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1. Ne pas pipeter avec la bouche Utiliser des gants usage unique et des protections pour les yeux quand on manipule des chantillons et pendant le test Se laver soigneusement les mains apr s les manipulations Les r actifs suivants contiennent de faibles concentrations en substances nocives ou irritantes a Le tampon de lavage contient des d tergents b Le conjugu contient du ph nol c Le substrat est acide d Les contr les contiennent de l azide de sodium 0 0995 Les azides peuvent r agir avec les m taux des canalisations et donner des compos s explosifs Il est n cessaire de rincer abondamment avec de l eau Si un r actif vient contact avec la peau ou les yeux laver abondamment avec de l eau Tout le mat riel non jetable doit tre st rilis apr s utilisation de pr f rence en autoclave pendant 1 heure 121 C Tout mat riel jetable doit tre auto clav ou incin r apr s utilisation L acide sulfurique contenu dans la solution d arr t et l acide chlorhydrique utilis pour laver la verrerie est corrosif ces substances doivent tre utilis es avec pr caution En cas de contact avec la peau ou les yeux laver abondamment l eau Les mat riaux liquides jeter neutralis s avec une solution alcaline doivent tre d sinfect s avec le sodium hypochlorite en volume suffisant concentration finale de 196 au moins Un contact de 30 minutes avec cette solution est n cessaire pour garantir2. du papier d emballage et placer les barrettes non utilis es dans le sachet en plastique avec le gel de silice chasser l air et fermer le sachet par pression sur la fermeture CONJ CONJUGUE 1 x 10 ml Composition Anticorps monoclonaux anti IgG marqu s la peroxydase dans un tampon phosphate contenant 0 05 de ph nol et 0 02 96 de bronidox Pr t l emploi CONTROL CONTROLE POSITIF 1 x 1 6 ml Composition S rum humain dilu contenant une quantit connue d anticorps IgG anti Varicelle dans un tampon phosphate 0 01 mol l avec 1 de BSA et 0 09 d azide de sodium Il se pr sente sous forme liquide pr t l emploi sans autre dilution Couleur La couleur est proportionnelle au titre en anticorps CONTROL CUT OFF CONTROLE CUT OFF 1 x 2 0 ml Composition S rum humain dilu contenant une quantit connue d anticorps IgG anti Varicelle dans un tampon phosphate 0 01 mol l avec 1 de BSA et 0 09 azide de sodium Il se pr sente sous forme liquide pr t l emploi sans autre dilution Couleur La couleur est proportionnelle au titre en anticorps CONTROLE NEGATIF IgG PF93910 1 x 1 6 ml INTERCHANGEABLE ENTRE LOTS Composition S rum humain dilu n gatif en IgG anti Varicelle dans un tampon phosphate 0 01 mol l avec 1 de BSA et 0 09 96 azide de sodium Il se pr sente sous forme liquide pr t l emploi sans autre dilution Ref 91078 BRD Fran
3. paragraphe COMPOSITION DU COFFRET ET PREPARATION DES REACTIFS Ne pas r duire les temps d incubation indiqu s Toute verrerie utilis e dans le test doit tre laver soigneusement avec l acide chlorhydrique 2M et rinc e l eau distill e ou d sionis e Ne pas exposer les r actifs une forte lumi re ni aux vapeurs d hypochlorure pendant leur conservation ni pendant les phases d incubation Eviter le dess chement des puits pendant le test Eviter la contamination crois e entre les r actifs I est important d utiliser des c nes diff rents pour chaque r actif Eviter de toucher ou d clabousser le bord du puit avec le conjugu Ne pas souffler sur les microplaques Les dosages immunoenzymatiques pr sentent parfois un effet de bord cet effet peut tre minimis en augmentant l humidit pendant les phases d incubation Les microplaques doivent tre couvertes et incub es 37 C soit dans un bain marie soit dans un incubateur soit dans un analyseur adapt Ne pas utiliser d incubateurs CO 10 Avant de lire la microplaque veiller ce que le fond de la microplaque soit sec et propre et qu il n y ait aucune bulle d air la surface du liquide Ref 91078 BRD Fran ais 5 10 11 Les chantillons fortement h molys s les s rums incompl tement coagul s ou les chantillons pr sentant une contamination microbienne peuvent entra ner des r sultats erron s 12 Lire attenti
4. C m w PLATELIA VZV IgG 48 TESTS 12684 TROUSSE POUR LA DETECTION QUALITATIVE DES ANTICORPS IgG ANTI VARICELLE DANS LE SERUM HUMAIN PAR METHODE IMMUNOENZYMATIQUE Ref 91078 BRD Fran ais 1 10 Ref 91078 BRD SOMMAIRE BUT DU DOSAGE INTERET CLINIQUE PRINCIPE DU TEST COMPOSITION DE LA TROUSSE ET PREPARATION DES REACTIFS CONSERVATION ET STABILITE DES REACTIFS PRECAUTIONS D UTILISATION ECHANTILLONS MODE OPERATOIRE RESUME DU MODE OPERATOIRE CRITERES DE VALIDATION DU TEST INTERPRETATION DES RESULTATS LIMITES DE LA METHODE SPECIFICITE ANALYTIQUE SENSIBLITE ET SPECIFICITE DIAGNOSTIQUES PRECISION EXPERTISE DES CAUSES D ERREUR REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES Fran ais 2 10 1 BUT DU DOSAGE TROUSSE POUR LA DETECTION QUALITATIVE DES ANTICORPS IgG ANTI VARICELLE DANS LE SERUM HUMAIN PAR TECHNIQUE IMMUNOENZYMATIQUE 2 INTERET CLINIQUE La varicelle et le zona constituent deux manifestations cliniques d une infection caus e par le Virus VZV La varicelle est une maladie tr s contagieuse caus e g n ralement par une infection primaire avec le VZV elle atteint souvent les enfants Pendant la grossesse l infection peut causer des malformations du f tus si l infection a lieu la fin de la gestation elle peut entrainer la mort du nouveau n Le zona est une maladie qui touche surtout les adultes et semble tre caus par la r activation du virus Celui ci peut rester l tat latent pendant de long
5. ES SOLUTIONS Tous les r sultats sont n gatifs Absence d un ou plusieurs r actifs ou erreur de manipulation dans l addition des r actifs Contr ler le protocole Contr ler s il y a une solution inutilis e Refaire le test Plaque non r active Contr ler le code imprim sur le sachet de la plaque lire les instructions pour l usage section 4 Contr ler sur une microplaque inutilis e si elle a t expos e l humidit Le gel de silice doit tre d une couleur jaune p le Refaire le test Tous les r sultats sont positifs Contamination du substrat Pr lever une nouvelle aliquote du substrat Lavage insuffisant S assurer que le laveur fonctionne correctement Mauvaise pr cision Lavage incomplet des puits S assurer que le laveur fonctionne correctement Aspiration insuffisante des puits S assurer que le laveur fonctionne correctement Erreur de pipetage S assurer que la pipette fonctionne correctement D lai trop long pour la distribution des r actifs Eviter le dess chement de la plaque apr s la phase de lavage Ajouter imm diatement les r actifs Pr sence de bulles d air Eviter la formation des bulles d air pendant le pipetage Pr sence d impuret s sur le parcours optique Contr ler l absence d impuret s sur la source lumineuse et le d tecteur Essuyer le fond de la microplaque avec un chiffon doux D vel
6. ON DU TEST Lire les densit s optiques D O 450 nm ou 450 620 nm et soustraire la valeur de D O du blanc e Calcul de la valeur seuil VS moyenne des CO Aucune valeur ne doit s carter de plus 25 par rapport la valeur moyenne si analys en triple sinon liminer la valeur aberrante Recalculer la moyenne e Conditions de validation du test Pour valider la manipulation les crit res suivants doivent tre respect s Valeurs des densit s optiques Blanc lt 0 150 CP CO gt 1 5 CN CO lt 0 6 CO gt 0 200 450 nm ou CO gt 0 160 450 620 nm 11 INTERPRETATION DES RESULTATS R sultats qualitatifs Calculer le rapport entre la D O de l chantillon et celle de la valeur seuil Index Index DO chantillon DO cut off L chantillon est consid r comme Positif si l index est sup rieur 1 2 Douteux si l index est compris entre 0 8 et 1 2 N gatif si l index est inf rieur 0 8 Si le r sultat est douteux r p ter le test Si le r sultat est de nouveau douteux r aliser le test sur un nouveau pr l vement Ref 91078 BRD Fran ais 7 10 12 LIMITES DE LA METHODE Un s rum obtenu pendant la phase aigu de l infection quand seulement les anticorps IgM sont pr sents peut tre n gatif avec cette m thode Le niveau des IgM anti Varicelle doit tre d termin en utilisant le coffret Platelia VZV IgM Alternativement un deuxi me chantillon pr lev 8 14 jou
7. ais 3 10 WASH BUF 10x TAMPON DE LAVAGE 10X PF93603 1 x 100 ml INTERCHANGEABLE ENTRE LOTS Composition Solution saline tamponn e concentr e 10 fois contient 0 5 96 de brij Pr paration Diluer au 1 10 avec de l eau distill e pour obtenir un tampon de lavage pr t l emploi En pr sence de cristaux chauffer la solution 37C pour les solubiliser puis r aliser la dilution INTERCHANGEABLE ENTRE LOTS SAMP DIL DILUANT 2 PF93611 1 x 100 mL Pour diluer les chantillons de s rum Pr t l emploi Composition Solution prot ique additionn e d azide de sodium 0 09 et m thylorange comme colorant SUBS TMB SUBSTRAT PF93619 1 x 15 ml Pr t l emploi INTERCHANGEABLE ENTRE LOTS Composition T tram thylbenzidine 0 26 mg ml et du peroxyde d hydrog ne H20 0 01 96 stabilis dans un tampon citrate 0 05 mol l pH 3 8 H SO 0 3 M SOLUTION D ARRET PF93602 1 x 16 ml INTERCHANGEABLE ENTRE LOTS Composition H2SO 0 3 mol l dans une solution pr te l emploi SACHET EN POLYETHYLENE 1 FEUILLES ADHESIVES 2 MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI ncubateur 37 Lecteur de microplaques quip de filtres 450 et 620 nm Laveur de microplaques optionnel capable de distribuer des volumes de 225 375 yl Eau distill e ou d ionis e Verrerie normale de laboratoire prouvette pip
8. ette etc Micropipette pour le pr l vement pr cis de 10 100 1000 ul de solution Gants usage unique Minuteur Solution 596 de sodium hypochlorite R cipients pour les mat riaux potentiellement infectieux Papier absorbant 5 MODALITES DE CONSERVATION ET STABILITE DES REACTIFS Les r actifs doivent tre conserv s 2 8 C La date de p remption est indiqu e sur chaque flacon et sur l tiquette externe du coffret Stabilit des r actifs apr s ouverture et ou reconstitution REACTIF CONDITIONS MICROPLAQUE 5 semaines 2 8 C dans le sachet en polyth ne CONTROLES 5 semaines 2 8 C CONJUGUE 5 semaines 2 8 C SUBSTRAT jusqu la date de p remption 2 8 C 1 semaine 15 30 C l obscurit DILUANT jusqu la date de p remption 2 8 C TAMPON DE LAVAGE pr t l emploi 2 semaines 2 8 C 5 jours 15 30 C SOLUTION D ARRET jusqu la date de p remption 2 8 C Ref 91078 BRD Fran ais 4 10 6 PRECAUTIONS D UTILISATION POUR USAGE DIAGNOSTIQUE IN VITRO ATTENTION Ce coffret contient des mat riaux d origine humaine Bien que tous les produits d origine humaine aient subi un contr le de d pistage n gatif concernant les anticorps anti VIH 1 et 2 les anticorps anti VHC et l Ag HBs en utilisant des m thodes approuv es par la FDA ils doivent cependant tre manipul s comme des produits potentiellement infectieux PRECAUTIONS DE SECURITE 1
9. gues requises par la Directive Europ enne sont disponibles aupr s de votre repr sentant Bio Rad local Los otros idiomas que se requiren para la conformidad de la Directiva Europea puede ser obtenida en su oficina local Biorad Die anderen Sprachen die in bereinstimmung mit der europ ischen IVD Direktive ben tigt werden erhalten Sie ber Ihre lokale Bio Rad Niederlassung Le altre lingue che sono richieste in conformit con le Direttive Europee possono essere ottenute dal locale agente Bio Rad As restantes l nguas obrigat rias em conformidade com a Directiva Europeia podem ser obtidas atrav s da subsidi ria Bio Rad mais pr xima de si vriga spr k som kr vs i enlighet med EG direktivet kan erh llas fr n din lokala Bio Rad representant De vrige sprog som kr ves i henhold til EU direktiv kan f s ved henvendelse til den lokale Bio Rad leverand r O UTTOAOITTEG YVAWOOEG TTOU qrTroITo vTqQI arr Tv Eupwrra k O ny a iat evTai OTOV TOTIK AVTITP OWTO Bio Rad Bio Rad 3 boulevard Raymond Poincar 05 2012 92430 Marnes la Coquette France Tel 33 0 1 47 95 60 00 Fax 33 0 1 47 41 91 33 Ref 91078 BRD Fran ais 10 10
10. lu dans les puits on conseille d effectuer l analyse en double Couvrir les puits avec la feuille de protection pour viter l vaporation Incuber pendant 45 minutes 37 C Proc der 4 lavages temps de trempage de 30 secondes avec un volume minimum de 300 ul 75 ul Ajouter 100 ul de conjugu antig ne anticorps monoclonaux marqu s la peroxydase dans chaque puits sauf le blanc Couvrir les puits avec la feuille de protection Incuber pendant 45 minutes 37 C Laver la plaque encore 4 fois comme mentionn pr c demment Distribuer 100 ul de substrat dans chaque puits Incuber 15 minutes temp rature ambiante Ajouter 100 ul de solution d arr t Lire la densit optique 450 nm ou 450 620 nm dans les 30 minutes Ref 91078 BRD Fran ais 6 10 9 RESUME DU MODE OPERATOIRE Platelia VZV IgG 1 tape Distribuer 100 ul de s rums dilu s et contr les dans les puits Incuber pendant 45 minutes 37 C Laver 4 fois avec la solution tamponn e de lavage dilu e gne tape Distribuer 100 ul de conjugu dans tous les puits sauf le blanc Incuber pendant 45 minutes 37 C Laver 4 fois avec la solution tamponn e de lavage dilu e gs tape Distribuer 100 ul du substrat dans tous les puits Incuber pendant 15 min T A 4eme tape Distribuer 100 ul de solution d arr t dans tous les puits Lire la densit optique 450 nm ou 450 620 nm dans les 30 minutes 10 CRITERES DE VALIDATI
11. oppement de la couleur insuffisante Temps ou temp rature d incubation incorrects V rifier le contr le de la temp rature et du temps d incubation Suivre attentivement les instructions d utilisation Volume de substrat ajout incorrect Contr ler le fonctionnement de la pipette 17 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1 E H Wasmuth and W J Miller J Med Virology 32 189 1990 2 M L Landry S D Cohen D Mayo C Fong W Andiman J Clin Microbiology 25 832 1987 3 P Larussa S Steinberg et al J Clin Microbiology 25 2059 1987 Ref 91078 BRD Fran ais 9 10 Marquage CE Directive europ enne 98 79 CE relative aux dispositifs m dicaux de diagnostic in vitro Marcado CE Directiva europea 98 79 CE sobre productos sanitarios para diagn stico in vitro Marchiatura CE Direttiva europea 98 79 CE relativa ai dispositivi medico diagnostici in vitro M M Pour diagnostic in vitro Para diagn stico in vitro Per uso diagnostico in vitro lt Fabricant Fabricante Produttore Limites de temp ratures de stockage Temperatura limite Limiti di temperatura di conservazione Consulter le mode d emploi Consulte la instrucci n para el uso Consultare le istruzioni per uso JSE The other languages which are required in conformity to the European Directive can be obtained from your local Bio Rad agent Les autres lan
12. rs plus tard devrait tre contr l en parall le pour valuer l volution du titre des anticorps IgG Le diagnostic ne doit pas se fonder seulement sur les r sultats biologiques mais doit aussi prendre en compte l ensemble des donn es cliniques 13 SPECIFICITE ANALYTIQUE La pr sence des anticorps IgG vers des virus comme l Epstein Barr Herpes Simplex Oreillons Rougeole ne cause pas d interf rence avec le test 14 SENSIBILITE ET SPECIFICITE DIAGNOSTIQUES Les performance diagnostiques de Platelia VZV IgG ont t tudi es sur une population de 47 chantillons en comparaison avec une autre m thode immunoenzymatique Tous les chantillons discordants ont t analys s avec une m thode d immunofluorescence comme r f rence Les r sultats sont report s dans le tableau ci dessous REFERENCE Platelia VZV IgG E 0 3 15 Le kit Platelia VZV IgG pr sente une sensibilit de 90 63 et une sp cificit de 100 15 PRECISION Reproductibilit intra essai avec 3 lots diff rents Cut off n 21 Lot 029 Lot 030 Lot 031 D O 0 451 0 457 0 362 CV 10 7 5 Reproductibilit inter essai et inter lots INDEX Echantillons Lot 029 Lot 030 Lot 031 Moyenne CV 1 0 3 0 4 0 3 0 3 23 2 1 5 1 0 1 7 1 7 10 3 3 0 3 0 3 3 3 1 5 Ref 91078 BRD Fran ais 8 10 16 EXPERTISE DES CAUSES D ERREUR PROBLEME CAUSES POSSIBL
13. ues p riodes dans les ganglions sensoriels spinaux la suite de l infection primaire Cette infection se manifeste par des ruptions cutan es douloureuses le long des nerfs On utilise g n ralement les techniques s rologiques pour d terminer l tat immunitaire des sujets risque surtout les sujets immunod prim s et pour le diagnostic pr ou post natal des sujets infect s par le VZV 3 PRINCIPE DU TEST Le test repose sur le principe de l ELISA indirecte L antig ne constitu du virus VZV partiellement purifi et inactiv est li la phase solide L incubation du complexe antig ne anticorps avec des anticorps monoclonaux conjugu s la peroxydase permet de s lectionner les anticorps sp cifiques de l antig ne L addition du substrat permet la r v lation On arr te la r action enzymatique par l addition d une solution d acide sulfurique La couleur obtenue est proportionnelle la quantit d anticorps sp cifiques dans le s rum et elle peut tre lue avec un lecteur de microplaques 4 COMPOSITION DE LA TROUSSE ET PREPARATION DES REACTIFS Le kit permet de r aliser 48 tests Laisser les r actifs revenir temp rature ambiante avant utilisation MT PLATE MICROPLAQUE 3 x 2 barrettes sensibilis es avec le virus de la Varicelle Utilisation Couper le sachet du c t oppos au code ZG suivi par le num ro du lot qui sert pour son identification sortir le support et les barrettes n cessaires
14. une d contamination efficace En cas de versement accidentel de mat riaux potentiellement infectieux essuyer imm diatement avec du papier absorbant et nettoyer le plan de travail avec par exemple de l hypochlorure de sodium 1 avant de continuer le test En pr sence d un acide veiller bien essuyer le plan de travail avant d utiliser de l hypochlorure de sodium Tout mat riel notamment les gants souill par d ventuelles claboussures doit tre consid r comme potentiellement infectieux et limin selon la r glementation en vigueur PRECAUTIONS ANALYTIQUES 1 Laisser les r actifs et les chantillons revenir temp rature ambiante 18 30 C avant utilisati on Imm diatement apr s utilisation conserver les r actifs la temp rature de conservation recommand e II est tres important contr ler la temp rature d incubation des microplaques Le thermostat ne doit pas descendre au dessous de 35C ni au dessus de 39C Laisser le sachet contenant les barrettes revenir temp rature ambiante pendant 30 minutes avant de l ouvrir Ne pas utiliser les r actifs au del de la date de p remption Eviter toute contamination microbienne des r actifs les r sultats pourraient en tre affect s Ne pas modifier le mode op ratoire indiqu ni remplacer les r actifs par d autres provenant de lots ou de fournisseurs diff rents moins que cela ne soit sp cifi sur la notice d utilisation Se reporter au
15. vement le manuel d utilisation des instruments utilis s en particulier les chapitres concernant L installation et les pr cautions sp cifiques Le principe les instructions les pr cautions et risques d utilisation Les sp cifications du fabricant et les performances de l instrument La maintenance 7 ECHANTILLONS Les s rums frais ou d congel s peuvent tre utilis s Les chantillons frais peuvent tre stock s 2 8 C pendant 4 jours Pour un stockage plus long congeler les s rums 20 C Il ne faut pas les d congeler et recongeler plus de 3 fois Les s rums d congel s doivent tre bien agit s avant l usage L inactivation chaleur peut causer des r sultats erron s Les chantillons qui pr sentent une contamination microbienne peuvent fausser les r sultats Ceux qui sont fortement h molys s lip miques ict riques ou contamin s ne doivent pas tre utilis s Ne pas utiliser de plasma humain 8 MODE OPERATOIRE Pr parer le nombre n cessaire de barrettes Pr parer la solution tamponn e de lavage Diluer la solution de lavage concentr e au 1 10 par exemple 100 ml 900 ml d eau distill e Diluer les chantillons au 1 101 10ul de s rum 1 ml de diluant Pr voir un puit libre pour le calcul de la valeur de blanc du substrat Distribuer 100 ul de contr les non dilu s 1 contr le n gatif 2 cut off et 1 contr le positif Distribuer 100 ul de chaque chantillon di
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