B Difco™ E. Coli Antisera
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1. Sert l isolement d E coli 0157 partir d chantillons f caux sanglants sur g lose au sorbitol de MacConkey Pour isoler ce microorganisme partir d chantillons alimentaires utiliser un milieu SMAC CT g lose au sorbitol de MacConkey additionn e de c fixime et de tellurite 12 Cependant des concentrations lev es de microorganismes coliformes contaminants masquent les souches 0157 13 Les m thodes de confirmation s rologique par les Difco E Coli Antisera n cessitent une culture pure du microorganisme tester isol sur une g lose d infusion de veau ou un autre milieu solide enrichi MODE OPERATOIRE Mat riaux fournis Difco E Coli O Antiserum 0157 et Difco E Coli H Antiserum H7 Mat riaux requis mais non fournis G lose d infusion de veau milieu Motility Gl Medium bain marie 50 2 C formol standard de McFarland au sulfate de baryum n 3 tubes culture 12 x 75 mm et portoir pipettes s rologiques de 1 mL solution de NaCl 0 85 Pr paration du r actif Laisser tous les mat riels s quilibrer temp rature ambiante avant d effectuer les tests S assurer que la verrerie et les pipettes utilis es sont propres et exemptes de r sidus traces de d tergent par exemple Difco E Coli antisera Ajouter 3 mL de solution de NaCl a 0 85 a chaque flacon Retourner doucement plusieurs fois pour dissoudre parfaitement le contenu Les antis rums reconstitu s sont consid r s comme une dilut2. BD Difco E Coli Antisera CE ss English pages 1 4 Italiano pagine 11 14 Fran ais pages 5 8 Espa ol p ginas 15 18 Deutsch Seiten 8 11 Contact your local BD representative for instructions CBbpxeTe ce c MEcTHUA npeacraBuren Ha BD 3a uHcTpykaun Pokyny vam poskytne mistni z stupce spole nosti BD Kontakt den lokale BD repr sentant for at f instruktioner Etrikoivwvnote pe TOV TOTTIK AVTITTP CWTTO TNS BD yia odnyies Kasutusjuhiste suhtes kontakteeruge oma kohaliku BD esindajaga 1 Ota yhteys l himp n BD n edustajaan ohjeiden saamiseksi Kontaktiraj lokalnog predstavnika BD za upute A haszn lati utas t st k rje a BD helyi k pviselet t l Hyckaynap ywin xeprinikri BD exinimen xa6apnacbiHbi3 Lai sa emtu nor d jumus sazinieties ar viet jo BD p rst vi Naudojimo instrukcij teiraukit s vietos BD jgaliotojo atstovo Neem contact op met uw plaatselijke BD vertegenwoordiger voor instructies Kontakt din lokale BD representant for mer informasjon Aby uzyska instrukcje u ytkowania skontaktuj si z lokalnym przedstawicielstwem BD Contacte o representante local da BD para instru es Pentru instruc iuni contacta i reprezentantul local BD Ana nonyuenus ykazann o6patuTecb K MECTHOMY npeacraBurenio komnannn BD In trukcie z skate u miestneho z stupcu spolo nosti BD Obratite se svom lokalnom predstavniku kompanije BD za uputstva Kontakta n rmaste
3. chantillons les r cipients les lames les tubes et les autres mat riels contamin s Respecter scrupuleusement le mode d emploi AVERTISSEMENT Ce produit contient de l azide de sodium qui est toxique par inhalation contact avec la peau ou ingestion Au contact d un acide un gaz tr s toxique est d gag Apr s tout contact avec la peau laver imm diatement grande eau L azide de sodium peut r agir au contact du plomb ou du cuivre des canalisations et former des azides m talliques tr s explosifs Lors de l limination faire couler un volume d eau important pour viter l accumulation d azides Attention H302 Nocif en cas d ingestion P264 Se laver soigneusement apr s manipulation P301 P312 EN CAS D INGESTION Appeler un CENTRE ANTIPOISON ou un m decin en cas de malaise P501 liminer le contenu r cipient conform ment aux reglements locaux r gionaux nationaux internationaux 5 Conservation Conserver les Difco E Coli Antisera lyophilis s et reconstitu s entre 2 et 8 C Lexposition prolong e des r actifs des temp ratures autres que les temp ratures sp cifi es a un effet adverse sur ceux ci La date de p remption s applique au produit contenu dans son emballage intact et conserv conform ment aux instructions D t rioration du produit Ne pas utiliser si le produit pr sente un aspect agglutin d color ou d autres signes de d t rioration PRELEVEMENT ET PREPARATION DES ECHANTILLONS
4. REAGENTI Difco E Coli O Antiserum 0157 e Difco E Coli H Antiserum H7 sono antisieri policlonali di coniglio liofilizzati contenenti 0 2 di sodio azide come conservante Avvertenze e precauzioni Per uso diagnostico in vitro Questo prodotto contiene gomma naturale secca Durante tutte le procedure adottare tecniche asettiche e seguire le precauzioni standard contro i rischi microbiologici Dopo l uso sterilizzare in autoclave campioni contenitori vetrini provette e tutti gli altri materiali contaminati Seguire attentamente le istruzioni per l uso AVVERTENZA Questo prodotto contiene sodio azide tossica per inalazione ingestione e a contatto con la pelle A contatto con acido libera gas estremamente tossici In caso di contatto con la pelle lavarsi immediatamente e abbondantemente con acqua La sodio azide pu reagire con il piombo e il rame delle tubature formando azidi metalliche altamente esplosive Eliminare la sodio azide facendo scorrere abbondante acqua negli scarichi per impedire l accumulo di azidi Attenzione H302 Nocivo se ingerito P264 Lavarsi accuratamente dopo l uso P301 P312 IN CASO DI INGESTIONE In caso di malessere contattare un CENTRO ANTIVELENI o un medico P501 Smaltire il prodotto recipiente in conformit alle normative locali regionali nazionali internazionali Conservazione Conservare gli antisieri Difco E Coli liofilizzati e reidratati a 2 8 C L esposizione prolungata dei reagenti
5. en volume 6 Dans un portoir pr parer une rang e de huit tubes essai pour chaque suspension de microorganisme tester 7 Distribuer 0 9 mL de solution de NaCl a 0 85 dans le premier tube de chaque rang e et 0 5 mL dans les tubes restants 8 Pr parer des dilutions s ri es avec le Difco E Coli O Antiserum 0157 reconstitu A l aide d une pipette s rologique de 1 mL ajouter 0 1 mL d antis rum au tube n 1 de chaque rang e et bien m langer Transf rer 0 5 mL du tube n 1 au tube n 2 et bien m langer Proc der ainsi pour transf rer 0 5 mL jusqu au tube n 7 puis liminer 0 5 mL du tube n 7 apr s m lange Le tube n 8 est un tube de contr le n gatif contenant uniquement une solution de NaCl a 0 85 9 Ajouter 0 5 mL de la suspension de microorganisme tester chacun des 8 tubes Lorsque les suspensions de microorganismes tester ont t ajout es les dilutions finales s chelonnent de 1 40 1 2560 pour les tubes n 1 7 respectivement 10 M langer en secouant le portoir Incuber au bain marie 50 2 C pendant 18 24h 11 Observer s il se produit une r action d agglutination 6 a Tube essai pour le titrage de l antig ne H 1 Pr parer une culture motilit lev e de la culture d E coli suspect e par transferts successifs dans du milieu Motility GI Medium Deux ou trois passages au minimum dans du milieu Motility Gl Medium sont n cessaires pour pouvoir tablir l
6. 3 Padhye N V and M P Doyle 1992 Escherichia coli 0157 H7 epidemiology pathogenesis and methods for detection in food J Food Prot 55 555 565 4 Riley L W R S Remis and S D Helgerson et al 1983 Hemorrhagic colitis associated with a rare Escherichia coli serotype N Engl J Med 308 681 685 5 Samadpour M L Grimm B Desai D Alfi J E Ongerth and P I Tarr 1993 Molecular epidemiology of Escherichia coli 0157 H7 strains using bacteriophage A restriction fragment length polymorphism analysis application to a multistate foodborne outbreak and a day care center cluster J Clin Microbiol 31 3179 3183 6 Tarr P I 1994 Review of 1993 Escherichia coli 0157 H7 outbreak western United States Dairy Food and Environmental Sanitation 14 372 373 7 Gray L D 1995 Escherichia Salmonella Shigella and Yersinia p 450 455 In P R Murray E J Baron M A Pfaller F C Tenover and R H Yolken ed Manual of clinical microbiology 6th ed American Society for Microbiology Washington D C 8 Marrier R J G Wells R C Swanson W Callahan and I J Mehlman 1973 An outbreak of enteropathogenic E coli foodborne disease traced to imported French cheese Lancet 2 1376 1378 9 Flowers R S W Andrews C W Donnelly and E Koenig 1993 Pathogens in milk and milk products p 168 176 n R T Marshall ed Standard methods for the examination of dairy products 16th ed America
7. Prepare pure cultures of the test organism by plating onto Veal Infusion Agar and incubating at 35 2 C for 16 18 h 2 Suspend the test isolate growth obtained from solid agar medium in 0 85 NaCl solution to give a homogeneous suspension 3 Heat the organism suspension in a boiling water bath for 30 60 min The culture should be homogeneous Precipitation indicates a rough culture and the suspension should be discarded 4 Allow the suspension to cool dilute with 0 85 NaCl solution to a density approximating that of a McFarland Barium Sulfate Standard No 3 Add formalin to a final concentration of 0 5 by volume In a rack prepare a row of 8 test tubes for each organism suspension to be tested 7 Dispense 0 9 mL 0 85 NaCl solution to the first tube in each row and 0 5 mL to the remaining tubes 8 Prepare serial dilutions using the rehydrated Difco E Coli O Antiserum 0157 Using a 1 mL serological pipette add 0 1 mL of antiserum to tube 1 in each row and mix thoroughly Transfer 0 5 mL from tube 1 to tube 2 and mix thoroughly on 2 In a like manner continue transferring 0 5 mL through tube 7 discarding 0 5 mL from tube 7 after mixing Tube 8 is a negative control tube containing only 0 85 NaCl solution 9 Add 0 5 mL of the test organism suspension to each of the 8 tubes Upon addition of the test organism suspension final dilutions will be 1 40 through 1 2 560 for tubes 1 through 7 respectively 10 Shake the rack to
8. Verd nnung betr gt 1 1000 7 Im Wasserbad bei 50 2 C 1 h lang inkubieren 8 Auf Agglutination berpr fen a ERGEBNISSE Testergebnis unter indirekter Beleuchtung vor einem dunklen Hintergrund beobachten Zellagglutination wie folgt bewerten 4 100 Zellagglutination berstand klar bis leicht tr b 3 75 Zellagglutination Uberstand leicht wolkig 2 50 Zellagglutination berstand m ig wolkig 1 25 Zellagglutination berstand wolkig Unter 25 Zellagglutination Keine Agglutination Difco E Coli O Antiserum 0157 R hrchen die bei einer Verd nnung von 1 320 oder mehr eine Zellagglutination von 2 oder mehr aufweisen sind als positiv zu bewerten Difco E Coli H Antiserum H7 R hrchen die eine Zellagglutination von 2 oder mehr aufweisen sind als positiv zu bewerten 10 VERFAHRENSBESCHR NKUNGEN 1 Serologische Techniken unter Verwendung von E coli Antiseren liefern nur einen zus tzliche Hinweis auf das Vorliegen von E coli O157 H7 F r die endg ltige Identifizierung m ssen morphologische serologische und biochemische Eigenschaften ber cksichtigt werden 2 berm ige W rme aus externen Quellen hei e bakteriologische se Brennerflamme Lichtquelle o kann die glatte Suspension des Mikroorganismus verhindern oder zum Verdunsten oder Ausf llen des Testgemischs f hren Es kann zu falsch positiven Reaktionen kommen 3 Grobe Kultur Isolate sind m glich sie a
9. a temperature diverse da quelle indicate pu danneggiare i prodotti La data di scadenza si riferisce al prodotto nel contenitore intatto e conservato come prescritto Deterioramento del prodotto Non usare il prodotto se appare indurito scolorito o presenta altri segni di deterioramento RACCOLTO E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Per isolare E coli 0157 da campioni di feci sanguinolente usare MacConkey Sorbitol Agar Per isolare questo microrganismo da generi alimentari usare SMAC CT Sorbitol MacConkey Agar con cefixime e tellurito 12 Livelli elevati di coliformi contaminanti mascherano tuttavia i ceppi 0157 13 Le procedure di conferma sierologica con gli antisieri Difco E Coli richiedono una coltura pura del microrganismo da testare isolato su agar all infuso di vitello o un altro terreno solido arricchito PROCEDURE Materiali forniti Difco E Coli O Antiserum 0157 e Difco E Coli H Antiserum H7 Materiali necessari ma non forniti Agar all infuso di vitello terreno Motility GI Medium bagnomaria a 50 2 C formalina standard McFarland n 3 solfato di bario provette per coltura da 12 x 75 mm e portaprovette pipette sierologiche 1 mL soluzione sterile NaCl allo 0 85 Preparazione dei reagenti Prima di eseguire i test lasciare equilibrare tutti i materiali a temperatura ambiente 12 Assicurarsi che tutta la vetreria e le pipette siano pulite e prive di residui di detergenti o altro Antisieri Difco E Coli pe
10. antisueros de conejo policlonales y liofilizados que contienen aproximadamente 0 2 de azida s dica como conservante Advertencias y precauciones Para uso diagn stico in vitro Este producto contiene goma natural seca Emplee una t cnica as ptica y siga las precauciones habituales contra riesgos microbiol gicos durante todo el proceso Despu s del uso se deber n esterilizar muestras envases portaobjetos tubos y dem s material contaminado en autoclave Es necesario seguir al pie de la letra las instrucciones de uso ADVERTENCIA Este producto contiene azida s dica la cual es t xica en caso de inhalaci n contacto con la piel e ingesti n El contacto con cidos libera un gas muy t xico En caso de contacto con la piel lavar de inmediato el rea afectada con abundante agua La azida s dica puede reaccionar con las ca er as de plomo y cobre y formar azidas met licas muy explosivas Al eliminar el material por el desague utilizar un gran volumen de agua para evitar la acumulaci n de azidas Atenci n H302 Nocivo en caso de ingesti n P264 Lavarse concienzudamente tras la manipulaci n P301 P312 EN CASO DE INGESTI N Llamar a un CENTRO DE INFORMACION TOXICOLOGICA o a un m dico en caso de malestar P501 Eliminar el contenido el recipiente de conformidad con las normativas locales regionales nacionales e internacionales 15 Almacenamiento Conservar los antisueros Difco E Coli liofilizados y rehidratados a
11. causar la enfermedad Generalmente se transmite por alimentos elaborados en grandes cantidades cuya preparaci n no siempre est sujeta a controles estrictos y se sirven a una clientela objetivo los ni os y los ancianos constituyen el grupo de mayor riesgo de complicaciones por la enfermedad El organismo se ha aislado en varios alimentos incluidos los siguientes hamburguesa poco cocida agua potable patatas nuevas panecillo con pavo leche cruda y sidra de manzana La determinaci n de serotipos de E coli ent rica hemorr gica es til para la documentaci n epidemiol gica de la propagaci n de una cepa en particular en un brote por transmisi n alimentaria PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO Difco E Coli O Antiserum 0157 se utiliza en la t cnica de aglutinaci n en tubo para la valoraci n del ant geno O Difco E Coli H Antiserum H7 se utiliza en la t cnica de aglutinaci n en tubo para la detecci n de ant genos H Estos antisueros se utilizan para confirmar la presencia de E coli O157 H7 despu s del aislamiento selectivo La t cnica serol gica se basa en la reacci n de un antisuero espec fico con su ant geno hom logo Mientras que la especificidad de los m todos serol gicos no es absoluta la determinaci n de serotipos de E coli junto con las caracter sticas bioqu micas puede proporcionar una identificaci n exacta del agente etiol gico REACTIVOS Difco E Coli O Antiserum 0157 y Difco E Coli H Antiserum H7 son
12. da trasparente a leggermente opaco 3 75 di agglutinazione cellulare sovranatante leggermente torbido 2 50 di agglutinazione cellulare sovranatante moderatamente torbido 1 25 di agglutinazione cellulare sovranatante torbido Agglutinazione cellulare inferiore al 25 Nessuna agglutinazione Difco E Coli O Antiserum 0157 Le provette che presentano un agglutinazione pari o maggiore di 2 alla diluizione 1 320 o superiore sono considerate positive Difco E Coli H Antiserum H7 Le provette che presentano un agglutinazione pari o maggiore di 2 sono considerate positive LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA 1 Le tecniche sierologiche che impiegano gli antisieri di E Coli servono a convalidare l identificazione di E coli O157 H7 L identificazione finale non pu essere effettuata senza tenere conto di una caratterizzazione morfologica sierologica e biochimica 2 Il calore eccessivo da fonti esterne ansa batteriologica calda fiamma di bruciatore fonte di luce ecc pu impedire la formazione di una sospensione omogenea del microrganismo o causare evaporazione o precipitazione della miscela da testare e dar luogo a reazioni falsamente positive 3 Le colture disomogenee di isolati sono soggette ad agglutinazione spontanea con conseguente agglutinazione in siero normale autoagglutinazione Le colture omogenee devono essere selezionate e testate in procedure sierologiche 4 L esposizione prolungata dei reagenti a tem
13. mix Incubate in a 50 2 C water bath for 18 24 h 11 Read for agglutination Tube Test for H Antigen Detection 1 Prepare an actively motile culture of the suspect E coli culture by several successive transfers in Motility Gl Medium At least 2 3 passages through Motility Gl Medium are necessary before attempting to establish the presence and identity of H antigens Fresh isolates of E coli generally have poorly developed flagella 2 Inoculate a loopful of the Motility Gl Medium culture into a tube of Veal Infusion Broth Incubate 6 8 h at 35 2 C or overnight if necessary 3 Inactivate the culture by adding formalin to a final concentration of 0 3 0 3 parts formaldehyde per 100 parts of the Veal Infusion Broth culture lf necessary adjust the density of the suspension with formalized saline to approximate a McFarland Barium Sulfate Standard No 3 This broth culture will be used as the test antigen in step 6 4 Prepare a 1 500 dilution of Difco E Coli H Antiserum H7 by adding 0 2 mL of the rehydrated 1 2 working solution to 49 8 mL of 0 85 NaCl solution 5 Pipette 0 5 mL of the diluted antiserum into a test tube 6 Add 0 5 mL of the test organism broth culture from step 3 and mix well The resulting antiserum dilution will be 1 1 000 7 Incubate in a 50 2 C water bath for 1 h 8 Read for agglutination RESULTS Observe test result with indirect lighting against a dark background Record agglutination as follo
14. notamment des hamburgers insuffisamment cuits l eau de boisson les pommes de terre nouvelles le r ti de dinde le lait cru et le cidre Le s rotypage des E coli ent roh morragiques est utile pour documenter l pid miologie de la propagation d une souche donn e dans une pid mie d origine alimentaire PRINCIPES DE LA METHODE Le Difco E Coli O Antiserum O157 s utilise dans la technique d agglutination en tube pour le titrage de l antig ne O Le Difco E Coli H Antiserum H7 s utilise dans la technique d agglutination en tube pour le titrage des antig nes H Ces antis rums servent confirmer la pr sence d E coli O157 H7 apr s isolement s lectif La technique s rologique est bas e sur la r action d un antis rum sp cifique avec son antig ne homologue Alors que la sp cificit des m thodes s rologiques n est pas totale le s rotypage d E coli compl t par des tests biochimiques peut fournir une identification exacte de l agent causal REACTIFS Le Difco E Coli O Antiserum O157 et le Difco E Coli H Antiserum H7 sont des antis rums polyclonaux de lapin lyophilis s contenant environ 0 2 96 d azide de sodium agent conservateur Avertissements et pr cautions R serv au diagnostic in vitro Ce produit contient du caoutchouc naturel sec Toujours utiliser des techniques aseptiques et prendre les pr cautions en vigueur contre les dangers microbiologiques Apr s utilisation st riliser l autoclave les
15. tteln Im Wasserbad bei 50 2 C 18 24 h lang inkubieren 11 Auf Agglutination berpr fen a R hrchentest f r den H Antigen Nachweis 1 Durch mehrfaches Verbringen in Motilit ts Gl N hrboden eine aktiv motile Kultur des vermuteten E coli herstellen Es sind mindestens 2 3 Durchg nge mit Motilitats Gl Nahrboden erforderlich um Vorhandensein und Identit t der H Antigene nachweisen zu k nnen Frische Isolate von E coli haben normalerweise nur schlecht entwickelte Flagellen 2 Eine Impf se voll Motilit ts Gl N hrboden in ein R hrchen Kalbfleisch Infusionsbouillon einbringen Bei 35 2 C 6 8 h oder falls erforderlich ber Nacht inkubieren 3 Kultur inaktivieren Hierzu Formaldehyd bis zu einer Endkonzentration von 0 3 hinzuf gen 0 3 Teile Formaldehyd auf 100 Teile der Kalbfleisch Infusionsbouillons Kultur Falls erforderlich die Suspension mit formaldehydhaltiger Kochsalzl sung auf eine Dichte verd nnen die etwa McFarland Bariumsulfat Standard Nr 3 entspricht Diese Bouillon Kultur soll in Schritt 6 als Test Antigen verwendet werden 4 Eine Verd nnung 1 500 von Difco E Coli H Antiserum H7 herstellen Hierzu 0 2 mL der rehydrierten Arbeitsl sung 1 2 zu 49 8 mL Kochsalzl sung 0 85 hinzuf gen 0 5 mL des verd nnten Antiserums in ein R hrchen pipettieren 6 0 5 mL der Bouillion Kultur des Testorganismus aus Schritt 3 hinzuf gen und gut durchmischen Die resultierende Antiserum
16. una temperatura de 2 8 C Una exposici n prolongada de los reactivos a temperaturas diferentes de las especificadas es perjudicial para los productos La fecha de caducidad se aplica al producto conservado en su envase intacto de la forma indicada Deterioro del producto No utilizar si el producto est aglutinado o descolorido o si evidencia otras se ales de deterioro RECOGIDA Y PREPARACION DE LAS MUESTRAS Para aislamiento de E coli 0157 en muestras fecales con sangre macrosc pica utilizar agar MacConkey sorbitol Para aislar este organismo de los alimentos utilizar SMAC CT agar MacConkey sorbitol con cefixima y telurito 12 Sin embargo los niveles altos de organismos coliformes contaminantes ocultar n las tinciones de 015713 Los procedimientos para la confirmaci n serol gica mediante antisueros Difco E Coli requieren un cultivo puro del organismo de prueba aislado en agar infusi n de ternera u otro medio s lido enriquecido PROCEDIMIENTOS Materiales suministrados Difco E Coli O Antiserum 0157 y Difco E Coli H Antiserum H7 Materiales necesarios pero no suministrados Agar infusi n de ternera medio para motilidad Gl Motility Gl Medium ba o Mar a a 50 2 C formalina patr n N 3 de McFarland de sulfato de bario tubos de cultivo de 12 x 75 mm y gradilla pipetas serol gicas de 1 mL soluci n de NaCl al 0 85 est ril Preparaci n del reactivo Equilibrar todos los materiales a temperatura am
17. BD representant f r anvisningar Talimatlar i in yerel BD temsilcinizle temasa ge in 3a incrpykuiamu 3BepHiTbCs AO MicueBoro npencraBHMka KoMnaHit BD INTENDED USE Difco E Coli O Antiserum 0157 and Difco E Coli H Antiserum H7 are used for identifying Escherichia coli 0157 H7 SUMMARY AND EXPLANATION E coli 0157 H7 is a foodborne pathogen that can cause potentially fatal enteric related disease in humans 1 7 This disease is characterized by sudden onset of severe cramps and abdominal pain followed by a watery stool that may become markedly bloody A series of 107 outbreaks involving 387 persons was traced to imported Camembert cheese in the United States in 1971 8 E coli O157 H7 was recognized as a cause of hemorrhagic colitis in 19824 and hemolytic uremic syndrome in 1983 9 The 1982 outbreak was derived from ingested hamburgers 4 10 The incidence of disease caused by this organism has increased significantly over the past decade 3 11 The largest outbreak of E coli O157 H7 disease occurred during January 1993 in Washington State where more than 600 patients with hemorrhagic colitis were confirmed The source of the outbreak was identified as undercooked hamburger at multiple outlets of the same fast food restaurant chain E coli 0157 H7 is an enteric pathogen that requires only a low inoculum to cause disease Transmission is usually via high volume food items whose preparation is not always under stringent control and is s
18. DUKTE Best Nr Beschreibung 229701 BD Difco E Coli O Antiserum 0157 1 x 3 mL 221591 BD Difco E Coli H Antiserum H7 1 x 3 mL LITERATUR S References im englischen Text BD Diagnostics Technischer Kundendienst setzen Sie sich mit Ihrer zustandigen BD Vertretung BD Difco E Coli Antisera Italiano USO PREVISTO Difco E Coli O Antiserum 0157 e Difco E Coli H Antiserum H7 sono usati per l identificazione di Escherichia coli 0157 H7 SOMMARIO E SPIEGAZIONE E coli O157 H7 un patogeno alimentare che nell uomo pu causare enterite potenzialmente fatale 1 7 caratterizzata da esordio improvviso di intensi dolori crampiformi e addominali seguiti da feci acquose che possono diventare marcatamente sanguinolente Nel 1971 negli Stati Uniti una serie di 107 focolai epidemici attribuiti al consumo di formaggio Camembert importato colp 387 persone 8 E coli O157 H7 venne riconosciuto come la causa di colite emorragica nel 19824 e di sindrome uremica emolitica nel 1983 9 L epidemia del 1982 fu attribuita all ingestione di hamburger contaminati 4 10 Nel corso dell ultimo decennio l incidenza di malattie causate da questo microrganismo significativamente aumentata 3 11 La pi diffusa epidemia di malattie provocate da E coli O157 H7 si verific nel gennaio 1993 nello stato di Washington dove in oltre 600 pazienti venne confermata la diagnosi di colite emorragica La scarsa cottura degli hamburger serviti in pi lo
19. EFERENCES Voir la rubrique References du texte anglais Service et assistance technique de BD Diagnostics contacter votre repr sentant local de BD amp BD Difco E Coli Antisera Deutsch VERWENDUNGSZWECK Difco E Coli O Antiserum 0157 und Difco E Coli H Antiserum H7 werden zur Identifizierung von Escherichia coli O157 H7 verwendet ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLARUNG E coli O157 H7 ist ein durch Lebensmittel Ubertragener Keim der beim Menschen eine potentiell t dliche Darmerkrankung hervorrufen kann 1 7 Der Krankheitsverlauf ist gekennzeichnet durch das pl tzliche Auftreten schwerer Kr mpfe und Schmerzen im Abdominalbereich gefolgt von w riger Diarrh bei der der Stuhl deutlich sichtbar Blut enthalten kann In den USA konnte 1971 eine Serie von 107 Ausbr chen von denen 387 Personen betroffen waren auf importierten Camembert K se zur ckgef hrt werden E coli 0157 H7 wurde 1982 als Ursache einer h morrhagischen Kolitis und 1983 als Ursache eines h molytischen ur mischen Syndroms erkannt Der Ausbruch von 1982 war auf den Verzehr kontaminierter Hamburger zur ckzuf hren 4 10 Die Zahl der Erkrankungen durch diesen Keim hat sich im Lauf des letzten Jahrzehnts deutlich erh ht 3 11 Der gr te Ausbruch von E coli O157 H7 ereignete sich im Januar 1993 im US Bundesstaat Washington wo ber 600 F lle von h morrhagischer Kolitis best tigt wurden 1 Als Quelle des Ausbruchs wurde nicht ausreichend durchgebra
20. a pr sence et l identit des antig nes H Les isolats frais d E coli pr sentent habituellement des flagelles peu d velopp s 2 Ensemencer un tube de bouillon d infusion de veau avec une anse de milieu Motility Gl Medium Incuber 35 2 C pendant 6 8 h ou jusqu au lendemain si n cessaire 3 Inactiver la culture en ajoutant du formol la concentration finale de 0 3 0 3 part de formol pour 100 parts de culture en bouillon d infusion de veau Si n cessaire ajuster la densit de la suspension avec du s rum physiologique additionn de formol pour obtenir une turbidit correspondant celle d un standard McFarland au sulfate de baryum n 3 Cette culture en bouillon servira d antigene de test l tape 6 4 Pr parer une dilution au 1 500 de Difco E Coli H Antiserum H7 en ajoutant 0 2 mL de solution de travail au 1 2 reconstitu e 49 8 mL de solution de NaCl 0 85 96 5 Pipeter 0 5 mL de l antis rum dilu dans un tube essai 6 Ajouter 0 5 mL de la culture en bouillon du microorganisme tester r alis e l tape 3 et bien m langer La dilution de l antis rum r sultante sera de 1 1000 7 Incuber au bain marie 50 2 C pendant 1 h 8 Observer s il se produit une r action d agglutination RESULTATS Lire les r sultats de test sous clairage indirect sur fond sombre Rapporter les r sultats d agglutination comme suit 4 100 d agglutination des cellules surnageant clair legerem
21. ains 13 Procedures for serological confirmation by Difco E Coli Antisera require a pure culture of the test organism isolated on Veal Infusion Agar or other enriched solid medium PROCEDURES Materials Provided Difco E Coli O Antiserum 0157 and Difco E Coli H Antiserum H7 Materials Required But Not Provided Veal Infusion Agar Motility GI Medium Water bath 50 2 C Formalin McFarland Barium Sulfate Standard No 3 Culture tubes 12 x 75 mm and rack Serological pipettes 1 mL Sterile 0 85 NaCl solution Reagent Preparation Equilibrate all materials to room temperature before performing the tests Ensure that all glassware and pipettes are clean and free of residues such as detergents Difco E Coli antisera To rehydrate add 3 mL sterile 0 85 NaCl solution to each vial Rotate gently to dissolve contents completely The rehydrated antisera are considered a 1 2 working dilution USER QUALITY CONTROL At the time of use test both positive and negative control cultures to check performance of the antiserum techniques and methodology Quality control requirements must be performed in accordance with applicable local state and or federal regulations or accreditation requirements and your laboratory s standard Quality Control procedures It is recommended that the user refer to pertinent CLSI guidance and CLIA regulations for appropriate Quality Control practices Test Procedure Tube Test for O Antigen Titration 1
22. biente antes de realizar las pruebas Aseg rese de que el material de vidrio y las pipetas est n limpios y libres de residuos como por ejemplo detergente Antisueros Difco E Coli Para rehidratar agregar 3 mL de soluci n de NaCl al 0 85 est ril a cada vial Girar suavemente para disolver el contenido por completo Los antisueros rehidratados se consideran como diluciones de trabajo 1 2 CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO En el momento de uso analizar los cultivos de control tanto positivos como negativos para comprobar el rendimiento de los antisueros las t cnicas y la metodolog a El control de calidad debe llevarse a cabo conforme a la normativa local y o nacional a los requisitos de los organismos de acreditaci n y a los procedimientos est ndar de control de calidad del laboratorio Se recomienda consultar las instrucciones de CLSI y normativas de CLIA correspondientes para obtener informaci n acerca de las pr cticas adecuadas de control de calidad Procedimiento de an lisis Prueba en tubo para valoraci n del ant geno O 1 Preparar cultivos puros del organismo de prueba mediante preparaci n en placa de agar infusi n de ternera e incubaci n a 35 2 C durante 16 18 h 2 Suspender el crecimiento del aislado de prueba obtenido del medio de agar s lido en soluci n de NaCl al 0 85 para lograr una suspensi n homog nea 3 Calentar la suspensi n de organismo en ba o Mar a hirviendo durante 30 60 min El
23. cali appartenenti alla Stessa catena di fast food venne ritenuta all origine di tale epidemia 11 E coli O157 H7 un patogeno enterico che pu causare infezione anche con un basso livello di inoculo La trasmissione si verifica di norma mediante generi alimentari di largo consumo preparati non sempre sotto stretto controllo e serviti a soggetti sensibili bambini e anziani sono le fasce pi a rischio di complicanze della malattia II microrganismo stato isolato da numerosi generi alimentari tra cui hamburger poco cotti acqua potabile patate novelle rotolo di tacchino latte crudo e succo di mele La sierotipizzazione di E coli entero emorragico utile ai fini della valutazione epidemiologica della diffusione di un particolare ceppo in un epidemia di origine alimentare 11 PRINCIPI DELLA PROCEDURA Difco E Coli O Antiserum 0157 usato nella tecnica di agglutinazione in provetta per la titolazione dell antigene O mentre Difco E Coli H Antiserum H7 destinato all agglutinazione in provetta per la rilevazione degli antigeni H Questi antisieri si usano per confermare la presenza di E coli 0157 H7 dopo isolamento selettivo La tecnica sierologica si basa sulla reazione di un antisiero specifico con l antigene omologo Mentre la specificit delle metodiche sierologiche non assoluta la sierotipizzazione di E coli unitamente alle caratteristiche biochimiche pu fornire un identificazione accurata dell agente eziologico
24. cesario seleccionar y analizar colonias uniformes en los procedimientos serol gicos 4 Una exposici n prolongada de los reactivos a temperaturas diferentes a las especificadas es perjudicial para los productos 5 En esta prueba es importante respetar el tiempo y la temperatura de incubaci n recomendados Adem s se debe comprobar que el ba o Mar a se encuentre en un lugar libre de vibraciones mec nicas 6 Descarte los antisueros Difco E Coli con turbidez o precipitado despu s de la rehidrataci n o almacenamiento CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO14 El rendimiento de Difco E Coli O Antiserum 0157 fabricado por Difco Laboratories se compar con una prueba de l tex disponible comercialmente en un estudio publicado por Chapman 4 Se analizaron cultivos puros de 91 aislados bacterianos1115 AT En la tabla siguiente se recogen los resultados obtenidos Todos las muestras de E coli anteriormente confirmadas como 0157 dieron resultado positivo con el m todo de aglutinaci n en tubo de Difco Todos los dem s organismos analizados dieron resultado negativo con el m todo de aglutinaci n en tubo de Difco Positivos a la prueba Positivos a la Cantidad de Cena de aglutinaci n en prueba de l tex muestras P tubo con Difco E Coli disponible Antiserum 0157 comercialmente 30 E coli 0157 30 30 30 E coli non 0157 0 0 Microrganismi 30 non fermentanti il 0 0 sorbitolo 1 Escherichia 0 0 hermanii DISPONIBILIDAD N ref De
25. cultivo debe ser homog neo Si se genera precipitado el cultivo es rugoso y debe descartarse la suspensi n 4 Dejar enfriar la suspensi n diluir con soluci n de NaCl al 0 85 a una densidad aproximada al patr n N 3 de McFarland de sulfato de bario Agregar formalina a la concentraci n final de 0 5 por volumen 6 En una gradilla preparar una fila de 8 tubos de ensayo para cada suspensi n de organismo que se ha de analizar 7 Dispensar 0 9 mL de soluci n de NaCl al 0 85 al primer tubo en cada fila y 0 5 mL a los tubos restantes 8 Preparar una serie de diluciones con Difco E Coli O Antiserum 0157 rehidratado Con una pipeta serol gica de 1 mL agregar 0 1 mL de antisuero al tubo 1 de cada fila y mezclar bien Transferir 0 5 mL del tubo 1 al tubo 2 y mezclar bien De manera similar continuar transfiriendo 0 5 mL hasta el tubo 7 y descartar 0 5 mL del tubo 7 despu s de mezclar El tubo 8 es un tubo de control negativo solamente con soluci n de NaCl al 0 85 9 Agregar 0 5 mL de suspensi n del organismo de prueba a cada uno de los 8 tubos Al agregar la suspensi n del organismo de prueba las diluciones finales ser n desde 1 40 hasta 1 2 560 para los tubos 1 a 7 respectivamente 10 Agitar la gradilla para mezclar Incubar en ba o Maria a 50 2 C durante 18 24 h 11 Efectuar una lectura para determinar la aglutinaci n a 16 Prueba en tubo para detecci n del ant geno H 1 Preparar un cultivo con motil
26. d mit kochenden Wasser 30 60 min lang erhitzen Die Kultur soll m glichst homogen sein Niederschl ge sind ein Hinweis auf eine ungleichm ige Kultur Eine Suspension mit Niederschl gen sollte verworfen werden 4 Suspension abk hlen lassen Mit Kochsalzl sung 0 85 auf eine Dichte verd nnen die etwa McFarland Bariumsulfat Standard Nr 3 entspricht Mit Formaldehyd auf eine Endkonzentration von 0 5 Vol verd nnen 6 In einen R hrchenst nder je eine Reihe mit 8 R hrchen f r jede zu testende Suspension einstellen 7 In das erste R hrchen jeder Reihe 0 9 mL Kochsalzl sung 0 85 geben in das zweite und jedes weitere R hrchen jeder Reihe 0 5 mL 8 Mit dem rehydrierten Difco E Coli O Antiserum 0157 eine Verd nnungsserie herstellen Mit einer serologischen 1 mL Pipette 0 1 mL Antiserum in R hrchen 1 jeder Reihe einbringen und gut durchmischen 0 5 mL Fl ssigkeit von R hrchen 1 in R hrchen 2 verbringen und gut durchmischen In gleicher Weise jeweils 0 5 mL in das n chste R hrchen bertragen bis R hrchen 7 erreicht ist Aus R hrchen 8 nach dem Durchmischen 0 5 mL der Fl ssigkeit abgie en R hrchen 8 ist eine negative Kontrolle die nur Kochsalzl sung 0 85 enth lt 9 Zu jedem der 8 R hrchen 0 5 mL der Mikroorganismen Testsuspension hinzuf gen Nach Hinzuf gen der Mikroorganismen Testsuspension betr gt in R hrchen 1 bis 7 die Endkonzentration 1 40 bis 1 2560 10 Zum Durchmischen R hrchenst nder sch
27. ded time and temperature of incubation In addition care should be taken to make certain that the water bath is in a location free of mechanical vibration 6 Discard Difco E Coli Antisera that are cloudy or have a precipitate after rehydration or storage PERFORMANCE CHARACTERISTICS14 The performance of the Difco E Coli O Antiserum 0157 manufactured by Difco Laboratories was compared to a commercially available latex test in a study published by Chapman 14 Pure cultures of 91 bacterial isolates were tested 14 15 The table below lists the results obtained All E coli previously confirmed as 0157 were positive by the Difco tube agglutination method All other organisms tested were negative by the Difco tube agglutination method Dico Ecol Commercially Hover Strain And erum 0157 Available Latex Test Samples Tube Agglutination nn sai Positives Test Positives 30 E coli 0157 30 30 E coli 30 non 0157 0 S Non sorbitol 30 fermenting 0 0 organisms 1 Escherichia 0 0 hermanii AVAILABILITY Cat No Description 229701 BD Difco E Coli O Antiserum 0157 3 mL 221591 BD Difco E Coli H Antiserum H7 3 mL REFERENCES 1 Centers for Disease Control 1993 Emerging infectious diseases Morb Mort Wkly 42 257 260 2 Glass K A J M Leffelholtz J P Ford and M P Doyle 1992 Fate of Escherichia coli 0157 H7 as affected by pH or sodium chloride and in fermented dry sausage Appl Environ Microbiol 58 2513 2516
28. der Reagenzien Vor der Testdurchf hrung alle Materialien Zimmertemperatur annehmen lassen Sicherstellen da alle gl sernen Utensilien und Pipetten sauber sind und keine R ckst nde aufweisen wie z B von Reinigungsmitteln Difco E coli Antiserum Zum Rehydrieren in jedes R hrchen 3 mL sterile Kochsalzl sung 0 85 geben Zur vollst ndigen Aufl sung des Inhalts R hrchen vorsichtig drehen Die rehydrierten Antiseren sind als Arbeitsl sung 1 2 zu betrachten QUALITATSSICHERUNG DURCH DEN ANWENDER Bei Anwendung sowohl positive als auch negative Kontrollen durchf hren um die Leistung der Antiseren die Techniken und die Methodik zu berpr fen Es sind die geltenden gesetzlichen und beh rdlichen und in den Akkreditierungsbedingungen festgelegten Vorschriften zur Qualit tskontrolle sowie 9 die laborinternen Standardvorgaben zur Qualit tskontrolle zu beachten Benutzer sollten die relevanten CLSI Dokumente und CLIA Vorschriften ber geeignete Testverfahren zur Qualit tskontrolle einsehen Testverfahren R hrchentest zur O Antigen Titrierung 1 Reinkulturen des Testorganismus herstellen Hierzu den Testorganismus auf einem Objekttr ger mit Kalbfleisch Infusionsagar ausstreichen und bei 35 2 C 16 18 h lang inkubieren 2 Testisolat Wachstum vom festen Agar N hrboden entfernen und in Kochsalzl sung 0 85 suspendieren so da eine homogene Suspension entsteht 3 Suspension mit dem Mikroorganismus in einem Ba
29. e a quella dello standard McFarland n 3 solfato di bario Aggiungere formalina a una concentrazione finale dello 0 5 del volume 6 In un portaprovette preparare una fila di 8 provette per ogni sospensione di microrganismi da testare 7 Dispensare 0 9 mL di soluzione NaCl allo 0 85 nella prima provetta di ogni fila e 0 5 mL nelle provette rimanenti 8 Preparare diluizioni seriali usando Difco E Coli O Antiserum 0157 reidratato Con una pipetta sierologia da 1 mL dispensare 0 1 mL di antisiero nella provetta 1 di ogni fila e mescolare accuratamente Trasferire 0 5 mL dalla provetta 1 alla provetta 2 e mescolare accuratamente Continuare a trasferire 0 5 mL sino alla provetta 7 gettando 0 5 mL dalla provetta 7 dopo la miscelazione La provetta 8 quella per il controllo negativo e contiene solo soluzione NaCl allo 0 85 9 Dispensare 0 5 mL di sospensione del microrganismo da testare in ciascuna delle 8 provette All aggiunta della sospensione del microrganismo da testare le diluizioni finali dovranno essere da 1 40 a 1 2 560 per le provette rispettivamente da 1 a 7 10 Agitare il portaprovette per mescolare Incubare a bagnomaria a 50 2 C per 18 24 h 11 Verificare l agglutinazione a Test in provetta per rilevazione dell antigene H 1 Preparare una coltura attivamente mobile della coltura E coli sospetta mediante alcuni trasferimenti consecutivi di Motility Gl Medium Prima di tentare di stabilire la prese
30. ent voil 3 75 d agglutination des cellules surnageant l g rement trouble 2 50 d agglutination des cellules surnageant moyennement trouble 1 25 d agglutination des cellules surnageant trouble Moins de 25 d agglutination de cellules Absence d agglutination Difco E Coli O Antiserum O157 Les tubes montrant une agglutination 2 ou sup rieure la dilution 1 320 ou sup rieure sont consid r s comme positifs Difco E Coli H Antiserum H7 Les tubes montrant une agglutination 2 ou sup rieure sont consid r s comme positifs LIMITES DE LA PROCEDURE 1 Les techniques s rologiques employant des s rums E Coli Antisera servent de tests d identification de confirmation d E coli 0157 H7 L identification finale n cessite des tests morphologiques s rologiques et biochimiques 2 Une source de chaleur externe excessive anse d ensemenceur br lante flamme du bec bunsen source lumineuse etc peut emp cher d obtenir une suspension fluide du microorganisme ou entra ner l vaporation ou la pr cipitation du m lange r actionnel De faux positifs risquent d tre obtenus 3 Des isolats de culture non purs sont parfois obtenus et provoquent une agglutination spontan e entra nant l agglutination du s rum normal autoagglutination Choisir des colonies lisses et les tester suivant les m thodes s rologiques 4 L exposition prolong e des r actifs des temp ratures autres que les temp rat
31. ersi al rappresentante locale BD 14 BD Difco E Coli Antisera Espanol USO PREVISTO Difco E Coli O Antiserum 0157 y Difco E Coli H Antiserum H7 son antisueros que se utilizan para la identificaci n de Escherichia coli 0157 H7 RESUMEN Y EXPLICACION E coli 0157 H7 es un pat geno de transmisi n alimentaria que puede causar enfermedades ent ricas potencialmente fatales en los seres humanos1 7 Esta enfermedad se caracteriza por la aparici n repentina de calambres y dolores abdominal graves seguidos de heces l quidas posiblemente con gran cantidad de sangre Una serie de 107 brotes que incluyeron a 387 personas fue rastreada hasta dar con un queso Camembert importado en los Estados Unidos en 19718 E coli O157 H7 fue reconocida como causa de colitis hemorr gica en 19824 y de sindrome ur mico hemol tico en 19839 El brote de 1982 fue debido a la ingesti n de hamburguesas4 10 La incidencia de la enfermedad causada por este organismo se ha incrementado significativamente en la ltima d cada3 11 El brote m s importante de la enfermedad por E coli O157 H7 ocurri en enero de 1993 en el estado de Washington en el que se confirmaron m s de 600 casos de colitis hemorr gica El origen del brote fue identificado como la hamburguesa poco cocida en varios puntos de venta de la misma cadena de restoranes de comida r pida E coli 0157 H7 es un pat geno ent rico que requiere s lo una peque a cantidad de in culo para
32. erved to a target audience children and the elderly are most at risk for complications of the illness The organism has been isolated from several foods including undercooked hamburger drinking water new potatoes turkey roll raw milk and apple cider Serotyping of the entero hemorrhagic E coli is useful in the epidemiological documentation of the spread of a particular strain in a foodborne outbreak 11 PRINCIPLES OF THE PROCEDURE Difco E Coli O Antiserum 0157 is used in the tube agglutination technique for O antigen titration Difco E Coli H Antiserum H7 is used in the tube agglutination technique for detecting H antigens These antisera are used to confirm the presence of E coli 0157 H7 after selective isolation The serological technique is based on the reaction of a specific antiserum with its homologous antigen While the specificity of serological methods is not absolute serotyping of E coli along with biochemical characteristics can provide an accurate identification of the etiological agent REAGENTS Difco E Coli O Antiserum 0157 and Difco E Coli H Antiserum H7 are lyophilized polyclonal rabbit antisera containing approximately 0 2 sodium azide as a preservative Warnings and Precautions For in vitro Diagnostic Use This Product Contains Dry Natural Rubber Observe aseptic techniques and established precautions against microbiological hazards throughout all procedures After use specimens containers slides t
33. gen Aufbewahrung Lyophilisiertes und rehydriertes Difco E Coli Antiserum bei 2 8 C aufbewahren Werden die Reagenzien l ngere Zeit anderen Temperaturen ausgesetzt als vorgeschrieben ist dies den Produkten abtr glich Das angegebene Verfallsdatum gilt f r das in der unge ffneten Packung aufbewahrte Produkt bei Einhaltung der Lagervorschriften Haltbarkeit des Produkts Zusammenklebendes verf rbtes oder sonstige Verfallsanzeichen aufweisendes Produkt nicht verwenden PROBENENTNAHME UND VORBEREITUNG Zur Isolierung von E coli 0157 aus blutigen Stuhlproben MacConkey Sorbitol Agar verwenden Zur Isolierung von E coli 0157 aus Lebensmitteln SMAC CT Sorbitol MacConkey Agar mit Cefixim und Tellurid verwenden 12 Bei einer Kontamination durch gr ere Mengen koliformer Mikroorganismen werden jedoch die 0157 F rbungen maskiert 13 F r die serologische Best tigung durch Difco E coli Antiseren ist eine Reinkultur des Testorganismus auf Kalbfleisch Infusionsagar oder einem anderen angereicherten festen Nahrboden erforderlich VERFAHREN Mitgeliefertes Arbeitsmaterial Difco E Coli O Antiserum 0157 und Difco E Coli H Antiserum H7 Ben tigtes jedoch nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial Kalbfleisch Infusionsagar Motilit ts Gl N hrboden Wasserbad 50 2 C Formaldehyd McFarland Bariumsulfat Standard Nr 3 R hrchen 12 x 75 mm mit St nder serologische Pipetten 1 mL sterile Kochsalzl sung 0 85 Vorbereitung
34. gglutinieren spontan und f hren zur Agglutination in normalem Serum Autoagglutination Es sind glatte Kolonien zu w hlen und mit serologischen Verfahren zu testen 4 Werden die Reagenzien l ngere Zeit anderen Temperaturen ausgesetzt als vorgeschrieben ist dies den Produkten abtr glich 5 Bei diesem Test ist es wichtig sich an die empfohlenen Inkubationszeiten und temperaturen zu halten Au erdem ist darauf zu achten da das Wasserbad keinen mechanischen Vibrationen ausgesetzt wird 6 Difco E coli Antiseren die nach Rehydrierung oder Lagerung wolkig getr bt sind oder Niederschl ge zeigen sind zu verwerfen LEISTUNGSMERKMALE 4 Die Leistung von Difco E Coli O Antiserum O157 hergestellt von Difco Laboratories wurde in einer von Chapman ver ffentlichten Studie mit einem handels blichen Latextest verglichen 14 Es wurden Reinkulturen von 91 Bakterienisolaten getestet 14 15 Die nachstehende Tabelle f hrt die dabei erhaltenen Ergebnisse auf Alle E coli die zuvor als O157 best tigt waren waren im Difco R hrchenagglutinationstest positiv Alle anderen getesteten Mikroorganismen waren im Difco R hrchenagglutinationstest negativ Positiv im R hrchen Anzahl agglutinationstest EIN Im Stamm gg un 2 handels blichen Proben mit Difco E Coli Latextest Antiserum O157 MEA 30 E coli 0157 30 30 30 E coli nicht 0157 0 0 Non sorbitol 30 fermentierende 0 0 Mikroorganismen 1 Escherichia 0 0 hermanii LIEFERBARE PRO
35. gus Repr sentant autoris pour la Communaut europ enne Autorizuirani predstavnik u Europskoj uniji Meghatalmazott k pvisel az Eur pai K z ss gben Rappresentante autorizzato nella Comunit Europea Espona KaybIMAACTBIFHIHAAFEI yekinerri ekin galiotasis atstovas Europos Bendrijoje Bevoegde vertegenwoordiger in de Europese Gemeenschap Autorisert representant i EU Autoryzowane przedstawicielstwo we Wsp lnocie Europejskiej Representante autorizado na Comunidade Europeia Reprezentantul autorizat pentru Comunitatea European VnonHomoyeHHbI npeacraButent B EBpone ckom coo6ujecrae Autorizovan z stupca v Eur pskom spolo enstve Autorizovano predstavni tvo u Evropskoj uniji Auktoriserad representant i Europeiska gemenskapen Avrupa Toplulu u Yetkili Temsilcisi YnosHoBaxenn NpeacTaBHuk y kpa Hax EC 19 In Vitro Diagnostic Medical Device MeauuuHcku ypeg 3a AnarHocTuka MH BuTpo L ka sk za zen ur en pro diagnostiku in vitro In vitro diagnostisk medicinsk anordning Medizinisches In vitro Diagnostikum In vitro Siayvworikh atp kr ouokeur Dispositivo m dico para diagn stico in vitro In vitro diagnostika meditsiiniaparatuur Dispositif m dical de diagnostic in vitro Medicinska pomagala za In Vitro Dijagnostiku In vitro diagnosztikai orvosi eszk z Dispositivo medicale per diagnostica in vitro XacaHabi xargavga XYpri3eTiH MEAULIUHANBIK AUATHOCTUKA acna6b In vitro diag
36. h nap utols napja AAAA MM GG AAAA MM MM fine mese HOKHOK AA KK HOKHOK AA AA 20040 COHbI MMMM MM DD MMMM MM MM m nesio pabaiga JJJJ MM DD JJJJ MM MM einde maand AAAA MM DD AAAA MM MM slutten av m neden RRRR MM DD RRRR MM MM koniec miesiaca AAAA MM DD AAAA MM MM fim do m s AAAA LL ZZ AAAA LL LL sf rsitul lunii TTTT MM UJ FTTT MM MM koHeu mecaya RRRR MM DD RRRR MM MM koniec mesiaca GGGG MM DD GGGG MM MM kraj meseca AAAA MM DD AAAA MM MM slutet av m naden YYYY AA GG YYYY AA AA ayin sonu PPPP MM 44 PPPP MM MM kiHeub Micaus Catalog number KaranoxeH Homep Katalogov slo Katalognummer Api8u6 karad you N mero de cat logo Katalooginumber Num ro catalogue Katalo ki broj Katal gussz m Numero di catalogo Karanor Hemipi Katalogo numeris Catalogus nummer Numer katalogowy Num r de catalog Homep no katanory Katal gov slo Katalo ki broj Katalog numaras Homep 3a KaTanorom Authorized Representative in the European Community OropuaupaH npeacraBuren B Esponeickata o6uiocr Autorizovan z stupce pro Evropsk m spole enstv Autoriseret repr sentant i De Europ iske F llesskaber Autorisierter Vertreter in der Europ ischen Gemeinschaft Egouciodorn vos AVTITTPOOWTTOG ornv Eupurrraikr Koiv rnra Representante autorizado en la Comunidad Europea Volitatud esindaja Euroopa N uko
37. idad activa del cultivo en el que se sospecha la presencia de E coli mediante las transferencias sucesivas de medio para motilidad Gl Se necesitan al menos 2 3 pasadas por el medio para motilidad Gl antes de intentar establecer la presencia y la identidad de los ant genos H Las cepas aisladas recientes de E coli por lo general tienen flagelos poco desarrollados 2 Inocular un asa llena de cultivo de medio para motilidad Gl en un tubo de caldo infusi n de ternera Incubar de 6 8 h a 35 2 C o hasta la ma ana siguiente si es necesario 3 Inactivar el cultivo agregando formalina a una concentraci n final de 0 3 0 3 partes de formaldeh do por 100 partes de cultivo de caldo de infusi n de ternera Si es necesario ajustar la densidad de la suspensi n con soluci n salina tratada con formalina para aproximar al patr n N 3 de McFarland de sulfato de bario Este cultivo de caldo se utilizar como ant geno de prueba en el paso 6 4 Preparar una diluci n 1 500 de Difco E Coli H Antiserum H7 agregando 0 2 mL de soluci n de trabajo 1 2 rehidratada a 49 8 mL de soluci n de NaCl al 0 85 5 Pipetear 0 5 mL de antisuero diluido en un tubo de ensayo 6 Agregar 0 5 mL del cultivo de caldo del organismo de prueba del paso 3 y mezclar bien La diluci n de antisuero resultante ser de 1 1000 7 Incubar en ba o Mar a a 50 2 C durante 1 h 8 Efectuar una lectura para determinar la aglutinaci n RESULTADOS Observar el
38. ii seria C digo do lote Cod de serie Lot Kon naptun nor K d s rie ar a Kod serije Partinummer Lot Parti Kodu Lot Kog naprii tal Becton Dickinson and Company Benex Limited 7 Loveton Circle Pottery Road Dun Laoghaire Sparks MD 21152 USA Co Dublin Ireland Australian Sponsor Becton Dickinson Pty Ltd 4 Research Park Drive Macquarie University Research Park North Ryde NSW 2113 Australia Difco is a trademark of Difco Laboratories Inc a subsidiary of Becton Dickinson and Company BD and BD Logo are trademarks of Becton Dickinson and Company 2014 BD
39. ion de travail au 1 2 CONTROLE DE QUALITE PAR L UTILISATEUR Tester dans la m me s rie des contr les positifs et n gatifs pour contr ler les performances de l antis rum des techniques et de la m thodologie Effectuer les contr les de qualit conform ment aux r glementations nationales et ou internationales aux exigences des organismes d homologation concern s et aux proc dures de contr le de qualit en vigueur dans l tablissement Il est recommand l utilisateur de consulter les directives CLSI et la r glementation CLIA concern es pour plus d informations sur les modalit s de contr le de qualit Mode op ratoire du test Tube essai pour le titrage de l antig ne O 1 Pr parer des cultures pures du microorganisme tester par ensemencement sur g lose d infusion de veau puis les incuber 35 2 C pendant 16 amp 18 h 2 R aliser une suspension homogene de l isolat tester pr lev sur milieu g los solide dans une solution de NaCl 0 85 3 Chauffer la suspension du microorganisme dans un bain marie bouillant pendant 30 60 min La culture doit tre homog ne Une pr cipitation indique une culture non pure et la suspension doit tre limin e 4 Laisser refroidir la suspension puis la diluer avec une solution de NaCl a 0 85 pour obtenir une densit correspondant celle d un standard McFarland au sulfate de baryum n 3 Ajouter du formol la concentration finale de 0 5
40. menwirken mit den biochemischen Eigenschaften einen pr zisen Nachweis dieses Krankheitserregers REAGENZIEN Difco E Coli O Antiserum 0157 und Difco E Coli H Antiserum H7 sind Iyophilisierte polyklonale Antiseren des Kaninchens mit etwa 0 2 Natriumazid als Konservierungsmittel Warnungen und Vorsichtsma nahmen In vitro Diagnostikum Dieses Produkt enth lt Naturkautschuk getrocknet Der Umgang mit mikrobiologischem Material sollte bei allen Verfahren unter Einhaltung der allgemein blichen Vorsichtsma nahmen und Verwendung aseptischer Techniken erfolgen Nach Gebrauch sind Proben Beh lter Objekttr ger R hrchen und sonstiges kontaminiertes Material im Autoklaven zu sterilisieren Die Gebrauchsanleitung ist sorgf ltig zu befolgen WARNUNG Dieses Produkt enth lt Natriumazid das beim Einatmen bei Ber hrung mit der Haut und beim Verschlucken sehr giftig ist Bei Kontakt mit S ure entstehen hochgiftige Gase Bei Kontakt mit der Haut sofort mit viel Wasser abwaschen Natriumazid kann mit Blei und Kupferleitungen reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Beim Entsorgen mit sehr viel Wasser nachsp len um Ansammlungen von Azid zu vermeiden Achtung H302 Gesundheitssch dlich bei Verschlucken P264 Nach Gebrauch gr ndlich waschen P301 P312 BEI VERSCHLUCKEN Bei Unwohlsein GIFTINFORMATIONSZENTRUM oder Arzt anrufen P501 Inhalt Beh lter gem den rtlichen regionalen nationalen internationalen Bestimmungen entsor
41. n Public Health Association Washington D C 10 Morbidity and Mortality Weekly Reports November 1982 11 Lior H 1994 Escherichia coli O157 H7 and verotoxigenic Escherichia coli VTEC Dairy Food and Environ Sanit 14 378 382 12 Association of Official Analytical Chemists 2001 FDA bacteriological analytical manual online lt http www cfsan fda gov ebam bam mm html gt 13 Meng J P Feng and M P Doyle 2001 Pathogenic E coli p 331 341 In P Downes and K Ito ed Compendium of methods for the microbiological examination of foods 4th ed American Public Health Association Washington D C 14 Chapman P A 1989 Evaluation of commercial latex slide test for identifying Escherichia coli 0157 J Clin Pathol 43 1109 1110 15 Chapman P A D J Wright and P Norman 1989 Verotoxin producing Escherichia coli infections in Sheffield cattle as a possible source Epidem Infect 102 439 45 Technical information In the United States contact BD Technical Service and Support at 800 638 8663 or www bd com ds BD Difco E Coli Antisera Francais APPLICATION Le Difco E Coli O Antiserum 0157 et le Difco E Coli H Antiserum servent l identification d Escherichia coli O157 HT RESUME ET EXPLICATION E coli 0157 H7 est un pathog ne d origine alimentaire responsable d infections ent riques potentiellement mortelles chez homme 7 Ces infections se caract risent par l apparitio
42. n soudaine de crampes et de douleurs abdominales s v res suivies d une diarrh e aqueuse pouvant devenir sanglante En 1971 une s rie de 107 contaminations ayant touch 387 personnes aux Etats Unis a t reli e des importations de camembert 8 E coli O157 H7 a t identifi comme l agent causal de la colite h morragique en 19824 et du syndrome ur mique h molytique en 1983 9 L pid mie de 1982 a t reli e la consommation de hamburgers 4 10 L incidence des maladies provoqu es par ce microorganisme s est accrue de fa on significative au cours de la derni re d cennie 311 L pid mie la plus importante de contamination par E coli O157 H7 s est produite en janvier 1993 dans l Etat de Washington Etats Unis o plus de 600 patients ont t diagnostiqu s avec une colite h morragique La contamination a t reli e des hamburgers insuffisamment cuits fabriqu s dans plusieurs tablissements d une m me chaine de restauration rapide E coli O157 H7 est un pathog ne ent rique qui ne n cessite qu un faible inoculum pour provoquer la maladie La transmission s effectue habituellement par l interm diaire de pr parations alimentaires de masse qui ne sont pas toujours soumises des r gles de contr les strictes et servies un public cible les enfants et les personnes g es tant les plus expos es aux risques de complications de la maladie Le microorganisme a t isol partir de plusieurs aliments
43. nostikos prietaisas Medisch hulpmiddel voor in vitro diagnostiek In vitro diagnostisk medisinsk utstyr Urzadzenie medyczne do diagnostyki in vitro Dispositivo m dico para diagn stico in vitro Dispozitiv medical pentru diagnostic in vitro MeamunHekni npu6op ans auarHoctuu in vitro Medicinska pom cka na diagnostiku in vitro Medicinski uredaj za in vitro dijagnostiku Medicinteknisk produkt f r in vitro diagnostik In Vitro Diyagnostik T bbi Cihaz MegnuHnn npuetpi ana BiarHoctuku in vitro Temperaturbegreensning Temperaturbegrenzung Mepiopio poi Bepuokpacias Limitaci n de temperatura Temperatuuri piirang Limites de temp rature Dozvoljena temperatura H m rs kleti hat r Limiti di temperatura TemnepatypaHbi uiekrey Laikymo temperatura Temperatuurlimiet Temperaturbegrensning Ograniczenie temperatury Limites de temperatura Limite de temperatura Orpanuyenue temnepatypbi Ohrani enie teploty Ograni enje temperature Temperaturgr ns S cakl k s n rlamas OOmexeHHa TeMneparypu T Temperature limitation TemnepatypHu orpannyenna Teplotni omezen Batch Code Lot Kon Ha naptugata K d slo ar e Batch kode lot Batch Code Charge Kwdik c Trapridag rrapr a C digo de lote lote Partii kood Num ro de lot Lot kod T tel sz ma Lot Codice batch lotto Tontama kogpi Partijos numeris LOT Lot nummer Batch kode parti Kod part
44. nza e identificare gli antigeni H sono necessari almeno 2 3 passaggi attraverso il Motility Gl Medium Gli isolati freschi di E coli presentano generalmente flagelli scarsamente sviluppati 2 Inoculare un ansa completa della coltura del Motility Gl Medium in una provetta contenente brodo all infuso di vitello Incubare a 35 2 C per 6 8 h o per tutta la notte se necessario 3 Inattivare la coltura aggiungendo formalina a una concentrazione finale dello 0 3 0 3 parti di formaldeide ogni 100 parti di brodo di coltura all infuso di vitello Se necessario correggere la densit della sospensione con soluzione fisiologica formalinizzata in modo da approssimare lo standard McFarland n 3 solfato di bario Questo brodo di coltura verr usato come antigene per il test al punto 6 4 Preparare una diluizione 1 500 di Difco E Coli H Antiserum H7 dispensando 0 2 mL della soluzione di lavoro 1 2 reidratata in 49 8 mL di soluzione NaCl allo 0 85 Pipettare 0 5 mL di antisiero diluito in una provetta 6 Dispensare 0 5 mL del brodo di coltura del microrganismo da testare preparato al punto 3 e mescolare bene La diluizione di antisiero cos ottenuta 1 1 000 Incubare a bagnomaria a 50 2 C per 1 h 8 Verificare l agglutinazione oa SQ 13 RISULTATI Osservare il risultato del test a luce indiretta su fondo scuro Registrare l agglutinazione nel modo seguente 4 100 di agglutinazione cellulare sovranatante
45. perature diverse da quelle indicate pu danneggiare i prodotti 5 In questo test importante usare i tempi e le temperature di incubazione raccomandati Assicurarsi inoltre che il bagnomaria sia situato in una posizione non soggetta ad alcuna vibrazione meccanica 6 Gettare gli antisieri Difco E Coli opachi o che presentano precipitati dopo la reidratazione o la conservazione PRESTAZIONI METODOLOGICHE 4 Le performance di Difco E Coli O Antiserum 0157 prodotto da Difco Laboratories sono state comparate con un test al latex in commercio in uno studio pubblicato da Chapman 14 Sono state testate colture pure di 91 isolati batterici 14 15 La tabella seguente elenca i risultati ottenuti Tutti gli E coli precedentemente confermati come 0157 sono risultati positivi con la metodica di agglutinazione in provetta Difco mentre tutti gli altri microrganismi testati con tale metodica sono risultati negativi Positivi al test di pun i Positivi al N di agglutinazione in RR Ceppo i A test al latex in campioni provetta Difco E Coli commercio Antiserum 0157 30 E coli 0157 30 30 30 E coli non 0157 0 0 Microrganismi 30 non fermentanti 0 0 il sorbitolo 1 Escherichia 0 0 hermanii DISPONIBILIT N di cat Descrizione 229701 BD Difco E Coli O Antiserum 0157 1x3 mL 221591 BD Difco E Coli H Antiserum H7 1 x 3 mL BIBLIOGRAFIA Vedere References nel testo inglese Assistenza e supporto tecnico BD Diagnostics rivolg
46. r reidratare dispensare in ogni flacone 3 mL di soluzione sterile NaCl allo 0 85 Roteare delicatamente per dissolvere completamente il contenuto Gli antisieri reidratati sono considerati una soluzione di lavoro 1 2 CONTROLLO DI QUALIT A CURA DELL UTENTE Al momento dell uso testare le colture di controllo positiva e negativa per verificare le performance dell antisiero le tecniche e la metodologia Le procedure prescritte per il controllo di qualit devono essere effettuate in conformit alle norme vigenti o ai requisiti di accreditazione e alla prassi di controllo di qualit del laboratorio specifico Per una guida alla prassi di controllo di qualit appropriata si consiglia di consultare le norme CLIA e la documentazione CLSI in merito Procedura del test Test in provetta per titolazione dell antigene O 1 Preparare colture pure del microrganismo per il test allestendo piastre su agar all infuso di vitello e incubando a 35 2 C per 16 18 h 2 Sospendere la crescita dell isolato per il test ottenuta da terreno agar solido in soluzione NaCl allo 0 85 NaCl per avere una sospensione omogenea 3 Riscaldare la sospensione di microrganismo in bagnomaria bollente per 30 60 min La coltura deve essere omogenea La formazione di precipitati indica una coltura imperfetta e la sospensione deve essere gettata 4 Lasciare raffreddare la sospensione diluire con soluzione NaCl allo 0 85 sino a ottenere una densit simil
47. resultado de la prueba con luz indirecta contra un fondo oscuro Registrar la aglutinaci n de la manera siguiente 4 100 de aglutinaci n de c lulas l quido sobrenadante transparente a ligeramente lechoso 3 75 de aglutinaci n de c lulas l quido sobrenadante ligeramente turbio 2 50 de aglutinaci n de c lulas l quido sobrenadante moderadamente turbio 1 25 de aglutinaci n de c lulas l quido sobrenadante turbio Menos de 25 de aglutinaci n de c lulas Sin aglutinaci n Difco E Coli O Antiserum 0157 los tubos con 2 o m s de aglutinaci n en 1 320 o m s se consideran positivos Difco E Coli H Antiserum H7 los tubos con 2 o m s de aglutinaci n se consideran positivos LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO 1 Las t cnicas serol gicas con antisueros de E Coli sirven como evidencia para corroborar la identificaci n de E coli 0157 H7 No se puede realizar una identificaci n final sin considerar la caracterizaci n morfol gica serol gica y bioqu mica 2 El calor excesivo proveniente de fuentes externas asa bacteriol gica caliente llama del mechero fuente de luz etc puede impedir la formaci n de una suspensi n uniforme del microorganismo o causar la evaporaci n o precipitaci n de la mezcla de an lisis Pueden ocurrir reacciones positivas falsas 3 Se generan aislados de cultivos rugosos que se aglutinar n espont neamente lo que causa aglutinaci n en un suero normal autoaglutinaci n Es ne
48. scripci n 229701 BD Difco E Coli O Antiserum O157 1 x 3 mL 221591 BD Difco E Coli H Antiserum H7 1 x 3 mL REFERENCIAS V ase la secci n References en el texto ingl s Servicio t cnico de BD Diagnostics p ngase en contacto con el representante local de BD 18 Manufacturer Mpou3Boauten V robce Fabrikant Hersteller Karaokeuaorr s Fabricante Tootja Fabricant Proizvodac Gy rt Fabbricante Atkapy ub Gamintojas Tilvirker Producent Produc tor l IpousBonurene V robca Proizvo a Tillverkare retici Bnpo6Hnk Use by Wanonapanre no Spotrebujte do Brug for Verwendbar bis Xp on wc Usar antes de Kasutada enne Date de p remption Upotrijebiti do Felhaszn lhat s g d tuma Usare entro He in na aananyra Naudokite iki Houdbaar tot Brukes for Stosowa do Prazo de validade A se utiliza pana la Ucnonb30BaTb go Pou ite do Upotrebiti do Anv nd f re Son kullanma arihi Bugopuctatu noVine YYYY MM DD YYYY MM MM end of month TTTTMM DD FTTT MM MM kpas Ha Meceua RRRR MM DD RRRR MM MM konec m s ce AAAA MM DD AAAA MM MM slutning af m ned JJJJ MM TT JJJJ MM MM Monatsende EEEE MM HH EEEE MM MM t Aog rou priva AAAA MM DD AAAA MM MM fin del mes AAAA KK PP AAAA KK KK kuu l pp AAAA MM JJ AAAA MM MM fin du mois GGGG MM DD GGGG MM MM kraj mjeseca HH NN HH HH
49. tenes Hackfleisch in mehreren Restaurants der gleichen Fast Food Kette identifiziert E coli 0157 H7 ist ein Enteropathogen das schon bei geringen Konzentrationen im Inokulum krankheitserregend wirkt Die bertragung erfolgt gew hnlich ber eine nicht immer unter stringenter Kontrolle stehende Massenzubereitung von Lebensmitteln f r bestimmte Zielgruppen Kinder und ltere Menschen sind besonders anf llig gegen ber Komplikationen aufgrund dieser Erkrankung Der Mikroorganismus wurde bereits in mehreren Nahrungsmitteln gefunden zum Beispiel in nicht ausreichend durchgebratenem Hackfleisch Trinkwasser Fr hkartoffeln Putenrollen roher Milch und Apfelcider Die Serotypisierung enteroh morrhagischer E coli ist n tzlich f r die epidemiologische Dokumentation der Ausbreitung eines bestimmten Stammes im Rahmen eines lebensmittelbedingten Ausbruchs 11 VERFAHRENSGRUNDLAGEN Difco E Coli O Antiserum 0157 wird in der R hrchenagglutinationstechnik zur O Antigen Titrierung verwendet Difco E Coli O Antiserum H7 wird in der R hrchenagglutinationstechnik f r den Nachweis von H Antigenen verwendet Mit diesen Antiseren wird die Anwesenheit von E coli O157 H7 nach selektiver Isolierung best tigt Die serologische Technik basiert auf der Reaktion eines spezifischen Antiserums mit seinem homologen Antigen Auch wenn die Spezifit t serologischer 8 Methoden nicht absolut ist so erm glicht doch die Serotypisierung von E coli in Zusam
50. ubes and other contaminated material must be sterilized by autoclaving Directions for use should be followed carefully WARNING This product contains sodium azide Sodium azide is toxic by inhalation by skin contact and if swallowed Contact with acid liberates very toxic gas After contact with skin wash immediately with plenty of water Sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive metal azides On disposal flush with a large volume of water to prevent azide build up Warning H302 Harmful if swallowed P264 Wash thoroughly after handling P301 P312 IF SWALLOWED Call a POISON CENTER doctor if you feel unwell P501 Dispose of contents container in accordance with local regional national international regulations Storage Store lyophilized and rehydrated Difco E Coli Antisera at 2 8 C z Prolonged exposure of reagents to temperatures other than those specified is detrimental to the products The expiration date applies to the product in its intact container when stored as directed Product Deterioration Do not use if the product is caked discolored or shows other signs of deterioration SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION For isolation of E coli 0157 from bloody stool samples use MacConkey Sorbitol Agar For isolation of this organism from food use SMAC CT Sorbitol MacConkey Agar w Cefixime and Tellurite 12 However high levels of contaminating coliform organisms will mask the 0157 str
51. ures sp cifi es a un effet adverse sur ceux ci 5 Il est important pour ce test de respecter la dur e et la temp rature d incubation recommand es En outre s assurer que le bain marie est plac l abri de vibrations m caniques 6 Jeter les Difco E Coli Antisera qui sont troubles ou pr sentent un pr cipit apr s reconstitution ou conservation CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES 4 Les performances du Difco E Coli O Antiserum O157 fabriqu par les laboratoires Difco ont t compar es celles d un test au latex disponible sur le march dans une tude publi e par Chapman 14 Des cultures pures de 91 isolats bact riens ont t test es 14 15 Le tableau ci dessous r capitule les r sultats obtenus Tous les isolats d E coli pr c demment confirm s comme 0157 taient positifs avec la m thode d agglutination en tube Difco Tous les autres microorganismes test s taient n gatifs avec la m thode d agglutination en tube Difco R sultats positifs obtenus avec le test R sultats positifs test obtenus avec Nb d agglutination en d chantillons Souche tube par le Difco b i auilatox disponible sur le Ecol march Antiserum 0157 30 E coli 0157 30 30 30 E coli non 0157 0 0 Microorganismes 30 ne fermentant 0 0 pas le sorbitol 4 Escherichia 0 0 hermanii CONDITIONNEMENT N r f Description 229701 BD Difco E Coli O Antiserum 0157 1 x 3 mL 221591 BD Difco E Coli H Antiserum H7 1 x 3 mL R
52. ws 4 100 agglutination of cells supernatant fluid is clear to slightly hazy 3 75 agglutination of cells supernatant fluid is slightly cloudy 2 50 agglutination of cells supernatant fluid is moderately cloudy 1 25 agglutination of cells supernatant fluid cloudy Less than 25 agglutination of cells No agglutination Difco E Coli O Antiserum 0157 Tubes showing a 2 or greater agglutination at 1 320 or greater are considered positive Difco E Coli H Antiserum H7 Tubes showing 2 or greater agglutination are considered positive LIMITATIONS OF THE PROCEDURE 1 Serological techniques employing E Coli Antisera serve as corroborative evidence for the identification of E coli 0157 H7 Final identification cannot be made without consideration of morphological serological and biochemical characterization 2 Excessive heat from external sources hot bacteriological loop burner flame light source etc may prevent making a smooth suspension of the microorganism or cause evaporation or precipitation of the test mixture False positive reactions may occur 3 Rough culture isolates occur and will agglutinate spontaneously causing agglutination in a normal serum autoagglutination Smooth colonies must be selected and tested in serological procedures 4 Prolonged exposure of reagents to temperatures other than those specified is detrimental to the products 5 It is important in this test to use the recommen
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