15263HLA 10 mL 15283HLA 40 mL USO PREVISTO Los c cteles de enriquecimiento celular RosetteSepTM est n dise ados para enriquecer in vitro subpoblaciones celulares espec ficas de origen humano incluida la sangre total para enriquecimiento Para marcar 250 mL de sangre total Para marcar 1000 mL de sangre total Destinado nicamente para profesionales del diagn stico in vitro ESPECIFICACIONES DEL PRODUCTO RosetteSep HLA para enriquecimiento REF N 2 15223HC 1 linfocitos totales El c ctel contiene una combinaci n de anticuerpos monoclonales de rat n y rata Estos anticuerpos est n ligados en complejos de anticuerpos tetram ricos tetrameric antibody complexes TAC biespecificos dirigidos contra los ant genos de la superficie celular de c lulas hematopoy ticas humanas CD16 CD36 CD66b y la glicoforina A en eritrocitos La subclase del anticuerpo monoclonal de rat n es IgG Se debe tener en cuenta que este producto es un reactivo biol gico y como tal no puede ser caracterizado ni cuantificado completamente Cierta variabilidad es inevitable PRINCIPIO DEL M TODO El c ctel de anticuerpos RosetteSep entrecruza las c lulas no deseadas en sangre total humana a m ltiples eritrocito
21. erte Zellen mit PBS 2 FBS waschen Wiederholen Angereicherte Zellen wie gew nscht verwenden Wir empfehlen dass die angereicherten Proben mit Salmiak lysiert werden um R ckst nde roter Blutk rperchen vor der Durchflusszytometrie zu entfernen dies kann w hrend des Waschvorgangs erfolgen oder falls rote Blutk rperchen nachfolgende Analysen beeintr chtigen Unerw nschte Zellen werden x RosetteSep mittels tetramerer Rosettenform gebracht Dichtemedium Plasma a Angereicherte Zellen TO Dichtemedium Rote Blutk rperchen und 9 unerw nschte Zellen in Rosettenform i 8 Angereicherte Zellen o_ nicht rosettenf rmig gt ud STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com For Technical Assistance MDSS GmbH Tel 1 604 877 0713 Schiffgraben 41 e mail info stemcell com 30175 Hannover e Germany cE me 29672 Version 2 1 0 March 2012 Page 14 of 15 ANMERKUNGEN Alternative Proben zu Vollblut Obwohl RosetteSep f r die Verwendung mit Vollblut optimiert wurde k nnen Zellen auch aus anderen erythrocytenhaltigen Probenmaterialien angereichert werden z B Buffy Coat Leukapherese Proben Die Konzentration der kernhaltigen Zellen in der Probe sollte 5 x 10 Zellen mL nicht berschreiten Rote Blutk rperchen RBK sollten mindestens im Verh ltnis von 30 50 RBKs pro kernhaltige Zelle v
22. ida de la capa enriquecida tras la centrifugaci n Tabla 1 Vol menes y tama os de tubo recomendados SANGRE PBS 2 MEDIO DE TAMA O DE TOTAL mL FBS mL DENSIDAD mL TUBO mL 1 1 1 5 5 2 2 3 14 3 3 3 14 4 4 4 14 5 5 15 50 10 10 15 50 15 15 15 50 e mail info stemcell com Centrifugar durante 20 minutos a 1200 x g consulte las Notas a temperatura ambiente 15 25 C y sin freno Retirar las c lulas enriquecidas de la interfase entre el medio de densidad y el plasma En algunas ocasiones es dif cil ver las c lulas en la interfase especialmente cuando se enriquecen c lulas muy poco comunes Es aconsejable retirar parte del medio de densidad junto con las c lulas enriquecidas a fin de asegurar una recuperaci n ptima Lavar las c lulas enriquecidas una vez con PBS 2 FBS Repetir Utilice las c lulas enriquecidas para el uso deseado Recomendamos lisar las muestras enriquecidas con cloruro de amonio para eliminar eritrocitos residuales antes del an lisis por citometr a de flujo esto se puede realizar como uno de los pasos de lavado o si los eritrocitos pueden interferir en ensayos posteriores Los n meros hacen referencia a Manipulaci n e instrucciones de uso mir SRosetteSep 5 Las c lulas no deseadas se entrecruzan con eritrocitos rosetados con los complejos de anticuerpos tetram ricos RosetteSep
23. ma Cellules enrichies 604 Milieu de gradient de densit Globules rouges et cellules ind sirables sous forme de rosettes 6 8 Cellules enrichies non sous forme de Ce rosettes e ud STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover e Germany 29672 Version 2 1 0 C March 2012 Page 5 of 15 NOTES chantillons autres que du sang total Bien que RosetteSep ait t optimis pour une utilisation avec du sang total les cellules peuvent tre enrichies partir d autres sources tel que la couche leucocyto plaquettaire des chantillons de leucaph r se La concentration de cellules nucl es dans l chantillon ne doit pas d passer 5 x 10 cellules mL et les globules rouges GR doivent tre pr sents un ratio d au moins 30 50 GR par cellule nucl e Conversion de g en tr min Pour convertir g en tr min utiliser la formule suivante tr min E 1 118 x 10 x Radius O FCR force centrifuge relative g tr min vitesse centrifuge en tour par minute Radius rayon du moteur en cm Contr le de la puret La puret des lymphocytes peut tre mesur e par cytom trie de flux apr s marquage l aide d un anticorps anti CD3 conjugu un fluorochrome par ex FITC anti CD3 R f rence N 10402 et CD19 par ex PE anti CD19 R f rence N 10509
24. n No congelar ESTABILIDAD El producto permanece estable a una temperatura de entre 2 y 8 C hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta PRECAUCIONES 1 Destinado nicamente a usuarios profesionales 2 No utilizar el c ctel si se ha producido una fuga del contenido del vial El c ctel no utilizado se puede desechar de acuerdo a los procedimientos est ndar de laboratorio para l quidos no peligrosos 3 Este producto debe ser manipulado por personal capacitado y observando las buenas pr cticas de laboratorio Una vez que se ha a adido el producto a c lulas humanas la suspensi n debe tratarse como peligro biol gico potencial La manipulaci n de los reactivos y el tratamiento de los residuos deber n realizarse observando toda la normativa local estatal o nacional 4 Este producto puede irritar los ojos el sistema respiratorio y la piel Este producto tambi n puede ser perjudicial si se ingiere Evitar la exposici n sobre la piel el contacto con los ojos la inhalaci n y la ingesta MATERIALES ESPECIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Medio de densidad Medio de densidad se refiere a Ficoll Paque PLUS n de cat logo 07917 07957 07967 Ficoll PaqueTM PREMIUM n 2 de cat logo 07908 07968 o RosetteSep DM L n de cat logo 15705 Medio recomendado Tamp n fosfato salino de Dulbecco con 2 de suero fetal bovino PBS 2 FBS n de cat logo 07905 Ficoll Ficoll Paque PLUS
25. og 15705 Desired cells are never labeled with antibody and are easily collected as a highly enriched population at the interface between the plasma and the buoyant density medium QUALITY CONTROL RosetteSep cell enrichment cocktails are aseptically manufactured using tightly controlled processes and pre tested components Each lot of RosetteSep cell enrichment cocktail is sterility tested according to USP standards and Quality Control performance tested in cell separation assays using human whole blood LIMITATIONS Product has been CE Marked in the European Union according to the 98 79 EC In Vitro Diagnostic Device Directive and complies with its requirements Additional terms and conditions may apply STORAGE Store at 2 8 C This product may be shipped at 15 25 C but should be refrigerated upon receipt Do not freeze STABILITY Product stable at 2 8 C until expiry date as indicated on label PRECAUTIONS 1 For professional users only 2 Do not use cocktail if vial contents have leaked Unused cocktail may be disposed of according to standard laboratory procedures for non hazardous liquids 3 This product should be handled by trained personnel observing good laboratory practices Once this product is added to human cells treat the suspension as potentially biohazardous Handling of reagents and disposal of wastes should observe all local state or national regulations 4 This product is a potenti
26. om 29672 For Technical Assistance MDSS GmbH IVD IVD Version 2 1 0 Tel 1 604 877 0713 Schiffgraben 41 C March 2012 30175 Hannover e Germany e mail info O stemcell com Page 4 of 15 MANIPULATION ET MODE D EMPLOI V rifier que l chantillon de sang le milieu recommand le milieu de gradient de densit cf Mat riel sp cial n cessaire non fourni et la centrifugeuse sont temp rature ambiante 15 25 C 1 Ajouter le cocktail HLA RosetteSep 40 uL mL de sang total par ex pour 2 mL de sang total ajouter 80 uL de cocktail Bien m langer En cas d utilisation d chantillons autres que du sang total frais se r f rer aux Notes Incuber 20 minutes temp rature ambiante 15 25 C Diluer l chantillon au avec du PBS 2 FBS puis m langer doucement Disposer l chantillon dilu au dessus du milieu de gradient de densit OU Disposer le milieu de gradient de densit sous l chantillon dilu Eviter de m langer entre le milieu de gradient de densit et l chantillon Se r f rer au Tableau 1 pour les recommandations de volume Pour des tubes coniques de 50 mL nous conseillons d utiliser 15 mL de milieu de gradient de densit afin de faciliter la r cup ration de la fraction enrichie apr s centrifugation Tableau 1 Volumes recommand s et Tailles des tubes SANG TOTAL PBS 2 FBS MITA DE TAILLE DU mL mL GRADIENT DE TUBE mL
27. ontrollierter Verfahren und zuvor getesteter Komponenten steril hergestellt Jede Charge RosetteSep Cocktails zur Zellanreicherung wird gem USP United States Pharmacopeia auf Sterilit t getestet und Qualit tskontrollen mit humanen Vollblut in Zelltrennungsanalysen durchgef hrt EINSCHR NKUNGEN Das Produkt ist in der Europ ischen Union gem IVD Richtlinie 98 79 EG f r In Vitro Diagnostika mit der CE Marke versehen und erf llt deren Anforderungen Je nach Land bzw Region k nnen ggf zus tzliche Bestimmungen zur Anwendung kommen LAGERUNG Lagerung bei 2 8 C Das Produkt kann bei einer Temperatur von 15 25 C transportiert werden muss aber nach Erhalt gek hlt gelagert werden Nicht einfrieren STABILIT T Produktstabilit t bei 2 8 C bis zum auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum VORSICHTSMABNAHMEN 1 Nur f r die professionelle Anwendung 2 Cocktail nicht verwenden wenn eine Besch digung der Umverpackung vorliegt Nichtverwendete Cocktails k nnen gem B den g ngigen Laborverfahren f r nicht gef hrliche Fl ssigkeiten entsorgt werden 3 Die Handhabung dieses Produkts ist nur ausgebildetem Personal gestattet das die Normen der guten Laborpraxis einh lt Wenn das Produkt humanen Zellen beigegeben wurde ist die Suspension als potentiell biologisch gef hrlich zu behandeln Bei der Handhabung der Reagenzien und der Entsorgung von Abfallstoffen sind s mtliche regionalen oder nationalen Ri
28. orliegen Umwandlung von g zu UpM Drehzahl Zur Umwandlung von g in UpM bitte folgende Formel verwenden UpM RZB 1 118 x 10 x Radius Wobei RZB Relative Zentrifugalbeschleunigung g UpM Umdrehung pro Minute Radius Rotorradius in cm Reinheitsanalyse Die Reinheit der erw nschten Zellen kann mittels Durchflusszytometrie nach der Einf rbung mit einem fluorochromkonjugierten anti CD3 Antik rper gemessen werden z B FITC anti CD3 Katalognr 10402 CD19 z B PE anti CD19 Katalognr 10509 Lymphozyten sind entweder CD3 oder CD19 Beachten Sie dass CD3 CD16 NK Zellen w hrend des RosetteSep Verfahrens entfernt werden Typische Ergebnisse Diese Ergebnisse dienen ausschlie lich Anschauungszwecken Sie wurden aus Proben normaler gesunder Erwachsener gewonnen Die Ergebnisse individueller Patientenproben k nnen voneinander abweichen KATALOGNR ANGEREICHERTER ZELLTYP REINHEIT 15263HLA Gesamtlymphozyten gt 80 15283HLA T CD3 amp B CD19 Zellen TECHNISCHE UNTERSTUTZUNG Weitere technische Unterst tzung erhalten Sie indem Sie eine E Mail an info stemcell com senden oder telefonisch unter 1 604 877 0713 Weitere Informationen finden Sie unter www stemcell com MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover Germany REF LOT Katalog oder Lotnummer Verbrauch bis Referenznummer MM JJJJ ie
29. ow cytometric analysis this can be done as one of the wash steps or if residual red blood cells will interfere with subsequent assays Plasma Enriched cells Density medium Red blood cells and unwanted cells rosetted 8 Enriched cells Ce unrosetted ud STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com For Technical Assistance MDSS GmbH Tel 1 604 877 0713 Schiffgraben 41 C e mail info stemcell com 30175 Hannover e Germany 29672 Version 2 1 0 March 2012 Page 2 of 15 NOTES Samples other than Whole Blood Although RosetteSep has been optimized for use with whole blood cells can be enriched from other sources e g buffy coat leukapheresis samples The concentration of nucleated cells in the sample should not exceed 5 x 10 cells mL and red blood cells RBCs should be present at a ratio of at least 30 50 RBCs per nucleated cell Conversion of g to RPM To convert g to rpm use the following formula RCF RPM EE a 1 118 x 10 x Radius Where RCF relative centrifugal force g RPM centrifuge speed in revolutions per minute Radius radius of rotor in cm Assessing Purity Purity of lymphocytes can be measured by flow cytometry after staining with fluorochrome conjugated antibodies against CD3 e g FITC anti CD3 Catalog 10402 and CD19 e g PE anti CD19 Catalog 10509 Lymphocytes are either CD3 or CD19 Note that CD3 CD
30. per utilizzatori professionisti 2 Non usare il cocktail in caso di perdite dalla fiala cocktail inutilizzati possono essere smaltiti in base alle procedure standard di laboratorio relative ai liquidi non pericolosi 3 Il prodotto deve essere utilizzato da personale qualificato in base alle buone prassi di laboratorio Una volta aggiunto il prodotto alle cellule umane trattare la sospensione come potenzialmente biopericolosa L utilizzo di reagenti e lo smaltimento di scarti devono essere svolti in conformit alle disposizioni locali statali o nazionali 4 Questo prodotto potenzialmente irritante per gli occhi il sistema respiratorio e la pelle Pu inoltre essere dannoso se ingerito Evitare l esposizione alla pelle il contatto con gli occhi l inalazione e l ingestione MATERIALI SPECIALI RICHIESTI MA NON FORNITI Mezzo di densit Il mezzo di densit si riferisce a Ficoll Paque PLUS Catalogo 07917 07957 07967 Ficoll Paque v PREMIUM Catalogo 07908 07968 o RosetteSep DM L Catalogo 15705 Mezzo consigliato Salina tamponata al fosfato Dulbecco con siero di bovino totale al 2 PBS 2 FBS Catalogo 07905 Ficoll Ficoll Paque PLUS e Ficoll Paque PREMIUM sono marchi di fabbrica di GE Healthcare Limited tal STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com MDSS GmbH Schiffgraben 41 For Technical Assistance Tel 1 604 877 0713
31. r f r professionelle in vitro Diagnostik PRODUKTSPEZIFIKATIONEN RosetteSep HLA Cocktail zur 15223HC 1 Anreicherung von T und B Lymphozyten Dieser Cocktail enth lt eine Mischung monoklonaler Antik rper von M usen und Ratten Die Antik rper sind in bi spezifischen tetramerischen Antik rperkomplexen TACs gebunden die gegen Zelloberfl chenantigene auf humanen h matopoetischen Zellen CD16 CD36 CD66b und Glykophorin A auf roten Blutk rperchen gerichtet sind Die Unterklasse der monoklonalen Mausantik rper ist IgG1 Es ist zu beachten dass dieses Produkt ein biologischer Reagenz ist und aus diesem Grunde nicht vollst ndig charakterisiert oder quantifiziert werden kann Gewisse Abweichungen sind unvermeidbar METHODISCHES PRINZIP Der RosetteSep Antik rper Cocktail quervernetzt unerw nschte Zellen und roten Blutk rperchen RBK im humanen Vollblut und bildet so Immunrosetten Auf diese Weise erh ht sich die Dichte der unerw nschten Zellen in den Rosetten so dass diese beim Zentrifugieren in einem Dichtemedium wie Ficoll Paque PLUS Katalognr 07917 07957 07967 Ficoll PaqueT PREMIUM Katalognr 07908 07968 oder RosetteSep DM L Katalognr 15705 nach unten zentrifugiert werden Die unmarkierten Zielzellen finden sich als hoch angereicherte Population in der Interphase zwischen Plasma und Dichtegradientenmedium QUALIT TSKONTROLLE RosetteSep Cocktails zur Zellanreicherung werden mittels streng k
32. s formando inmunorosetas Esto aumenta la densidad de las c lulas no deseadas rosetadas por lo que se precipitan junto a los eritrocitos libres cuando se centrifugan en un medio de densidad flotante como Ficoll Paque PLUS n de cat logo 07917 07957 07967 Ficoll Paque PREMIUM n de cat logo 07908 07968 o RosetteSep DM L n de cat logo 15705 Las c lulas deseadas no son nunca marcadas con anticuerpos y la poblaci n altamente enriquecida puede recogerse de forma sencilla en la intersecci n entre el plasma y el medio de densidad flotante CONTROL DE CALIDAD Los c cteles de enriquecimiento celular RosetteSep se fabrican de forma as ptica utilizando procesos estrictamente controlados y componentes probados previamente Cada lote de c ctel de enriquecimiento celular RosetteSepTM se somete a pruebas de esterilidad seg n las normas USP farmacopea estadounidense y de control de calidad con pruebas de rendimiento en ensayos de separaci n celular con sangre total humana LIMITACIONES El producto ha recibido la aprobaci n del Marcado CE en la Uni n Europea con conformidad de la Directiva 98 79 CE de Dispositivos de Diagn stico In Vitro y cumple con sus requisitos Podr n aplicarse t rminos y condiciones adicionales CONSERVACI N Conservar a una temperatura de entre 2 y 8 C Este producto se puede enviar a temperaturas de entre 15 y 25 C pero debe refrigerarse en el momento de la recepci
33. vec les GR libres lorsqu elles sont centrifug es par milieu de gradient de densit tel que Ficoll Paque PLUS Reference N 07917 07957 07967 Ficoll Paque PREMIUM R f rence N 07908 07968 ou RosetteSep DM L R f rence N 15705 Les cellules d int r t fortement enrichie par cette m thode ne sont jamais marqu es par un anticorps et sont facilement collect es interface entre le plasma et Ficoll Paque CONTR LE DE LA QUALIT Les cocktails d enrichissement en cellules RosetteSep sont fabriqu s en milieu st rile au moyen de processus strictement contr l s et de composants pr test s Chaque lot de cocktail d enrichissement en cellules RosetteSep est test pour la st rilit afin de r pondre aux normes USP ainsi qu un test de performance d isolation cellulaire sur sang totale humain et de contr le qualit GARANTIES ET LIMITES Ce produit a re u le marquage CE dans l Union Europ enne conform ment la Directive 98 79 EC relative aux Dispositifs M dicaux de Diagnostic n Vitro et se conforme ses obligations Des conditions suppl mentaires peuvent s appliquer CONSERVATION Conservation 2 8 C Ce produit peut tre transport 15 25 C mais doit tre r frig r d s r ception Ne pas congeler STABILIT Produit stable 2 8 C jusqu sa date d expiration comme indiqu sur l tiquette PR CAUTIONS 1 R serv aux professionnels 2 Ne
34. y Ficoll PaqueT PREMIUM son marcas comerciales de GE Healthcare Limited tal STEMCELL Technologies Inc 400 570 West 7 Avenue Vancouver BC V5Z1B3 Canada www stemcell com 29672 For Technical Assistance MDSS GmbH IVD IVD Version 2 1 0 Tel 1 604 877 0713 Schiffgraben 41 C March 2012 30175 Hannover e Germany e mail info O stemcell com Page 7 of 15 MANIPULACI N E INSTRUCCIONES DE USO PROCEDIMIENTO ROSETTESEP Asegurarse de que la muestra de sangre el medio recomendado el medio de densidad consulte el apartado Materiales especiales necesarios pero no suministrados y la centr fuga est n a temperatura ambiente 15 25 C 1 A adir c ctel de HLA RosetteSep en una proporci n de 40 uL mL de sangre total p ej para 2 mL de sangre total a adir 80 uL de c ctel Mezclar bien En caso de utilizar muestras que no sean sangre total fresca consulte las Notas Incubar durante 20 minutos a temperatura ambiente 15 25 C Diluir la muestra en un volumen equivalente de PBS 2 FBS y mezclar con cuidado A ada una capa de la muestra diluida sobre el medio de densidad O A ada una capa de medio de densidad bajo la muestra diluida Ponga atenci n para minimizar la posibilidad de que el medio de densidad se mezcle con la muestra Consulte las recomendaciones de volumen en la Tabla 1 Con tubos c nicos de 50 mL sugerimos utilizar 15 mL de medio de densidad para facilitar la recog
Download Pdf Manuals
Related Search