STIFFMAN GADI+GADII IgG DOT
Contents
1. de substances interf rentes le contr le n gatif est presque incolore Au contraire un contr le n gatif plus color indique un taux important de liaisons non sp cifiques dans l chantillon RESULTAT POSITIF Un chantillon est positif pour un anticorps sp cifique si l intensit de la couleur du Dot antig ne correspondant est sup rieure l intensit de la couleur du Dot Contr le N gatif RESULTAT NEGATIF Un chantillon est n gatif pour un anticorps sp cifique si l intensit de la couleur du Dot antig ne correspondant est inf rieure ou gale l intensit de la couleur du Dot Contr le N gatif Note Une interpr tation visuelle peut tre difficile pour les dots antig nes dont l intensit de coloration est tr s faible et tr s proche de l intensit du Contr le N gatif Dans de tels cas l utilisation du syst me Dr DOT BlueScan peut tre avantageuse voir 9 2 et permettre une interpr tation plus pr cise Des faibles concentrations d auto anticorps peuvent tre observ es chez des patients sains Dr DOT AU Pour cette raison un r sultat positif faible entre 5 et 10 UA bien que valide doit tre consid r comme quivoque Dans un tel cas il est recommand de r aliser un nouveau test du patient de pr f rence en utilisant un nouvel chantillon Si le r sultat reste quivoque apr s ce nouveau test d autres tests de diagnostic et ou clinique doivent tre utilis s pour 10 PERFOR2. ALPHADIA sav DIAGNOSTIC PRODUCTS Ci IFU Mode d emploi AD GAD p 1 of 4 STIFFMAN GADI GADII IgG DOT Code AD GAD 1 INDICATIONS D UTILISATION La trousse ALPHADIA STIFFMAN GADI GADII IgG DOT contient 24 tests Immunodot permettant la d tection des auto anticorps IgG dirig s contre les antig nes GAD I 67 kDa et GAD II 65 kDa dans le s rum humain Plus d information sur le type la source des antig nes est disponible par l interm diaire de votre distributeur 2 PRINCIPE DU TEST Le test est bas sur une m thode immunoenzymatique Les bandelettes sont compos es d une membrane fix e sur un support plastique Dans la proc dure de dosage les bandelettes sont incub es avec le s rum du patient dilu au 1 151 Les anticorps s ils sont pr sents dans l chantillon se lient l antig ne sp cifique sur la membrane La fraction non li e est limin e par lavage dans l tape suivante Ensuite les immunoglobulines anti IgG humaines conjugu es de la phosphatase alcaline sont mises en incubation avec les bandelettes et se lient aux complexes antig nes anticorps sur la surface de la membrane Apr s une seconde tape de lavage permettant d liminer l exc s de conjugu la solution de chromog ne substrat est ajout e et provoque l apparition d un produit insoluble color violet qui pr cipite sur le site de la r action enzymatique L intensit de la coloration est directement proportionnelle la quantit d
3. MANCES 10 1 Reproductibilit Des chantillons de r f rence ont t test s pour chaque anticorps dans des s ries successives statistiquement repr sentatives tant dans un m me essai que lors de diff rents essais afin de calculer respectivement la variation intra et inter essais Dans tous les cas les variations d intensit de coloration des dots se trouvaient dans les limites attendues et l cart type tait inf rieur 10 Les donn es d taill es sont disponibles sur demande aider d terminer le statut auto immun du patient 10 2 Sensibilit et sp cificit Des chantillons de r f rence caract ris s chantillons confirm s positifs ou n gatifs pour certains anticorps sp cifiques et ce par des laboratoires de r f rence et ou des m thodes de r f rence ont t test s en suivant les instructions du test La sensibilit et la sp cificit ont t calcul es partir des r sultats g n r s par le logiciel Dr DOT vrai positif faux positif vrai positif faux positif 47 7 54 0 faux n gatif vrai n gatif faux n gatif vrai n gatif 0 200 0 200 Sensibilit 100 Sensibilit 100 Sp cificit 96 6 Sp cificit 100 ALPHADIA sav DIAGNOSTIC PRODUCTS Ci IFU Mode d emploi AD GAD p 4 of 4 11 LIMITES DU TEST 1 Le diagnostic ne doit pas tre tabli uniquement sur base d une seule m thode de test 2 Les r sultats doivent tre toujours interpr t s en tenant compte d
4. anticorps pr sents dans l chantillon 3 CONTENU DE LA TROUSSE Abr viations AP Phosphatase alcaline BCIP Bromo Chloro Indolyl Phosphate BSA albumine de s rum bovin MIT MethylIsoThiazolone NBT NitroBlue Tetrazolium TBS Tampon Tris Salin A RECONSTITUER Tampon de lavage 10 x 1 x 40 mi concentr x 10 incolore Contient TBS Tween Preservative MIT PRETS A L EMPLOI Bandelettes 24 unit s 4 Dots chacune 1 contr le n gatif C 2 antig nes 1 contr le positif C Diluent pour chantillon 1 x 40 mi jaune Contient Tris Tween BSA conservateur MIT Conjugu 1 x 40 mi rouge Contient immunoglobulines de ch vre anti IgG humaines AP conservateur MIT Substrat 1 x 40 mi bouteille brune solution jaune clair Contient NBT BCIP conservateur 0 05 NaN sodium azide Plaque d incubation 3 unit s 8 puits d incubation 4 MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI Agitateur Micropipettes Chronom tre prouvette gradu e eau distill e ou d ionis e pinces papier absorbant 5 CONSERVATION ET STABILITE DES REACTIFS Une fois reconstitu e la solution de lavage est conserv e pendant au moins un mois 2 8 C Conserver tous les r actifs et les bandelettes 2 8 C jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette de chaque flacon ou tube Les bandelettes non utilis es doivent tre remises dans leur tube et conserv es 2 8 C 6 PRECAUTIONS D UTILISATION Cette trousse e
5. e sur la zone plastique d identification Note Les tapes 4 et 5 peuvent tre combin es en pr diluant les chantillons dans des tubes en verre ou en plastique 1 5 ml de diluant 10 ul d chantillon M langer gt verser dans le puits Eliminer la solution contenue dans les puits Enlever le liquide des puits en retournant doucement la plaque Les bandelettes adh rent au fond des puits Appliquer le bord de la plaque d incubation sur du papier absorbant Laver 3 x 3 minutes avec 1 5 mi de tampon de lavage dans chaque puits sur agitateur Apr s chaque tape de lavage enlever le liquide des puits en retournant doucement la plaque Les bandelettes adh rent au fond des puits Appliquer le bord de la plaque d incubation sur du papier absorbant Ajouter 1 5 mi de conjugu dans chaque puits Incuber 30 minutes sur agitateur Eliminer la solution contenue dans les puits Enlever le liquide des puits en retournant doucement la plaque Les bandelettes adh rent au fond des puits Appliquer le bord de la plaque d incubation sur du papier absorbant Laver 3 x 3 minutes avec 1 5 mi de tampon de lavage dans chaque puits sur agitateur Apr s chaque tape de lavage enlever le liquide des puits en renversant doucement la plaque Les bandelettes adh rent au fond des puits Appliquer le bord de la plaque d incubation sur du papier absorbant Ajouter 1 5 mi de substrat dans chaque puits Incuber 10 minutes sur agitateur Eliminer la s
6. e l examen clinique de l historique du patient et des r sultats obtenus au moyen d autres m thodes Aucune technique utilis e seule ne peut carter la possibilit de r sultats faussement positifs ou faussement n gatifs Dans cette optique un test d immunofluorescence indirecte devrait dans la mesure du possible tre r alis en parall le la D termination des auto anticorps faite avec les trousses ALPHADIA Dot automatis es L immunofluorescence tant reconnue comme m thode de r f rence en auto immunit 3 ALPHADIA sa nv et ses distributeurs autoris s ne peuvent pas tre tenus responsables des dommages occasionn s indirectement ou cons cutivement un changement ou une modification dans le proc d indiqu L utilisation de cette trousse est r serv e uniquement un personnel technique qualifi 4 L utilisation de cette trousse est soumise au respect des Bonnes Pratiques de Laboratoires BPL et doit galement tenir compte de tous les r glements g n raux et sp cifiques li s l utilisation d une telle trousse 5 La responsabilit de ALPHADIA sa nv se limite dans tous les cas au remplacement de la trousse 12 D PANNAGE Pas d apparition de Utilisation du tampon de lavage concentr e en lieu et place de la solution dilu e r action Echantillons trop dilu s Dilution du conjugu pour rappel le conjugu est pr t l emploi Conjugu inactif Bruit de fond trop lev Mauvaise qualit de l chantil
7. lon particules vieux s rum contamination bact rienne L tape de pr lavage a t insuffisante ou omise Faible qualit du lavage Incubation trop longue Incubation des temp ratures trop lev es Mauvaise dilution des chantillons Contamination du NBT 13 BIBLIOGRAPHIE La litt rature est disponible sur demande l adresse suivante contact alphadia be GARANTIE ALPHADIA sa nv d cline toute responsabilit vis vis des dommages directs indirects ou cons quents r sultant de l usage inad quat des r actifs inclus dans cette trousse Fabriqu par ALPHADIA sa nv Avenue V sale 26 1300 Wavre BELGIQUE Version 04 2014 Tel 0032 0 10 24 26 49 Fax 0032 0 10 24 55 99 Email contact alphadia be www alphadia be
8. mbrane sur la bandelette Utiliser toujours la zone plastique d identification pour la manipulation Toute la proc dure doit tre effectu e temp rature ambiante 8 1 Pr paration des r actifs 1 Amener tous les r actifs temp rature ambiante 18 24 C avant utilisation 2 Diluer le tampon de lavage concentr 10x avec de l eau distill e Pr parer 15 ml de tampon de lavage par bandelette utilis e Exemple 1 5 mi de tampon de lavage concentr 13 5 ml d eau distill e pour une bandelette 8 2 Sch ma de pipetage Placer une bandelette par patient dans chaque puits avec la face r active au dessus Ajouter 2 mi de solution de lavage dans chaque puits Incuber pendant 10 min sur agitateur La coloration bleue des Dots dispara t compl tement si les bandelettes sont correctement immerg es Si ce n est pas le cas prolonger l incubation jusqu la disparition compl te de la coloration bleue Eliminer la solution contenue dans les puits Enlever le liquide des puits en retournant doucement la plaque Les bandelettes adh rent au fond des puits Appliquer le bord de la plaque d incubation sur du papier absorbant Ajouter 1 5 mi de diluant pour chantillon par puits Ajouter 10 pl d chantillon de s rum de patient dans chaque puits Incuber 30 minutes sur agitateur Eviter de toucher la membrane avec l embout de la pipette D poser l chantillon dans la solution de pr f rence sur la partie sup rieure de la bandelett
9. olution contenue dans les puits Enlever le liquide des puits en retournant doucement la plaque Les bandelettes adh rent au fond des puits Appliquer le bord de la plaque d incubation sur du papier absorbant ALPHADIA sav DIAGNOSTIC PRODUCTS Ci IFU Mode d emploi AD GAD p 3 of 4 13 Laver 1 x 3 minutes avec 1 5 mi de tampon de lavage dans chaque puits pour arr ter la r action 14 Retirer les bandelettes des puits et les laisser s cher sur du papier absorbant pendant 30 minutes L interpr tation doit tre faite dans les 24 heures qui suivent la r alisation du test 9 INTERPRETATION DES RESULTATS 1 Enlever l adh sif derri re chaque bandelette et les coller comme repr sent dans le dessin sur la feuille d interpr tation des r sultats fournie avec la trousse Celui ci indiquera les positions respectives des diff rents contr les et antig nes sur la membrane 2 Le Dot sup rieur contr le positif doit toujours tre positif pour tous les chantillons La coloration de ce contr le positif garantit que le test a t r alis correctement et que les composants de la trousse ne sont pas d grad s 3 Comparer les Dots antig nes avec le contr le n gatif toujours situ en derni re position L intensit de la couleur des Dots antig nes est directement proportionnelle la concentration de l anticorps sp cifique dans l chantillon du patient Dans des conditions optimales et si l chantillon est d pourvu
10. st destin e uniquement au diagnostic in vitro La trousse contient des composants pouvant pr senter des risques Eviter le contact avec les yeux et la peau Les chantillons de patients devraient tre manipul s comme s ils taient capables de transmettre des maladies infectieuses Ne pas m langer ou remplacer les r actifs ou les bandelettes provenant de lots diff rents Eviter de toucher les bandelettes avec les doigts Utiliser des pinces ou des gants de laboratoire Amener tous les r actifs temp rature ambiante 18 24 C avant utilisation Respecter strictement les temps d incubation Manipuler la solution de chromog ne substrat NBT BCIP avec pr caution afin d viter toute contamination avec de la phosphatase alcaline ALPHADIA sax DIAGNOSTIC PRODUCTS Ci IFU Mode d emploi AD GAD p 2 of 4 7 PR L VEMENT DES CHANTILLONS MANIPULATION ET CONSERVATION Le test doit tre utilis de pr f rence sur des chantillons r cemment pr lev s Les s rums pr sentant des particules devraient tre centrifug s faible vitesse Les chantillons de sang doivent tre recueillis dans des tubes secs ou dans des tubes contenant de l EDTA ou de l h parine Apr s s paration les chantillons s riques doivent tre utilis s imm diatement ou aliquot s et conserv s 2 8 C pendant deux ou trois jours ou congel s 20 C pour de plus longues p riodes Eviter les cong lations d cong lations r p t es des chan
11. tillons 8 PROCEDURE DE DOSAGE INDICATIONS PRELIMINAIRES Les dots sont pr color s en bleu sur les bandelettes ceci garantit que tous les antig nes ont t correctement adsorb s sur la membrane Cette coloration bleue dispara t pendant la premi re tape de la proc dure la membrane devient alors l g rement rose cette coloration dispara t la fin de la proc dure Pendant la proc dure il est n cessaire d agiter la plaque d incubation pour garantir une circulation efficace des liquides sur la membrane On peut utiliser tout agitateur dont l amplitude et ou la vitesse du mouvement ne cause pas d claboussures des solutions et des contaminations entre les puits Une vitesse d agitation comprise entre 10 et 60 rpm rotations par minute est id ale Si le mouvement de l agitateur peut tre r gl il est pr f rable mais non indispensable d utiliser une agitation l g re durant les tapes d incubation et une agitation plus forte durant les tapes de lavage Apr s le remplissage des puits avec la solution agiter manuellement la plaque d incubation pour que les bandelettes soient compl tement immerg es et pour liminer les bulles d air qui pourraient tre coinc es sous les bandelettes Les bandelettes qui flottent doivent tre pouss es dans la solution avec des pinces ou l embout d une pipette appliqu e sur la zone plastique d identification Eviter de toucher avec les doigts les pinces ou l embout de pipette la me
Download Pdf Manuals
Related Search