GENSCREEN® ULTRA HIV Ag-Ab 1 plaque
Contents
1. talon Ag VIH de l AFSSAPS avec une concentration initiale de 100 pg ml a t trouv e inf rieure 25 pg ml Durant les valuations externes la limite de d tection calcul e par r gression de la courbe standard du panel Ag VIH SFTS 1998 a t tablie a 13 6 pg ml La limite de sensibilit a aussi t valu e sur le pannel BBI 801 pour lequel la concentration en Ag p24 a t d termin e avec le standard Dupont la limite de d tection extrapol e a t tablie 4 2 pg ml d Ag p24 avec ce pannel Sensibilit sur des chantillons Ag VIH positifs 56 chantillons ont t test s 53 contenant au moins 25 pg ml d antig ne VIH taient positifs alors que 3 chantillons contenant respectivement 13 16 et 19 pg ml d Antig ne VIH avaient des ratios densit optique valeur seuil compris entre 0 9 et 1 00 Sensibilit sur des chantillons provenant de surnageants de cultures cellulaires 83 surnageants de g notypes suivants ont t test s 76 VIH1 du groupe M 16 A 16 B 11 C 7D 13 E 4 F 4 G 3H 2 4 VIH1 du groupe O 1 VIH1 du groupe N et 2 VIH 2 Tous les chantillons VIH1 taient r actifs l exception d un chantillon de groupe O qui contenait que 29 pg ml d antig ne VIH et qui avait t trouv avec un ratio densit optique valeur seuil de 0 6 25 R p tabilit et Reproductibilit du test La r p tabilit intra essai et la reproductibilit inter essai d2. CLAVEL F GUYADER M GUETARD D et al Molecular cloning and polymorphism of the human immune deficiency virus type 2 Nature 1986 324 691 695 NORRBY E BIBERFELD G JOHNSON PR et al The chemistry of site directed serology for HIV infections AIDS Res Human Retroviruses 1989 5 487 493 MATHIESEN T CHIODI F BROLIDEN PA et al Analysis of a subclass restricted HIV1 gp 41 epitope by omission peptides Immunology 1989 67 1 7 PASQUALI J L KIENY M P KOLBE H et al Immunogenicity and epitope mapping of a recombinant soluble gp 160 of the human immunodeficiency virus type 1 envelope glycoprotein AIDS Res Human Retroviruses 1990 6 1107 1113 ZAAIJER H L EXEL OEHLERS P V KRAAIJEVELD T et al Early detection of antibodies to HIV1 by third generation assays The Lancet 1992 340 770 772 COUROUCE AM and the other members of the retrovirus study group of the french society of blood transfusion Effectiveness of assays for antibodies to HIV and p24 antigen to detect very recent HIV infections in blood donors AIDS 1992 6 1548 1550 LANGE J M A TEEUWSEN V J P VAHLNE A BARIN F et al Antigenic variation of the dominant gp41 epitope in Africa AIDS 1993 7 461 466 CONSTANTINE N T Serologic tests for retroviruses approaching a decade of evolution AIDS 1993 7 1 13 VANDEN HAESEVELDE M DECOURT JL DE LEYS R et al Genomic cloning and complete sequence analysis of a highly divergent african human
3. LIMITES DU TEST De faibles taux d antig ne ou d anticorps peuvent ne pas tre d tect s lors d infection r cente en cons quence un r sultat n gatif signifie que l chantillon contr l ne contient pas d antig ne VIH ou d anticorps anti VIH d tectable par le test GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab Un tel r sultat n exclut pas la possibilit d une infection VIH1 VIH2 La variabilit des virus VIH groupe M groupe O et VIH 2 ne permet pas d exclure la possibilit de r actions faussement n gatives Aucune m thode connue ne peut offrir l assurance que le virus VIH est absent Toute technique ELISA hautement sensible peut produire des r actions faussement positives Afin de v rifier la sp cificit de la r action tout chantillon trouv positif reproductible selon les crit res d interpr tation de la trousse GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab doit tre confirm par une m thode appropri e par utilisation d un test sp cifique de d pistage des antig nes VIH comme le test Genetic System HIV Ag ElA puis neutralisation pour prouver la pr sence d antig ne VIH ou par Western Blot pour prouver la pr sence d anticorps anti VIH Le chauffage des chantillons affecte la qualit des r sultats La m thode colorim trique de v rification du d p t des chantillons et ou des conjugu s et ou de la solution de r v lation ne permet pas de v rifier l exactitude des volumes distribu s mais seulement de montrer la pr sence d chantillons et
4. 0 100 une DO plus faible indique une mauvaise distribution de la solution de r v lation PERFORMANCES Les performances du GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab ont t d termin es en testant des chantillons de donneur de sang non s lectionn s ainsi que des chantillons de patients infect s par le virus VIH ou des panels commerciaux de s roconversions La limite de sensibilit pour la d tection des Ag VIH a t tablie par analyse de l talon Ag VIH de l AFSSAPS Des chantillons de patients atteints d affections sans relation avec le VIH ont galement t test s Sp cificit La sp cificit a t valu e en testant 1 6038 chantillons de donneurs de sang non s lectionn s dans 3 sites diff rents La sp cificit sur donneurs de sang non s lectionn es tait de 99 95 6035 chantillons n gatif 6038 chantillons test s avec 3 chantillons trouv s r actifs r p t s et non confirm s en Western blot VIH tout comme en Ag VIH 2 409 chantillons non s lectionn s dans 2 laboratoires hospitaliers d analyse 14 chantillons ont t trouv s initialement r actifs dont 12 taient r p t s r actifs 11 d entre eux ont t confirm s par Western Blot 1 ne l a pas t et a t consid r comme faussement positif La sp cificit sur cette population tait de 99 75 397 chantillons n gatifs 398 chantillons test s 3 313 patients montrant diff rentes pathologies ou statuts non
5. au chapitre 8 Sortir le cadre support et les barrettes R1 de l emballage protecteur D poser directement sans pr lavage de la plaque successivement plan de plaque conseill 5 1 25 ul de conjugu 1 R6 dans chaque cupule 5 2 75 ul de contr le positif Ag VIH 85 en A1 75 ul de contr le positif anticorps VIH R4 en 81 75 pl de contr le n gatif R3 en C1 D1 et El 75 ul du premier chantillon en F1 75 ul du deuxi me chantillon en G1 etc en homog n isant le m lange par 3 aspirations minimum avec la pipette de 75 ul ou en agitant la microplaque apr s l tape de pipetage N B La distribution du conjugu 1 et des chantillons peut tre contr l e visuellement ce stade de la manipulation apr s addition des chantillons le conjugu 1 qui est color en jaune vert devient bleu Se r f rer au chapitre 14 pour la v rification automatique V RIFICATION SPECTROPHOTOM TRIQUE DU D P T DES CHANTILLONS ET DES CONJUGU S Lorsque cela est possible couvrir d un film autocollant en appuyant bien sur toute la surface pour assurer l tanch it Incuber la microplaque au bain marie thermostat ou dans un incubateur sec de microplaques pendant 1 heure 4 minutes 37 1 C Retirer le film adh sif Aspirer le contenu de toutes les cupules dans un conteneur pour d chets contamin s contenant de l hypochlorite de sodium et ajouter imm diatement dans chacune d elles un minimum
6. de 0 370 ml de solution de lavage Respecter un temps de trempage temps d attente minimum de 30 secondes Aspirer de nouveau R p ter le lavage au moins 2 fois soit un minimum de 3 lavages au total Le volume r siduel doit tre inf rieur a 10 yl si n cessaire s cher la plaque par retournement sur une feuille de papier absorbant Si l on dispose d un laveur automatique respecter le m me cycle op ratoire voir chapitre 12 ADAPTATIONS Distribuer rapidement 100 yl de la solution de travail du conjugu 2 R7a R7b dans toutes les cupules Le conjugu doit tre agit avant emploi N B La distribution du conjugu 2 qui est de coloration rouge peut tre visuellement contr l e ce stade de la manipulation Se r f rer au chapitre 14 pour la v rification automatique V RIFICATION SPECTROPHOTOM TRIQUE DU D P T DES CHANTILLONS ET DES R ACTIFS 10 Lorsque cela est possible recouvrir d un film neuf et incuber 30 4 minutes temp rature ambiante 18 30 C 11 Retirer le film adh sif vider toutes les cupules par aspiration et laver au moins 5 fois comme pr c demment Le volume r siduel doit tre inf rieur 10 ul si n cessaire s cher les barrettes par retournement sur une feuille de papier absorbant 12 Distribuer rapidement dans toutes les cupules 80 ul de la solution de r v lation de l activit enzymatique R8 R9 pr alablement pr par e Laisser la r action se d velopper l obscu
7. identifi TMB buf en bleu de chromog ne R9 identifi TMB 11x en violet et de solution d arr t R10 identifi 1N en rouge que ceux fournis dans la trousse sous r serve d utiliser un seul et m me lot de ceux ci au cours d un m me essai Ces r actifs peuvent tre utilis s avec d autres produits de notre soci t contacter nos services techniques pour obtenir des informations d taill es Avant utilisation il est n cessaire d attendre 30 minutes pour que les r actifs s quilibrent la temp rature du laboratoire Reconstituer soigneusement les r actifs en vitant toute contamination Ne pas r aliser le test en pr sence de vapeurs r actives acides alcalines ald hydes ou de poussi res qui pourraient alt rer l activit enzymatique des conjugu s Utiliser une verrerie parfaitement lav e et rinc e l eau distill e ou de pr f rence du mat riel usage unique Ne pas laisser la microplaque s cher entre la fin du lavage et le d but de la distribution des r actifs Le temps d attente entre la distribution du conjugu 1 et des chantillons ne doit pas exc der 10 minutes La r action enzymatique est tr s sensible tous m taux ou ions m talliques En cons quence aucun l ment m tallique ne doit entrer en contact avec les diff rentes solutions contenant les conjugu s ou le substrat La solution de r v lation tampon substrat chromog ne doit tre color e en rose L apparition d une autr
8. le positif anticorps VIH1 R4 a t test et trouv n gatif en antig ne HBs et en anticorps anti VHC Le mat riel utilis dans la pr paration du contr le Ag VIH positif R5 a t inactiv en pr sence d un agent dissociant Du fait qu aucune m thode ne peut garantir de fa on absolue l absence de virus VIH H patites B ou C ou d autres agents infectieux Consid rer ces r actifs ainsi que les chantillons de patients comme potentiellement infectieux et les manipuler avec les pr cautions d usage Consid rer le mat riel directement en contact avec les chantillons et les r actifs ainsi que les solutions de lavage comme des produits contamin s et les traiter comme tels Eviter les claboussures d chantillons ou de solution les contenant 20 Les surfaces souill es seront nettoy es par de l eau de javel dilu e 10 Si le liquide contaminant est un acide les surfaces souill es seront neutralis es au pr alable avec du bicarbonate de soude puis nettoy es l aide d eau de javel et s ch es avec du papier absorbant Le mat riel utilis pour le nettoyage devra tre jet dans un conteneur sp cial pour d chets contamin s Les chantillons les r actifs d origine humaine ainsi que le mat riel et les produits contamin s seront limin s apr s d contamination soit par trempage dans de l eau de javel la concentration finale de 5 d hypochlorite de sodium 1 volume d eau de javel pour 10 volumes d
9. 100 VIH 2 Profil WB VIH 2 complet 196 196 100 2 Echantillons de patients atteints d infection aigu ou provenant de panels commerciaux de s roconversion e 81 chantillons provenant de patients atteints d infections VIH aigu ou r cemment infect s ont tous t trouv s positifs avec le GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab 35 chantillons provenant de 28 patients avec des profils de s roconversions en Western Blot et 46 chantillons de patients r cemment infect s e 20 chantillons de per s roconversion ont t test s chantillons de s roconversion pr coce avec des profils Western Blot n gatifs ou des bandes p24 et ou gp160 tr s faibles en Western Blot 19 d entre eux ont t trouv s positifs e Un total de 90 panels commerciaux de s roconversions bien document es ont aussi t analys s les r sultats sur 85 de ces panels ont pu tre compar s un test marqu CE le GENSCREEN PLUS HIV Ag Ab R sultats obtenus avec D tections plus pr coces D tections quivalentes D tection GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab au moins un chantillon les m mes chantillons plus tardive comparativement au suppl mentaire d tect sont reconnus positifs GENSCREEN PLUS HIV Ag Ab Nombre de s roconversions 44 41 0 3 Echantillons contenant des Ag VIH Sensibilit analytique la limite de sensibilit du test calcul e par extrapolation de la courbe obtenue en testant les dilutions de l
10. 24 et des anticorps anti VIH1 groupes M et O et anti VIH2 dans le s rum ou le plasma humain Cette trousse peut tre utilis e la fois pour un d pistage Ag VIH et anticorps anti VIH INT R T CLINIQUE Le syndrome d immunod ficience acquise SIDA est une maladie infectieuse d origine virale se traduisant par un d ficit profond de l immunit cellulaire Deux types de virus apparent s au groupe des lentivirus ont t isol s des lymphocytes de patients atteints de SIDA ou de ses prodromes Le premier nomm VIH1 a t isol en France puis aux Etats Unis Le second nomm VIH2 a t isol chez deux malades d origine africaine et s est r v l tre responsable d un nouveau foyer de SIDA en Afrique de l Ouest Les connaissances sur la variabilit g n tique des souches des virus VIH ont t acquises par le s quen age des g nes GAG POL et ENV des souches repr sentatives de chacun des sous types Les virus VIH1 sont divis s en 2 groupes le groupe M comprenant 9 sous types A et le groupe Le virus VIH2 comprend 5 sous types La r partition g ographique des diff rents sous types est maintenant assez bien d finie Certains variants VIH1 n ont que 70 d homologie pour les g nes GAG et POL avec les principaux isolats et seulement 50 pour le g ne ENV ces diff rences peuvent expliquer l chec du diagnostic de l infection chez certains patients Les diff rentes souches du virus VIH2 pr sentent des co
11. CD GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab 1 plaque 96 tests 72386 5 plaques 480 tests 72388 TROUSSE POUR LA D TECTION DE L ANTIG NE VIH P24 ET ANTICORPS ANTI VIH1 ET ANTI VIH2 DANS LE S RUM PLASMA HUMAIN PAR TECHNIQUE IMMUNOENZYMATIQUE Contr le de qualit du fabriquant Tous les produits fabriqu s et commercialis s par la soci t Bio Rad sont plac s sous un syst me d assurance qualit de la r ception des mati res premi res jusqu la commercialisation des produits finis Chaque lot du produit fini fait l objet d un contr le de qualit et n est commercialis que s il est conforme aux crit res d acceptation La documentation relative la production et au contr le de chaque lot est conserv e par notre soci t 10 11 12 13 14 15 16 17 TABLE DES MATI RES BUT DU DOSAGE INT R T CLINIQUE PRINCIPE DE LA TROUSSE GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab COMPOSITION DE LA TROUSSE GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab PR CAUTIONS CONSIGNES D HYGI NE ET DE S CURIT MAT RIEL N CESSAIRE MAIS NON FOURNI RECONSTITUTION DES R ACTIFS VALIDIT CONSERVATION CHANTILLONS MODE OP RATOIRE ADAPTATIONS CALCUL ET INTERPR TATION DES R SULTATS V RIFICATION SPECTROPHOTOM TRIQUE i DU D P T DES CHANTILLONS ET DES CONJUGU S PERFORMANCES LIMITES DU TEST R F RENCES BIBLIOGRAPHIQUES BUT DU DOSAGE GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab est technique immuno enzymatique bas e sur la d tection de Pantigene VIH p
12. chantillons dont les absorbances sont inf rieures la valeur seuil sont consid r s n gatifs d apr s le test GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab Toutefois les r sultats situ s juste au dessous de la valeur seuil VS 10 lt DO lt VS doivent tre interpr t s avec prudence et il est conseill de tester de nouveau les chantillons correspondants en double lorsque les syst mes utilis s et les proc dures du laboratoire le permettent Les chantillons dont les absorbances sont gales ou sup rieures la valeur seuil sont consid r s initialement positifs d apr s le test GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab lls doivent tre contr l s de nouveau en double avant l interpr tation finale Si apr s r p tition de l essai pour un chantillon l absorbance des 2 doublets est inf rieure la valeur seuil le r sultat initial est non reproductible et l chantillon est d clar n gatif selon le test GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab L origine des r actions non reproductibles est souvent en relation avec les causes suivantes e lavage insuffisant des microplaques e contamination des chantillons n gatifs par un s rum ou un plasma contenant un titre lev d anticorps e contamination ponctuelle de la solution de r v lation par des agents chimiques oxydants eau de javel ions m talliques etc e Contamination de la solution d arr t 23 14 15 24 Si apr s r p tition de l essai l absorbance mesur e sur l un des
13. de par chauffage pendant quelques minutes 40 C pour limiter la pr cipitation de la fibrine En raison de l instabilit de l Ag VIH la chaleur des temp ratures sup rieures ne pourront pas tre utilis es Eviter les cong lations d cong lations r p t es Les chantillons ayant t congel s et d congel s plus de 3 fois ne doivent pas tre utilis s Si les chantillons doivent voyager les emballer selon la r glementation en usage pour le transport des agents tiologiques NE PAS UTILISER DE S RUMS OU PLASMAS CONTAMIN S HYPERLIP MIQUES O HYPERH MOLYSES REMARQUE Aucune interf rence n a t mise en vidence sur des chantillons contenant jusqu 90 g l d albumine 200 mg l de bilirubine et 50 ug l de biotine ainsi que sur des chantillons lip miques contenant jusqu 36 g l de triglyc rides et sur des chantillons h molys s contenant jusqu 10 g l d h moglobine 21 11 MODE OP RATOIRE Suivre strictement le protocole propos Utiliser les s rums de contr le n gatif R3 contr le positif Ac VIH R4 et contr le Ag VIH positif R5 chaque mise en uvre du test pour valider la qualit du test Appliquer les bonnes pratiques de laboratoire 22 1 2 3 4 5 Etablir soigneusement le plan de distribution et d identification des chantillons Pr parer la solution de lavage dilu e se r f rer au chapitre 8 Pr parer la solution de travail du conjugu 2 se r f rer
14. deux doublets est gale ou sup rieure la valeur seuil le r sultat initial est reproductible et l chantillon est d clar positif avec le test GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab conform ment aux limites d crites ci apr s V RIFICATION SPECTROPHOTOM TRIQUE DU D P T DES CHANTILLONS ET DES R ACTIFS V rification du d p t du conjugu 1 et des chantillons Apr s distribution du conjugu 1 R6 et des chantillons il est possible de v rifier la pr sence simultan e du conjugu 1 et des chantillons par une lecture spectrophotom trique 620 nm la densit optique d une cupule contenant la fois du conjugu 1 et de l chantillon doit tre sup rieure 0 600 une DO plus faible indique une mauvaise distribution du conjugu ou de l chantillon V rification du d p t de la solution de travail du conjugu 2 Apr s distribution de la solution de travail du conjugu 2 R7a R7b il est possible de v rifier sa pr sence par une lecture spectrophotom trique 450 620 nm la densit optique d une cupule contenant du conjugu 2 reconstitu doit tre sup rieure 0 100 une DO plus faible indique une mauvaise distribution du conjugu 2 reconstitu V rification du d p t de la solution de r v lation ll est possible de v rifier la pr sence de la solution de r v lation ros e par lecture automatique 490nm une cupule contenant la solution de r v lation doit avoir une densit optique sup rieure
15. e coloration dans les minutes suivant la reconstitution indique que le r actif est inutilisable et doit tre remplac Pour cette pr paration utiliser de pr f rence des r cipients et du mat riel de distribution en plastique usage unique ou de la verrerie pr alablement lav e l acide chlorhydrique 1N rinc e l eau distill e et s ch e Conserver cette solution l abri de la lumi re Utiliser un c ne de distribution neuf pour chaque chantillon Le lavage des cupules est une tape essentielle de la manipulation respecter le nombre de cycles de lavage prescrits et s assurer que toutes les cupules sont remplies puis compl tement vid es Un mauvais lavage peut entra ner des r sultats incorrects Ne jamais utiliser le m me r cipient pour distribuer les conjugu s et la solution de r v lation V rifier l exactitude et la pr cision des pipettes et le bon fonctionnement des appareils utilis s Ne pas modifier le mode op ratoire CONSIGNES D HYGI NE ET DE S CURIT Tous les r actifs de la trousse sont destin s l usage du diagnostic in vitro Porter des gants usage unique lors de la manipulation des r actifs Ne pas pipeter la bouche Le mat riel d origine humaine utilis dans la pr paration du contr le n gatif R3 a t test et trouv n gatif en antig ne HBs et VIH et en anticorps anti VIH1 anti VIH2 et anti VHC Le mat riel d origine humaine utilis dans la pr paration du contr
16. e liquide contamin ou d eau pendant 30 minutes soit par autoclavage 121 C pendant 2 heures minimum L autoclavage 121 C pendant une heure minimum est le meilleur proc d d inactivation des virus VIH et du virus de l h patite B ATTENTION NE PAS INTRODUIRE DANS L AUTOCLAVE DE SOLUTIONS CONTENANT DE L HYPOCHLORITE DE SODIUM e Ne pas omettre de neutraliser et ou d autoclaver les solutions effluents ou tout liquide contenant des chantillons biologiques avant de les jeter dans l vier e Certains r actifs contiennent 0 5 de ProClinTM 300 ProClin 300 0 5 Irritant R43 Peut entra ner une sensibilisation par contact avec la peau A S28 37 Apr s contact avec la peau se laver imm diatement et abondamment avec Xi Irritant de l eau et du savon Porter des gants appropri s e La fiche de donn es de s curit est disponible sur demande e D autre part la manipulation et l limination des produits chimiques doivent tre effectu es selon les bonnes pratiques de laboratoire e Eviter tout contact du tampon substrat du chromog ne et de la solution d arr t avec la peau et les muqueuses risques de toxicit d irritation et de br lures e Certains r actifs contiennent de l azoture de sodium comme conservateur L azoture de sodium peut former des azotures de plomb ou de cuivre dans les canalisations du laboratoire Ces azotures sont explosifs Pour viter toute accumulation d azotures rincer grande eau
17. e lote e Chargen Bezeichnung e Codice del lotto C digo do lote e Batch nr e Batchkoden e Storage temperature limitation e Limites de temp ratures de stockage Temperatura limite Lagerungstemperatur e Limiti di temperatura di conservazione Limites de temperatura de armazenamento e Temperaturbegr nsning e Temperaturbegraensning Bio Rad 3 Bd Raymond Poincar 92430 Marnes la Coquette France T l 33 0 47 95 60 Fax 33 0 1 47 41 91 33 CE e Catalogue number e R f rence catalogue N mero de cat logo Bestellnummer e Numero di catalogo e N mero de cat logo Katalognummer Katalognummer e Authorised Representative Repr sentant agr e Representante autorizado Bevollm chtigter Distributore autorizzato e Representante Autorizado e Auktoriserad representant e Autoriseret repr sentant Expiry date YYYY MM DD Date de p remption AAAA MM JJ e Estable hasta AAAA MM DD e Vervvendbar bis JJJJ MM TT e Da utilizzare prima del AAAA MM GG e Data de expira o AAAA MM DD Utg ngsdatum r M nad Dag Anvendes far AAA MM DD Consult Instruction for use Consulter le mode d emploi Consulte la instrucci n para el uso e Siehe Gebruchsanweisung Consultare le istruzioni per uso Consulte o folheto Informativo Se instruktionsanvisning vid anv ndning Se instruktion f r brug CE 09 2005 code 883304
18. es gp 41 et gp 36 mimant les pitopes immunodominants des glycoprot ines d enveloppe des virus VIH1 et VIH2 et le m me peptide synth tique mimant un pitope sp cifique du virus VIH 1 groupe O totalement artificiel que celui utilis dans la phase solide conjugu 2 La mise en ceuvre du test comprend les tapes r actionnelles suivantes 1 Le conjugu 1 anticorps polyclonal anti p24 du VIH1 biotinyl est distribu dans toutes les cupules de la microplaque 2 Les s rums tudier ainsi que les contr les sont distribu s dans les cupules e Les antig nes VIH ventuellement pr sents se fixent sur les anticorps monoclonaux de la phase solide et forment des complexes avec les anticorps biotinyl s du conjugu 1 e Si des anticorps anti VIH1 et ou VIH2 sont pr sents ils se lient aux antig nes fix s sur la phase solide e Le d p t du conjugu 1 et des chantillons est valid par un changement de couleur du jaune vert au bleu 17 3 Apr s incubation 37 C puis lavage le conjugu 2 est distribu e La streptavidine r agit avec les complexes Ac Ag Ac biotinyl s ventuellement fix s sur la phase solide e Les antig nes VIH1 et VIH2 purifi s marqu s la peroxydase se lient leur tour aux IgG et ou IgM et ou IgA retenus par la phase solide 4 Apr s incubation temp rature ambiante 18 30 C la fraction de conjugu 2 rest e libre est limin e par lavage Apr s une nouvelle incubation te
19. if anticorps VIH R actif 5 R5 Contr le positif Ag VIH R actif 6 R6 Conjugu 1 R actif 10 R10 Solution d arr t 2 R actifs reconstituer R actif 2 R2 Solution de lavage concentr e 10 fois Diluer 10 fois la solution dans l eau distill e On obtient ainsi la solution de lavage pr te l emploi Pr voir 800 ml pour une plaque de 12 barrettes Solution de travail du conjugu 2 R actif 7a R7a R actif 7b R7b Taper doucement le flacon sur la paillasse pour d tacher toute substance pouvant adh rer au bouchon de caoutchouc Enlever le bouchon avec soin et verser le contenu d un flacon de diluant conjugu dans le flacon de conjugu lyophilis Reboucher et laisser reposer pendant 10 minutes en remuant et en retournant de temps en temps pour faciliter la dissolution Solution de r v lation enzymatique R actif 8 R8 R actif 9 R9 Diluer 11 fois la solution de chromog ne R9 dans le tampon substrat R8 ex 1 ml de r actif R9 10 ml de r actif R8 Stabilit 6 heures l obscurit apr s reconstitution VALIDIT CONSERVATION La trousse doit tre gard e 2 8 C Chaque l ment de la trousse GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab conserv 2 8 C peut tre utilis jusqu la date de p remption indiqu e sur le coffret sauf indication sp cifique R1 Apr s ouverture du sachet sous vide les barrettes conserv es 2 8 C dans leur sachet d origine referm avec soin sont s
20. immunodeficiency virus isolate J Virology 1994 68 1586 1596 GURTLER L G HAUSER P H EBERLE J et al A new subtype of human immunodeficiency virus type 1 MVP 5180 from Cameroon J Virology 1994 1581 1585 NAIR B C FORD G KALYANARAMAN V S et al Enzyme immunoassay using native envelope glycoprotein gp 160 for detection of human immunodeficiency virus type 1 antibodies J Clin Microbio 1994 32 1449 1456 GAO F YUE L ROBERTSON D L et al Genetic diversity of human immunodeficiency virus type 2 evidence for distinct sequence subtypes with differences in virus biology J Virol 1994 68 7433 7447 27 28 15 16 17 18 19 20 BUSCH M P SATTEN G A Time course of viremia and antibody seroconversion following human immunodeficiency virus exposure American J Med 1997 102 117 124 AUBUCHON J P BIRKMEYER J D BUSCH M P Cost effectiveness of expanded human immunodeficiency virus testing protocols for donated blood Transfusion 1997 37 45 51 WEBER B et al Reduction of diagnostic window by new fourth generation human immunodeficiency virus screening assays J Clin Microbio 1998 36 2235 2239 GURTLER L MUHLBACHER A MICHL U et al Reduction of the diagnostic window with a new combined p24 antigen and human immunodeficiency virus antibody screening assay J Virology Methods 1998 75 27 38 SIMON F MAUCLERE P ROQUES P et al Identification of a new human immunodeficiency vi
21. ique contenant de l antig ne VIH1 purifi 1 ml 1 inactiv par la chaleur en pr sence d un agent dissociant Conservateur ProClinTM 300 lt 0 1 R6 Conjugu 1 1 flacon 2 flacons Anticorps polyclonaux mouton biotinyl s anti p24 VIH1 10 mi 2 x 10 ml color en jaune vert Conservateur ProClinTM 300 0 5 R7a Conjugu 2 1 flacon 2 flacons Streptavidine et antig nes VIH1 et VIH2 purifi s marqu s asp 12 5 ml qsp 2x30 ml la peroxydase lyophilis R7b Diluant du conjugu 2 1 flacon 2 flacons Solution de lait cr m color en rouge 12 5 mi 2 x 30 ml Conservateur ProClinTM 300 0 5 R8 Tampon substrat 1 flacon 2 flacons Solution d acide citrique et d ac tate de Sodium pH 4 0 60 ml 2 x 60 ml contenant 0 015 d H202 et 4 de DMSO R9 Chromog ne 1 flacon 2 flacons Solution contenant de la tetramethyl benzidine TMB 5 mi 2x5 ml R10 Solution d arr t 1 flacon 3 flacons Solution d acide sulfurique 28 ml 3 x 28 ml Feuilles adh sives pour microplaques 4 12 PR CAUTIONS La qualit des r sultats est d pendante du respect des bonnes pratiques de laboratoire suivantes Ne pas utiliser de r actifs apr s la date d expiration Ne pas m langer des r actifs de lots diff rents au cours d un m me essai REMARQUE Il est possible d utiliser d autres lots de solution de lavage R2 identifi 10 x en bleu sur l tiquette de tampon substrat R8
22. les canalisations si les solutions contenant de l azoture sont limin es par l vier apr s leur inactivation MAT RIEL N CESSAIRE MAIS NON FOURNI e Eau distill e e Hypochlorite de sodium eau de javel et bicarbonate de sodium e Pipettes multipipettes automatiques ou semi automatiques r glables ou fixes pour mesurer et d livrer 25 yl 75 ul 80 pl et 100 pl e Eprouvettes gradu es 25 ml 100 ml 1000 ml e Conteneur de d chets contamin s e Bain marie ou incubateur de microplaques thermostat 37 C 1 C e Dispositif de lavage manuel semi automatique ou appareil de lavage pour plaque de microtitration e Appareil de lecture pour microplaques quip de filtres 450 nm 490 nm et 620 700 nm Papier absorbant Nous consulter pour une information pr cise concernant les appareils valid s par nos services techniques RECONSTITUTION DES R ACTIFS NOTE Avant utilisation laisser tous les r actifs atteindre la temp rature ambiante 18 30 C 1 R actifs pr ts l emploi R actif 1 R1 Microplaque Chaque support cadre contenant 12 barrettes est conditionn en sachet ZIP Couper le sachet l aide de ciseaux ou scalpel 0 5 1 cm au dessus du ZIP Ouvrir le sachet et sortir le cadre Replacer dans le sachet les barrettes inutilis es Refermer le sachet soigneusement et le replacer 2 8 C 10 R actif 3 R3 Contr le n gatif R actif 4 R4 Contr le posit
23. li s au VIH femme enceintes facteur rhumato de maladies auto immune SLE cirrhose insuffisance r nale chronique dialyse immunoglobulines anti souris ou d autres infections virales ou bact riennes H patites A B et C Rub ole Toxoplasmose Oreillons Rougeole CMV HSV EBV VZV HTLVI Malaria patients vaccin s contre la grippe La sp cificit tait de 98 72 sur cette population 309 chantillons n gatifs 313 chantillons test s avec 4 r actions non sp cifiques mais non significatives Sensibilit La sensibilit a t valu e en testant des chantillons dont la pr sence d anticorps anti VIH a t confirm e des chantillons provenant de patients atteints d infections aigu s ou provenant de panels commerciaux de s roconversions Des chantillons contenant des antig nes VIH ont galement t test s purs ou dilu s 1 Echantillons dont la pr sence d anticorps a t confirm e 745 chantillons positifs provenant du suivi de patients infect s par les VIH1 ou VIH2 on t analys s la sensibilit obtenue dans cette tude tait de 100 Types Nombre Nombre Sensitivit d chantillons d chantillons r actifs A B C 200 200 100 classification CDC WB VIH1 complet ou profil avec des bandes anti gag faibles 200 200 100 VIH 1 groupe M 18A 718 23C 9D 12 E 4 F 118 118 100 Groupe O 23 23 100 Groupe N 1 1 100 Panel BBI PRZ 204 Y 7
24. mmunaut s antig niques avec le virus simien SIV au niveau de toutes les prot ines prot ines d enveloppe et prot ines internes h t rologie 30 mais pr sentent moins de 40 d homologie avec les prot ines d enveloppe du virus VIH1 Les antig nes VIH et les anticorps apparaissent et sont d tectables diff rents stades des s roconversions et de l infection Le test GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab permet la d tection simultan e des anticorps anti VIH1 groupes M et O et anti VIH2 ainsi que des antig nes VIH voir galement limites de la m thode PRINCIPE DE LA TROUSSE GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab est une trousse immuno enzymatique bas e sur le principe sandwich pour la d tection de l antig ne VIH et des diff rents anticorps associ s aux virus VIH1 et ou VIH2 dans le s rum ou plasma humain La phase solide est pr par e avec e des anticorps monoclonaux dirig s contre l antig ne p24 du VIH1 e des antig nes purifi s une prot ine gp 160 recombin e un peptide synth tique mimant un pitope sp cifique du virus VIH 1 groupe O totalement artificiel c est dire cod par aucun virus existant ainsi qu un peptide mimant l pitope immunodominant de la glycoprot ine d enveloppe du virus VIH2 Les conjugu s sont pr par s avec e des anticorps polyclonaux biotinyl s contre l Ag VIH conjugu 1 e de la streptavidine et des antig nes VIH marqu s la peroxydase peptid
25. mp rature ambiante 18 30 C la pr sence de l enzyme immobilis e sur les complexes est r v l e par la modification de la coloration du substrat 5 Apr s arr t de la r action la lecture s effectue au spectrophotom tre 450 620 700 nm Labsorbance observ e pour un chantillon permet de conclure quant la pr sence ou l absence d antig ne VIH et ou d anticorps anti VIH1 et ou VIH2 COMPOSITION DE LA TROUSSE Tous les r actifs sont destin s l usage exclusif du diagnostic in vitro ETIQUETAGE NATURE DES R ACTIFS PR SENTATION 72386 72388 R1 Microplaque 12 barrettes de 8 cupules sensibilis es 1 plaque 5 plaques avec des anticorps monoclonaux souris anti p24 du VIH1 et des antig nes VIH1 et VIH2 purifi s R2 Solution de lavage concentr e 10 fois 1 flacon 2 flacons Tampon Tris NaCl pH 7 4 100 mi 2 x 250 ml Conservateur Merthiolate de Sodium 0 01 R3 Contr le n gatif 1 flacon 1 flacon Plasma humain inactiv par chauffage n gatif en antig ne 2 5 mi 2 5 ml HBs et VIH et en anticorps anti VIH1 anti VIH2 et anti VHC Conservateur Azide de Sodium lt 0 1 R4 Contr le positif anticorps VIH 1 flacon 1 flacon Diluant synth tique contenant du plasma humain inactiv 1 ml 1 par chauffage positif en anticorps anti VIH n gatif en antig ne HBs et en anticorps anti VHC Conservateur ProClinTM 300 lt 0 1 R5 Contr le positif Ag VIH 1 flacon 1 flacon Diluant synth t
26. ou des conjugu s et ou de la solution de r v lation Le taux de r ponses erron es obtenues avec cette m thode est li e la pr cision du syst me utilis des CV 26 cumul s de pipetage et de lecture sup rieurs 10 peuvent d grader significativement la qualit de cette v rification Des chantillons ict riques hyperlip miques ou hyperh molys s peuvent affecter la m thode colorim trique de v rification du d p t du conjugu 1 Dans ce cas seule la pr sence des chantillons est certaine Dans le cas d un lavage inefficace apr s l tape d incubation du conjugu la v rification automatique de la distribution de la solution de r v lation par lecture 490 nm des densit s optiques des cupules peut donner des r sultats erron s avec des densit s optiques sup rieures 0 100 en l absence de solution de r v lation Cependant ce ph nom ne n a pas t observ durant les valuations conduites sur 939 chantillons test s 17 R F RENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1 N wm al 10 11 12 13 14 BARRE SINOUSSI F CHERMANN J C REY F et al Isolation of a T lymphotropic retrovirus from a patient at risk for acquired immunodeficiency syndrome AIDS Science 1983 220 868 871 BRUN VEZINET F ROUZIOUX C BARRE SINOUSSI F et al Detection of IgG antibodies to lymphadenopathy associated in patients with Aids or lymphadenopathy syndrome Lancet 1984 june 1253 1256
27. rit pendant 30 4 minutes temp rature ambiante 18 30 C Lors de cette incubation ne pas utiliser de film adh sif N B La distribution de la solution de r v lation qui est color e en rose peut tre contr l e visuellement a ce stade de la manipulation Il y a une diff rence de coloration significative entre une cupule vide et une cupule contenant la solution de r v lation ros e se reporter au paragraphe 14 pour la v rification automatique V RIFICATION SPECTROPHOTOM TRIQUE DU D P T DES CHANTILLONS ET DES R ACTIFS 12 13 13 Ajouter 100 ul de la solution d arr t R10 en adoptant la m me s quence et le m me rythme de distribution que pour la solution de r v lation N B La distribution de la solution d arr t qui est incolore peut tre contr l e visuellement ce stade de la manipulation La coloration du substrat ros e pour les chantillons n gatifs ou bleu pour les chantillons positifs dispara t des cupules qui deviennent incolores pour les chantillons n gatifs ou jaunes pour les chantillons positifs apr s addition de la solution d arr t 14 Essuyer soigneusement le dessous des plaques Au moins 2 minutes apr s la distribution de la solution d arr t et dans les 30 minutes qui suivent l arr t de la r action lire la densit optique 450 620 700 nm l aide d un lecteur de plaques 15 S assurer avant la transcription des r sultats de la concordance entre la lecture e
28. rus type 1 distinct from group M and group O Nature med 1998 4 1032 1037 COUROUCE AM et le groupe de travail R trovirus de la Soci t Fran aise de Transfusion Sanguine Tests de d pistage combin des anticorps anti VIH et de l antig ne p24 Spectra Bio 1999 18 38 44 CE al CE marking European directive 98 79 CE on in vitro diagnostic medical devices e Marquage CE Directive europ enne 98 79 CE relative aux dispositifs m dicaux de diagnostic in vitro Marcodo CE Directiva europea 98 79 CE sobre productos sanitarios para diagn stico in vitro EG Markierung Europ ische Richtlinie 98 79 EG ber In vitroDiagnostika e Marchiatura CE Direttiva europea 98 79 CE relativa ai dispositivi medico diagnostici in vitro e Marca o CE Directiva europeia 98 79 CE relativa aos dispositivos m dicos de diagn stico in vitro e CE m rkning Europa direktiv 98 79 EG om medicintekniska produkter l r in vitro diagnostik e CE m rkningen Europa direktiv 98 79 EF om medicinsk udstyr til in vitrodiagnostik e For in vitro diagnostic use e Pour diagnostic in vitro e Para diagn stico in vitro In vitro Diagnostikum e Per uso diagnostico in vitro Para uso em diagn stico in vitro In vitro diagnostik e In vitro diagnose e Manufacturer e Fabricant e Fabricante e Hersteller e Produttore e Fabricante e Tillverkad av e Fremstillet af e Batch code e Code du lot C digo d
29. t le plan de distribution et d identification des plaques et des chantillons ADAPTATIONS LAVAGE est indispensable de respecter scrupuleusement les proc dures de lavage afin d obtenir les performances maximales du tests CALCUL ET INTERPR TATION DES R SULTATS La pr sence ou l absence d antig ne VIH ou d anticorps anti VIH1 et ou anti VIH2 d tectable est d termin e en comparant pour chaque chantillon l absorbance enregistr e celle de la valeur seuil calcul e 1 Calculer la moyenne des absorbances du contr le n gatif DO R3 00 83 DO C1 DO E1 2 Calcul de la valeur seuil La valeur seuil sera d termin e par la formule suivante VS DO R3 0 200 3 Validation de l essai L absorbance de chaque contr le n gatif R3 doit tre inf rieure 0 170 DO R3 lt 0 170 est possible d liminer au plus une valeur individuelle aberrante du contr le n gatif si sa densit optique se situe en dehors de la norme pr c dente Dans ce cas lorsque la valeur aberrante a t limin e refaire le calcul de la moyenne du contr le n gatif avec les deux valeurs restantes La moyenne des absorbances des contr les n gatifs doit tre inf rieure 0 150 DO R3 lt 0 150 L absorbance du contr le positif anticorps VIH R4 doit tre sup rieure 0 9 DO R4 gt 0 9 L absorbance du contr le positif Ag VIH R5 doit tre sup rieure 0 9 DO R5 gt 0 9 4 Interpr tation des r sultats Les
30. tables pendant 1 mois R2 Apr s dilution la solution de lavage se conserve 2 semaines 2 8 C La solution de lavage concentr e R2 peut tre conserv e 2 25 C R7a b Apr s reconstitution les r actifs conserv s 2 8 C sont stables pendant 1 mois Le conjugu reconstitu R7 a b et congel est stable jusqu la date d expiration du kit il peut subir jusuqu a 11 cycles de cong lation d cong lation R8 R9 Apr s reconstitution les r actifs conserv s l obscurit sont stables pendant 6 heures la temp rature ambiante 18 30 C CHANTILLONS Pr lever un chantillon de sang selon les pratiques en usage Les tests sont effectu s sur des chantillons non dilu s de s rum ou de plasma collect s avec des anticoagulants comme l EDTA l h parine le citrate l ACD Extraire le s rum ou le plasma du caillot ou des globules rouges d s que possible pour viter toute h molyse Une h molyse tr s prononc e peut affecter les performances du test Les chantillons pr sentant des agr gats doivent tre clarifi s par centrifugation avant le test Les particules ou agr gats de fibrine en suspension peuvent donner des r sultats faussement positifs NE PAS CHAUFFER LES CHANTILLONS Les chantillons seront conserv s 2 8 C si le d pistage est effectu dans les 7 jours ou peuvent tre conserv s congel s 20 C pendant plusieurs mois Les plasmas devront subir une d cong lation rapi
31. u test GENSCREEN ULTRA HIV Ag Ab ont t d termin es par l analyse de 10 chantillons 1 n gatif 3 positifs VIH1 3 positifs VIH2 et 3 positifs en antig ne VIH La r p tabilit a t valu e en testant ces 10 chantillons 30 fois dans le m me essai tandis que la reproductibilit a t analys e en testant en double ces 10 chantillons durant 20 jours dans deux essais ind pendants chaque jour Les r sultats figurent dans les tableaux ci apr s Tableau 1 R p tabilit intra essai Echantillons Ratio moyen cart type CV N gatif 0 28 0 02 5 37 Faiblement positif 1 62 0 07 4 32 VIH 1 Moyennement positif 2 98 0 13 4 33 Fortement positif 5 37 0 18 3 32 Faiblement positif 2 5 0 18 7 20 VIH 2 Moyennement positif 5 85 0 45 8 48 Fortement positif 11 19 0 58 5 21 Faiblement positif 1 58 0 06 3 64 Ag VIH Moyennement positif 4 19 0 17 4 13 Fortement positif 9 21 0 34 3 65 Tableau 2 Reproductibilit inter essai Echantillons Ratio moyen cart type N gatif 0 28 0 04 15 84 Faiblement positif 1 05 0 10 9 44 VIH 1 Moyennement positif 2 7 0 22 8 10 Fortement positif 4 96 0 41 8 37 Faiblement positif 1 91 0 41 21 15 VIH 2 Moyennement positif 4 45 0 64 14 29 Fortement positif 10 93 0 62 5 81 Faiblement positif 1 29 0 08 6 48 Ag VIH Moyennement positif 3 48 0 17 4 99 Fortement positif 8 91 1 11 12 48 16
Download Pdf Manuals
Related Search