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1. 1 tiqueter cing tubes MGIT 7 mL pour chaque isolat tester tiqueter un tube TC t moin de croissance un tube STR un tube INH un tube RIF et un tube EMB Placer les tubes dans l ordre indiqu dans un support de module AST de taille appropri e se reporter au manuel d utilisation de l instrument BACTEC MGIT 2 Ajouter st rilement 0 8 mL de suppl ment BACTEC MGIT SIRE chaque tube REMARQUE Il importe d utiliser le suppl ment fourni avec la trousse 3 l aide d une micropipette pipeter st rilement 100 uL de la solution m re de MGIT STR 83 ug mL dans le tube MGIT convenablement tiquet Pipeter st rilement 100 uL de la solution m re de MGIT INH 8 3 pg mL dans le tube MGIT convenablement tiquet Pipeter st rilement 100 uL de la solution m re de MGIT RIF 83 ug mL dans le tube MGIT convenablement tiquet Pipeter st rilement 100 pL de la solution m re de MGIT EMB 415 ug mL dans le tube MGIT convenablement tiquet Il importe d ajouter l antibiotique qui convient dans le tube correspondant N ajouter aucun antibiotique dans le tube MGIT TC Concentration Volume ajout aux Concentration Antibiotique d antibiotique apr s tubes MGIT pour le finale dans reconstitution test les tubes MGIT MGIT STR 83 pug mL 100 uL 1 0 ug mL MGIT INH 8 3 ug mL 100 uL 0 1 ug mL MGIT RIF 83 ug mL 100 uL 1 0 pg mL MGIT EMB 415 pg mL 100 uL 5 0 ug mL Ces antibiotiques doivent tre reconstitu s avec 4 mL d e
2. Setzt voraus da alle Isolate die im MGIT bei der kritischen Konzentration empfindlich sind im MGIT bei der hohen Konzentration ebenfalls empfindlich sind Alle Isolate mit diskordanten MGIT Ergebnissen wurden in zwei unabh ngigen Labors anhand der Proportionsmethode getestet Die f nf diskordanten R 960 36 E Proportionsmethode STR resistenten Isolate waren in beiden Labors empfindlich Von den vier diskordanten E 960 R Proportionsmethode STR empfindlichen Isolaten waren drei in beiden Labors empfindlich und eines war in beiden Labors resistent Das diskordante E 960 R Proportionsmethode INH empfindliche Isolat war in beiden Labors resistent LIEFERBARE PRODUKTE Best Nr Beschreibung 245123 BACTEC MGIT 960 SIRE Testkit Karton mit 4 Fl schchen lyophilisiertem Arzneimittel und 8 Fl schchen SIRE Supplement 245125 BACTEC MGIT 960 STR 4 0 Testkit Karton mit 1 Fl schchen Iyophilisiertem Arzneimittel und 2 Fl schchen SIRE Supplement 245157 BACTEC MGIT 960 IR Testkit Karton mit 2 Fl schchen Iyophilisiertem Arzneimittel und 4 Fl schchen SIRE Supplement 245126 BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Testkit Karton mit 1 Fl schchen lyophilisiertem Arzneimittel und 2 Fl schchen SIRE Supplement LITERATUR Siehe den Abschnitt References im englischen Text BD Kit BACTEC MGIT 960 SIRE Per il test di sensibilit antimicobatterica di Mycobacterium tuberculosis Italiano USO PREVISTO Il kit BACTEC MGIT 960 SIRE
3. D s r ception conserver les flacons d antibiotique lyophilis une temp rature comprise entre 2 8 C Une fois reconstitu es les solutions d antibiotique peuvent tre congel es et conserv es 20 C ou une temp rature inf rieure jusqu 6 mois sans d passer la date de p remption d origine Une fois d congel es les solutions doivent tre utilis es imm diatement Jeter les portions non utilis es 13 Supplement BACTEC MGIT SIRE D s r ception conserver l obscurit une temp rature comprise entre 2 et 8 C Ne pas congeler ni surchauffer Ouvrir et utiliser avant la date de p remption Maintenir l abri de la lumi re Mode d emploi Reconstituer chaque flacon de streptomycine lyophilis e de la trousse BACTEC MGIT 960 SIRE avec 4 mL d eau distill e d sionis e st rile afin d obtenir une solution m re 83 ug mL Reconstituer chaque flacon d isoniazide lyophilis de la trousse BACTEC MGIT 960 SIRE avec 4 mL d eau distill e d sionis e st rile afin d obtenir une solution m re 8 3 ug mL Reconstituer chaque flacon de rifampicine lyophilis e de la trousse BACTEC MGIT 960 SIRE avec 4 mL d eau distill e d sionis e st rile afin d obtenir une solution m re 83 ug mL Reconstituer chaque flacon d thambutol lyophilis de la trousse BACTEC MGIT 960 SIRE avec 4 mL d eau distill e d sionis e st rile afin d obtenir une solution m re 415 pg mL REMARQUE Les antibiotiques suivants so
4. gilt als Tag 0 27 2 Zur Vorbereitung des Testinokulums sollte ein positives MGIT 7 mL R hrchen vom ersten Tag nach dem Positivwerden im BACTEC MGIT Ger t Tag 1 bis einschlieBlich zum f nften Tag Tag 5 verwendet werden Von einem R hrchen das l nger als f nf Tage positiv war sollte eine Subkultur in einem neuen MGIT 7 mL R hrchen mit BACTEC MGIT Wachstumssupplement angelegt werden Die Subkultur sollte dann im BACTEC MGIT Ger t bis zum Positivwerden getestet und innerhalb von ein bis f nf Tagen nach Auftreten einer Positivit t verwendet werden Siehe Vorbereitung eines MGIT Inokulumr hrchens aus fl ssigen Medien 3 Wenn das R hrchen an Tag 1 oder Tag 2 positiv ist die MGIT Bouillonsuspension zur Inokulation verwenden Gut durchmischen Mit dem Inokulationsverfahren f r die Empfindlichkeitspr fung fortfahren 4 Wenn das R hrchen an Tag 3 4 oder 5 positiv wird den Inhalt gut mischen und 1 mL der positiven Bouillon in 4 mL steriler Kochsalzl sung verd nnen 1 5 Verd nnung Den R hrcheninhalt gut durchmischen Die verd nnte Suspension zur Inokulation verwenden Mit dem Inokulationsverfahren f r die Empfindlichkeitspr fung fortfahren Vorbereitung eines MGIT Inokulumr hrchens aus fl ssigen Medien 1 Den R hrcheninhalt durch Umdrehen bzw mit dem Vortex Mischer mischen 2 Eine 1 100 Verd nnung herstellen indem Sie 0 1 mL der Kultur zu 10 mL BBL Middlebrook 7H9 Bouillon bzw BBL MGIT Bouillon z
5. importante incluir o m todo de teste nome e concentra o do f rmaco se o resultado obtido com o sistema BACTEC MGIT ou com um m todo alternativo O especialista em Doen as Infecciosas e ou Pulmonares a cargo do controlo da TB deve ser consultado relativamente ao regime e posologias terap uticas adequadas No caso de serem obtidos resultados de resist ncia inesperados dever confirmar se a identifica o do isolado testado como M tuberculosis Certifique se de que foi apenas utilizada uma cultura pura exclua a presen a de micobact rias mistas etc A mono resist ncia a etambutol rara e deve ser confirmada28 Relat rio de resultados de concentra o cr tica no BACTEC MGIT 960 SIRE F rmaco Resultado Relat rio Recomendado Ac o concentra o no Sistema MGIT Sens vel O isolado foi testado com o Nenhuma ac o STR 1 0 pg mL SIRE Sistema BACTEC MGIT f rmaco concentrac o e o resultado sens vel INH 0 1 g mL O isolado foi testado com o Recomenda se Resistente Sistema BACTEC MGIT o teste ocm uma SIR f rmaco concentrac o eo concentra o RIF 1 0 ug mL resultado resistente mais elevada Seguem se os resultados do STR e ou INH teste do f rmaco a uma concentra o mais elevada se tiver sido testada EMB 5 0 ug mL Se for resistente a mais do Recomenda se o Resistente que etambutol EMB O teste de EMB E isolado foi testado com o com uma Sistema BACTEC MGIT concent
6. trois isolats ont donn lieu un r sultat de r sistance sur les deux sites et un isolat un r sultat de sensibilit sur les deux sites Pour les trois autres isolats un r sultat de r sistance a t obtenu sur un site et un r sultat de sensibilit sur l autre site Un r sultat de sensibilit t obtenu sur les deux sites pour l isolat discordant pour la sensibilit STR S 960 R MOP Des r sultats de sensibilit ont t obtenus sur les deux sites pour les deux isolats discordants pour la r sistance INH R 960 S MOP Un r sultat de sensibilit t obtenu sur les deux sites pour l isolat discordant pour la sensibilit INH S 960 R MOP Un r sultat de r sistance a t obtenu sur les deux sites pour l isolat discordant pour la r sistance RIF R 960 S MOP Des r sultats de sensibilit ont t obtenus sur les deux sites pour les trois isolats discordants pour la r sistance EMB R 960 S MOP Parmi les trois isolats discordants pour la sensibilit EMB S 960 R MOP deux isolats ont donn lieu un r sultat de sensibilit sur les deux sites et le troisi me isolat un r sultat de r sistance sur un site et un r sultat de sensibilit sur l autre site 22 Tableau 3 R sultat des isolats cliniques BACTEC MGIT 960 AST compar la m thode des proportions partir de cultures sur milieu solide M thode des Syst me MGIT 960 AST proportions ANTI Concen Concen R su
7. 41 5 Inoculo delle provette contenenti farmaco Pipettare in asepsi 0 5 mL di sospensione di batteri vedi PREPARAZIONE DELL INOCULO in ognuna delle altre QUATTRO provette di farmaci STR INH RIF EMB 6 Chiudere bene le provette con il tappo Mescolare accuratamente capovolgendo con attenzione le provette tre o quattro volte 7 Introdurre il set AST nello strumento BACTEC MGIT usando la funzione di ingresso del set AST vedi il Manuale d uso dello strumento BACTEC MGIT Accertarsi che la disposizione delle provette nel carrello per il set AST sia conforme alle definizioni del carrello selezionate all attivazione della funzione di ingresso del set AST 8 Seminare 0 1 mL di sospensione di batteri su una piastra di agar soia Trypticase con 5 di sangue di montone TSA II Inserire in una busta di plastica e incubare a 35 37 C 9 Controllare la piastra di agar sangue dopo 48 h per verificare l eventuale presenza di contaminazione batterica Se non si nota alcuna crescita sulla piastra continuare il test AST Se si notano segni di crescita sulla piastra eliminare il set AST vedi il Manuale d uso dello strumento BACTEC MGIT e ripetere il test con una coltura pura Procedura di inoculo per il test di sensibilit con i kit BACTEC MGIT 960 STR 4 0 e INH 0 4 In caso di resistenza alla concentrazione critica si raccomanda di eseguire un test del profilo di sensibilit per valutare come minimo la concentrazione elevata de
8. MGIT 960 susceptibility test kits are used with the BACTEC MGIT 960 and BACTEC MGIT 320 Systems SUMMARY AND EXPLANATION Antimycobacterial susceptibility testing is valuable in the proper treatment of patients with tuberculosis The treatment of tuberculosis is commonly through a multiple drug regimen that includes the antimycobacterial drugs streptomycin isoniazid rifampin and ethambutol It is important that the antimycobacterial drugs prescribed show appropriate activity against Mycobacterium tuberculosis i e susceptibility of the isolate to the drug Multi drug resistant Mycobacterium tuberculosis MDR TB has recently become a serious public health problem Resistance to any of the primary drugs streptomycin STR isoniazid INH rifampin RIF and ethambutol EMB makes the disease more difficult and expensive to treat The rapid detection of these resistant isolates is critical to effective patient management Two methods have been widely used for antimycobacterial susceptibility testing The first method known as the Method of Proportion 2 uses Middlebrook and Cohn 7H10 Agar It compares colony counts on drug containing and drug free media Resistance to a drug is detected when 1 or more of the bacterial population is resistant to the drug concentration under test Results are generally available after 21 days of incubation The second method known as the BACTEC 460TB radiometric susceptibility method 3 gener
9. o de Sens vel de Resistente Concordantes Concordantes Concord ncia Concord ncia 95 CI 95 CI STR 10 0 pg mL 78 21 4 0 ug mL 73 94 17 81 86 98 58 95 INH 1 0 pg mL 68 31 0 4 ug mL 68 100 30 97 95 100 83 100 Assume um resultado de S para concentrac o elevada do f rmaco MGIT para todos os isolados com resultado de S para concentra o baixa do f rmaco MGIT Todos os isolados com resultados MGIT discordantes foram testados com MOP em dois locais independentes Os cinco isolados resistentes a STR discordantes R 960 S MOP apresentaram resultados de sens vel nos dois locais Dos quatro isolados sens veis a STR discordantes S 960 R MOP tr s apresentaram resultados de sens vel nos dois locais e um apresentou resultados de resistente nos dois locais O isolado sens vel a INH discordante S 960 R MOP apresentou resultados de resistente nos dois locais APRESENTA O N de Cat Descri o 245123 BACTEC MGIT 960 SIRE Kit caixa de 4 frascos de f rmaco liofilizado e 8 SIRE Supplements 245125 BACTEC MGIT 960 STR 4 0 Kit caixa de 1 frasco de f rmaco liofilizado e 2 SIRE Supplements 245157 BACTEC MGIT 960 IR Kit caixa de 2 frascos de f rmaco liofilizado e 4 SIRE Supplements 245126 BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Kit caixa de 1 frasco de f rmaco liofilizado e 2 SIRE Supplements BIBLIOGRAFIA Consulte References no texto em Ingl s Somente para uso diagn stico in vitro Importado e Distr
10. una procedura qualitativa rapida per analizzare la sensibilit di Mycobacterium tuberculosis da coltura a streptomicina STR isoniazide INH rifampicina RIF e etambutolo EMB Il kit BACTEC MGIT 960 STR 4 0 Kit e il kit BACTEC MGIT 960 INH 0 4 trovano impiego per il test a concentrazioni pi elevate di farmaco kit per test di sensibilit BACTEC MGIT 960 vengono usati con i sistemi BACTEC MGIT 960 e BACTEC MGIT 320 SOMMARIO E SPIEGAZIONE DEL METODO Il test di sensibilit antimicobatterica importante per stabilire la terapia corretta dei pazienti affetti da tubercolosi La terapia della tubercolosi si basa generalmente su un regime a piu farmaci a base di antimicobatterici come streptomicina isoniazide rifampicina e etambutolo importante che i farmaci antimicobatterici prescritti manifestino attivit specifica contro Mycobacterium tuberculosis ossia che il ceppo isolato sia sensibile al farmaco L incidenza di ceppi multiresistenti di Mycobacterium tuberculosis MDR TB diventata recentemente un serio problema di sanit pubblica La possibile resistenza a uno dei quattro farmaci primari streptomicina STR isoniazide INH rifampicina RIF ed etambutolo EMB rende la malattia ancora pi difficile e costosa da curare pertanto la rilevazione rapida di questi ceppi essenziale ai fini di un trattamento efficace dei pazienti metodi piu comunemente usati per il test di sensibilit agli agenti antimicobatteri
11. 100 per EMB La riproducibilit complessiva per ciascun farmaco alla concentrazione elevata del 9696 per STR 4 0 e del 10096 per INH 0 4 Test con pannello CDC di confronto Le prestazioni del test di sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE sono state valutate utilizzando un pannello con isolati di confronto ottenuto dai Centers for Disease Control and Prevention CDC GA USA Il pannello era costituito da trenta isolati di M tuberculosis con pattern di sensibilit accertati con il metodo delle proporzioni II pannello stato testato due volte con il test di sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE ed entrambi i risultati sono stati concordi I risultati dei test BACTEC MGIT 960 SIRE sono stati confrontati con i risultati attesi dei CDC La concordanza complessiva con i risultati attesi dei CDC per ciascun farmaco alla concentrazione critica amp del 93 per STR 100 per INH 100 per RIF e 100 per EMB La concordanza complessiva con i risultati attesi del CDC per ciascun farmaco alla concentrazione elevata del 100 per STR 4 0 e del 100 per INH 0 4 Valutazione clinica Il test di sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE stato valutato presso quattro centri in aree geografiche diverse tra cui centri regionali di riferimento laboratori di ospedali universitari e un centro all estero Il test di sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE stato confrontato con il test di sensibilit eseguito con il metodo delle proporzioni 2 farmaci inclusi nella v
12. 16 x 100 mm R hrchen in dessen rundem Boden eine fluoreszierende Verbindung in Silikon eingebettet ist Die fluoreszierende Verbindung spricht auf das Vorliegen von in der Bouillon aufgel stem Sauerstoff an Anf nglich ist nur wenig Fluoreszenz nachweisbar da der aufgel ste Sauerstoff die Emissionen der Verbindung absorbiert Sp ter nehmen die aktiv wachsenden und respirierenden Mikroorganismen den Sauerstoff auf und erm glichen die Fluoreszenz der Verbindung Das BACTEC MGIT 960 SIRE Testkit ist ein qualitativer Test der 4 13 Tage dauert Der Test basiert auf dem Vergleich des Wachstums eines M tuberculosis Isolats in einem arzneimittelhaltigen gegen ber einem arzneimittelfreien R hrchen Wachstumskontrolle Das BACTEC MGIT Ger t kontrolliert die R hrchen auf zunehmende Fluoreszenz Die Empfindlichkeit bzw Resistenz wird vom Ger t anhand einer Fluoreszenzanalyse im arzneimittelhaltigen R hrchen im Vergleich zur Fluoreszenz im Wachstumskontrollr hrchen bestimmt Das BACTEC MGIT Ger t interpretiert diese Ergebnisse automatisch und gibt das Testergebnis empfindlich oder resistent aus 25 REAGENZIEN Das BACTEC MGIT 960 SIRE Testkit enth lt jeweils ein Fl schchen lyophilisiertes Streptomycin Isoniazid Rifampin und Ethambutol sowie acht Fl schchen SIRE Supplement Ungef hre Zusammensetzung pro Fl schchen lyophilisiertes Arzneimittel Streptomycin esee Ungef hre Zusammensetzung pro F IERT DEE
13. 4 0 und 100 f r INH 0 4 Klinische Beurteilung Der BACTEC MGIT 960 SIRE Empfindlichkeitstest wurde in vier klinischen Labors an verschiedenen geographischen Standorten beurteilt Bei den Labors handelte es sich um regionale Referenzzentren und Labors an Universit tskliniken einschlie lich eines Labors im Ausland Der BACTEC MGIT 960 SIRE Empfindlichkeitstest wurde mit der Proportionsmethode verglichen Die erste Beurteilung erfolgte mit den Arzneimitteln Streptomycin Isoniazid und Rifampin F r das Arzneimittel Ethambutol wurde eine separate Beurteilung durchgef hrt Reproduzierbarkeitstests Die Beurteilung der Reproduzierbarkeit des BACTEC MGIT 960 SIRE Tests erfolgte in den klinischen Labors mit einem Panel von zehn qualifizierten Isolaten einschlie lich mehrerer Isolate die gegen jedes der Arzneimittel resistent waren Die Ergebnisse des BACTEC MGIT 960 SIRE Tests wurden mit den erwarteten Ergebnissen verglichen Die Gesamtreproduzierbarkeit f r jedes Arzneimittel bei der kritischen Konzentration betrug 98 9 f r STR 99 7 f r INH 99 2 f r RIF und 97 5 f r EMB Die Reproduzierbarkeit in den einzelnen Labors lag zwischen 89 9 und 100 f r alle Arzneimittel bei der kritischen Konzentration Die Gesamtreproduzierbarkeit f r jedes Arzneimittel bei der hohen Konzentration betrug 99 7 f r STR 4 0 und 95 6 f r INH 0 4 Die Reproduzierbarkeit in den einzelnen Labors lag zwischen 92 2 und 100 f r alle Arzneimittel
14. Este isolado com um resultado de resist ncia a 0 1 ug mL e um resultado sens vel a 0 4 ug mL indica resist ncia de baixo n vel a isoniazida Resistente O isolado foi testado com o Nenhuma ac o Sistema BACTEC MGIT isoniazida 0 4 ug mL e o resultado resistente Erro X Nenhum relat rio Repita o teste LIMITA ES DO PROCEDIMENTO O teste de sensibilidade no sistema BACTEC MGIT n o interpreta o grau de sensibilidade do isolado que est a ser testado Os resultados s o reportados como S sens vel ou R resistente para o f rmaco e concentra o testados O teste BACTEC MGIT 960 SIRE foi desenvolvido com concentra es cr ticas para estreptomicina isoniazida rifampicina e etambutol que s o ligeiramente inferiores s concentra es cr ticas utilizadas no MOP para evitar uma falsa sensibilidade O teste das concentra es mais elevadas conforme recomendado ir aumentar a capacidade para detectar isolados com resist ncia de baixo n vel Os testes de sensibilidade no sistema BACTEC MGIT s podem ser efectuados utilizando um instrumento BACTEC MGIT Os Conjuntos AST n o podem ser lidos manualmente Utilizar exclusivamente culturas puras de M tuberculosis Culturas contaminadas ou contendo estirpes m ltiplas de micobact rias podem dar origem a resultados errados e n o devem ser testadas N o se recomendam testes directos a partir de amostras cl nicas Dever permitir se que suspens es feitas
15. Las preparaciones de in culos a partir de medios s lidos deben compararse visualmente con un patr n de turbidez 0 5 de McFarland en caso contrario pueden obtenerse resultados inexactos o puede producirse un error del conjunto de AST Si no se utiliza la diluci n de 1 5 de la suspensi n de microorganismos en los casos en que est indicado para inocular los tubos que contienen el antibi tico pueden obtenerse resultados inexactos Si no se utiliza una diluci n de 1 100 de la suspensi n de microorganismos para inocular el tubo de control de crecimiento pueden obtenerse resultados inexactos o puede producirse un error del conjunto de AST Si no se reconstituyen los antibi ticos con los vol menes apropiados de agua est ril destilada desionizada pueden obtenerse resultados inexactos Es importante mezclar bien los tubos inoculados En caso contrario pueden obtenerse resultados falsos de resistencia Si no se colocan los tubos del conjunto de AST en el transportador en el orden correcto pueden obtenerse resultados inexactos Si no se selecciona la definici n de antibi ticos del transportador del conjunto de AST apropiada pueden obtenerse resultados no v lidos o inexactos Si no se carga correctamente el conjunto de AST en el instrumento se originar una situaci n de identificaci n an nima que debe resolverse en el plazo de ocho horas Si la situaci n no se resuelve en ese per odo de tiempo se debe desechar el conjunto
16. MGIT STR da 83 pg mL nella provetta MGIT che riporta l etichetta appropriata Con una micropipetta dispensare in asepsi 100 uL di soluzione MGIT INH da 8 3 ug mL nella provetta MGIT che riporta l etichetta appropriata Con una micropipetta dispensare in asepsi 100 uL di soluzione MGIT RIF da 83 pg mL nella provetta MGIT che riporta l etichetta appropriata Con una micropipetta dispensare in asepsi 100 uL di soluzione MGIT EMB da 415 ug mL nella provetta MGIT che riporta l etichetta appropriata importante dispensare il farmaco corretto nella provetta corrispondente Nella provetta MGIT GC non vanno aggiunti antibiotici Concentrazione del Volume dispensato Concentrazione finale Farmaco farmaco dopo la nelle provette MGIT nelle provette MGIT ricostituzione per il test MGIT STR 83 g mL 100 uL 1 0 ug mL MGIT INH 8 3 ug mL 100 uL 0 1 ug mL MGIT RIF 83 g mL 100 uL 1 0 ug mL MGIT EMB 415 pg mL 100 uL 5 0 ug mL Per ottenere le concentrazioni indicate ricostituire i farmaci con 4 mL di acqua sterile deionizzata 4 Preparazione ed inoculo della provetta del Controllo di crescita Per preparare la sospensione 1 100 del Controllo di crescita pipettare in asepsi 0 1 mL di sospensione di batteri vedi PREPARAZIONE DELL INOCULO in 10 mL di soluzione fisiologica sterile Mescolare accuratamente la sospensione del Controllo di crescita Inoculare 0 5 mL della sospensione 1 100 del Controllo di crescita in una provetta MGIT con etichetta GC
17. Resistenz nachgewiesen wird sollte ein Empfindlichkeitsprofil erstellt werden bei dem zumindest die hohe Konzentration des Arzneimittels gepr ft wird gegen das der Organismus urspr nglich resistent war Isolatquelle Das f r diesen Test verwendete Isolat mu nach den Anleitungen unter VORBEREITUNG DES INOKULUMS zubereitet werden Zur Zubereitung eines Inokulumr hrchens k nnen 0 5 mL des Isolats aus dem arzneimittelfreien Wachstumskontrollr hrchen des zuvor getesteten AST Ansatzes in ein neues MGIT 7 mL R hrchen mit BACTEC MGIT Wachstumssupplement berimpft werden Wenn das Inokulumr hrchen im Ger t positiv ist mit den Anleitungen unter VORBEREITUNG DES INOKULUMS Vorbereitung aus einem positiven MGIT R hrchen fortfahren 1 Eine ausreichende Anzahl von MGIT 7 mL R hrchen f r das Testisolat beschriften so daB f r jedes Antibiotikum ein MGIT WK R hrchen und ein MGIT Arzneimittelr hrchen zur Verf gung steht Die R hrchen in der richtigen Anordnung in einen AST R hrchenst nder geeigneter Gr e stellen siehe Benutzerhandbuch des BACTEC MGIT Ger ts 2 Jedes R hrchen aseptisch mit 0 8 mL BACTEC MGIT SIRE Supplement beschicken HINWEIS Die Verwendung der mit dem Kit gelieferten Supplement ist wichtig 29 3 Mit einer Mikropipette 100 uL der Arzneimittel L sung aseptisch in das entsprechend gekennzeichnete MGIT R hrchen pipettieren Die Zugabe des korrekten Arzneimittels zum entsprechenden R hrchen ist wichti
18. Tous les isolats pr sentant des r sultats MGIT discordants ont t test s par la m thode des proportions par deux centres ind pendants Des r sultats de sensibilit ont t obtenus sur les deux sites pour les quatre isolats discordants pour la r sistance STR R 960 S MOP Parmi les deux isolats discordants pour la sensibilit STR S 960 R MOP un isolat a donn lieu un r sultat de sensibilit sur les deux sites et l autre isolat un r sultat de r sistance sur les deux sites Parmi les deux isolats discordants pour la sensibilit INH S 960 R MOP un isolat a donn lieu un r sultat de sensibilit sur les deux sites et l autre isolat un r sultat de r sistance sur les deux sites 23 Tableau 5 R sultat des isolats cliniques BACTEC MGIT 960 AST compar la m thode des proportions partir de cultures sur milieu solide M thode des Syst me MGIT 960 AST proportions ANTI Concen Concen R sultats de sensibilit R sultats de r sistance BIOTI tration S R tration Nb Nb QUE concordances concordance concordances concordance IC 95 IC 95 STR 10 0 ug mL 78 21 4 0 pg mL 73 94 17 81 86 98 58 95 INH 1 0 g mL 68 31 0 4 ug mL 68 100 30 97 95 00 83 100 Suppose un r sultat S pour la concentration lev e de l antibiotique avec MGIT pour tous les isolats ayant un r sultat S pour la faible concentration de l antibiotique avec MGIT Tous les isolats pr se
19. a partir de meios s lidos assentem durante os per odos de tempo prescritos antes da padroniza o Prepara es de in culo feitas a partir de meios s lidos devem ser comparadas visualmente com um padr o de turva o de 0 5 de McFarland se tal n o for realizado podem obter se resultados imprecisos ou provocar se um erro de Conjunto AST A n o utiliza o de uma dilui o de 1 5 da suspens o do microrganismo quando indicado para a inocula o dos tubos contendo o f rmaco poder fornecer resultados incorrectos A incapacidade de utiliza o de uma dilui o a 1 100 da suspens o do microrganismo para inocula o do tubo de Controlo de Crescimento pode dar origem a resultados imprecisos ou a um erro do Conjunto AST A reconstitui o dos f rmacos com o volume incorrecto de gua desionizada destilada est ril poder fornecer resultados imprecisos A homogeneiza o total dos tubos inoculados importante A n o homogeneiza o adequada pode dar origem a resultados de falsa resist ncia A incapacidade de carregar os tubos do conjunto AST no Transportador do Conjunto AST na sequ ncia adequado pode dar origem a resultados imprecisos A incapacidade 57 de seleccionar a defini o adequada do f rmaco no transportador do conjunto pode dar origem a resultados inv lidos ou imprecisos A incapacidade de carregar correctamente os tubos do conjunto AST no instrumento ir dar origem a uma situac o an nima que tem que
20. appropriate identification techniques that the isolate to be tested is a pure culture of M tuberculosis Inoculum can be prepared from solid media or from a positive BACTEC MGIT 7 mL tube In addition cultures grown in liquid and on solid media can be used to prepare a seed MGIT tube which can then be used to prepare the inoculum Each of these options is described below Preparation of the Inoculum from Solid Media NOTE It is important to prepare the inoculum according to the following instructions to obtain the appropriate organism concentration for the susceptibility test 1 Add 4 mL of BBL Middlebrook 7H9 Broth or BBL MGIT broth to a 16 5 x 128 mm sterile tube with cap containing 8 10 glass beads 2 Scrape with a sterile loop as many colonies as possible from growth no more than 14 days old trying not to remove any solid medium Suspend the colonies in the Middlebrook 7H9 Broth 3 Vortex the suspension for 2 3 min to break up the larger clumps The suspension should exceed a 1 0 McFarland standard in turbidity 4 Let the suspension sit for 20 min without disturbing 5 Transfer the supernatant fluid to another 16 5 x 128 mm sterile tube with cap avoid transferring any of the sediment and let sit for another 15 min 6 Transfer the supernatant fluid it should be smooth free of any clumps to a third 16 5 x 128 mm sterile tube NOTE The organism suspension should be greater than a 0 5 McFarland Standard at thi
21. bei der hohen Konzentration Testung eines CDC Referenzpanels Die Leistung des BACTEC MGIT 960 SIRE Empfindlichkeitstests wurde anhand eines Panels von Referenzisolaten der CDC Centers for Disease Control and Prevention GA USA beurteilt Das Panel bestand aus drei ig M tuberculosis Isolaten mit bekanntem Empfindlichkeitsmuster unter Anwendung der Proportionsmethode bestimmt die in jedem klinischen Labor getestet wurden Tabelle 1 zeigt die bereinstimmung des BACTEC MGIT 960 SIRE Empfindlichkeitstests f r jedes Arzneimittel im Vergleich mit den CDC Referenzergebnissen 34 Tabelle 1 CDC Referenzpanel BACTEC MGIT 960 Testung in klinischen Labors MGIT 960 Anzahl Anzahl korrekt getestet korrekt STR 1 0 120 111 92 5 INH 0 1 120 119 99 2 RIF 1 0 120 120 100 EMB 5 0 119 111 93 3 STR 4 0 29 29 100 INH 0 4 87 82 94 3 Mit dem STR 4 0 und INH 0 4 wurden nur Isolate getestet die bei den kritischen Konzentrationen resistent waren Testung klinischer Isolate Insgesamt wurden 106 klinische Isolate von M tuberculosis mit dem BACTEC MGIT 960 SIRE Empfindlichkeitstest und der Proportionsmethode getestet Dabei wurden sowohl frische klinische Isolate als auch Stammisolate aus fl ssigen und festen Kulturmedien getestet Bei der ersten Empfindlichkeitspr fung mit Streptomycin Isoniazid und Rifampin kritische Konzentration wurden insgesamt 195 Testergebnisse erzielt Eine separate Beurteilung von Ethambutol wurde mit gefror
22. conformit del test di sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE per ciascun farmaco rispetto ai risultati attesi dei CDC Tabella 1 Pannello CDC di confronto Test BACTEC MGIT 960 presso i centri clinici MGIT 960 Numero di Numero corretta analisi corretto STR 1 0 120 111 92 5 INH 0 1 120 119 99 2 RIF 1 0 120 120 100 EMB 5 0 119 111 93 3 STR 4 0 29 29 100 INH 0 4 87 82 94 3 Solo isolati resistenti a concentrazioni cliniche testati con STR 4 0 e INH 0 4 Test di isolati clinici Con il test di sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE e con il test di sensibilit con il metodo delle proporzioni sono stati analizzati in tutto 106 isolati clinici di M tuberculosis Nell analisi sono stati inclusi isolati clinici freschi e isolati stock da terreni di coltura liquidi e solidi che hanno generato un totale di 195 risultati per il test iniziale di sensibilit eseguito per streptomicina isoniazide rifampicina concentrazione critica Una valutazione separata dell etambutolo stata eseguita sia da aliquote congelate di isolati clinici originali e di isolati stock che da isolati clinici prospettici da terreni di coltura liquidi e solidi Per il test dell etambutolo alla concentrazione critica sono stati generati complessivamente 223 risultati La Tabella 2 presenta i risultati ottenuti dai test di isolati clinici per ciascun farmaco concentrazione critica provenienti dai terreni di coltura liquidi La Tabella 3 presenta i risultati ottenuti dai
23. conservate a temperature di 20 C o inferiori per un massimo di sei mesi ma non oltre la data di scadenza originaria Una volta scongelate le soluzioni usarle immediatamente Eliminare le aliquote non utilizzate Supplemento BACTEC MGIT SIRE Alla consegna conservare il prodotto al buio a 2 8 C Non congelare o riscaldare eccessivamente Aprire ed usare prima della data di scadenza Ridurre al minimo l esposizione alla luce Istruzioni per l uso Ricostituire ogni flacone di polvere liofilizzata di streptomicina del kit BACTEC MGIT 960 SIRE con 4 mL di acqua distillata deionizzata sterile per ottenere una soluzione stock di 83 ug mL Ricostituire ogni flacone di polvere liofilizzata di isoniazide del kit BACTEC MGIT 960 SIRE con 4 mL di acqua distillata deionizzata sterile per ottenere una soluzione stock di 8 3 ug mL Ricostituire ogni flacone di polvere liofilizzata di rifampicina del kit BACTEC MGIT 960 SIRE con 4 mL di acqua distillata deionizzata sterile per ottenere una soluzione stock di 83 ug mL Ricostituire ogni flacone di polvere liofilizzata di etambutolo del kit BACTEC MGIT 960 SIRE con 4 mL di acqua distillata deionizzata sterile per ottenere una soluzione stock di 415 pg mL N B I seguenti flaconi vengono ricostituiti con un volume diverso Il mancato impiego del volume appropriato di acqua distillata sterile per ricostituire le concentrazioni pi elevate di farmaco invalida i risultati delle analisi Ricostituire o
24. contenant uniquement les concentrations critiques peut tre configur dans le syst me Diff rents modules supports de tube peuvent tre configur s en fonction des tests facultatifs de profil ex cut s se reporter au manuel d utilisation de l instrument BACTEC MGIT Contr le de qualit par l utilisateur D s r ception d un nouvel arrivage ou d un nouveau num ro de lot de flacons de trousse BACTEC MGIT 960 SIRE il est recommand de tester la souche de contr le indiqu e ci dessous La souche de contr le doit tre une culture pure pr par e conform ment aux instructions de PREPARATION DE L INOCULUM 17 Le module AST de contr le de qualit CQ doit tre pr par conform ment aux instructions de la M thode d ensemencement pour le test de sensibilit des trousses d antibiotique test es Les consid rations importantes pour la pr paration du module AST CQ sont la bonne reconstitution des antibiotiques lyophilis s et la dilution ad quate de la souche de contr le de qualit pour les tubes de t moin de croissance et d antibiotiques Il importe d ajouter l antibiotique qui convient dans le tube correspondant L utilisation d une souche de contr le de qualit spectre de sensibilit large ne r v lera pas un antibiotique incorrect pipet dans les tubes du module AST L obtention des r sultats escompt s indiqu s ci dessous dans les 4 13 jours signifie que les trousses BACTEC MGIT 960 SIRE sont pr t
25. da una crescita di terreni solidi fino a 14 giorni la procedura consigliata prevede l impiego di una diluizione 1 5 di una sospensione di batteri equivalente ad uno standard 0 5 McFarland Gli studi interni indicano che gli inoculi preparati da coltura su terreno solido sono compresi in un range tra 1 4 x 105 e 2 4 x 106 CFU mL Riproducibilit dei lotti La riproducibilit dei lotti stata valutata usando venticinque isolati di M tuberculosis per includere cinque ceppi ATCC Ciascun test BACTEC MGIT 960 SIRE alla concentrazione critica di farmaco stato eseguito in triplicato per un totale di settantacinque risultati per farmaco Ogni replicato ha rappresentato una condizione di analisi separata differenziata in base ai lotti di farmaco SIRE e supplemento SIRE utilizzati tre lotti di ciascuno Gli isolati risultati resistenti a streptomicina isoniazide e etambutolo nel test iniziale sono stati successivamente analizzati con la concentrazione di farmaco pi elevata ad eccezione dei ceppi ATCC Oltre agli isolati resistenti testati sono stati inclusi nel profilo di sensibilit del test anche due isolati sensibili a STR concentrazione critica due sensibili a INH concentrazione critica e due sensibili a EMB concentrazione critica risultati osservati sono stati confrontati con i risultati attesi La riproducibilit complessiva per ciascun farmaco alla concentrazione critica del 96 per STR 100 per INH 100 per RIF e
26. despu s del registro de positividad Los estudios internos muestran que los in culos preparados a partir de un tubo MGIT de 7 mL positivo de los d as 1 a 5 var a entre 0 8 x 10 y 3 2 x 105 UFC mL Medios s lidos el procedimiento recomendado para preparar un conjunto de AST a partir del crecimiento en medios s lidos hasta 14 d as utiliza una diluci n de 1 5 de 70 una suspensi n de microorganismos equivalente a un patr n 0 5 de McFarland Los estudios internos muestran que los in culos preparados a partir de cultivos en medios s lidos var an entre 1 4 x 105 y 2 4 x 106 UFC mL Reproducibilidad en lote La reproducibilidad en lote se evalu utilizando 25 cepas aisladas de M tuberculosis incluidas cinco cepas de ATCC Cada an lisis BACTEC MGIT 960 SIRE a la concentraci n cr tica del antibi tico se realiz por triplicado para un total de 75 resultados por antibi tico Cada duplicado representaba una situaci n de an lisis diferente diferenciada por lote de antibi tico SIRE y por suplemento SIRE utilizado tres lotes cada uno Las cepas aisladas que tuvieron un resultado de resistencia a estreptomicina isoniazida o etambutol en el an lisis inicial se analizaron de nuevo a la concentraci n alta del antibi tico salvo las cepas ATCC Adem s de las cepas aisladas resistentes analizadas en el an lisis del perfil de sensibilidad se incluyeron dos cepas aisladas sensibles a STR concentraci n cr tica dos cepas a
27. disposer d un tube MGIT TC t moin de croissance et d un tube MGIT pour chaque antibiotique test Placer les tubes dans l ordre indiqu dans le support du module AST de taille appropri e se reporter au manuel d utilisation de l instrument BACTEC MGIT 2 Ajouter st rilement 0 8 mL de suppl ment BACTEC MGIT SIRE chaque tube REMARQUE Il importe d utiliser le suppl ment fourni avec la trousse 3 l aide d une micropipette pipeter st rilement 100 uL de la solution d antibiotique dans le tube MGIT convenablement tiquet Il importe d ajouter l antibiotique qui convient dans le tube correspondant N ajouter aucun antibiotique dans le tube MGIT TC Concentration Volume ajout aux Concentration Antibiotique d antibiotique apr s tubes MGIT pour le finale dans reconstitution test les tubes MGIT MGIT STR 4 0 332 g mL 100 uL 4 0 ug mL MGIT INH 0 4 33 2 ug mL 100 uL 0 4 ug mL Ces antibiotiques doivent tre reconstitu s avec 2 mL d eau st rile d sionis e afin d obtenir les concentrations indiqu es 4 Pr paration et ensemencement du tube de t moin de croissance Pipeter st rilement 0 1 mL de la suspension de microorganismes voir PREPARATION DE L INOCULUM dans 10 mL de s rum physiologique st rile afin de pr parer une suspension de t moin de croissance au 1 100 M langer soigneusement la solution de t moin de croissance Ensemencer 0 5 mL de la suspension de t moin de croissance au 1 100 dans le tube M
28. en ambos centros De las cuatro cepas sensibles a STR con resultados discordantes S 960 R MP tres tuvieron resultados de sensibilidad en ambos centros y una tuvo resultados de resistencia en ambos centros La cepa aislada sensible a INH con resultados discordantes S 960 R MP tuvo resultados de resistencia en ambos centros DISPONIBILIDAD N cat Descripci n 245123 Kit BACTEC MGIT 960 SIRE caja de 4 frascos de antibi ticos liofilizados y 8 frascos de Suplemento SIRE 245125 Kit BACTEC MGIT 960 STR 4 0 caja de 1 frasco de antibi tico liofilizado y 2 frascos de Suplemento SIRE 245157 Kit BACTEC MGIT 960 IR caja de 2 frasco de antibi tico liofilizado y 4 frascos de Suplemento SIRE 245126 Kit BACTEC MGIT 960 INH 0 4 caja de 1 frasco de antibi tico liofilizado y 2 frascos de Suplemento SIRE REFERENCIAS V ase la secci n References en el texto ingl s 74 Figure 1 Distribution of BACTEC MGIT 960 AST Time in Protocol Figure 1 Distribution du temps dans le protocole BACTEC MGIT 960 AST Abbildung 1 Verteilung der BACTEC MGIT 960 AST Testzeiten Figura 1 Distribuzione della durata del protocollo BACTEC MGIT 960 AST Figura 1 Distribui o do per odo de tempo do BACTEC MGIT 960 AST no Protocolo Figura 1 Distribuci n del tiempo de an lisis con el sistema BACTEC MGIT 960 AST Frequency Distribution of Time in Protocol TIP 60 1200 a E E on x 100 0 3 2 2 40
29. erzielten Patientenergebnisse f r die betreffenden Arzneimittel nicht berichtet werden Den Qualit tskontrolltest f r die betreffenden Arzneimittel und Patientenisolate wiederholen Wenn der Qualit tskontrolltest erneut scheitert k nnen die Patientenergebnisse nicht berichtet werden Das Testkit nicht verwenden und eine Becton Dickinson Vertretung verst ndigen Bei der externen Beurteilung der BACTEC MGIT 960 SIRE Testkits waren die h ufigsten Ursachen f r das Scheitern von Qualit tskontrolltests kontaminierte Qualit tskontrollkulturen ber unterinokulierte AST Ans tze Arzneimittel die nicht den korrekten R hrchen zugegeben wurden und Ger tefehler ERGEBNISSE Das BACTEC MGIT Ger t kontrolliert AST Ans tze bis ein Isolat als empfindlich oder resistent beurteilt wird Sobald die Ans tze durchgetestet sind werden die Ergebnisse vom BACTEC MGIT Ger t ausgegeben siehe Benutzerhandbuch des BACTEC MGIT Ger ts Das BACTEC MGIT Ger t gibt das Ergebnis eines AST Ansatzes als Fehler X aus ohne Beurteilung der Empfindlichkeit wenn bestimmte Bedingungen auftreten die das Testergebnis beeintr chtigen k nnten Bedingungen die zu einem Fehlerergebnis X f hren k nnen sind in Kapitel 7 Fehlersuche des BACTEC MGIT Ger t Benutzerhandbuchs aufgef hrt Im Befundbericht sind folgende Angaben einzuschlieBen Testmethode Name und Konzentration des Arzneimittels und ob das Ergebnis mit dem BACTEC MGIT Ger t System o
30. et doit tre confirm e 2 8 18 R sultats donn s aux concentrations critiques avec BACTEC MGIT 960 SIRE Antibiotique concentration STR 1 0 ug mL INH 0 1 ug mL RIF 1 0 ug mL EMB 5 0 ug mL R sultat R sultat donn du syst me MGIT Isolat test avec le systeme BACTEC MGIT antibiotique concentration r sultat sensible Isolat test avec le systeme BACTEC MGIT antibiotique concentration r sultat r sistant R sultat de tests antibiotique une concentration plus lev e suivre si test Sensible SIRE R sistant SIR R sistant Si r sistant d autres antibiotiques E que l thambutol EMB Isolat test avec le systeme BACTEC MGIT thambutol 5 0 ug mL r sultat r sistant Consulter le laboratoire pour tester EMB une concentration plus lev e Si r sistant uniquement thambutol EMB Isolat test avec e syst me BACTEC MGIT thambutol 5 0 ug mL r sultat r sistant Une mono r sistance thambutol n est pas courante Demander confirmation au aboratoire Erreur X Aucun r sultat donn R sultats donn s avec BACTEC MGIT 960 STR 4 0 et INH 0 4 Antibiotique concentration STR 4 0 ug mL INH 0 4 ug mL Resultat Resultat donn du syst me MGIT Sensible Isolat test avec le systeme BACTEC MGIT streptomycine 4 0 pg mL resultat sensible Cet isolat avec un r sultat de
31. f r die getesteten Arzneimittelkits vorbereitet werden Bei der Vorbereitung des AST Qualit tskontroll ansatzes mu auf die ordnungsgem e Rekonstituierung der lyophilisierten Arzneimittel und die korrekte Verd nnung der Qualit tskontrollorganismen f r die Wachstums und Arzneimittelr hrchen geachtet werden Die Zugabe des korrekten Arzneimittels zum entsprechenden gekennzeichneten R hrchen ist wichtig Bei Verwendung des pan empfindlichen Qualit tskontrollorganismus wird nicht erkannt ob ein inkorrektes Arzneimittel in die AST R hrchen pipettiert wurde Wenn die nachstehend aufgef hrten korrekten Ergebnisse innerhalb von 4 13 Tagen erzielt werden k nnen die BACTEC MGIT 960 SIRE Testkits zur Pr fung von Patientenisolaten verwendet werden Sollten die korrekten Ergebnisse nicht erzielt werden ist der Test zu wiederholen Wenn die korrekten Ergebnisse nach nochmaligem Testen nicht erzielt werden das Testkit nicht verwenden und eine Becton Dickinson Vertretung verst ndigen 30 St mme WK MGIT STR MGIT INH MGIT RIF MGIT EMB M tuberculosis ATCC 27294 Positiv Empfindlich Empfindlich Empfindlich Empfindlich St mme WK MGIT STR 4 0 MGIT INH 0 4 M tuberculosis ATCC 27294 Positiv Empfindlich Empfindlich Der gleiche Kontrollorganismus sollte bei der Durchf hrung von Empfindlichkeitspr fungen einmal w chentlich als Qualit tskontrolle getestet werden Wenn die Qualit tskontrolle scheitert d rfen die in dieser Testperiode
32. from solid source cultures Table 4 Clinical Isolate Results BACTEC MGIT 960 AST Compared to Method of Proportion from Liquid Source Cultures Method of Proportion MGIT 960 AST System DRUG Concen Concen Susceptible Results Resistant Result tration SR tration Agreement Agreement Agreement Agreement 95 Cl 95 Cl STR 10 0 g mL 77 19 4 0 pg mL 73 95 17 90 87 99 67 99 INH 1 0 pg mL 65 31 0 4 ug mL 65 100 29 94 95 100 79 99 Assumes MGIT high drug S result for all isolates with MGIT low drug S result 10 All isolates with discordant MGIT results were tested by MOP at two independent sites The four discordant STR resistant R 960 S MOP isolates had susceptible results from both sites Of the two discordant STR susceptible S 960 R MOP isolates one had susceptible results from both sites and one had resistant results from both sites Of the two discordant INH susceptible S 960 R MOP isolates one had susceptible results from both sites and one had resistant results from both sites Table 5 Clinical Isolate Results BACTEC MGIT 960 AST Compared to Method of Proportion from Solid Source Cultures Method of Proportion MGIT 960 AST System DRUG Concen Concen Susceptible Results Resistant Result tration S R tration Agreement Agreement 4 Agreement Agreement 95 Cl 95 Cl STR 10 0ug mL 78 21 4 0 ug mL 73 94 17 81 86 98 58 95 INH 1 0 pg mL 68 31 04yg mL 68 100 30 97 95 100 83 1
33. im anderen Labor empfindlich Das diskordante E 960 R Proportionsmethode STR empfindliche Isolat war in beiden Labors empfindlich Die beiden diskordanten R 960 E Proportionsmethode INH resistenten Isolate waren in beiden Labors empfindlich Das diskordante E 960 R Proportionsmethode INH empfindliche Isolat war in beiden Labors empfindlich Das diskordante R 960 E Proportionsmethode RIF resistente Isolat war in beiden Labors resistent Die drei diskordanten R 960 E Proportionsmethode EMB resistenten Isolate waren in beiden Labors empfindlich Von den drei diskordanten E 960 R Proportionsmethode EMB resistenten Isolaten waren zwei in beiden Labors empfindlich und eines war im einen Labor resistent und im anderen empfindlich 35 Tabelle 3 Ergebnisse der klinischen Isolate aus festen Kulturmedien BACTEC MGIT 960 AST im Vergleich zur Proportionsmethode Proportionsmethode MGIT 960 AST System ARZ Konzen Konzen Empfindlich Resistent NEI tration E R tration Anz berein bereinstim Anz berein bereinstim MITTEL stimmung mung 95 VI stimmung mung 95 VI STR 2 0 ug ml 70 29 1 0 ug mL 65 93 28 97 84 98 82 100 INH 0 2 Hg mL 63 36 0 1 ug mL 62 98 35 97 92 100 86 100 RIF 1 0 ug mL 70 29 1 0 ug mL 70 100 26 90 95 100 73 98 EMB 50ygg mL 87 25 5 0 ug mL 86 99 20 80 94 100 59 93 Alle Isolate mit diskordanten MGIT Ergebnissen wurden in zwei unabh ngigen Labors anhand der Proportionsmethode get
34. liofilizzato Rifampicina RIF 332 ug Formula approssimata per flacone di farmaco liofilizzato Etambutolo 1660 ug Il kit BACTEC MGIT 960 IR contiene un flacone di isoniazide e uno di rifampicina liofilizzate e quattro flaconi di supplemento SIRE Formula approssimata per flacone di farmaco liofilizzato Isoniazide 33 2 ug Formula approssimata per flacone di farmaco liofilizzato Rifampicina 332 ug Il kit BACTEC MGIT 960 STR 4 0 contiene un flacone di polvere liofilizzata di streptomicina e due flaconi di supplemento SIRE Formula approssimata per flacone di farmaco liofilizzato Streptomicina 664 ug 38 Il kit BACTEC MGIT 960 INH 0 4 contiene un flacone di polvere liofilizzata di isoniazide e due flaconi di supplemento SIRE Formula approssimata per flacone di farmaco liofilizzato Isoniazide 66 4 ug Il supplemento BACTEC MGIT 960 SIRE contiene 20 mL di terreno di arricchimento OADC Middlebrook Formula approssimata per L di acqua purificata Albumina bovina 50 0 g Catalasi iud 0 03 g Destrosio seas 20 0 g Acido oleico 0 6 y Compensata elo corretta per soddisfare i criteri di rendimento Conservazione e ricostituzione dei reagenti Flaconi di farmaci BACTEC MGIT 960 SIRE Alla consegna conservare i flaconi dei farmaci liofilizzati a 2 8 C Una volta ricostituite le soluzioni di antibiotico possono essere congelate e
35. lyophilized drug vial with 2 mL of sterile distilled deionized water to make a stock solution of 33 2 ug mL Warnings and Precautions For in vitro Diagnostic Use POTENTIALLY INFECTIOUS TEST SPECIMEN Pathogenic microorganisms including hepatitis viruses and Human Immunodeficiency Virus may be present in clinical specimens Standard Precautions 47 and institutional guidelines should be followed in handling all items contaminated with blood and other body fluids Working with M tuberculosis growth in culture requires Biosafety Level BSL 3 practices containment equipment and facilities Read and follow directions contained in all appropriate package inserts including the BBL MGIT 7 mL Mycobacteria Growth Indicator Tube Prior to use the user should examine the tubes and vials for evidence of contamination or damage Discard any tubes or vials if they appear unsuitable Dropped tubes should be examined carefully If damage is seen the tube should be discarded In the event of tube breakage 1 Close the instrument drawers 2 Turn off the instrument 3 Vacate the area immediately 4 Consult your facility CDC guidelines An inoculated leaking or broken tube may produce an aerosol of mycobacteria appropriate handling should be observed Autoclave all inoculated MGIT tubes prior to disposal INOCULUM PREPARATION All preparations detailed below must be from pure cultures of M tuberculosis The laboratory should confirm by
36. nach dem Positivwerden und eines 1 5 verd nnten Inokulums an Tag 3 bis 5 nach dem Positivwerden vor Interne Studien zeigten da Inokula die aus einem positiven MGIT 7 mL R hrchen an Tag 1 bis Tag 5 nach dem Positivwerden entnommen wurden zwischen 0 8 x 10 und 3 2 x 105 KBE mL enthalten 33 Feste Medien Das empfohlene Verfahren zur Zubereitung eines AST Ansatzes aus dem Wachstum auf einem festen Medium bis zu 14 Tage schreibt die Verwendung einer 1 5 verd nnten Bakteriensuspension mit einer Tr bung von 0 5 McFarland vor Interne Studien haben gezeigt da Inokula die aus einem festen Kulturmedium zubereitet wurden zwischen 1 4 x 105 und 2 4 x 106 KBE mL enthalten Reproduzierbarkeit von Charge zu Charge Die Reproduzierbarkeit von Charge zu Charge wurde anhand von f nfundzwanzig M tuberculosis Isolaten einschlie lich f nf ATCC St mmen beurteilt Jeder BACTEC MGIT 960 SIRE Test bei der kritischen Arzneimittelkonzentration wurde in dreifacher Ausf hrung durchgef hrt so da insgesamt f nfundsiebzig Ergebnisse pro Arzneimittel vorlagen Jedes Replikat repr sentierte eine andere Testbedingung die sich durch die Charge des verwendeten SIRE Arzneimittels und des SIRE Supplement je drei Chargen unterschieden Mit Ausnahme der ATCC St mme wurden Isolate die beim ersten Test resistent gegen ber Streptomycin Isoniazid oder Ethambutol waren danach mit der hohen Arzneimittelkonzentration getestet Zus tzlich zu den get
37. obtained that is resistant at the high concentration an alternate method of testing at this concentration should be performed PRINCIPLES OF THE PROCEDURE The BBL MGIT 7 mL Mycobacteria Growth Indicator Tube is a tube containing a modified Middlebrook 7H9 Broth which supports the growth and detection of mycobacteria see BBL MGIT 7 mL package insert The MGIT tube contains a fluorescent compound embedded in silicone on the bottom of a 16 x 100 mm round bottom tube The fluorescent compound is sensitive to the presence of oxygen dissolved in the broth The initial concentration of dissolved oxygen quenches the emission from the compound and little fluorescence can be detected Later actively growing and respiring microorganisms consume the oxygen that allows the compound to fluoresce The BACTEC MGIT 960 SIRE Kit is a 4 13 day qualitative test The test is based on growth of the M tuberculosis isolate in a drug containing tube compared to a drug free tube Growth Control The BACTEC MGIT instrument monitors tubes for increased fluorescence Analysis of fluorescence in the drug containing tube compared to the fluorescence of the Growth Control tube is used by the instrument to determine susceptibility results The BACTEC MGIT instrument automatically interprets these results and reports a susceptible or resistant result REAGENTS BACTEC MGIT 960 SIRE Kit contains one each lyophilized vials of streptomycin isoniazid rifampin
38. por medio del procedimiento MP en dos centros independientes De las siete cepas aisladas resistentes a STR con resultados discordantes R 960 S MP tres tuvieron resultados de resistencia en ambos centros y una tuvo resultados de sensibilidad en ambos centros Las otras tres cepas aisladas tuvieron resultados de resistencia en un centro y resultados de sensibilidad en el otro La cepa aislada sensible a STR con resultados discordantes S 960 R MP tuvo resultados de sensibilidad en ambos centros Las dos cepas aisladas resistentes a INH con resultados discordantes R 960 S MP tuvieron resultados de sensibilidad en ambos centros La cepa aislada sensible a INH con resultados discordantes S 960 R MP tuvo resultados de sensibilidad en ambos centros La cepa aislada resistente a RIF con resultados discordantes R 960 S MP tuvo resultados de resistencia en ambos centros Las tres cepas resistentes a EMB con resultados discordantes R 960 S MP tuvieron resultados de sensibilidad en ambos centros De las tres cepas aisladas sensibles a EMB con resultados discordantes S 960 R MP dos tuvieron resultados de sensibilidad en ambos centros y una tuvo un resultado de resistencia en un centro y un resultado de sensibilidad en el otro 72 Tabla 3 Resultados de cepas cl nicas an lisis BACTEC MGIT 960 AST en comparaci n con el m todo de proporciones a partir de cultivos s lidos M todo de Sistema MGIT 960 AST proporciones Anti Concen Con
39. por completo Inocule 0 5 mL da suspens o de Controlo do Crescimento a 1 100 para dentro do tubo MGIT identificado como CC 5 Inoculac o do tubo contendo f rmaco Pipete de forma ass ptica 0 5 mL de suspens o do organismo consulte PREPARACAO DO IN CULO para dentro de cada um dos QUATRO tubos de f rmaco restantes STR INH RIF EMB 6 Voltar a tapar os tubos firmemente Homogeneizar os tubos por completo atrav s de invers o suave tr s a quatro vezes 7 Introduza o conjunto AST dentro do Instrumento BACTEC MGIT utilizando a func o de entrada do conjunto AST consulte o Manual do Utilizador do Instrumento BACTEC MGIT Certifique se de que a disposic o dos tubos no Suporte do Conjunto AST est de acordo com as definic es do Suporte do Conjunto seleccionadas durante a execuc o da func o de entrada do conjunto AST 8 Riscar 0 1 mL da suspens o do microrganismo numa placa de Trypticase Soy Agar with 5 Sheep Blood Agar de Soja de Trypticase com 5 de Sangue de Ovelha TSA Il Fechar num saco de pl stico Incubar entre 35 e 37 C 9 Analisar a placa de agar de sangue decorridas 48 h relativamente presenca de contamina o bacteriana Se o agar do sangue n o apresentar crescimento prosseguir com o teste AST Se a placa de agar de sangue apresentar crescimento descartar o conjunto AST consultar o Manual do Utilizador do Instrumento BACTEC MGIT e repetir o teste com uma cultura pura Procedimento de Inocul
40. positivity Proceed to Preparation of the Inoculum from a Positive BACTEC MGIT 7 mL Tube above PROCEDURE Materials Provided BACTEC MGIT 960 SIRE Kit containing one vial each lyophilized drug and eight vials of SIRE Supplement approximately 40 tests per drug per kit BACTEC MGIT 960 STR 4 0 Kit containing one vial each lyophilized drug and two vials of SIRE Supplement approximately 20 tests per kit and BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Kit containing one vial each lyophilized drug and two vials of SIRE Supplement approximately 20 tests per kit Materials Required But Not Provided BBL MGIT 7 mL Mycobacteria Growth Indicator Tubes ancillary culture media reagents quality control organisms and laboratory equipment as required for this procedure Inoculation Procedure for BACTEC MGIT 960 SIRE Kit Susceptibility Test 1 Label five 7 mL MGIT tubes for each test isolate Label one as GC Growth Control one as STR one as INH one as RIF and one as EMB Place the tubes in the correct sequence in the appropriate size AST Set Carrier see BACTEC MGIT Instrument User s Manual 2 Aseptically add 0 8 mL of BACTEC MGIT SIRE Supplement to each tube NOTE It is important to use the supplement supplied with the kit 3 Aseptically pipet using a micropipet 100 uL of 83 pg mL MGIT STR solution to the appropriately labeled MGIT tube Aseptically pipet 100 uL of 8 3 g mL MGIT INH solution to the appropriately labeled MGIT tube Aseptically pipet 100
41. r sistance 1 0 ug mL et un r sultat de sensibilit a 4 0 ug mL presente un faible niveau de resistance la streptomycine Isolat test avec le systeme BACTEC MGIT streptomycine 4 0 ug mL r sultat r sistant Demander confirmation au laboratoire Resistant Erreur X Aucun r sultat donn Sensible Isolat test avec le syst me BACTEC MGIT isoniazide 0 4 ug mL r sultat sensible Cet isolat avec un r sultat de r sistance 0 1 ug mL et un r sultat de sensibilit 0 4 ug mL pr sente un faible niveau de r sistance la l isoniazide Isolat test avec le syst me BACTEC MGIT isoniazide 0 4 ug mL r sultat r sistant R sistant Erreur X Aucun r sultat donn 19 Action Aucune action Test recommand une concentration plus lev e STR et ou INH Test de l EMB recommand une concentration plus lev e en utilisant une m thode de substitution Test de l EMB recommand la concentration critique et une concentration plus lev e en utilisant une m thode de substitution Renouveler le test Action Aucune action L isolat doit tre test par une m thode de substitution pour confirmer le r sultat Renouveler le test Aucune action Aucune action Renouveler le test LIMITES DE LA METHODE Le test de sensibilit du syst me BACTEC MGIT n interpr te pas le degr de sensibilit de l iso
42. resistencia en ambos centros De las cinco cepas aisladas sensibles a EMB con resultados discordantes S 960 R MP cuatro tuvieron resultados de sensibilidad en ambos centros La otra cepa aislada tuvo un resultado de resistencia en un centro y un resultado de sensibilidad en el otro La Tabla 4 presenta los resultados del an lisis de cepas cl nicas para estreptomicina e isoniazida concentraci n alta a partir de cultivos l quidos La Tabla 5 presenta los resultados del an lisis de cepas cl nicas para estreptomicina e isoniazida concentraci n alta a partir de cultivos s lidos Tabla 4 Resultados de cepas cl nicas an lisis BACTEC MGIT 960 AST en comparaci n con el m todo de proporciones a partir de cultivos l quidos M todo de Sistema MGIT 960 AST proporciones Anti Concen Concen Resultados de sensibilidad Resultados de resistencia bi tico traci n S R traci n N de de N de de concordancias concordancia concordancias concordancia 95 CI 95 CI STR 10 0 ug mL 77 19 4 0 pg mL 73 95 17 90 87 99 67 99 INH 1 0 ug mL 65 31 0 4 ug mL 65 100 29 94 95 100 79 99 Se supone un resultado S para el antibi tico a la concentraci n alta con el MGIT para todas las cepas aisladas con un resultado S para el antibi tico a la concentraci n baja con el MGIT Todas las cepas aisladas con resultados discordantes en el MGIT se analizaron por medio del procedimiento MP en dos centros independientes Las cuatro cepa
43. sangue di montone TSA II Inserire in una busta di plastica e incubare a 35 37 C 42 9 Controllare la piastra di agar sangue dopo 48 h per verificare l eventuale presenza di contaminazione batterica Se non si nota alcuna crescita sulla piastra continuare il test AST Se si notano segni di crescita sulla piastra eliminare il set AST vedi il Manuale d uso dello strumento BACTEC MGIT e ripetere il test con una coltura pura N B Il test di sensibilit pu essere configurato in diversi modi possibile ad esempio configurare nel sistema un set con carrello a cinque provette che contenga solo concentrazioni critiche A seconda di test opzionali di profilo possibile configurare diversi altri set di carrelli per provette vedi il Manuale d uso dello strumento BACTEC MGIT Controllo di qualit a cura dell utente Per ogni nuova partita o nuovo numero di lotto di flaconi del kit BACTEC MGIT 960 SIRE si raccomanda di testare l organismo di controllo indicato di seguito L organismo di controllo deve provenire da una coltura pura preparata secondo le istruzioni contenute in PREPARAZIONE DELL INOCULO Il set AST per il controllo di qualit CQ deve essere preparato in osservanza delle istruzioni contenute in Procedura di inoculo per il test di sensibilit relative ai kit di farmaci da analizzare Durante la preparazione del set AST di CQ importante accertare la corretta ricostituzione dei farmaci liofilizzati e la corre
44. ser resolvida no prazo de oito horas Se esta situac o n o for resolvida no prazo de oito horas o Conjunto AST tem que ser eliminado e criado novamente A n o utilizac o do SIRE Supplement no conjunto AST poder fornecer resultados imprecisos N O adicione Suplemento de Crescimento BACTEC MGIT ao conjunto AST VALORES ESPERADOS Testou se um total de 106 isolados cl nicos de M tuberculosis com o teste de sensibilidade BACTEC MGIT 960 SIRE em quatro locais cl nicos com localiza es geog ficas diversas Os testes inclu ram isolados cl nicos frescos e de stock provenientes de culturas l quidas e s lidas Foi efectuado um total de 200 testes de sensibilidade l quidos e s lidos com concentrac es cr ticas de estreptomicina STR isoniazida INH e rifampicina RIF e foi realizado um total de 223 testes de sensibilidade l quidos e s lidos com a concentrac o cr tica de etambutol EMB durante testes separados O per odo m dio de tempo global at obten o do resultado para o teste de sensibilidade BACTEC MGIT 960 SIRE de sete a oito dias com um intervalo de quatro a quatorze dias Os dados est o apresentados na Figura 1 no fim do folheto informativo CARACTER STICAS DE DESEMPENHO Estudos Anal ticos Intervalos de In culo AST em Meio L quido e S lido Meio l quido O procedimento recomendado para a prepara o de um Conjunto AST de um tubo MGIT de 7 mL positivo utiliza um in culo directo no Dia 1 e
45. streptomycine d isoniazide et ou d thambutol doivent tre test s en utilisant une concentration plus lev e d antibiotique soit avec le syst me BACTEC MGIT soit par une m thode de substitution Dans ce cas un r sultat d finitif de r sistance la concentration 12 critique peut tre donn en indiquant qu un test compl mentaire une concentration plus lev e est en cours Le test de r sistance des isolats une concentration plus lev est important pour identifier les isolats qui pr sentent un faible niveau de r sistance c est dire une r sistance la concentration critique et une sensibilit une concentration lev e Les concentrations lev es employ es dans le syst me BACTEC MGIT ont t con ues pour tre inf rieures aux concentrations utilis es dans la m thode des proportions La conception du systeme BACTEC MGIT est telle qu un r sultat de r sistance notamment pour la streptomycine n est pas toujours corr latif d un r sultat de r sistance aux concentrations lev es utilis es dans la m thode des proportions Si le r sultat obtenu pour la streptomycine montre une r sistance la concentration lev e le test doit tre r p t cette concentration en utilisant une m thode de substitution PRINCIPES DE LA METHODE Le tube BBL MGIT 7 mL avec indicateur de croissance mycobact rienne est un tube contenant un bouillon Middlebrook 7H9 modifi qui permet la croissance et la d tecti
46. tubo NOTA importante usar o suplemento fornecido com o conjunto 3 Pipete de forma ass ptica utilizando uma micropipeta 100 uL de solu o MGIT STR a 83 ug mL para o tubo MGIT com a identifica o apropriada Pipete de forma ass ptica 100 uL de solu o MGIT INH a 8 3 pg mL para o tubo MGIT com a identifica o apropriada Pipete de forma ass ptica 100 uL de solu o MGIT RIF a 83 ug mL para o tubo MGIT com a identifica o apropriada Pipete de forma ass ptica 100 uL de solu o MGIT EMB a 415 ug mL para o tubo MGIT com a identificac o apropriada importante adicionar o f rmaco correcto ao tubo correspondente N o devem ser adicionados antibi ticos ao tubo CC MGIT 53 Concentrac o do Volume Adicionado Concentrac o Medicamento F rmaco ap s aos Tubos Final nos Tubos Reconstitui o MGIT para Teste MGIT MGIT STR 83 ug mL 100 uL 1 0 ug mL MGIT INH 8 3 ug mL 100 uL 0 1 ug mL MGIT RIF 83 ug mL 100 uL 1 0 pg mL MGIT EMB 415 ug mL 100 uL 5 0 ug mL Estes f rmacos devem ser reconstitu dos utilizando 4 mL de gua est ril desionizada para atingir as concentrac es indicadas 4 Prepara o e inocula o do tubo de Controlo do Crescimento Pipetar de forma ass ptica 0 1 mL de suspens o do organismo consulte PREPARA O DO IN CULO para dentro de 10 mL de soro fisiol gico est ril para preparar a suspens o de Controlo do Crescimento a 1 100 Homogeneizar a suspens o de Controlo do Crescimento
47. 0 SIRE test was evaluated at the clinical sites using a panel of ten qualified isolates including several isolates resistant to each of the drugs The BACTEC MGIT 960 SIRE test results were compared to the expected results The overall reproducibility for each drug at the critical concentration is 98 9 for STR 99 7 for INH 99 2 for RIF and 97 5 for EMB Individual site reproducibility ranged from 89 9 to 100 for the combined critical concentration drug results The overall reproducibility for each drug at the high concentration is 99 7 for STR 4 0 and 95 6 for INH 0 4 Individual site reproducibility ranged from 92 2 to 100 for the combined high concentration drug results CDC Challenge Panel Testing The performance of the BACTEC MGIT 960 SIRE susceptibility test was evaluated using a panel of challenge isolates obtained from the Centers for Disease Control and Prevention CDC GA USA The panel consisted of thirty isolates of M tuberculosis with known susceptibility patterns using MOP tested by each clinical site Table 1 shows the agreement of the BACTEC MGIT 960 SIRE susceptibility test for each drug compared to the CDC expected results Table 1 CDC Challenge Panel BACTEC MGIT 960 Clinical Site Testing MGIT 960 Number Number Correct tested Correct STR 1 0 120 111 92 5 INH 0 1 120 119 99 2 RIF 1 0 120 120 100 EMB 5 0 119 111 93 3 STR 4 0 29 29 100 INH 0 4 87 82 94 3 Only isolates resistant at critical concentra
48. 00 Assumes MGIT high drug S result for all isolates with MGIT low drug S result All isolates with discordant MGIT results were tested by MOP at two independent sites The five discordant STR resistant R 960 S MOP isolates had susceptible results from both sites Of the four discordant STR susceptible S 960 R MOP isolates three had susceptible results from both sites and one had resistant results from both sites The discordant INH susceptible S 960 R MOP isolate had resistant results from both sites AVAILABILITY Cat No Description 245123 BACTECTM MGIT 960 SIRE Kit carton of 4 lyophilized drug vials and 8 SIRE Supplements 245125 BACTECTM MGITTM 960 STR 4 0 Kit carton of 1 lyophilized drug vial and 2 SIRE Supplements 245157 BACTECTM MGITTM 960 IR Kit carton of 2 lyophilized drug vials and 4 SIRE Supplements 245126 BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Kit carton of 1 lyophilized drug vial and 2 SIRE Supplements REFERENCES 1 Barenfanger J 1993 Making your lab safe against multi drug resistant Mycobacterium tuberculosis Clin Microbiol Newsl 75 76 80 2 Clinical and Laboratory Standards Institute 2003 Approved Standard M24 A Susceptibility testing of mycobacteria nocardiae and other aerobic actinomycetes CLSI Wayne Pa 3 BD Diagnostics BACTEC 460TB System Product and Procedure Manual 4 Clinical and Laboratory Standards Institute 2005 Approved Guideline M29 A3 Protection of laboratory
49. 100 para INH 0 4 Evaluaci n cl nica El an lisis de sensibilidad BACTEC MGIT 960 SIRE se evalu en cuatro centros cl nicos de distinta localizaci n geogr fica compuestos por centros regionales de referencia y laboratorios de hospitales universitarios incluido un centro de fuera de Estados Unidos Se compar el an lisis de sensibilidad BACTEC MGIT 960 SIRE con el m todo de proporciones MP 2 para an lisis de la sensibilidad La evaluaci n inicial incluy los antibi ticos estreptomicina isoniazida y rifampicina Se realiz una evaluaci n independiente para el antibi tico etambutol An lisis de la reproducibilidad La reproducibilidad del an lisis BACTEC MGIT 960 SIRE se evalu en los centros cl nicos utilizando un panel de diez cepas aisladas cualificadas incluidas varias cepas resistentes a Cada uno de los antibi ticos Se compararon los resultados del an lisis BACTEC MGIT 960 SIRE con los resultados previstos La reproducibilidad global para cada antibi tico a la concentraci n cr tica es del 98 9 para STR el 99 7 para INH el 99 2 para RIF y el 97 5 para EMB La reproducibilidad individual en cada centro vari entre el 89 9 y el 100 para los resultados combinados de los antibi ticos a la concentraci n cr tica La reproducibilidad global para cada antibi tico a la concentraci n alta es del 99 7 para STR 4 0 y del 95 6 para INH 0 4 La reproducibilidad individual en cada centro vari entre el 92
50. 2 y el 100 para los resultados combinados de los antibi ticos a la concentraci n alta An lisis del panel de referencia de los CDC El rendimiento del an lisis de sensibilidad BACTEC MGIT 960 SIRE se evalu por medio de un panel de cepas aisladas de referencia obtenido de los Centers for Disease Control and Prevention CDC Georgia EE UU El panel estaba constituido por treinta cepas aisladas de M tuberculosis con patrones de sensibilidad conocidos por medio del procedimiento MP analizadas en cada centro cl nico 71 La Tabla 1 muestra la concordancia del an lisis de sensibilidad BACTEC MGIT 960 SIRE para cada antibi tico en comparaci n con los resultados previstos conforme a los CDC Tabla 1 Panel de referencia de los CDC an lisis BACTEC MGIT 960 en centros cl nicos MGIT 960 N mero de cepas N mero de analizadas correcto correcci n STR 1 0 120 111 92 5 INH 0 1 120 119 99 2 RIF 1 0 120 120 100 EMB 5 0 119 111 93 3 STR 4 0 29 29 100 INH 0 4 87 82 94 3 S lo cepas aisladas resistentes a las concentraciones cr ticas analizadas con STR 4 0 e INH 0 4 An lisis de cepas cl nicas Se analiz un total de 106 cepas cl nicas de M tuberculosis con el an lisis de sensibilidad BACTEC MGIT 960 SIRE y el an lisis de sensibilidad MP El an lisis incluy cepas aisladas de reserva y cepas cl nicas reci n aisladas a partir de cultivos l quidos y s lidos Se obtuvo un total de 195 resultados para el an lisis i
51. 2 24 1 0 pg mL 71 99 24 100 93 100 95 100 EMB 5 0 ug mL 91 20 5 0 pg mL 88 97 17 85 91 99 62 97 All isolates with discordant MGIT results were tested by MOP at two independent sites Of the seven discordant STR resistant R 960 S MOP isolates three had resistant results from both sites and one had susceptible results from both sites The remaining three had resistant results from one site and susceptible results from the other site The discordant STR susceptible S 960 R MOP isolate had susceptible results from both sites The two discordant INH resistant R 960 S MOP isolates had susceptible results from both sites The discordant INH susceptible S 960 R MOP isolate had susceptible results from both sites The discordant RIF resistant R 960 S MOP isolate had resistant results from both sites The three discordant EMB resistant R 960 S MOP isolates had susceptible results from both sites Of the three discordant EMB susceptible S 960 R MOP isolates two had susceptible results from both sites and one had a resistant result from one site and a susceptible result from the other site Table 3 Clinical Isolate Results BACTEC MGIT 960 AST Compared to Method of Proportion from Solid Source Cultures Method of Proportion MGIT 960 AST System DRUG Concen Concen Susceptible Results Resistant Result tration S R tration Agreement Agreement Agreement Agreement 95 CH 95 CI STR 20gg mL 70 29 1 0 pg mL 65 93 28 9
52. 2 ug Formule approximative par flacon d antibiotique lyophilis Isoniazide 33 2 ug Formule approximative par flacon d antibiotique lyophilis Rifampicine 332 ug Formule approximative par flacon d antibiotique lyophilis thambutol 1660 ug La trousse BACTEC MGIT 960 IR contient un flacon d isoniazide et un de rifampicine lyophilis s et quatre flacons de suppl ment SIRE Formule approximative par flacon d antibiotique lyophilis Isoniazide 33 2 ug Formule approximative par flacon d antibiotique lyophilis Rifampicine 332 ug La trousse BACTEC MGIT 960 STR 4 0 contient un flacon de streptomycine lyophilis e et deux flacons de suppl ment SIRE Formule approximative par flacon d antibiotique lyophilis Streptomycine 664 ug La trousse BACTEC MGIT 960 INH 0 4 contient un flacon d isoniazide lyophilis et deux flacons de suppl ment SIRE Formule approximative par flacon d antibiotique lyophilis Isoniazide 66 4 ug Le suppl ment BACTEC MGIT 960 SIRE contient 20 mL de suppl ment d enrichissement Middlebrook OADC Formule approximative par litre d eau distill e Albumine bovine 50 0 g Catalase 0 03 g Dextrose israk 20 0 g Acide ol ique 0 6 y Ajust e et ou compl ment e en fonction des crit res de performances impos s Conservation et reconstitution des r actifs Flacons d antibiotique BACTEC MGIT 960 SIRE
53. 33 2 ug Ungef hre Zusammensetzung pro F Rifampin Ungef hre Zusammensetzung pro F Ethambutol ita Lolitas 1660 ug Das BACTEC MGIT 960 IR Testkit enth lt jeweils ein Fl schchen lyophilisiertes Isoniazid und Rifampin sowie vier Fl schchen SIRE Supplement Ungef hre Zusammensetzung pro Fl schchen lyophilisiertes Arzneimittel Isoniazid Ungef hre Zusammensetzung pro Fl schchen lyophilisiertes Arzneimittel Rifa EE 332 ug Das BACTEC MGIT 960 STR 4 0 Testkit enth lt ein Fl schchen lyophilisiertes Streptomycin und zwei Fl schchen SIRE Supplement Ungef hre Zusammensetzung pro Fl schchen lyophilisiertes Arzneimittel Streptomycin Actos aa Ra AE AEAEE aaa 664 ug Das BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Testkit enth lt ein Fl schchen Iyophilisiertes Isoniazid und zwei Fl schchen SIRE Supplement Ungef hre Zusammensetzung pro Fl schchen Iyophilisiertes Arzneimittel Isoniazid Alert eet ota 66 4 ug Die BACTEC MGIT 960 SIRE Supplement enth lt 20 mL Middlebrook OADC Anreicherung Ungef hre Zusammensetzung pro L destilliertes Wasser 0 03 9 0 6 g Nach Bedarf abgestimmt und oder erg nzt auf die geforderten Testkriterien Aufbewahrung und Rekonstituierung der Reagenzien BACTEC MGIT 960 SIRE Arzneimittelfl schchen Fl schchen mit lyophilisiertem Arzneimittel nach Erhalt bei 2 8 C aufbewahren Rekonstituierte Antibiotikal sungen k nnen eingefroren und bei mindestens 20 C bis zu sechs Monate jedoch nic
54. 37 C 9 Rechercher la pr sence de contamination bact rienne sur la g lose au sang au bout de 48 h Si la g lose au sang ne pr sente aucune trace de d veloppement bact rien laisser le test AST se poursuivre Si la g lose au sang pr sente un d veloppement 16 bact rien jeter le module AST se reporter au manuel d utilisation de l instrument BACTEC MGIT et r p ter le test avec une culture pure M thode d ensemencement pour le test de sensibilit avec les trousses BACTEC MGIT 960 STR 4 0 et INH 0 4 Si une r sistance appara t la concentration critique il est recommand d effectuer un test de profil de sensibilit qui teste au minimum la concentration lev e de l antibiotique laquelle l isolat tait r sistant l origine Source de l isolat L isolat utilis pour ce test doit avoir t pr par comme d crit la section PREPARATION DE L INOCULUM Un tube d ensemencement peut tre pr par partir du tube de t moin de croissance d pourvu d antibiotique du module AST pr c demment test pour cet isolat en ensemen ant 0 5 mL dans un nouveau tube MGIT 7 mL contenant le suppl ment de croissance BACTEC MGIT Une fois que le tube ensemenc est d termin comme positif par l instrument proc der comme d crit la section PREPARATION DE L INOCULUM Pr paration partir d un tube MGIT positif 1 tiqueter un nombre suffisant de tubes MGIT 7 mL pour l isolat tester de fa on
55. 5 INH 1 0 ug mL 68 31 0 4 ug mL 68 100 30 97 95 100 83 100 Presume un risultato MGIT S per farmaco a concentrazione elevata per tutti gli isolati con risultato MGIT S per farmaco a bassa concentrazione Tutti gli isolati con risultati MGIT discordi sono stati testati con il metodo delle proporzioni presso due centri indipendenti cinque isolati STR resistenti discordi R 960 S Metodo delle proporzioni sono risultati sensibili presso entrambi i centri Dei quattro isolati STR sensibili discordi S 960 R Metodo delle proporzioni tre sono risultati sensibili presso entrambi i centri e uno e risultato resistente presso entrambi i centri L isolato INH sensibile discorde S 960 R Metodo delle proporzioni risultato resistente presso entrambi i centri DISPONIBILIT N cat Descrizione 245123 Kit BACTEC MGIT 960 SIRE confezione da 4 flaconi di antibiotici liofilizzati e 8 flaconi di Supplemento SIRE 245125 Kit BACTEC MGIT 960 STR 4 0 confezione da 1 flacone di antibiotico liofilizzato e 2 flaconi di Supplemento SIRE 245157 Kit BACTEC MGIT 960 IR confezione da 2 flaconi di antibiotico liofilizzato e 4 flaconi di Supplemento SIRE 245126 Kit BACTEC MGIT 960 INH 0 4 confezione da 1 flacone di antibiotico liofilizzato e 2 flaconi di Supplemento SIRE RIFERIMENTI Vedere la sezione References nel testo inglese amp BD BACTEC MGIT 960 SIRE Kits Para o Teste da Sensibilidade Anti micobacteriana do Mycobacteri
56. 7 84 98 82 100 INH 0 2ug mL 63 36 0 1 ug mL 62 98 35 97 92 100 86 100 RIF 1 0 pg mL 70 29 1 0 ug mL 70 100 26 90 95 100 73 98 EMB 5 0ug mL 87 25 5 0 ug mL 86 99 20 80 94 100 59 93 All isolates with discordant MGIT results were tested by MOP at two independent sites Of the five discordant STR resistant R 960 S MOP isolates two had resistant results from both sites and one had susceptible results from both sites The remaining two had resistant results from one site and susceptible results from the other site The discordant STR susceptible S 960 R MOP isolate had resistant results from both sites The discordant INH resistant R 960 S MOP isolate had susceptible results from both sites The discordant INH susceptible S 960 R MOP isolate had resistant results from both sites The three discordant RIF susceptible S 960 R MOP isolates had susceptible results from both sites The one discordant EMB resistant R 960 S MOP isolate had resistant results from both sites Of the five discordant EMB susceptible S 960 R MOP isolates four had susceptible results from both sites The remaining isolate had a resistant result from one site and a susceptible result from the other site Table 4 presents the results from clinical isolate testing for streptomycin and isoniazid high concentration from liquid source cultures Table 5 presents the results from clinical isolate testing for streptomycin and isoniazid high concentration
57. 800 E 2 5 E amp 30 600 5 E E Z 20 400 2 So 200 E l bal 1 l LE lo a l4 s e z e e 1 12 13 333 Number of SIR AST Sets Interpreted O 6 17 40 46 42 23 10 6 9 1 0 by TIP Number of EMB AST Sets interpreted 0 10 35 54 57 22 i4 4 1 o 0 by TIP Cumulative SIR Interpreted 0 0 3 0 11 5 31 5 54 5 75 5 87 0 92 0 95 0 99 5 100 0 100 0 Cumulative EMB Interpreted 0 0 4 9 22 0 48 3 76 1 90 2 97 1 99 0 99 5 100 0 100 0 100 0 NENNEN Number of SIR AST Sets Interpreted by TIP Number of EMB AST Sets Interpreted by TIP Cumulative SIR 96 interpreted Cumulative EMB Interpreted Frequency Distribution of Time in Protocol TIP Distribution de fr quence du temps dans le protocole TDP H ufigkeitsverteilung der Testzeiten TZ Frequenza di distribuzione della durata del protocollo TIP Distribui o da frequ ncia do Tempo de Perman ncia no Protocolo TIP Distribuci n de frecuencias del tiempo de an lisis TA Number Interpreted by TIP Nombre interpr t par TDP Anzahl der Auswertungen nach TZ Numero interpretato mediante TIP N mero interpretado por TIP N mero interpretado por TA Cumulative Interpreted by TIP cumulatif interpr t par TDP Kumulative Prozentzahl der Auswertungen nach TZ cumulativa interpretata mediante TIP Percentagem cumulativa interpretada por TIP
58. 83 pg mL 100 uL 1 0 ug mL MGIT INH 8 3 ug mL 100 uL 0 1 ug mL MGIT RIF 83 pg mL 100 uL 1 0 ug mL MGIT EMB 415 pg mL 100 uL 5 0 ug mL Estos antibi ticos deben reconstituirse utilizando 4 mL de agua est ril desionizada para lograr las concentraciones indicadas 4 Preparaci n e inoculaci n del tubo de control de crecimiento con una pipeta transferir as pticamente 0 1 mL de la suspensi n de microorganismos v ase PREPARACI N DEL IN CULO a 10 mL de soluci n salina est ril para preparar la suspensi n 1 100 de control de crecimiento Mezclar bien la suspensi n de control de crecimiento Inocular 0 5 mL de la suspensi n 1 100 de control de crecimiento en el tubo MGIT que tiene la etiqueta GC 5 Inoculaci n de los tubos que contienen antibi ticos con una pipeta transferir as pticamente 0 5 mL de la suspensi n de microorganismos v ase PREPARACI N DEL IN CULO a cada uno de los CUATRO tubos de antibi tico restantes STR INH RIF EMB 6 Volver a cerrar bien los tubos Mezclar bien los tubos invirti ndolos suavemente entre tres y cuatro veces 7 Introducir el conjunto de AST en el instrumento BACTEC MGIT utilizando la funci n de introducci n del conjunto de AST v ase el Manual del usuario del instrumento BACTEC MGIT Al utilizar la funci n de introducci n del conjunto de AST es preciso asegurarse de que el orden de los tubos en el transportador del conjunto de AST coincide con las definiciones selec
59. 8663 United States only During the external evaluation of the BACTEC MGIT 960 SIRE Kits the most common causes of QC failure were contaminated QC cultures over under inoculated AST Sets drug not added to appropriate tubes and instrument error conditions RESULTS The BACTEC MGIT instrument will monitor AST Sets until a susceptible or resistant determination is made Once the set testing is completed the results are reported by the BACTEC MGIT instrument refer to the BACTEC MGIT Instrument User s Manual The BACTEC MGIT instrument will report an AST Set result as an Error X no susceptibility interpretation when certain conditions occur that may affect the test results Conditions that may result in an Error X result are described in Section 7 Troubleshooting of the BACTEC MGIT Instrument User s Manual When reporting results it is important to include the test method drug name and concentration whether the result is obtained with the BACTEC MGIT System or an alternate method The Pulmonary and or Infectious Disease specialist in TB control should be consulted concerning the appropriate therapeutic regimen and dosages In the event of unexpected resistant results verify identification of isolate tested as M tuberculosis Ensure that only a pure culture was used rule out presence of mixed mycobacteria etc Mono resistance to ethambutol is uncommon and should be verified 28 BACTEC MGIT 960 SIRE critical concentration result report
60. B concentra o cr tica no teste de perfil de sensibilidade Os resultados observados foram comparados com os resultados esperados A reprodutibilidade global para cada f rmaco com a concentrac o cr tica de 96 para STR 100 para INH 100 para RIF e 100 para EMB A reprodutibilidade global para cada f rmaco com a concentrac o elevada de 96 para STR 4 0 e de 100 para INH 0 4 Teste do Painel de Provocac o do CDC O desempenho do teste de sensibilidade BACTEC MGIT 960 SIRE foi avaliado utilizando um painel de isolados de provoca o obtidos junto do Centro de Controlo e Preven o das Doen as dos EUA Centers for Disease Control and Prevention CDC em GA EUA The painel foi constitu do por 30 isolados de M tuberculosis com padr es de sensibilidade conhecidos utilizando MOP O painel foi testado duas vezes com o teste de sensibilidade BACTEC MGIT 960 SIRE e os dois resultados estiveram de acordo Os resultados do teste BACTEC MGIT 960 SIRE foram comparados com os resultados esperados pelo CDC A concord ncia global com os resultados esperados pelo CDC para cada f rmaco com a concentrac o cr tica de 93 para STR 100 para INH 100 para RIF e 100 para EMB A concord ncia global com os resultados esperados pelo CDC para cada f rmaco com a concentrac o elevada de 96 para STR 4 0 e de 100 para INH 0 4 58 Avaliac o Cl nica O teste de sensibilidade BACTEC MGIT 960 SIRE foi avaliado em quatro locais
61. BACTEC MGIT System susceptibility tests can only be performed using a BACTEC MGIT instrument The AST Sets cannot be read manually Use only pure cultures of M tuberculosis Cultures that are contaminated or that may contain multiple species of mycobacteria may give erroneous results and should not be tested Direct testing from clinical specimens is not recommended Suspensions made from solid media must be allowed to settle for the prescribed times prior to standardization Inoculum preparations made from solid media should be visually compared to a 0 5 McFarland turbidity standard failure to do so may give inaccurate results or cause an AST Set error Failure to use the 1 5 dilution of the organism suspension when indicated to inoculate the drug containing tubes may give inaccurate results Failure to use a 1 100 dilution of the organism suspension for the inoculation of the Growth Control tube may give inaccurate results or cause an AST Set error Failure to reconstitute the drugs with the appropriate volume of sterile distilled deionized water may give inaccurate results Thorough mixing of inoculated tubes is important Failure to mix the tubes adequately can lead to false resistant results Failure to load the tubes of the AST Set into the AST Set Carrier in the proper sequence may give inaccurate results Failure to select the appropriate set carrier drug definition may result in invalid or inaccurate results Failure to load th
62. BACTEC MGIT nel set AST VALORI ATTESI Con il test di sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE sono stati analizzati in tutto 106 isolati clinici di M tuberculosis presso quattro centri in diverse aree geografiche Nell analisi sono stati inclusi isolati clinici freschi e isolati stock da terreni di coltura liquidi e solidi Nel corso di analisi separate 200 test di sensibilit supporto liquido e solido sono stati eseguiti a concentrazioni critiche di streptomicina STR isoniazide INH e rifampicina RIF e 223 test di sensibilit sono stati eseguiti alla concentrazione critica di etambutolo EMB Il tempo medio complessivo per raggiungere i risultati del test di sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE di sette otto giorni entro un intervallo di quattro quattordici giorni dati sono illustrati nella Figura 1 alla fine del foglietto illustrativo CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI Studi analitici Intervallo di concentrazione per inoculi AST su terreni liquidi e solidi Terreni liquidi Per preparare un set AST da una provetta MGIT da 7 mL positiva la procedura consigliata prevede l impiego di un inoculo diretto nel Giorno 1 e nel Giorno 2 post positivit e di un inoculo diluito 1 5 dal Giorno 3 al Giorno 5 post positivit Gli studi interni indicano che gli inoculi preparati dal Giorno 1 al giorno 5 da una provetta MGIT da 7 mL positiva rientrano in un range tra 0 8 x 105 e 3 2 x 105 CFU mL Terreni solidi Per preparare un set AST
63. Carrier conforms to the set carrier definitions selected when performing the AST set entry feature 8 Streak 0 1 mL of the organism suspension to a Trypticase Soy Agar with 5 Sheep Blood TSA Il plate Enclose in a plastic bag Incubate at 35 37 C 9 Check the blood agar plate at 48 h for bacterial contamination If the blood agar plate shows no growth then allow AST testing to proceed If the blood agar plate shows growth discard the AST set refer to the BACTEC MGIT Instrument User s Manual and repeat testing with pure culture Inoculation Procedure for BACTEC MGIT 960 STR 4 0 and INH 0 4 Kits Susceptibility Test It is recommended if resistance occurs at the critical concentration a susceptibility profile test be performed which at a minimum tests the high concentration of the drug to which the isolate was originally resistant Isolate Source The isolate used for this testing must have been prepared as described in INOCULUM PREPARATION A seed tube may be prepared from the drug free Growth Control tube from the previously tested AST set of the isolate by inoculating 0 5 mL to a fresh MGIT 7 mL tube containing BACTEC MGIT Growth Supplement Once the seed tube is instrument positive proceed as described in INOCULUM PREPARATION Preparation of the Inoculum from a Positive MGIT tube 1 Label enough MGIT 7 mL tubes for the test isolate to have a MGIT GC Growth Control and a MGIT drug tube for each antimicrobic tested Pl
64. Dia 2 p s positividade e um in culo dilu do 1 5 no Dia 3 a Dia 5 p s positividade Estudos internos mostram que in culos preparados a partir de um tubo MGIT de 7 mL positivo do Dia 1 a Dia 5 variam entre 0 8 x 105 e 3 2 x 105 UFC mL Meio s lido O procedimento recomendado para a prepara o de um Conjunto AST a partir de crescimento em meio s lido at 14 dias utiliza uma dilui o a 1 5 de suspens o de microrganismos equivalente a um padr o 0 5 de McFarland Estudos internos mostram que in culos preparados a partir de um meio de cultura s lido variam entre 1 4 x 105 e 2 4 x 106 UFC mL Reprodutibilidade de Lote A reprodutibilidade de lote foi avaliada utilizando 25 estirpes de M tuberculosis incluindo cinco estirpes ATCC Cada teste BACTEC MGIT 960 SIRE com a concentrac o cr tica de f rmaco foi realizado em triplicado para um total de setenta e cinco resultados por f rmaco Cada r plica representou uma condi o de teste separada diferenciada por lote de f rmaco SIRE e SIRE Supplement utilizado tr s lotes cada Os isolados que foram determinados como resistentes a estreptomicina isoniazida ou etambutol no teste inicial foram depois testados com a concentrac o de f rmaco elevada excepto as estirpes ATCC Para al m dos isolados resistentes testados foram inclu dos dois isolados sens veis a STR concentrac o cr tica dois isolados sens veis a INH concentra o cr tica e dois isolados sens veis a EM
65. GGG MM MM kraj mjeseca Catalog number Katalogov slo Katalognummer Catalogusnummer Kataloogi number Tuotenumero Num ro catalogue Bestellnummer ApiBu g kataA you Katal gussz m Numero di catalogo Katalogo numeris Numer katalogowy N mero do cat logo Katal gov slo N mero de cat logo KaranoxeH Homep Num r de catalog Katalog numaras Katalo ki broj Homep no katanory Karanor Hemipi Authorized Representative in the European Community Autorizovany z stupce pro Evropskou unii Autoriseret repraesentant i EU Erkend vertegenwoordiger in de Europese Unie Volitatud esindaja Euroopa N ukogus Valtuutettu edustaja Euroopan yhteis ss Repr sentant agr pour la C E E Autorisierte EG Vertretung EfouciodoTnp vos avtimp cwTToG oTny Eupurraikr Koiv rnra Hivatalos k pviselet az Eur pai Uni ban Rappresentante autorizzato nella Comunit europea Jgaliotasis atstovas Europos Bendrijoje Autorisert representant i EU Autoryzowane przedstawicielstwo w Unii Europejskiej Representante autorizado na Uni o Europeia Autorizovany z stupca v Eur pskom spolocenstve Representante autorizado en la Comunidad Europea Auktoriserad representant i EU OTopusmpan npeactasuten B EU Reprezentant autorizat in Uniunea European Avrupa Toplulu u Yetkili Temsilcisi Ovla eni predstavnik u Evropskoj zajednici YnonHoOMO4eHHbIA npeacraBurerb B Espone ckoM coo6uecrae Esp
66. GIT tiquet TC 5 Ensemencement d un tube contenant un antibiotique Pipeter st rilement 0 5 mL de la suspension de microorganismes voir PREPARATION DE L INOCULUM dans chacun des tubes d antibiotique 6 Bien reboucher les tubes M langer soigneusement en renversant d licatement les tubes trois ou quatre fois 7 Entrer le module AST dans l instrument BACTEC MGIT au moyen de la fonction d entr e de module AST se reporter au manuel d utilisation de l instrument BACTEC MGIT S assurer que l ordre des tubes dans le support de module AST est conforme aux d finitions de support de module s lectionn es lors de l ex cution de la fonction d entr e de module AST 8 Strier 0 1 mL de la suspension de microorganismes sur une g lose de Trypticase de soja additionn e de 5 de sang de mouton TSA Il en boite de P tri Enfermer dans un sac plastique Incuber une temp rature comprise entre 35 et 37 C 9 Rechercher la pr sence de contamination bact rienne sur la g lose au sang au bout de 48 h Si la g lose au sang ne pr sente aucune trace de d veloppement bact rien laisser le test AST se poursuivre Si la g lose au sang pr sente un d veloppement bact rien jeter le module AST se reporter au manuel d utilisation de l instrument BACTEC MGIT et r p ter le test avec une culture pure REMARQUE Le test de sensibilit peut tre configur suivant diff rents formats Par exemple un module support 5 tubes
67. GIT 960 SIRE con 4 mL de agua est ril destilada desionizada para preparar una soluci n de reserva de 83 ug mL Reconstituir cada frasco de etambutol liofilizado del kit BACTEC MGIT 960 SIRE con 4 mL de agua est ril destilada desionizada para preparar una soluci n de reserva de 415 ug mL NOTA Los antibi ticos siguientes se reconstituyen con un volumen diferente Si no se utiliza el volumen apropiado de agua destilada est ril para la reconstituci n de las concentraciones altas de antibi tico se invalidar n los resultados de los an lisis Reconstituir cada frasco de estreptomicina liofilizada del kit BACTEC MGIT 960 STR 4 0 con 2 mL de agua est ril destilada desionizada para preparar una soluci n de reserva de 332 ug mL Reconstituir cada frasco de isoniazida liofilizada del kit BACTEC MGIT 960 INH 0 4 con 2 mL de agua est ril destilada desionizada para preparar una soluci n de reserva de 33 2 ug mL Advertencias y precauciones Para uso diagn stico in vitro MUESTRA DE AN LISIS POTENCIALMENTE INFECCIOSA En las muestras cl nicas puede haber microorganismos pat genos como los virus de la hepatitis y el virus de la inmunodeficiencia humana Para la manipulaci n de todos los elementos contaminados con sangre u otros l quidos corporales deben seguirse las Precauciones est ndar 47 y las directrices del centro El trabajo con cultivos de M tuberculosis requiere pr cticas equipo de contenci n e instalaciones de niv
68. GIT 960 SIRE foi avaliado utilizando um painel de isolados de provoca o obtidos junto do Centro de Controlo e Preven o das Doen as dos EUA Centers for Disease Control and Prevention CDC em GA EUA The painel foi constitu do por 30 isolados de M tuberculosis com padr es de sensibilidade conhecidos utilizando MOP No Quadro 1 apresenta se a concord ncia entre os teste de sensibilidade BACTEC MGIT 960 SIRE comparativamente com os resultados esperados do CDC para cada f rmaco Quadro 1 Painel de Provocac o do CDC Teste nos Locais Cl nicos com o BACTEC MGIT 960 MGIT 960 N mero N mero de testado de correctos Correctos STR 1 0 120 111 92 5 INH 0 1 120 119 99 2 RIF 1 0 120 120 100 EMB 5 0 119 111 93 3 STR 4 0 29 29 100 INH 0 4 87 82 94 3 Os isolados resistentes com concentra es cr ticas foram os nicos testados com STR 4 0 e INH 0 4 Teste de Isolados Cl nicos Testou se um total de 106 isolados cl nicos de M tuberculosis com o teste de sensibilidade BACTEC MGIT 960 SIRE e com o teste de sensibilidade MOP Os testes inclu ram isolados cl nicos frescos e de stock provenientes de culturas l quidas e s lidas Tal produziu um total de 195 resultados de teste para o teste de sensibilidade inicial efectuado para estreptomicina isoniazida e rifampicina concentra o cr tica Foi efectuada uma avalia o separada de etambutol a partir de al quotas congeladas dos isolados cl nicos e de stock originais b
69. Jedes R hrchen aseptisch mit 0 8 mL BACTEC MGIT SIRE Supplement beschicken HINWEIS Die Verwendung der mit dem Testkit gelieferten Supplement ist wichtig 3 Mit einer Mikropipette 100 UL der 83 uL mL MGIT STR L sung aseptisch in das entsprechend gekennzeichnete MGIT R hrchen pipettieren 100 uL der 8 3 ug mL MGIT INH L sung aseptisch in das entsprechend gekennzeichnete MGIT R hrchen pipettieren 100 uL der 83 ug mL MGIT RIF L sung aseptisch in das entsprechend gekennzeichnete MGIT R hrchen pipettieren 100 uL der 415 ug mL MGIT EMB L sung aseptisch in das entsprechend gekennzeichnete MGIT R hrchen pipettieren Die Zugabe des korrekten Arzneimittels zum entsprechenden R hrchen ist wichtig Dem MGIT WK R hrchen d rfen keine Antibiotika zugesetzt werden Konzentration des Den MGIT R hrchen Endkonzentration in Arzneimittel Arzneimittels nach zugegebene Volumina den MGIT R hrchen der Rekonstituierung MGIT STR 83 Hg mL 100 uL 1 0 ug mL MGIT INH 8 3 ug mL 100 uL 0 1 ug mL MGIT RIF 83 pg mL 100 uL 1 0 ug mL MGIT EMB 415 pg mL 100 uL 5 0 ug mL Diese Arzneimittel m ssen mit 4 mL sterilem deionisiertem Wasser rekonstituiert werden um die angegebenen Konzentrationen zu erhalten 4 Vorbereitung und Inokulation des Wachstumskontrollr hrchens Zur Zubereitung der 1 100 verd nnten Wachstumskontrollsuspension 0 1 mL der Bakteriensuspension siehe VORBEREITUNG DES INOKULUMS aseptisch in 10 mL sterile Kochsalzl sung pipettieren Di
70. MGIT discordantes foram testados com MOP em dois locais independentes Dos cinco isolados resistentes a STR discordantes R 960 S MOP dois apresentaram resultados de resistente nos dois locais e um apresentou resultados de sens vel nos dois locais Os restantes dois apresentaram resultados de resistente num local e resultados de sens vel no outro local O isolado sens vel a STR discordante S 960 R MOP apresentou resultados de resistente nos dois locais O isolado resistente a INH R 960 S MOP discordante apresentou resultados de sens vel nos dois locais O isolado sens vel a INH discordante S 960 R MOP apresentou resultados de resistente nos dois locais Os tr s isolados sens veis a RIF S 960 R MOP discordantes apresentaram resultados de sens vel nos dois locais O isolado resistente a EMB R 960 S MOP discordante apresentou resultados de resistente nos dois locais Dos cinco isolados sens veis a EMB S 960 R MOP discordantes quatro apresentaram resultados de sens vel nos dois locais O restante isolado apresentou um resultado de resistente num local e um resultado de sens vel no outro local No Quadro 4 apresentam se os resultados dos testes com isolados cl nicos para estreptomicina e isoniazida concentra o elevada de culturas de origem l quidas No Quadro 5 apresentam se os resultados dos testes com isolados cl nicos para estreptomicina e isoniazida concentra o elevada de culturas de origem s lidas 60 Qua
71. Porcentaje acumulado interpretado por TA Number of SIR AST Sets Interpreted by TIP Nombre de modules AST SIR interpr t s par TDP Anzahl ausgewerteter SIR AST Ans tze nach TZ Numero di set AST SIR interpretati mediante TIP N mero de conjuntos AST de SIR interpretados por TIP N mero de conjuntos de AST SIR interpretados por TA Number of EMB AST Sets Interpreted by TIP Nombre de modules AST EMB interpr t s par TDP Anzahl ausgewerteter EMB AST Ans tze nach TZ Numero di set AST EMB interpretati mediante TIP N mero de conjuntos AST de EMB interpretados por TIP N mero de conjuntos de AST EMB interpretados por TA Cumulative SIR Interpreted SIR cumulatifs interpr t s Kumulative Prozentzahl ausgewerteter SIR cumulativa di SIR interpretata Percentagem cumulativa de SIR interpretada Porcentaje acumulado de SIR interpretado Cumulative EMB Interpreted EMB cumulatifs interpr t s Kumulative Prozentzahl ausgewerteter EMB cumulativa di EMB interpretata Percentagem cumulativa de EMB interpretada Porcentaje acumulado de EMB interpretado 75 Manufacturer Vyrobce Producent Fabrikant Tootja Valmistaja Fabricant Hersteller KaraokeuaorT c Gy rt Ditta produttrice Gamintojas Producent Fabricante V robca Tillverkare Mponssoanten Produc tor retici Proizvo a NponsBogurenb Arxapytubi Use by Spotrebujte do Anvendes for Houdbaar tot Kasutada enne V
72. Revisions SO 0191 5 Rev from Rev to ECO 2009 11 2010 10 5571 10 Notes 1 BD Cat Number 245123 245125 245126 245157 2 Blank Sheet Size Length 7 7 8 Width 8 5 Number of Pages 80 Number of Sheets 20 Page Size Length 7 7 8 Width 4 1 4 Final Folded Size 7 7 8 x 4 1 4 Style see illustrations below 5 p HEADER HEADER sl ni DER 3 4 HEADER mA E 5 6 7 See Specification Control Number N A for Material Information Ink Colors Printed two sides x Yes We No of Colors 1 PMS Black Graphics are approved by Becton Dickinson and Company Supplier has the responsibility for using the most current approved revision level Label Design COMPANY CONFIDENTAL THIS DOCUMENT IS Mm BD Becton Dickinson and Company THE PROPERTY OF BECTON DICKINSON AND RI 7 Lovetoni Circle Proofer COMPANY AND IS NOT TO BE USED OUTSIDE THE COMPANY WITHOUT WRITTEN PERMISSION Sparks MD 21152 USA Category and Description Sheet 1 of 81 Part Number Package Insert A 8008200 BACTEC MGIT 960 SIRE Kit Scale N A Checked By BD BACTEC MGIT 960 SIRE Kits For the Antimycobacterial Susceptibility Testing of Mycobacterium tuberculosis English pages 1 11 Italiano pagine 37 49 8008200 Fran ais pages 12 24 Portugu s p ginas 49 61 2010 10 Deutsch Seiten 24 37 Espa ol p ginas 62 74 Pokyny v m poskytne mistni z stupce spole nosti BD Kontakt den l
73. T 960 STR 4 0 Testkit mit 2 mL sterilem destilliertem deionisiertem Wasser rekonstituieren um eine Stamml sung von 332 ug mL herzustellen Jedes Fl schchen lyophilisiertes Isoniazid im BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Testkit mit 2 mL sterilem destilliertem deionisiertem Wasser rekonstituieren um eine Stamml sung von 33 2 ug mL herzustellen Katalase Ols ure Rinderalbumin Dextrose 26 Warnungen und VorsichtsmaBnahmen In vitro Diagnostikum POTENTIELL INFEKTI SE TESTPROBE Klinische Proben k nnen pathogene Mikroorganismen wie z B Hepatitis Viren und HIV enthalten Beim Umgang mit allen mit Blut oder anderen K rperfl ssigkeiten kontaminierten Artikeln sind die Allgemeinen Vorsichtsma nahmen 47 sowie die einschl gigen Institutionsrichtlinien zu beachten Beim Umgang mit M tuberculosis Kulturen sind Laborpraktiken Sicherheitsvorkehrungen und anlagen der Biosicherheitsstufe 3 erforderlich Die Anleitungen in allen zutreffenden Packungsbeilagen einschlie lich des BBL MGIT 7 mL Indikatorr hrchens f r Mykobakterienwachstum durchlesen und befolgen R hrchen und Fl schchen vor Gebrauch auf Anzeichen von Kontamination oder Besch digung untersuchen R hrchen oder Fl schchen die unbrauchbar erscheinen verwerfen R hrchen die fallengelassen wurden sorgf ltig untersuchen Bei Anzeichen von Besch digungen das betreffende R hrchen verwerfen Beim Bruch eines R hrchens 1 Ger teschubl
74. ac o para o Teste de sensibilidade dos BACTEC MGIT 960 STR 4 0 e INH 0 4 Kits Recomenda se que se se verificar alguma resist ncia na concentrac o cr tica seja efectuado um teste com perfil de sensibilidade o qual no m nimo testa a concentrac o elevada do f rmaco qual houve uma resist ncia inicial do isolado Fonte do Isolado O isolado utilizado neste teste deve ser preparado conforme descrito em PREPARA O DO IN CULO Um tubo de sementeira poder ser preparado a partir do tubo de Controlo do Crescimento sem f rmaco do conjunto AST do isolado previamente testado inoculando 0 5 mL para um tubo MGIT de 7 mL novo contendo Suplemento de Crescimento BACTEC MGIT Logo que o tubo de sementeira seja positivo no instrumento prossiga conforme descrito em PREPARA O DO IN CULO Prepara o a partir de um Tubo Positivo MGIT 1 Identifique um n mero suficiente de tubos MGIT de 7 mL para que o isolado de teste tenha um tubo MGIT de CC Controlo do Crescimento e um tubo de f rmaco MGIT para cada anti microbiano testado Coloque os tubos na sequ ncia correcta no suporte do conjunto AST de tamanho apropriado consulte o Manual do Utilizador do Instrumento BACTEC MGIT 2 Adicione de forma ass ptica 0 8 mL de BACTEC MGIT SIRE Supplement a cada tubo NOTA importante usar o suplemento fornecido com o conjunto 3 Pipete de forma ass ptica utilizando uma micropipeta 100 uL da solu o do f rmaco para o t
75. ace the tubes in the correct sequence in the appropriate size AST Set Carrier see BACTEC MGIT Instrument User s Manual 2 Aseptically add 0 8 mL of BACTEC MGIT SIRE Supplement to each tube NOTE It is important to use the supplement supplied with the kit 3 Aseptically pipet using a micropipet 100 uL of the drug solution to the appropriately labeled MGIT tube It is important to add the correct drug to the corresponding tube No antibiotics should be added to the MGIT GC tube Concentration of Volume Added to Final Concentration Drug Drug after MGIT Tubes for Test in MGIT Tubes Reconstitution MGIT STR 4 0 332 pg mL 100 uL 4 0 ug mL MGIT INH 0 4 33 2 ug mL 100 uL 0 4 ug mL These drugs must be reconstituted using 2 mL sterile deionized water to achieve concentrations indicated 4 Growth Control tube preparation and inoculation Aseptically pipet 0 1 mL of the organism suspension see INOCULUM PREPARATION into 10 mL of sterile saline to prepare the 1 100 Growth Control suspension Mix the Growth Control suspension 5 thoroughly Inoculate 0 5 mL of the 1 100 Growth Control suspension into the MGIT tube labeled GC 5 Drug containing tube inoculation Aseptically pipet 0 5 mL of the organism suspension see INOCULUM PREPARATION into each of the drug tubes 6 Tightly recap the tubes Mix tubes thoroughly by gentle inversion three to four times 7 Enter the AST set into the BACTEC MGIT instrument using the AST se
76. act rias consulte o folheto informativo do BBL MGIT 7 mL O tubo do MGIT cont m um composto fluorescente embebido em silicone no fundo de um tubo de 16 x 100 mm com base redonda O composto fluorescente sens vel presen a de oxig nio dissolvido no caldo A concentra o inicial de oxig nio dissolvido atenua a emiss o proveniente do composto tornando poss vel detectar um reduzido grau de fluoresc ncia Subsequentemente microrganismos com prolifera o e respira o activa consomem o oxig nio o que permite que o composto desenvolva fluoresc ncia O BACTEC MGIT 960 SIRE Kit um teste qualitativo com 4 a 13 dias de dura o O teste baseia se no crescimento de isolados de M tuberculosis num tubo contendo f rmaco que comparado com um tubo isento de f rmaco Controlo do Crescimento O instrumento BACTEC MGIT monitoriza os tubos relativamente a um aumento da fluoresc ncia A an lise da fluoresc ncia no tubo contendo f rmaco comparativamente com a fluoresc ncia presente no tubo de Controlo de Crescimento usada pelo instrumento para determinar os resultados da sensibilidade O instrumento BACTEC MGIT interpreta estes resultados automaticamente e reporta um resultado de sens vel ou resistente 50 REAGENTES O BACTEC MGIT 960 SIRE Kit cont m um frasco liofilizado de cada um dos seguintes antibi ticos estreptomicina isoniazida rifampicina e etambutol e oito frascos de SIRE Supplement Suplemento SIRE F r
77. adas en el procedimiento MP con el fin de evitar resultados falsos de sensibilidad Esto es m s evidente con estreptomicina para la que muchas cepas aisladas se encuentran pr ximas a la concentraci n cr tica recomendada conforme al procedimiento MP Por este motivo se desarroll una segunda concentraci n m s alta para estreptomicina e isoniazida Se puede informar un resultado de sensibilidad a la concentraci n cr tica sin necesidad de realizar m s an lisis Las cepas aisladas resistentes a la concentraci n cr tica de estreptomicina isoniazida y o etambutol deben analizarse a una concentraci n m s alta del antibi tico con el sistema BACTEC MGIT o con un m todo alternativo En este caso puede informarse un resultado final de resistencia a la concentraci n cr tica con un aviso de que se est n realizando an lisis adicionales a una concentraci n m s alta 62 Es importante analizar a una concentraci n m s alta las cepas aisladas resistentes con el fin de identificar las cepas que presentan una resistencia de bajo grado es decir resistencia a la concentraci n cr tica y sensibilidad a la concentraci n alta Las concentraciones altas previstas en el sistema BACTEC MGIT eran inferiores a las concentraciones utilizadas en el procedimiento MP Con este dise o del sistema BACTEC MGIT un resultado de resistencia especialmente para estreptomicina puede no asociarse siempre a un resultado de resistencia a la concentraci n alta e
78. aden schlie en 2 Ger t ausschalten 3 betroffenen Bereich unverz glich verlassen 4 vom Labor empfohlene Ma nahmen ergreifen Ein undichtes bzw zerbrochenes inokuliertes R hrchen kann ein Mykobakterien Aerosol erzeugen entsprechende Richtlinien zur Handhabung beachten Alle inokulierten MGIT R hrchen vor dem Verwerfen autoklavieren VORBEREITUNG DES INOKULUMS Alle nachstehenden Vorbereitungsschritte m ssen mit Reinkulturen von M tuberculosis durchgef hrt werden Das jeweilige Labor mu anhand geeigneter Identifizierungsmethoden best tigen da das zu testende Isolat eine Reinkultur von M tuberculosis ist Das Inokulum kann aus festen Medien oder aus einem positiven BACTEC MGIT 7 mL R hrchen vorbereitet werden Au erdem k nnen in fl ssigen und festen Medien angelegte Kulturen zur Vorbereitung eines MGIT Inokulumr hrchens verwendet werden Dieses kann anschlie end wiederum zur Vorbereitung des Inokulums genutzt werden Die einzelnen M glichkeiten werden weiter unten beschrieben Vorbereitung des Inokulums aus festen Medien HINWEIS Das Inokulum mu in bereinstimmung mit den nachstehenden Anleitungen vorbereitet werden um die ordnungsgem e Organismenkonzentration f r die Empfindlichkeitspr fung zu erhalten 1 Ein steriles 16 5 x 128 mm R hrchen mit Kappe das 8 10 Glasperlen enth lt mit 4 mL BBL Middlebrook 7H9 Bouillon oder BBL MGIT Bouillon beschicken 2 Von einer bis zu 14 Tage alten Kultur m g
79. ally takes from 4 to 12 days It is based on the production of radioactive 14C labeled carbon dioxide by the growing mycobacteria manifested by a Growth Index increase in the system Historically the Method of Proportion MOP procedure has included susceptibility testing of M tuberculosis using two concentrations of antimicrobials The Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI formerly NCCLS continues to recommend that the MOP test procedure include two concentrations of the primary drugs for testing except rifampin The recommended low concentrations for the MOP procedure are the critical concentrations for these drugs The critical concentration is defined as the drug concentration that allows the interpretation of a result as either resistant or susceptible An isolate is determined resistant if 1 or more of the test population grows in the presence of the critical concentration of the drug The high drug concentration is used to profile the degree of resistance within the population This result provides information to the physician to assist in determining whether a modification to the therapy regimen is necessary The BACTEC MGIT 960 SIRE test provides the susceptibility result in approximately the same time frame as the BACTEC 460TB System In addition this method is non radiometric and allows appropriate susceptibility results to be reported earlier in most cases than the MOP procedure The BACTEC MGIT 960 SIRE test was devel
80. alutazione iniziale sono stati streptomicina isoniazide e rifampicina Per l etambutolo stata eseguita una valutazione a parte 46 Riproducibilit del test La riproducibilit del test BACTEC MGIT 960 SIRE stata valutata presso i centri clinici utilizzando un pannello di dieci isolati qualificati inclusi vari isolati resistenti a ciascuno dei farmaci risultati dei test BACTEC MGIT 960 SIRE sono stati confrontati con i risultati attesi La riproducibilit complessiva per ciascun farmaco alla concentrazione critica del 98 9 per STR 99 7 per INH 99 2 per RIF e 97 5 per EMB La riproducibilit presso i singoli centri rientrata in un range da 89 9 a 100 per i risultati combinati dei farmaci alla concentrazione critica La riproducibilit complessiva per ciascun farmaco alla concentrazione elevata del 99 7 per STR 4 0 e del 95 6 per INH 0 4 La riproducibilit presso i singoli centri rientrata in un range da 92 2 a 10096 per i risultati combinati dei farmaci alla concentrazione elevata Test con pannello CDC di confronto Le prestazioni del test di sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE sono state valutate utilizzando un pannello con isolati di confronto ottenuto dai Centers for Disease Control and Prevention CDC GA USA Il pannello era costituito da trenta isolati di M tuberculosis con pattern di sensibilit accertati con il metodo delle proporzioni testati da ciascun centro clinico La tabella 1 illustra la
81. and ethambutol and eight vials of SIRE Supplement Approximate Formula Per Vial Lyophilized drug Streptomycin 332 ug Approximate Formula Per Vial Lyophilized drug Isoniazid 33 2 ug Approximate Formula Per Vial Lyophilized drug Rifampin 332 ug Approximate Formula Per Vial Lyophilized drug Ethambutol 1660 ug BACTEC MGIT 960 IR Kit contains one each lyophilized vials of isoniazid and rifampin and four vials of SIRE Supplement Approximate Formula Per Vial Lyophilized drug Isoniazid 33 2 ug Approximate Formula Per Vial Lyophilized drug Rifampin 332 ug BACTEC MGIT 960 STR 4 0 Kit contains one vial lyophilized streptomycin and two vials of SIRE Supplement Approximate Formula Per Vial Lyophilized drug Streptomycin 664 ug BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Kit contains one vial lyophilized isoniazid and two vials of SIRE Supplement Approximate Formula Per Vial Lyophilized drug Isoniazid 66 4 ug BACTEC MGIT 960 SIRE Supplement contains 20 mL Middlebrook OADC enrichment Approximate Formula Per L Purified Water Bovine albumin Catalase Dextrose si Oleic Acid Adjusted and or supplemented as required to meet performance criteria Storage and reconstitution of reagents BACTEC MGIT 960 SIRE Drug vials On receipt store the lyophilized drug vials at 2 8 C Once reconstituted the antibiotic solu
82. anos o tubo dever ser descartado Em caso de quebra do tubo 1 Fechar as gavetas do instrumento 2 Desligar o instrumento 3 Desocupar a rea de imediato 4 Consultar as normas da institui o CDC Um tubo inoculado que apresente fugas ou se encontre partido pode produzir aeross is de micobact rias o frasco dever ser manipulado de forma apropriada Submeter todos os tubos MGIT inoculados ao autoclave antes de proceder ao seu descarte PREPARA O DO IN CULO Todas as prepara es que se descrevem em baixo devem ser provenientes de culturas puras de M tuberculosis O laborat rio dever confirmar atrav s de t cnicas de identifica o adequadas que o isolado a testar consiste numa cultura pura de M tuberculosis O in culo pode ser preparado a partir de meio s lido ou de um tubo positivo BACTEC MGIT de 7 mL Para al m disso as culturas desenvolvidas em meios l quidos e em meios s lidos podem ser utilizadas para preparar um tubo de sementeira MGIT o qual poder ser utilizado para preparar o in culo Cada uma destas op es descrita em seguida Prepara o do In culo a partir de Meios S lidos NOTA importante preparar o in culo de acordo com as instru es que se seguem para obter a concentra o de microrganismos adequada para o teste de sensibilidade 1 Adicionar 4 mL de BBL Middlebrook 7H9 Broth ou meio l quido BBL MGIT a um tubo est ril de 16 5 x 128 mm com tampa contendo 8 a 10 esfera
83. arse con un m todo alternativo para confirmar el resultado Repetir el an lisis No se requiere ninguna acci n No se requiere ninguna acci n Repetir el an lisis LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO El an lisis de sensibilidad con el sistema BACTEC MGIT no interpreta la sensibilidad de la cepa aislada analizada Los resultados se informan como S sensible o R resistente para el antibi tico y la concentraci n analizados El an lisis BACTEC MGIT 960 SIRE se desarroll con concentraciones cr ticas de estreptomicina isoniazida rifampicina y etambutol ligeramente inferiores a las concentraciones cr ticas utilizadas en el procedimiento MP con el fin de evitar resultados falsos de sensibilidad El an lisis de las concentraciones m s altas conforme a las recomendaciones mejorar la capacidad de detectar cepas aisladas con una resistencia de bajo grado Los an lisis de sensibilidad con el sistema BACTEC MGIT s lo pueden realizarse con un instrumento BACTEC MGIT Los conjuntos de AST no pueden leerse manualmente S lo deben utilizarse cultivos puros de M tuberculosis No deben analizarse cultivos que est n contaminados o que contengan varias cepas de micobacterias ya que pueden producir resultados err neos No se recomienda el an lisis directo de muestras cl nicas Se debe permitir que las suspensiones preparadas a partir de medios s lidos reposen durante el tiempo prescrito antes de realizar la estandarizaci n
84. ato sensibile presso entrambi i centri L isolato RIF resistente discorde R 960 S Metodo delle proporzioni risultato resistente presso entrambi i centri tre isolati EMB resistenti discordi R 960 S Metodo delle proporzioni sono risultati sensibili presso entrambi i centri Dei tre risultati EMB sensibili discordi S 960 R Metodo delle proporzioni due sono risultati sensibili presso entrambi i centri e uno risultato resistente presso un centro e sensibile presso l altro Tabella 3 Risultati di isolati clinici Test BACTEC MGIT 960 AST confrontato al metodo delle proporzioni su isolati da terreni di coltura solidi Metodo delle Sistema MGIT 960 AST proporzioni FAR Concen Concen Risultati di sensibilit Risultati di resistenza MACO trazione S R trazione N di di N di di concordanze concordanza concordanze concordanza 95 CI 95 CI STR 20ugmlL 70 29 1 0 pg mL 65 93 28 97 84 98 82 100 INH O 2pug mL 63 36 0 1 pg mL 62 98 35 97 92 100 86 100 RIF 1 0 ug mL 70 29 1 0 ug mL 70 100 26 90 95 100 73 98 EMB 5 0ug mL 87 25 5 0 ug mL 86 99 20 80 94 100 59 93 Tutti gli isolati con risultati MGIT discordi sono stati testati con il metodo delle proporzioni presso due centri indipendenti Dei cinque isolati STR resistenti discordi R 960 S Metodo delle proporzioni due sono risultati resistenti presso entrambi i centri e uno risultato sensibile presso entrambi i centri Gli altri due sono risultati resist
85. atrav s de invers o ou com vortex 2 Diluir a 1 100 com adi o de 0 1 mL de cultura a 10 mL de Meio L quido BBL Middlebrook 7H9 ou Meio L quido BBL MGIT Homogeneizar bem 3 Adicionar 0 5 mL desta suspens o a um tubo MGIT de 7 mL suplementado com 0 8 mL de Suplemento de Crescimento BACTEC MGIT 4 Tapar firmemente e homogeneizar suavemente com 2 a 3 invers es 5 Introduzir o tubo num instrumento BACTEC MGIT e efectuar o teste at obter um positivo NOTA O tempo at positividade deve ser gt 4 dias para a utiliza o como in culo AST Se o tubo ficar positivo em lt 4 dias regressar ao passo 1 e preparar um novo tubo de sementeira 6 Este tubo poder ent o ser utilizado dentro de 1 a 5 dias ap s obter a positividade Consulte Prepara o do In culo a partir de um Tubo Positivo BACTEC MGIT de 7 mL acima Prepara o de um Tubo de Sementeira MGIT a partir de Meio S lido 1 Raspar o crescimento de um tubo inclinado com uma ansa est ril e adicionar a um tubo MGIT de 7 mL suplementado com 0 8 mL de Suplemento de Crescimento BACTEC MGIT 2 Tapar firmemente e homogeneizar suavemente com 2 a 3 invers es 3 Introduzir o tubo num instrumento BACTEC MGIT e efectuar o teste at obter um positivo NOTA O tempo at positividade deve ser gt 4 dias para a utiliza o como in culo AST Se o tubo ficar positivo em lt 4 dias regressar ao passo 1 e preparar um novo tubo de sementeira 4 Este tubo po
86. au st rile d sionis e afin d obtenir les concentrations indiqu es 4 Pr paration et ensemencement du tube de t moin de croissance Pipeter st rilement 0 1 mL de la suspension de microorganismes voir PREPARATION DE L INOCULUM dans 10 mL de s rum physiologique st rile afin de pr parer une suspension de t moin de croissance au 1 100 M langer soigneusement la suspension de t moin de croissance Ensemencer 0 5 mL de la suspension de t moin de croissance au 1 100 dans le tube MGIT tiquet TC 5 Ensemencement d un tube contenant un antibiotique Pipeter st rilement 0 5 mL de la suspension de microorganismes voir PREPARATION DE L INOCULUM dans chacun des QUATRE tubes d antibiotique restants STR INH RIF EMB 6 Bien reboucher les tubes M langer soigneusement en renversant d licatement les tubes trois ou quatre fois 7 Entrer le module AST dans l instrument BACTEC MGIT en utilisant la fonction d entr e de module AST se reporter au manuel d utilisation de l instrument BACTEC MGIT S assurer que l ordre des tubes dans le support de module AST est conforme aux d finitions de support de module s lectionn es lors de l ex cution de la fonction d entr e de module AST 8 Strier 0 1 mL de la suspension de microorganismes sur une g lose de Trypticase de soja additionn e de 5 de sang de mouton TSA Il en bo te de P tri Enfermer dans un sac plastique Incuber une temp rature comprise entre 35 et
87. cen Resultados de sensibilidad Resultados de resistencia bi tico traci n S R traci n N de de N de de concordancias concordancia concordancias concordancia 95 CI 95 CI STR 20gyg mL 70 29 1 0 pg mL 65 93 28 97 84 98 82 100 INH 0 22ug mL 63 36 0 1 ug mL 62 98 35 97 92 100 86 100 RIF 1 0 Hg mL 70 29 1 0 pg mL 70 100 26 90 95 100 73 98 EMB 5 0ug mL 87 25 5 0 ug mL 86 99 20 80 94 100 59 93 Todas las cepas aisladas con resultados discordantes en el MGIT se analizaron por medio del procedimiento MP en dos centros independientes De las cinco cepas aisladas resistentes a STR con resultados discordantes R 960 S MP dos tuvieron resultados de resistencia en ambos centros y una tuvo resultados de sensibilidad en ambos centros Las otras dos cepas tuvieron resultados de resistencia en un centro y resultados de sensibilidad en el otro La cepa aislada sensible a STR con resultados discordantes S 960 R MP tuvo resultados de resistencia en ambos centros La cepa aislada resistente a INH con resultados discordantes R 960 S MP tuvo resultados de sensibilidad en ambos centros La cepa aislada sensible a INH con resultados discordantes S 960 R MP tuvo resultados de resistencia en ambos centros Las tres cepas aisladas sensibles a RIF con resultados discordantes S 960 R MP tuvieron resultados de sensibilidad en ambos centros La cepa aislada resistente a EMB con resultados discordantes R 960 S MP tuvo resultados de
88. centrazione finale Farmaco farmaco dopo la nelle provette MGIT nelle provette MGIT ricostituzione per il test MGIT STR 4 0 332 yg mL 100 uL 4 0 ug mL MGIT INH 0 4 33 2 ug mL 100 uL 0 4 ug mL Per ottenere le concentrazioni indicate ricostituire i farmaci con 2 mL di acqua sterile deionizzata 4 Preparazione e inoculo della provetta del Controllo di crescita Per preparare la sospensione 1 100 del Controllo di crescita pipettare in asepsi 0 1 mL di sospensione di batteri vedi PREPARAZIONE DELL INOCULO in 10 mL di soluzione fisiologica sterile Mescolare accuratamente la sospensione di Controllo di crescita Inoculare 0 5 mL della sospensione 1 100 di Controllo di crescita in una provetta MGIT con etichetta GC 5 Inoculo delle provette contenenti farmaco Pipettare in asepsi 0 5 mL di sospensione di batteri vedi PREPARAZIONE DELL INOCULO in ognuna delle provette con farmaco 6 Chiudere bene le provette con il tappo Mescolare accuratamente capovolgendo con attenzione le provette tre o quattro volte 7 Introdurre il set AST nello strumento BACTEC MGIT usando la funzione di ingresso del set AST vedi il Manuale d uso dello strumento BACTEC MGIT Accertarsi che la disposizione delle provette nel carrello per il set AST sia conforme alle definizioni del carrello selezionate all attivazione della funzione di ingresso del set AST 8 Seminare 0 1 mL di sospensione di batteri su una piastra di agar soia Trypticase con 5 di
89. ci n salina est ril para preparar la suspensi n 1 100 de control de crecimiento Mezclar bien la suspensi n de control de crecimiento Inocular 0 5 mL de la suspensi n 1 100 de control de crecimiento en el tubo MGIT que tiene la etiqueta GC 5 Inoculaci n de los tubos que contienen antibi ticos con una pipeta transferir as pticamente 0 5 mL de la suspensi n de microorganismos v ase PREPARACI N DEL IN CULO a cada uno de los tubos de antibi tico 6 Volver a cerrar bien los tubos Mezclar bien los tubos invirti ndolos suavemente entre tres y cuatro veces 7 Introducir el conjunto de AST en el instrumento BACTEC MGIT utilizando la funci n de introducci n del conjunto de AST v ase el Manual del usuario del instrumento BACTEC MGIT Al utilizar la funci n de introducci n del conjunto de AST es preciso asegurarse de que el orden de los tubos en el transportador del conjunto de AST coincide con las definiciones seleccionadas para el transportador 8 Extender 0 1 mL de la suspensi n de microorganismos en una placa de agar soja Trypticase con 5 de sangre de carnero TSA Il Colocar la placa dentro de una bolsa de pl stico Incubar a 35 37 C 9 Inspeccionar la placa de agar sangre a las 48 h en busca de contaminaci n bacteriana Si la placa de agar sangre no muestra crecimiento continuar el an lisis AST Si la placa de agar sangre muestra crecimiento desechar el conjunto de AST v ase el Manual del usuario
90. ci sono due Il primo conosciuto come metodo delle proporzioni utilizza Agar Middlebrook e Cohn 7H10 e confronta i conteggi delle colonie presenti su terreni contenenti e su terreni senza farmaci La resistenza ad un farmaco viene rilevata quando l 1 o pi della popolazione batterica risulta resistente alla concentrazione del farmaco testato In genere i risultati si ottengono dopo 21 giorni di incubazione Il secondo metodo noto come metodo della sensibilit radiometrica BACTEC 460TB 3 richiede generalmente da 4 a 12 giorni ed basato sulla produzione di anidride carbonica radioattiva marcata con 14C da parte dei micobatteri in crescita Tale produzione evidenziata da un aumento dell indice di crescita nel sistema Tradizionalmente il metodo delle proporzioni prevedeva l impiego di due concentrazioni di antibiotici per il test di sensibilit di Mycobacterium tuberculosis Il Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI gi NCCLS consiglia tuttora di impiegare nella procedura di analisi con il metodo delle proporzioni due concentrazioni di farmaci primari eccetto la rifampicina Le concentrazioni basse consigliate per la procedura con il metodo delle proporzioni corrispondono alle concentrazioni critiche per tali farmaci Si definisce come critica la concentrazione di farmaco che permette di interpretare un risultato come indicativo di resistenza o di sensibilit Un isolato viene considerato resistente quando l 1 o pi della po
91. cionadas para el transportador 8 Extender 0 1 mL de la suspensi n de microorganismos en una placa de agar soja Trypticase con 5 de sangre de carnero TSA Il Colocar la placa dentro de una bolsa de pl stico Incubar a 35 37 C 9 Inspeccionar la placa de agar sangre a las 48 h en busca de contaminaci n bacteriana Si la placa de agar sangre no muestra crecimiento continuar el an lisis AST Si la placa de agar sangre muestra crecimiento desechar el conjunto de AST v ase el Manual del usuario del instrumento BACTEC MGIT y repetir el an lisis con un cultivo puro 66 Procedimiento de inoculaci n para el an lisis de sensibilidad con los kits BACTEC MGIT 960 STR 4 0 e INH 0 4 Si se produce resistencia a la concentraci n cr tica se recomienda realizar un an lisis del perfil de sensibilidad que al menos analice la concentraci n alta del antibi tico a la que la cepa aislada mostr resistencia originalmente Fuente de la cepa aislada la cepa aislada utilizada para este an lisis debe haberse preparado conforme a las instrucciones descritas en PREPARACI N DEL IN CULO Se puede preparar un tubo de siembra a partir del tubo de control de crecimiento del conjunto de AST previamente analizado de la cepa aislada mediante la inoculaci n de 0 5 mL en un nuevo tubo MGIT de 7 mL que contenga el suplemento para crecimiento BACTEC MGIT 960 Una vez que el tubo de siembra sea registrado como positivo por el instrumento proce
92. cl nicos com localiza es geogr ficas diversas constitu dos por centros regionais de refer ncia e laborat rios baseados em hospitais universit rios incluindo um local estrangeiro O teste de sensibilidade BACTEC MGIT 960 SIRE foi comparado com o m todo de teste de sensibilidade M todo de Propor o MOP 2 A avalia o inicial incluiu os f rmacos estreptomicina isoniazida e rifampicina Foi efectuada uma avalia o separada para o f rmaco etambutol Teste de Reprodutibilidade A reprodutibilidade do teste de sensibilidade BACTEC MGIT 960 SIRE foi avaliada nos locais cl nicos utilizando um painel de dez isolados qualificados incluindo v rios isolados resistentes a cada um dos f rmacos Os resultados do teste BACTEC MGIT 960 SIRE foram comparados com os resultados esperados A reprodutibilidade global para cada f rmaco com a concentrac o cr tica de 98 9 para STR 99 7 para INH 99 2 para RIF e 97 5 para EMB Os resultados de reprodutibilidade dos locais individuais oscilaram entre 89 9 e 100 para os resultados combinados da concentrac o cr tica do f rmaco A reprodutibilidade global para cada f rmaco com a concentrac o elevada de 99 7 para STR 4 0 e de 95 6 para INH 0 4 Os resultados de reprodutibilidade dos locais individuais oscilaram entre 92 2 e 100 para os resultados combinados da concentrac o elevada do f rmaco Teste do Painel de Provocac o do CDC O desempenho do teste de sensibilidade BACTEC M
93. contenant l antibiotique celui obtenu sur milieu sans antibiotique La r sistance un antibiotique est d tect e lorsque 1 ou plus d une population bact rienne est r sistante la concentration d antibiotique test Les r sultats sont g n ralement disponibles apr s 21 jours d incubation La seconde m thode connue sous le nom de m thode de sensibilit radiom trique BACTEC 460TB3 prend g n ralement de 4 12 jours Elle est bas e sur la production de dioxyde de carbone radiomarqu au 14C lors de la croissance des mycobact ries telle qu indiqu e par une augmentation de l index de croissance dans le syst me Historiquement la m thode des proportions MOP a consist en un test de sensibilit de Mycobacterium tuberculosis utilisant deux concentrations d antimicrobiens Le Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI anciennement NCCLS Commission de normes de laboratoires d analyses m dicales aux Etats Unis continue recommander l emploi de deux concentrations pour tester la sensibilit aux principaux antibiotiques except e la rifampicine par la m thode des proportions MOP Les basses concentrations recommand es pour cette m thode correspondent aux concentrations critiques de ces antibiotiques La concentration critique est d finie comme la concentration de l antibiotique qui permet l interpr tation du r sultat comme r sistant ou sensible Un isolat est d termin comme r sistant si 1 ou plus de la p
94. d e de pr paration d un module AST partir d une croissance bact rienne sur milieu solide jusqu 14 jours utilise une dilution au 1 5 de la suspension de microorganismes quivalente un standard de McFarland 0 5 Des tudes internes montrent que les inoculum pr par s partir d une culture sur milieu solide comptent 1 4 x 105 2 4 x 106 CFU mL Reproductibilit de lot La reproductibilit de lot a t valu e en utilisant vingt cinq isolats de M tuberculosis pour inclure cinq souches ATCC Chaque test BACTEC MGIT 960 SIRE la concentration d antibiotique critique a t effectu en triple exemplaire pour un total de 75 r sultats par antibiotique Chaque r p tition de test repr sentait une condition de test distincte diff renci e par les lots d antibiotique SIRE et de suppl ment SIRE utilis s trois lots chacun Les isolats d termin s comme r sistants la streptomycine l isoniazide ou l thambutol lors du test initial ont t test s la concentration plus lev e d antibiotique l exception des souches ATCC En plus des isolats r sistants test s deux isolats sensibles la STR concentration critique deux isolats sensibles l INH concentration critique et deux isolats sensibles l EMB concentration critique ont t inclus dans le test du profil de sensibilit Les r sultats obtenus taient compar s aux r sultats attendus La reproductibilit globale pour chacun des antibio
95. de AST y comenzar de nuevo Si no se utiliza el suplemento SIRE en el conjunto de AST pueden obtenerse resultados inexactos NO agregue suplemento de crecimiento BACTEC MGIT al conjunto de AST VALORES PREVISTOS Se analiz un total de 106 cepas cl nicas de M tuberculosis con el an lisis de sensibilidad BACTEC MGIT 960 SIRE en cuatro centros de diferente localizaci n geogr fica El an lisis incluy cepas aisladas de reserva y cepas cl nicas reci n aisladas a partir de cultivos l quidos y s lidos Se realiz un total de 200 an lisis de sensibilidad cultivos l quidos y s lidos a las concentraciones cr ticas de estreptomicina STR isoniazida INH y rifampicina RIF y un total de 223 an lisis de sensibilidad cultivos l quidos y s lidos a la concentraci n cr tica de etambutol EMB durante an lisis diferentes El tiempo medio global transcurrido hasta la obtenci n del resultado para el an lisis de sensibilidad BACTEC MGIT 960 SIRE es de siete a ocho d as con un intervalo de cuatro a catorce d as Los datos se muestran en la Figura 1 al final del prospecto CARACTER STICAS DE RENDIMIENTO Estudios anal ticos Intervalos de in culos de AST de medios l quidos y s lidos Medios l quidos el procedimiento recomendado para preparar un conjunto de AST a partir de un tubo MGIT de 7 mL positivo utiliza un in culo directo los d as 1 y 2 despu s del registro de positividad y un in culo diluido 1 5 los d as 3 a 5
96. de control de crecimiento para determinar los resultados de sensibilidad El instrumento BACTEC MGIT interpreta autom ticamente estos resultados e informa un resultado de sensibilidad o resistencia REACTIVO El kit BACTEC MGIT 960 SIRE contiene frascos individuales de estreptomicina isoniazida rifampicina y etambutol liofilizados y ocho frascos de suplemento SIRE F rmula aproximada por frasco de antibi tico liofilizado estreptomicina 332 ug F rmula aproximada por frasco de antibi tico liofilizado isoniazida ug F rmula aproximada por frasco de antibi tico liofilizado rifampicina ug F rmula aproximada por frasco de antibi tico liofilizado etambutol ug El kit BACTEC MGIT 960 IR contiene un frasco de isoniazida y un de rifampicina liofilizados y cuatro frascos de suplemento SIRE F rmula aproximada por frasco de antibi tico liofilizado Isoniazida F rmula aproximada por frasco de antibi tico liofilizado Rifampicina 33 2 ug 332 ug El kit BACTEC MGIT 960 STR 4 0 contiene un frasco de estreptomicina liofilizada y dos frascos de suplemento SIRE F rmula aproximada por frasco de antibi tico liofilizado estreptomicina 664 ug El kit BACTEC MGIT 960 INH 0 4 contiene un frasco de isoniazida liofilizada y dos frascos de suplemento SIRE F rmula aproximada por frasco de antibi tico liofilizado isoniazida 66 4 ug El suplemento BACTEC MGIT 960 SIRE c
97. del instrumento BACTEC MGIT y repetir el an lisis con un cultivo puro NOTA El an lisis de sensibilidad puede configurarse en diversos formatos Por ejemplo se puede configurar el sistema para un transportador de cinco tubos que contiene nicamente las concentraciones cr ticas Se pueden configurar otros transportadores de tubos dependiendo de los an lisis de perfil optativos que se est n realizando v ase el Manual del usuario del instrumento BACTEC MGIT Control de calidad del usuario despu s de la entrega de un nuevo env o o n mero de lote de frascos del kit BACTEC MGIT 960 SIRE se recomienda analizar el microorganismo de control indicado a continuaci n El microorganismo de control debe ser un cultivo 67 puro el cual debe prepararse conforme a las instrucciones descritas en PREPARACI N DEL IN CULO El conjunto de AST de control de calidad QC debe prepararse conforme a las instrucciones descritas en Procedimiento de inoculaci n para el an lisis de sensibilidad para los kits de antibi ticos analizados Algunas consideraciones importantes al preparar el conjunto de AST de QC son la correcta reconstituci n de los antibi ticos liofilizados y la correcta diluci n del microorganismo de QC para los tubos de control de crecimiento y de antibi tico Es importante agregar el antibi tico apropiado al tubo con la etiqueta correspondiente El uso del microorganismo de QC pansensible no detectar un antibi tic
98. der ent o ser utilizado dentro de 1 a 5 dias ap s obter a positividade Consulte Prepara o do In culo a partir de um Tubo Positivo BACTEC MGIT de 7 mL acima PROCEDIMENTO Material Fornecido O BACTEC MGIT 960 SIRE Kit cont m um frasco liofilizado de cada um dos f rmacos e oito frascos de SIRE Supplement aproximadamente 40 testes por f rmaco por conjunto O BACTEC MGIT 960 STR 4 0 cont m um frasco de f rmaco liofilizado e dois frascos de SIRE Supplement aproximadamente 20 testes por conjunto e o BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Kit cont m um frasco de cada f rmaco liofilizado e dois frascos de SIRE Supplement aproximadamente 20 testes por conjunto Material Necess rio mas N o Fornecido BBL MGIT 7 mL Mycobacteria Growth Indicator Tubes Tubos Indicadores do Crescimento de Micobact rias BBL MGIT de 7 mL meios de cultura auxiliares reagentes organismos de controlo da qualidade e equipamento de laborat rio necess rio para este procedimento Procedimento de Inocula o para o Teste de sensibilidade do BACTEC MGIT 960 SIRE Kit 1 Identifique cinco tubos MGIT de 7 mL para cada isolado do teste Identifique um tubo como CC Controlo do crescimento um como STR um como INH um como RIF e um como EMB Coloque os tubos na sequ ncia correcta no suporte do conjunto AST de tamanho apropriado consulte o Manual do Utilizador do Instrumento BACTEC MGIT 2 Adicione de forma ass ptica 0 8 mL de BACTEC MGIT SIRE Supplement a cada
99. der conforme a las instrucciones descritas en PREPARACI N DEL IN CULO Preparaci n a partir de un tubo MGIT positivo 1 Etiquetar suficientes tubos MGIT de 7 mL para que la cepa aislada analizada tenga un tubo MGIT GC control de crecimiento y un tubo MGIT de antibi tico para cada antimicrobiano analizado Colocar los tubos en la secuencia correcta en el transportador del tama o apropiado para el conjunto de AST v ase el Manual del usuario del instrumento BACTEC MGIT 2 Agregar as pticamente 0 8 mL de suplemento BACTEC MGIT SIRE a cada tubo NOTA Es importante usar el suplemento suministrado con el kit 3 Con una micropipeta transferir as pticamente 100 uL de la soluci n de antibi tico al tubo MGIT que tiene la etiqueta correspondiente Es importante agregar el antibi tico apropiado al tubo correspondiente No deben agregarse antibi ticos al tubo MGIT GC Concentraci n del Volumen a adido a Concentraci n final Antibi tico antibi tico los tubos MGIT en los tubos MGIT reconstituido para el an lisis MGIT STR 4 0 332 ug mL 100 uL 4 0 ug mL MGIT INH 0 4 33 2 ug mL 100 pL 0 4 ug mL Estos antibi ticos deben reconstituirse utilizando 2 mL de agua est ril desionizada para lograr las concentraciones indicadas 4 Preparaci n e inoculaci n del tubo de control de crecimiento con una pipeta transferir as pticamente 0 1 mL de la suspensi n de microorganismos v ase PREPARACI N DEL IN CULO a 10 mL de solu
100. der einer alternativen Methode erzielt wurde Zur Auswahl der geeigneten Arzneimittel und deren Dosierung sollte der Facharzt f r Lungen oder Infektionskrankheiten der entsprechenden Fachabteilung hinzugezogen werden Bei unerwarteten Resistenzbefunden mu best tigt werden da es sich bei dem getesteten Isolat tats chlich um M tuberculosis handelt Sicherstellen da eine Reinkultur verwendet wurde um das Vorliegen gemischter Mykobakterien usw auszuschlie en Eine Monoresistenz gegen ber Ethambutol ist ungew hnlich und sollte best tigt werden A8 31 Befundbericht f r den BACTEC MGIT 960 SIRE Test bei der kritischen Konzentration MGIT System Ergebnis Arzneimittel MaBnahmen Konzentration Empfohlener Bericht Isolat mit dem BACTEC MGIT System Keine Empfindlich Arzneimittel Konzentration getestet Ma nahmen SIRE Ergebnis empfindlich Isolat mit dem BACTEC MGIT System Testung bei der Resistent Arzneimittel Konzentration getestet h heren SIR Ergebnis resistent Ergebnisse der Konzentration STR Arzneimittel Testung bei h herer und oder INH STR 1 0 ug mL INH 0 1 ug mL RIF 1 0 ug mL Konzentration folgen falls empfohlen EMB 5 0 pg mL durchgef hrt Resistent Falls nicht nur gegen ber Ethambutol EMB Testung bei E EMB resistent Isolat mit dem h herer BACTEC MGIT System Ethambutol Konzentration 5 0 ug mL getestet Ergebnis anhand einer resistent Labor bzgl EMB Testung bei al
101. do com as instru es de PREPARA O DO IN CULO O Conjunto AST de controlo de qualidade CQ deve ser preparado de acordo com as instru es do Procedimento de Inocula o para o Teste de Sensibilidade dos conjuntos de f rmacos que est o a ser testados As considera es importantes quando se prepara o Conjunto de CQ AST consistem na reconstitui o adequada dos f rmacos liofilizados e dilui o adequada do microrganismo de CQ para os tubos de Controlo do Crescimento e f rmacos importante adicionar o f rmaco correcto ao tubo identificado correspondente A utiliza o uso do microrganismo de CQ pan sens vel n o ir detectar o f rmaco incorrecto pipetado para os tubos do Conjunto AST A observa o de resultados correctos conforme aqueles apresentados em baixo num per odo de 4 a 13 dias indica que os BACTEC MGIT 960 SIRE Kits est o prontos a serem utilizados para o teste de isolados de doentes Se n o se observarem resultados adequados repetir o teste Se ap s repeti o do teste ainda n o forem observados resultados adequados n o usar o produto at se ter contactado o o representante local da Becton Dickinson Estirpe GC MGIT STR MGIT INH MGIT RIF MGIT EMB M tuberculosis Positivo Sens vel Sens vel Sens vel Sens vel ATCC 27294 Estirpe GC MGIT STR 4 0 MGIT INH 0 4 M tuberculosis Positivo Sens vel Sens vel ATCC 27294 Dever usar se o mesmo microrganismo de controlo como grupo de CQ sema
102. dro 4 Resultados dos Isolados Cl nicos BACTEC MGIT 960 AST Comparado com o M todo de Proporc o a Partir de Culturas de Origem L quidas M todo de Proporc o Sistema MGIT 960 AST F RMACO Concen Concen Resultados Resultado trac o S R trac o de Sens vel de Resistente Concordantes Concordantes Concord ncia Concord ncia 95 CI 95 CI STR 10 0 pg mL 77 19 4 0 ug mL 73 95 17 90 87 99 67 99 INH 1 0 pg mL 65 31 0 4 ug mL 65 100 29 94 95 100 79 99 Assume um resultado de S para concentrac o elevada do f rmaco MGIT para todos os isolados com resultado de S para concentrac o baixa do f rmaco MGIT Todos os isolados com resultados MGIT discordantes foram testados com MOP em dois locais independentes Os quatro isolados resistentes a STR discordantes R 960 S MOP apresentaram resultados de sens vel nos dois locais Dos dois isolados sens veis a STR discordantes S 960 R MOP um apresentou resultados de sens vel nos dois locais e um apresentou resultados de resistente nos dois locais Dos dois isolados sens veis a INH discordantes S 960 R MOP um apresentou resultados de sens vel nos dois locais e um apresentou resultados de resistente nos dois locais Quadro 5 Resultados dos Isolados Cl nicos BACTEC MGIT 960 AST Comparado com o M todo de Proporc o a Partir de Culturas de Origem S lidas M todo de Proporc o Sistema MGIT 960 AST F RMACO Concen Concen Resultados Resultado trac o S R tra
103. e 1 5 dilution Mix tube thoroughly Use the diluted suspension for the inoculation procedures Proceed to Inoculation Procedure for Susceptibility Test Preparation of a Seed MGIT Tube from Liquid Media 1 Mix the tube by inversion or vortexing 2 Make a 1 100 dilution by adding 0 1 mL of the culture into 10 mL of BBL Middlebrook 7H9 Broth or BBL MGIT Broth Mix well 3 Add 0 5 mL of this suspension into a 7 mL MGIT tube supplemented with 0 8 mL of BACTEC MGIT Growth Supplement 4 Cap tightly and gently mix by inverting 2 3 times 5 Enter the tube into a BACTEC MGIT instrument and test until positive NOTE Time to positivity must be gt 4 days for use as AST inoculum If tube becomes positive in 4 days return to step 1 and prepare a new seed tube 6 This tube may now be used from one to five days following positivity Proceed to Preparation of the Inoculum from a Positive BACTEC MGIT 7 mL Tube above Preparation of a Seed MGIT Tube from Solid Media 1 Using a sterile loop scrape growth from a slant and add to a 7 mL MGIT tube supplemented with 0 8 mL of BACTEC MGIT Growth Supplement Cap tightly and gently mix by inverting 2 3 times 3 Enter the tube into a BACTEC MGIT instrument and test until positive NOTE Time to positivity must be gt 4 days for use as AST inoculum If tube becomes positive in 4 days return to step 1 and prepare a new seed tube 4 This tube may now be used from one to five days following
104. e AST Set into the instrument correctly will result in an anonymous condition that must be resolved within eight hours If condition is not resolved within eight hours the AST Set must be discarded and set up again Failure to use the SIRE Supplement in the AST Set may give inaccurate results DO NOT add BACTEC MGIT Growth Supplement to the AST Set EXPECTED VALUES A total of 106 clinical isolates of M tuberculosis were tested with the BACTEC MGIT 960 SIRE susceptibility test at four geographically diverse sites The testing included both fresh clinical and stock isolates from both liquid and solid culture sources A total of 200 susceptibility tests liquid and solid were performed at the critical concentrations of streptomycin STR isoniazid INH and rifampin RIF and a total of 223 susceptibility tests liquid and solid were performed at the critical concentration of ethambutol EMB during separate testing The overall average time to result for the BACTEC MGIT 960 SIRE susceptibility test is seven to eight days with a range from four to fourteen days The data are shown in Figure 1 at end of insert PERFORMANCE CHARACTERISTICS Analytical Studies Liquid and Solid Media AST Inoculum Ranges Liquid media The recommended procedure for preparing an AST Set from a positive MGIT 7 mL tube uses a direct inoculum on Day 1 and Day 2 post positivity and a dilute 1 5 inoculum on Day 3 to Day 5 post positivity Internal studies show that
105. e M tuberculosis ont t test s avec le test de sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE dans quatre centres investigateurs loign s g ographiquement Les tests incluaient des chantillons cliniques frais et des isolats m res provenant de cultures en milieux liquide et solide Au total 200 tests de sensibilit liquides et solides ont t effectu s aux concentrations critiques de streptomycine STR d isoniazide INH et de rifampicine RIF et 223 tests de sensibilit liquides et solides au total ont t effectu s la concentration critique d thambutol EMB au cours d un test distinct Le d lai moyen global d obtention d un r sultat pour le test de sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE est de sept huit jours sur un intervalle de 4 14 jours Les donn es sont repr sent es la figure 1 voir la fin de la notice CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES tudes analytiques Gammes d inoculum AST pour milieux liquides et solides Milieux liquides La proc dure recommand e de pr paration d un module AST partir d un tube MGIT 7 mL utilise un ensemencement direct le Jour 1 et le Jour 2 suivant la d termination de la positivit est un ensemencement dilu 1 5 les Jours 3 5 suivant la d termination de la positivit Des tudes internes montrent que les inoculum pr par s partir d un tube MGIT 7 mL positif du Jour 1 au Jour 5 comptent 0 8 x 105 3 2 x 105 CFU mL 20 Milieux solides La proc dure recomman
106. e Wachstumskontrollsuspension gr ndlich durchmischen Das mit WK beschriftete MGIT R hrchen mit 0 5 mL der 1 100 verd nnten Wachstumskontrollsuspension inokulieren 5 Inokulation der arzneimittelhaltigen R hrchen 0 5 mL der Bakteriensuspension siehe VORBEREITUNG DES INOKULUMS aseptisch in jedes der VIER verbleibenden R hrchen STR INH RIF EMB pipettieren 6 Die R hrchen wieder fest verschlieBen Den Inhalt der Reagenzgl ser durch drei bis viermaliges vorsichtiges Umdrehen gr ndlich mischen 7 Den AST Ansatz mit Hilfe der AST Eingabefunktion in das BACTEC MGIT Ger t eingeben siehe Benutzerhandbuch des BACTEC MGIT Ger ts Sicherstellen da die Anordnung der R hrchen im AST R hrchenst nder mit der bei der Eingabe gew hlten Konfiguration bereinstimmt 8 0 1 mL der Bakteriensuspension auf einer Trypticase Soja Agarplatte mit 5 96 Schafblut TSA Il ausstreichen Platte in einen Plastikbeutel einschlieBen Bei 35 37 C inkubieren 9 Die Blutagarplatte nach 48 h auf bakterielle Kontamination untersuchen Wenn die Blutagarplatte kein Wachstum aufweist die Empfindlichkeitspr fung fortsetzen Wenn die Blutagarplatte Wachstum aufweist den AST Ansatz verwerfen siehe Benutzerhandbuch des BACTEC MGIT Ger ts und den Test mit einer Reinkultur wiederholen Inokulationsverfahren f r die Empfindlichkeitspr fung mit dem BACTEC MGIT 960 STR 4 0 und INH 0 4 Testkit Wenn bei der kritischen Konzentration eine
107. e giorni Procedere a Preparazione dell inoculo da una provetta BACTEC MGIT 7 mL positiva sopra PROCEDURA Materiale fornito Kit BACTEC MGIT 960 SIRE contenente un flacone di ciascun farmaco liofilizzato e otto flaconi di supplemento SIRE circa 40 test per farmaco in ciascun kit Kit BACTEC MGIT 960 STR 4 0 contenente un flacone di ciascun farmaco liofilizzato e due flaconi di supplemento SIRE circa 20 test per kit e Kit BACTEC MGIT 960 INH 0 4 contenente un flacone di ciascun farmaco liofilizzato e due flaconi di supplemento SIRE circa 20 test per kit Materiali richiesti ma non forniti Provette di indicatore di crescita dei micobatteri BBL MGIT da 7 mL terreni di coltura ausiliari reagenti organismi per il controllo di qualit e attrezzatura di laboratorio necessaria per questa procedura Procedura di inoculo per il test di sensibilit con il kit BACTEC MGIT 960 SIRE 1 Etichettare cinque provette MGIT da 7 mL per ogni isolato da testare Contrassegnarne una come GC Growth Control o Controllo di crescita una come STR una come INH una come RIF e una come EMB Disporre le provette secondo la sequenza corretta nel carrello per set AST di dimensioni appropriate vedi il Manuale d uso dello strumento BACTEC MGIT 2 In ogni provetta dispensare in asepsi 0 8 mL di supplemento BACTEC MGIT SIRE N B E importante usare il supplemento fornito con il kit 3 Con una micropipetta dispensare in asepsi 100 pL di soluzione
108. e sa ynoTpe6a Consulta i instructiunile de utilizare Kullanim Talimatlar na basvurun Pogledajte uputstvo za upotrebu Cm pykoBogcTBo no akcnnyarauw Madganany HYcKaynbirbIMeH TaHbICbIN anbiHbl3 Koristi upute za upotrebu 77 78 79 wi Becton Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks MD 21152 USA 800 638 8663 www bd com ds Benex Limited Rineanna House Shannon Free Zone Shannon County Clare Ireland ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD BD Logo BACTEC BBL MGIT and Trypticase are trademarks of Becton Dickinson and Company 2010 BD
109. e una conferma Nessun referto 44 Intervento Nessun intervento Si raccomanda di effettuare il test ad una concentrazione pi elevata STR e o INH Si raccomanda di effettuare il test con EMB ad una concentrazione piu elevata usando un metodo alternativo Si raccomanda di effettuare il test con EMB sia ad una concentrazione clinica che ad una concentrazione pi elevata usando un metodo alternativo Ripetere il test Sommario dei risultati BACTEC MGIT 960 STR 4 0 e INH 0 4 Farmaco Risultati Referto consigliato Intervento concentrazione sistema MGIT STR 4 0 ug mL Sensibile L isolato stato testato con il Nessun sistema BACTEC MGIT intervento streptomicina da 4 0 ug mL ed risultato sensibile L isolato risultato resistente a 1 0 ug mL e sensibile a 4 0 ug mL indica un basso livello di resistenza alla streptomicina Resistente L isolato stato testato con il sistema Per verificare il BACTEC MGIT streptomicina da 4 0 risultato l isolato ug mL ed risultato resistente deve essere Consultare il laboratorio per ottenere testato con un una conferma metodo alternativo Errore X Nessun referto Ripetere il testo Sensibile L isolato stato testato con il sistema Nessun BACTEC MGIT isoniazide 0 4 ug mL intervento ed risultato sensibile L isolato risultato resistente a 0 1 ug mL e sensibile a 0 4 ug mL indica un bas
110. el de seguridad biol gica BSL 3 El usuario debe leer y seguir las instrucciones contenidas en todos los prospectos correspondientes incluido el tubo indicador de crecimiento micobacteriano BBL MGIT de 7 mL Antes de usarlos el usuario debe revisar los tubos y frascos en busca de indicios de contaminaci n o da o Deben desecharse los tubos o frascos que no parezcan aptos Deben examinarse detenidamente los tubos que se hayan ca do Los tubos que presenten da os deben desecharse En caso de que se rompa un tubo 1 cerrar los cajones del instrumento 2 apagar el instrumento 3 desalojar la zona inmediatamente 4 consultar las normas de su centro o de los CDC Un tubo inoculado que tiene p rdidas o est roto puede producir un aerosol de micobacterias deben observarse las normas de manipulaci n adecuadas Todos los tubos MGIT inoculados deben ser esterilizados en autoclave antes de su eliminaci n PREPARACI N DEL IN CULO Todas las preparaciones detalladas a continuaci n deben realizarse a partir de cultivos puros de M tuberculosis El laboratorio debe confirmar mediante t cnicas de identificaci n apropiadas que la cepa aislada que se va a analizar es un cultivo puro de M tuberculosis El in culo puede prepararse a partir de un medio s lido de un tubo BACTEC MGIT 7 mL positivo Adem s los cultivos que crecen en medios l quidos y s lidos se pueden utilizar para preparar un tubo MGIT de siembra que sirve para preparar e
111. em como de isolados cl nicos prospectivos provenientes de fontes de cultura l quidas e s lidas Tal produziu um total de 223 resultados de teste para o teste de etambutol com a concentra o cr tica No Quadro 2 apresentam se os resultados do teste de isolados cl nicos para cada f rmaco concentra o cr tica a partir de culturas de de origem l quidas No Quadro 3 apresentam se os resultados do teste de isolados cl nicos para cada f rmaco concentra o cr tica a partir de culturas de de origem s lidas 59 Quadro 2 Resultados dos Isolados Cl nicos BACTEC MGIT 960 AST Comparado com o M todo de Proporc o a Partir de Culturas de Origem L quidas Sistema MGIT 960 AST M todo de Proporc o F RMACO Concen Concen Resultados Resultado tra o S R tra o de Sens vel de Resistente Concordantes Concordantes Concord ncia Concord ncia 95 CI 95 CI STR 2 0 pg mL 69 27 1 0 ug mL 62 90 26 96 80 96 81 100 INH 0 2ug mL 59 37 0 1 pg mL 57 97 36 97 88 100 86 100 RIF 1 0 pg mL 72 24 1 0 ug mL 71 99 24 100 93 100 95 100 EMB 5 0 g mL 91 20 5 0 ug mL 88 97 17 85 91 99 62 97 Todos os isolados com resultados MGIT discordantes foram testados com MOP em dois locais independentes Do sete isolados resistentes a STR discordantes R 960 S MOP tr s apresentaram resultados de resistente nos dois locais e um apresentou resultados de sens vel nos dois locais Os restantes tr s apresentaram resultado
112. enen Aliquoten der urspr nglichen klinischen und Stammisolate sowie mit prospektiven klinischen Isolaten aus fl ssigen und festen Kulturmedien durchgef hrt Die Testung von Ethambutol bei der kritischen Konzentration lieferte insgesamt 223 Testergebnisse Tabelle 2 zeigt die Testergebnisse der klinischen Isolate aus fl ssigen Kulturmedien f r jedes Arzneimittel kritische Konzentration Tabelle 3 zeigt die Testergebnisse der kli nischen Isolate aus festen Kulturmedien f r jedes Arzneimittel kritische Konzentration Tabelle 2 Ergebnisse der klinischen Isolate aus fl ssigen Kulturmedien BACTEC MGIT 960 AST im Vergleich zur Proportionsmethode Proportionsmethode MGIT 960 AST System ARZ Konzen Konzen Empfindlich Resistent NEI tration E R tration Anz berein bereinstim Anz berein bereinstim MITTEL stimmung mung 95 VI stimmung mung 95 VI STR 2 0 ug mL 69 27 1 0pg mL 62 90 26 96 80 96 81 100 INH 0 2 pg mL 59 37 0 1 pg mL 57 97 36 97 88 100 86 100 RIF 1 0 ug mL 72 24 10yg mL 71 99 24 100 93 100 95 100 EMB 5 0 pug mL 91 20 5 0ug mL 88 97 17 85 91 99 62 97 Alle Isolate mit diskordanten MGIT Ergebnissen wurden in zwei unabh ngigen Labors anhand der Proportionsmethode getestet Von den sieben diskordanten R 960 E Proportionsmethode STR resistenten Isolaten waren drei in beiden Labors resistent und eines war in beiden Labors empfindlich Die restlichen drei waren in einem Labor resistent und
113. ente Consultar al laboratorio para obtener confirmaci n No generar informe Informe recomendado Cepa aislada analizada con el sistema BACTEC MGIT estreptomicina 4 0 pg mL con resultado de sensibilidad Esta cepa aislada con un resultado de resistencia a 1 0 ug mL y un resultado de sensibilidad a 4 0 ug mL indica una resistencia de bajo grado a estreptomicina Cepa aislada analizada con el sistema BACTEC MGIT estreptomicina 4 0 pg mL con resultado de resistencia Consultar al laboratorio para obtener confirmaci n No generar informe Cepa aislada analizada con el sistema BACTEC MGIT isoniazida 0 4 pg mL con resultado de sensibilidad Esta cepa aislada con un resultado de resistencia a 0 1 g mL y un resultado de sensibilidad a 0 4 pg ml indica una resistencia de bajo grado a isoniazida Cepa aislada analizada con el sistema BACTEC MGIT isoniazida 0 4 ug mL con resultado de resistencia No generar informe 69 Acci n No se requiere ninguna acci n Se recomienda realizar un an lisis a una concentraci n m s alta STR y o INH Se recomienda realizar un an lisis con EMB a una concentraci n m s alta utilizando un m todo alternativo Se recomienda realizar un an lisis con EMB a la concentraci n cr tica y a una concentraci n m s alta con un m todo alternativo Repetir el an lisis Acci n No se requiere ninguna acci n La cepa aislada debe analiz
114. enti presso un centro e sensibili presso l altro L isolato STR sensibile discorde S 960 R Metodo delle proporzioni risultato resistente presso entrambi i centri L isolato INH resistente discorde R 960 S Metodo delle proporzioni risultato sensibile presso entrambi i centri L isolato INH sensibile discorde S 960 R Metodo delle proporzioni risultato resistente presso entrambi i centri tre isolati RIF sensibili discordi S 960 R Metodo delle proporzioni sono risultati sensibili presso entrambi i centri L isolato EMB resistente discorde R 960 S Metodo delle proporzioni risultato resistente presso entrambi i centri Dei cinque isolati EMB sensibili discordi S 960 R Metodo delle proporzioni quattro sono risultati sensibili presso entrambi i centri L altro isolato risultato resistente presso un centro e sensibile presso l altro La Tabella 4 presenta i risultati ottenuti dai test di isolati clinici per streptomicina e isoniazide concentrazione elevata provenienti da terreni di coltura liquidi La Tabella 5 presenta i risultati ottenuti dai test di isolati clinici per streptomicina e isoniazide concentrazione elevata provenienti da terreni di coltura solidi Tabella 4 Risultati di isolati clinici Test BACTEC MGIT 960 AST confrontato al metodo delle proporzioni su isolati da terreni di coltura liquidi Metodo delle Sistema MGIT 960 AST proporzioni FAR Concen Concen Risultati di sensibilit Risultati di r
115. es tre utilis es pour tester des isolats provenant de patients R p ter le test si les r sultats appropri s ne sont pas obtenus Si apr s r p tition du test les r sultats escompt s ne sont toujours pas obtenus ne pas utiliser le produit avant d avoir contact le repr sentant local de Becton Dickinson Souches TC MGIT STR MGIT INH MGIT RIF MGIT EMB M tuberculosis ATCC 27294 Positif Sensible Sensible Sensible Sensible Souches TC MGIT STR 40 MGIT INH 0 4 M tuberculosis ATCC 27294 Positif Sensible Sensible La m me souche de contr le doit tre test e comme contr le de qualit de lot une fois par semaine lorsque le test de sensibilit est effectu Si le contr le de qualit du lot choue ne pas donner les r sultats cliniques pour le s antibiotique s dont le test a chou pour la p riode consid r e R p ter le contr le de qualit pour le s antibiotique s et les isolats cliniques concern s par l chec du contr le de qualit initial Si le nouveau contr le de qualit ne donne pas les r sultats attendus ne pas communiquer les r sultats de patients Ne pas utiliser le produit avant d avoir contact le repr sentant local de Becton Dickinson Lors de l valuation externe des trousses BACTEC MGIT 960 SIRE les causes les plus fr quences d chec du contr le de qualit sont des cultures de CQ contamin es des modules AST sur sous ensemenc s des antibiotiques non ajout s aux tubes correspondants e
116. es laboratoires de CHU parmi lesquels un centre situ l tranger Le test de sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE a t compar au test de sensibilit par la m thode des proportions MOP 2 L valuation initiale incluait les antibiotiques streptomycine isoniazide et rifampicine Une valuation distincte a t effectu e pour l antibiotique thambutol Test de reproductibilit La reproductibilit du test BACTEC MGIT 960 SIRE a t valu e dans les centres investigateurs en utilisant un panel de dix isolats qualifi s parmi lesquels plusieurs isolats r sistants chacun des antibiotiques Les r sultats obtenus avec BACTEC MGIT 960 SIRE ont t compar s aux r sultats attendus La reproductibilit globale pour chacun des antibiotiques la concentration critique est de 98 9 pour STR 99 7 pour INH 99 2 pour RIF et 97 5 pour EMB La reproductibilit pour chacun des sites varie de 89 9 100 pour les r sultats combin s des antibiotiques aux concentrations critiques La reproductibilit globale pour chacun des antibiotiques la concentration lev e est de 99 7 pour STR 4 0 et de 95 6 pour INH 0 4 La reproductibilit pour chacun des sites varie de 92 2 100 pour les r sultats combin s des antibiotiques aux concentrations lev es Test du panel d preuve du CDC Les performances du test de sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE ont t valu es en utilisant un panel d isolats d preuve ob
117. escente fissato in silicone sul fondo di una provetta a base circolare da 16 x 100 mm Il composto fluorescente sensibile all ossigeno dissolto nel brodo La concentrazione iniziale di ossigeno dissolto attenua l emissione dal composto e limita l intensit della fluorescenza rilevabile Successivamente i microrganismi in crescita attiva consumano l ossigeno permettendo cosi una maggiore fluorescenza del composto Il kit BACTEC MGIT 960 SIRE e un test qualitativo di 4 13 giorni Il test basato sul confronto tra la crescita di un isolato di M tuberculosis in una provetta contenente farmaco e in una provetta senza farmaco Controllo di crescita Lo strumento BACTEC MGIT controlla l aumento della fluorescenza nelle provette Per determinare i risultati di sensibilit lo strumento rileva la fluorescenza nella provetta con il farmaco e la confronta con fluorescenza nella provetta del Controllo di crescita Lo strumento BACTEC MGIT interpreta automaticamente i risultati ottenuti e riporta un risultato di sensibilit o di resistenza REAGENTI Il kit BACTEC MGIT 960 SIRE contiene un flacone di polvere liofilizzata di streptomicina uno di isoniazide uno di rifampicina ed uno di etambutolo e otto flaconi di supplemento SIRE Formula approssimata per flacone di farmaco liofilizzato Streptomicina 332 ug Formula approssimata per flacone di farmaco liofilizzato Isoniazide 33 2 Hg Formula approssimata per flacone di farmaco
118. esistenza MACO trazione S R trazione N di di N di di concordanze concordanza concordanze concordanza 95 CI 95 CI STR 10 0ug mL 77 19 4 0 pg mL 73 95 17 90 87 99 67 99 INH 1 0 g mL 65 31 0 4 ug mL 65 100 29 94 95 100 79 99 Presume un risultato MGIT S per farmaco a concentrazione elevata per tutti gli isolati con risultato MGIT S per farmaco a bassa concentrazione Tutti gli isolati con risultati MGIT discordi sono stati testati con il metodo delle proporzioni presso due centri indipendenti quattro isolati STR resistenti discordi R 960 S Metodo delle proporzioni sono risultati sensibili presso entrambi i centri Dei cinque isolati STR sensibili discordi S 960 R Metodo delle proporzioni uno risultato sensibile presso entrambi i centri e uno e risultato resistente presso entrambi i centri Dei due isolati INH sensibili discordi S 960 R Metodo delle proporzioni uno risultato sensibile presso entrambi i centri e uno risultato resistente presso entrambi i centri 48 Tabella 5 Risultati di isolati clinici Test BACTEC MGIT 960 AST confrontato al metodo delle proporzioni su isolati da terreni di coltura solidi Metodo delle Sistema MGIT 960 AST proporzioni FAR Concen Concen Risultati di sensibilit Risultati di resistenza MACO trazione S R trazione N di di N di di concordanze concordanza concordanze concordanza 95 CI 95 CI STR 10 0 pg mL 78 21 4 0 ug mL 73 94 17 81 86 98 58 9
119. ested Important considerations when preparing the QC AST Set are the proper reconstitution of the lyophilized drugs and the proper dilution of the QC organism for the Growth Control and drug tubes It is important to add the appropriate drug to the corresponding labeled tube The use of the pan sensitive QC organism will not detect incorrect drug pipetted into AST Set tubes Observation of the proper results as shown below within 4 13 days indicates that the BACTEC MGIT 960 SIRE Kits are ready for use in testing patient isolates If the proper results are not observed repeat the test If after repeating the test the proper results are still not observed do not use the product until you have contacted Technical Services at 800 638 8663 United States only Strain GC MGIT STR MGIT INH MGIT RIF MGIT EMB M tuberculosis ATCC 27294 Positive Susceptible Susceptible Susceptible Susceptible Strain GC MGIT STR 4 0 MGIT INH 0 4 M tuberculosis ATCC 27294 Positive Susceptible Susceptible The same control organism should be run as batch QC once each week when susceptibility testing is performed If the batch QC fails do not report patient results for the drug s that failed for that testing period Repeat the QC for the drug s and patient isolates affected by the initial QC failure If the repeat QC does not perform as expected do not report patient results Do not use the product until you have contacted Technical Services at 800 638
120. estet Von den f nf diskordanten R 960 E Proportionsmethode STR resistenten Isolaten waren zwei in beiden Labors resistent und eines war in beiden Labors empfindlich Die restlichen zwei waren in einem Labor resistent und im anderen Labor empfindlich Das diskordante E 960 R Proportionsmethode STR empfindliche Isolat war in beiden Labors resistent Das diskordante R 960 E Proportionsmethode INH resistente Isolat war in beiden Labors empfindlich Das diskordante E 960 R Proportionsmethode INH empfindliche Isolat war in beiden Labors resistent Die drei diskordanten E 960 R Proportionsmethode RIF empfindlichen Isolate waren in beiden Labors empfindlich Das diskordante R 960 E Proportionsmethode EMB resistente Isolat war in beiden Labors resistent Von den f nf diskordanten E 960 R Proportionsmethode EMB empfindlichen Isolaten waren vier in beiden Labors empfindlich Das andere Isolat war in einem Labor resistent und im anderen Labor empfindlich Tabelle 4 zeigt die Testergebnisse der klinischen Isolate aus fl ssigen Kulturmedien f r Streptomycin und Isoniazid hohe Konzentration Tabelle 5 zeigt die Testergebnisse der klinischen Isolate aus festen Kulturmedien f r Streptomycin und Isoniazid hohe Konzentration Tabelle 4 Ergebnisse der klinischen Isolate aus fl ssigen Kulturmedien BACTEC MGIT 960 AST im Vergleich zur Proportionsmethode Proportionsmethode MGIT 960 AST System ARZ Konzen Konzen Empfindlich Resiste
121. esteten resistenten Isolaten wurden zwei STR empfindliche kritische Konzentration zwei INH empfindliche kritische Konzentration und zwei EMB empfindliche kritische Konzentration Isolate in den Empfindlichkeitsprofiltest aufgenommen Die erzielten Ergebnisse wurden mit den erwarteten Ergebnissen verglichen Die Gesamtreproduzierbarkeit f r jedes Arzneimittel bei der kritischen Konzentration betrug 96 f r STR 100 f r INH 100 f r RIF und 100 f r EMB Die Gesamtreproduzierbarkeit f r jedes Arzneimittel bei der hohen Konzentration betrug 96 f r STR 4 0 und 100 f r INH 0 4 Testung eines CDC Referenzpanels Die Leistung des BACTEC MGIT 960 SIRE Empfindlichkeitstests wurde anhand eines Panels von Referenzisolaten der CDC Centers for Disease Control and Prevention GA USA beurteilt Das Panel bestand aus drei ig M tuberculosis Isolaten mit bekanntem Empfindlichkeitsmuster unter Anwendung der Proportionsmethode bestimmt Das Panel wurde zweimal mit dem BACTEC MGIT 960 SIRE Empfindlichkeitstest getestet und beide Ergebnisse stimmten berein Die Ergebnisse des BACTEC MGIT 960 SIRE Tests wurden mit den CDC Referenzergebnissen verglichen Die Gesamt bereinstimmung mit den CDC Referenzergebnissen f r jedes Arzneimittel bei der kritischen Konzentration betrug 93 f r STR 100 f r INH 100 f r RIF und 100 f r EMB Die Gesamt bereinstimmung f r jedes Arzneimittel bei der hohen Konzentration betrug 100 f r STR
122. eues Inokulumr hrchen vorbereiten 4 Dieses R hrchen kann nun bis zu f nf Tagen nach Feststellen eines positiven Ergebnisses verwendet werden Mit der oben beschriebenen Vorbereitung des Inokulums aus einem positiven BACTEC MGIT 7 mL R hrchen fortfahren VERFAHREN Mitgelieferte Materialien BACTEC MGIT 960 SIRE Testkit mit je einem Fl schchen der lyophilisierten Arzneimittel sowie acht Fl schchen SIRE Supplement etwa 40 Tests pro Arzneimittel pro Testkit Das BACTEC MGIT 960 STR 4 0 Testkit enth lt je ein Fl schchen lyophilisiertes Arzneimittel und zwei Fl schchen SIRE Supplement etwa 20 Tests pro Kit Das BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Testkit enth lt je ein Fl schchen lyophilisiertes Arzneimittel und zwei Fl schchen SIRE Supplement etwa 20 Tests pro Kit Ben tigtes jedoch nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial BBL MGIT 7 mL Indikatorr hrchen f r Mykobakterienwachstum zus tzliche Kulturmedien Reagenzien Qualit tskontrollorganismen und die f r dieses Verfahren ben tigten Laborutensilien Inokulationsverfahren f r die Empfindlichkeitspr fung mit dem BACTEC MGIT 960 SIRE Testkit 1 F r jedes Testisolat f nf MGIT 7 mL R hrchen beschriften Ein R hrchen mit WK Wachstumskontrolle eines mit STR eines mit INH eines mit RIF und eines mit EMB beschriften Die R hrchen in der richtigen Anordnung in einen AST 28 R hrchenst nder geeigneter Gr e stellen siehe Benutzerhandbuch des BACTEC MGIT Ger ts 2
123. g Dem MGIT WK R hrchen d rfen keine Antibiotika zugesetzt werden Konzentration des Den MGIT R hrchen Endkonzentration in Arzneimittel Arzneimittels nach zugegebene Volumina den MGIT R hrchen der Rekonstituierung MGIT STR 4 0 332 pg mL 100 uL 4 0 pg mL MGIT INH 0 4 33 2 ug mL 100 uL 0 4 ug mL Diese Arzneimittel m ssen mit 2 mL sterilem deionisiertem Wasser rekonstituiert werden um die angegebene Konzentration zu erhalten 4 Vorbereitung und Inokulation des Wachstumskontrollr hrchens Zur Zubereitung der 1 100 verd nnten Wachstumskontrollsuspension 0 1 mL der Bakteriensuspension siehe VORBEREITUNG DES INOKULUMS aseptisch in 10 mL sterile Kochsalzl sung pipettieren Die Wachstumskontrollsuspension gr ndlich durchmischen Das mit MK beschriftete MGIT R hrchen mit 0 5 mL der 1 100 verd nnten Wachstumskontrollsuspension inokulieren 5 Inokulation der arzneimittelhaltigen R hrchen 0 5 mL der Bakteriensuspension siehe VORBEREITUNG DES INOKULUMS aseptisch in jedes der arzneimittelhaltigen R hrchen pipettieren 6 Die R hrchen wieder fest verschlieBen Den Inhalt der Reagenzgl ser durch drei bis viermaliges vorsichtiges Umdrehen gr ndlich mischen 7 Den AST Ansatz mit Hilfe der AST Eingabefunktion in das BACTEC MGIT Ger t eingeben siehe Benutzerhandbuch des BACTEC MGIT Ger ts Sicherstellen da die Anordnung der R hrchen im AST R hrchenst nder mit der bei der Eingabe gew hlten Konfiguration be
124. gique st rile dilution 1 5 Bien m langer le contenu du tube Utiliser la suspension dilu e pour proc der l ensemencement Passer la M thode d ensemencement pour le test de sensibilit Pr paration d un tube MGIT d ensemencement partir de milieux liquides 1 2 Bien m langer le contenu du tube en l inversant ou le passant au vortex Faire une dilution 1 100 en ajoutant 0 1 mL de culture dans 10 mL de bouillon BBL Middlebrook 7H9 Broth ou BBL MGIT Broth Bien m langer Ajouter 0 5 mL de cette suspension dans un tube 7 mL MGIT additionn de 0 8 mL de suppl ment de croissance BACTEC MGIT Boucher herm tiquement et m langer en inversant 2 3 fois Placer le tube dans un instrument BACTEC MGIT et tester jusqu obtenir un r sultat positif REMARQUE Le d lai pour obtenir un r sultat positif doit tre 2 4 jours pour pouvoir servir comme inoculum AST Si le tube devient positif en 4 jours revenir l tape 1 et pr parer un nouveau tube d ensemencement Ce tube peut d sormais tre utilis d un cinq jours apr s tre devenu positif Passer la Pr paration de l inoculum partir d un tube BACTEC MGIT 7 mL positif d crite ci dessus Pr paration d un tube MGIT d ensemencement partir de milieux solides 1 A l aide d une anse d ensemencement st rile pr lever un peu de culture d une culture inclin e et l ajouter un tube 7 mL MGIT additionn de 0 8 mL de suppl ment de c
125. gni flacone di polvere liofilizzata di streptomicina del kit BACTEC MGIT 960 STR 4 0 con 2 mL di acqua distillata deionizzata sterile per ottenere una soluzione stock di 332 ug mL Ricostituire ogni flacone di polvere liofilizzata di isoniazide del kit BACTEC MGIT 960 INH 0 4 con 2 mL di acqua distillata deionizzata sterile per ottenere una soluzione stock di 33 2 ug mL Avvertenze e precauzioni Per uso diagnostico in vitro CAMPIONI DI ANALISI POTENZIALMENTE INFETTI campioni clinici possono contenere microrganismi patogeni inclusi i virus dell epatite e il virus dell immunodeficienza umana Nel maneggiare qualsiasi oggetto contaminato con sangue o altri liquidi biologici occorre attenersi alle direttive del presidio locale e alle precauzioni standard 47 Quando si lavora con una coltura in crescita di M tuberculosis necessario attenersi alle procedure di sicurezza biologica BSL di livello 3 e disporre di attrezzature e recipienti conformi alle misure di contenimento Leggere e seguire le istruzioni contenute nei fogli illustrativi contenuti nelle rispettive confezioni compreso quello della provetta di indicatore di crescita dei micobatteri BBL MGIT da 7 mL Prima dell uso esaminare le provette e i flaconi per accertarsi che non siano contaminati o danneggiati Eliminare le provette e i flaconi che risultano non idonei Esaminare con attenzione le provette cadute ed eliminarle se risultano danneggiate In caso di rottu
126. ht ber das urspr ngliche Verfallsdatum hinaus aufbewahrt werden Aufgetaute L sungen m ssen sofort verwendet werden Nicht verwendete Anteile verwerfen BACTEC MGIT SIRE Supplement Nach Erhalt bei 2 8 C im Dunkeln aufbewahren Nicht einfrieren oder erhitzen Vor dem Verfallsdatum ffnen und verwenden Vor Lichteinwirkung sch tzen Gebrauchsanleitung Jedes Fl schchen lyophilisiertes Streptomycin im BACTEC MGIT 960 SIRE Testkit mit 4 mL sterilem destilliertem deionisiertem Wasser rekonstituieren um eine Stamml sung von 83 ug mL herzustellen Jedes Fl schchen lyophilisiertes Isoniazid im BACTEC MGIT 960 SIRE Testkit mit 4 mL sterilem destilliertem deionisiertem Wasser rekonstituieren um eine Stamml sung von 8 3 ug mL herzustellen Jedes Fl schchen Iyophilisiertes Rifampin im BACTEC MGIT 960 SIRE Testkit mit 4 mL sterilem destilliertem deionisiertem Wasser rekonstituieren um eine Stamml sung von 83 ug mL herzustellen Jedes Fl schchen lyophilisiertes Ethambutol im BACTEC MGIT 960 SIRE Testkit mit 4 mL sterilem destilliertem deionisiertem Wasser rekonstituieren um eine Stamml sung von 415 pg mL herzustellen HINWEIS Die folgenden Reagenzien werden mit einer anderen Wassermenge rekonstituiert Wenn zur Rekonstituierung der h heren Arzneimittelkonzentrationen nicht die korrekte Menge sterilen destillierten Wassers verwendet wird sind die Testergebnisse ung ltig Jedes Fl schchen lyophilisiertes Streptomycin im BACTEC MGI
127. ibu do no Brasil por Becton Dickinson Ind strias Cir rgicas Ltda Rua Cyro Correia Pereira 550 Curitiba Paran Brasil CNPJ 21 551 379 0013 31 Servi o de Suporte Tecnico 11 5185 9961 Registro ANVISA n 10033430440 Centro de Relacionamento com o Cliente 0800 0555 654 61 BD Kit BACTEC MGIT 960 SIRE Para el an lisis de sensibilidad antimicobacteriana de Mycobacterium tuberculosis Espafiol USO PREVISTO El kit BACTEC MGIT 960 SIRE es un procedimiento cualitativo r pido para el an lisis de la sensibilidad de Mycobacterium tuberculosis obtenida en cultivo a estreptomicina STR isoniazida INH rifampicina RIF y etambutol EMB Los kits BACTEC MGIT 960 STR 4 0 y BACTEC MGIT 960 INH 0 4 est n dise ados para el an lisis a concentraciones m s altas del antibi tico Los kits para an lisis de sensibilidad BACTEC MGIT 960 se utilizan con los sistemas BACTEC MGIT 960 y BACTEC MGIT 320 RESUMEN Y EXPLICACI N El an lisis de sensibilidad antimicobacteriana es til para el tratamiento adecuado de pacientes con tuberculosis Por lo general el tratamiento antituberculoso consiste en una polifarmacoterapia que incluye los antibi ticos antimicobacterianos estreptomicina isoniazida rifampicina y etambutol Es importante que los antibi ticos antimicobacterianos recetados presenten la actividad apropiada frente a Mycobacterium tuberculosis es decir que la cepa aislada sea sensible al antibi tico Recientemen
128. iimeink ytt p iv A utiliser avant Verwendbar bis Huepopnia Afgng Felhaszn lhat s g d tuma Usare entro Naudokite iki Brukes for Stosowa do Utilizar em Pou ite do Usar antes de Anv nd f re Manonaaaitre no A se utiliza pana la Son kullanma tarihi Upotrebiti do Wenonb3oBarb no Depin na nanaHyra Upotrijebiti do YYYY MM DD YYYY MM MM end of month RRRR MM DD RRRR MM MM konec m s ce AAAA MM DD AAAA MM MM slutning af m ned JJJJ MM DD JJJJ MM MM einde maand AAAA KK PP AAAA KK KK kuu l pp VVVV KK PP VVVV KK kuukauden loppuun menness AAAA MM JJ AAAA MM MM fin du mois JJJJ MM TT JJJJ MM MM Monatsende EEEE MM HH EEEE MM MM t Aoc rou priva HH NN HH HH h nap utols napja AAAA MM GG AAAA MM MM fine mese MMMM MM DD MMMM MM MM m nesio pabaiga AAAA MN DD AAAA MM MM slutten av m neden RRRR MM DD RRRR MM MM koniec miesiaca AAAA MM DD AAAA MM MM fim do m s RRRR MM DD RRRR MM MM koniec mesiaca aaaa mm dd aaaa mm mm fin del mes AAAA MM DD AAAA MM MM slutet p m naden TTFT MM TTTT MM MM kpas Ha meceua AAAA LL ZZ AAAA LL LL sf rsitul lunii YYYY AA GG YYYY AA AA ay n sonu GGGG MM DD GGGG MM MM kraj meseca TTFT MM A FTTT MM MM koHeu mecaua HOKHOK AA KK HOIOIOK AA AA alinielH COHbI GGGG MM DD G
129. ine geringe Resistenz dieses Isolats gegen ber Isoniazid hin Resistent Isolat mit dem BACTEC MGIT System Keine Isoniazid bei 0 4 g mL getestet MaBnahmen Ergebnis resistent Fehler X Kein Bericht Test wiederholen 32 VERFAHRENSBESCHR NKUNGEN Der BACTEC MGIT System Empfindlichkeitstest beurteilt nicht den Empfindlichkeitsgrad des getesteten Isolats Die Ergebnisse werden entweder als S empfindlich oder R resistent f r das getestete Arzneimittel und die Konzentration ausgegeben Bei der Entwicklung des BACTEC MGIT 960 SIRE Tests wurden die kritischen Konzentrationen f r Streptomycin Isoniazid Rifampin und Ethambutol etwas niedriger angesetzt als die kritischen Konzentrationen der Proportionsmethode um zu vermeiden da Isolate f lschlicherweise als empfindlich beurteilt werden Die empfohlene Testung der h heren Konzentrationen verbessert den Nachweis von Isolaten mit geringer Resistenz Die BACTEC MGIT System Empfindlichkeitstests k nnen nur auf einem BACTEC MGIT Ger t durchgef hrt werden Die AST Ans tze k nnen nicht manuell abgelesen werden Nur Reinkulturen von M tuberculosis verwenden Kontaminierte Kulturen oder Kulturen mit mehreren Mykobakterien Spezies k nnen zu falschen Ergebnissen f hren und sollten nicht getestet werden Die direkte Testung von klinischen Proben wird nicht empfohlen Aus festen Medien zubereitete Suspensionen m ssen sich vor der Standardisierung die vorgeschriebene Zei
130. ing Drug concentration STR 1 0 ug mL INH 0 1 ug mL RIF 1 0 ug mL EMB 5 0 ug mL MGIT System result Susceptible SIRE Resistant SIR Resistant E Error X Recommended Report Isolate tested with BACTEC MGIT System drug concentration and result is susceptible Isolate tested with BACTEC MGIT System drug concentration and result is resistant Results of testing drug at a higher concentration to follow if tested If resistant to more than ethambutol EMB Isolate tested with BACTEC MGIT System Ethambutol 5 0 pg mL and result is resistant Consult laboratory for testing EMB at a higher concentration If mono resistant to ethambutol EMB Isolate tested with BACTEC MGIT System Ethambutol 5 0 pg mL and result is resistant Mono resistance to ethambutol is uncommon Consult laboratory for confirmation No report BACTEC MGIT 960 STR 4 0 and INH 0 4 result reporting Drug concentration STR 4 0 ug mL INH 0 4 ug mL LIMITATIONS OF THE PROCEDURE MGIT System result Susceptible Resistant Error X Susceptible Resistant Error X Recommended Report Isolate tested with BACTEC MGIT System streptomycin 4 0 ug mL and result is susceptible This isolate with a resistant result at 1 0 ug mL and a susceptible result at 4 0 ug mL indicates low level resistance to streptomycin Isolate tested with BACTEC MGIT Sy
131. inocula prepared from a Day 1 to Day 5 positive MGIT 7 mL tube range between 0 8 x 105 to 3 2 x 105 CFU mL Solid media The recommended procedure for preparing an AST Set from growth on solid media up to 14 days uses a 1 5 dilution of an organism suspension equivalent to a 0 5 McFarland Standard Internal studies show that inocula prepared from solid medium culture range between 1 4 x 105 to 2 4 x 108 CFU mL Lot Reproducibility Lot reproducibility was evaluated using twenty five M tuberculosis isolates to include five ATCC strains Each BACTEC MGIT 960 SIRE test at the critical drug concentration was performed in triplicate for a total of seventy five results per drug Each replicate represented a separate test condition differentiated by lot of SIRE drug and SIRE Supplement used three lots each Those isolates that were determined resistant to streptomycin isoniazid or ethambutol in the initial test were then tested with the high drug concentration except the ATCC strains In addition to the resistant isolates tested two sensitive isolates to STR critical concentration two sensitive isolates to INH critical concentration and two sensitive isolates to EMB critical concentration were included in the susceptibility profile test Observed results were compared to the expected results The overall reproducibility for each drug at the critical concentration is 96 for STR 100 for INH 100 for RIF and 100 for EMB The overal
132. ire el crecimiento del agar inclinado y a dalo a un tubo MGIT de 7 mL suplementado con 0 8 mL de suplemento para crecimiento BACTEC MGIT Cierre bien y mezcle suavemente invirtiendo 2 a 3 veces Ponga el tubo en el instrumento BACTEC MGIT y analice hasta obtener un resultado positivo NOTA El tiempo necesario hasta lograr la positividad debe de ser igual o superior a 4 d as para su uso como in culo AST Si el tubo se vuelve positivo antes de que transcurran 4 d as vuelva al paso 1 y prepare un nuevo tubo de siembra Proceda a utilizar este tubo durante uno a cinco d as despu s de la positividad Contin e con el apartado anterior Preparaci n del in culo a partir de un tubo BACTEC MGIT de 7 mL positivo 65 PROCEDIMIENTO Material suministrado kit BACTEC MGIT 960 SIRE con un frasco de cada antibi tico liofilizado y ocho frascos de suplemento SIRE se obtienen aproximadamente 40 an lisis con cada antibi tico del kit kit BACTEC MGIT 960 STR 4 0 con un frasco de cada antibi tico liofilizado y dos frascos de suplemento SIRE aproximadamente 20 an lisis por kit y kit BACTEC MGIT 960 INH 0 4 con un frasco de cada antibi tico liofilizado y dos frascos de suplemento SIRE aproximadamente 20 an lisis por kit Materiales necesarios pero no suministrados tubos indicadores de crecimiento micobacteriano BBL MGIT de 7 mL medios de cultivo auxiliares reactivos microorganismos para el control de calidad y el equipo de laborato
133. isladas sensibles a INH concentraci n cr tica y dos cepas aisladas sensibles a EMB concentraci n cr tica Se compararon los resultados observados con los resultados previstos La reproducibilidad global para cada antibi tico a la concentraci n cr tica es del 96 para STR el 100 para INH el 100 para RIF y el 100 para EMB La reproducibilidad global para cada antibi tico a la concentraci n alta es del 96 para STR 4 0 y del 100 para INH 0 4 An lisis del panel de referencia de los CDC El rendimiento del an lisis de sensibilidad BACTEC MGIT 960 SIRE se evalu por medio de un panel de cepas aisladas de referencia obtenido de los Centers for Disease Control and Prevention CDC Georgia EE UU El panel estaba constituido por treinta cepas aisladas de M tuberculosis con patrones de sensibilidad conocidos por medio del procedimiento MP Se analiz el panel dos veces con el sistema de an lisis de sensibilidad BACTEC MGIT 960 SIRE y ambos resultados coincidieron Se compararon los resultados del an lisis BACTEC MGIT 960 SIRE con los resultados previstos conforme a los CDC La concordancia global con los resultados previstos conforme a los CDC para cada antibi tico a la concentraci n cr tica es del 93 para STR el 100 para INH el 100 para RIF y el 100 para EMB La concordancia global con los resultados previstos conforme a los CDC para cada antibi tico a la concentraci n alta es del 100 para STR 4 0 y del
134. istentes essencial para um tratamento eficaz do doente Existem dois m todos que t m sido amplamente usados no teste da sensibilidade anti micobacteriana O primeiro m todo conhecido como o M todo de Proporc o utiliza Agar de Middlebrook e Cohn 7H10 Compara a contagem de col nias entre meios contendo f rmaco e meios isentos de f rmaco A resist ncia a um f rmaco detectada quando uma percentagem de 1 ou mais da popula o bacteriana resistente 49 concentrac o do f rmaco que est a ser testado Normalmente os resultados est o dispon veis ap s 21 dias de incuba o O segundo m todo conhecido como o m todo de sensibilidade radiom trica BACTEC 460TB3 tem geralmente uma durac o de 4 a 12 dias Baseia se na produ o de di xido de carbono radioactivo marcado com 14C por parte das micobact rias em desenvolvimento o que se manifesta por um aumento do ndice de crescimento no sistema Historicamente o procedimento de M todo de Proporc o MOP incluiu o teste de sensibilidade do M tuberculosis utilizando duas concentrac es de antimicrobianos O Instituto de Normas Laboratoriais e Cl nicas Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI anteriormente NCCLS continua a recomendar que o procedimento MOP inclua duas concentrac es dos f rmacos prim rios para teste excepto a rifampina Geralmente as concentra es baixas recomendadas para o procedimento MOP s o concentra es cr ticas para estes f r
135. kobakterien finden zwei Methoden breite Anwendung Bei der ersten Methode als Proportionsmethode bekannt wird Middlebrook und Cohn 7H10 Agar verwendet Dabei werden Koloniezahlen auf 24 Medien mit und ohne Arzneimittel verglichen Resistenz gegen ein Arzneimittel ist nachgewiesen wenn mindestens 1 der Bakterienpopulation gegen die im Test verwendete Arzneimittelkonzentration resistent ist Ergebnisse liegen im allgemeinen nach 21t giger Inkubation vor Die zweite Methode als BACTEC 460TB radiometrische Empfindlichkeitsmethode3 bekannt dauert normalerweise 4 bis 12 Tage Diese Methode beruht auf der Produktion von radioaktivem 14C markiertem Kohlendioxid durch die wachsenden Mykobakterien was durch die Zunahme des Wachstumsindex im System angezeigt wird Bei der Proportionsmethode wird die Empfindlichkeitspr fung von Mycobacterium tuberculosis herk mmlicherweise mit zwei Antibiotikakonzentrationen durchgef hrt Das Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI ehemals NCCLS empfiehlt weiterhin bei Anwendung der Proportionsmethode zwei Konzentrationen der Prim rarzneimittel auBer Rifampin zu verwenden Die f r die Proportionsmethode empfohlenen niedrigen Konzentrationen sind die kritischen Konzentrationen f r diese Arzneimittel Die kritische Konzentration ist die Arzneimittelkonzentration bei der ein Isolat entweder als resistent oder empfindlich eingestuft werden kann Ein Isolat wird als resistent eingestuft wenn mindeste
136. l farmaco al quale l isolato era risultato originariamente resistente Provenienza dell isolato L isolato usato per questo test deve essere preparato come descritto in PREPARAZIONE DELL INOCULO Per preparare una provetta di semina dalla provetta senza farmaco del Controllo di crescita proveniente dal set AST dell isolato precedentemente analizzato possibile inoculare 0 5 mL di questo isolato in una nuova provetta MGIT da 7 mL contenente il supplemento di crescita BACTEC MGIT Non appena la provetta di semina diventa positiva procedere come descritto in PREPARAZIONE DELL INOCULO Preparazione da una provetta positiva MGIT 1 Etichettare un numero sufficiente di provette MGIT da 7 mL in modo che per l isolato da testare sia disponibile una provetta MGIT GC Controllo di crescita e una provetta MGIT di farmaco per ogni antibiotico da analizzare Disporre le provette secondo la sequenza corretta nel carrello per set AST di dimensioni appropriate vedi il Manuale d uso dello strumento BACTEC MGIT 2 In ogni provetta dispensare in asepsi 0 8 mL di supplemento BACTEC MGIT SIRE N B importante usare il supplemento fornito con il kit 3 Con una micropipetta dispensare in asepsi 100 uL della soluzione di farmaco nella provetta MGIT con l etichetta appropriata importante dispensare il farmaco corretto nella provetta corrispondente Nella provetta MGIT GC non vanno aggiunti antibiotici Concentrazione del Volume dispensato Con
137. l in culo Cada una de estas opciones se describen a continuaci n Preparaci n del in culo aislado a partir de medios s lidos NOTA Es importante preparar el in culo conforme a las instrucciones presentadas a continuaci n para obtener la concentraci n apropiada del microorganismo para el an lisis de sensibilidad 1 Agregar 4 mL de caldo BBL Middlebrook 7H9 o caldo BBL MGIT a un tubo est ril de 16 5 x 128 mm con tap n que contiene 8 10 microesferas de vidrio 2 Con un asa esterilizada separar el mayor n mero posible de colonias de un cultivo de 14 d as como m ximo procurando evitar recoger medio s lido Poner en suspensi n las colonias en el caldo Middlebrook 7H9 3 Agitar la suspensi n en un agitador Vortex durante 2 3 min para dispersar los grumos m s grandes La turbidez de la suspensi n debe superar el patr n 1 0 de McFarland 4 Dejar que la suspensi n repose durante 20 min sin moverla 64 Transferir el l quido sobrenadante a otro tubo est ril de 16 5 x 128 mm con tap n evitar transferir parte del sedimento y dejar reposar durante otros 15 min Transferir el l quido sobrenadante ste debe estar homog neo sin grumos a un tercer tubo est ril de 16 5 x 128 mm NOTA En este paso la suspensi n del microorganismo debe ser superior al patr n 0 5 de McFarland Ajustar la suspensi n a un patr n 0 5 de McFarland mediante comparaci n visual con el patr n de turbidez 0 5 de McFarland No aj
138. l reproducibility for each drug at the high concentration is 96 for STR 4 0 and 100 for INH 0 4 8 CDC Challenge Panel Testing The performance of the BACTEC MGIT 960 SIRE susceptibility test was evaluated using a panel of challenge isolates obtained from the Centers for Disease Control and Prevention CDC GA USA The panel consisted of thirty isolates of M tuberculosis with known susceptibility patterns using MOP The panel was tested twice with the BACTEC MGIT 960 SIRE susceptibility test and both results were in agreement The BACTEC MGIT 960 SIRE results were compared to the CDC expected results The overall agreement with CDC expected results for each drug at the critical concentration is 93 for STR 100 for INH 100 for RIF and 100 for EMB The overall agreement with CDC expected results for each drug at the high concentration is 100 for STR 4 0 and 100 for INH 0 4 Clinical Evaluation The BACTEC MGIT 960 SIRE susceptibility test was evaluated at four geographically diverse clinical sites composed of regional reference centers and university hospital based laboratories including one foreign site The BACTEC MGIT 960 SIRE susceptibility test was compared to the Method of Proportion MOP susceptibility test method The initial evaluation included the drugs streptomycin isoniazid and rifampin A separate evaluation was performed for the drug ethambutol Reproducibility Testing The reproducibility of the BACTEC MGIT 96
139. laci n excesiva o insuficiente de los conjuntos de AST la adici n de antibi ticos a los tubos incorrectos y errores del instrumento RESULTADOS El instrumento BACTEC MGIT controlar los conjuntos de AST hasta que se obtenga una determinaci n de resistencia o sensibilidad Una vez completado el an lisis del conjunto los resultados son informados por el instrumento BACTEC MGIT v ase el Manual del usuario del instrumento BACTEC MGIT El instrumento BACTEC MGIT informar el resultado de un conjunto de AST como Error X sin interpretaci n de la sensibilidad en ciertas situaciones que podr an influir en los resultados del an lisis Las situaciones que podr an dar lugar a un resultado de Error X se describen en el Manual del usuario del instrumento BACTEC MGIT secci n 7 Resoluci n de problemas Al informar los resultados es importante incluir el m todo de an lisis el nombre y la concentraci n del antibi tico y si el resultado se ha obtenido con el sistema BACTEC MGIT o con un m todo alternativo Debe consultarse al especialista de Neumolog a o Enfermedades Infecciosas especializado en el control de la tuberculosis con respecto al tratamiento y la posolog a apropiados En caso de obtener resultados de resistencia inesperados comprobar la identificaci n de la cepa aislada analizada como M tuberculosis Es preciso asegurarse de que se ha utilizado exclusivamente un cultivo puro hay que descartar la presencia de mezclas de
140. lat test Les r sultats sont donn s comme S sensible ou R r sistant pour l antibiotique et la concentration test s Le test BACTEC MGIT 960 SIRE a t mis au point avec des concentrations critiques de streptomycine d isoniazide de rifampicine et d thambutol l g rement inf rieures aux concentrations critiques utilis es dans la m thode des proportions afin d viter de faux r sultats de sensibilit Le test des concentrations plus lev es comme recommand augmente la probabilit de d tecter des isolats qui pr sentent un faible niveau de r sistance Les tests de sensibilit du syst me BACTEC MGIT ne peuvent tre effectu s qu au moyen d un instrument BACTEC MGIT Les modules AST ne peuvent pas tre lus manuellement Utiliser uniquement des cultures pures de M tuberculosis Les cultures contamin es ou qui contiennent des souches multiples de mycobact ries peuvent donner des r sultats erron s et ne doivent pas tre test es Le test direct partir d chantillons cliniques n est pas recommand Il faut laisser reposer les suspensions r alis es partir de milieux solides pendant les temps prescrits avant la normalisation Les pr parations d inoculum r alis es partir de milieux solides doivent tre compar es visuellement au standard de turbidit McFarland 0 5 pour ne pas risquer de produire des r sultats inexacts ou d entra ner une erreur de module AST Le fait de ne pas utiliser la diluti
141. lichst viele Kolonien mit einer sterilen se abschaben und dabei nach M glichkeit kein festes Medium mitaufnehmen Die Kolonien in der Middlebrook 7H9 Bouillon suspendieren 3 Suspension 2 3 min in einem Vortexmischer mischen um gr ere Klumpen aufzubrechen Die Suspension sollte eine Tr bung von ber 1 0 McFarland aufweisen Suspension 20 min ungest rt stehen lassen 5 Den berstand in ein weiteres steriles 16 5 x 128 mm R hrchen mit Kappe berf hren dabei Uberf hren des Sediments vermeiden und weitere 15 min stehen lassen 6 Den berstand der gleichm ig aussehen und keine Klumpen enthalten sollte in ein drittes steriles 16 5 x 128 mm R hrchen berf hren HINWEIS Die Bakteriensuspension sollte bei diesem Schritt eine Tr bung von ber 0 5 McFarland aufweisen 7 Suspension visuell auf einen McFarland Standard von 0 5 einstellen Nicht auf einen McFarland Standard unter 0 5 einstellen 8 1 0 mL der eingestellten Suspension in 4 mL steriler Kochsalzl sung verd nnen 1 5 Verd nnung Mit dem Inokulationsverfahren f r die Empfindlichkeitspr fung fortfahren Vorbereitung des Inokulums aus einem positiven BACTEC MGIT 7 mL R hrchen HINWEIS Das Inokulum muB in bereinstimmung mit den nachstehenden Zeitangaben zubereitet werden um die ordnungsgem e Organismenkonzentration f r die Empfindlichkeitspr fung zu erhalten 1 Der erste Tag an dem ein MGIT R hrchen vom Ger t als positiv ausgegeben wird
142. liniques d origine et des isolats m res ainsi que des isolats cliniques r trospectifs issus de cultures en milieux liquides et solides Au total 223 r sultats de test ont t obtenus pour le test de sensibilit de l thambutol la concentration critique Le tableau 2 pr sente les r sultats obtenus pour chaque antibiotique pour le test des isolats cliniques concentration critique issus de cultures en milieu liquide Le tableau 3 pr sente les r sultats obtenus pour chaque antibiotique pour le test des isolats cliniques concentration critique issus de cultures sur milieux solides Tableau 2 R sultat des isolats cliniques BACTEC MGIT 960 AST compar la m thode des proportions partir de cultures en milieu liquide M thode des Syst me MGIT 960 AST proportions ANTI Concen Concen R sultats de sensibilit R sultats de r sistance BIOTI tration S R tration Nb Nb QUE concordances concordance concordances concordance IC 95 IC 95 STR 20ugiml 69 27 1 0 ug mL 62 90 26 96 80 96 81 100 INH 0 24g mL 59 37 0 1 pg mL 57 97 36 97 88 a 100 86 100 RIF 1 0 pg mL 72 24 1 0 ug mL 71 99 24 100 93 100 95 100 EMB 50ygg mL 91 20 5 0 pg mL 88 97 17 85 91 99 62 97 Tous les isolats pr sentant des r sultats MGIT discordants ont t test s par la m thode des proportions par deux centres ind pendants Parmi les sept isolats discordants pour la r sistance STR R 960 S MOP
143. litatives Schnellverfahren zur Empfindlichkeitspr fung von Mycobacterium tuberculosis aus Kulturen gegen Streptomycin STR Isoniazid INH Rifampin RIF und Ethambutol EMB Das BACTEC MGIT 960 STR 4 0 Testkit und das BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Testkit sind zur Empfindlichkeitspr fung bei h heren Arzneimittelkonzentrationen vorgesehen Die BACTEC MGIT 960 Testkits zur Empfindlichkeitspr fung werden mit dem BACTEC MGIT 960 und BACTEC MGIT 320 System ZUSAMMENFASSUNG UND ERKL RUNG Zur ordnungsgem Ben Behandlung von Tuberkulose Patienten sind Empfindlichkeitspr fungen gegen Antituberkulotika unerl lich Tuberkulose wird normalerweise mit einer Kombination von Antituberkulotika wie Streptomycin Isoniazid Rifampin und Ethambutol behandelt Dabei ist wichtig da die angewendeten Antituberkulotika eine ausreichende Aktivit t gegen Mycobacterium tuberculosis aufweisen d h das Bakterienisolat mu gegen das Arzneimittel empfindlich sein Mycobacterium tuberculosis mit Mehrfachresistenz MDR TB hat sich in letzter Zeit zu einem schwerwiegenden ffentlichen Gesundheitsproblem entwickelt Resistenz gegen eines der Prim rtherapeutika Streptomycin STR Isoniazid INH Rifampin RIF und Ethambutol EMB erschwert die Behandlung der Erkrankung und f hrt zu h heren Kosten Der schnelle Nachweis dieser resistenten Isolate ist von ma geblicher Bedeutung f r eine wirksame Behandlung des Patienten Zur Empfindlichkeitspr fung von My
144. lonie possibile da una crescita di non oltre 14 giorni cercando di non rimuovere terreno solido Sospendere le colonie nel brodo Middlebrook 7H9 3 Agitare con vortex per 2 3 min la sospensione per frammentare i grumi pi grossi La torbidit della sospensione deve essere superiore allo standard 1 0 McFarland Lasciar riposare la sospensione per 20 min senza disturbarla 5 Trasferire il supernatante in un altra provetta sterile da 16 5 x 128 mm con tappo evitare di trasferire il sedimento e lasciar riposare per altri 15 min 6 Trasferire il supernatante dovrebbe essere omogeneo e privo di grumi in una terza provetta sterile da 16 5 x 128 mm N B Durante questo passaggio la torbidit della sospensione di organismi deve essere superiore allo standard 0 5 McFarland 7 Regolare la torbidit della sospensione sullo standard 0 5 McFarland confrontandola visivamente con lo stesso standard Non regolare ad una torbidit inferiore allo standard 0 5 McFarland 8 Diluire 1 mL della sospensione cosi regolata in 4 mL di soluzione fisiologica sterile diluizione 1 5 Passare alla Procedura di inoculo per il test di sensibilit Preparazione dell inoculo da una provetta BACTEC MGIT 7 mL positiva N B Al fine di ottenere la concentrazione appropriata di organismi per il test di sensibilit importante preparare l inoculo secondo i tempi indicati qui di seguito 1 Viene considerato Giorno 0 il primo giorno in cui si ottiene sull
145. ltats de sensibilit R sultats de r sistance BIOTI tration S R tration Nb Nb QUE concordances concordance concordances concordance IC 95 IC 95 STR 2 0 pg mL 70 29 1 0 pg mL 65 93 28 97 84 98 82 100 INH O 2pug mL 63 36 0 1 pg mL 62 98 35 97 92 a 100 86 100 RIF 1 0 pg mL 70 29 1 0 pg mL 70 100 26 90 95 100 73 98 EMB 5 0ug mL 87 25 5 0 ug mL 86 99 20 80 94 100 59 93 Tous les isolats pr sentant des r sultats MGIT discordants ont t test s par la m thode des proportions par deux centres ind pendants Parmi les cinq isolats discordants pour la r sistance STR R 960 S MOP deux isolats ont donn lieu un r sultat de r sistance sur les deux sites et un isolat un r sultat de sensibilit sur les deux sites Pour les deux autres isolats un r sultat de r sistance a t obtenu sur un site et un r sultat de sensibilit sur l autre site Un r sultat de r sistance a t obtenu sur les deux sites pour l isolat discordant pour la sensibilit STR S 960 R MOP Un r sultat de sensibilit a t obtenu sur les deux sites pour l isolat discordant pour la r sistance INH R 960 S MOP Un r sultat de r sistance t obtenu sur les deux sites pour l isolat discordant pour la sensibilit INH S 960 R MOP Un r sultat de sensibilit t obtenu sur les deux sites pour les trois isolats discordants pour la sensibilit RIF S 960 R MOP Un r s
146. macos A concentra o cr tica definida como a concentra o de f rmaco que permite a interpreta o de um resultado como resistente ou sens vel Um isolado determinado como resistente se 1 ou mais da popula o de teste cresce na presen a da concentra o cr tica do f rmaco Utiliza se a concentra o elevada do f rmaco para obter um perfil do grau de resist ncia dentro da popula o Este resultado faculta informa es ao m dico para ajudar a determinar se necess ria modifica o do regime terap utico O teste BACTEC MGIT 960 SIRE fornece o resultado da sensibilidade dentro do mesmo prazo que o Sistema BACTEC 460TB Al m disso este m todo n o radiom trico permitindo na maioria dos casos a obten o mais precoce de resultados apropriados da sensibilidade do que no procedimento MOP O teste BACTEC MGIT 960 SIRE foi desenvolvido com concentra es cr ticas para estreptomicina isoniazida rifampicina e etambutol que s o ligeiramente inferiores s concentra es cr ticas utilizadas no MOP para evitar uma falsa sensibilidade Tal mais aparente para estreptomicina onde muitos isolados est o pr ximos da concentra o cr tica recomendada conforme efectuado por MOP Por esta raz o foi desenvolvida uma segunda concentra o de f rmaco mais elevada para estreptomicina e isoniazida Pode ser efectuado o relat rio de um resultado sens vel na concentra o cr tica n o sendo necess rios outros te
147. micobacterias etc La monorresistencia a etambutol es muy poco frecuente por lo que debe comprobarse2 8 68 Informe de resultados a la concentraci n cr tica con BACTEC MGIT 960 SIRE Antibi tico concentraci n STR 1 0 ug mL INH 0 1 pg mL RIF 1 0 ug mL EMB 5 0 ug mL Informe de resultados con BACTEC MGIT 960 STR 4 0 e INH 0 4 Antibi tico concentraci n STR 4 0 ug mL INH 0 4 ug mL Resultado del sistema MGIT Sensible SIRE Resistente SIR Resistente E Error X Resultado del sistema MGIT Sensible Resistente Error X Sensible Resistente Error X Informe recomendado Cepa aislada con el sistema BACTEC MGIT antibi tico concentraci n con resultado de sensibilidad Cepa aislada con el sistema BACTEC MGIT antibi tico concentraci n con resultado de resistencia Debe seguirse de los resultados del an lisis de antibi tico a una concentraci n m s alta si se realiza En caso de resistencia a otros antibi ticos adem s de a etambutol EMB Cepa aislada analizada con el sistema BACTEC MGIT etambutol 5 0 pg mL con resultado de resistencia Consultar al laboratorio para realizar un an lisis con EMB a una concentraci n m s alta En caso de monorresistencia a etambutol EMB Cepa aislada con el sistema BACTEC MGIT etambutol 5 0 pg mL con resultado de resistencia La monorresistencia a etambutol es muy poco frecu
148. mperat ra Temperaturbegrensning Ograniczenie temperatury Limita o da temperatura Ohranitenie teploty Limitaci n de temperatura Temperaturbegr nsning TemneparypHu orpanuyeHna Limitare de temperatura Sicaklik s n rlamas Ograni enje temperature OrpaHnueHue Temneparypei TemneparypaHbi wektey Dozvoljena temperatura Batch Code Lot K d slo ar e Batch kode Lot Chargenummer lot Partii kood Er koodi LOT Code de lot Lot Chargencode Chargenbezeichnung Kw k g Traprida Maprida T tel sz ma Lot Codice del lotto partita Partijos numeris Lot Batch kode Serie Kod partii seria C digo do lote Lote K d s rie ar a C digo de lote Lote Satskod parti Kon Mapruga Num r lot Lotul Parti Kodu Lot Kod serije Kon naptun nor Tontama kon Lot kod Consult Instructions for Use Prostudujte pokyny k pou it Lass brugsanvisningen Raadpleeg gebruiksaanwijzing Lugeda kasutusjuhendit Tarkista k ytt ohjeista Consulter la notice d emploi Gebrauchsanweisung beachten Zuu oukeureite me oonyies xp ons Olvassa el a haszn lati utas t st Consultare le istruzioni per l uso Skaitykite naudojimo instrukcijas Se i bruksanvisningen Zobacz instrukcja uzytkowania Consulte as instruc es de utiliza o Pozri Pokyny na pou vanie Consultar las instrucciones de uso Se bruksanvisningen HanpaBere cnpaBka B HHCTPyKLUUT
149. mula Aproximada Por Frasco de Farmaco Liofilizado Estreptomicina 332 ug F rmula Aproximada Por Frasco de F rmaco Liofilizado Isoniazida F rmula Aproximada Por Frasco de F rmaco Liofilizado Rifampicina F rmula Aproximada Por Frasco de Farmaco Liofilizado Etambutol ug BACTEC MGIT 960 IR Kit cont m um frasco liofilizado de cada um de isoniazida e rifampicina e quatro frascos de SIRE Supplement F rmula Aproximada Por Frasco de F rmaco Liofilizado Isoniazida F rmula Aproximada Por Frasco de F rmaco Liofilizado Rifampicina BACTEC MGIT 960 STR 4 0 Kit cont m um Frasco liofilizado de estreptomicina e dois frascos de SIRE Supplement F rmula Aproximada Por Frasco de Farmaco Liofilizado Estreptomicina 664 ug BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Kit cont m um Frasco liofilizado de isoniazida e dois frascos de SIRE Supplement F rmula Aproximada Por Frasco de F rmaco Liofilizado Isoniazida 66 4 ug O BACTEC MGIT 960 SIRE Supplement enriquecido com 20 mL de Middlebrook OADC F rmula Aproximada por 1 L de gua Purificada Albumina bovina 50 0 g Catalase 0 03 g Dextrose 20 0 g cido Oleico 06 g Ajustado e ou suplementado conforme necess rio para cumprir os crit rios de desempenho Conserva o e reconstitui o dos reagentes Frascos de F rmaco BACTEC MGIT 960 SIRE ap s recep o conservar o
150. n el procedimiento MP Si se obtiene un resultado para estreptomicina de resistencia a la concentraci n alta debe realizarse un an lisis a esta concentraci n con un m todo alternativo PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO El tubo indicador de crecimiento micobacteriano BBL MGIT de 7 mL es un tubo que contiene caldo Middlebrook 7H9 modificado que permite el crecimiento y la detecci n de micobacterias v ase el prospecto del tubo BBL MGIT de 7 mL El tubo MGIT contiene un compuesto fluorescente incluido en silicona que se encuentra en la parte inferior de un tubo de 16 x 100 mm de fondo redondo El compuesto fluorescente es sensible a la presencia de ox geno disuelto en el caldo La concentraci n inicial de ox geno disuelto apaga las emisiones procedentes del compuesto por lo que se detecta poca fluorescencia M s tarde los microorganismos al respirar y crecer activamente consumen el ox geno lo cual permite la fluorescencia del compuesto El kit BACTEC MGIT 960 SIRE es un an lisis cualitativo con una duraci n de 4 a 13 d as El an lisis se basa en la comparaci n del crecimiento de la cepa aislada de M tuberculosis en un tubo que contiene antibi tico con el crecimiento en un tubo sin antibi tico control de crecimiento El instrumento BACTEC MGIT controla los tubos para detectar un aumento de su fluorescencia El instrumento utiliza el an lisis de la fluorescencia del tubo con antibi tico en comparaci n con la fluorescencia del tubo
151. nalmente quando se efectuar o teste de sensibilidade Se o CQ do lote falhar n o efectuar o relat rio do s f rmaco s que falharam durante esse per odo de teste Repita o CQ para o s f rmaco s e os isolados do doente afectados pela falha do CQ inicial Se a repeti o do CQ n o apresentar o desempenho previsto n o participar os resultados do doente N o usar o produto at se ter contactado o representante local da Becton Dickinson Durante a avalia o externa dos BACTEC MGIT 960 SIRE Kits as causas mais frequentes de falha de CQ consistiram em culturas de CQ foram contaminadas Conjuntos AST hiper hipo inoculados f rmaco n o adicionado aos tubos apropriados e situa es de erro do instrumento 55 RESULTADOS O instrumento BACTEC MGIT ir monitorizar os conjuntos de AST at que seja feita uma determina o de sens vel ou resistente Depois do teste do conjunto se concluir os resultados ser o participados pelo instrumento BACTEC MGIT consultar o Manual do Utilizador do Instrumento BACTEC MGIT O instrumento BACTEC MGIT ir reportar um resultado do Conjunto AST como um Erro X aus ncia de interpreta o de sensibilidade quando ocorrerem determinadas condi es que possam afectar os resultados do teste As condi es que poder o dar origem a um resultado de Erro X est o descritas na Sec o 7 Resolu o de Problemas do Manual do Utilizador do Instrumento BACTEC MGIT Quando se reportam resultados
152. ncentration de microorganismes appropri e pour le test de sensibilit 1 Ajouter 4 mL de bouillon BBL Middlebrook 7H9 ou bouillon BBL MGIT un tube st rile de 16 5 x 128 mm avec capuchon contenant 8 10 billes de verre 2 l aide d une anse bact riologique st rile racler la surface d une culture vieille de 14 jours au maximum afin de r colter le plus de colonies possible tout en veillant 14 ne pr lever aucun milieu solide Suspendre les colonies dans le Bouillon Middlebrook 7H9 Agiter la suspension au vortex pendant 2 3 min afin de briser les gros agr gats La turbidit de la suspension doit exc der le standard McFarland 1 0 Laisser reposer compl tement la suspension pendant 20 min Transf rer le surnageant liquide dans un autre tube st rile de 16 5 x 128 mm avec capuchon viter de transf rer le s diment et laisser reposer nouveau pendant 15 min Transf rer le surnageant liquide qui doit tre fluide et exempt de tout agr gat dans un troisi me tube st rile de 16 5 x 128 mm REMARQUE ce stade la turbidit de la suspension de microorganismes devrait tre sup rieure au standard McFarland 0 5 Ajuster la suspension une turbidit quivalente au standard McFarland 0 5 en la comparant visuellement un standard de turbidit McFarland 0 5 La turbidit ne doit pas tre inf rieure au standard McFarland 0 5 Diluer 1 mL de la suspension ajust e dans 4 mL de s rum physiologique s
153. niazide e o etambutolo devono essere analizzati ad una concentrazione pi elevata di farmaco usando il sistema BACTEC MGIT o un metodo alternativo In questo caso il risultato finale di resistenza alla concentrazione critica pu essere riportato indicando che in corso anche il test ad una concentrazione pi elevata Per individuare gli isolati che esibiscono una resistenza di basso livello vale a dire che sono resistenti alla concentrazione critica e sensibili alla concentrazione elevata importante analizzare gli isolati resistenti ad una concentrazione pi elevata Le concentrazioni elevate nel sistema BACTEC MGIT sono state calibrate per essere inferiori alle concentrazioni usate nel metodo delle proporzioni Il sistema BACTEC MGIT predisposto in modo tale che un risultato di resistenza specialmente per la streptomicina pu talvolta non essere correlato ad un risultato di resistenza alla concentrazione elevata nel metodo delle proporzioni Nel caso si ottenga un risultato di resistenza alla streptomicina a concentrazione elevata occorre eseguire un analisi alla stessa concentrazione con un metodo alternativo PRINCIPI DELLA PROCEDURA La provetta di indicatore di crescita dei micobatteri BBL MGIT da 7 mL contiene un brodo Middlebrook 7H9 modificato che favorisce la crescita e l individuazione dei micobatteri vedere il foglio illustrativo incluso nella confezione di BBL MGIT da 7 mL La provetta MGIT contiene un composto fluor
154. nicial de la sensibilidad realizado para estreptomicina isoniazida y rifampicina concentraci n cr tica Se realiz una evaluaci n independiente de etambutol a partir de partes al cuotas congeladas de cepas aisladas de reserva y cepas cl nicas originales as como a partir de cepas cl nicas prospectivas procedentes de cultivos l quidos y s lidos Se obtuvo un total de 223 resultados para el an lisis de etambutol a la concentraci n cr tica La Tabla 2 presenta los resultados del an lisis de cepas cl nicas para cada antibi tico concentraci n cr tica a partir de cultivos l quidos La Tabla 3 presenta los resultados del an lisis de cepas cl nicas para cada antibi tico concentraci n cr tica a partir de cultivos s lidos Tabla 2 Resultados de cepas cl nicas an lisis BACTEC MGIT 960 AST en comparaci n con el m todo de proporciones a partir de cultivos l quidos M todo de Sistema MGIT 960 AST proporciones Anti Concen Concen Resultados de sensibilidad Resultados de resistencia bi tico traci n S R traci n N de de N de de concordancias concordancia concordancias concordancia 95 CI 95 CI STR 20ugiml 69 27 1 0 ug mL 62 90 26 96 80 96 81 100 INH 0 2 pg mL 59 37 0 pg mL 57 97 36 97 88 100 86 100 RIF 1 0 pg mL 72 24 1 0 pg mL 71 99 24 100 93 100 95 100 EMB 50ygg mL 91 20 5 0 pg mL 88 97 17 85 91 99 62 97 Todas las cepas aisladas con resultados discordantes en el MGIT se analizaron
155. noculi preparati da terreni solidi devono essere esaminati visivamente a fronte di uno standard di torbidit McFarland 0 5 altrimenti possono dar luogo a risultati non accurati o errati del set AST La mancata diluizione 1 5 della sospensione batterica se indicata per l inoculo delle provette di farmaco pu dar luogo a risultati non accurati La mancata diluizione 1 100 della sospensione batterica per l inoculo della provetta del Controllo di crescita pu dar luogo a risultati non accurati o errati del set AST La mancata ricostituzione dei farmaci con il volume corretto di acqua distillata deionizzata sterile pu dar luogo a risultati non accurati importante che il contenuto delle provette inoculate sia mescolato bene in quanto una miscelazione inadeguata pu dar luogo a falsi risultati di resistenza Il mancato caricamento delle provette del set AST nel carrello secondo l ordine appropriato pu dar luogo a risultati non accurati La selezione di una definizione errata di farmaci nel carrello del set pu dar luogo a risultati non validi o non accurati Il caricamento sbagliato del set AST nello strumento pu dar luogo ad una condizione sconosciuta che deve essere risolta entro otto ore Se la condizione non viene risolta entro otto ore il set AST deve essere scartato e predisposto nuovamente 45 Il mancato impiego del supplemento SIRE nel set AST pu dar luogo a risultati non accurati NON aggiungere il supplemento di crescita
156. ns 1 der Testpopulation in Gegenwart der kritischen Konzentration des Arzneimittels w chst Die hohe Arzneimittelkonzentration wird zur Erstellung eines Resistenzprofils innerhalb der Population verwendet Anhand dieses Ergebnisses kann der Arzt entscheiden ob eine Anpassung der Arzneimitteltherapie erforderlich ist Der BACTEC MGIT 960 SIRE Test liefert die Ergebnisse der Empfindlichkeitspr fung etwa im gleichen Zeitraum wie das BACTEC 460TB System AuBerdem ist diese Methode nicht radiometrisch und die Ergebnisse der Empfindlichkeitspr fung liegen in den meisten F llen fr her als bei der Proportionsmethode vor Bei der Entwicklung des BACTEC MGIT 960 SIRE Tests wurden die kritischen Konzentrationen f r Streptomycin Isoniazid Rifampin und Ethambutol etwas niedriger angesetzt als die kritischen Konzentrationen der Proportionsmethode um zu vermeiden da Isolate f lschlicherweise als empfindlich beurteilt werden Dies gilt besonders f r Streptomycin bei dem viele Isolate nahe an der f r die Proportionsmethode empfohlenen kritischen Konzentration liegen Aus diesem Grund wurde f r Streptomycin und Isoniazid eine zweite h here Konzentration angesetzt Wenn ein Isolat bei der kritischen Konzentration als empfindlich getestet wird kann dieser Befund ausgegeben werden und weitere Untersuchungen sind nicht erforderlich Isolate die bei der kritischen Konzentration von Streptomycin Isoniazid und oder Ethambutol resistent sind soll
157. nt NEI tration E R tration Anz berein bereinstim Anz berein bereinstim MITTEL stimmung mung 95 VI stimmung mung 95 VI STR 10 0 ug mL 77 19 4 0 ug mL 73 95 17 90 87 99 67 99 INH 1 0 ug mL 65 31 0 4 ug mL 65 100 29 94 95 100 79 99 Setzt voraus da alle Isolate die im MGIT bei der kritischen Konzentration empfindlich sind im MGIT bei der hohen Konzentration ebenfalls empfindlich sind Alle Isolate mit diskordanten MGIT Ergebnissen wurden in zwei unabh ngigen Labors anhand der Proportionsmethode getestet Die vier diskordanten R 960 E Proportionsmethode STR resistenten Isolate waren in beiden Labors empfindlich Von den zwei diskordanten E 960 R Proportionsmethode STR empfindlichen Isolaten war eines in beiden Labors empfindlich und eines war in beiden Labors resistent Von den zwei diskordanten E 960 R Proportionsmethode INH empfindlichen Isolaten war eines in beiden Labors empfindlich und eines war in beiden Labors resistent Tabelle 5 Ergebnisse der klinischen Isolate aus festen Kulturmedien BACTEC MGIT 960 AST im Vergleich zur Proportionsmethode Proportionsmethode MGIT 960 AST System ARZ Konzen Konzen Empfindlich Resistent NEI tration E R tration Anz berein bereinstim Anz berein bereinstim MITTEL stimmung mung 95 VI stimmung mung 95 VI STR 10 0 pg mL 78 21 4 0 ug mL 73 94 17 81 86 98 58 95 INH 1 0 ug mL 68 31 0 4 ug mL 68 100 30 97 95 100 83 100
158. nt reconstitu s dans un volume diff rent Le non respect du volume d eau distill e st rile requis pour la reconstitution des antibiotiques aux concentrations plus lev es invalide les r sultats de test correspondants Reconstituer chaque flacon de streptomycine lyophilis e de la trousse BACTEC MGIT 960 STR 4 0 avec 2 mL d eau distill e d sionis e st rile afin d obtenir une solution m re 332 ug mL Reconstituer chaque flacon d isoniazide lyophilis de la trousse BACTEC MGIT 960 INH 0 4 avec 2 mL d eau distill e d sionis e st rile afin d obtenir une solution m re 33 2 ug mL Avertissements et precautions R serv au diagnostic in vitro CHANTILLON CLINIQUE POTENTIELLEMENT INFECTIEUX Des microorganismes pathog nes notamment les virus de l h patite et de l immunod ficience humaine sont susceptibles d tre pr sents dans les chantillons cliniques Respecter les Pr cautions standard et les consignes en vigueur dans l tablissement pour manipuler tout objet contamin avec du sang ou d autres liquides organiques La manipulation de M tuberculosis en culture n cessite des pratiques de s curit biologique de niveau 3 BSL ainsi que les appareils et installations de confinement correspondants Lire et suivre les instructions contenues dans toutes les notices d emploi concern es y compris la notice des tubes avec indicateur de croissance mycobact rienne BBL MGIT 7 mL Avant utilisation il convien
159. ntant des r sultats MGIT discordants ont t test s par la m thode des proportions par deux centres ind pendants Des r sultats de sensibilit ont t obtenus sur les deux sites pour les cinq isolats discordants pour la r sistance STR R 960 S MOP Parmi les quatre isolats discordants pour la sensibilit STR S 960 R MOP trois isolats ont donn lieu un r sultat de sensibilit sur les deux sites et le quatrieme isolat un r sultat de r sistance sur les deux sites Un r sultat de r sistance t obtenu sur les deux sites pour l isolat discordant pour la sensibilit INH S 960 R MOP CONDITIONNEMENT R f Description 245123 Trousse BACTEC MGIT 960 SIRE coffret comprenant 4 flacons de complexe d antibiotiques lyophilis s et 8 flacons de Suppl ment SIRE 245125 Trousse BACTEC MGIT 960 STR 4 0 coffret comprenant 1 flacon d antibiotique lyophilis et 2 flacons de Suppl ment SIRE 245157 Trousse BACTEC MGIT 960 IR coffret comprenant 2 flacons d antibiotique lyophilis et 4 flacons de Suppl ment SIRE 245126 Trousse BACTEC MGIT 960 INH 0 4 coffret comprenant 1 flacon d antibiotique lyophilis et 2 flacons de Suppl ment SIRE REFERENCES Voir la section References dans la notice en anglais amp BD BACTEC MGIT 960 SIRE Testkit Zur Empfindlichkeitspr fung von Mycobacterium tuberculosis gegen Antituberkulotika Deutsch VERWENDUNGSZWECK Das BACTEC MGIT 960 SIRE Testkit ist ein qua
160. o incorrecto pipeteado en tubos del conjunto de AST La constataci n de los resultados apropiados mostrados a continuaci n en el plazo de 4 13 d as indica que el kit BACTEC MGIT 960 SIRE est listo para el an lisis de cepas aisladas de pacientes Si no se observan los resultados apropiados repetir la prueba Si los resultados obtenidos al repetir la prueba siguen siendo inapropiados no utilizar el producto hasta contactar con el representante local de Becton Dickinson Cepas GC MGIT STR MGIT INH MGIT RIF MGIT EMB M tuberculosis ATCC 27294 Positivo Sensible Sensible Sensible Sensible Cepas GC MGIT STR 4 0 MGIT INH 0 4 M tuberculosis ATCC 27294 Positivo Sensible Sensible Cuando se realizan an lisis de sensibilidad debe analizarse el mismo microorganismo de control como control de calidad de lote una vez a la semana Si el QC de lote no supera el an lisis no deben informarse los resultados del paciente para los antibi ticos que no hayan superado este per odo de an lisis Repetir el QC para los antibi ticos y cepas aisladas del paciente afectados por el fallo inicial del QC Si el QC repetido no produce los resultados esperados no deben informarse los resultados del paciente No utilizar el producto hasta contactar con el representante local de Becton Dickinson Durante la evaluaci n externa de los kits BACTEC MGIT 960 SIRE las causas m s frecuentes de fallo del QC fueron la contaminaci n de los cultivos de QC una inocu
161. o strumento una provetta MGIT positiva 2 Perla preparazione dell inoculo da testare usare una provetta positiva MGIT da 7 mL a partire dal giorno successivo alla comparsa di positivit Giorno 1 sullo strumento BACTEC MGIT fino al quinto giorno compreso di positivit Giorno 5 Una provetta positiva da oltre cinque giorni deve essere sottoposta a subcoltura in una nuova provetta MGIT da 7 mL contenente il supplemento di crescita BACTEC MGIT testata sullo strumento BACTEC MGIT fino alla comparsa di positivit e quindi usata tra il primo e il quinto giorno dalla positivit Vedere Preparazione di una provetta MGIT di semina a partire da terreno liquido 3 Sela provetta nel Giorno 1 o Giorno 2 di positivit usare la sospensione di brodo MGIT per le procedure di inoculo Mescolare accuratamente Passare alla Procedura di inoculo per il test di sensibilit 4 Se la provetta nel Giorno 3 Giorno 4 o Giorno 5 di positivit mescolare accuratamente e diluire 1 mL di brodo positivo in 4 mL di soluzione fisiologica sterile diluizione 1 5 Mescolare accuratamente Usare la sospensione diluita per le procedure di inoculo Passare alla Procedura di inoculo per il test di sensibilit Preparazione di una provetta MGIT di semina a partire da terreno liquido 1 Miscelare capovolgendo o vortexando la provetta 2 Fare una diluizione 1 100 aggiungendo 0 1 mL di coltura a 10 mL di Brodo BBL Middlebrook 7H9 o Brodo BBL MGIT Mescola
162. okale BD repraesentant for at fa instruktioner Kasutusjuhiste suhtes kontakteeruge oma kohaliku BD esindajaga ETTIKOIVWV OTE ME Tov TOTIK AVTITP CWwWITO rnc BD yia o nyieg A haszn lati utas t st k rje a BD helyi k pviselet t l Naudojimo instrukcij teiraukit s vietos BD jgaliotojo atstovo Kontakt din lokale BD representant for mer informasjon Aby uzyska instrukcje u ytkowania skontaktuj si z lokalnym przedstawicielstwem BD Contacte o seu representante local da BD para obter instru es In trukcie z skate u miestneho z stupcu spolo nosti BD Kontakta lokal Becton Dickinson representant f r anvisningar CBbpxere ce c MecTHMa npencraBuren Ha BD 3a nHcrpyKamu Contactati reprezentantul dumneavoastr local BD pentru instruc iuni Talimatlar i in yerel BD temsilcilerinize dan n Obratite se svom lokalnom predstavniku kompanije BD za uputstva Ana nonyueHas UHCTpyKUM CBAMETECL C MECTHbIM NPEACTABUTENEM komnaHHy BD O3iHisniH xeprinikti BA ekiniHe xyriHin Hyckay anbiHbI3 Kontaktiraj lokalnog predstavnika BD za upute INTENDED USE The BACTECTM MGITTM 960 SIRE Kit is a rapid qualitative procedure for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from culture to streptomycin STR isoniazid INH rifampin RIF and ethambutol EMB The BACTECTM MGIT 960 STR 4 0 Kit and the BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Kit are for testing at higher drug concentrations The BACTEC
163. on des mycobact ries cf la notice d emploi de BBL MGIT 7 mL Le tube MGIT contient un compos fluorescent incorpor la silicone pr sente au fond du tube de 16 x 100 mm fond rond Le compos fluorescent est sensible la pr sence d oxyg ne dissous dans le bouillon La concentration d oxyg ne dissous initiale teint la fluorescence du compos et l mission d tectable est tr s faible Par la suite la croissance et la respiration des microorganismes consomment l oxyg ne du milieu et permettent la fluorescence de s exprimer La trousse BACTEC MGIT 960 SIRE est un test qualitatif de 4 13 jours Le test est bas sur une comparaison de la croissance d un isolat de M tuberculosis dans un tube contenant un antibiotique avec celle obtenue dans un tube sans antibiotique t moin de croissance L instrument BACTEC MGIT contr le les tubes pour d celer toute augmentation de fluorescence L instrument compare la fluorescence du tube contenant l antibiotique celle du tube t moin de croissance pour tablir les r sultats de sensibilit L instrument BACTEC MGIT interpr te automatiquement ces r sultats et donne un r sultat de sensibilit ou de r sistance REACTIF La trousse BACTEC MGIT 960 SIRE contient un flacon de streptomycine d isoniazide de rifampicine et d thambutol lyophilis s respectivement et huit flacons de suppl ment SIRE Formule approximative par flacon d antibiotique lyophilis Streptomycine 33
164. on au 1 5 de la suspension de microorganismes comme indiqu pour ensemencer les tubes contenant des antibiotiques peut entra ner des r sultats erron s Le fait de ne pas utiliser la dilution au 1 100 de la suspension de microorganismes pour ensemencer le tube de t moin de croissance peut entra ner des r sultats erron s ou causer une erreur du module AST Le fait de ne pas reconstituer les antibiotiques avec les volumes d eau st rile distill e ou d sionis e ad quats peut engendrer des r sultats erron s Il importe de m langer compl tement le contenu des tubes ensemenc s Un m lange imparfait peut conduire un faux r sultat de r sistance Le fait de ne pas charger les tubes du module AST dans le support de module AST dans l ordre indiqu peut entra ner des r sultats erron s Le fait de ne pas s lectionner la d finition de support de modules appropri e peut entra ner des r sultats invalides ou inexacts Un chargement incorrect du module AST dans l instrument se traduit par une condition d erreur anonyme qui doit tre r solue dans les huit heures Si la condition d erreur n est pas r solue dans les huit heures le module AST Set doit tre limin et configur de nouveau Le fait de ne pas utiliser le suppl ment SIRE dans le module AST peut conduire des r sultats erron s NE PAS ajouter de suppl ment de croissance BACTEC MGIT dans le module AST VALEURS ATTENDUES Au total 106 isolats cliniques d
165. ona KaybIMAACTBIFRIHAAFEI yekinerri ekin Autorizuirani predstavnik u EU In Vitro Diagnostic Medical Device L ka sk za zen ur en pro diagnostiku in vitro In vitro diagnostisk medicinsk anordning Medisch hulpmiddel voor in vitro diagnose in vitro diagnostika meditsiiniaparatuur L kinn llinen in vitro diagnostiikkalaite Dispositif m dical de diagnostic in vitro Medizinisches In vitro Diagnostikum In vitro diayvwoTIK rarpikr cuokeur In vitro diagnosztikai orvosi eszk z Dispositivo medico diagnostico in vitro In vitro diagnostikos prietaisas In vitro diagnostisk medisinsk utstyr Urz dzenie medyczne do diagnostyki in vitro Dispositivo m dico para diagn stico in vitro Medic nska pom cka na diagnostiku in vitro Dispositivo m dico de diagn stico in vitro Medicinsk anordning f r in vitro diagnostik MenuuynHcku ypea 3a narHocruka UH BuTpo Aparatur medical de diagnosticare in vitro In Vitro Diyagnostik Tibbi Cihaz Medicinski ure aj za in vitro dijagnostiku Megn nncku npu6op gna AnarHocTakn in vitro XKacaHgbl xarna ga xypriaeriH MeguuMHanbik AUATHOCTUKA acna bi Medicinska pomagala za In Vitro Dijagnostiku 76 Temperature limitation Teplotn omezen Temperaturbegr nsning Temperatuurlimiet Temperatuuri piirang L mp tilarajoitus Temp rature limite Zul ssiger Temperaturenbereich Opio Bepuokpaoia H m rs kleti hat r Temperatura limite Laikymo te
166. ontiene 20 mL de medio de enriquecimiento Middlebrook OADC F rmula aproximada por litro de agua purificada Alb mina bovina Catalasa Dextrosa Acido oleico Ajustada y o enriquecida para satisfacer los criterios de rendimiento Almacenamiento y reconstituci n de los reactivos Frascos de antibi tico BACTEC MGIT 960 SIRE tras su entrega almacenar los frascos de antibi tico liofilizado a 2 8 C Una vez reconstituidas las soluciones de antibi tico pueden ser congeladas y almacenadas a una temperatura igual o inferior a 20 C durante un m ximo de seis meses siempre que este per odo no sobrepase la fecha de caducidad original Una vez descongeladas las soluciones deben utilizarse inmediatamente Desechar cualquier porci n no utilizada Suplemento BACTEC MGIT SIRE tras su entrega almacenar en un lugar oscuro a 2 8 C Evitar la congelaci n y el sobrecalentamiento Abrir y usar antes de la fecha de caducidad Reducir al m nimo la exposici n a la luz 63 Instrucciones de uso Reconstituir cada frasco de estreptomicina liofilizada del kit BACTEC MGIT 960 SIRE con 4 mL de agua est ril destilada desionizada para preparar una soluci n de reserva de 83 ug mL Reconstituir cada frasco de isoniazida liofilizada del kit BACTEC MGIT 960 SIRE con 4 mL de agua est ril destilada desionizada para preparar una soluci n de reserva de 8 3 ug mL Reconstituir cada frasco de rifampicina liofilizada del kit BACTEC M
167. oped with critical concentrations for streptomycin isoniazid rifampin and ethambutol that are slightly lower than the critical concentrations used in the MOP in order to avoid false susceptibility This is most apparent for streptomycin where many isolates are close to the recommended critical concentration as performed by the MOP For this reason a second higher drug concentration was developed for streptomycin and isoniazid A susceptible result at the critical concentration can be reported and no other testing is necessary Isolates that are resistant at the critical concentration of streptomycin isoniazid and or ethambutol should be tested at a higher drug concentration either in the BACTEC MGIT system or using an alternate method In this case a final result of resistant at the critical concentration may be reported with notification that an additional test at a higher concentration is being performed Testing of resistant isolates at a higher concentration is important to identify those that exhibit low level resistance i e resistant at the critical concentration and susceptible at the high concentration The high concentrations in the BACTEC MGIT system were designed to be lower than the concentrations used in the MOP This design of the BACTEC MGIT system is such that a resistant result especially for streptomycin may not always correlate to a resistant result at the high concentration in MOP In the event that a streptomycin result is
168. opulation test e se d veloppe en pr sence de la concentration critique d antibiotique La concentration lev e d antibiotique sert tablir le profil du degr de r sistance au sein de la population Ce r sultat fournit des informations au m decin qui l aident d terminer si une modification du sch ma th rapeutique est n cessaire Le test BACTEC MGIT 960 SIRE donne des r sultats de sensibilit dans approximativement les m mes d lais que le systeme BACTEC 460TB De plus cette m thode n utilise pas de radio isotope et permet d obtenir des r sultats de test de sensibilit pertinents plus t t en g n ral qu avec la m thode des proportions Le test BACTEC MGIT 960 SIRE a t mis au point avec des concentrations critiques de streptomycine d isoniazide de rifampicine et d thambutol l g rement inf rieures aux concentrations critiques utilis es dans la m thode des proportions afin d viter de faux r sultats de sensibilit Ceci est particulierement notable pour la streptomycine o les r sultats obtenus pour de nombreux isolats sont proches des concentrations critiques recommand es pour la m thode des proportions Pour cette raison une seconde concentration d antibiotique plus lev e t mise au point pour la streptomycine et l isoniazide Un r sultat de sensibilit la concentration critique peut tre donn et aucun autre test n est n cessaire Les isolats r sistants aux concentrations critiques de
169. polazione batterica analizzata cresce in presenza della concentrazione critica del farmaco La concentrazione elevata di farmaco viene usata per definire il grado di resistenza 37 all interno della popolazione testata Questo risultato fornisce al medico informazioni utili per stabilire la necessit o meno di modificare il regime terapeutico Il test BACTEC MGIT 960 SIRE consente di ottenere il risultato della sensibilit quasi nello stesso arco di tempo del sistema BACTEC 460TB Inoltre questo metodo non radiometrico e consente generalmente di ottenere risultati di sensibilit appropriati pi rapidamente rispetto alla procedura con il metodo delle proporzioni Al fine di evitare l incidenza di falsa sensibilit il test BACTEC MGIT 960 SIRE stato sviluppato con concentrazioni critiche di streptomicina isoniazide rifampicina ed etambutolo leggermente inferiori rispetto alle concentrazioni critiche usate nel metodo delle proporzioni Questo particolarmente evidente nel caso della streptomicina dove molti isolati si avvicinano alla concentrazione critica consigliata per le procedure con il metodo delle proporzioni Per questo motivo per la streptomicina e l isoniazide stata sviluppata una seconda concentrazione pi elevata di farmaco cosi possibile riportare un risultato di sensibilit alla concentrazione critica senza dover ricorrere ad altre analisi Gli isolati resistenti alla concentrazione critica di streptomicina iso
170. ra di una provetta 1 chiudere i cassetti dello strumento 2 spegnere lo strumento 3 sgombrare immediatamente la zona 4 consultare i regolamenti del laboratorio utilizzato o dei CDC Centers for Disease Control Una provetta inoculata rotta o che perde pu produrre un aerosol di micobatteri e pertanto deve essere trattata in modo opportuno Prima di eliminare tutte le provette MGIT inoculate sterilizzarle in autoclave 39 PREPARAZIONE DELL INOCULO Le modalit di preparazione illustrate qui di seguito si riferiscono a colture pure di M tuberculosis Il laboratorio deve confermare mediante tecniche di identificazione appropriate che l isolato da testare una coltura pura di M tuberculosis L inoculo pu essere preparato a partire da terreno solido o da una provetta BACTEC MGIT 7 mL Le colture cresciute su terreno liquido e solido possono anche essere utilizzate per preparare una provetta MGIT di semina a sua volta usata per preparare l inoculo Ognuna di queste opzioni descritta qui di seguito Preparazione dell inoculo da terreno solido N B Al fine di ottenere la concentrazione appropriata di organismi per il test di sensibilit importante preparare l inoculo in osservanza delle seguenti istruzioni 1 Aggiungere 4 mL di brodo BBL Middlebrook 7H9 o brodo BBL MGIT in una provetta sterile da 16 5 x 128 mm munita di tappo e contenente 8 10 microsfere di vetro 2 Con un ansa sterile prelevare quante pi co
171. rac o Etambutol 5 0 ug mL e o mais elevada resultado resistente utilizando um Consulte o laborat rio para m todo testar EMB com uma alternativo concentrac o mais elevada Se for mono resistente a Recomend se o etambutol EMB O isolado teste de EMB com foi testado com o Sistema a concentrac o BACTEC MGIT Etambutol critica e 5 0 ug mL e o resultado concentrac o resistente A mono resist ncia mais elevada a etambutol rara Consulte com um m todo o laborat rio para alternativo confirma o Erro X Nenhum relat rio Repita o teste 56 Relat rio de resultados com o BACTEC MGIT 960 STR 4 0 e INH 0 4 F rmaco Resultado Relat rio Recomendado Acc o concentrac o no Sistema MGIT STR 4 0 ug mL Sens vel O isolado foi testado com o Nenhuma acc o Sistema BACTEC MGIT estreptomicina 4 0 ug mL e o resultado sens vel Este isolado com um resultado de resist ncia a 1 0 ug mL e um resultado sens vel a 4 0 ug mL indica resist ncia de baixo n vel a estreptomicina Resistente O isolado foi testado com o O isolado deve Sistema BACTEC MGIT ser testado com estreptomicina 4 0 ug mL eo um m todo resultado resistente alternativo para Consulte o laborat rio para confirmar o confirma o resultado Erro X Nenhum relat rio Repita o teste INH 0 4 ug mL Sens vel O isolado foi testado com o Nenhuma ac o Sistema BACTEC MGIT isoniazida 0 4 ug mL e o resultado sens vel
172. re accuratamente 3 Aggiungere 0 5 mL della sospensione ottenuta in una provetta MGIT 7 mL addizionata di 0 8 mL di supplemento di crescita BACTEC MGIT 4 Tappare ermeticamente e miscelare accuratamente capovolgendo la provetta 2 3 volte 5 Introdurre la provetta nello strumento BACTEC MGIT e analizzare fino al raggiungimento della positivit 40 NOTA La durata fino a positivit deve essere di gt 4 giorni ai fini del test AST Se la provetta raggiunge la positivit in lt 4 giorni ritornare al punto 1 e preparare una nuova provetta di semina 6 Dal momento di positivit la provetta pu essere usata entro uno cinque giorni Procedere a Preparazione dell inoculo da una provetta BACTEC MGIT 7 mL positiva sopra Preparazione di una provetta MGIT di semina a partire da terreno solido 1 Con un ansa sterile rimuovere la crescita da uno slant e aggiungerla in una provetta MGIT 7 mL addizionata di 0 8 mL di supplemento di crescita BACTEC MGIT 2 Tappare ermeticamente e miscelare accuratamente capovolgendo la provetta 2 3 volte 3 Introdurre la provetta nello strumento BACTEC MGIT e testare fino al raggiungimento della positivit NOTA La durata fino a positivit deve essere di gt 4 giorni ai fini del test AST Se la provetta raggiunge la positivit in lt 4 giorni ritornare al punto 1 e preparare una nuova provetta di semina 4 Dal momento di positivit la provetta pud essere usata entro uno cinqu
173. reconstitui o das concentra es de f rmaco mais elevadas invalidar os resultados do teste Reconstitua cada frasco de f rmaco liofilizado de Estreptomicina do BACTEC MGIT 960 STR 4 0 Kit com 2 mL de gua destilada desionizada est ril para produzir uma solu o stock de 332 ug mL Reconstitua cada frasco de f rmaco liofilizado de Isoniazida do BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Kit com 2 mL de gua destilada desionizada est ril para produzir uma solu o stock de 33 2 ug mL Advert ncias e Precau es Para diagn stico in vitro AMOSTRA DE TESTE POTENCIALMENTE INFECCIOSA Nas amostras podem existir microorganismos patog nicos incluindo os v rus das hepatites e o v rus da imunodefici ncia humana No manuseamento de todos os itens contaminados com sangue e outros fluidos corporais devem ser seguidas as Precau es padr o 47 e as linhas de orienta o da institui o 51 O trabalho com crescimento de M tuberculosis em cultura requer pr ticas de Biosseguranca de N vel 3 BSL equipamento e instalac es de contenc o Ler e cumprir as instruc es presentes em todos os folhetos informativos relevantes incluindo o Tubo Indicador de Crescimento de Micobact rias BBL MGIT de 7 mL Antes usar o utilizador dever examinar os tubos e frascos relativamente a sinais de contaminac o ou danos Rejeitar qualquer tubo ou frasco que pareca inadequado Tubos que caiam dever o ser analisados cuidadosamente Se forem observados d
174. reinstimmt 8 0 1 mL der Bakteriensuspension auf einer Trypticase Soja Agarplatte mit 5 96 Schafblut TSA II ausstreichen Platte in einen Plastikbeutel einschlie en Bei 35 37 C inkubieren 9 Die Blutagarplatte nach 48 h auf bakterielle Kontamination untersuchen Wenn die Blutagarplatte kein Wachstum aufweist die Empfindlichkeitspr fung fortsetzen Wenn die Blutagarplatte Wachstum aufweist den AST Ansatz verwerfen siehe BACTEC MGIT Benutzerhandbuch und den Test mit einer Reinkultur wiederholen HINWEIS Die Empfindlichkeitspr fung kann in verschiedenen Formaten konfiguriert werden So kann zum Beispiel ein Testansatz f r einen R hrchenst nder mit 5 R hrchen die nur die kritischen Konzentrationen enthalten im System konfiguriert werden Abh ngig von den durchgef hrten optionalen Profiltests k nnen Testans tze f r verschiedene andere R hrchenst nder konfiguriert werden siehe Benutzerhandbuch des BACTEC MGIT Ger ts Qualit tssicherung durch den Anwender Es wird empfohlen bei Erhalt einer neuen Sendung oder Chargennummer von BACTEC MGIT 960 SIRE Testr hrchen den nachstehend aufgef hrten Kontrollorganismus zu testen Der Kontrollorganismus sollte eine Reinkultur sein die in bereinstimmung mit den Anleitungen unter VORBEREITUNG DES INOKULUMS angelegt werden sollte Der AST Qualit tskontrollansatz sollte in bereinstimmung mit den Anleitungen unter lnokulationsverfahren f r die Empfindlichkeitspr fung
175. rio necesario para este procedimiento Procedimiento de inoculaci n para el an lisis de sensibilidad con el kit BACTEC MGIT 960 SIRE 1 Etiquetar cinco tubos MGIT de 7 mL para cada cepa aislada analizada Etiquetar uno como GC control de crecimiento uno como STR uno como INH uno como RIF y uno como EMB Colocar los tubos en la secuencia correcta en el transportador del tama o apropiado para el conjunto de AST v ase el Manual del usuario del instrumento BACTEC MGIT 2 Agregar as pticamente 0 8 mL de suplemento BACTEC MGIT SIRE a cada tubo NOTA Es importante usar el suplemento suministrado con el kit 3 Con una micropipeta transferir as pticamente 100 uL de la soluci n MGIT STR de 83 ug mL al tubo MGIT que tiene la etiqueta correspondiente Con una pipeta transferir as pticamente 100 uL de la soluci n MGIT INH de 8 3 pg mL al tubo MGIT que tiene la etiqueta correspondiente Con una pipeta transferir as pticamente 100 uL de la soluci n MGIT RIF de 83 ug mL al tubo MGIT que tiene la etiqueta correspondiente Con una pipeta transferir as pticamente 100 uL de la soluci n MGIT EMB de 415 ug mL al tubo MGIT que tiene la etiqueta correspondiente Es importante agregar el antibi tico apropiado al tubo correspondiente No deben agregarse antibi ticos al tubo MGIT GC Concentraci n del Volumen a adido a Concentraci n final Antibi tico antibi tico los tubos MGIT en los tubos MGIT reconstituido para el an lisis MGIT STR
176. roissance BACTEC MGIT Boucher herm tiquement et m langer en inversant 2 3 fois Placer le tube dans un instrument BACTEC MGIT et tester jusqu obtenir un r sultat positif 15 REMARQUE Le d lai pour obtenir un r sultat positif doit tre gt 4 jours pour pouvoir servir comme inoculum AST Si le tube devient positif en lt 4 jours revenir l tape 1 et pr parer un nouveau tube d ensemencement 4 Ce tube peut d sormais tre utilis d un cinq jours apr s tre devenu positif Passer la Pr paration de l inoculum partir d un tube BACTEC MGIT 7 mL positif d crite ci dessus METHODE Mat riel fourni Trousse BACTEC MGIT 960 SIRE contenant un flacon de chaque antibiotique lyophilis et huit flacons de suppl ment SIRE environ 40 tests par antibiotique et par trousse Trousse BACTEC MGIT 960 STR 4 0 contenant un flacon d antibiotique lyophilis et deux flacons de suppl ment SIRE environ 20 tests par trousse et trousse BACTEC MGIT 960 INH 0 4 contenant un flacon d antibiotique lyophilis et deux flacons de suppl ment SIRE environ 20 tests par trousse Mat rieux requis mais non fournis Tubes BBL MGIT 7 mL avec indicateur de croissance mycobact rienne milieux de culture auxiliaires r actifs souches de contr le de qualit et mat riel de laboratoire n cessaires la r alisation de cette m thode M thode d ensemencement pour le test de sensibilit avec la trousse BACTEC MGIT 960 SIRE
177. rollo di qualit non fornisce i risultati attesi non riportare i risultati dei pazienti Non usare il prodotto prima di aver contattato il rappresentante locale di BD Le cause pi comuni di fallimento del controllo di qualit evidenziate durante la valutazione esterna dei kit BACTEC MGIT 960 SIRE sono state la contaminazione delle colture di controllo di qualit l inoculo eccessivo o insufficiente dei set AST la mancata distribuzione dei farmaci nelle provette appropriate e le condizioni di errore dello strumento RISULTATI Lo strumento BACTEC MGIT esegue il monitoraggio dei set AST fino a quando viene determinata la sensibilit o la resistenza Una volta completato il test del set lo strumento BACTEC MGIT riporta i risultati Vedi il Manuale d uso dello strumento BACTEC MGIT In presenza di condizioni che potrebbero influire sui risultati del test lo strumento BACTEC MGIT riporter il risultato del set AST come Errore X nessuna interpretazione di sensibilit Le condizioni che possono dar luogo ad un risultato di Errore X sono descritte nel Manuale d uso dello strumento BACTEC MGIT Sezione 7 Risoluzione dei problemi Nel riportare i risultati importante includere il metodo di analisi il nome e la concentrazione del farmaco e se il risultato stato ottenuto usando il sistema BACTEC MGIT o un metodo alternativo Per quanto riguarda il regime terapeutico appropriato e le dosi occorre consultare uno specialista di mala
178. rorganismos adequada para o teste de sensibilidade 1 O primeiro dia de um tubo MGIT positivo no instrumento considerado como Dia 0 2 Para a preparac o do in culo de teste dever usar se um tubo positivo MGIT de 7 mL desde o dia seguinte ao primeiro dia de resultado positivo no instrumento BACTEC MGIT Dia 1 e at ao quinto dia Dia 5 inclusiv ap s o instrumento revelar positividade Um tubo positivo durante mais de cinco dias dever ser objecto de subcultura num tubo fresco MGIT de 7 mL que contenha Suplemento de Crescimento BACTEC MGIT e testado no instrumento BACTEC MGIT at se tornar positivo procedendo se subsequentemente sua utilizac o entre o primeiro a quinto dias de positividade Consulte Preparac o de um Tubo de Sementeira MGIT a partir de Meio L quido 52 3 Seo tubo for um positivo para o Dia 1 ou Dia 2 utilizar uma suspens o de meio l quido MGIT para os procedimentos de inoculac o Homogeneizar bem Prossiga para o Procedimento de Inoculac o para o Teste de sensibilidade 4 Seo tubo for positivo do Dia 3 Dia 4 ou Dia 5 misturar bem e diluir 1 mL do meio l quido positivo em 4 mL de solu o salina est ril dilui o a 1 5 Homogeneizar bem o tubo Usar a suspens o dilu da para os procedimentos de inocula o Prossiga para o Procedimento de Inocula o para o Teste de sensibilidade Prepara o de um Tubo de Sementeira MGIT a partir de Meio L quido 1 Homogeneizar o tubo
179. s resistentes a STR con resultados discordantes R 960 S MP tuvieron resultados de sensibilidad en ambos centros De las dos cepas sensibles a STR con resultados discordantes S 960 R MP una tuvo resultados de sensibilidad en ambos centros y la otra tuvo resultados de resistencia en ambos centros De las dos cepas aisladas sensibles a INH con resultados discordantes S 960 R MP una tuvo resultados de sensibilidad en ambos centros y la otra tuvo resultados de resistencia en ambos centros 73 Tabla 5 Resultados de cepas cl nicas an lisis BACTEC MGIT 960 AST en comparaci n con el m todo de proporciones a partir de cultivos s lidos M todo de Sistema MGIT 960 AST proporciones Anti Concen Concen Resultados de sensibilidad Resultados de resistencia bi tico traci n S R traci n N de de N de de concordancias concordancia concordancias concordancia 95 CI 95 CI STR 10 0 g mL 78 21 4 0 ug mL 73 94 17 81 86 98 58 95 INH 1 0 ug mL 68 31 0 4 ug mL 68 100 30 97 95 100 83 100 Se supone un resultado S para el antibi tico a la concentraci n alta con el MGIT para todas las cepas aisladas con un resultado S para el antibi tico con la concentraci n baja con el MGIT Todas las cepas aisladas con resultados discordantes en el MGIT se analizaron por medio del procedimiento MP en dos centros independientes Las cinco cepas resistentes a STR con resultados discordantes R 960 S MP tuvieron resultados de sensibilidad
180. s concentraciones de los agentes antimicrobianos El Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI antes NCCLS sigue recomendando que el procedimiento del an lisis MP incluya dos concentraciones de los principales antibi ticos analizados con la excepci n de rifampicina Las concentraciones bajas recomendadas para el procedimiento MP representan las concentraciones cr ticas para estos antibi ticos Se define concentraci n cr tica como la concentraci n del antibi tico que permite interpretar un resultado como resistencia o sensibilidad Se determina que una cepa aislada es resistente si al menos el 1 de la poblaci n analizada crece en presencia de la concentraci n cr tica del antibi tico La concentraci n alta del antibi tico se utiliza para obtener un perfil del grado de resistencia en la poblaci n analizada Este resultado proporciona al m dico informaci n que le ayuda a determinar si es necesario modificar el tratamiento El an lisis BACTEC MGIT 960 SIRE proporciona el resultado de la sensibilidad en aproximadamente el mismo margen de tiempo que el sistema BACTEC 460TB Adem s este m todo no es radiom trico y permite en la mayor a de los casos que los resultados de la sensibilidad se informen antes que con el procedimiento MP El an lisis BACTEC MGIT 960 SIRE se desarroll con concentraciones cr ticas de estreptomicina isoniazida rifampicina y etambutol ligeramente inferiores a las concentraciones cr ticas utiliz
181. s de resistente num local e resultados de sens vel no outro local O isolado sens vel a STR discordante S 960 R MOP apresentou resultados de sens vel nos dois locais O dois isolados resistentes a INH discordantes R 960 S MOP apresentaram resultados de sens vel nos dois locais O isolado sens vel a INH S 960 R MOP discordante apresentou resultados de sens vel nos dois locais O isolado resistente a RIF R 960 S MOP discordante apresentou resultados de resistente nos dois locais O tr s isolados resistentes a EMB discordantes R 960 S MOP apresentaram resultados de sens vel nos dois locais Dos tr s isolados sens veis a EMB discordantes S 960 R MOP dois apresentaram resultados de sens vel nos dois locais e um apresentou resultado de resistente num local e resultado de sens vel no outro local Quadro 3 Resultados dos Isolados Cl nicos BACTEC MGIT 960 AST Comparado com o M todo de Proporc o a Partir de Culturas de Origem S lidas M todo de Proporc o Sistema MGIT 960 AST F RMACO Concen Concen Resultados Resultado trac o S R tra o de Sens vel de Resistente Concordantes Concordantes Concord ncia Concord ncia 95 CI 95 CI STR 2 0 ug mL 70 29 1 0 pg mL 65 93 28 97 84 98 82 100 INH 0 2 Hg mL 63 36 0 1 ug mL 62 98 35 97 92 100 86 100 RIF 1 0 g mL 70 29 1 0 pg mL 70 100 26 90 95 100 73 98 EMB 5 0 ug mL 87 25 5 0 pg mL 86 99 20 80 94 100 59 93 Todos os isolados com resultados
182. s de vidro 2 Raspar usando uma ansa est ril o m ximo n mero de col nias poss vel com um per odo de crescimento inferior a 14 dias tentando n o retirar o meio s lido Suspender as col nias em Middlebrook 7H9 Broth 3 Levar a suspens o ao misturador autom tico durante 2 a 3 min para desintegrar os aglomerados de maior dimens o A turva o da suspens o dever ser superior de um padr o 1 0 de McFarland Deixar a suspens o repousar durante 20 min sem perturba o 5 Transferir o l quido do sobrenadante para outro tubo est ril de 16 5 x 128 mm com tampa evitar transferir qualquer parte do sedimento e deixar assentar mais 15 min 6 Transferir o l quido sobrenadante dever ter um aspecto homog neo isento de aglomerados para um terceiro tubo est ril de 16 5 x 128 mm NOTA Neste passo a suspens o de microrganismos dever ser superior de um padr o 0 5 de McFarland 7 Ajustar a suspens o para um padr o 0 5 de McFarland recorrendo a compara o com um padr o de turva o 0 5 de McFarland N o ajuste abaixo de um padr o 0 5 de McFarland 8 Diluir 1 mL da suspens o ajustada em 4 mL de solu o salina est ril dilui o a 1 5 Consulte Procedimento de Inoculac o para o Teste de Sensibilidade Preparac o do In culo a partir de um Tubo Positivo BACTEC MGIT de 7 mL NOTA importante preparar o in culo utilizando as refer ncias de tempo que se seguem para obter a concentrac o de mic
183. s frascos de f rmaco liofilizado entre 2 e 8 C Ap s reconstitui o as solu os antibi ticas podem ser congeladas e conservadas a 20 C ou menos durante um per odo m ximo de seis meses n o excedendo o prazo de validade original Depois de descongelar usar de imediato Descartar o que n o se utilizar Ap s a recep o armazene o BACTEC MGIT SIRE Supplement entre 2 e 8 C ao abrigo da luz Evite congelar ou aquecer excessivamente Abrir e usar antes do final do prazo de validade Minimizar a exposi o luz Instru es de Utiliza o Reconstitua cada frasco de f rmaco liofilizado de Estreptomicina do BACTEC MGIT 960 SIRE Kit com 4 mL de gua destilada desionizada est ril para produzir uma solu o stock de 83 pg mL Reconstitua cada frasco de f rmaco liofilizado de Isoniazida do BACTEC MGIT 960 SIRE Kit com 4 mL de gua destilada desionizada est ril para produzir uma solu o stock de 8 3 pg mL Reconstitua cada frasco de farmaco liofilizado de Rifampicina do BACTEC MGIT 960 SIRE Kit com 4 mL de gua destilada desionizada est ril para produzir uma solu o stock de 83 ug mL Reconstitua cada frasco de farmaco liofilizado de Etambutol do BACTEC MGIT 960 SIRE Kit com 4 mL de agua destilada desionizada est ril para produzir uma solu o stock de 415 pg mL NOTA Os frascos seguintes s o reconstituidos com um volume diferente A utilizac o de um volume incorrecto de gua destilada est ril para a
184. s step 7 Adjust the suspension to a 0 5 McFarland standard by visual comparison to a 0 5 McFarland turbidity standard Do not adjust below a 0 5 McFarland Standard 8 Dilute 1 mL of the adjusted suspension in 4 mL of sterile saline 1 5 dilution Proceed to Inoculation Procedure for Susceptibility Test Preparation of the Inoculum from a Positive BACTEC MGIT 7 mL Tube NOTE It is important to prepare the inoculum using the following time references to obtain the appropriate organism concentration for the susceptibility test 1 The first day of an instrument positive MGIT tube is considered Day 0 2 For the preparation of the test inoculum a positive 7 mL MGIT tube should be used the day after it first becomes positive on the BACTEC MGIT instrument Day 1 up to and including the fifth day Day 5 after instrument positivity A tube which has been positive longer than five days should be subcultured to a fresh 7 mL MGIT tube containing BACTEC MGIT Growth Supplement and tested on the BACTEC MGIT instrument until positive and used from one to five days following positivity See Preparation of a Seed MGIT Tube from Liquid Media 3 If the tube is a Day 1 or Day 2 positive use the MGIT broth suspension for the inoculation procedures Mix well Proceed to Inoculation Procedure for Susceptibility Test 4 If the tube is a Day 3 Day 4 or Day 5 positive mix well then dilute 1 mL of the positive broth in 4 mL of sterile salin
185. so livello di resistenza all isoniazide L isolato stato testato con il sistema Nessun BACTEC MGIT isoniazide 0 4 ug mL intervento ed risultato resistente Errore X Nessun referto Ripetere il test INH 0 4 ug mL Resistente LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA Il test di sensibilit del sistema BACTEC MGIT non interpreta il grado di sensibilit dell isolato analizzato risultati vengono riportati come S sensibile o R resistente per il farmaco e la concentrazione del test Al fine di evitare l incidenza di falsa sensibilit il test BACTEC MGIT 960 SIRE e stato sviluppato con concentrazioni critiche di streptomicina isoniazide rifampicina ed etambutolo leggermente inferiori rispetto alle concentrazioni critiche usate nel metodo delle proporzioni L analisi a concentrazioni pi elevate come consigliato migliora la capacit di individuare gli isolati con basso livello di resistenza I test di sensibilit del sistema BACTEC MGIT possono essere eseguiti solo con uno strumento BACTEC MGIT Non e possibile leggere manualmente i risultati dei set AST Usare solo colture pure di M tuberculosis in quanto le colture contaminate o contenenti ceppi multipli di micobatteri possono dare luogo a risultati errati e non devono pertanto essere analizzate Non si consiglia l analisi diretta da campioni clinici Prima di standardizzare le sospensioni preparate da terreni solidi lasciarle riposare per il tempo stabilito Gli i
186. stem streptomycin 4 0 ug mL and result is resistant Consult laboratory for confirmation Isolate tested with BACTEC MGIT System isoniazid 0 4 ug mL and result is susceptible This isolate with a resistant result at 0 1 ug mL and a susceptible result at 0 4 ug mL indicates low level resistance to isoniazid Isolate tested with BACTEC MGIT System isoniazid 0 4 ug mL and result is resistant Action No action Recommend testing at higher concentration STR and or INH Recommend testing EMB at higher concentration using alternate method Recommend testing EMB at both critical concentration and higher concentration with an alternate method Repeat test Action No action Isolate should be tested by an alternate method to verify result Repeat test No action No action Repeat test The BACTEC MGIT System susceptibility test does not interpret the degree of susceptibility of the isolate being tested Results are reported as either S susceptible or R resistant for the drug and concentration tested The BACTEC MGIT 960 SIRE test was developed with critical concentrations for streptomycin isoniazid rifampin and ethambutol that are slightly lower than the critical concentrations used in the MOP in order to avoid false susceptibility Testing of 7 the higher concentrations as recommended will enhance the ability to detect isolates with low level resistance The
187. stes Os isolados que s o resistentes com a concentra o cr tica de estreptomicina etambutol e ou isoniazida devem ser testados com uma concentra o de f rmaco mais elevada no Sistema BACTEC MGIT ou utilizando um m todo alternativo Neste caso pode ser efectuado o relat rio de um resultado final de resist ncia na concentra o cr tica com a notifica o de que est a ser efectuado um teste suplementar na concentra o elevada O teste de isolados resistentes com uma concentra o mais elevada importante para identificar os que apresentam resist ncia de baixo n vel ou seja resistentes com a concentra o cr tica e sens veis com a concentra o elevada As concentra es elevadas no Sistema BACTEC MGIT foram concebidas para serem inferiores s concentra es utilizadas no MOP Esta concep o do Sistema BACTEC MGIT tal que um resultado de resist ncia especialmente para estreptomicina pode nem sempre se correlacionar com um resultado de resist ncia com a concentra o elevada no MOP Caso se obtenha um resultado de estreptomicina que resistente concentra o elevada deve ser efectuado um m todo alternativo de teste com esta concentra o PRINC PIOS DO PROCEDIMENTO O BBL MGIT 7 mL Mycobacteria Growth Indicator Tube Tubo Indicador do Crescimento de Micobact rias um tubo que cont m um Middlebrook 7H9 Broth Meio L quido Middlebrook 7H9 modificado que sustenta o crescimento e o isolamento de micob
188. t rile dilution 1 5 Passer la M thode d ensemencement pour le test de sensibilit Pr paration de I inoculum partir d un tube BACTEC MGIT 7 mL positif REMARQUE Il importe de pr parer l inoculum en respectant les r f rences temporelles suivantes pour obtenir la concentration de microorganismes appropri e pour le test de sensibilit 1 2 Le premier jour d un tube MGIT positif dans l instrument est consid r comme Jour 0 Pour la pr paration de l inoculum pour le test un tube MGIT 7 mL positif doit tre utilis le jour suivant celui o il a t d termin comme positif par l instrument BACTEC MGIT Jour 1 et au plus dans les cinq jours Jour 5 suivant l apparition de la positivit Un tube positif depuis plus de cinq jours doit tre repiqu dans un nouveau tube MGIT 7 mL contenant le suppl ment de croissance BACTEC MGIT et test sur l instrument BACTEC MGIT jusqu ce qu il soit d termin comme positif puis utilis dans les cinq jours qui suivent Se reporter Pr paration d un tube MGIT d ensemencement partir de milieux liquides S il s agit d un tube positif au Jour 1 ou au Jour 2 utiliser la suspension de bouillon MGIT pour proc der l ensemencement Bien m langer Passer la M thode d ensemencement pour le test de sensibilit S il s agit d un tube positif au Jour 3 Jour 4 ou Jour 5 bien m langer puis diluer 1 mL de bouillon positif dans 4 mL de s rum physiolo
189. t absetzen Inokula die aus festen Medien zubereitet wurden sollten visuell auf eine Tr bung von 0 5 McFarland eingestellt werden andernfalls k nnen falsche Ergebnisse erzielt oder AST Ansatzfehler verursacht werden Wenn zur Inokulation des Arzneimittelr hrchens an entsprechender Stelle keine 1 5 Verd nnung der Bakteriensuspension verwendet wird k nnen falsche Ergebnisse erzielt werden Wenn zur Inokulation des Wachstumskontrollr hrchens keine 1 100 Verd nnung der Bakteriensuspension verwendet wird k nnen falsche Ergebnisse erzielt oder AST Ansatzfehler verursacht werden Arzneimittel die nicht mit der korrekten Menge sterilen destillierten deionisierten Wassers rekonstituiert werden k nnen zu falschen Ergebnissen f hren Das gr ndliche Durchmischen der inokulierten Reagenzgl ser ist uBerst wichtig Wenn es vers umt wird k nnen Mikroorganismen f lschlich als resistent getestet werden Wenn die R hrchen des AST Ansatzes nicht in der richtigen Anordnung in den AST R hrchenst nder gestellt werden k nnen falsche Ergebnisse erzielt werden Wenn die falsche Arzneimitteldefinition f r den jeweiligen R hrchenst nder gew hlt wird k nnen ung ltige oder falsche Ergebnisse erzielt werden Wenn der AST Ansatz nicht korrekt in das Ger t eingesetzt wird kann ein anonymer Fehlerzustand ausgel st werden der innerhalb von 8 Stunden behoben werden muB Wenn der Fehlerzustand nicht innerhalb von 8 Stunden behoben wird m
190. t d examiner les tubes et les flacons pour v rifier l absence de contamination ou de d t rioration Jeter tout tube ou flacon apparaissant suspect Examiner avec soin les tubes tomb s terre liminer les tubes visiblement endommag s En cas de bris de tube 1 Fermer les tiroirs de l instrument 2 teindre l instrument 3 vacuer les lieux imm diatement 4 Se reporter aux directives de l tablissement du centre pid miologique CDC Un tube ensemenc bris ou pr sentant une fuite peut produire un a rosol de mycobact ries manipuler imp rativement le tube comme il convient St riliser l autoclave tous les tubes MGIT avant de les jeter PREPARATION DE L INOCULUM Toutes les pr parations d taill es ci dessous doivent tre r alis es partir de cultures pures de M tuberculosis Le laboratoire doit confirmer au moyen de techniques d identification appropri es que l isolat tester est une culture pure de M tuberculosis L inoculum peut tre pr par partir de milieux solides ou d un tube BACTEC MGIT 7 mL positif De plus des cultures sur milieux liquides ou solides peuvent tre utilis es pour pr parer un tube MGIT d ensemencement qui peut ensuite servir la pr paration de l inoculum Chacune de ces options est d crite ci apr s Pr paration de l inoculum partir d un milieu solide REMARQUE Il importe de pr parer l inoculum conform ment aux instructions suivantes pour obtenir la co
191. t des conditions d erreur de l instrument RESULTATS L instrument BACTEC MGIT contr le les modules AST jusqu ce que la d termination de sensibilit ou de r sistance soit effectu e Une fois que le test est termin les r sultats sont donn s par l instrument BACTEC MGIT se reporter au manuel d utilisation de l instrument BACTEC MGIT L instrument BACTEC MGIT donne un r sultat d erreur X ou d absence d interpr tation de sensibilit pour le module AST lorsque certaines conditions susceptibles d affecter les r sultats de test sont rencontr es Les conditions susceptibles de se traduire par un r sultat d erreur X sont d crites dans la Section 7 R solution des probl mes du manuel d utilisation de l instrument BACTEC MGIT Lors de la communication des r sultats il est important d inclure la m thode de test le nom de l antibiotique et sa concentration et d indiquer si le r sultat a t obtenu avec l instrument BACTEC MGIT ou avec une m thode de substitution Le sp cialiste des maladies pulmonaires et ou infectieuses dans la prise en charge de la tuberculose doit tre consult concernant le r gime th rapeutique et les dosages appropri s En cas de r sultats de r sistance inattendus v rifier l identit de l isolat test comme M tuberculosis S assurer que seule une culture pure a t utilis e carter la pr sence d un m lange de mycobact ries etc Une mono r sistance l thambutol n est pas courante
192. t entry feature refer to the BACTEC MGIT Instrument User s Manual Ensure that the order of the tubes in the AST Set Carrier conforms to the set carrier definitions selected when performing the AST set entry feature 8 Streak 0 1 mL of the organism suspension to a Trypticase Soy Agar with 5 Sheep Blood TSA II plate Enclose in a plastic bag Incubate at 35 37 C 9 Check the blood agar plate at 48 h for bacterial contamination If the blood agar plate shows no growth then allow AST testing to proceed If the blood agar plate shows growth discard the AST set refer to the BACTEC MGIT Instrument User s Manual and repeat testing with pure culture NOTE The susceptibility test may be configured in a variety of formats For example a five tube carrier set containing only the critical concentrations can be configured into the system A variety of other tube carrier sets can be configured depending on the optional profile tests being run refer to BACTEC MGIT Instrument User s Manual User Quality Control Upon receipt of a new shipment or lot number of BACTEC MGIT 960 SIRE Kit vials it is recommended that the control organism shown below be tested The control organism should be a pure culture and the culture should be prepared according to the INOCULUM PREPARATION instructions The quality control QC AST Set should be prepared according to the Inoculation Procedure for Susceptibility Test instructions for the drug kits being t
193. te la aparici n de Mycobacterium tuberculosis multirresistente TB MR se ha convertido en un serio problema para la salud p blica La resistencia a cualquiera de los cuatro antibi ticos principales estreptomicina STR isoniazida INH rifampicina RIF y etambutol EMB hace m s dif cil y caro el tratamiento de la enfermedad La r pida detecci n de estas cepas aisladas resistentes es esencial para proporcionar un tratamiento eficaz al paciente Para el an lisis de la sensibilidad antimicobacteriana se han utilizado generalmente dos m todos El primer m todo conocido como m todo de las proporciones utiliza el agar Middlebrook y Cohn 7H10 Este m todo compara el n mero de colonias en medios con y sin antibi tico Se detecta resistencia a un antibi tico cuando al menos el 1 de una poblaci n bacteriana es resistente a la concentraci n del antibi tico analizado Generalmente los resultados pueden obtenerse despu s de 21 d as de incubaci n El segundo m todo conocido como m todo radiom trico de sensibilidad BACTEC 460TB3 tarda generalmente de 4 a 12 d as Este m todo se basa en la producci n de di xido de carbono marcado radioactivamente con 14C por parte de las micobacterias en crecimiento esta producci n se manifiesta por un aumento del ndice de crecimiento en el sistema Tradicionalmente el procedimiento del m todo de las proporciones MP ha incluido el an lisis de la sensibilidad de M tuberculosis con do
194. ten entweder mit dem BACTEC MGIT System oder einer alternativen Methode bei einer h heren Arzneimittelkonzentration getestet werden In diesem Fall kann der Befund als resistent bei kritischer Konzentration ausgegeben werden mit dem Vermerk da eine zus tzliche Pr fung bei einer h heren Konzentration durchgef hrt wird Die Testung von resistenten Isolaten bei einer h heren Konzentration ist wichtig f r die Identifizierung von Isolaten mit geringer Resistenz d h Isolaten die bei der kritischen Konzentration resistent und bei der hohen Konzentration empfindlich sind Die hohen Konzentrationen im BACTEC MGIT System wurden niedriger angesetzt als die Konzentrationen die bei der Proportionsmethode Anwendung finden Aufgrund dieser Konfiguration des BACTEC MGIT Systems korreliert das Ergebnis resistent insbesondere bei Streptomycin ggf nicht immer mit einem Resistenzbefund der bei der hohen Konzentration mit der Proportionsmethode erzielt wurde Falls ein Isolat bei der hohen Konzentration von Streptomycin als resistent getestet wird sollte es anhand einer alternativen Methode bei der gleichen Konzentration getestet werden VERFAHRENSGRUNDLAGEN Das BBL MGIT 7 mL Indikatorr hrchen f r Mykobakterienwachstum enth lt eine modifizierte Middlebrook 7H9 Bouillon die das Wachstum und den Nachweis von Mykobakterien f rdert siehe Packungsbeilage f r das BBL MGIT 7 mL Indikatorr hrchen Das MGIT Indikatorr hrchen ist ein
195. tenu aupr s du Centers for Disease Control and Prevention centre pid miologique aux tats Unis Le panel se compose de 30 isolats de M tuberculosis aux profils de sensibilit connus en utilisant la m thode des proportions test par chaque centre investigateur 21 Le tableau 1 indique le pourcentage de concordance du test de sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE pour chaque antibiotique comparativement aux r sultats attendus du CDC Tableau 1 Panel d preuve du CDC Test en centre investigateur du BACTEC MGIT 960 MGIT 960 Nombre d isolats Nombre d isolats d isolats test s corrects corrects STR 1 0 120 111 92 5 INH 0 1 120 119 99 2 RIF 1 0 120 120 100 EMB 5 0 119 111 93 3 STR 4 0 29 29 100 INH 0 4 87 82 94 3 Seuls les isolats r sistants aux concentrations critiques ont t test s avec STR 4 0 et INH 0 4 Test d isolats cliniques Au total 106 isolats cliniques de M tuberculosis ont t test s avec le test de sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE et le test de sensibilit par la m thode des proportions Les tests incluaient des chantillons cliniques frais et des isolats m res provenant de cultures en milieux liquides et solides Au total 195 r sultats de test ont t obtenus pour le test initial de sensibilit effectu pour la streptomycine l isoniazide et la rifampicine concentration critique Une valuation distincte de l thambutol a t effectu e partir d aliquots congel s des isolats c
196. ternativen einer h heren Konzentration Methode konsultieren empfohlen Falls mono resistent gegen ber EMB Testung Ethambutol EMB sowohl bei der Isolat mit dem BACTEC MGIT System kritischen als Ethambutol 5 0 ug mL getestet auch bei der Ergebnis resistent Mono Resistenz h heren gegen ber Ethambutol ist Konzentration ungew hnlich Labor bzgl anhand einer Best tigung konsultieren alternativen Methode empfohlen Kein Bericht Test wiederholen Fehler X Befundbericht f r BACTEC MGIT 960 STR 4 0 und INH 0 4 Arzneimittel Konzentration STR 4 0 ug mL MGIT System Ergebnis Empfohlener Bericht Ma nahmen Empfindlich Isolat mit dem BACTEC MGIT System Keine Streptomycin bei 4 0 pg mL getestet Ma nahmen Ergebnis empfindlich Resistenz bei 1 0 ug mL und Empfindlichkeit bei 4 0 ug mL deuten auf eine geringe Resistenz dieses Isolats gegen ber Streptomycin hin Resistent Isolat mit dem BACTEC MGIT System Isolat sollte Streptomycin bei 4 0 pg mL getestet anhand einer Ergebnis resistent Labor bzgl alternativen Best tigung konsultieren Methode getestet werden um das Ergebnis zu best tigen Test wiederholen Fehler X Kein Bericht Keine Ma nahmen INH 0 4 ug mL Empfindlich Isolat mit dem BACTEC MGIT System Isoniazid bei 0 4 ug mL getestet Ergebnis empfindlich Resistenz bei 0 1 ugmL und Empfindlichkeit bei 0 4 ug mL deuten auf e
197. test di isolati clinici per ciascun farmaco concentrazione critica provenienti dai terreni di coltura solidi Tabella 2 Risultati di isolati clinici Test BACTEC MGIT 960 AST confrontato al metodo delle proporzioni su isolati da terreni di coltura liquidi Metodo delle Sistema MGIT 960 AST proporzioni FAR Concen Concen Risultati di sensibilit Risultati di resistenza MACO trazione S R trazione N di di N di di concordanze concordanza concordanze concordanza 95 CI 95 CI STR 20ugiml 69 27 1 0 ug mL 62 90 26 96 80 96 81 100 INH 0 2pg mL 59 37 0 1 pg mL 57 97 36 97 88 100 86 100 RIF 1 0 ug mL 72 24 1 0 pg mL 71 99 24 100 93 100 95 100 EMB 50ygg mL 91 20 5 0 pg mL 88 97 17 85 91 99 62 97 Tutti gli isolati con risultati MGIT discordi sono stati testati con il metodo delle proporzioni presso due centri indipendenti Dei sette isolati STR resistenti discordi R 960 S Metodo delle proporzioni tre sono risultati resistenti presso entrambi i centri e uno risultato sensibile presso entrambi i centri Gli altri tre sono risultati resistenti 47 presso un centro e sensibili presso l altro L isolato STR sensibile discorde S 960 R Metodo delle proporzioni risultato sensibile presso entrambi i centri due isolati INH resistenti discordi R 960 S Metodo delle proporzioni sono risultati sensibili presso entrambi i centri L isolato INH sensibile discorde S 960 R Metodo delle proporzioni risult
198. tions may be frozen and stored at 20 C or colder up to six months not to exceed the original expiration date Once thawed use immediately Discard unused portions 2 BACTEC MGIT SIRE Supplement On receipt store in dark at 2 8 C Avoid freezing or overheating Open and use prior to the expiration date Minimize exposure to light Directions For Use Reconstitute each BACTEC MGIT 960 SIRE Kit Streptomycin lyophilized drug vial with 4 mL of sterile distilled deionized water to make a stock solution of 83 ug mL Reconstitute each BACTEC MGIT 960 SIRE Kit Isoniazid lyophilized drug vial with 4 mL of sterile distilled deionized water to make a stock solution of 8 3 ug mL Reconstitute each BACTEC MGIT 960 SIRE Kit Rifampin lyophilized drug vial with 4 mL of sterile distilled deionized water to make a stock solution of 83 ug mL Reconstitute each BACTEC MGIT 960 SIRE Kit Ethambutol lyophilized drug vial with 4 mL of sterile distilled deionized water to make a stock solution of 415 ug mL NOTE The following are reconstituted with a different volume Failure to use the appropriate volume of sterile distilled water for reconstitution of the higher drug concentrations will invalidate those test results Reconstitute each BACTEC MGIT 960 STR 4 0 Kit Streptomycin lyophilized drug vial with 2 mL of sterile distilled deionized water to make a stock solution of 332 ug mL Reconstitute each BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Kit Isoniazid
199. tions tested at STR 4 0 and INH 0 4 Clinical Isolate Testing A total of 106 clinical isolates of M tuberculosis were tested with the BACTEC MGIT 960 SIRE susceptibility test and the MOP susceptibility test This included testing of both fresh clinical and stock isolates from both liquid and solid culture sources This generated a total of 195 test results for the initial susceptibility test performed for streptomycin isoniazid and rifampin critical concentration A separate evaluation of ethambutol was performed from frozen aliquots of the original clinical and stock isolates as well as prospective clinical isolates from both liquid and solid culture sources This generated a total of 223 test results for the ethambutol test at the critical concentration Table 2 presents the results from clinical isolate testing for each drug critical concentration from liquid source cultures Table 3 presents the results from clinical isolate testing for each drug critical concentration from solid source cultures Table 2 Clinical Isolate Results BACTEC MGIT 960 AST Compared to Method of Proportion from Liquid Source Cultures Method of Proportion MGIT 960 AST System DRUG Concen Concen Susceptible Results Resistant Result tration S R tration Agreement Agreement Agreement Agreement 95 CI 95 CI STR 2 0pg mL 69 27 1 0 pg mL 62 90 26 96 80 96 81 100 INH 0 2pg mL 59 37 0 1 pg mL 57 97 36 97 88 100 86 100 RIF 1 0 pg mL 7
200. tiques la concentration critique est de 96 pour STR 100 pour INH 100 pour RIF et 100 pour EMB La reproductibilit globale pour chacun des antibiotiques la concentration lev e est de 96 pour STR 4 0 et 100 pour INH 0 4 Test du panel d preuve du CDC Les performances du test de sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE ont t valu es en utilisant un panel d isolats d preuve obtenu aupr s du Centers for Disease Control and Prevention centre pid miologique aux tats Unis Le panel se compose de 30 isolats de M tuberculosis aux profils de sensibilit connus en utilisant la m thode des proportions Le panel a t test deux reprises avec le test de sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE et les deux r sultats taient concordants Les r sultats obtenus avec BACTEC MGIT 960 SIRE ont t compar s aux r sultats attendus du CDC Le pourcentage de concordance global avec les r sultats attendus du CDC pour chacun des antibiotiques la concentration critique est de 93 pour STR 100 pour INH 100 pour RIF et 100 pour EMB Le pourcentage de concordance global avec les r sultats attendus du CDC pour chacun des antibiotiques la concentration lev e est de 100 pour STR 4 0 et de 100 pour INH 0 4 valuation clinique Le test de sensibilit BACTEC MGIT 960 SIRE a t valu dans quatre centres investigateurs loign s g ographiquement comprenant des centres de r f rencement r gionaux et d
201. trousse BACTEC MGIT 960 INH 0 4 sont concues pour tester des concentrations plus lev es d antibiotique Les trousses de test de sensibilit BACTEC MGIT 960 sont destin es aux syst mes BACTEC MGIT 960 et BACTEC MGIT 320 RESUME ET EXPLICATION Le test de sensibilit aux antimycobact riens est pr cieux pour un traitement appropri des patients atteints de tuberculose Le traitement de la tuberculose s effectue en g n ral par antibioth rapie multiple associant les antimycobact riens suivants streptomycine isoniazide rifampicine et thambutol Il importe que les antimycobact riens prescrits d montrent une activit sp cifique contre Mycobacterium tuberculosis v rifi e par la sensibilit de l isolat ces antibiotiques Les souches multir sistantes de Mycobacterium tuberculosis MDR TB sont r cemment devenues un grave probl me de sant publique Une r sistance l un des quatre antibiotiques principaux que sont la streptomycine STR l isoniazide INH la rifampicine RIF et l thambutol EMB rend le traitement plus difficile et plus on reux La d tection rapide de ces isolats r sistants est essentielle pour une prise en charge efficace des patients Deux m thodes ont t largement utilis es pour tester la sensibilit aux antimycobact riens La premi re m thode connue sous le nom de m thode des proportions utilise des g loses Middlebrook et Cohn 7H10 Elle compare le nombre de colonies sur g lose
202. tta diluizione dell organismo di controllo di qualit sia per il Controllo di crescita che per le provette di farmaco importante dispensare il farmaco appropriato nella provetta con etichetta corrispondente L impiego di organismi a sensibilit estesa per il controllo di qualit non permetter di rilevare l introduzione di un farmaco sbagliato nelle provette del set AST Se entro 4 13 giorni si ottengono risultati conformi a quelli della tabella seguente il kit per test BACTEC MGIT 960 SIRE pronto per il test degli isolati di pazienti Se non si ottengono i risultati appropriati ripetere il test Se pur ripetendo il test non si ottengono i risultati appropriati non usare il prodotto prima di aver contattato il rappresentante locale di BD Ceppi GC MGIT STR MGIT INH MGIT RIF MGIT EMB M tuberculosis ATCC 27294 Positivo Sensibile Sensibile Sensibile Sensibile Ceppi GC MGIT STR 4 0 MGIT INH 0 4 M tuberculosis ATCC 27294 Positivo Sensibile Sensibile Lo stesso organismo di controllo deve essere testato per il controllo di qualit in batch una volta alla settimana quando si esegue il test di sensibilit Se il controllo di qualit in batch fallisce non riportare i risultati per il farmaco o i farmaci che ha fallito il test per il periodo considerato Ripetere il controllo di qualit per il farmaco o i farmaci e per gli isolati di pazienti associati al fallimento iniziale del controllo di qualit Se la replica del cont
203. ttie polmonari e o infettive esperto di tubercolosi Nel caso di risultati imprevisti di resistenza verificare che l identificazione dell isolato testato corrisponda a M tuberculosis e assicurarsi che sia stata usata solamente una coltura pura escludere la presenza di micobatteri misti ecc La monoresistenza all etambutolo rara e deve essere verificata 2 8 43 Sommario dei risultati di BACTEC MGIT 960 SIRE alla concentrazione critica Farmaco concentrazione STR 1 0 ug mL INH 0 1 pg mL RIF 1 0 ug mL EMB 5 0 ug mL Risultati sistema MGIT Sensibile SIRE Resistente SIR Resistente E Errore X Referto consigliato L isolato stato testato con il sistema BACTEC MGIT farmaco concentrazione ed e risultato sensibile L isolato stato testato con il sistema BACTEC MGIT farmaco concentrazione ed e risultato resistente Seguono i risultati del test farmaco ad una concentrazione pi elevata se eseguito Resistenza a pi farmaci non solo all etambutolo EMB L isolato stato testato con il sistema BACTEC MGIT Etambutolo 5 0 ug mL ed risultato resistente Consultare il laboratorio per eseguire un test con EMB ad una concentrazione pi elevata Monoresistenza all etambutolo EMB L isolato stato testato con il sistema BACTEC MGIT Etambutolo 5 0 ug mL ed risultato resistente La monoresistenza all etambutolo rara Consultare il laboratorio per ottener
204. uB der AST Ansatz verworfen und neu vorbereitet werden Wenn die SIRE Supplement nicht im AST Ansatz verwendet wird k nnen falsche Ergebnisse erzielt werden Einem AST Ansatz darf KEINE BACTEC MGIT Wachstumssupplement zugesetzt werden ERWARTETE WERTE Insgesamt wurden 106 klinische Isolate von M tuberculosis in vier Labors an verschiedenen geographischen Standorten mit dem BACTEC MGIT 960 SIRE Empfindlichkeitstest gepr ft Die Tests wurden sowohl mit frischen klinischen Isolaten als auch mit Stammisolaten aus fl ssigen und festen Kulturen durchgef hrt Insgesamt wurden 200 Empfindlichkeitstests aus fl ssigen und festen Medien bei den kritischen Konzentrationen von Streptomycin STR Isoniazid INH sowie Rifampin RIF und in einem separaten Testansatz insgesamt 223 Empfindlichkeitstests aus fl ssigen und festen Medien bei der kritischen Konzentration von Ethambutol durchgef hrt Die gesamtdurchschnittliche Testzeit f r den BACTEC MGIT 960 SIRE Empfindlichkeitstests betrug sieben bis acht Tage wobei die einzelnen Testzeiten zwischen vier und vierzehn Tagen lagen Diese Daten sind in Abbildung 1 am Ende der Packungsbeilage aufgef hrt LEISTUNGSMERKMALE Analytische Studien Keimdichtebereiche der AST Inokula aus fl ssigen und festen Medien Fl ssige Medien Das empfohlene Verfahren zur Vorbereitung eines AST Ansatzes aus einem positiven MGIT 7 mL R hrchen schreibt die Verwendung eines direkten Inokulums an Tag 1 und Tag 2
205. uL of 83 ug mL MGIT RIF solution to the appropriately labeled MGIT tube Aseptically pipet 100 uL of 415 ug mL MGIT EMB solution to the appropriately labeled MGIT tube It is important to add the correct drug to the corresponding tube No antibiotics should be added to the MGIT GC tube Concentration of Volume Added to Final Concentration in Drug Drug after MGIT Tubes for Test MGIT Tubes Reconstitution MGIT STR 83 pg mL 100 pL 1 0 ug mL MGIT INH 8 3 ug mL 100 uL 0 1 ug mL MGIT RIF 83 pg mL 100 uL 1 0 pg mL MGIT EMB 415 ug mL 100 uL 5 0 pg mL These drugs must be reconstituted using 4 mL sterile deionized water to achieve concentrations indicated 4 Growth Control tube preparation and inoculation Aseptically pipet 0 1 mL of the organism suspension see INOCULUM PREPARATION into 10 mL of sterile saline to prepare the 1 100 Growth Control suspension Mix the Growth Control suspension thoroughly Inoculate 0 5 mL of the 1 100 Growth Control suspension into the MGIT tube labeled GC 5 Drug containing tube inoculation Aseptically pipet 0 5 mL of the organism suspension see INOCULUM PREPARATION into each of the FOUR remaining drug tubes STR INH RIF EMB 6 Tightly recap the tubes Mix tubes thoroughly by gentle inversion three to four times 7 Enter the AST set into the BACTEC MGIT instrument using the AST set entry feature refer to the BACTEC MGIT Instrument User s Manual Ensure that the order of the tubes in the AST Set
206. ubo MGIT com a identificac o apropriada importante adicionar o f rmaco correcto ao tubo correspondente N o devem ser adicionados antibi ticos ao tubo CC MGIT Medicamento Concentrac o do Volume Adicionado Concentrac o F rmaco ap s aos Tubos MGIT Final nos Reconstitui o para Teste Tubos MGIT MGIT STR 4 0 332 ug mL 100 uL 4 0 ug mL MGIT INH 0 4 33 2 ug mL 100 pL 0 4 ug mL Estes f rmacos devem ser reconstitu dos utilizando 2 mL de gua est ril desionizada para atingir as concentra es indicadas 54 4 Prepara o e inocula o do tubo de Controlo do Crescimento Pipetar de forma ass ptica 0 1 mL de suspens o do organismo consulte PREPARA O DO IN CULO para dentro de 10 mL de soro fisiol gico est ril para preparar a suspens o de Controlo do Crescimento a 1 100 Homogeneizar a suspens o de Controlo do Crescimento por completo Inocule 0 5 mL da suspens o de Controlo do Crescimento a 1 100 para dentro do tubo MGIT identificado como CC 5 Inocula o do tubo contendo f rmaco Pipetar de forma ass ptica 0 5 mL de suspens o do organismo consulte PREPARA O DO IN CULO para dentro dos tubos dos f rmacos 6 Voltar a tapar os tubos firmemente Homogeneizar os tubos por completo atrav s de invers o suave tr s a quatro vezes 7 Introduza o conjunto AST dentro do instrumento BACTEC MGIT utilizando a fun o de entrada do conjunto AST consulte o Manual do Utilizador do Instr
207. ugeben Gut durchmischen 3 0 5 mL dieser Suspension in ein MGIT 7 mL R hrchen zugeben dem 0 8 mL BACTEC MGIT Wachstumssupplement zugesetzt sind 4 Dicht verschlieBen und durch zwei bis dreimaliges Umdrehen vorsichtig mischen 5 Das R hrchen in ein BACTEC MGIT Ger t geben und testen bis Sie ein positives Ergebnis erhalten HINWEIS F r die Verwendung als AST Inokulum gilt Bis zu einem positiven Testergebnis m ssen mindestens 4 Tage vergehen Falls ein positives Ergebnis in weniger als 4 Tagen feststeht zu Schritt 1 zur ckkehren und ein neues Inokulumr hrchen vorbereiten 6 Dieses R hrchen kann nun bis zu f nf Tagen nach Feststellen eines positiven Ergebnisses verwendet werden Mit der oben beschriebenen Vorbereitung des Inokulums aus einem positiven BACTEC MGIT 7 mL R hrchen fortfahren Vorbereitung eines MGIT Inokulumr hrchens aus festen Medien 1 Eine sterile se verwenden und das Wachstum von der Schr ge schaben In ein MGIT 7 mL R hrchen geben dem 0 8 mL BACTEC MGIT Wachstumssupplement zugesetzt wurden 2 Dicht verschlieBen und durch zwei bis dreimaliges Umdrehen vorsichtig mischen 3 Das R hrchen in ein BACTEC MGIT Ger t geben und testen bis Sie ein positives Ergebnis erhalten HINWEIS F r die Verwendung als AST Inokulum gilt Bis zu einem positiven Testergebnis m ssen mindestens 4 Tage vergehen Falls ein positives Ergebnis in weniger als 4 Tagen feststeht zu Schritt 1 zur ckkehren und ein n
208. ulaci n para el an lisis de sensibilidad Si el tubo es positivo los d as 3 4 5 mezclar bien y diluir 1 mL del caldo positivo en 4 mL de soluci n salina est ril diluci n de 1 5 Mezcle bien el tubo Utilizar la suspensi n diluida para los procedimientos de inoculaci n Continuar con el Procedimiento de inoculaci n para el an lisis de sensibilidad Preparaci n de un tubo MGIT de siembra a partir de medios l quidos 1 2 Mezcle el tubo por inversi n o agitaci n vorticial Haga una diluci n 1 100 a adiendo 0 1 mL del cultivo a 10 mL de caldo BBL Middlebrook 7H9 o caldo BBL MGIT Mezclar bien A ada 0 5 mL de esta suspensi n a 7 mL de tubo MGIT al que se han a adido 0 8 mL de suplemento para crecimiento BACTEC MGIT Cierre bien y mezcle suavemente invirtiendo 2 a 3 veces Ponga el tubo en el instrumento BACTEC MGIT y analice hasta obtener un resultado positivo NOTA El tiempo necesario hasta lograr la positividad debe de ser igual o superior a 4 d as para su uso como in culo AST Si el tubo se vuelve positivo antes de que transcurran 4 d as vuelva al paso 1 y prepare un nuevo tubo de siembra Proceda a utilizar este tubo durante uno a cinco d as despu s de la positividad Contin e con el apartado anterior Preparaci n del in culo a partir de un tubo BACTEC MGIT de 7 mL positivo Preparaci n de un tubo MGIT de siembra a partir de medios s lidos 1 Con un asa de inoculaci n est ril ret
209. ultat de r sistance a t obtenu sur les deux sites pour l isolat discordant pour la r sistance EMB R 960 S MOP Un r sultat de sensibilit t obtenu sur les deux sites pour quatre des cinq isolats discordants pour la sensibilit EMB S 960 R MOP Pour le cinqui me isolat un r sultat de r sistance a t obtenu sur un site et un r sultat de sensibilit sur l autre site Le tableau 4 pr sente les r sultats obtenus avec la streptomycine et l isoniazide pour le test des isolats cliniques concentration lev e issus de cultures en milieu liquide Le tableau 5 pr sente les r sultats obtenus avec la streptomycine et l isoniazide pour le test des isolats cliniques concentration lev e issus de cultures sur milieu solide Tableau 4 R sultat des isolats cliniques BACTEC MGIT 960 AST compar la m thode des proportions partir de cultures en milieu liquide M thode des Syst me MGIT 960 AST proportions ANTI Concen Concen R sultats de sensibilit R sultats de r sistance BIOTI tration S R tration Nb Nb QUE concordances concordance concordances concordance IC 95 IC 95 STR 10 0 pg mL 77 19 4 0 ug mL 73 95 17 90 87 99 67 99 INH 1 0 g mL 65 31 0 4 ug mL 65 100 29 94 95 100 79 99 Suppose un r sultat S pour la concentration lev e de l antibiotique avec MGIT pour tous les isolats ayant un r sultat S pour la faible concentration de l antibiotique avec MGIT
210. um tuberculosis Portugu s UTILIZA O PRETENDIDA O BACTEC MGIT 960 SIRE Kit Conjunto de SIRE BACTEC MGIT 960 um procedimento qualitativo r pido para o teste de sensibilidade do Mycobacterium tuberculosis em cultura estreptomicina STR isoniazida INH rifampicina RIF e etambutol EMB O BACTEC MGIT 960 STR 4 0 Kit e o BACTEC MGIT 960 INH 0 4 Kit destinam se realiza o de testes com concentrac es de f rmaco mais elevadas Os kits de teste de sensibilidade BACTEC MGIT 960 s o utilizados com os sistemas BACTEC MGIT 960 e BACTEC MGIT 320 RESUMO E EXPLICA O O teste de sensibilidade anti micobacteriana importante para o tratamento adequado de doentes com tuberculose O tratamento da tuberculose frequentemente realizado atrav s de um regime com v rios f rmacos que inclui os f rmacos anti micobacterianos estreptomicina isoniazida rifampicina e etambutol importante que os f rmacos anti micobacterianos prescritos demonstrem uma actividade apropriada contra o Mycobacterium tuberculosis ou seja que exista sensibilidade do isolado ao f rmaco O Mycobacterium tuberculosis resistente a v rios f rmacos MDR TB tornou se recentemente num grave problema de sa de p blica A resist ncia a qualquer um dos f rmacos principais a estreptomicina STR a isoniazida INH a rifampicina RIF e o etambutol EMB tornam o tratamento da doenca mais dif cil e mais caro A r pida detecc o destes isolados res
211. umento BACTEC MGIT Certifique se de que a disposi o dos tubos no Suporte do Conjunto AST est de acordo com as defini es do Suporte do Conjunto seleccionadas durante a execu o da fun o de entrada do conjunto AST 8 Espalhe 0 1 mL da suspens o do organismo num placa de Trypticase Soy Agar with 5 Sheep Blood TSA II Fechar num saco de pl stico Incubar entre 35 e 37 C 9 Analisar a placa de agar de sangue decorridas 48 h relativamente presen a de contamina o bacteriana Se o agar do sangue n o apresentar crescimento prosseguir com o teste AST Se a placa de agar de sangue apresentar crescimento descartar o conjunto AST consultar o Manual do Utilizador do Instrumento BACTEC MGIT e repetir o teste com uma cultura pura NOTA O teste de sensibilidade pode ser configurado em v rios formatos Por exemplo um conjunto de suporte para cinco tubos contendo apenas as concentra es cr ticas pode ser configurado no sistema Podem ser configurados v rios conjuntos de suporte de tubos dependendo dos testes de perfil opcionais que est o a ser executados consultar o Manual do Utilizador do Instrumento BACTEC MGIT Controlo de Qualidade do Utilizador Ap s a recep o de uma nova remessa ou de um novo n mero de lote de frascos do BACTEC MGIT 960 SIRE Kit recomenda se que o organismo de controlo apresentado em baixo seja testado O microrganismo de controlo deve ser uma cultura pura e a cultura deve ser preparada de acor
212. ustar por debajo de un patr n 0 5 de McFarland Diluir 1 mL de la suspensi n ajustada en 4 mL de soluci n salina est ril diluci n de 1 5 Continuar con el Procedimiento de inoculaci n para el an lisis de sensibilidad Preparaci n del in culo a partir de un tubo BACTEC MGIT de 7 mL positivo NOTA Es importante preparar el in culo utilizando las referencias de tiempo presentadas a continuaci n para obtener la concentraci n apropiada del microorganismo para el an lisis de sensibilidad 1 El primer d a en que el instrumento registra un resultado positivo para un tubo MGIT se considera el d a 0 Para la preparaci n del in culo de an lisis debe usarse un tubo MGIT de 7 mL positivo el d a despu s de que el instrumento BACTEC MGIT registre el resultado positivo d a 1 hasta el quinto d a inclusive d a 5 despu s de que el instrumento registre el resultado positivo Si un tubo ha permanecido positivo m s de cinco d as se debe hacer un subcultivo en un nuevo tubo MGIT de 7 mL que contenga suplemento para crecimiento BACTEC MGIT analizarlo en el instrumento BACTEC MGIT hasta que muestre positividad y utilizarlo de uno a cinco d as despu s de mostrar positividad Consulte Preparaci n de un tubo MGIT de siembra a partir de medios l quidos Si el tubo es positivo los d as 1 2 utilice el caldo de suspensi n MGIT para los procedimientos de inoculaci n Mezclar bien Continuar con el Procedimiento de inoc
213. workers from occupationally acquired infections 3rd ed CLSI Wayne Pa 5 Garner J S 1996 Hospital Infection Control Practices Advisory Committee U S Department of Health and Human Services Centers for Disease Control and Prevention Guideline for isolation precautions in hospitals Infect Control Hospital Epidemiol 17 53 80 6 U S Department of Health and Human Services 2007 Biosafety in microbiological and biomedical laboratories HHS Publication CDC 5th ed U S Government Printing Office Washington D C 7 Directive 2000 54 EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work seventh individual directive within the meaning of Article 16 1 of Directive 89 391 EEC Official Journal L262 17 10 2000 p 0021 0045 8 Ridderhof J 2001 Multicenter evaluation of 3 75 ug mL ethambutol EMB in BACTEC vials for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis Abstract C 244 American Society for Microbiology Abstracts 2001 11 BD Trousse BACTEC MGIT 960 SIRE Pour le test de sensibilit de Mycobacterium tuberculosis aux antimycobact riens Francais APPLICATION La trousse BACTEC MGIT 960 SIRE est un test de sensibilit qualitatif rapide de Mycobacterium tuberculosis en culture la streptomycine STR l isoniazide INH la rifampicine RIF et l thambutol EMB La trousse BACTEC MGIT 960 STR 4 0 et la

Notes: - CiteSeer

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