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GEN-PROBE APTIMA HPV 16 18/45 Genotype Assay

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Contents

1. M thode de r f rence Pos HPV 16 N g HPV 16 Pos HPV 16 N g HPV 16 n g HPV 18 45 pos HPV 18 45 pos HPV 18 45 n g HPV 18 45 Total Pos HPV 16 n g HPV 18 45 128 9 1 9 i N g HPV 16 0 43 0 1 44 Aptima HPV 16 18 45 pos HPV 18 45 Genotype Assa yp y Pos HPV 16 0 0 8 1 9 pos HPV 18 45 N g HPV 16 n g HPV 18 45 f 1 g 197 199 Total 126 44 9 199 378 N g n gatif Pos positif Concordance positive 98 3 176 179 IC 95 95 2 99 4 Concordance n gative 99 0 197 199 IC 95 96 4 99 7 Seuil de d tection du seuil clinique Le seuil de d tection SdD du seuil clinique est une concentration qui est positive sup rieure au seuil clinique 95 du temps Le SdD du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay a t d termin en testant des panels de transcrits in vitro TIV dilu s pour les g notypes 16 18 et 45 Avant de proc der aux tests le milieu pour transport d chantillon a t suppl ment avec le TIV diff rentes concentrations puis dilu avec des d chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep n gatifs individuels Trente r plicats de chaque taux de copie ont t test s avec chacun des trois lots de r actifs pour un total de 90 r plicats Les tests ont t ex cut s sur une p riode de 6 jours avec 3 s ries r alis es par jour chaque s rie comprenant 5 r plicats d un g notype et d une concentration donn s Le s
2. Les rapports de vraisemblance l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sont indiqu s dans le Tableau 13 r sultats corrig s pour le biais de v rification et dans le Tableau 14 non corrig s Les types de HPV 16 18 et ou 45 ont montr 17 1 fois plus de probabilit d tre pr sents chez une femme avec des l sions 2 CIN2 et 21 9 fois plus de probabilit d tre pr sents chez une femme avec des l sions 2 CINS 2 CIN2 2 CIN3 Interpr tation des r sultats du Aptima Assay Rapport de vraisemblance Rapport de vraisemblance IC 95 IC 95 a 17 1 21 9 Positif au HPV 16 et ou 18 45 6 2 46 9 7 3 65 2 a 4 2 3 8 Positif aux autres HPV HR 1 7 10 1 1 2 12 6 Er 0 7 0 7 N gatif au HPV HR 0 5 1 0 0 4 1 1 IC intervalle de confiance HR haut risque Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse 2 CIN2 2 CIN3 Interpr tation des r sultats du Aptima Assay Rapport de vraisemblance Rapport de vraisemblance IC 95 IC 95 ay 5 1 7 9 Positif au HPV 16 et ou 18 45 2 3 9 1 3 5 12 9 Le 1 4 1 2 Positif aux autres HPV HR 0 7 2 2 0 4 2 3 oer 0 4 0 1 N gatif au HPV HR 0 1 0 7 0 0 0 6 IC intervalle de confiance HR haut risque
3. 2 Sile r actif sonde reconstitu contient un pr cipit qui ne se dissout pas temp rature ambiante chauffez le 60 C maximum pendant 1 2 minutes Ne l utilisez pas tant que le pr cipit ou la turbidit n ont pas disparu Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 16 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Panther System 3 Sile WTCR contient un pr cipit chauffez le une temp rature entre 42 C et 60 C pendant 90 minutes maximum Laissez le WTCR parvenir a temp rature ambiante avant l emploi Ne l utilisez pas tant que le pr cipit n a pas disparu 4 Sile r actif de s lection contient un pr cipit chauffez le 60 C 1 C pendant 45 minutes maximum pour faciliter la dissolution du pr cipit M langez d licatement le flacon toutes les 5 10 minutes Laissez le r actif de s lection parvenir temp rature ambiante avant l emploi Ne l utilisez pas tant que le pr cipit ou la turbidit n ont pas disparu 5 M langez bien chaque r actif en le retournant doucement avant de le charger dans le syst me vitez la formation de mousse pendant le retournement des r actifs 6 Ne rajoutez pas de r actif dans les flacons Le Panther System reconna t et rejette les flacons qui ont t remplis nouveau D Manipulation des chantillons 1 Laissez les chantillons calibrateurs chantillons et tout chantillon externe de contr le de qualit fourni par l utilisateur parvenir tem
4. Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 35 AW 11244 901 Rev 002 FR Performances du test avec le Tigris DTS System Aptima Performances cliniques du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay avec les chantillons pr lev s avec le kit de collecte et de transport pour chantillon cervical Les chantillons pr lev s avec le kit CSCT ont t recueillis chez des femmes lors d un d pistage de routine ou d une visite de suivi puis test s avec le Aptima HPV Assay Des chantillons pr lev s avec le kit CSCT r siduels n 378 dont le r sultat tait positif avec le Aptima HPV Assay ont t test s avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Tigris DTS System Le g notype HPV de chaque chantillon a t d termin avec un test de g notypage de DNA Les chantillons dont les r sultats des tests de g notypage DNA et Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay taient en conflit ont t test s avec un test valid de s quen age par PCR apr s transcription inverse afin de d terminer leur tat HPV 16 HPV 18 et HPV 45 La concordance clinique positive et n gative du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay pour la d tection du High Risk HPV de type 16 18 et 45 a t d termin e Les r sultats sont pr sent s dans le Tableau 15
5. Performances du Panther System Assay suivi r siduels provenant de toutes les femmes valuables de l tude ASC US et de l tude NILM pr sentant des r sultats positifs avec le Aptima HPV Assay ont t admis pour tre test s avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System Les performances cliniques du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay r alis sur le Panther System dans la d tection des l sions 2 CIN2 et des n oplasies cervicales intra pith liales de grade 3 ou de pathologies cervicales plus graves 2 CIN3 ont t valu es Population ASC US 2 21 ans Performances cliniques du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Au total 404 femmes valuables g es de 21 ans ou plus avec des r sultats cytologiques d ASC US et des r sultats positifs avec le Aptima HPV Assay sur le Panther System avaient des chantillons cytologiques de suivi ligibles pour le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System Parmi celles ci 45 femmes ne disposaient pas d un chantillon cytologique de suivi en volume suffisant pour tre test dans cette tude et 6 avaient un diagnostic pathologique ind termin apr s analyse des valeurs manquantes elles n ont pas t inclues dans les calculs de performance Les 353 femmes valuables avec un tat pathologique concluant avaient des r sultats valides avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System et ce sur la base des tests r flexes d un r s
6. chantillon clinique 2 HPV 16 Positif 98 1 105 107 98 8 160 162 Faiblement positif 93 4 99 5 95 7 99 7 chantillon clinique 3 HPV 16 Positif 99 1 107 108 97 5 158 162 Faiblement positif 94 9 99 8 94 0 99 1 chantillon clinique 2 HPV 18 45 N oatif 100 107 107 100 162 162 Faiblement positif g 96 5 100 97 7 100 chantillon clinique 3 HPV 18 45 N oatif 100 108 108 100 162 162 Faiblement positif g 96 6 100 97 7 100 Cellules SiHa 0 001 cellule N gatif 97 2 105 108 98 1 158 161 Fortement n gatif g 92 1 99 1 94 8 99 4 Cellules HeLa 0 001 cellules N oatif 100 108 108 100 162 162 Fortement n gatif g 96 6 100 97 7 100 Cellules MS751 0 006 cellule N oatif 100 108 108 100 162 162 Fortement n gatif g 96 6 100 97 7 100 chantillon clinique 1 n gatif au HPV N gatif 1085 100 WONT 100 z on Posies ech 100 108 108 100 162 162 Echantillon clinique 2 n gatif au HPV N gatif 96 6 100 97 7 100 Echantillon 1 n gatif au HPV pr par avec N aatif 100 107 107 100 162 162 PreservCyt 9 96 5 100 97 7 100 Echantillon 2 n gatif au HPV pr par avec N aatif 100 107 107 100 162 162 PreservCyt g 96 5 100 97 7 100 Remarque La concordance en pourcentage a pu tre affect e par des variations lors de l ajout de substances la dilution et ou l aliquotage Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 58 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Pe
7. de d tergent 1 flacon IC R actif de contr le interne du HPV 16 18 45 Transcrit de RNA non infectieux dans une solution tamponn e contenant lt 5 de d tergent 1 flacon Bo te temp rature ambiante Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay conserver entre 15 C et 30 C d s r ception Symbole Composant Quantit AR Solution de reconstitution pour amplification du HPV 16 18 45 Solution aqueuse contenant des conservateurs 1 flacon ER Solution de reconstitution enzymatique du HPV 16 18 45 Solution tamponn e HEPES contenant un surfactant et du glyc rol 1 flacon PR Solution de reconstitution de sonde du HPV 16 18 45 Solution tamponn e de succinate contenant lt 5 de d tergent 1 flacon S R actif de s lection du HPV 16 18 45 Solution tamponn e de borate 600 mM contenant un surfactant 1 flacon TCR R actif de capture de cible du HPV 16 18 45 Acide nucl ique non infectieux dans une solution tamponn e contenant une phase solide lt 0 5 mg ml Collets de reconstitution 1 flacon 3 Fiche des codes barres du lot de r f rence 1 fiche Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 8 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Tigris DTS System Boite de calibrateurs Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay n de r f 303235 conserver entre 2 C et 8 C d s r ception suite Symbole Composant Quantit PCAL1 Calibrateur positif 1 HPV 16 18
8. 0 6 1 9 Re 0 2 0 2 N gatif au HPV HR 0 1 0 4 0 1 0 4 IC intervalle de confiance HR haut risque Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 29 AW 11244 901 Rev 002 FR Performances du test avec le Tigris DTS System Aptima Population NILM 2 30 ans Performances cliniques du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay avec les chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep Au total l tude a inclus 540 femmes valuables de 30 ans ou plus avec des r sultats cytologiques de NILM et des r sultats positifs avec le Aptima HPV Assay qui avaient des chantillons cytologiques de suivi ligibles pour le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Parmi celles ci 25 femmes 18 femmes ayant subi une colposcopie et 7 n en ayant pas subi ne disposaient pas d un chantillon cytologique de suivi en volume suffisant pour tre test dans cette tude apr s analyse des valeurs manquantes elles n ont pas t inclues dans les calculs de performance Les 515 femmes valuables avaient des r sultats valides avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Parmi celles ci 317 ont subi une colposcopie Quinze 15 femmes pr sentaient des l sions 2 CIN2 et 10 des l sions 2 CIN3 283 femmes avaient un r sultat d histologie Normal CIN1 19 femmes avaient un ta
9. 26 9 0 7 23 4 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 10 7 6 9 pos HPV 18 45 uniquement 0 0 22 5 0 0 16 2 Positif Pos HPV 16 Seip adds Pos HPV 16 et 18 45 S O S 0 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR st 1 8 g 1 2 5 6 0 1 3 5 5 0 3 2 Pos ou n g Pos HPV HR 2 6 7 5 1 3 5 2 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR 0 6 of g 9 9 0 1 1 2 0 0 0 7 Pr valence 0 9 0 5 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay HR haut risque SO Sans objet N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Tableau 9b Population NILM 2 30 ans Risque absolu de l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay estimations non corrig es 2 CIN2 2 CIN3 R sultat du Aptima AHPV GT Interpr tation HPV Assay R sultat du test p Risque absolu Risque absolu IC 95 IC 95 Pos HPV 16 et ou 11 5 7 61 9 8 6 61 pos HPV 18 45 Pos HPV 16 et ou HPV 18 45 5 4 18 9 4 6 15 2 Pos HPV 16 12 9 4 31 12 9 4 31 n g HPV 18 45 Ros HP 18 unlavement 4 0 26 0 4 3 23 8 N g HPV 16 A 10 0 3 30 6 7 2 30 pos HPV 18 45 Pos HPV 18 45 uniquement 2 4 23 0 0 8 17 7 Positif 7 N g HPV 16 pos HPV 18 45 Pos HP
10. Faites tournoyer en douceur la solution dans le flacon pour bien la m langer vitez la formation de mousse en tournoyant le flacon Figure 1 tape 4 h Attendez que le r actif lyophilis se dissolve puis retournez nouveau les flacons assembl s en inclinant un angle de 45 pour minimiser la formation de mousse Figure 1 tape 5 Laissez la totalit du liquide retourner dans le flacon en plastique i Retirez le collet de reconstitution et le flacon Figure 1 tape 6 j Rebouchez le flacon Enregistrez les initiales de l op rateur ainsi que la date de reconstitution sur l tiquette Figure 1 tape 7 k Jetez le collet de reconstitution et le flacon Figure 1 tape 8 Avertissement vitez la formation de mousse lors de la reconstitution des r actifs La mousse interf re avec le d tecteur de niveau du Tigris DTS System Remarque M langez soigneusement le r actif d amplification le r actif enzymatique le r actif sonde et le r actif de s lection en les retournant doucement avant de les charger dans le syst me Evitez la formation de mousse pendant le retournement des r actifs Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 10 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Tigris DTS System 2 3 1 RY 3 a VANE Figure 1 Processus de reconstitution du Tigris DTS System Pr paration de la solution de r actif de capture de cible working Target Capture Reagent
11. Fortement n gatif 9 92 1 99 1 94 7 99 4 Echantillon clinique 3 HPV 16 N aatif 100 108 108 99 4 161 162 Fortement n gatif 9 96 6 100 96 6 99 9 Echantillon clinique 3 HPV 18 45 N aatif 80 6 87 108 81 5 132 162 Fortement n gatif 9 72 1 86 9 74 8 86 7 Echantillon clinique 1 n gatif au HPV N gatif eee On Tee RU Echantillon clinique 2 n gatif au HPV N gatif ns MOTT 100 chantillon clinique 3 n gatif au HPV N gatif 066 400 pe on IC intervalle de confiance Remarque La concordance en pourcentage a pu tre affect e par des variations lors de l ajout de substances la dilution et ou l aliquotage Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 39 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du test avec le Tigris DTS System R activit crois e La sp cificit analytique du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay a t valu e avec des groupes d chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep r siduels dilu s au 1 2 9 avec du STM comparable aux chantillons transf r s dans un tube de transfert d chantillons Aptima et suppl ment s avec des bact ries levures ou mycoses de culture des virus de culture ou des transcrits in vitro de HPV non cibl Les organismes et les concentrations test es pour lesquels aucune r activit crois e n a t observ e sont identifi s dans le Tableau 18 Les crit res de l tude pour valuer l effet de la pr sence d un micro o
12. Fortement positif 96 6 100 97 7 100 TIV de HPV 18 260 copies N gatif 100 107 107 100 162 162 Fortement positif g 96 5 100 97 7 100 TIV de HPV 45 350 copies N oatif 99 1 107 108 99 4 161 162 Fortement positif g 94 9 99 8 96 6 99 9 chantillon clinique 1 HPV 16 Positif 100 108 108 100 162 162 Fortement positif 96 6 100 97 7 100 chantillon clinique 1 HPV 18 45 N oatif 100 108 108 100 161 161 Fortement positif g 96 6 100 97 7 100 Cellules SiHa 4 cellules Fortement positif et Positif 100 108 108 100 162 162 cellules HeLa 0 7 cellule Faiblement positif 96 6 100 97 7 100 Cellules SiHa 0 4 cellule Faiblement positif et Positif 99 1 107 108 97 5 158 162 cellules HeLa 7 cellules Fortement positif 94 9 99 8 94 0 99 1 Cellules SiHa 0 4 cellule Positif 99 1 107 108 97 5 158 162 Faiblement positif 94 9 99 8 94 0 99 1 Cellules HeLa 0 7 cellules N oatif 100 108 108 100 162 162 Faiblement positif g 96 6 100 97 7 100 Cellules MS751 0 2 cellule N gatif 100 108 108 99 4 158 159 Faiblement positif 9 96 6 100 96 5 99 9 TIV de HPV 16 24 copies Positif 100 107 107 96 9 157 162 Faiblement positif 96 5 100 93 2 98 7 TIV de HPV 18 26 copies N aatif 100 108 108 100 162 162 Faiblement positif g 96 6 100 97 7 100 TIV de HPV 45 35 copies N oatif 100 108 108 100 162 162 Faiblement positif g 96 6 100 97 7 100
13. dure de test pour le Tigris DTS System ou Proc dure de test pour le Panther System pour de plus amples informations Recommandations concernant les chantillons G Maintenez des conditions de temp rature ad quates pendant le transport et la conservation des chantillons pour pr server leur int grit La stabilit des chantillons na pas t valu e dans des conditions de transport autres que celles recommand es Les dates de p remption figurant sur les kits et les tubes de collecte transfert d chantillon s adressent au site de transfert et non l tablissement effectuant les tests Les chantillons pr lev s transf r s avant ces dates de p remption sont valides pour des tests dans la mesure ou ils ont t transport s et conserv s conform ment a la notice du test correspondante m me si ces dates de p remption sont d pass es depuis lors Les chantillons peuvent tre infectieux Respectez les pr cautions universelles lors de la r alisation de ce test Le responsable du laboratoire devra avoir tabli des m thodes de manipulation et d limination ad quates Seul le personnel ayant re u une formation ad quate pour manipuler des substances infectieuses devra tre autoris effectuer cette proc dure de diagnostic vitez toute contamination crois e lors des tapes de manipulation des chantillons Veillez viter tout contact entre les diff rents r cipients d chantillons et ne pas pass
14. pour de plus amples informations sur la proc dure avec ce syst me A Pr paration de la zone de travail Nettoyez les plans de travail sur lesquels les r actifs et les chantillons seront pr par s Essuyez les plans de travail et les pipeteurs avec une solution d hypochlorite de sodium de 2 5 3 5 0 35 M 0 5 M Laissez la solution d hypochlorite de sodium au contact des surfaces et des pipeteurs pendant au moins 1 minute avant de rincer l eau Ne laissez pas s cher la solution d hypochlorite de sodium Couvrez la surface de la paillasse sur laquelle les r actifs et les chantillons seront pr par s avec des protections de laboratoire absorbantes propres envers plastifi B Pr paration des r actifs d un nouveau kit Remarque La reconstitution des r actifs doit tre effectu e avant d entreprendre toute t che sur le Panther System 1 Afin de reconstituer le r actif d amplification le r actif enzymatique et le r actif sonde combinez les flacons de r actif lyophilis la solution de reconstitution Si les solutions de reconstitution sont r frig r es laissez parvenir temp rature ambiante avant de les utiliser a Faites correspondre chaque solution de reconstitution avec son r actif lyophilis V rifiez que la solution de reconstitution et le r actif lyophilis ont des couleurs d tiquettes correspondantes avant de mettre en place le collet de reconstitution b V rifiez les num ros
15. s Manual Manuel de l op rateur du syst me ThinPrep 2000 Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 42 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima R sultats attendus avec le Panther System Pr valence du MRNA du High Risk HPV R sultats attendus avec le Panther System Prevalence du mRNA du High Risk HPV La pr valence d une infection par High Risk HPV varie consid rablement et est influenc e par plusieurs facteurs dont le plus important est l ge De nombreuses tudes ont analys la pr valence du HPV en s appuyant sur la d tection du DNA du HPV cependant peu d tudes rapportent la pr valence en fonction de la d tection du MRNA oncog ne du HPV Des femmes provenant de divers sites cliniques n 18 repr sentant une vaste distribution g ographique et une population vari e 10 Etats au sein des Etats Unis ont t inscrites l essai CLEAR une tude clinique prospective afin d valuer le Aptima HPV Assay qui d tecte 14 types de High Risk HPV Les chantillons des femmes de l essai CLEAR dont les r sultats taient positifs avec le Aptima HPV Assay sur le Panther System ont t valu s dans 3 sites de test avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System dans une tude clinique s par e La pr valence du HPV 16 18 45 ainsi que des 11 types restants de High Risk HPV observ s dans tude clinique d apr s les r sultats des tests r alis s avec le Aptima HPV Assay et le Aptim
16. tudes en utilisant le m me panel de 24 chantillons L tude 1 a t men e dans 3 sites de test externes afin de d terminer la reproductibilit du test L tude 2 a t men e en interne afin de d terminer la pr cision intra laboratoire Le panel comprenait 17 chantillons positifs au HPV 16 et ou 18 45 avec des concentrations gales ou sup rieures au seuil de d tection du test positivit attendue 95 3 chantillons positifs au HPV 16 et ou 18 45 avec des concentrations inf rieures au seuil de d tection du test positivit attendue gt 0 lt 25 et 4 chantillons n gatifs au HPV Les chantillons du panel positifs au HPV 16 et ou 18 45 ont t pr par s en ajoutant des transcrits in vitro ou des cellules de culture infect es par le HPV SiHa HeLa et MS751 ATCC Manassas Virginia Etats Unis des groupes d chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep r siduels dilu s avec du STM ou en diluant des chantillons cliniques de HPV 16 18 et ou 45 dans des groupes d chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep r siduels dilu s avec du STM Les chantillons du panel n gatifs au HPV ont t pr par s avec des groupes d chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep ou avec de la solution PreservCyt dilu s avec du STM Dans l tude 1 2 op rateurs dans chacun des 3 sites de test 1 appareil par site ont r alis 2 listes de travail du Aptima HPV 16 18 45 Genotype As
17. wTCR a Faites correspondre les flacons appropri s de TCR et de IC b V rifiez les num ros de lot des r actifs sur la fiche des codes barres du lot de r f rence pour vous assurer que les r actifs appropri s sont appari s Ouvrez le flacon de TCR et posez le bouchon sur un plan de travail propre et couvert Ouvrez le flacon de IC et versez la totalit du contenu dans le flacon de TCR Il est normal qu une petite quantit de liquide reste dans le flacon de IC e Rebouchez le flacon de TCR et faites tournoyer en douceur la solution pour m langer le contenu Evitez la formation de mousse pendant cette tape f Enregistrez les initiales de l op rateur ainsi que la date du jour sur l tiquette g Jetez le flacon de IC et son bouchon h Un pr cipit peut se former dans le wTCR et produire des r sultats non valides dus des erreurs de v rifications du volume Il est possible de dissoudre le pr cipit en chauffant le WTCR entre 42 C et 60 C jusqu 90 minutes maximum Laissez le wTCR parvenir a temp rature ambiante avant l emploi Ne l utilisez pas tant que le pr cipit n a pas disparu Pr paration du r actif de s lection a V rifiez le num ro de lot du r actif sur la fiche des codes barres du lot de r f rence pour vous assurer qu il appartient au kit b Si le r actif de s lection contient un pr cipit chauffez le 60 C 1 C pendant 45 minutes maximum pour faciliter la dissolution du
18. 0 0 0 0 N g HPV 16 18 45 P tres HPV HR 32 Le g os autres 1 6 6 3 0 6 4 9 z 4 6 3 2 Pos ou n g Pos HPV HR 2 8 7 4 1 7 5 9 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR De oe gati g eg 0 2 2 5 0 0 4 8 Pr valence 1 1 0 8 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay HR haut risque N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Remarque Les estimations des performances corrig es pour le biais de v rification dans la section Tigris DTS System et la section Panther System utilisent diff rentes m thodes d imputation Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 51 AW 11244 901 Rev 002 FR Performances du Panther System Assay Aptima Tableau 28b Population NILM 2 30 ans Risque absolu de l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay estimations non corrig es ee list dak ns 2 CIN2 2 CIN3 sultat du Aptima sultat du ae HPV Assay AHPV GT Assay Interpr tation Risque absolu Risque absolu IC 95 IC 95 Pos HPV 16 et ou Pos HPV 16 et ou 10 8 7 65 9 2 6 65 pos HPV 18 45 HPV 18 45 5 1 17 7 4 3 14 2 Pos HPV 16 Pos HPV 16 12 5 4 32 12 5 4 32 n g HPV 18 45
19. 0 9 12 3 Pos HPV 16 Pos HPV 16 0 0 17 0 0 17 n g HPV 18 45 uniquement 0 0 15 5 0 0 14 3 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 15 0 3 20 10 0 2 20 pos HPV 18 45 uniquement 3 9 30 6 1 0 22 8 Positif Pos HPV 16 30 39 ans pos HPV 18 45 Pos HPV 16 et 18 45 S O 0 0 S O 0 0 F 3 6 4 111 2 7 3 111 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR 1 2 6 2 0 7 4 7 Pos ou n g Pos HPV HR o Don a N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR 4 oy D ee Pr valence 2 4 9 378 1 6 6 378 Pos HPV 16 et ou Pos HPV 16 et ou 14 3 4 28 14 3 4 28 pos HPV 18 45 HPV 18 45 4 8 26 4 5 0 21 9 Pos HPV 16 Pos HPV 16 26 7 4 15 26 7 4 15 n g HPV 18 45 uniquement 6 4 47 9 6 5 43 1 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 0 0 12 0 0 12 DE pos HPV 18 45 uniquement 0 0 21 5 0 0 18 6 Positif Pos HPV 16 0 0 0 1 0 0 0 1 gt 40 ans pos HPV 18 45 POS HPV 16 et 18 45 0 0 93 4 0 0 93 1 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR nner oma Pos oun g Pos xpvur 6907110 ee N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR Gi oy foes Pr valence 2 6 11 430 1 2 5 430 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay HR haut risque SO Sans objet N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotype As
20. 1 9 4 1 0 11 6 0 3 0 3 lt 0 1 2 6 5 268 11 268 0 268 31 268 19 6 656 18 6 656 1 6 656 176 6 656 Site de test 4 5 6 6 6 0 3 27 0 0 4 0 4 lt 0 1 3 6 17 304 20 304 1 304 82 304 16 3 610 16 3 610 1 3 610 130 3 610 2 9 6 3 6 0 3 26 4 0 5 0 4 0 3 6 29 303 11 303 1 303 80 303 18 3 614 15 3 614 0 3 614 130 3 614 3 8 2 5 6 0 3 24 7 0 4 0 5 0 3 6 25 304 17 304 1 304 75 304 16 3 615 18 3 615 0 3 615 131 3 615 HR haut risque SO Sans objet Pos positif Remarque Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay sur le Panther System ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System aux fins de l analyse Types de HPV 31 33 35 39 51 52 56 58 59 66 et 68 Dans la population NILM les sujets dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay sur le Panther System n ont pas tous t test s avec le Aptima 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System Pour l analyse par site de test les r sultats de ces femmes ont t al atoirement affect s l un des 3 sites de test Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 43 AW 11244 901 Rev 002 FR Performances du Panther System Assay Aptima Performances du Panther System Assay Conception de l tude clinique portant sur le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay r alis sur le Panther System avec les cha
21. 1086 100 Wor 100 chantillon 1 n gatif au HPV pr par avec N aatif 100 107 107 100 162 162 PreservCyt 9 96 5 100 97 7 100 Echantillon 2 n gatif au HPV pr par avec N aatif 100 107 107 100 162 162 PreservCyt g 96 5 100 97 7 100 IC intervalle de confiance Remarque La concordance en pourcentage a pu tre affect e par des variations lors de l ajout de substances la dilution et ou l aliquotage Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 59 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du Panther System Assay R activit crois e Les tests de substances a r action crois e potentielle avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay ont t men s au moyen du Tigris DTS System Consultez R activit crois e Tableau 18 dans la section Tigris DTS System pour voir les r sultats Interf rence Les tests de substances potentiellement interf rentes avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay ont t men s au moyen du Tigris DTS System Consultez Interf rence Tableau 19 dans la section Tigris DTS System pour voir les r sultats Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 60 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Bibliographie Bibliographie 1 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Walboomers J M M V Jacobs M M Manos F X Bosch J A Kummer K V Shah P J Snijders J Peto C J Meijer N Mu oz 1999 Human papillomav
22. 2 CIN2 et 2 CIN3 chez les femmes valuables avec un r sultat cytologique d ASC US s levait respectivement 8 8 et 3 7 Les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay d apr s le r sultat du Aptima HPV Assay et le diagnostic du panel d examen histologique consensuel sont pr sent s dans le Tableau 2 R sultat du Diagnostic du panel d examen histologique consensuel A AHPV GT RR Aptima HPV x Interpr tation vs Assay R sultat du test Ind termin Normal CIN1 CIN2 CIN3 Cancer Total Pos HPV 16 N g HPV 18 45 Pos HPV 16 1 27 18 11 14 0 71 N g HPV 16 Pos HPV 19 45 Pos HPV 18 45 3 23 14 3 3 1 47 PRE Pos HPV 16 Pos HPV 16 et Pos HPV 18 45 18 45 1 o 1 1 0 2 N g HPV 16 Pos autres HPV N g HPV 18 45 R 2 125 73 23 10 0 233 Total 6 176 105 38 28 1 354 N gatif eis N g HPV HR 13 458 75 8 4 0 558 Total 19 634 180 46 32 1 912 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay CIN1 n oplasie cervicale intra pith liale de grade 1 HR haut risque N g n gatif Pos Positif Tous les chantillons disposaient de r sultats finaux lors du test final ou apr s la r solution des r sultats initiaux non valides par la proc dure 19 femmes se sont rendues la consultation pour la colposcopie mais un diagnostic na pas pu tre tabli pour les raisons suivantes lt 5 chantillons de biopsie obtenus tous avec un r sultat d h
23. 30 2 5x10 copies ml HPV 70 2 5x10 copies ml HPV 34 2 5x10 copies ml HPV 73 2 5x10 copies ml HPV 42 2 5x10 copies ml HPV 82 2 5x10 copies ml HPV 43 2 5x10 copies ml HPV 85 2 5x10 copies ml HPV 44 2 5x10 copies ml Levures protozoaires Candida albicans 1x10 CFU ml 1x10 cellules ml Trichomonas vaginalis CFU Colony Forming Units unit s formant colonies IFU Inclusion Forming Units unit s de formation des inclusions PFU Plaque Forming Units unit s formant plages TDs59 dose qui provoque 50 de tumeurs TCID50 dose infectant 50 des cultures tissulaires Transcrit in vitro test Bien qu aucune r activit crois e n ait t observ e avec Trichomonas vaginalis des interf rences ont t not es voir ci dessous La sensibilit analytique du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay en pr sence de micro organismes a t valu e avec le m me panel d crit dans le Tableau 18 qui a galement t suppl ment avec une faible concentration de cellules SiHa infect es au HPV 1 6 cellule r action et de cellules HeLa infect es au HPV 0 3 cellule r action Les crit res de l tude pour valuer l effet de la pr sence d un micro organisme sur la sensibilit du test taient bas s sur la positivit La pr sence de micro organismes n a pas interf r avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay l exception du Trichomonas vaginalis TV Des interf ren
24. 45 Transcrit in vitro de HPV 18 non infectieux a 750 copies par ml dans une solution tamponn e contenant lt 5 de d tergent 5 flacons PCAL2 Calibrateur positif 2 HPV 16 18 45 Transcrit in vitro de HPV 16 non infectieux a 1 000 copies par ml dans une solution tamponn e contenant lt 5 de d tergent 5 flacons NCAL Calibrateur n gatif HPV 16 18 45 Solution tamponn e contenant lt 5 de d tergent 5 flacons Mat riel requis mais disponible s par ment Remarque Les r f rences du mat riel disponible chez Hologic sont indiqu es sauf indication contraire Tigris DTS System Kit pour s ries Tigris DTS System Unit s multi tube Multi tube Units MTU Sac pour embouts MTU usag s D flecteur de d chets pour MTU Couvre d chets pour MTU Kit de liquides Aptima Assay Solution de lavage Aptima tampon pour solution de d sactivation Aptima et r actif huileux Aptima Kit Aptima Auto Detect Kit Aptima System Fluid Preservative Embouts 1 000 ul conductifs d tecteur de liquide Kit de transfert d chantillons Aptima Kit de collecte et de transport pour chantillon cervical Aptima Bouchons p n trables Aptima Bouchons non p n trables de remplacement Bouchons de rechange pour coffrets de 100 tests Solutions de reconstitution pour r actif d amplification et r actif sonde Solution de reconstitution pour r actif enzymatique TCR et solution de reconstitution de s lection Eau de javel solut
25. HPV 18 45 HPV 18 45 12 4 55 0 4 1 36 0 Pos HPV 16 Pos HPV 16 80 0 4 5 40 0 2 5 n g HPV 18 45 uniquement 36 8 99 0 6 3 78 2 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 10 0 1 10 10 0 1 10 pos HPV 18 45 uniquement 0 4 36 6 0 4 33 1 Positif HU os re pos HPV 18 45 Pos HPV 16 et 18 45 S O 0 0 S O 0 0 F 3 2 1 31 0 0 31 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR 0 1 13 2 0 0 7 8 13 0 6 46 6 5 3 46 Pos ou n g Pos HPV HR 6 1 19 7 1 7 10 9 Palai j y A 1 9 4 210 1 0 2 210 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR 0 6 3 4 0 1 2 0 Pr valence 3 9 10 256 2 0 5 256 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay HR haut risque SO Sans objet N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 47 AW 11244 901 Rev 002 FR Performances du Panther System Assay Aptima Le risque relatif de maladie d apr s les r sultats positifs et n gatifs du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sont pr sent s dans le Tableau 24 Les femmes pr sentant les types de HPV 16 18 et ou 45 ont montr 11 1 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN2 et 22 8 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN3 que les femmes ne pr sentant aucun type de High Risk HPV Les f
26. Pos HPV 16 n g HPV 18 45 Pos HPV 16 2 27 0 0 3 1 33 N g HPV 16 pos HPV 18 45 Pos HPV 18 45 1 26 1 1 0 2 31 Pasit Pos HPV 16 Pos HPV 16 et os os e pos HPV 18 45 18 45 9 E p g 8 o 9 N g HPV 16 Pos autres n g HPV 18 45 HPV HR 16 a 3 4 0 a Total 19 271 12 5 7 3 317 ee N g HPV N gatif 46 18 45 N g HPV HR 25 483 17 4 1 0 530 Total 44 754 29 9 8 3 847 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay HR haut risque N g n gatif Pos positif Tous les chantillons disposaient de r sultats finaux valides lors du test initial ou apr s r solution des r sultats initiaux non valides par la proc dure 44 femmes se sont rendues la consultation pour la colposcopie mais un diagnostic na pas pu tre tabli pour les raisons suivantes un consensus n a pas pu tre obtenu en raison de d chantillons inad quats n 28 d aucune biopsie pr lev e en raison de facteurs sous jacents n 13 d aucune biopsie pr lev e ou examin e pour cause d erreur n 3 Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Trois femmes ont pr sent un adenocarcinoma in situ AIS Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 30 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du test avec le Tigris DTS System Sur les 515 femmes dont les r sultats t
27. au HPV N gatif 96 6 100 97 7 100 chantillon clinique 3 n gatif au HPV N gatif os dau Or IC intervalle de confiance Remarque La concordance en pourcentage a pu tre affect e par des variations lors de l ajout de substances la dilution et ou l aliquotage Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 38 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du test avec le Tigris DTS System Tableau 17b Etudes 1 et 2 de pr cision du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Description du panel et concordance en pourcentage avec les r sultats attendus pour le HPV 18 45 Din Concordance en pourcentage IC 95 Description du panel R sultat attendu z z cellules r action pour le HPV 18 45 pipe ede 3 sites de test 1 site de test Cellules SiHa 3 0 cellule N aatif 100 108 108 98 8 160 162 Moyennement positif 9 96 6 100 95 6 99 7 Cellules HeLa 0 6 cellules Positif 93 5 101 108 98 1 159 162 Moyennement positif 87 2 96 8 94 7 99 4 Cellules MS751 11 0 cellule Positif 92 6 100 108 92 6 150 162 Moyennement positif 86 1 96 2 87 5 95 7 chantillon clinique 1 HPV 16 N aatif 100 107 107 100 162 162 Moyennement positif 9 96 5 100 97 7 100 chantillon clinique 1 HPV 18 45 Positif 99 1 107 108 99 4 161 162 Moyennement positif 94 9 99 8 96 6 99 9 Cellules SiHa 1 6 cellule Faiblement positif et P
28. cible d amplification et de d tection du test Il n est pas pr vu pour contr ler l ad quation de l chantillonnage cervical Un r sultat n gatif avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay n exclut pas la possibilit d anomalies cytologiques ou d une l sion CIN2 CIN3 ou un cancer sous jacents ou futurs Le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay fournit des r sultats qualitatifs Les niveaux d analytes ne sont pas n cessairement associ s aux valeurs S CO c d le niveau d expression du MRNA d un chantillon n est pas n cessairement en corr lation avec l ampleur d un signal de test positif Des valeurs de S CO lev es peuvent tre constat es dans les chantillons qui sont proches du seuil de d tection du test et des valeurs de S CO faibles peuvent tre constat es dans les chantillons qui d passent le seuil de d tection La r alisation de plusieurs tests sur un chantillon peut produire des valeurs S CO diff rentes La d tection du mRNA du High Risk HPV types 16 18 et 45 d pend du nombre de copies pr sentes dans l chantillon et peut tre affect e par les m thodes de pr l vement des chantillons les facteurs relatifs au patient le stade de l infection et la pr sence de substances interf rentes L infection HPV n est pas indicative d une LIHG cytologique ni d une l sion CIN sous jacente de haut grade et n implique pas le d veloppement ult rieur d une l sion CIN2 ou CIN3 ou d u
29. cytologique de suivi en volume suffisant pour tre test dans cette tude et 6 avaient un diagnostic pathologique ind termin apr s analyse des valeurs manquantes elles n ont pas t inclues dans les calculs de performance Les 348 femmes valuables avec un tat pathologique concluant avaient des r sultats valides avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et ce sur la base des tests r flexes d un r sultat positif avec le Aptima HPV Assay Soixante sept 67 femmes avaient des l sions 2 CIN2 et 29 avaient des l sions 2 CIN3 Sur les 348 femmes valuables dont les r sultats taient positifs avec le Aptima HPV Assay 117 avaient des r sultats positifs avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay indiquant la pr sence de HPV 16 et ou HPV 18 45 231 avaient des r sultats n gatifs indiquant la pr sence d un ou plusieurs des 11 autres types de High Risk HPV tells que d tect s par le Aptima HPV Assay c d types de HPV 31 33 35 39 51 52 56 58 59 66 et 68 Les r sultats de 545 femmes valuables suppl mentaires g es de 21 ans ou plus avec des r sultats cytologiques ASC US taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay au cours de l essai CLEAR Un r sultat n gatif avec le Aptima HPV Assay indique qu aucun des 14 types de High Risk HPV n est pr sent dans l chantillon ce dernier est donc d sign comme n gatif avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse La pr valence des l sions
30. diagnostic du panel d examen histologique consensuel Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 45 AW 11244 901 Rev 002 FR Performances du Panther System Assay Aptima Tableau 21 Population ASC US 2 21 ans R sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay d apr s le diagnostic du panel d examen histologique consensuel R sultat du R sultat du test iteraa Diagnostic du panel d examen histologique consensuel Aptima HPV Assay AHPV GT Ind termin Normal CIN1 CIN2 CIN3 Cancer Total Pos HPV 16 3 1 26 18 11 15 0 71 n g HPV 18 45 nee HPNA N g HPV 16 3 23 16 2 3 1 48 pos HPV 18 45 Pos HPV 18 45 Positif Pos HPV 16 Pos HPV 16 et 0 4 0 1 1 0 3 pos HPV 18 45 18 45 N g HPV 16 Pos autres HPV 2 132 70 23 10 0 237 n g HPV 18 45 HR Total 6 182 104 37 29 1 359 ee N g HPV s 13 450 75 10 4 0 552 N gatif 416 18 45 N g HPV HR Total 19 632 179 47 33 14 911 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay CIN1 n oplasie cervicale intra pith liale de grade 1 HR haut risque N g n gatif Pos positif Tous les chantillons disposaient de r sultats finaux lors du test final ou apr s la r solution des r sultats initiaux non valides par la proc dure 19 femmes se sont rendues la consultation pour la colposcopie mais un diagnostic n a pas pu tre tabli pour les raisons suivantes lt 5 chant
31. fois plus de probabilit d tre pr sents chez une femme avec des l sions 2 CIN2 et 5 2 fois plus de probabilit d tre pr sents chez une femme avec des l sions 2 CIN3 Tableau 25 Population ASC US 2 21 ans Rapports de vraisemblance pour les l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay 2 CIN2 2 CIN3 Interpr tation des r sultats du Aptima Assay Rapport de vraisemblance Rapport de vraisemblance IC 95 IC 95 j 4 1 5 2 Positif au HPV 16 et ou 18 45 2 9 5 6 3 5 7 0 Positif aux autres HPV HR ie ted 1 2 2 1 0 6 1 8 fe 0 3 0 2 N gatif au HPV HR 0 2 0 4 0 1 0 4 IC intervalle de confiance HR haut risque Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 48 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du Panther System Assay Population NILM 2 30 ans Performances cliniques du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Au total 512 femmes valuables g es de 30 ans ou plus avec des r sultats cytologiques de NILM et des r sultats positifs avec le Aptima HPV Assay sur le Panther System avaient des chantillons cytologiques de suivi ligibles pour le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Parmi celles ci 21 femmes 1
32. les r plicats valides du calibrateur n gatif Seuil de l analyte 16 Le seuil d analyte pour HPV 16 est d termin par le signal RLU 1C 16 produit par les r plicats valides du calibrateur n gatif et les r plicats valides du calibrateur positif 2 2 x RLU IC 16 moyen pour les r plicats valides du calibrateur n gatif Seun dalanao ee 0 1 x RLU IC 16 moyen pour les r plicats valides du calibrateur positif 2 Signal d analyte seuil S CO de analyte 16 Le S CO d analyte pour HPV 16 est d termin par le signal RLU IC 16 produit par l chantillon de test et par le seuil de l analyte 16 pour la s rie RLU IC 16 de l chantillon de test seuil de l analyte 16 S CO de l analyte 16 Seuil de l analyte 18 45 Le seuil d analyte pour HPV 18 45 est d termin par le signal RLU 18 45 produit par les r plicats valides du calibrateur n gatif et les r plicats valides du calibrateur positif 1 1 x RLU 18 45 moyen pour les r plicats valides du calibrateur n gatif 0 18 x RLU 18 45 moyen pour les r plicats valides du calibrateur positif 1 Seuil de l analyte 18 45 Signal d analyte seuil S CO de l analyte 18 45 Le S CO d analyte pour HPV 18 45 est d termin par le signal RLU 18 45 produit par l chantillon de test et par le seuil de l analyte 18 45 pour la s rie RLU 18 45 de l chantillon de test seuil de l analyte 18 45 S CO de l analyte 18 45 Aptima HPV 16 18
33. pour les calibrateurs sont enregistr s dans le Panther System 2 Une fois que les tubes de calibrateur ont t pipet s et qu ils sont en cours de traitement pour un kit de r actifs sp cifique il est possible de traiter les chantillons avec le kit de r actifs du test associ pendant 24 heures maximum sauf si a Les calibrateurs sont non valides b Le kit de r actifs du test associ est retir du Panther System c Le kit de r actifs du test associ a d pass ses limites de stabilit 3 Toute tentative de pipeter plus de deux r plicats d un tube de calibrateur peut entra ner des erreurs d insuffisance de volume B Temp rature La temp rature ambiante est d finie comme tant comprise entre 15 C et 30 C C Gants poudr s Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 17 AW 11244 901 Rev 002 FR Panther System Aptima Comme avec tout syst me de r actif l exc s de poudre sur certains gants peut entra ner la contamination des tubes ouverts Il est recommand d utiliser des gants sans poudre Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 18 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Proc dures de contr le de qualit Tigris DTS System et Panther System Proc dures de contr le de qualit Tigris DTS System et Panther System A Crit res de validit de la s rie Le logiciel d termine automatiquement la validit de la s rie Le logiciel invalidera une s rie si l une des conditions suivant
34. pr cipit M langez d licatement le flacon toutes les 5 10 minutes Laissez le r actif de s lection parvenir temp rature ambiante avant l emploi Ne lutilisez pas tant que le pr cipit ou la turbidit n ont pas disparu Remarque M langez bien les r actifs en les retournant doucement avant de les charger dans le syst me Evitez la formation de mousse pendant le retournement des r actifs C Pr paration des r actifs pr c demment reconstitu s 1 2 Le r actif d amplification le r actif enzymatique et le r actif sonde pr c demment reconstitu s doivent parvenir temp rature ambiante entre 15 C et 30 C avant le d but du test Si le r actif sonde reconstitu contient un pr cipit qui ne se dissout pas temp rature ambiante chauffez le 60 C maximum pendant 1 2 minutes Ne l utilisez pas tant que le pr cipit ou la turbidit n ont pas disparu Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 11 AW 11244 901 Rev 002 FR Tigris DTS System Aptima 3 Sile WTCR contient un pr cipit chauffez le une temp rature entre 42 C et 60 C pendant 90 minutes maximum Laissez le WTCR parvenir temp rature ambiante avant l emploi Ne l utilisez pas tant que le pr cipit n a pas disparu 4 Si le r actif de s lection contient un pr cipit chauffez le 60 C 1 C pendant 45 minutes maximum pour faciliter la dissolution du pr cipit M langez d licatement le flacon toute
35. sp cifiques de la s quence des oligom res de capture se fixent sur des r gions pr cises des mol cules cibles du mRNA du HPV Le complexe oligom re de capture cible est ensuite captur hors de la solution en r duisant la temp rature de la r action la temp rature ambiante Cette r duction de temp rature permet l hybridation de se produire entre la r gion d soxyad nosine de l oligom re de capture et les mol cules poly d soxythymidines li es par covalence aux particules magn tiques Les microparticules y compris les mol cules cibles du mRNA du HPV captur es auxquelles elles sont li es sont attir es sur la paroi du tube r actionnel par des aimants puis le surnageant est aspir Les particules sont lav es afin d liminer la matrice r siduelle de l chantillon qui peut contenir des inhibiteurs d amplification Une fois la capture de cible termin e le mRNA du HPV est amplifi via la TMA une m thode d amplification de l acide nucl ique bas e sur la transcription qui utilise deux enzymes la transcriptase inverse MMLV et la RNA polym rase T7 La transcriptase inverse sert g n rer une copie du DNA de la s quence de mRNA cible contenant une s quence promoteur de RNA polym rase T7 La RNA polym rase T7 produit de multiples copies de l amplicon du RNA partir de la matrice de copie du DNA La d tection de l amplicon s effectue au moyen du test HPA avec des sondes d acide nucl ique simple brin mar
36. t divis s en aliquotes qui ont t archiv es et conserv es 70 C jusqu ce qu elles soient test es soit avec le Aptima HPV Assay sur le Panther System soit avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System Les chantillons cytologiques de suivi r siduels de l essai CLEAR ligibles ont t test s avec le Aptima HPV Assay r alis sur le Panther System Dans l essai clinique sur le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay les chantillons provenant des chantillons cytologiques de suivi r siduels ont t test s avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay r alis sur le Panther System Les femmes de l tude ASC US ont toutes t orient es vers une colposcopie ind pendamment des r sultats du Aptima HPV Assay r alis sur le Tigris DTS System et du test de DNA du HPV Une biopsie par curetage endocervical CEC et des biopsies cervicales a l emporte pi ce 1 biopsie de chacun des 4 quadrants ont t effectu es Une biopsie a l emporte pi ce a t men e m thode dirig e 1 biopsie par l sion chaque fois qu une l sion tait visible et les quadrants exempts de l sion visible ont t biopsi s la jonction pavimento cylindrique m thode al atoire Dans tude NILM les femmes dont les r sultats taient positifs avec le Aptima HPV Assay sur le Tigris DTS System et ou avec le test de DNA du HPV ainsi que les femmes s lectionn es al atoirement et dont les r sultats taie
37. traitement cytologique avec le ThinPrep 2000 System ou le ThinPrep 3000 System transf rez 1 ml de l chantillon cytologique en milieu liquide ThinPrep dans un tube de transfert d chantillons Aptima conform ment a la notice du kit de transfert d chantillons Aptima Echantillons pr lev s avec le kit de collecte et de transport pour chantillon cervical Aptima Pr levez l chantillon conform ment au mode d emploi du kit CSCT Aptima B Transport et conservation des chantillons avant le test Echantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep 1 Transportez les chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep entre 2 C et 30 C 2 Les chantillons doivent tre transf r s dans un tube de transfert d chantillons Aptima dans les 105 jours suivant le pr levement 3 Avant le transfert les chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep doivent tre conserv s entre 2 C et 30 C sans d passer 30 jours a des temp ratures de plus de 8 C 4 Les chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep transf r s dans un tube de transfert d chantillons Aptima peuvent tre conserv s entre 2 C et 30 C pendant 60 jours maximum 5 Si une dur e de conservation sup rieure est n cessaire les chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep ou les chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep dilu s dans le tube de Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 6 AW 11244 901 Rev 002 FR Ap
38. type 16 et ou 18 le risque cumulatif de d velopper une pathologie cervicale est 10 fois sup rieur au risque de d velopper une pathologie associ e aux autres types haut risque Principes de la proc dure Le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay implique trois tapes principales qui se d roulent dans un tube unique capture de cible amplification de la cible m di e par la transcription Transcription Mediated Amplification TMA et d tection des produits d amplification amplicons par test de protection de l hybridation Hybridization Protection Assay HPA Le test incorpore un contr le interne Internal Control IC pour v rifier les tapes de capture de l acide nucl ique d amplification et de d tection et pour rep rer d ventuelles erreurs de l op rateur ou de l appareil Les chantillons sont pr lev s ou transf r s dans un tube contenant un milieu pour transport d chantillon Specimen Transport Media STM qui lyse les cellules lib re le MRNA et l emp che de se d grader pendant la conservation Quand le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay est effectu le mRNA cible est isol de l chantillon au moyen d oligom res de capture qui sont li s des microparticules magn tiques Les oligom res de capture contiennent les sequences compl mentaires a des r gions pr cises des mol cules cibles du mRNA du HPV ainsi qu une chaine de r sidus de d oxyad nosine Lors de l tape d hybridation les r gions
39. uniquement 3 7 25 2 3 9 23 1 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 9 4 3 32 6 3 2 32 pos HPV 18 45 uniquement 2 2 21 8 0 9 16 8 Positif Pos HPV 16 0 0 0 1 0 0 0 1 pos HPV 18 45 Poe eee 0 0 93 5 0 0 93 4 3 6 7 194 2 1 4 194 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR 1 7 6 0 0 7 3 9 5 4 14 259 3 9 10 259 Pos ou n g Pos HPV HR 3 7 6 8 2 6 4 5 dan 5 1 1 6 549 0 2 1 549 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR 0 5 1 9 0 0 0 8 Pr valence 2 91 ee 20 808 11 808 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay HR haut risque N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 52 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du Panther System Assay Tableau 29 Population NILM 2 30 ans Risque absolu de l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay par tranche d age estimations non corrig es R sultat du 2 CIN2 2 CINS Aptima HPV R sultat du Interpr tation A AHPV GT Assay Risque absolu Risque absolu ssay IC 95 IC 95 Pos HPV 16 et ou HPV 16 et ou 8 1 3 37 5 4 2 37 pos HPV 18 45 Pos HPV 18 45 2 0 16 4
40. 1 femmes ayant subi une colposcopie et 10 n en ayant pas subi ne disposaient pas d un chantillon cytologique de suivi en volume suffisant pour tre test dans cette tude apr s analyse des valeurs manquantes elles n ont pas t inclues dans les calculs de performance Les 491 femmes valuables avaient des r sultats valides avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Parmi celles ci 273 ont subi une colposcopie Quatorze 14 femmes avaient des l sions 2 CIN2 et 10 avaient des l sions 2 CIN3 245 femmes avaient un r sultat d histologie Normal CIN1 14 femmes avaient un tat pathologique ind termin Sur les 259 femmes valuables avec un tat pathologique concluant et des r sultats positifs avec le Aptima HPV Assay sur le Panther System 65 avaient des r sultats positifs avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System indiquant la pr sence de HPV 16 et ou HPV 18 45 194 avaient des r sultats n gatifs indiquant la pr sence d un ou de plusieurs des autres 11 types de High Risk HPV Les r sultats de 549 femmes valuables suppl mentaires g es de 30 ans ou plus avec des r sultats cytologiques de NILM et un tat pathologique concluant taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay sur le Panther System Un r sultat n gatif avec le Aptima HPV Assay indique qu aucun des 14 types de High Risk HPV n est pr sent dans l chantillon ce dernier est donc d sign comme n gatif avec le Aptima HPV 16 1
41. 18 45 Genotype Assay 62 AW 11244 901 Rev 002 FR
42. 45 Genotype Assay 20 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Interpr tation du test Tigris DTS System et Panther System Interpr tation du test Tigris DTS System et Panther System Les r sultats des tests sont automatiquement d termin s par le logiciel de test Un r sultat de test peut tre n gatif au HPV 16 et HPV 18 45 n gatif au HPV 16 et positif au HPV 18 45 positif au HPV 16 et n gatif au HPV 18 45 positif au HPV 16 et positif au HPV 18 45 ou non valide tel que d termin par la valeur RLU de FIC et les rapports S CO d crits dans le tableau ci dessous Un r sultat de test peut aussi tre non valide en raison d autres param tres p ex forme anormale de la courbe qui se situent en dehors des seuils normalement attendus Si les r sultats d un test ne sont pas valides le test doit tre r p t R sultats du Aptima HPV 16 18 45 Crit res Genotype Assay RLU du IC HPV 16 gt seuil du IC et S CO HPV 16 lt 1 00 et S CO HPV 18 45 lt 1 00 S CO HPV 16 lt 1 00 et S CO HPV 18 45 2 1 00 et RLU HPV 18 45 lt 3 000 000 S CO HPV 16 2 1 00 et RLU du IC HPV 16 lt 4 000 000 et S CO HPV 18 45 lt 1 00 S CO HPV 16 2 1 00 et N gatif 16 N gatif 18 45 N gatif 16 Positif 18 45 Positif 16 N gatif 18 45 Positif 16 RLU du IC HPV 16 lt 4 000 000 et Positif 18 45 S CO HPV 18 45 2 1 00 et RLU HPV 18 45 lt 3 000 000 S CO HPV 16 lt 1 00 et S
43. 5 ositi Pos HPV 16 100 2 2 50 0 1 2 pos HPV 18 45 POS HPV 16 et 18 45 27 0 100 2 9 97 1 gt 17 0 25 147 5 4 8 147 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR 12 6 21 5 2 8 8 5 f 20 2 44 218 8 7 19 218 Pos ou n g Pos HPV HR 17 6 22 5 7 1 9 8 Pe p 3 6 6 165 0 6 1 165 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR 1 5 6 9 0 0 2 7 Pr valence 13 1 50 383 5 2 20 383 Pos HPV 16 et ou Pos HPV 16 et ou 32 3 10 31 16 1 5 31 pos HPV 18 45 HPV 18 45 19 0 45 9 7 0 25 4 Pos HPV 16 Pos HPV 16 50 0 7 14 21 4 3 14 n g HPV 18 45 uniquement 24 2 74 2 5 1 41 6 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 18 8 3 16 12 5 2 16 Boei pos HPV 18 45 uniquement 3 0 40 6 1 3 30 8 ositi Pos HPV 16 0 0 1 0 0 1 pos HPV 18 45 POS HPV 16 et 18 45 0 0 93 5 0 0 93 3 A 12 7 7 55 3 6 2 55 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR 6 2 20 5 0 6 9 1 19 8 17 86 8 1 7 86 Pos ou n g Pos HPV HR 15 1 23 9 4 7 10 3 ar R 7 1 2 2 167 0 6 1 167 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR 0 2 3 5 0 0 2 3 Pr valence 7 5 19 253 3 2 8 253 Pos HPV 16 et ou Pos HPV 16 et ou 33 3 5 15 20 0 3 15 pos HPV 18 45 HPV 18 45 12 4 55 0 4 1 36 0 Pos HPV 16 Pos HPV 16 66 7 4 6 33 3 2 6 n g HPV 18 45 uniquement 27 1 93 5 6 2 69 2 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 11 1 1 9 11 1 1 9 pos HPV 18 45 uniquement 0 5 39 7 0 5 37 1 Positif Pos HPV 16
44. 7 pos HPV 18 45 uniquement 3 2 35 4 1 3 27 0 Positif os HP 16 os side pos HPV 18 45 Pos HPV 16 et 18 45 S O 0 0 S O 0 0 A 4 0 5 124 2 4 3 124 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR 1 7 6 2 0 7 4 2 z 5 1 8 158 3 2 5 158 Pos ou n g Pos HPV HR 3 2 6 1 1 5 4 0 eae 4 3 0 5 1 217 0 5 1 217 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR 0 0 1 9 0 0 1 7 Pr valence 2 4 9 375 1 6 6 375 Pos HPV 16 et ou Pos HPV 16 et ou 14 8 4 27 14 8 4 27 pos HPV 18 45 HPV 18 45 4 7 27 3 5 1 22 8 Pos HPV 16 Pos HPV 16 28 6 4 14 28 6 4 14 n g HPV 18 45 uniquement 6 3 50 7 6 4 46 5 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 0 0 13 0 0 13 pos HPV 18 45 uniquement 0 0 20 1 0 0 17 1 Positif Bos HPV16 os se pos HPV 18 45 Pos HPV 16 et 18 45 S O 0 0 S O 0 0 k 2 7 3 113 0 9 1 113 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR 0 7 5 8 0 0 3 1 5 0 7 140 3 6 5 140 Pos ou n g Pos HPV HR 2 6 7 0 1 9 4 2 PR x A 1 4 4 288 0 0 288 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR 0 5 2 5 0 0 0 8 Pr valence 2 6 11 428 1 2 5 428 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay HR haut risque SO Sans objet N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotyp
45. 7 cellules Fortement positif Positif 100 108 108 100 162 162 et cellules MS751 4 3 cellules Faiblement positif 96 6 100 97 7 100 Cellules SiHa 1 6 cellule Positif 97 2 105 108 98 8 160 162 Faiblement positif 92 1 99 1 95 6 99 7 Cellules HeLa 0 3 cellules N aatif 100 108 108 100 161 161 Faiblement positif 9 96 6 100 97 7 100 Cellules MS751 4 3 cellule N aatif 100 108 108 100 162 162 Faiblement positif 9 96 6 100 97 7 100 chantillon clinique 2 HPV 16 Positif 97 2 104 107 94 4 152 161 Faiblement positif 92 1 99 0 88 7 97 0 chantillon clinique 2 HPV 18 45 N aatif 100 108 108 100 162 162 Faiblement positif g 96 6 100 97 7 100 Cellules SiHa 0 1 cellule N aatif 85 2 92 108 84 6 137 162 Fortement n gatif 9 77 3 90 7 78 2 89 3 Cellules HeLa 0 02 cellules N aatif 100 108 108 100 162 162 Fortement n gatif 9 96 6 100 97 7 100 Cellules MS751 0 04 cellule N aatif 100 108 108 100 162 162 Fortement n gatif 9 96 6 100 97 7 100 chantillon clinique 3 HPV 16 N aatif 95 4 103 108 92 6 150 162 Fortement n gatif 9 89 6 98 0 87 5 95 7 chantillon clinique 3 HPV 18 45 N aatif 100 108 108 99 4 161 162 Fortement n gatif 9 96 6 100 96 6 99 9 z ar pee are 100 108 108 100 162 162 Echantillon clinique 1 n gatif au HPV N gatif 96 6 100 97 7 100 z y ae Lite ere 100 108 108 100 162 162 Echantillon clinique 2 n gatif
46. 8 20 6658 0 6 658 200 6 658 Site de test 1 9 0 4 3 0 7 24 9 0 4 0 5 0 3 8 27 301 13 301 2 301 75 301 13 3 666 18 3 666 0 3 666 141 3 666 2 7 4 6 1 0 26 5 0 5 0 5 0 3 7 23 310 19 310 0 310 82 310 18 3671 17 3671 0 3671 136 3 671 3 7 0 5 0 0 3 25 2 0 5 0 3 0 4 1 21 301 15 301 1 301 76 301 16 3 509 12 3 509 0 3 509 144 3 509 Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 24 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du test avec le Tigris DTS System Performances du test avec le Tigris DTS System Conception de l tude clinique portant sur le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay avec les chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep Le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay a t valu l aide d chantillons cytologiques de suivi pr lev s chez des femmes ayant donn leur consentement dans le cadre de l essai CLEAR une tude clinique am ricaine multicentrique prospective Lessai CLEAR a t men pour d terminer les performances cliniques du Aptima HPV Assay dans la d tection des n oplasies cervicales intra pith liales de grade 2 ou de pathologies cervicales plus graves l sions 2 CIN2 Les femmes ont t inscrites l tude ASC US ou l tude NILM d apr s les r sultats cytologiques en milieu liquide ThinPrep de suivi dans le cadre de d pistages de routine du cancer du col de l ut rus La population de l tude ASC US compre
47. 8 45 Genotype Assay sur le Panther System aux fins de l analyse Les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay d apr s le r sultat du Aptima HPV Assay et le diagnostic du panel d examen histologique consensuel sont pr sent s dans le Tableau 26 Tableau 26 Population NILM 2 30 ans R sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay d apr s le diagnostic du panel d examen histologique consensuel R sultat du R sultat du test Lo Diagnostic du panel d examen histologique consensuel Aptima HPV AHPV GT Interpr tation Assay Ind termin Normal CIN1 CIN2 CIN3 Cancer Total Pos HPV 16 2 28 0 0 3 1 34 n g HPV 18 45 Bee ee Neg HPV 16 1 28 1 1 0 2 33 pos HPV 18 45 Pos HPV 18 45 Positif pos HPV 18 45 18 45 N g HPV 16 Pos autres 11 175 12 3 4 0 205 n g HPV 18 45 HPV HR Total 14 232 13 4 7 3 273 sgati Neg Hex 31 527 16 5 1 0 580 N gatif 16 18 45 N g HPV HR Total 45 759 29 9 8 3 853 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay HR haut risque N g n gatif Pos positif Tous les chantillons disposaient de r sultats finaux valides lors du test initial ou apr s r solution des r sultats initiaux non valides par la proc dure 45 femmes se sont rendues la consultation pour la colposcopie mais un diagnostic n a pas pu tre tabli pour les raisons suivantes un consensus n a pas pu tre obten
48. 97 14 1072 1079 ASCCP American Society for Colposcopy and Cervical Pathology 2009 HPV Genotyping Clinical Update http www asccp org Portals 9 docs pdfs Consensus 20Guidelines clinical_update_20090408 pdf Accessed March 22 2012 Wright T C S Massad C J Dunton M Spitzer E J Wilkinson and D Solomon 2007 2006 Consensus guidelines for the management of women with abnormal cervical screening tests Journal of Lower Genital Tract Disease 11 4 201 222 Kacian D L and T J Fultz 1995 Nucleic acid sequence amplification methods U S Patent 5 399 491 Arnold L J P W Hammond W A Wiese and N C Nelson 1989 Assay formats involving acridinium ester labeled DNA probes Clin Chem 35 1588 1594 Nelson N C A BenCheikh E Matsuda and M Becker 1996 Simultaneous detection of multiple nucleic acid targets in a homogeneous format Biochem 35 8429 8438 Datta S D L A Koutsky S Ratelle E R Unger J Shlay T McClain B Weaver P Kerndt J Zenilman M Hagensee C J Suhr and H Weinstock 2008 Human Papillomavirus Infection and Cervical Cytology in Women Screened for Cervical Cancer in the United States 2003 2005 Annals Int Med 148 493 Clifford G M S Gallus R Herrero N Mu oz P J F Snijders S Vaccarella P T H Anh C Ferreccio N T Hieu E Matos M Molano R Rajkumar G Ronco S de Sanjos H R Shin S Sukvirach J O Thomas S Tunsakul C J L M Meijer S Francesch
49. Bosch P Coursaget J T Cox E Franco Frazer R Sankaranarayanan J Schiller A Singer T C Wright Jr W Kinney C J Meijer J Linder E McGoogan and C Meijer 2004 Cervical cancer control priorities and new directions Int J Cancer 108 3 329 33 Erratum in Int J Cancer 108 6 945 Cuschieri K S M J Whitley H A Cubie 2004 Human papillomavirus type specific DNA and RNA persistence implications for cervical disease progression and monitoring J Med Virol 73 1 65 70 De Sanjose S et al 2010 Human papillomavirus genotype attribution in invasive cervical cancer a retrospective cross sectional worldwide study The Lancet DOI 10 1016 S1470 2045 10 70230 8 Burger R A B J Monk T Kurosaki H Anton Culver S Vasilv M L Berman and S P Wilczynski 1996 Human Papillomavirus Type 18 Association with poor prognosis in early stage cervical cancer J Nat Cancer institute 88 19 1361 1368 Safaeian M M Schiffman J Gage D Solomon C Wheeler and P Castle 2009 Detection of Precancerous Cervical Lesions Is Differential by Human Papillomavirus Type Cancer Res 69 8 3262 3266 Khan M J P E Castle A T Lorincz S Wacholder M Sherman D R Scott B B Rush A G Glass and M Schiffman 2005 The elevated 10 year risk of cervical precancer and cancer in women with human papillomavirus HPV type 16 or 18 and the possible utility of type specific HPV testing in clinical practice J Natl Cancer Inst
50. CO HPV 18 45 lt 1 00 et RLU du IC HPV 16 lt seuil du IC Non valide ou RLU du IC HPV 16 gt 4 000 000 ou RLU HPV 18 45 gt 3 000 000 Remarque Les r sultats des chantillons de contr le de qualit externe fournis par l utilisateur doivent tre surveill s et valu s par le personnel du laboratoire conform ment aux protocoles du laboratoire Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 21 AW 11244 901 Rev 002 FR Limites Tigris DTS System et Panther System Aptima Limites Tigris DTS System et Panther System A Les performances du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay n ont pas t valu es pour les personnes vaccin es contre le HPV B Le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay n a pas t valu dans les cas d abus sexuel soup onn La pr valence de l infection par HPV dans une population donn e peut affecter les performances Les coefficients de pr vision positifs diminuent quand la population test e a un taux de pr valence bas ou que les individus n ont pas de risque d infection Les chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep contenant moins de 1ml apr s la pr paration de la lame du ThinPrep Pap Test sont consid r s comme inad quats pour le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Les r sultats du test peuvent tre affect s par le pr l vement la conservation ou le traitement incorrects des chantillons Le contr le interne IC v rifie les tapes de capture de
51. Cellules HeLa 0 7 cellules Positif 100 108 108 100 162 162 Faiblement positif 96 6 100 97 7 100 Cellules MS751 0 2 cellule Positif 99 1 107 108 88 7 141 159 Faiblement positif 94 9 99 8 84 5 93 5 TIV de HPV 16 24 copies N oatif 100 107 107 100 162 162 Faiblement positif 9 96 5 100 97 7 100 TIV de HPV 18 26 copies Positif 99 1 107 108 100 162 162 Faiblement positif 94 9 99 8 97 7 100 TIV de HPV 45 35 copies Positif 99 1 107 108 98 1 159 162 Faiblement positif 94 9 99 8 94 7 99 4 Echantillon clinique 2 HPV 16 Ne aatif 100 107 107 100 162 162 Faiblement positif g 96 5 100 97 7 100 chantillon clinique 3 HPV 16 N oatif 100 108 108 100 162 162 Faiblement positif 9 96 6 100 97 7 100 Echantillon clinique 2 HPV 18 45 Positif 100 107 107 95 7 155 162 Faiblement positif 96 5 100 91 7 98 0 Echantillon clinique 3 HPV 18 45 Positif 100 108 108 98 8 160 162 Faiblement positif 96 6 100 95 6 99 7 Cellules SiHa 0 001 cellule N aatif 100 108 108 100 161 161 Fortement n gatif g 96 6 100 97 7 100 Cellules HeLa 0 001 cellules N oatif 97 2 105 108 98 1 159 162 Fortement n gatif g 92 1 99 1 94 7 99 4 Cellules MS751 0 006 cellule N oatif 75 0 81 108 88 3 143 162 Fortement n gatif g 66 1 82 2 84 2 93 2 chantillon clinique 1 n gatif au HPV N gatif ony 008 Won 100 chantillon clinique 2 n gatif au HPV N gatif
52. HOLOGIC Aptimar Aptima HPV 16 18 45 Test de g notypage Pour diagnostic in vitro R serv l exportation am ricaine Informations g n rales Tigris DTS System et Panther System 2 Usage pr vu ut lens disant eng entr wed a annee Aa Ne anew ie 2 R sum et explication du test 22 222 2 Principes dela proc dure crore ensenen ne e a e bdoh edit dents DE a deg dites ere 3 Avertissements et pr cautions 4 44444 eee 4 Conditions de conservation et de manipulation des r actifs 5 Collecte et conservation des chantillons 6 Proc dures de contr le de qualit Tigris DTS System et Panther System 19 Interpr tation du test Tigris DTS System et Panther System 21 Limites Tigris DTS System et Panther System 22 R sultats attendus avec le Tigris DTS System Pr valence du mRNA du High Risk HPV 24 Performances du test avec le Tigris DTS System 25 R sultats attendus avec le Panther System Prevalence du MRNA du High Risk HPV 43 Performances du Panther System Assay 44 Bibliograph
53. HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 54 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du Panther System Assay Les rapports de vraisemblance l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sont indiqu s dans le Tableau 32 r sultats corrig s pour le biais de v rification et dans le Tableau 33 non corrig s Les types de HPV 16 18 et ou 45 ont montr 11 2 fois plus de probabilit d tre pr sents chez une femme avec des l sions 2 CIN2 et 24 1 fois plus de probabilit d tre pr sents chez une femme avec des l sions 2 CIN3 Tableau 32 Population NILM 2 30 ans Rapports de vraisemblance pour les l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay estimations corrig es pour le biais de v rification 2 CIN2 2 CIN3 Interpr tation des r sultats du Aptima Assay Rapport de vraisemblance Rapport de vraisemblance IC 95 IC 95 oo 11 2 24 1 Positif au HPV 16 et ou 18 45 3 3 38 4 2 6 225 9 os 3 5 4 7 Positif aux autres HPV HR 1 3 9 4 0 7 29 8 Sener 0 8 0 4 N gatif au HPV HR 0 6 1 1 0 1 2 2 IC intervalle de confiance HR haut risque Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay au
54. HPV 18 45 19 0 36 2 10 3 22 5 Pos HPV 16 Pos HPV 16 29 4 15 51 19 6 10 51 n g HPV 18 45 uniquement 18 8 41 1 11 3 28 5 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 15 0 3 20 5 0 1 20 Beste pos HPV 18 45 uniquement 3 6 34 6 0 2 21 6 ositi Pos HPV 16 100 2 2 50 0 1 2 21 29 ans pos HPV 18 45 OS HPV 16 et 18 45 27 0 100 2 9 97 1 17 1 25 146 5 5 8 146 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR 12 7 21 7 2 8 8 6 g 20 5 45 219 9 1 20 219 Pos ou n g Pos HPV HR 17 9 23 0 7 5 10 2 a 7 4 2 7 166 0 6 1 166 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR 1 9 7 6 0 0 2 7 Pr valence 13 5 52 385 5 5 21 385 Pos HPV 16 et ou Pos HPV 16 et ou 30 0 9 30 16 7 5 30 pos HPV 18 45 HPV 18 45 16 5 43 9 6 9 26 2 Pos HPV 16 Pos HPV 16 50 0 7 14 21 4 3 14 n g HPV 18 45 uniquement 24 2 74 2 5 1 41 6 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 13 3 2 15 13 3 2 15 pos HPV 18 45 uniquement 1 3 35 2 1 3 32 1 i Pos HPV 16 0 0 1 0 0 1 os 30 39 ans pos HPV 18 45 POS HPV 16 et 18 45 0 0 93 5 0 0 93 3 gt 12 1 7 58 3 4 2 58 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR 5 7 19 5 0 5 8 5 18 2 16 88 8 0 7 88 Pos ou n g Pos HPV HR 13 4 22 3 4 6 10 0 ee 2 y A 1 8 3 163 0 6 1 163 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR 0 4 4 3 0 0 2 4 Pr valence 7 6 19 251 3 2 8 251 Pos HPV 16 et ou Pos HPV 16 et ou 33 3 5 15 20 0 3 15 pos
55. Il est recommand d utiliser des gants sans poudre Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 12 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Panther System Panther System R actifs et mat riels fournis Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 100 tests n de r f 303236 3 bo tes Les calibrateurs peuvent tre achet s s par ment Consultez le num ro de r f rence sp cifique de la bo te ci dessous Bo te r frig r e Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay conserver entre 2 C et 8 C d s r ception Symbole Composant Quantit A R actif d amplification du HPV 16 18 45 1 flacon Acides nucl iques non infectieux d shydrat s dans une solution tamponn e contenant lt 5 de diluant E R actif enzymatique du HPV 16 18 45 1 flacon Transcriptase inverse et polym rase du RNA d shydrat es dans une solution tamponn e HEPES contenant lt 10 de r actif diluant P R actif sonde du HPV 16 18 45 1 flacon Sondes DNA chimiluminescentes non infectieuses lt 500 ng flacon d shydrat es dans une solution tamponn e de succinate contenant lt 5 de d tergent IC R actif de contr le interne du HPV 16 18 45 1 flacon Transcrit de RNA non infectieux dans une solution tamponn e contenant lt 5 de d tergent Bo te temp rature ambiante Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay conserver entre 15 C et 30 C d s r ception Symbole Composant Quantit AR Solution de reconstitution pour amplification d
56. PV HR par rapport a 8 5 10 1 n g HPV HR 2 9 24 8 2 7 38 2 Pr valence 0 9 0 5 IC intervalle de confiance HR haut risque N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Tableau 12 Population NILM 2 30 ans Risque relatif de l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay estimations non corrig es 2 CIN2 2 CIN3 Interpr tation du Aptima Assay Risque relatif Risque relatif IC a 95 IC a 95 Pos HPV 16 et ou 18 45 par rapport a 11 6 49 7 n g HPV HR 3 8 35 4 6 1 406 Pos HPV 16 et ou 18 45 par rapport a 3 4 5 8 pos autres HPV HR 1 3 9 0 1 7 20 0 Pos autres HPV HR par rapport a 3 4 8 5 n g HPV HR 1 1 10 3 1 0 75 8 Pos HPV HR par rapport a 5 1 16 9 n g HPV HR 1 9 13 8 2 2 132 Pr valence 2 5 20 803 1 4 11 803 IC intervalle de confiance HR haut risque N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 34 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du test avec le Tigris DTS System
57. Te uniquement 27 4 47 4 13 8 29 5 N g HPV 16 f 13 3 6 45 8 9 4 45 ey pos HPV 18 45 Pos HPV 18 45 uniquement 5 5 25 1 2 9 19 1 Iti Pos HPV 16 66 7 2 3 33 3 1 3 pos HPV 18 45 POSER Et 19 49 15 2 98 2 1 8 84 6 14 0 33 235 4 3 10 235 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR 10 7 17 7 2 3 6 7 19 0 67 353 8 5 30 353 Pos ou n g Pos HPV HR 16 8 21 1 7 1 9 6 ee x 2 6 14 539 0 7 4 539 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR Han le te Pr valence Sites 3 8 81 892 34 892 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay HR haut risque N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 46 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du Panther System Assay Tableau 23 Population ASC US 2 21 ans Risque absolu de l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay par tranche d ge R sultat du 2 CIN2 2 CIN3 A R sultat du Proc Aptima HPV AHPV GT Assay Interpr tation Risque absolu Risque absolu Assay IC 95 IC 95 Pos HPV 16 et ou Pos HPV 16 et ou 27 4 20 73 16 4 12 73 pos HPV 18 45
58. V 16 et 18 45 S O 0 0 S O 0 0 3 4 8 237 1 7 4 237 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR 1 7 5 3 0 6 3 2 f 5 0 15 298 3 4 10 298 Pos ou n g Pos HPV HR 3 6 6 2 2 3 3 9 a 5 1 0 5 505 0 2 1 505 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR 0 4 1 9 0 0 0 9 Pr valence 29 14 20 803 11 803 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay HR haut risque SO Sans objet N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 32 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du test avec le Tigris DTS System Tableau 10 Population NILM 2 30 ans Risque absolu de l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay par tranche d age estimations non corrig es 2 CIN2 2 CIN3 koima HAN EUR Interpr tation i i p R sultat du test p Risque absolu Risque absolu Assay IC 95 IC 95 Pos HPV 16 et ou Pos HPV 16 et ou 8 8 3 34 5 9 2 34 pos HPV 18 45 HPV 18 45 2 2 17 8 1 0 13 3 Pos HPV 16 Pos HPV 16 0 0 17 0 0 17 n g HPV 18 45 uniquement 0 0 15 5 0 0 14 3 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 17 6 3 17 11 8 2 1
59. V 18 45 uniquement 7 2 28 3 2 9 19 5 Positif Pos HPV 16 66 7 2 3 33 3 1 3 pos HPV 18 45 Pos Bbw as ey Aha 15 2 98 2 1 8 84 6 14 3 33 231 4 3 10 231 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR 10 9 17 9 2 4 6 8 19 3 67 348 8 3 29 348 Pos ou n g Pos HPV HR 17 1 21 3 6 9 9 4 ar i j 2 2 12 545 0 7 4 545 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR 4 2 3 5 0 2 16 Pr valence 8 8 Mo RO 79 893 33 893 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay HR haut risque N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 27 AW 11244 901 Rev 002 FR Performances du test avec le Tigris DTS System Aptima 21 a 29 ans 30 a 39 ans 2 40 ans 2 CIN2 2 CIN3 isang APT Interpr tation i i p R sultat du test p Risque absolu Risque absolu Assay IC 95 IC 95 Pos HPV 16 et ou Pos HPV 16 et ou 26 8 19 71 15 5 11 71 pos HPV 18 45 HPV 18 45 18 3 35 7 9 3 21 8 Pos HPV 16 Pos HPV 16 28 0 14 50 18 0 9 50 n g HPV 18 45 uniquement 17 5 39 6 9 9 26 9 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 15 8 3 19 5 3 1 19 Bosit pos HPV 18 45 uniquement 3 7 36 3 0 2 22
60. a HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System a t class e de mani re globale par tranche d age et par site de test Un r sultat n gatif avec le Aptima HPV Assay r alis sur le Panther System indique qu aucun des 14 types de High Risk HPV n est pr sent dans l chantillon ce dernier est donc d sign comme n gatif avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System aux fins de l analyse Les r sultats sont indiqu s dans le Tableau 20 pour les populations avec un r sultat d ASC US atypical squamous cells of undetermined significance ASC US et les populations avec un r sultat n gatif de NILM negative for intraepithelial lesion or malignancy Tableau 20 Pr valence du mRNA du High Risk HPV dans les populations par tranche d age par site de test et tous facteurs combin s Taux de positivit en x n Population ASC US Population NILM 2 21 ans 2 30 ans HPV 16 Pos Pos HPV 16 11 autres HPV 16 Pos Pos HPV 16 11 autres Pos HPV 18 45 et 18 45 pos a HR Pos HPV 18 45 et 18 45 pos a HR Tous 7 8 5 3 0 3 26 0 0 5 0 5 lt 0 1 3 6 71 911 48 911 3 911 237 911 50 10 839 49 10 839 1 10 839 391 10 839 Tranche d age en ann es x 13 4 5 2 0 5 37 9 ee 52 388 20 388 2 388 147 388 5 0 5 9 Lo wa 30 39 5 5 6 7 0 4 23 1 0 7 0 7 5 1 14 255 17 255 1 255 59 255 31 4 183 31 4 183 0 4 183 215 4 183 gt 40
61. adie Etat pathologique tat pathologique Etat pathologique v rifi 2 CIN2 v rifi 2 CIN3 non v rifi R sultat du R sultat Test de Femmes Femmes Femmes avec un Aptima HPV du test DNA du Total femmes Femmes non Femmes non statut Assay AHPV GT HPV atteintes atteintes teintes atteintes pathologique ae l sions ee f 2 CIN2 l sions gt CIN3 l sions inconnu lt CIN2 3 lt CIN3 inconnu Positif Positif 83 6 48 5 49 29 34 9 Positif N gatif 9 1 5 1 5 3 33 3 Positif Aucun 9 hr 2 0 1 0 1 1 50 0 Positif N gatif Positif 271 7 171 4 174 93 34 3 N gatif N gatif 137 1 52 0 53 84 61 3 N gatif Aucun 9 g r sultat 13 0 6 0 6 7 53 8 Total 515 15 283 10 288 217 42 1 SO Positif 306 3 178 1 180 125 40 8 N gatif S O N gatif 9 420 1 322 0 323 9 097 96 6 S 0 Aucun 3 m r sultat 605 1 0 0 1 604 99 8 Total 10 846 20 783 11 792 10 043 92 6 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay SO Sans objet Tous les chantillons disposaient de r sultats finaux valides lors du test initial ou apr s r solution des r sultats initiaux non valides par la proc dure 620 femmes disposant de r sultats avec le Aptima HPV Assay n avaient pas de r sultat de test de DNA du HPV principalement en raison d un volume insuffisant de l chantillon cytologique les femmes dont les r sultats taient n
62. aient positifs avec le Aptima HPV Assay et le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 217 avaient un tat pathologique non v rifi incluant les tats ind termin s Tableau 3 Sur les 10 331 femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay dans le cadre de l essai CLEAR original 9 826 avaient un tat pathologique non v rifi La proportion de femmes avec un tat pathologique non v rifi tait lev e dans ce groupe 96 6 car l tude tait con ue de mani re ce que seules des femmes s lectionn es al atoirement et pr sentant des r sultats n gatifs avec le Aptima HPV Assay et avec le test de DNA du HPV disponible sur le march soient orient es vers une colposcopie Pour corriger ce biais de v rification une m thode d imputation multiple a t utilis e pour estimer le nombre de femmes atteintes de l sions qui aurait t identifi si toutes les femmes avaient subi une colposcopie tant donn les r sultats du test Les estimations des performances corrig es pour le biais de v rification et les estimations des performances non corrig es bas es sur les 803 femmes avec un tat pathologique v rifi sont pr sent es Tableau 3 Population NILM 2 30 ans Classification des femmes NILM valuables d apr s les r sultats du Aptima HPV Assay du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay du test de DNA du HPV de l tat pathologique l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 et de l tat de v rification de la mal
63. ar rapport 6 1 20 2 n g HPV HR 1 8 21 0 0 7 567 7 Pr valence 11 0 8 IC intervalle de confiance HR haut risque N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Remarque Les performances corrig es pour le biais de v rification dans la section Tigris DTS System et la section Panther System utilisent diff rentes m thodes d imputation Tableau 31 Population NILM 2 30 ans Risque relatif de l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay estimations non corrig es 2 CIN2 2 CIN3 Interpr tation du Aptima Assay Risque relatif Risque relatif IC 95 IC 95 Pos HPV 16 et ou 18 45 par rapport a 9 9 50 7 n g HPV HR 3 4 28 4 6 2 414 4 Pos HPV 16 et ou 18 45 par rapport a 3 0 4 5 pos autres HPV HR 1 1 8 2 1 3 15 4 Pos autres HPV HR par rapport 3 3 11 3 n g HPV HR 1 1 9 7 1 3 100 7 Pos HPV HR par rapport a 4 9 21 2 n g HPV HR 1 9 12 7 2 7 164 7 Pr valence 2 5 20 808 1 4 11 808 IC intervalle de confiance HR haut risque N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima
64. ces ont t observ es avec la TV lorsque celle ci est pr sente a des concentrations sup rieures 3 x 10 cellules ml Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 41 AW 11244 901 Rev 002 FR Performances du test avec le Tigris DTS System Aptima Interf rence Les substances d crites dans le Tableau 19 ont t individuellement ajout es des groupes d chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep dilu s au 1 2 9 dans du STM aux concentrations indiqu es dans le tableau Toutes les substances ont t test es avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay en la pr sence ou l absence de cellules de culture infect es par HPV SiHa 1 6 cellule r action et HeLa 0 3 cellule r action Des interf rences ont t observ es avec les substances suivantes lorsque celles ci sont pr sentes des concentrations sup rieures celles qui sont indiqu es lubrifiants vaginaux contenant du Polyquaternium 15 1 m v cr me antifongique contenant du tioconazole 0 03 m v mucus 0 3 m v hormones intravaginales contenant de la progest rone 1 m v Tableau 19 Substances test es pour valuer d ventuelles interf rences avec le test Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Cat gorie de produit Type ou marque de produit Concentration test e la plus lev e n ayant pas interf r avec le test KY natural feeling liquid 10 viv Lubrifiant vaginal Liquide lubrifiant personnel Up amp Up mar
65. contenant lt 5 de d tergent NCAL Calibrateur n gatif HPV 16 18 45 5 flacons Solution tamponn e contenant lt 5 de d tergent Mat riel requis mais disponible s par ment Remarque Les r f rences du mat riel disponible chez Hologic sont indiqu es sauf indication contraire N de r f Panther System 303095 Kit pour s ries Panther System 303096 Kit de liquides Aptima Assay 303014 Solution de lavage Aptima tampon pour solution de d sactivation Aptima et r actif huileux Aptima Kit Aptima Auto Detect 303013 Unit s multi tube Multi tube Units MTU 104772 02 Assortiment de sacs pour d chets Panther 902731 Couvre d chets Panther 902714 Embouts 1 000 ul conductifs d tecteur de liquide 10612513 Tecan Kit de transfert d chantillons Aptima 301154C Bouchons p n trables Aptima 105668 Bouchons non p n trables de remplacement 103036A Bouchons de rechange pour coffrets de 100 tests Solutions de reconstitution pour r actif d amplification et r actif sonde CLO041 Solution de reconstitution pour r actif enzymatique CL0041 TCR et r actif de s lection 501604 Eau de javel solution d hypochlorite de sodium a 5 ou 0 7 M minimum Gants jetables Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 14 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Panther System Proc dure de test pour le Panther System Remarque Consultez le Panther System Operator s Manual Manuel de l op rateur du Panther System
66. de lot sur la fiche des codes barres du lot de r f rence pour vous assurer que les r actifs appropri s sont appari s c Ouvrez le flacon de r actif lyophilis et ins rez fermement l extr mit encoche du collet de reconstitution dans l ouverture du flacon Figure 2 tape 1 d Ouvrez la solution de reconstitution correspondante et posez le bouchon sur un plan de travail propre et couvert e Tout en tenant le flacon de solution sur la paillasse ins rez fermement l autre extr mit du collet de reconstitution dans l ouverture du flacon Figure 2 tape 2 f Retournez d licatement les flacons assembl s Laissez la solution s couler depuis le flacon dans le flacon en verre Figure 2 tape 3 g Faites tournoyer en douceur la solution dans le flacon pour bien la m langer vitez la formation de mousse en tournoyant le flacon Figure 2 tape 4 h Attendez que le r actif lyophilis se dissolve puis retournez nouveau les flacons assembl s en inclinant un angle de 45 pour minimiser la formation de mousse Figure 2 tape 5 Laissez la totalit du liquide retourner dans le flacon en plastique i Retirez le collet de reconstitution et le flacon en verre Figure 2 tape 6 j Rebouchez le flacon Enregistrez les initiales de l op rateur ainsi que la date de reconstitution sur l tiquette Figure 2 tape 7 k Jetez le collet de reconstitution et le flacon Figure 2 tape 8 Avertiss
67. des chantillons doit s effectuer conform ment aux r glementations locales nationales et internationales applicables en mati re de transport Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 7 AW 11244 901 Rev 002 FR Tigris DTS System Aptima Tigris DTS System R actifs et mat riels fournis Remarque Pour obtenir des informations sur les mentions de danger et de mise en garde qui pourraient tre associ es ces r actifs consultez la Safety Data Sheet Library Biblioth que des fiches techniques de s curit l adresse www hologic com sds Kit de test de g notypage Aptima HPV 16 18 45 100 tests n de r f 303234 3 boites Les calibrateurs peuvent tre achet s s par ment Consultez le num ro de r f rence sp cifique de la boite ci dessous Boite r frig r e Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay conserver entre 2 C et 8 C d s r ception Symbole Composant Quantit A R actif d amplification du HPV 16 18 45 Acides nucl iques non infectieux d shydrat s dans une solution tamponn e contenant lt 5 de diluant 1 flacon E R actif enzymatique du HPV 16 18 45 Transcriptase inverse et RNA polym rase d shydrat es dans une solution tamponn e HEPES contenant lt 10 de r actif diluant 1 flacon P R actif sonde du HPV 16 18 45 Sondes DNA chimiluminescentes non infectieuses lt 500 ng flacon d shydrat es dans une solution tamponn e de succinate contenant lt 5
68. des non cliniques 0 35 et 0 19 P L interpr tation des r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay doit tre effectu e en relation avec les autres donn es cliniques et d analyse dont dispose le clinicien Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 23 AW 11244 901 Rev 002 FR R sultats attendus avec le Tigris DTS System Pr valence du mRNA du High Risk HPV Aptima R sultats attendus avec le Tigris DTS System Prevalence du mRNA du High Risk HPV La pr valence d une infection par High Risk HPV varie consid rablement et est influenc e par plusieurs facteurs dont le plus important est l ge De nombreuses tudes ont analys la pr valence du HPV en s appuyant sur la d tection du DNA du HPV cependant peu d tudes rapportent la pr valence en fonction de la d tection du MRNA oncog ne du HPV Des femmes provenant de divers sites cliniques n 18 repr sentant une vaste distribution g ographique et une population vari e 10 Etats au sein des Etats Unis ont t inscrites l essai CLEAR une tude clinique prospective afin d valuer le Aptima HPV Assay qui d tecte 14 types de High Risk HPV Les chantillons des femmes de l essai CLEAR dont les r sultats taient positifs avec le Aptima HPV Assay ont t valu s dans 3 sites de test avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay dans une tude clinique s par e La pr valence du HPV 16 18 45 ainsi que des 11 types restants du Hig
69. e 1x10 CFU ml Gardnerella vaginalis 1x10 CFU ml Streptococcus pyogenes 1x10 CFU ml Haemophilus ducreyi 1x10 CFU ml Ureaplasma urealyticum 1x10 CFU ml Klebsiella pneumoniae 1x10 CFU ml G notypes du High Risk HPV non cibl s HPV 31 2 5x10 copies ml HPV 56 2 5x10 copies ml HPV 33 2 5x10 copies ml HPV 58 2 5x10 copies ml HPV 35 2 5x10 copies ml HPV 59 2 5x10 copies ml HPV 39 2 5x10 copies ml HPV 66 2 5x10 copies ml HPV 51 2 5x10 copies ml HPV 68 2 5x10 copies ml HPV 52 2 5x10 copies ml Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 40 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du test avec le Tigris DTS System Tableau 18 Panel de sp cificit analytique Organismes et concentration sans r activit crois e suite Concentration test e Concentration test e Organisme ne pr sentant pas de Organisme ne pr sentant pas de r activit crois e r activit crois e Virus Ad novirus 5 25x10 PFU ml HIV 1 2 5x10 copies ml Cytom galovirus 1 58x10 TCIDso ml Virus de l herp s simplex 1 3 39x10 TCIDsg mI Virus Epstein Barr 1 59x10TD50 mI Virus de l herp s simplex 2 2 29x10 TCIDso mI Autres g notypes du HPV non cibl s HPV 6 2 5x10 copies ml HPV 53 2 5x10 copies ml HPV 11 2 5x10 copies ml HPV 67 2 5x10 copies ml HPV 26 2 5x10 copies ml HPV 69 2 5x10 copies ml HPV
70. e Assay 33 AW 11244 901 Rev 002 FR Performances du test avec le Tigris DTS System Aptima Le risque relatif de maladie d apr s les r sultats positifs et n gatifs du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sont pr sent s dans le Tableau 11 r sultats corrig s pour le biais de v rification et le Tableau 12 non corrig s Les femmes pr sentant les types de HPV 16 18 et ou 45 ont montr 20 9 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN2 et 29 4 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN3 que les femmes ne pr sentant aucun type de High Risk HPV Les femmes pr sentant les types de HPV 16 18 et ou 45 ont montr 3 7 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN2 et 5 3 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN3 que les femmes pr sentant un ou plusieurs des 11 autres types de High Risk HPV Tableau 11 Population NILM 2 30 ans Risque relatif de l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay estimations corrig es pour le biais de v rification 2 CIN2 2 CIN3 Interpr tation du Aptima Assay Risque relatif Risque relatif IC a 95 IC a 95 Pos HPV 16 et ou 18 45 par rapport a 20 9 29 4 n g HPV HR 6 3 69 3 7 2 120 8 Pos HPV 16 et ou 18 45 par rapport a 3 7 5 3 pos autres HPV HR 1 5 9 5 1 5 18 2 Pos autres HPV HR par rapport a 5 6 5 6 n g HPV HR 1 8 17 7 1 2 26 0 Pos H
71. e fois qu une l sion tait visible et les quadrants exempts de l sion visible ont t biopsi s a la jonction pavimento cylindrique m thode al atoire Dans l tude NILM les femmes dont les r sultats taient positifs avec le Aptima HPV Assay et ou avec le test de DNA du HPV disponible sur le march ainsi que les femmes s lectionn es al atoirement et dont les r sultats taient n gatifs avec les deux tests ont t orient es vers une colposcopie pour l valuation initiale Une biopsie par CEC a t r alis e chez chacune des femmes ayant subi la colposcopie Des biopsies a l emporte pi ce ont t obtenues uniquement sur les l sions visibles m thode dirig e 1 biopsie par l sion Le suivi des femmes de l tude NILM qui ne pr sentaient pas de l sion 2 CIN2 au d but de l tude est en cours depuis 3 ans au moyen d examens cytologiques annuels Les femmes avec des r sultats cytologiques d ASC US ou plus graves pendant la p riode de suivi sont orient es vers une colposcopie bas e sur la m me proc dure de biopsie que celle utilis e lors de l valuation initiale L tat pathologique a t d termin partir d un panel d examen histologique consensuel fond sur l accord d au moins 2 pathologistes experts L tat cytologique et HPV des femmes tait inconnu des pathologistes experts et aucun ne connaissait les diagnostics histologiques r alis s par l autre Les chercheurs les cliniciens et les f
72. ement vitez la formation de mousse lors de la reconstitution des r actifs La mousse interf re avec le d tecteur de niveau du Panther System Remarque M langez soigneusement le r actif d amplification le r actif enzymatique le r actif sonde et le r actif de s lection en les retournant doucement avant de les charger dans le syst me Evitez la formation de mousse pendant le retournement des r actifs Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 15 AW 11244 901 Rev 002 FR Panther System Aptima 1 N P 4 Bue 5 BIG 7 8 a AE aE Y A i Figure 2 Processus de reconstitution du Panther System 2 Pr paration de la solution de r actif de capture de cible working Target Capture Reagent WTCR a Faites correspondre les flacons appropri s de TCR et de IC b V rifiez les num ros de lot des r actifs sur la fiche des codes barres du lot de r f rence pour vous assurer que les r actifs appropri s du kit sont appari s c Ouvrez le flacon de TCR et posez le bouchon sur un plan de travail propre et couvert d Ouvrez le flacon de IC et versez la totalit du contenu dans le flacon de TCR II est normal qu une petite quantit de liquide reste dans le flacon de IC e Rebouchez le flacon de TCR et faites tournoyer en douceur la solution pour m langer le contenu Evitez la formation de mousse pendant cette tape f Enregistrez les initiales de l op rate
73. emmes pr sentant les types de HPV 16 18 et ou 45 ont montr 2 1 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN2 et 4 0 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN3 que les femmes pr sentant un ou plusieurs des 11 autres types de High Risk HPV Tableau 24 Population ASC US 2 21 ans Risque relatif de l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay 2 CIN2 2 CIN3 Interpr tation des r sultats du Aptima Assay Risque relatif Risque relatif IC 95 IC 95 Positif au HPV 16 et ou 18 45 par rapport 11 1 22 8 n gatif au HPV HR 6 2 20 0 8 0 65 6 Positif au HPV 16 et ou 18 45 par rapport a 2 1 4 0 positif aux autres HPV HR 1 3 3 1 1 9 8 2 Positif aux autres HPV HR par rapport a 5 4 5 7 n gatif au HPV HR 2 9 9 9 1 8 18 1 Positif au HPV HR par rapport a 7 3 11 5 n gatif au HPV HR 4 2 12 8 4 1 32 2 Pr valence 9 1 81 892 IC intervalle de confiance HR haut risque 3 8 34 892 Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Les rapports de vraisemblance l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sont indiqu s dans le Tableau 25 Les types de HPV 16 18 et ou 45 ont montr 4 1
74. emmes n ont pas eu connaissance des r sultats du Aptina HPV Assay et du test de DNA du HPV disponible sur le march jusqu a la r alisation de la colposcopie afin d viter les biais Pour valider l usage pr vu du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay en tant que test r flexe la suite d un r sultat positif avec le Aptima HPV Assay les chantillons cytologiques de suivi r siduels provenant de toutes les femmes valuables de l tude ASC US et de l tude NILM pr sentant des Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 25 AW 11244 901 Rev 002 FR Performances du test avec le Tigris DTS System Aptima r sultats positifs avec le Aptima HPV Assay ont t admis pour tre test s avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Les performances cliniques du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay dans la d tection des l sions 2 CIN2 et des n oplasies cervicales intra pith liales de grade 3 ou de pathologies cervicales plus graves 2 CIN3 ont t valu es Population ASC US 2 21 ans Performances cliniques du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay avec les chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep Au total 400 femmes valuables g es de 21 ans ou plus avec des r sultats cytologiques d ASC US et des r sultats positifs avec le Aptima HPV Assay avaient des chantillons cytologiques de suivi ligibles pour le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Parmi celles ci 46 femmes ne disposaient pas d un chantillon
75. er au dessus d un r cipient ouvert en jetant le mat riel usag Changez de gants en cas de contact avec l chantillon Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 4 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Informations g n rales Tigris DTS System et Panther System K Dans certaines conditions du liquide peut s couler des bouchons des tubes lorsqu ils sont perc s Consultez Proc dure de test pour le Tigris DTS System ou Proc dure de test pour le Panther System pour de plus amples informations Les chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep et ceux pr lev s avec le kit de collecte et de transport pour chantillon cervical Cervical Specimen Collection and Transport CSCT doivent tre rejet s si un dispositif de collecte est rest dans le tube d chantillon Recommandations concernant les tests M Conservez les r actifs aux temp ratures indiqu es Les r sultats du test peuvent tre affect s par l utilisation de r actifs mal conserv s vitez de contaminer les r actifs par des microbes ou des ribonucl ases O N utilisez pas ce kit apr s la date de p remption N changez pas ne m langez pas et ne combinez pas les r actifs de test ou les calibrateurs provenant de kits portant diff rents num ros de lots Les liquides Aptima Assay les r actifs Aptima Auto Detect et le conservateur de liquide syst me Aptima Tigris DTS System uniquement ne font pas partie du lot de r f rence n i
76. es se produit e Plus d un r plicat non valide du calibrateur n gatif e Plus d un r plicat non valide du calibrateur positif 1 e Plus d un r plicat non valide du calibrateur positif 2 e Plus de 1 sur 6 r plicats non valides du calibrateur combin s Une s rie peut tre invalid e par un op rateur si des difficult s techniques de l op rateur ou de l appareil sont observ es et document es pendant la r alisation du test Toute s rie non valide doit tre r p t e Toute s rie annul e doit tre r p t e Remarque L obtention de r sultats non valides avec les calibrateurs n gatifs les calibrateurs positifs et ou le contr le interne peut indiquer un chec des r actifs et une contamination du syst me significatifs Suivez les directives de la section Interpr tation du test Tigris DTS System et Panther System pour retester les r sultats non valides Remarque Les chantillons de contr le de qualit externe non fournis doivent tre test conform ment aux r glementations locales d tat et ou f d rales ainsi qu aux exigences d homologation et aux protocoles valid s de contr le de qualit de chaque laboratoire Les chantillons de contr le de qualit externe peuvent tre pr par e en ajoutant des cellules de culture infect es par HPV c d SiHa HeLa ou MS751 au STM d un tube de transfert d chantillon Aptima ou a une matrice compos e d un chantillon ou groupe d chan
77. euil clinique est une concentration qui est positive sup rieure au seuil clinique 95 du temps Le SdD du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay a t d termin en testant des panels de transcrits in vitro TIV dilu s pour les g notypes 16 18 et 45 Avant de proc der aux tests le milieu pour transport d chantillon a t suppl ment avec le TIV diff rentes concentrations puis dilu avec des d chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep n gatifs individuels Soixante r plicats de chaque taux de copie ont t test s avec chacun des 2 lots de r actifs pour un total de 120 r plicats Les tests ont t ex cut s sur une p riode de 6 jours avec 3 s ries r alis es par jour chaque s rie comprenant 5 r plicats d un g notype et d une concentration donn s Le seuil de d tection 95 Tableau 34 a t calcul par une analyse de r gression Probit des r sultats de positivit pour chaque panel de dilution Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 56 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du Panther System Assay Tableau 34 Seuil de d tection du seuil clinique pour le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Seuil de d tection Cible copies r action IC 95 HPV 16 23 7 19 1 30 9 HPV 18 26 1 21 2 33 9 HPV 45 34 5 28 5 43 6 IC intervalle de confiance Pr cision du test La pr cision du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay a t valu e dans deux
78. euil de d tection 95 Tableau 16 a t calcul par une analyse de r gression Probit des r sultats de positivit pour chaque panel de dilution Seuil de d tection copies r action IC 95 57 3 46 5 74 6 84 8 66 1 115 6 60 0 46 6 82 3 Cible HPV 16 HPV 18 HPV 45 IC intervalle de confiance Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 36 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du test avec le Tigris DTS System Pr cision du test La pr cision du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay a t valu e dans deux tudes en utilisant le m me panel de 22 chantillons L tude 1 a t men e dans 3 sites de test externes afin de d terminer la reproductibilit du test L tude 2 a t men e en interne afin de d terminer la pr cision intra laboratoire Le panel comprenait 14 chantillons positifs au HPV 16 et ou 18 45 avec des concentrations gales ou sup rieures au seuil de d tection du test positivit attendue 95 5 chantillons positifs au HPV 16 et ou 18 45 avec des concentrations inf rieures au seuil de d tection du test positivit attendue gt 0 lt 25 et 3 chantillons n gatifs au HPV Les chantillons du panel positifs au HPV 16 et ou 18 45 ont t pr par s en ajoutant des cellules de culture infect es par le HPV SiHa HeLa et MS751 ATCC Manassas Virginia tats Unis des groupes d chantillons cytologiques en mi
79. gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Les risques absolus corrig s de maladie l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay sont pr sent s dans le Tableau 4a Le risque de l sions 2 CIN2 chez les femmes pr sentant des types de HPV 16 18 et ou 45 tait de 12 6 par rapport a 3 4 chez les femmes pr sentant un ou plusieurs des 11 autres types de High Risk HPV et de 0 6 chez les femmes ne pr sentant aucun des types de High Risk HPV Les risques absolus de maladie non corrig s sont pr sent s de mani re globale dans le Tableau 9b et par tranche d ge dans le Tableau 10 Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 31 AW 11244 901 Rev 002 FR Performances du test avec le Tigris DTS System Aptima Tableau 4a Population NILM 2 30 ans Risque absolu de l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay estimations corrig es pour le biais de v rification gt CIN2 gt CIN3 R sultat du Aptima R sultat du AHPV GT intenoestalion HPV Assay Assay p Risque absolu Risque absolu IC a 95 IC a 95 Pos HPV 16 et ou pos HPV 16 et ou 12 6 9 5 HPV 18 45 pos HPV 18 45 3 7 21 4 2 1 16 8 Pos HPV 16 14 5 12 1 n g HPV 18 45 RSS APY Se uniquement 2 1
80. h Risk HPV observ s dans l tude clinique d apr s les r sultats des tests r alis s avec le Aptima HPV Assay et le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay a t class e de mani re globale par tranche d age et par site de test Les r sultats sont indiqu s dans le Tableau 1 pour les populations avec un r sultat d ASC US atypical squamous cells of undetermined significance ASC US et les populations avec un r sultat n gatif de NILM negative for intraepithelial lesion or malignancy Tableau 1 Pr valence du mRNA du High Risk HPV dans les populations par tranche d age par site de test et tous facteurs combin s HR haut risque SO Sans objet Pos positif Types de HPV 31 33 35 39 51 52 56 58 59 66 et 68 Taux de positivit en x n Population ASC US Population NILM 2 21 ans 2 30 ans HPV 16 Pos Pos HPV16 11 autres HPV 16 Pos toe et 11 autres Pos HPV 18 45 et 18 45 pos HR Pos HPV 18 45 18 45 pos HR Tous 7 8 5 2 0 3 25 5 0 4 0 4 0 3 9 71 912 47 912 3 912 233 912 47 10 846 47 10 846 0 10 846 421 10 846 Tranche d ge en ann es x 13 2 4 9 0 5 38 3 VAR 51 386 19 386 2 386 148 386 3 0 Lun 0 30 39 5 4 7 0 0 4 21 8 0 7 0 6 0 5 3 14 257 18 257 1 257 56 257 30 4 188 27 4 188 0 4 188 221 4 188 gt 40 2 2 3 7 0 10 8 0 3 0 3 0 3 0 ioe 6 269 10 269 0 269 29 269 17 6 65
81. i and the IARC HPV Prevalence Surveys Study Group 2005 Worldwide distribution of human papillomavirus types in cytologically normal women in the International Agency for Research on Cancer HPV prevalence surveys a pooled Analysis The Lancet 366 991 Stoler M H T C Wright Jr J Cuzick J Dockter J Reid D Getman C Giachetti 2013 Aptima HPV assay performance in women with atypical squamous cells of undetermined significance cytology results American Journal of Obstetrics amp Gynecology 208 2 144 145 Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 61 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima faal IVD Hologic Inc 10210 Genetic Center Drive San Diego CA 92121 USA Service clients 1 844 Hologic 1 844 465 6442 customersupport hologic com Service technique 1 888 484 4747 molecularsupport hologic com Pour obtenir des coordonn es suppl mentaires visitez le site www hologic com Ce produit est destin tre utilis uniquement pour des diagnostics in vitro humains Hologic Aptima DTS Panther PreservCyt ThinPrep et Tigris sont des marques commerciales et ou des marques d pos es d Hologic Inc et ou de ses filiales aux Etats Unis et ou dans d autres pays Toutes les autres marques commerciales qui peuvent appara tre dans ce notice sont des marques commerciales de leurs d tenteurs respectifs 2007 2015 Hologic Inc Tous droits r serv s AW 11244 901 Rev 002 FR 2015 02 Aptima HPV 16
82. ie e ee pata cde eee a he ae eee eda 61 Tigris DTS System Panther System Tigris DTS System 8 Panther System cccceceecsseeeeseeneeeeeesseeeeeeeeneseeees 13 R actifs et mat riels fournis 8 R actifs et mat riels fournis 13 Mat riel requis mais disponible s par ment 9 Mat riel requis mais disponible s par ment 14 Proc dure de test pour le Tigris DTS System 10 Proc dure de test pour le Panther System 15 Remarques concernant la proc dure 12 Remarques concernant la proc dure 17 Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 1 AW 11244 901 Rev 002 FR Informations g n rales Tigris DTS System et Panther System Aptima Informations g n rales Tigris DTS System et Panther System Usage pr vu Le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay est un test in vitro d amplification de l acide nucl ique pour la d tection quanlitative du RNA messager mRNA viral E6 E7 des types 16 18 et 45 du Human Papillomavirus a haut risque High Risk HPV dans les chantillons cervicaux de femmes dont les r sultats taient positifs avec le Aptima HPV Assay Le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay peut diff rencier le HPV 16 du HPV 18 et ou 45 mais ne diff rencie pas le HPV 18 du HPV 45 Les chantillons cervicaux pr lev s dans des flacons ThinPrep Pap Test contenant de la solution PreservCyt pe
83. illons de biopsie obtenus tous avec un r sultat d histologie Normal CIN1 n 15 aucune biopsie pr lev e n 3 et lames de biopsie perdues n 1 Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse AUne femme a pr sent un adenocarcinoma in situ AIS Le risque absolu de maladie l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay sont pr sent s dans le Tableau 22 Le risque de l sions 2 CIN2 chez les femmes pr sentant des types de HPV 16 18 et ou 45 tait de 28 8 par rapport a 14 0 chez les femmes pr sentant un ou plusieurs des 11 autres types de High Risk HPV et de 2 6 chez les femmes ne pr sentant aucun des types de High Risk HPV Le risque absolu est indiqu par tranche d age dans le Tableau 23 Tableau 22 Population ASC US 2 21 ans Risque absolu de l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay R sultat du Apti R sultat du AHPV GT ZON e es a ma es a l i HPV Assay g Assay Interpr tation Risque absolu Risque absolu IC 95 IC 95 Pos HPV 16 et ou Pos HPV 16 et ou 28 8 34 118 16 9 20 118 pos HPV 18 45 HPV 18 45 22 2 35 7 12 1 21 8 Pos HPV 16 r 37 1 26 70 21 4 15 70 n g HPV 18 45 Pos HPV
84. ion d hypochlorite de sodium 5 ou 0 7 M minimum Eau pour le Tigris DTS System Consultez le Tigris DTS System Operator s Manual Manuel de l op rateur du Tigris DTS System pour les sp cifications Gants jetables Mat riel optionnel Optimiseur d eau de javel pour nettoyage N de r f 105118 301191 104772 02 900907 900931 105523 302382 301048 302380 10612513 Tecan 301154C 302657 105668 103036A CL0041 CL0041 501604 N de r f 302101 Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 9 AW 11244 901 Rev 002 FR Tigris DTS System Aptima Proc dure de test pour le Tigris DTS System Remarque Consultez le Tigris DTS System Operator s Manual Manuel de l op rateur du Tigris DTS System pour de plus amples informations sur la proc dure avec ce syst me A Pr paration de la zone de travail Nettoyez les plans de travail sur lesquels les r actifs seront pr par s Essuyez les plans de travail et les pipeteurs avec une solution d hypochlorite de sodium de 2 5 a 3 5 0 35 M 0 5 M Laissez la solution d hypochlorite de sodium au contact des surfaces et des pipeteurs pendant au moins 1 minute avant de rincer a l eau Ne laissez pas s cher la solution d hypochlorite de sodium Couvrez la surface de la paillasse sur laquelle les r actifs et les chantillons seront pr par s avec des protections de laboratoire absorbantes propres envers plastifi B Pr paration des r ac
85. irus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide J Pathol 189 12 19 Li N Franceschi S Howell Jones R Snijders P J F Clifford G M Human papillomavirus type distribution in 30 848 invasive cervical cancers worldwide Variation by geographical region histological type and year of publication Int J Cancer 2011 128 927 935 doi 10 1002 ijc 25396 Czegledy J C Losif B G Hansson M Evander L Gergely and G Wadell 1995 Can a test for E6 E7 transcripts of human papillomavirus type 16 serve as a diagnostic tool for the detection of micrometastasis in cervical cancer Int J Cancer 64 3 211 5 Doorbar J 2006 Molecular biology of human papillomavirus infection and cervical cancer Clin Sci Lond 110 5 525 41 Burd E M 2003 Human papillomavirus and cervical cancer Clin Microbiol Rev 16 1 1 17 Lambert P F H Pan H C Pitot A Liem M Jackson and A E Griep 1993 Epidermal cancer associated with expression of human papillomavirus type 16 E6 and E7 oncogenes in the skin of transgenic mice Proc Natl Acad Sci U S A 90 12 5583 7 Kjaer S K A J C van den Brule G Paull E I Svare M E Sherman B L Thomsen M Suntum J E Bock P A Poll and C J L M Meijer 2002 Type specific persistence of high risk human papillomavirus HPV as indicator of high grade cervical squamous intraepithelial lesions in young women population based prospective follow up study BMJ 325 7364 572 579 Monsonego J F X
86. istologie Normal CIN1 n 15 aucune biopsie pr lev e n 3 et lames de biopsie perdues n 1 Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 26 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du test avec le Tigris DTS System 45 Genotype Assay aux fins de l analyse AUne femme a pr sent un adenocarcinoma in situ AIS Le risque absolu de maladie l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay sont pr sent s dans le Tableau 3 Le risque de l sions 2 CIN2 chez les femmes pr sentant des types de HPV 16 18 et ou 45 tait de 29 1 par rapport a 14 3 chez les femmes pr sentant un ou plusieurs des 11 autres types de High Risk HPV et de 2 2 chez les femmes ne pr sentant aucun des types de High Risk HPV Le risque absolu est indiqu par tranche d ge dans le Tableau 4 2 CIN2 2 CIN3 R sultat du Aptima AHPV GT interpretation HPV Assay R sultat du test P Risque absolu Risque absolu IC 95 IC 95 Pos HPV 16 et ou Pos HPV 16 et ou 29 1 34 117 16 2 19 117 pos HPV 18 45 HPV 18 45 22 4 36 0 11 4 21 1 Pos HPV 16 35 7 25 70 20 0 14 70 n g HPV 18 45 PORSHP Nee Uniquement 26 1 45 9 12 6 28 0 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 15 9 7 44 9 1 4 44 pos HP
87. k HPV 2 CIN2 2 CIN3 Interpr tation des r sultats du Aptima Assay Risque relatif Risque relatif IC a 95 IC a 95 Positif au HPV 16 et ou 18 45 par rapport 13 2 22 1 a n gatif au HPV HR 7 0 24 7 7 7 63 8 Positif au HPV 16 et ou 18 45 par rapport 2 0 3 8 a positif aux autres HPV HR 1 3 3 1 1 8 7 8 Positif aux autres HPV HR par rapport 6 5 5 9 a n gatif au HPV HR 3 4 12 3 1 9 18 6 Positif au HPV HR par rapport 8 7 11 4 a n gatif au HPV HR 4 8 15 9 4 0 32 0 Pr valence 8 8 79 893 3 7 33 893 IC intervalle de confiance HR haut risque Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Les rapports de vraisemblance l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sont indiqu s dans le Tableau 6 Les types de HPV 16 18 et ou 45 ont montr 4 2 fois plus de probabilit d tre pr sents chez une femme avec des l sions 2 CIN2 et 5 1 fois plus de probabilit d tre pr sents chez une femme avec des l sions 2 CIN3 2 CIN2 2 CIN3 Interpr tation des r sultats du Aptima Assay Rapport de vraisemblance Rapport de vraisemblance IC a 95 IC a 95 or 4 2 5 1 Positif au HPV 16 et ou 18 45 3 0 5 8 3 4 6 9 ou 1 7 1 2 Positif aux autres HPV HR 1 3 2 3
88. lieu liquide ThinPrep r siduels ou en diluant des chantillons cliniques du HPV 16 18 et ou 45 dans des groupes d chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep r siduels Les chantillons du panel n gatifs au HPV ont t pr par s avec des groupes d chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep Dans l tude 1 2 op rateurs dans chacun des 3 sites de test 1 appareil par site ont r alis 2 listes de travail du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay par jour pendant 3 jours Le test a t effectu en utilisant 1 lot de r actif Chaque liste de travail contenait 3 r plicats de chacun des chantillons du panel de reproductibilit Cent huit 108 tubes d chantillon individuel ont t test s pour chaque chantillon du panel 3 sites x 1 appareil x 2 op rateurs x 1 lot x 2 listes de travail par jour x 3 jours x 3 r plicats Dans l tude 2 le test a t men en interne pendant 20 jours avec un total de 162 r actions test es pour chaque chantillon du panel 1 site x 3 appareils x 3 op rateurs x 3 lots x 2 listes de travail x 3 r plicats Les chantillons du panel sont d crits dans le Tableau 13a et le Tableau 17b accompagn s d un r sum de la concordance avec les r sultats attendus respectivement pour le HPV 16 et le HPV 18 45 Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 37 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du test avec le Tigris DTS System Tableau 13a Etudes 1 et 2 de pr ci
89. mporte quel lot peut tre utilis R Il est n cessaire de m langer soigneusement les r actifs de test pour obtenir des r sultats pr cis S Des embouts de pipette filtre hydrophobe doivent tre utilis s Conditions de conservation et de manipulation des r actifs N utilisez pas les r actifs au del de la date de p remption indiqu e sur les flacons Voir ci dessous pour des directives de conservation suppl mentaires A Les r actifs suivants se conservent entre 2 C et 8 C r frig r s d s leur r ception R actif d amplification du HPV 16 18 45 R actif enzymatique du HPV 16 18 45 R actif sonde du HPV 16 18 45 R actif de contr le interne du HPV 16 18 45 Calibrateurs positifs HPV 16 18 45 et calibrateurs n gatifs HPV 16 18 45 Les r actifs suivants se conservent entre 15 C et 30 C temp rature ambiante Solution de reconstitution pour amplification du HPV 16 18 45 Solution de reconstitution enzymatique du HPV 16 18 45 Solution de reconstitution de sonde du HPV 16 18 45 R actif de capture de cible du HPV 16 18 45 R actif de s lection du HPV 16 18 45 Solution de lavage R actif huileux Tampon pour solution de d sactivation R actif Auto Detect 1 Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 5 AW 11244 901 Rev 002 FR Informations g n rales Tigris DTS System et Panther System Aptima R actif Auto Detect 2 Aptima System Fluid Preservative Tigris DTS System uniquement C A
90. n tiques d mission de lumi re sont relativement plus longues signal brillant Avertissements et pr cautions A B Pour diagnostic in vitro Pour d autres avertissements et pr cautions sp cifiques concernant lappareil consultez le Tigris DTS System Operator s Manual Manuel de l op rateur du Tigris DTS System ou le Panther System Operator s Manual Manuel de l op rateur du Panther System Recommandations concernant les laboratoires C N utilisez que le mat riel de laboratoire jetable fourni ou recommand D Prenez les pr cautions de laboratoire habituelles Il est interdit de manger de boire ou de fumer dans les zones de travail signal es Portez des gants jetables sans poudre des lunettes de protection et des blouses de laboratoire pour manipuler les chantillons et les r actifs du kit Lavez vous bien les mains apr s avoir manipul les chantillons et les r actifs du kit Avertissement Substances irritantes et corrosives vitez tout contact d Auto Detect 1 et Auto Detect 2 avec la peau les yeux et les muqueuses En cas de contact de ces liquides avec la peau ou les yeux lavez la zone affect e l eau En cas de d versement de ces liquides diluer le produit r pandu l eau avant de l essuyer Les plans de travail pipettes et autre mat riel doivent tre r guli rement d contamin s avec une solution d hypochlorite de sodium de 2 5 3 5 0 35 M 0 5 M Consultez Proc
91. n cancer La plupart des femmes infect es par un ou plusieurs types de High Risk HPV ne d veloppent pas de l sions CIN2 CIN3 ni de cancer Les substances suivantes peuvent interf rer avec les performances du test lorsqu elles sont pr sentes a des concentrations sup rieures a celles qui sont indiqu es lubrifiants vaginaux contenant du Polyquaternium 15 a 1 m v cr me antifongique contenant du tioconazole a 0 03 m v mucus 0 3 m v hormones intravaginales contenant de la progest rone 1 m v Trichomonas vaginalis 3 x 10 cellules ml Des concentrations lev es de HPV 45 peuvent diminuer la capacit du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay d tecter la pr sence de HPV 16 des faibles niveaux Les effets d autres variables potentielles telles que les coulements vaginaux l utilisation de tampons etc et des variables de pr l vement des chantillons n ont pas t valu s L utilisation de ce dispositif doit tre r serv e au personnel form l utilisation Aptina HPV 16 18 45 Genotype Assay Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 22 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Limites Tigris DTS System et Panther System O La contamination crois e des chantillons peut produire des r sultats faussement positifs Le taux de contamination de transfert du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Tigris DTS System et le Panther System a t estim respectivement dans des tu
92. nait des femmes de 21 ans et plus pr sentant des r sultats cytologiques d ASC US et la population de l tude NILM incluait des femmes de 30 ans ou plus pr sentant des r sultats cytologiques de NILM Des femmes provenant de 18 sites cliniques principalement des cliniques d obst trique gyn cologie refl tant une vaste distribution g ographique et une population vari e ont subi des analyses Au cours de l essai CLEAR des chantillons cytologiques de suivi r siduels ont t test s avec le Aptima HPV Assay et un test de DNA du HPV disponible sur le march Ces chantillons ont ensuite t divis s en aliquotes qui ont t archiv es et conserv es a 70 C jusqu a ce qu elles soient test es avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Tigris DTS System Dans l essai clinique sur le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay les chantillons provenant des chantillons cytologiques de suivi r siduels ont t test s avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay r alis sur le Tigris DTS System Les femmes de l tude ASC US ont toutes t orient es vers une colposcopie ind pendamment des r sultats du Aptima HPV Assay et du test de DNA du HPV disponible sur le march Une biopsie par curetage endocervical CEC et des biopsies cervicales a l emporte pi ce 1 biopsie de chacun des 4 quadrants ont t effectu es Une biopsie a l emporte pi ce a t men e m thode dirig e 1 biopsie par l sion a chaqu
93. nt n gatifs avec les deux tests ont t orient es vers une colposcopie pour l valuation initiale Une biopsie par CEC a t r alis e chez chacune des femmes ayant subi la colposcopie Des biopsies l emporte pi ce ont t obtenues uniquement sur les l sions visibles m thode dirig e 1 biopsie par l sion Le suivi des femmes de l tude NILM ne pr sentant pas de l sion 2 CIN2 est en cours depuis 3 ans au moyen d examens cytologiques annuels Les femmes avec des r sultats cytologiques d ASC US ou plus graves pendant la p riode de suivi sont orient es vers une colposcopie bas e sur la m me proc dure de biopsie que celle utilis e lors de l valuation initiale L tat pathologique a t d termin partir d un panel d examen histologique consensuel fond sur l accord d au moins 2 pathologistes experts L tat cytologique et HPV des femmes tait inconnu des pathologistes experts et aucun ne connaissait les diagnostics histologiques r alis s par l autre Les chercheurs les cliniciens et les femmes n ont pas eu connaissance des r sultats du test HPV jusqu la r alisation de la colposcopie afin d viter les biais Pour valider l usage pr vu du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System en tant que test r flexe la suite d un r sultat positif avec le Aptima HPV Assay les chantillons cytologiques de Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 44 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima
94. ntillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep Le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay r alis sur le Panther System a t valu l aide d chantillons cytologiques de suivi pr lev s chez des femmes ayant donn leur consentement dans le cadre de l essai CLEAR une tude clinique am ricaine multicentrique prospective L essai CLEAR a t men pour d terminer les performances cliniques du Aptima HPV Assay sur le Tigris DTS System dans la d tection des n oplasies cervicales intra pith liales de grade 2 ou de pathologies cervicales plus graves l sions 2 CIN2 Les femmes ont t inscrites a l tude ASC US ou l tude NILM d apr s les r sultats cytologiques en milieu liquide ThinPrep de suivi dans le cadre de d pistages de routine du cancer du col de l ut rus La population de l tude ASC US comprenait des femmes de 21 ans et plus pr sentant des r sultats cytologiques d ASC US et la population de l tude NILM incluait des femmes de 30 ans ou plus pr sentant des r sultats cytologiques de NILM Des femmes provenant de 18 sites cliniques principalement des cliniques d obst trique gyn cologie refl tant une vaste distribution g ographique et une population vari e ont subi des analyses Au cours de l essai CLEAR des chantillons cytologiques de suivi r siduels ont t test s avec le Aptima HPV Assay r alis sur le Tigris DTS System et avec le test de DNA du HPV Ces chantillons ont ensuite
95. ortoirs de r actifs et des adaptateurs TCR de taille appropri e sont utilis s Remarques concernant la proc dure A Calibrateurs 1 Chaque liste de travail doit contenir 2 r plicats du calibrateur n gatif et de chaque calibrateur positif Pour fonctionner correctement avec le logiciel Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay le calibrateur n gatif doit se trouver dans le tube de la premi re position du premier portoir de la liste de travail le calibrateur positif 1 dans le tube de la seconde position du premier portoir de la liste de travail et le calibrateur positif 2 dans le tube de la troisi me position du premier portoir de la liste de travail 2 Toute tentative de pipeter plus de deux r plicats d un tube de calibrateur peut entra ner des erreurs d insuffisance de volume 3 Les calibrateurs doivent tre utilis avec le lot de r f rence de r actifs correspondant L op rateur doit v rifier que le lot correct de calibrateurs est utilis avec le lot de r f rence correspondant des kits de r actifs tel que cela est indiqu sur la fiche des codes barres du lot de r f rence Le num ro de lot appropri doit tre indiqu lors de la commande de calibrateurs suppl mentaires Temp rature La temp rature ambiante est d finie comme tant comprise entre 15 C et 30 C Gants poudr s Comme avec tout syst me de r actif l exc s de poudre sur certains gants peut entra ner la contamination des tubes ouverts
96. os pos HPV 18 45 Pos HPV 16 et 18 45 S O 0 0 S O 0 0 A 3 4 1 29 0 0 29 N g HPV 16 18 45 Pos autres HPV HR 0 1 14 0 0 0 8 2 F 13 6 6 44 6 8 3 44 Pos ou n g Pos HPV HR 6 5 20 6 1 8 11 4 er 7 5 1 9 4 213 0 9 2 213 N gatif N g HPV 16 18 45 N g HPV HR 0 6 3 4 0 1 2 0 Pr valence 3 9 10 257 1 9 5 257 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay HR haut risque SO Sans objet N g n gatif Pos positif Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 28 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du test avec le Tigris DTS System Le risque relatif de maladie d apr s les r sultats positifs et n gatifs du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sont pr sent s dans le Tableau 5 Les femmes pr sentant les types de HPV 16 18 et ou 45 ont montr 13 2 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN2 et 22 1 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN3 que les femmes ne pr sentant aucun type de High Risk HPV Les femmes pr sentant les types de HPV 16 18 et ou 45 ont montr 2 0 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN2 et 3 8 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN3 que les femmes pr sentant un ou plusieurs des 11 autres types de High Ris
97. ositif 100 108 108 100 162 162 cellules HeLa 3 3 cellules Fortement positif 96 6 100 97 7 100 Cellules SiHa 1 6 cellule Faiblement positif et Positif 100 108 108 99 4 161 162 cellules MS751 42 5 cellules Fortement positif 96 6 100 96 6 99 9 Cellules SiHa 15 7 cellules Fortement positif et Positif 63 9 69 108 67 7 109 161 cellules HeLa 0 3 cellule Faiblement positif 54 5 72 3 60 1 74 4 Cellules SiHa 15 7 cellules Fortement positif et Positif 98 1 106 108 92 0 149 162 cellules MS751 4 3 cellules Faiblement positif 93 5 99 5 86 8 95 3 Cellules SiHa 1 6 cellule N aatif 100 108 108 99 4 161 162 Faiblement positif 9 96 6 100 96 6 99 9 Cellules HeLa 0 3 cellules Positif 71 3 77 108 92 5 149 161 Faiblement positif 62 1 79 0 87 4 95 7 Cellules MS751 4 3 cellule Positif 86 1 93 108 69 1 112 162 Faiblement positif 78 3 91 4 61 6 75 7 chantillon clinique 2 HPV 16 N aatif 100 107 107 99 4 160 161 Faiblement positif 9 96 5 100 96 6 99 9 Echantillon clinique 2 HPV 18 45 Positif 88 0 95 108 79 6 129 162 Faiblement positif 80 5 92 8 72 8 85 1 Cellules SiHa 0 1 cellule N aatif 100 108 108 100 162 162 Fortement n gatif 9 96 6 100 97 7 100 Cellules HeLa 0 02 cellules N aatif 92 6 100 108 86 4 140 162 Fortement n gatif 9 86 1 96 2 80 3 90 9 Cellules MS751 0 04 cellule N aatif 97 2 105 108 98 1 159 162
98. p rature ambiante avant de les traiter 2 Ne m langez pas les chantillons au vortex 3 Inspectez les tubes d chantillon avant de les charger dans le portoir Si un tube d chantillon pr sente des bulles ou un volume inf rieur a celui g n ralement observe centrifugez le tube pendant 5 minutes a 420 FCR pour vous assurer qu il n y a pas de liquide dans le bouchon Remarque Le non respect de l tape 3 peut entra ner un coulement de liquide depuis le bouchon du tube d chantillon E Pr paration du syst me Configurez le syst me conform ment aux instructions du Panther System Operator s Manual Manuel de l op rateur du Panther System et la section Remarques concernant la proc dure ci dessous V rifiez que des portoirs de r actifs et des adaptateurs TCR de taille appropri e sont utilis s Remarques concernant la proc dure A Calibrateurs 1 Pour travailler correctement avec le logiciel Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System deux r plicats du calibrateur n gatif et de chaque calibrateur positif sont n cessaires Un flacon de chaque calibrateur peut tre charg dans une position de portoir quelconque d une rang e du compartiment des chantillons du Panther System Le pipetage des chantillons commence quand l une des deux conditions suivantes est satisfaite a Les calibrateurs positifs et n gatifs sont en cours de traitement par le Panther System b Des r sultats valides
99. pathologique v rifi 2 CIN2 v rifi 2 CIN3 non v rifi RE HV Fo LE a Total Femmes Femmes Femmes Femmes avec un i u u x femmes Femmes non F non statut Assay AHPV GT HPV atteintes atteintes cine atteintes pathologique 2 CIN2 l sions gt CIN3 l sions inconnu lt CIN2 E lt CIN3 inconnu Positif Positif 88 6 52 5 53 30 34 1 Positif N gatif 10 1 5 1 5 4 40 0 Positif Aucun 2 0 1 0 1 1 50 0 r sultat Positif N gatif Positif 291 TA 169 4 172 115 39 5 N gatif N gatif 85 0 14 0 14 71 83 5 zu Aucun N gatif rites 15 0 4 0 4 11 73 3 Total 491 14 245 10 249 232 47 3 S O Positif 282 3 177 1 179 102 36 2 kkk A H O N gatif S O N gatif 9 467 2 362 0 364 9 103 96 2 S 0 Aucun 599 1 4 0 5 594 99 2 r sultat Total 10 839 20 788 11 797 10 031 92 5 AHPV GT Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay SO Sans objet Tous les chantillons disposaient de r sultats finaux valides lors du test initial ou apr s r solution des r sultats initiaux non valides par la proc dure 616 femmes disposant de r sultats avec le Aptima HPV Assay n avaient pas de r sultat de test de DNA du HPV principalement en raison d un volume insuffisant de l chantillon cytologique Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analy
100. pr s reconstitution les r actifs suivants restent stables pendant 30 jours lorsqu ils sont conserv s entre 2 C et 8 C R actif d amplification du HPV 16 18 45 R actif enzymatique du HPV 16 18 45 R actif sonde du HPV 16 18 45 D La solution de r actif de capture de cible working Target Capture Reagent WTCR reste stable pendant 30 jours lorsqu elle est conserv e entre 15 C et 30 C Ne r frig rez pas E Jetez tous les r actifs reconstitu s et le WTCR non utilis s apr s 30 jours ou apr s la date de p remption du lot de r f rence la premi re ch ance pr valant F Les r actifs du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay restent stables pendant 48 heures cumul es lorsqu ils sont conserv s int gr s au Tigris DTS System G Les r actifs du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay restent stables pendant 72 heures cumul es lorsqu ils sont conserv s int gr s au Panther System H Le r actif sonde et le r actif sonde reconstitu sont photosensibles Conservez les r actifs labri de la lumi re Ne congelez pas les r actifs Collecte et conservation des chantillons A Collecte et traitement des chantillons chantillons cytologiques en milieu liquide ThinPrep 1 Pr levez les chantillons cervicaux dans des flacons ThinPrep pour test de Pap contenant de la solution PreservCyt avec des dispositifs de type balai ou cytobrosse spatule conform ment aux directives du fabricant 2 Avant ou apr s le
101. que Target Astroglide 1 m v Mousse contraceptive vaginale MCV Spermicide gel contraceptif 10 m v Options Gel contraceptif vaginal Conceptrol Miconazole 3 Up amp Up marque Target 10 m v Pommade antifongique Monistat 3 Combipack Tioconazole 1 Up amp Up marque Target 0 03 m v Douche vaginale Summer s Eve Douche vaginale 10 viv Douche vaginale Up amp Up marque Target Spray d odorant f minin Summer s Eve Spray f minin 10 m v Spray d odorant f minin FDS Mucus Mucine porcine 0 3 m v Cr me vaginale Estrace cestrog ne 10 m v Hormones intravaginales Cr me Crinone progest rone 1 m v Sang total Sang total 5 viv Leucocytes Leucocytes 1x10 cellules ml Solution de lavage d acide 4 Cide ac tique glacial solution CytoLyt 2 6 viv ac tique glacial concentration dans l chantillon de test Echantillon cytologique en milieu liquide ThinPrep dilu au 1 2 9 dans du STM comparable un chantillon transf r dans un tube de transfert d chantillons Aptima Lubrifiants personnels contenant du Polyquaternium 15 Une interf rence du sang total avec le test a t constat e a une concentration de test de 10 v v ASolution de lavage a l acide ac tique glacial pr par en m langeant 1 volume d acide ac tique glacial et 9 volumes de solution Cytolyt conform ment au ThinPrep 2000 System Operator
102. queurs chimiluminescents qui sont compl mentaires de l amplicon Les sondes d acide nucl ique marqu es s hybrident sp cifiquement l amplicon Le r actif de s lection diff rencie les sondes hybrid es de celles qui ne le sont pas en d sactivant le marqueur sur les sondes non hybrid es Lors de l tape de d tection la lumi re mise par les hybrides RNA DNA marqueurs est mesur e l aide d un luminom tre en tant que signaux de photons appel s Unit s relatives de lumi re Relative Light Units RLU Les r sultats finaux du test sont interpr t s en fonction du rapport du signal divis par le seuil signal to cutoff S CO de l analyte Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 3 AW 11244 901 Rev 002 FR Informations g n rales Tigris DTS System et Panther System Aptima Un IC est ajout a chaque r action grace au r actif de capture de cible Le IC surveille les tapes de capture de cible d amplification et de d tection du test Le double test cin tique Dual Kinetic Assay DKA est la m thode utilis e pour diff rencier les signaux du HPV des signaux du IC L amplicon du IC et du HPV 16 sont d tect s l aide de sondes dont les cin tiques d mission de lumi re sont rapides signal clair Le signal IC pour chaque r action est distingu du signal HPV 16 par l ampleur de l mission de lumi re Les amplicons sp cifiques du HPV 18 et 45 sont d tect s l aide de sondes dont les ci
103. rformances du Panther System Assay Tableau 36b Etudes 1 et 2 de pr cision du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Description du panel et concordance en pourcentage avec les r sultats attendus pour le HPV 18 45 a Concordance en pourcentage IC 95 Description du panel R sultat attendu z copies ou cellules r action pour le HPV 18 45 Etude 1 Etude 2 3 sites de test 1 site de test TIV de HPV 16 240 copies N gatif 100 108 108 100 162 162 Fortement positif g 96 6 100 97 7 100 TIV de HPV 18 260 copies Positif 100 107 107 100 162 162 Fortement positif 96 5 100 97 7 100 TIV de HPV 45 350 copies Positif 100 108 108 100 162 162 Fortement positif 96 6 100 97 7 100 chantillon clinique 1 HPV 16 N oatif 100 108 108 100 162 162 Fortement positif g 96 6 100 97 7 100 chantillon clinique 1 HPV 18 45 Positif 100 108 108 100 161 161 Fortement positif 96 6 100 97 7 100 Cellules SiHa 4 cellules Fortement positif et Positif 100 108 108 100 162 162 cellules HeLa 0 7 cellule Faiblement positif 96 6 100 97 7 100 Cellules SiHa 0 4 cellule Faiblement positif et Positif 100 108 108 100 162 162 cellules HeLa 7 cellules Fortement positif 96 6 100 97 7 100 Cellules SiHa 0 4 cellule N oatif 100 108 108 99 4 161 162 Faiblement positif g 96 6 100 96 6 99 9
104. rganisme sur la sp cificit du test taient bas s sur la positivit Tableau 18 Panel de sp cificit analytique Organismes et concentration sans r activit crois e Concentration test e Concentration test e Organisme ne pr sentant pas de Organisme ne pr sentant pas de r activit crois e r activit crois e Bact ries Acinetobacter Iwoffii 1x10 CFU ml Lactobacillus acidophilus 1x10 CFU ml Actinomyces israelii 1x10 CFU ml Lactobacillus crispatus 1x10 CFU ml Alcaligenes faecalis 1x10 CFU ml Listeria monocytogenes 1x10 CFU ml Atopobium vaginae 1x10 CFU ml Mobiluncus curtisii 1x10 CFU ml Bacteroides fragilis 1x10 CFU ml Mycoplasma genitalium 2 5x10 copies ml Bifidobacterium adolescentis 1x10 CFU ml Mycoplasma hominis 1x10 CFU ml Campylobacter jejuni 1x10 CFU ml Neisseria gonorrhoeae 1x10 CFU ml Chlamydia trachomatis 1x10 IFU ml Peptostreptococcus magnus 1x10 CFU ml Clostridium difficile 1x10 CFU ml Prevotaella bivia 1x10 CFU ml Corynebacterium genitalium 1x10 CFU ml Propionibacterium acnes 1x10 CFU ml Cryptococcus neoformans 1x10 CFU ml Proteus vulgaris 1x10 CFU ml Enterobacter cloacae 1x10 CFU ml Pseudomonas aeruginosa 1x10 CFU ml Enterococcus faecalis 1x10 CFU ml Staphylococcus aureus 1x10 CFU ml Escherichia coli 1x10 CFU ml Staphylococcus epidermidis 1x10 CFU ml Fusobacterium nucleatum 1x10 CFU ml Streptococcus agalactia
105. s tudes ont associ les g notypes 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 66 et 68 la progression de la maladie Les femmes qui presentent une infection persistante par l un de ces types ont un risque plus lev de d veloppement d une dysplasie s v re ou de carcinome du col de l ut rus Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 2 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Informations g n rales Tigris DTS System et Panther System Les tudes ont montr que les diff rents types de High Risk HPV conf rent diff rents taux de risque de d veloppement d une dysplasie s v re ou de carcinome du col de l ut rus A l chelle mondiale les types 16 18 et 45 du HPV sont associ s a 80 environ de tous les cancers invasifs du col de l ut rus Ces trois types sont d tect s dans 75 des carcinomes squameux le type 16 lui seul tant d tect dans plus de 60 de tous les carcinomes squameux Dans l adenocarcinoma les types de HPV 16 18 et 45 sont d tect s dans 80 94 des cas les types 18 et 45 repr sentant pr s de la moiti de ces infections La pr sence du type de HPV 18 au stade pr coce du cancer du col de l ut rus a t associ un mauvais pronostic Les types de HPV 18 et 45 sont sous d tect s dans les l sions pr canc reuses ce qui peut tre le r sultat de l sions occultes du canal cervical qui sont inaccessibles lors de la colposcopie Chez les femmes infect es par le HPV de
106. s e pour estimer le nombre de femmes atteintes de l sions qui aurait t identifi si toutes les femmes avaient subi une colposcopie tant donn les r sultats du test Pour cette m thode l tat pathologique manquant a t imput en fonction des r sultats du Aptima HPV Assay r alis sur le Panther System du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay r alis sur le Panther System ainsi que du test de DNA du HPV Cette m thode diff re de celle qui est utilis e pour valuer le Tigris DTS System qui imputait les r sultats des tests avec le Aptima HPV Assay et le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Tigris DTS System et n imputait pas les r sultats des tests sur le Panther System Il n est donc pas valide de comparer les estimations des performances corrig es pour le biais de v rification dans cette section et celles de la section Tigris DTS System Les estimations des performances corrig es pour le biais de v rification et les estimations des performances non corrig es bas es sur les 808 femmes avec un tat pathologique v rifi sont pr sent es Tableau 27 Population NILM 2 30 ans Classification des femmes NILM valuables d apr s les r sultats du Aptima HPV Assay du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay du test de DNA du HPV de l tat pathologique l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 et de l tat de v rification de la maladie tat pathologique tat pathologique tat
107. s les 5 10 minutes Laissez le r actif de s lection parvenir temp rature ambiante avant l emploi Ne l utilisez pas tant que le pr cipit ou la turbidit n ont pas disparu 5 M langez bien chaque r actif en le retournant doucement avant de le charger dans le syst me vitez la formation de mousse pendant le retournement des r actifs 6 Ne rajoutez pas de r actif dans les flacons Le Tigris DTS System reconna t et rejette les flacons qui ont t remplis nouveau Manipulation des chantillons 1 Laissez les chantillons calibrateurs chantillons et tout chantillon externe de contr le de qualit fourni par l utilisateur parvenir temp rature ambiante avant de les traiter 2 Ne m langez pas les chantillons au vortex 3 Inspectez les tubes d chantillon avant de les charger dans les portoirs Si un tube d chantillon pr sente des bulles ou un volume inf rieur a celui g n ralement observ centrifugez le tube pendant 5 minutes 420 FCR pour vous assurer qu il n y a pas de liquide dans le bouchon Remarque Le non respect de l tape 3 peut entra ner un coulement de liquide depuis le bouchon du tube d chantillon Pr paration du syst me Configurez le syst me et la liste de travail conform ment aux instructions du Tigris DTS System Operator s Manual Manuel de l op rateur du Tigris DTS System et la section Remarques concernant la proc dure ci dessous V rifiez que des p
108. s vers une visite de suivi a la suite d un r sultat anormal au test de Pap Les chantillons ont d abord t test s avec le Aptima HPV Assay n 651 Les chantillons dont les r sultats taient positifs avec le Aptima HPV Assay n 414 ont t test s avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Tigris DTS System et le Panther System La concordance clinique du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay pour la d tection du High Risk HPV de type 16 18 et 45 sur le Panther System a t d termin e en utilisant les r sultats obtenus sur le Tigris DTS System comme m thode de r f rence Les concordances positives et n gatives en pourcentage ainsi que les intervalles de confiance a 95 qui y sont associ s ont t calcul s Les r sultats sont pr sent s dans le Tableau 34 M thode de r f rence Pos HPV 16 N g HPV 16 Pos HPV 16 N g HPV 16 n g HPV 18 45 pos HPV 18 45 pos HPV 18 45 n g HPV 18 45 Total Pos HPV 16 n g HPV 18 45 134 E 1 s 138 N g HPV 16 0 34 0 0 34 R sultat du pos HPV 18 45 Panther System y Pos HPV 16 0 0 7 0 7 pos HPV 18 45 N g HPV 16 n g HPV 18 45 f 1 9 We 175 Total 195 35 8 176 414 N g n gatif Pos positif Concordance positive 98 7 235 238 IC 95 96 4 99 6 Concordance n gative 99 0 173 176 IC 95 95 1 99 4 Seuil de d tection du seuil clinique Le seuil de d tection SdD du s
109. say 53 AW 11244 901 Rev 002 FR Performances du Panther System Assay Aptima Le risque relatif de maladie d apr s les r sultats positifs et n gatifs du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sont pr sent s dans le Tableau 30 r sultats corrig s pour le biais de v rification et le Tableau 31 non corrig s Les femmes pr sentant les types de HPV 16 18 et ou 45 ont montr 12 9 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN2 et 53 3 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN3 que les femmes ne pr sentant aucun type de High Risk HPV Les femmes pr sentant les types de HPV 16 18 et ou 45 ont montr 3 0 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN2 et 4 8 fois plus de probabilit d avoir une l sion 2 CIN3 que les femmes pr sentant un ou plusieurs des 11 autres types de High Risk HPV Tableau 30 Population NILM 2 30 ans Risque relatif de l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay estimations corrig es pour le biais de v rification 2 CIN2 2 CIN3 Interpr tation du Aptima Assay Risque relatif Risque relatif IC 95 IC 95 Pos HPV 16 et ou 18 45 par rapport a 12 9 53 3 n g HPV HR 3 1 54 6 1 5 gt 999 Pos HPV 16 et ou 18 45 par rapport a 3 0 4 8 pos autres HPV HR 1 1 8 8 1 2 19 2 Pos autres HPV HR par rapport 4 3 11 0 n g HPV HR 1 2 15 1 0 4 289 2 Pos HPV HR p
110. say par jour pendant 3 jours Les tests ont t r alis s au moyen de 2 lots de r actifs Chaque liste de travail contenait 3 r plicats de chacun des chantillons du panel de reproductibilit Cent huit 108 tubes d chantillon individuel ont t test s pour chaque chantillon du panel 3 sites x 1 appareil x 2 op rateurs x 2 lots x 3 jours x 3 r plicats Dans l tude 2 le test a t men en interne pendant 13 jours avec un total de 162 r actions test es pour chaque chantillon du panel 1 site x 3 appareils x 3 op rateurs x 3 lots x 2 listes de travail x 3 r plicats Les chantillons du panel sont d crits dans le Tableau 35a et le Tableau 36b accompagn s d un r sum de la concordance avec les r sultats attendus respectivement pour le HPV 16 et le HPV 18 45 Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 57 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du Panther System Assay Tableau 35a Etudes 1 et 2 de pr cision du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Description du panel et concordance en pourcentage avec les r sultats attendus pour le HPV 16 IC intervalle de confiance ate 7 Concordance en pourcentage IC 95 Description du panel R sultat attendu z copies ou cellules r action pour le HPV 16 Etude 1 Etude 2 3 sites de test 1 site de test TIV de HPV 16 240 copies Positif 100 108 108 100 162 162
111. se Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 50 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du Panther System Assay Les risques absolus corrig s de maladie l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay sont pr sent s dans le Tableau 28a Le risque de l sions 2 CIN2 chez les femmes pr sentant des types de HPV 16 18 et ou 45 tait de 9 7 par rapport a 3 2 chez les femmes pr sentant un ou plusieurs des 11 autres types de High Risk HPV et de 0 7 chez les femmes ne pr sentant aucun des types de High Risk HPV Les risques absolus de maladie non corrig s sont pr sent s de mani re globale dans le Tableau 28b et par tranche d age dans le Tableau 29 Tableau 28a Population NILM 2 30 ans Risque absolu de l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay estimations corrig es pour le biais de v rification ae ay Bil tated 2 CIN2 2 CIN3 sultat du Aptima sultat du ae HPV Assay AHPV GT Assay Interpr tation Risque absolu Risque absolu IC 95 IC 95 Pos HPV 16 et ou Pos HPV 16 et ou 9 7 8 5 pos HPV 18 45 HPV 18 45 4 6 20 2 3 8 19 2 Pos HPV 16 Pos HPV 16 10 4 10 3 n g HPV 18 45 uniquement 4 0 27 1 3 9 27 1 N g HPV 16 Pos HPV 18 45 8 8 6 5 pos HPV 18 45 uniquement 2 9 26 4 1 7 25 1 Positif Pos HPV 16 pos HPV 18 45 Pos HPV 16 et 18 45
112. sion du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay Description du panel et concordance en pourcentage avec les r sultats attendus pour le HPV 16 Concordance en pourcentage IC a 95 Description du panel z R 3 l e cellules r action R sultat attendu Etude 1 Etude 2 pour le HPV 16 3 sites de test 1 site de test Cellules SiHa 3 0 cellule Positif 100 108 108 100 162 162 Moyennement positif 96 6 100 97 7 100 Cellules HeLa 0 6 cellules N aatif 100 108 108 100 162 162 Moyennement positif 9 96 6 100 97 7 100 Cellules MS751 11 0 cellule N aatif 100 108 108 100 162 162 Moyennement positif 9 96 6 100 97 7 100 chantillon clinique 1 HPV 16 Positif 100 107 107 100 162 162 Moyennement positif 96 5 100 97 7 100 chantillon clinique 1 HPV 18 45 N aatif 100 108 108 98 8 160 162 Moyennement positif 9 96 6 100 95 6 99 7 Cellules SiHa 1 6 cellule Faiblement positif Positif 100 108 108 98 8 160 162 et cellules HeLa 3 3 cellules Fortement positif 96 6 100 95 6 99 7 Cellules SiHa 1 6 cellule Faiblement positif Positif 100 108 108 99 4 161 162 et cellules MS751 42 5 cellules Fortement positif 96 6 100 96 6 99 9 Cellules SiHa 15 7 cellules Fortement positif Positif 100 108 108 100 161 161 et cellules HeLa 0 3 cellule Faiblement positif 96 6 100 97 7 100 Cellules SiHa 15
113. t pathologique ind termin Sur les 298 femmes valuables avec un tat pathologique concluant et des r sultats positifs avec le Aptima HPV Assay 61 avaient des r sultats positifs avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay indiquant la pr sence de HPV 16 et ou HPV 18 45 237 avaient des r sultats n gatifs indiquant la pr sence d un ou plusieurs des 11 autres types de High Risk HPV Les r sultats de 505 femmes valuables suppl mentaires g es de 30 ans ou plus avec des r sultats cytologiques de NILM et un tat pathologique concluant taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay au cours de l essai CLEAR Un r sultat n gatif avec le Aptima HPV Assay indique qu aucun des 14 types de High Risk HPV n est pr sent dans l chantillon ce dernier est donc d sign comme n gatif avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay d apr s le r sultat du Aptima HPV Assay et le diagnostic du panel d examen histologique consensuel sont pr sent s dans le Tableau 2 Tableau 2 Population NILM 2 30 ans R sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay d apr s le diagnostic du panel d examen histologique consensuel R sultat du Diagnostic du panel d examen histologique consensuel 3 AHPV GT save Aptima HPV R Interpr tation Assay R sultat du test Ind termin Normal CIN1 CIN2 CIN3 Cancer Total
114. tifs d un nouveau kit Remarque La reconstitution des r actifs doit tre effectu e avant d entreprendre toute t che sur le Tigris DTS System 1 Afin de reconstituer le r actif d amplification le r actif enzymatique et le r actif sonde combinez les flacons de r actif lyophilis la solution de reconstitution Si les solutions de reconstitution sont r frig r es laissez parvenir temp rature ambiante avant de les utiliser a Faites correspondre chaque solution de reconstitution avec son r actif lyophilis V rifiez que la solution de reconstitution et le r actif lyophilis ont des couleurs d tiquettes correspondantes avant de mettre en place le collet de reconstitution b V rifiez les num ros de lot sur la fiche des codes barres du lot de r f rence pour vous assurer que les r actifs appropri s sont appari s c Ouvrez le flacon de r actif lyophilis et ins rez fermement l extr mit encoche du collet de reconstitution dans louverture du flacon Figure 1 tape 1 d Ouvrez la solution de reconstitution correspondante et posez le bouchon sur un plan de travail propre et couvert e Tout en tenant le flacon de solution sur la paillasse ins rez fermement l autre extr mit du collet de reconstitution dans l ouverture du flacon Figure 1 tape 2 f Retournez d licatement les flacons assembl s Laissez la solution s couler depuis le flacon dans le flacon en verre Figure 1 tape 3 g
115. tillons cytologique en milieu liquide ThinPrep n gatif au HPV dilu au 1 2 9 avec du STM Des cellules ajout es a la concentration de 25 cellules ml 10 cellules par r action surveillent les checs significatifs de r actif mais ne surveillent pas n cessairement les performances au seuil du test Il revient aux laboratoires d tablir des crit res d acceptation p ex le pourcentage de positivit pour les chantillons de contr le de qualit externe Crit res d acceptation des calibrateurs Le tableau ci dessous d finit les crit res RLU des r plicats des calibrateurs n gatif et positif Tigris DTS System Panther System Calibrateur n gatif RLU 18 45 20 et lt 60 000 RLU 2 0 et lt 60 000 RLU RLU du IC 16 gt 75 000 et lt 300 000 RLU 2 75 000 et s 300 000 RLU Calibrateur positif 1 RLU 18 45 2 850 000 et lt 2 200 000 RLU 2 800 000 et lt 2 200 000 RLU RLU du IC 16 lt 475 000 RLU lt 475 000 RLU Calibrateur positif 2 RLU 18 45 lt 115 000 RLU lt 115 000 RLU RLU du IC 16 2 625 000 et lt 4 000 000 RLU gt 625 000 et lt 4 000 000 RLU Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay AW 11244 901 Rev 002 FR Proc dures de contr le de qualit Tigris DTS System et Panther System Aptima C Seuil du IC Le seuil du IC est d termin par le signal de l analyte IC 16 produit par les r plicats valides du calibrateur n gatif Seuil du IC 0 5 x RLU IC 16 moyen pour
116. tima Informations g n rales Tigris DTS System et Panther System transfert d chantillon Aptima peuvent tre conserv s a une temp rature de 20 C a 70 C pendant 24 mois maximum Echantillons pr lev s avec le kit de collecte et de transport pour chantillon cervical Aptima 1 Transportez et conservez les chantillons entre 2 C et 30 C pendant 60 jours maximum 2 Si une dur e de conservation sup rieure est n cessaire les chantillons du kit de transport peuvent tre conserv s entre 20 C et 70 C pendant 24 mois maximum C Conservation des chantillons apr s les tests 1 Les chantillons qui ont t test s doivent tre conserv s dans un portoir en position verticale 2 Les tubes d chantillons doivent tre recouverts avec une nouvelle barri re de plastique ou d aluminium propre 3 Sides chantillons test s doivent tre congel s ou transport s retirez les bouchons p n trables et placez de nouveaux bouchons non p n trables sur les tubes d chantillons Si les chantillons doivent tre transport s dans un autre tablissement pour y tre test s les temp ratures sp cifi es doivent tre maintenues Avant de d boucher des chantillons pr c demment test s et rebouch s les tubes d chantillon doivent tre centrifug s pendant 5 minutes 420 FCR force centrifuge relative pour faire descendre la totalit du liquide au fond du tube Remarque Le transport
117. u HPV 16 18 45 1 flacon Solution aqueuse contenant des conservateurs ER Solution de reconstitution enzymatique du HPV 16 18 45 1 flacon Solution tamponn e HEPES contenant un surfactant et du glyc rol PR Solution de reconstitution de sonde du HPV 16 18 45 1 flacon Solution tamponn e de succinate contenant lt 5 de d tergent S R actif de s lection du HPV 16 18 45 1 flacon Solution tamponn e de borate 600 mM contenant un surfactant Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 13 AW 11244 901 Rev 002 FR Panther System Aptima Bo te temp rature ambiante Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay conserver entre 15 C et 30 C d s r ception suite Symbole Composant Quantit TCR R actif de capture de cible du HPV 16 18 45 1 flacon Acide nucl ique non infectieux dans une solution tamponn e contenant une phase solide lt 0 5 mg ml Collets de reconstitution 3 Fiche des codes barres du lot de r f rence 1 fiche Bo te de calibrateurs Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay n de r f 303235 conserver entre 2 C et 8 C d s r ception Symbole Composant Quantit PCAL1 Calibrateur positif 1 HPV 16 18 45 5 flacons Transcrit in vitro de HPV 18 non infectieux a 750 copies par ml dans une solution tamponn e contenant lt 5 de d tergent PCAL2 Calibrateur positif 2 HPV 16 18 45 5 flacons Transcrit in vitro de HPV 16 non infectieux a 1 000 copies par ml dans une solution tamponn e
118. u en raison de d chantillons inad quats n 29 d aucune biopsie pr lev e en raison de facteurs sous jacents n 13 d aucune biopsie pr lev e ou examin e pour cause d erreur n 3 les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse ATrois femmes ont pr sent un adenocarcinoma in situ AIS Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 49 AW 11244 901 Rev 002 FR Performances du Panther System Assay Aptima Sur les 491 femmes dont les r sultats taient positifs avec le Aptima HPV Assay et le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay r alis s tous deux sur le Panther System 232 avaient un tat pathologique non v rifi incluant les tats ind termin s Tableau 27 Sur les 10 348 femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay dans le cadre de l essai CLEAR original 9 799 avaient un tat pathologique non v rifi La proportion de femmes avec un tat pathologique non v rifi tait lev e dans ce groupe 96 2 car l tude tait con ue de mani re ce que seules des femmes s lectionn es al atoirement et pr sentant des r sultats n gatifs avec le Aptima HPV Assay r alis sur le Tigris DTS System et avec le test de DNA du HPV soient orient es vers une colposcopie Pour corriger ce biais de v rification une m thode d imputation multiple a t utili
119. ues par le m decin aux autres facteurs de risque et aux directives professionnelles ces informations peuvent tre utilis es pour guider la prise en charge de la patiente R sum et explication du test Le cancer du col de l ut rus repr sente l chelle mondiale l un des cancers f minins les plus courants Le HPV est l agent tiologique responsable de plus de 99 de l ensemble des cancers du col de l ut rus Le HPV est un virus DNA couramment transmis par voie sexuelle et comportant plus de 100 g notypes Le g nome viral du HPV est un DNA circulaire double brin long d environ 7 900 paires de base Ce g nome pr sente huit cadres de lecture ouverts open reading frames qui se chevauchent On d nombre six g nes pr coces E deux g nes tardifs L et une longue r gion de contr le non transcrite Les prot ines majeure et mineure de la capside sont cod es par les g nes L1 et L2 Les g nes pr coces r gulent la r plication du virus HPV Les g nes E6 et E7 des g notypes High Risk HPV sont des oncog nes connus Les prot ines exprim es par le MRNA polycistronique E6 E7 alt rent les fonctions de la prot ine du r tinoblastome et de la p53 cellulaire ce qui entra ne une perturbation des points de contr le du cycle cellulaire et une instabilit du g nome cellulaire Quatorze g notypes de HPV sont consid r s comme pathog nes ou haut risque de progression de la pathologie cervicale Plusieur
120. ultat positif avec le Aptima HPV Assay sur le Panther System Soixante sept 67 femmes avaient des l sions 2 CIN2 et 30 avaient des l sions 2 CIN3 Sur les 353 femmes valuables dont les r sultats taient positifs avec le Aptima HPV Assay sur le Panther System 118 avaient des r sultats positifs avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System indiquant la pr sence de HPV 16 et ou HPV 18 45 235 ont eu des r sultats n gatifs indiquant la pr sence d un ou de plusieurs des autres 11 types de High Risk HPV tels que d tect s par le Aptima HPV Assay c a d types de HPV 31 33 35 39 51 52 56 58 59 66 et 68 Les r sultats de 539 femmes valuables suppl mentaires g es de 21 ans ou plus avec des r sultats cytologiques d ASC US taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay sur le Panther System Un r sultat n gatif avec le Aptima HPV Assay indique qu aucun des 14 types de High Risk HPV n est pr sent dans l chantillon ce dernier est donc d sign comme n gatif avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sur le Panther System aux fins de l analyse La pr valence des l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 chez les femmes valuables avec un r sultat cytologique d ASC US s levait respectivement 9 1 et 3 8 Sur la base des tests r alis s sur le Panther System les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay sont pr sent s dans le Tableau 21 et compar s aux r sultats du Aptima HPV Assay et du
121. ur ainsi que la date du jour sur l tiquette g Jetez le flacon de IC et son bouchon h Un pr cipit peut se former dans le WTCR et produire des r sultats non valides dus des erreurs de v rifications du volume II est possible de dissoudre le pr cipit en chauffant le wTCR entre 42 C et 60 C jusqu 90 minutes maximum Laissez le WTCR parvenir temp rature ambiante avant l emploi Ne l utilisez pas tant que le pr cipit n a pas disparu 3 Pr paration du r actif de s lection a V rifiez le num ro de lot du r actif sur la fiche des codes barres du lot de r f rence pour vous assurer qu il appartient au kit b Sile r actif de s lection contient un pr cipit chauffez le 60 C 1 C pendant 45 minutes maximum pour faciliter la dissolution du pr cipit M langez d licatement le flacon toutes les 5 10 minutes Laissez le r actif de s lection parvenir temp rature ambiante avant l emploi Ne l utilisez pas tant que le pr cipit ou la turbidit n ont pas disparu Remarque M langez bien les r actifs en les retournant doucement avant de les charger dans le syst me Evitez la formation de mousse pendant le retournement des r actifs C Pr paration des r actifs pr c demment reconstitu s 1 Le r actif d amplification le r actif enzymatique et le r actif sonde pr c demment reconstitu s doivent parvenir temp rature ambiante entre 15 C et 30 C avant le d but du test
122. uvent tre test s avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay tout comme les chantillons cervicaux pr lev s avec le kit de collecte et de transport pour chantillon cervical Aptima Le test est utilis avec le Tigris DTS System et le Panther System L utilisation du test est indiqu e dans les cas suivants 1 Chez les femmes ag es de 21 ans et plus avec un r sultat de cytologie cervicale Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance ASC US le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay peut tre utilis pour tester les chantillons de femmes ayant des r sultats positifs avec le Aptima HPV Assay afin d valuer la pr sence ou l absence des g notypes High Risk HPV 16 18 et ou 45 Conjointement l valuation des ant c dents cytologiques par le m decin aux autres facteurs de risque et aux directives professionnelles ces informations peuvent tre utilis es pour guider la prise en charge de la patiente Les r sultats de ce test ne doivent pas emp cher aux femmes de proc der la colposcopie 2 Chez les femmes g es de 30 ans et plus le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay peut tre utilis pour tester les chantillons de femmes dont les r sultats taient positifs avec le Aptima HPV Assay Les r sultats du test seront utilis s avec les r sultats de cytologie cervicale pour valuer la pr sence ou l absence des g notypes High Risk HPV 16 18 et ou 45 Conjointement l valuation des ant c dents cytologiq
123. x fins de l analyse Remarque Les estimations des performances corrig es pour le biais de v rification dans la section Tigris DTS System et la section Panther System utilisent diff rentes m thodes d imputation Tableau 33 Population NILM 2 30 ans Rapports de vraisemblance pour les l sions 2 CIN2 et 2 CIN3 d apr s les r sultats du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay et du Aptima HPV Assay estimations non corrig es 2 CIN2 2 CIN3 Interpr tation des r sultats du Aptima Assay Rapport de vraisemblance Rapport de vraisemblance IC 95 IC a 95 Se 4 8 7 4 Positif au HPV 16 et ou 18 45 2 1 8 5 3 3 12 0 ve 1 5 1 5 Positif aux autres HPV HR 0 7 2 5 0 5 2 9 Ser 0 4 0 1 N gatif au HPV HR 0 2 0 8 0 0 0 6 IC intervalle de confiance HR haut risque Les femmes dont les r sultats taient n gatifs avec le Aptima HPV Assay ont t d sign es comme n gatives avec le Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay aux fins de l analyse Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay 55 AW 11244 901 Rev 002 FR Aptima Performances du Panther System Assay Performances cliniques du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay avec les chantillons pr lev s avec le kit de collecte et de transport pour chantillon cervical Les performances du Aptima HPV 16 18 45 Genotype Assay ont t valu es l aide d chantillons pr lev s avec le kit CSCT chez des femmes orient e

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