Lipoprint® LDL Subfractions Kit
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1. 80 29 1 10 3 79 24 1 73 7 21 20 1 33 6 65 20 1 21 6 05 4 80 24 0 88 3 67 22 1 48 6 73 17 0 95 5 59 20 0 69 3 45 ca N Mens CV iene eM CV Here ge CV mg dl mg dl mg dl 1 80 s 0 S 0 s 0 2 80 s 0 s 0 s 0 3 80 s 0 s 0 s 0 4 80 24 0 62 2 58 17 2 05 12 06 4 1 39 33 90 12 Lin arit Des tudes de lin arit ont t men es sur deux chantillons de s rum enrichi de HDL C ou de LDL C isol par ultracentrifugation chantillon 1 LDL C 695 mg dl HDL C 260 mg dl VLDL C 140 mg dl Echantillon 2 LDL C 163 mg dl HDL C 178 mg dl VLDL C 38 mg dl Des suspensions dilutions ont t pr par es a partir d une solution physiologique a base d albumine s rique humaine Les concentrations observ es pour les LDL C HDL C et VLDL C totaux ont t compar es aux valeurs attendues tableaux 9 11 Le pourcentage de recouvrement a t calcul comme suit recouvrement valeur observ e valeur attendue x 100 Tableau 9 Lin ari de dilution des LDL Dilution LDL observ LDLattendu Recouvrement Dilution LDL observ LDL attendu Recouvrement mg dl mg dl mg dl mg dl 0 695 695 100 0 0 163 163 100 0 10 627 626 100 2 5 155 157 98 7 30 466 486 95 9 10 151 12. Movenne spe Gi 1 12 S 0 s 0 s 0 2 12 S 0 s 0 s 0 3 12 S 0 s 0 s 0 4 12 24 0 41 1 72 16 0 72 4 62 4 0 68 17 89 Pr cision inter dosage Des tests ont t r alis s en double sur quatre chantillons deux fois par jour pendant 5 jours dans 4 chambres d lectrophor se en utilisant un lot unique de tubes de gel Les r sultats correspondants de pr cision inter dosage sont r pertori s dans les tableaux 6 a 8 Tableau 6 Donn es de pr cision inter dosage pour HDL LDL et VLDL pu N vee pon CV ene e CV Moena pas CV mg dl mg dl mg dl 1 80 60 1 49 2 49 94 1 41 1 50 10 0 90 9 40 2 80 46 1 45 3 15 137 1 73 1 26 11 0 91 8 27 3 80 32 1 52 4 75 160 2 03 1 27 33 2 35 7 12 4 80 50 2 32 4 69 178 2 79 1 57 23 1 97 8 57 Tableau 7 Donn es de pr cision inter dosage pour les sous fractions de BANDES INTERM DIAIRES rrr oN ll red cv em Moyenne ray CV Movee as CV mg dl mg dl mg dl 1 80 14 1 23 8 79 10 0 87 8 27 19 2 00 10 90 2 80 18 1 99 11 06 13 0 86 6 62 16 1 33 8 31 3 80 21 2 84 13 63 22 1 04 4 73 17 1 27 7 47 4 80 28 1 87 7 79 13 0 91 7 00 10 0 81 8 10 Tableau 8 Donn es de pr cision inter dosage pour les sous fractions de LDL Ernan N jan ae CV ee pon CV ce pol CV Mere Fld CV mg dl mg dl mg dl mg dl 1 80 4 1 61 3 92 11 1 47 13 50 s 0 s 0 2 80 37 1 43 3 86 39 1 50 3 85 14 2 69 19 21 s 0 3
3. chaque bande par le cholest rol total de l chantillon Le cholest rol LDL est calcul comme la somme des concentrations de cholest rol de toutes les sous fractions de LDL plus les bandes interm diaires A B et C Les profils de sous fractions de lipoprot ines sont g n ralement classifi s en type A normal et type B anormal en fonction de la taille moyenne des particules de LDL 5 Un profil Lipoprint normal comportant principalement des LDL grosses particules LDL 1 et LDL 2 correspond au type A fig 11 dego SAMPLE Bube 8 Quantimetrix LIPOPRINT SY ST EM YLDL MID HDL c e 7 Subjfrection a 9 14 45 18 3 Reference Reference Renge 15 235 57 30 6 Ponga LDL Profile indicative of TYPE A mainl large LDL Total Chol mgldl 155 lt 200 LDL Chol mgd 103 lt 130 FFeference ranges derived from 125 serum samples that met the NCEP ATP III guidelines for desirable lipid status LDL C is comprised of the sum of cholesterol in Md bands C through A as well as all the LDL subfractions Figure 11 Profil Lipoprint normal type De m me un profil Lipoprint anormal comportant principalement des LDL petites particules LDL 3 a LDL 7 correspond au type B d crit dans la documentation fig 12 d eseoce SAMPLE tube 11 Quantimetrix LIPOPRINT SY ST EMI YLDL MID HDL c B 7 Subjfrection cholesterol 11 21 24 2
4. classes de lipoprot ines sont h t rog nes puisqu elles sont constitu es d un ensemble de sous fractions diversifi es sur le plan de la taille des particules de la densit et de la composition chimique Cette h t rog n it a t d montr e par divers proc d s analytiques tels que l ultracentri fugation en gradient de densit 3 la r sonance magn tique nucl aire RMN 4 l lectrophor se en gradient de gel non d naturant 5 ainsi que par le syst me Lipoprint qui est un syst me lin aire d lectrophor se sur gel de polyacrylamide 6 Le syst me Lipoprint est en mesure de d composer les LDL en un maximum de sept sous fractions Celles ci sont num rot es de LDL 1 pour les particules les plus grosses LDL 7 pour les plus petites Les diff rences en mati re d h t rog n it des LDL chez les sujets sont li es la fois des facteurs g n tiques et environnementaux II est connu que l ge le sexe et le bilan lipidique affectent le profil des sous fractions de LDL 7 Les individus pr sentant des profils de lipoprot ines constitu s principalement de sous fractions plus grosses et flottantes sous fractions LDL 1 et LDL 2 sont qualifi s de Pattern A tandis que ceux pr sentant surtout des sous fractions plus petites et plus denses sous fractions LDL 3 LDL 7 appartiennent au Pattern B 5 fig 1 Abnormal Figure 1 Profils de lipoprot ines normaux Pattern A et anormaux Pat
5. dl 15 29 15 71 R gression Lipoprint LDL 0 933 LDLg quant 9 430 R gression _ Lipoprint HDL 0 944 HDLg Quant 3 030 0 887 0 941 15 Table 19 Lipoprint VLDL B Quant VLDL N 40 40 Moyenne mg dl 24 7 22 9 ET mg dl 10 34 12 61 R gression Lipoprint VLDL 0 689 VLDLg_ Quant 7 990 0 8216 LITERATUR 1 10 Ti 12 Warnick GR Wood PD National Cholesterol Education Program recommendations for measurement of high density lipoprotein cholesterol Executive summary Clin Chem 1995 41 10 1427 1433 Bachorik PS Ross JW National Cholesterol Education Program recommendations for measurement of low density lipoprotein cholesterol Executive summary Clin Chem 1995 41 10 1414 1420 Griffin BA Caslake MJ Yip B Tait GW Packard CJ Shepherd J Rapid isolation of low density lipoprotein LDL subfractions from plasma by density gradient ultracentrifugation Atherosclerosis 1990 83 1 59 67 Otvos JD Measurement of lipoprotein subclass profiles by nuclear magnetic resonance spectroscopy In Handbook of Lipoprotein Testing Rifai N Warnick GR Dominiczak MH eds AACC Press 1999 2nd edition Washington DC Pages 609 623 Austin MA Hokanson JE Brunzell JD Characterization of low density lipoprotein subclasses methodologic approaches and clinical relevance Current Opinion in Lipidology 1994 5 6 395 403 Rajman Kend
6. fourchette de sous fractions a t m lang un volume gal d chantillon de s rum C contenant principalement la sous fraction LDL 1 pour produire un ensemble AC Les chantillons ont t analys s avec le syst me Lipoprint les concentrations de cholest rol de chaque fraction ont t d termin es et compar es aux valeurs attendues tableau 13 Tabelle 12 Valeurs observ es valeurs attendues pour Tabelle 13 Valeurs observ es valeurs attendues pour l chantillon m lang AB chantillon m lang AC A B AB A c AC mora morai mgran maian Ce morat mora ngran maan o VLDL 35 20 28 29 103 6 VLDL 35 13 24 25 104 2 Interm C 37 20 29 28 97 6 Interm C 37 16 27 25 92 6 Interm B 35 15 25 21 84 0 Interm B 35 11 23 18 78 3 Interm A 15 15 15 15 100 0 Interm A 15 16 16 14 87 5 LDL 1 21 29 25 26 104 0 LDL 1 21 54 38 36 94 8 LDL 2 17 49 33 37 112 1 LDL 2 17 38 28 34 121 4 LDL 3 14 28 21 25 119 0 LDL 3 14 7 11 16 145 4 LDL 4 14 5 10 12 120 0 LDL 4 14 7 11 157 1 LDL 5 12 6 5 83 8 LDL 5 12 6 5 83 3 LDL 6 9 4 2 50 0 LDL 6 9 4 2 50 0 LDL 7 15 7 2 28 8 LDL 7 15 7 2 28 6 HDL 29 35 32 35 109 4 HDL 29 40 35 37 105 7 Sensibilit La sensibilit du syst me Lipoprint est d finie comme la concentration minimale de HDL C et de LDL C total pouvant tre d tect e de fa on fiable Elle a t d termin e comme l in
7. tubes en verre pr vus cet effet Pousser les tubes en appuyant dessus jusqu ce qu ils soient au m me niveau que la partie inf rieure de l adaptateur fig 7 10 11 12 13 14 Figure 7 Chargement des tubes Placer 1000 ml de solution tampon lectrolytique dans la chambre inf rieure et 200 ml dans la chambre sup rieure Le tampon de la chambre inf rieure peut tre utilis au maximum cinq fois Dans la chambre sup rieure le tampon doit tre renouvel a chaque fois Le tampon doit tre temp rature ambiante c est dire entre 18 et 27 C Une fois les deux chambres assembl es et remplies de tampon v rifier soigneusement qu aucun tube ne contient de bulles d air S il y en a utiliser embout du pipeteur pour les d loger car elles risquent d obstruer le passage du courant lectrique Mettre en place le couvercle de la chambre d lectrophor se et brancher celle ci sur la source d alimentation fig 8 R gler la source d alimentation pour d livrer un courant de 3 mA par tube de gel ex 36 mA pour 12 tubes 18 mA pour 6 tubes etc La tension doit tre r gl e la puissance maximum 500 V Figure 8 Chambre assembl e L lectrophor se dure approximativement 60 minutes Arr ter l lectrophor se lorsque la fraction HDL se trouve environ 1 cm du bas du tube de gel dont la migration est la plus rapide Une fois l lectrophor se termin e couper l alimentation t
8. 0 18 13 3 mgidl HI HI HI HI Hi Reference Reference Renge 25 57 30 6 0 0 0 Range LDL Profile not indicative of Type A presence of small dense LDL Total Chol mgtdl 205 Hi lt 200 LDL Chol ingidl 152 HI 2130 Reference ranges derived from 125 serum samples that met the NCEP ATP III guidelines for desirable lipid status LDLC is comprised of the sum of cholesterol in Mid bands C through A ss well as all the LDL subfractions Figure 12 Profil Lipoprint anormal type LIMITES Le test Lipoprint LDL doit tre associ a d autres donn es ex tests cliniques compl mentaires observations du m decin ant c dents familiaux etc L h parine interf re avec la s paration des sous fractions de LDL Le cholest rol total de l chantillon doit tre sup rieur 100 mg dl pour viter toute surestimation du cholest rol VLDL La pr sence de chylomicrons dans l chantillon invalide la mesure du cholest rol dans les sous fractions Laspect du sp cimen n bulosit turbidit ou couche cr meuse sur le dessus de l chantillon apr s r frig ration jusqu au lendemain permet de confirmer la pr sence de chylomicrons Les r sultats du test Lipoprint n ont pas t valu s en cas de test de lipoprot ines durant la grossesse Les experts du NCEP National Cholesterol Education Program programme national am ricain de formation sur le cholest rol n ont pas publi de dire
9. 05 17 0 99 5 86 2 12 42 0 78 1 87 120 1 43 1 20 15 0 99 6 43 3 12 31 0 90 2 87 133 2 02 1 52 35 1 97 5 58 4 12 48 1 37 2 84 180 2 02 1 12 23 1 66 7 28 Donn es de pr cision pour les bandes interm diaires C B A et les sous fractions de LDL 1 7 r pertori es dans les tableaux 4 et 5 Tableau 4 Donn es de pr cision intra dosage pour les sous fractions de BANDES INTERM DIAIRES aA Aia a a GES Moyenne gi fo CN o ones Ot 1 22 16 0 76 4 75 9 0 60 6 67 14 1 56 11 14 2 12 17 1 44 8 47 13 0 51 3 92 14 0 72 5 14 3 12 22 1 21 5 50 16 0 47 2 94 13 0 50 3 85 4 12 30 1 44 4 80 15 1 36 9 07 10 077 7 70 11 Tableau 5 Donn es de pr cision intra dosage pour les sous fractions de LDL LDL 1 LDL 2 LDL 3 LDL 4 e aon N Moyenne spe go Moyenne yoo o Moyenne f ype cm Movenne l ip o 1 12 36 0 60 1 67 10 1 68 16 80 S O s 0 2 12 28 0 91 3 25 32 0 70 2 19 14 1 65 11 79 s 0 3 12 21 0 51 2 43 19 0 88 4 63 18 0 38 2 11 19 0 86 4 53 4 12 24 0 86 3 58 22 0 80 3 64 17 0 28 1 65 20 0 49 2 45 LDL 5 LDL 6 LDL 7 l ion Moyenne ype o Moyenne type ca
10. 26 24 59 4 32 0 4 59 128 40 103 123 199 Moyenne 12 9 16 5 10 1 16 6 41 1 14 3 1 9 95 7 56 8 168 1 Ecart type 4 12 2 82 2 40 4 26 7 85 6 82 0 81 16 56 11 29 18 45 95 Fourchette 4 7 10 9 5 3 8 11 25 4 0 7 0 62 5 40 0 131 2 22 1 221 14 9 25 1 56 8 28 6 3 6 128 8 79 4 200 0 N 114 114 114 114 114 114 44 114 114 114 Nombre d echantillons affichant les fractions respectives 10 Il est recommand chaque laboratoire d tablir sa propre fourchette de valeurs normales qui peut tre sp cifique une population donn e en fonction de facteurs g ographiques environnementaux ou propres aux patients Les donn es relatives la population dont les valeurs ne satisfont pas aux recommandations NCEP composition N 141 46 d hommes et 54 de femmes g s de 18 77 ans sont illustr es dans le tableau 2 Tableau 2 Population non conforme aux directives NCEP Cholest rol bandes Cholest rol sous fraction LDL interm diaires VLDL Interm C Interm B Interm A LDL 1 LDL 2 LDL 3 LDL 4 LDL 5 LDLTotal HDL CT mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl fourchette 5 69 9 40 5 37 5 34 9 77 7 55 0 35 0 28 0 11 58 215 26 137 104 319 moyenne 24 4 23 2 14 6 18 6 46 5 31 5 9 2 47 55 134 8 54 2 219 4 cart type 13 50 5 65 5 21 6 14 15 13 10 98 7 50 6 05
11. 3 6 27 17 18 05 35 04 95 0 12 0 4 2 6 4 16 2 9 5 0 0 0 80 5 18 2 148 6 fourchette 51 4 34 7 25 0 30 9 76 8 53 5 24 2 16 8 16 8 189 1 90 2 290 2 N 141 141 141 141 141 141 115 44 8 141 141 141 Nombre d chantillons affichant les fractions respectives CARACT RISTIQUES DE PERFORMANCE SP CIFIQUES Pr cision La variabilit intra dosage et inter dosage de quatre chantillons a t test e Des chantillons pr sentant des taux faibles moyens et lev s de HDL C et de LDL C ont t s lectionn s Echantillon 1 LDL C faible HDL C lev et pattern homog ne des LDL LDL 1 et 2 uniquement chantillon 2 LDL C moyen HDL C moyen et pattern l g rement h t rog ne des LDL LDL 1 2 et 3 Echantillon 3 LDL lev HDL faible et pattern h t rog ne des LDL LDL 1 2 3 et 4 chantillon 4 LDL C lev HDL C interm diaire et pattern h t rog ne des LDL LDL 1 7 Pr cision intra dosage Les chantillons ont t test s sur la base de 12 r plicats capacit maximale de la chambre d lectrophor se Les r sultats de pr cision des HDL C LDL C somme des bandes interm diaires C B A et des sous fractions de LDL et VLDL C sont indiqu s dans le tableau 3 Tableau 3 Donn es de pr cision intra dosage pour HDL LDL und VLDL cin ON Moyenne rigidi P CV nat agli PA CV Moyenne maldi ee N 1 12 55 1 47 2 68 86 0 90 1
12. 48 102 0 50 351 348 100 9 50 84 89 94 4 70 195 209 93 3 90 15 15 100 0 95 59 69 85 6 95 13 13 100 0 Tableau 10 Lin arit de dilution des HDL Dilution HDL observ HDL attendu Recouvrement Dilution HDL observ HDL attendu Recouvrement mg dl mg dl mg dl mg dl 0 260 260 100 0 0 178 178 100 0 10 218 234 93 2 5 170 169 100 6 30 174 182 95 9 10 162 160 101 3 50 117 130 90 0 50 95 89 106 7 70 73 78 93 6 95 11 9 122 2 90 25 26 96 2 97 5 5 3 94 3 Tableau 11 Lin arit de dilution des VLDL Dilution VLDL observ VLDL attendu Recouvrement Dilution VLDL observ VLDL attendu Recouvrement mg dl mg dl mg dl mg dl 0 140 140 100 0 0 38 38 100 0 10 129 126 102 4 5 36 37 97 3 30 99 98 101 0 10 34 35 97 1 50 75 70 107 1 50 24 24 100 0 70 48 42 115 5 90 17 13 130 8 90 22 14 157 1 95 13 11 4 114 0 13 Dose r ponse Un chantillon de s rum A contenant une large fourchette de sous fractions a t m lang un volume gal d chantillon B contenant principalement la sous fraction LDL 2 pour produire un ensemble AB Les chantillons ont t analys s avec le syst me Lipoprint les concentrations de cholest rol de chaque fraction ont t d termin es et les valeurs observ es ont t compar es aux valeurs attendues tableau 12 Selon la m me modalit un chantillon de s rum A contenant une large
13. Lipoprint LDL Subfractions Kit nero MDSS PG Quantimetrix Corporation 48 7002 Schiffgraben 41 2005 Manhattan Beach Blvd 30175 Hannover Redondo Beach CA 90278 Germany 2c 1 310 536 0006 Fran ais UTILISATION PR VUE ET MODE D EMPLOI Le kit de sous fractions de LDL du syst me Lipoprint de Quantimetrix kit Lipoprint LDL est un dispositif destin mesurer le taux de cholest rol lipoprot ine pour les fractions et sous fractions de lipoprot ines VLDL HDL dans le s rum ou le plasma jeun pour une concentration de cholest rol total gt 100 mg dl Associ es d autres tests lipidiques une d termination du risque pour le patient et une valuation clinique les mesures de taux de cholest rol lipoprot ine aident valuer les troubles du m tabolisme lipidique R SUM ET EXPLICATION DU TEST Les lipoprot ines du plasma sont des particules sph riques responsables du transport du cholest rol des triglyc rides et des phospholipides Il existe cinq classes principales de lipoprot ines chylomicrons lipoprot ine de tr s basse densit VLDL lipoprot ine de densit interm diaire IDL lipoprot ine de basse densit LDL et lipoprot ine de haute densit HDL Un faible taux de cholest rol HDL constitue un pr dicteur ind pendant fort de maladie coronarienne MC 1 Un taux de cholest rol LDL LDL C en augmentation a t identifi comme facteur de risque majeur de MC 2 Il est notoire que les
14. all MJ Cramb R Holder RL Salih M Gammage MD Investigation of low density lipoprotein subfractions as a coronary risk factor in normotriglyceridaemic men Atherosclerosis 1996 125 2 231 242 McNamara JR Campos H Ordovas JM Peterson J Wilson PW Schaefer EJ Effect of gender age and lipid status on low density lipoprotein subfraction distribution Results from the Framingham Offspring Study Arteriosclerosis 1987 7 483 490 Krauss RM Low density lipoprotein subclass and risk of coronary heart disease Current Opinion in Lipidology 1991 2 248 252 Mu iz N Measurement of plasma lipoproteins by electrophoresis on polyacrylamide gel Clin Chem 1977 23 1826 1833 Third Report of the National Cholesterol Education Program NCEP Expert Panel on Detection Evaluation and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults Adult Treatment Panel Ill Executive Summary MH Publication No 01 3670 May 2001 Stein E Greer IA Myers GL National Cholesterol Education Program recommendations for triglyceride measurement Clin Chem 1995 41 421 1426 Sattar N Greer IA Louden J Lindsay G McConnel M Shepherd J Packard C Lipoprotein Subfraction Changes in Normal Pregnancy J Clin Endocrin Metab 1997 82 2483 2491 ASSISTANCE TECHNIQHE T l phone 1 310 536 0006 Fax 1 310 536 0323 Courriel lipoprint quantimetrix com Site Web www quantimetrix com 16
15. ans votre tablissement en mati re de manipulation et d limination des mat riels doivent tre syst matiquement respect es SP CIMENS ET PR L VEMENT Seuls des chantillons jeun 12 heures doivent tre utilis s Du s rum ou du plasma EDTA peut tre utilis voir p 15 Ne pas utiliser d h parine comme anticoagulant Les chantillons peuvent tre conserv s pendant un maximum de 7 jours entre 2 et 8 C La cong lation d un chantillon est d conseill e Si toutefois elle s av re indispensable il faut utiliser un proc d cryog nique 70 C ou temp rature inf rieure PROC DURE DE DOSAGE 1 2 Pr parer la solution tampon lectrolytique selon la m thode d crite de dissolution d un flacon de sels tampons dans 1 200 ml d eau distill e ou d min ralis e Sortir les tubes de gel du bocal les essuyer et les placer dans le portoir pour pr paration extr mit non remplie tourn e vers le haut fig 4 Eviter de toucher les extr mit s du tube de gel ou d exercer une pression sur les gels car cela risque d y entra ner la formation de bulles d air Dans ce cas ou si le gel d passe du tube ne pas l utiliser D barrasser compl tement les gels du tampon de stockage qui les recouvre en retournant le portoir puis en le secouant Le cas ch ant ponger l extr mit des tubes pendant qu ils sont retourn s afin d liminer l exc s de tampon se trouvant encore l int rieur V
16. ctives relatives aux valeurs optimales souhaitables pour les sous fractions de LDL VALEURS ATTENDUES HDL C und LDL C Les limites pour les taux de cholest rol LDL et HDL li es un risque pour la sant du patient avaient t tablies dans le cadre du NCEP Elles ont t r affirm es en mai 2001 par le troisi me rapport du NCEP Adult Treatment Panel ATP III 10 Fraction Plage Etat HDL C 40 mg dl Diminution du risque aux niveaux lev s lt 40 mg dl Augmentation du risque LDL C lt 100 mg dl Optimal pour les patients atteints de maladie coronarienne MC lt 130 mg dl Souhaitable 130 159 mg dl Risque marginal lev 160 mg dl Risque lev Le LDL C comprend toutes les particules de lipoprot ines pour lesquelles d gt 1 006 1 063 kg l telles que les r sidus de VLDL IDL Lp a et LDL 2 Ces particules correspondent a la somme des bandes interm diaires et des sous fractions de LDL d compos es par le systeme Lipoprint R partition du cholest rol par sous fraction Les valeurs normales attendues pour chaque sous fraction sur le syst me Lipoprint ont t tablies comme suit Un ensemble de personnes se d clarant en bonne sant ont t recrut es composition N 273 ge 18 85 ans femmes 166 hommes 107 blancs 47 hispaniques 18 asiatiques 16 noirs 5 non d clar s 14 Il a t demand a ces volontaires de je ner pendant 12 heures Du sang total a t pr lev par ponct
17. d EQUAL Diagnostics respectivement Une population de 268 chantillons de s rum a des concentrations de LDL C comprises dans les fourchettes 55 218 mg dl Lipoprint et 54 215 mg dl m thode LDL directe ainsi qu des concentrations de HDL C de 24 129 mg dl Lipoprint et 26 137 mg dl m thode HDL directe a t valu e tableaux 15 et 16 Tabelle 15 Tabelle 16 Lipoprint HDL Direct HDL Lipoprint LDL Direct LDL N 268 268 N 268 268 Moyenne mg dl 53 2 54 8 Moyenne mg dl 121 9 116 3 ET mg dl 15 13 15 43 ET mg dl 30 73 29 58 R gression Lipoprint HDL 0 9361 HDLgirect 1 8607 R gression Lipoprint LDL 0 998 LDLdirect 5 7995 0 912 r 0 923 Une comparaison similaire a t effectu e entre la m thode par ultracentrifugation B Quantification et le syst me Lipoprint LDL Une population de 40 chantillons de s rum des concentrations de LDL C comprises dans les fourchettes 66 211 mg dl Lipoprint et 68 218 mg dl B Quantification ainsi qu des concentrations de HDL C de 29 91 mg dl Lipoprint et 28 90 mg dl B Quantification et des concentrations de VLDL C de 9 5 49 mg dl Lipoprint et 6 57 mg dl B Quantification a t valu e tableaux 17 19 Tabelle 17 Tabelle 18 Lipoprint LDL B Quant LDL Lipoprint HDL B Quant HDL N 40 40 N 40 40 Moyenne mg dl 130 8 130 0 Moyenne mg dl 53 5 53 5 ET mg dl 30 14 30 42 ET mg
18. de chargement et de concentration dans une bande troite et nette mesure que migrent les particules de lipoprot ine au travers de la matrice de gel de s paration elles se r partissent en bandes de lipoprot ines en fonction de la taille de leurs particules des plus grosses aux plus petites sous l action de tamisage du gel ce sont les lipoprot ines HDL qui migrent le plus loin suivies par les LDL a petites particules denses puis par les LDL particules plus grosses et flottantes par les bandes interm diaires constitu es principalement d IDL et enfin par les VLDL Les chylomicrons ventuellement pr sents apparaissent au dessus du gel de concentration ou restent dans le gel de chargement Un profil Lipoprint type comprend 1 bande de VLDL 3 bandes interm diaires jusqu 7 bandes de LDL et 1 bande de HDL la fin de l lectrophor se les diverses fractions de lipoprot ines color es bandes pr sentes dans l chantillon sont identifi es par leur mobilit Rf les VLDL servant de point de r f rence de d part VLDL 0 et les HDL de point de r f rence principal HDL 1 fig 3 cathodes Ry 0 00 voL c 0 17 e Midband A 1 LOL 1 3 4 Small LOL 5 7 Rf 1 00 HDL End of Gel anode Figure 3 Mobilit des bandes de lipoprot ines 2 La zone relative de chaque bande de lipoprot ines est d termin e et multipli e par la concentrati
19. er le couvercle de la chambre et jeter le tampon lectrolytique se trouvant dans la chambre sup rieure Le tampon de la chambre inf rieure peut y rester et tre utilis jusqu 5 fois Ne pas le conserver plus de 7 jours Avant de retirer les tubes de gel de la chambre d lectrophor se essuyer l exc s de tampon Les placer ensuite dans le portoir pour pr paration afin de les transporter jusqu au scanner pour analyse Laissez les tubes de gel reposer entre 30 minutes minimum et 2 heures maximum avant de les analyser au scanner 6 Remarque m thodologique Au cours de l lectrophor se il peut se produire une distorsion de la surface du gel de s paration et de la bande VLDL Il est possible de rem dier a cette distorsion apr s le retrait des gels de la chambre d lectrophor se en introduisant avec pr caution l outil de d collage le long du verre depuis le haut du gel de chargement et en d collant la surface du gel de s paration avec un mouvement circulaire Le gel reprend alors sa forme normale viter de d loger le gel de chargement en retirant l outil si du gel part avec l outil combler le vide avec de l eau d min ralis e ou distill e CONTR LE DE QUALIT La fiabilit des r sultats des tests doit tre r guli rement v rifi e l aide d un mat riel de contr le capable d muler de fa on satisfaisante la performance des sp cimens patient Il est recommand d utiliser le mat riel de cont
20. erser 25 ul d chantillon dans chaque tube fig 4 Figure 4 Application d chantillon 5 Ajouter 200 ul de gel de chargement Lipoprint dans chaque tube 6 Placer une bande de Parafilm entre les tubes de gel et le couvercle du portoir pour pr paration pour emp cher toute contamination M langer le gel de chargement au sp cimen en retournant plusieurs fois de suite le portoir pour pr paration fig 5 Figure 5 M lange du gel de chargement et des sp cimens 7 Mettre l clairage pour pr paration en position verticale avec l ampoule en haut Placer le portoir pour pr paration charg de fa on ce que le gel de chargement soit en contact avec l ampoule fig 6 Photopolym riser les gels de chargement pendant 30 minutes sans d passer 40 minutes Figure 6 Photopolym risation 8 l issue de la photopolym risation retirer chaque tube de gel du portoir pour pr paration et l ins rer avec pr caution dans l adaptateur en silicone de la chambre sup rieure Tout en tenant le tube de gel par le c t le pousser vers le haut jusqu ce que l extr mit o se trouve le gel de chargement soit au m me niveau que la partie sup rieure de l adaptateur Humecter le haut du tube de gel pour faciliter son insertion Eviter de toucher les extr mit s du tube pendant cette tape Si l op ration est r alis e sur une chambre partiellement vide boucher les adaptateurs non utilis s l aide des petits
21. ion veineuse dans un tube s rum Les chantillons de s rum ont ensuite t utilis s pour tester les param tres lipidiques indiqu s et g n rer les profils de lipoprot ines l aide du syst me Lipoprint LDL Les crit res d exclusion comprenaient les diab tiques les personnes prenant des hypolipid miants et les patients ayant eu r cemment une crise cardiaque En outre les femmes enceintes taient exclues de l tude cause de la modification de leur bilan lipidique 12 Seuls les chantillons satisfaisant aux conditions indiqu es dans les directives NCEP ATP Ill en mati re de bilan lipidique souhaitable 10 savoir CT lt 200 mg dl LDL lt 130 mg dl HDL gt 40 mg dl et triglyc rides lt 150 mg dl ont t utilis s dans le cadre de la d termination des valeurs attendues Les chantillons normaux N 114 32 d hommes et 68 de femmes g s de 18 84 ans ont servi a tablir les valeurs normales attendues d finies comme appartenant a un intervalle de confiance de 95 cart type moyen 2 pour chaque param tre lipidique obtenu par le syst me Lipoprint LDL tableau 1 Tableau 1 Population normale Cholest rol bandes Cholest rol sous fraction interm diaires LDL VLDL Interm C Interm B Interm A LDL 1 LDL 2 LDL 3 LDL Total HDL CT mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl mg dl Fourchette 6 26 9 24 5 17 6
22. on de cholest rol total de l chantillon afin d obtenir la quantit de cholest rol de chaque bande en mg di La concentration de cholest rol total de l chantillon doit tre mesur e ind pendamment par exemple l aide d un analyseur clinique ou d un instrument install au poste de soins DESCRIPTION DU PRODUIT Le kit Lipoprint LDL comprend des tubes de gel de polyacrylamide haute r solution pr moul une solution de gel de chargement contenant un colorant lipophile et des sels tampons R actifs et mat rielsn fournis voir catalogue Quantimetrix n 48 7002 Un kit de 100 tests comprend les l ments suivants 1 tubes de gel Lipoprint LDL 100 tubes polyacrylamide tampon conservateur 2 gel de chargement Lipoprint LDL 24 ml acrylamide N N m thyl ne bis acrylamide colorant lipophile catalyseur stabilisateur tampon 3 sels tampons Lipoprint LDL 6 flacons tris hydroxym thyl aminom thane acide borique 4 notice d utilisation Lipoprint LDL 1 Syst me Lipoprint non fourni voir catalogue Quantimetrix n 48 91500 9152 1 ordinateur quip du programme d analyse LipoWare imprimante couleur scanner num rique chambre d lectrophor se alimentation lectrique 120 V 220 V portoir pour pr paration clairage pour pr paration outil de d collage ONOaARWON Liposure contr le de lipoprot ines non fourni voir catalogues Quantimetrix n 48 7060 niveau 1 Mat riels requis n
23. on fournis 1 eau distill e ou d min ralis e pipeteur automatique 25 ul pipeteur automatique 200 ul agitateur magn tique Parafilm cylindres gradu s Doae Reconstitution des r actifs La solution tampon lectrolytique est reconstitu e par dissolution d un flacon de sels tampons du kit Lipoprint LDL dans 1 200 ml d eau distill e ou d min ralis e Stockage et stabilit Les tubes de gel le gel de chargement et les sels tampons doivent tre conserv s une temp rature comprise entre 2 et 8 C Ne pas congeler Dans des conditions de stockage ad quates les r actifs ouverts ou non sont stables jusqu la date de p remption AVERTISSEMENTS ET PR CAUTIONS Pour utilisation diagnostique in vitro uniquement Utiliser le kit Lipoprint LDL conform ment aux instructions de la notice d utilisation Lipoprint Le gel de chargement contient de l acrylamide qui est toxique en cas de contact cutan ou en cas d ingestion L exposition prolong e au gel de chargement et son inhalation sont proscrire Le gel de chargement qui est photosensible est conditionn dans un flacon en verre ambr La pipette ne doit jamais tre port e la bouche tout contact physique avec les r actifs et les sp cimens doit tre vit Tout chantillon r actif ou contr le doit tre trait comme potentiellement infectieux en cas d ingestion ou d absorption par contact cutan prolong Les pr cautions en vigueur d
24. oprint Le gabarit du syst me Lipoprint LDL permet d identifier les sous fractions de lipoprot ines pr sentes dans le gel fig 10 Cx B Midband A 1 Large LDL 2 Small LDL HDL lt End of Gel Figure 10 Gabarit des sous fractions de LDL du syst me Lipoprint 1 l aide d un marqueur faire un trait sur le tube en verre au centre de chaque bande de lipoprot ines pr sente 2 Aligner la fraction VLDL situ e au sommet du gel de s paration sur la ligne du gabarit marqu e VLDL 3 Faire glisser le gel le long du gabarit jusqu ce que la bande HDL soit superpos e la ligne HDL 4 D terminer les sous fractions de lipoprot ines pr sentes dans l chantillon en appariant les bandes du gel aux lignes correspondantes du gabarit R SULTATS QUANTITATIFS Remarque La valeur de cholest rol total de chaque chantillon analyser doit tre obtenue l aide d une technique cliniquement agr e avant de g n rer les r sultats quantitatifs La concentration de cholest rol total de l chantillon doit tre gt 100 mg dl Les tubes de gel sont num ris s et la zone relative correspondant chaque sous fraction de lipoprot ines est d termin e par l ajout de traits verticaux au niveau des seuils limites pr d termin s pour chaque bande La quantit de cholest rol pr sente dans chaque bande de lipoprot ines est calcul e en multipliant la zone relative de
25. r le de qualit avec chaque s rie d chantillons patient Le mat riel de contr le est uniquement destin valuer la justesse et la pr cision des mesures Un taux de recouvrement des valeurs de contr le situ dans les fourchettes appropri es doit constituer le crit re de validation de la performance du dosage Les proc dures de contr le de qualit doivent tre effectu es conform ment aux r glementations locales et nationales en vigueur ou aux exigences en mati re d accr ditation Quantimetrix Corporation propose son propre mat riel de contr le de la qualit Liposure R SULTATS QUALITATIFS Remarque Les bandes d un profil Lipoprint peuvent tre identifi es l aide du gabarit Lipoprint en vue d une valuation qualitative homog n it ou h t rog n it de la r partition des LDL Le profil des lipoprot ines refl te le bilan lipidique de l chantillon patient fig 9 Un profil des lipoprot ines normal Pattern A fait g n ralement appara tre des bandes pour les VLDL des bandes interm diaires C B et A qui englobent les IDL et des bandes LDL 1 LDL 2 et HDL La pr sence de sous fractions suppl mentaires de LDL LDL 3 7 indique l h t rog n it des LDL r v latrice du Pattern B Figure 9 R partition des sous fractions de lipoprot ines chez cinq individus de gauche droite pattern de LDL allant d homog ne de plus en plus h t rog ne Utilisation du gabarit Lip
26. s chantillons de s rum et de plasma EDTA pr lev s sur 37 patients ont t compar s sur le syst me Lipoprint Les valeurs de cholest rol en mg dl de toutes les fractions et sous fractions de lipoprot ines N 322 raison d un maximum de 12 par chantillon g n r es par le syst me Lipoprint ont t repr sent es graphiquement et mises en corr lation cholest rolyjasma 0 995 cholest rols rum 1 158 Stabilit des chantillons Des chantillons de s rum N 22 couvrant une large fourchette de concentrations de cholest rol et contenant entre 7 et 12 fractions et sous fractions ont t conserv s au r frig rateur pendant 7 jours Le profil Lipoprint de chaque chantillon a t g n r au jour 3 et au jour 7 et les valeurs de cholest rol r sultantes de chaque fraction et sous fraction de lipoprot ines N 206 ont t compar es cholest rol jour 3 0 996 cholest roljoyr o 0 075 cholest roljour 7 0 964 cholest rol o 0 758 r 0 971 r 0 976 r 0 961 Il a t conclu que le s rum et le plasma EDTA convenaient aussi bien l un que l autre comme sp cimen et que les chantillons pouvaient tre conserv s r frig r s 2 8 C pendant un maximum de 7 jours Pr cision par corr lation Le syst me de test Lipoprint a t compar des m thodes directes de d termination du HDL et du LDL HDL Direct Liquid Select et LDL Direct Liquid Select
27. tern B Quantimetrix 2005 Manhattan Beach Blvd Redondo Beach CA 90278 1205 USA e 1 310 536 0006 FAX 1 310 536 9977 www quantimetrix com MO96001B 12 14 1 Dans une tude portant sur 109 patients atteints d infarctus du myocarde IM Austin et al 5 ont mis en vidence que la sous fraction de LDL du Pattern B allait de pair avec un triplement du risque d IM ind pendamment du sexe de l ge et du poids relatif Krauss 8 a fait tat de d couvertes similaires Rajman et al 6 ont galement document le facteur de risque associ aux sous fractions de lipoprot ines de basse densit chez les hommes pr sentant des taux normaux de triglyc rides PRINCIPE DU TEST Le kit Lipoprint LDL comprend les l ments suivants e gelde polyacrylamide lin aire pr moul gel de concentration et gel de s paration dans un tube en verre fig 2 e gelde chargement liquide contenant un colorant lipophile e sels tampons Loading Gel Stacking Gel VLDL c B Midband A 3 SmalLoL Separating Get 8 7 HDL End of Gel Figure 2 Sch ma du tube de gel Lipoprint Le colorant se fixe proportionnellement a la quantit relative de cholest rol dans chaque lipoprot ine 9 Les lipoprot ines pr color es sont ensuite soumises a l lectrophor se Au cours de la premi re phase de l lectrophor se les particules de lipoprot ine sont concentr es par les gels
28. tersection de lintervalle de confiance inf rieur de 95 de la moyenne et de l axe des abscisses dans le cadre de la repr sentation graphique d une suspension dilution des valeurs attendues compar es au valeurs r elles pour les param tres de lipoprot ines individuels la sensibilit au VLDL est 2 02 mg dl la sensibilit au HDL est 3 65 mg dl et la sensibilit au LDL total est 8 30 mg dl Interf rences Des substances susceptibles de cr er des interf rences ont t ajout es aux concentrations indiqu es au tableau 14 a des chantillons de s rum puis test es c te c te avec des chantillons purs 4 r plicats Il en est ressorti que l h moglobine aux concentrations sup rieures 200 mg dl et l h parine aux concentrations g n ralement rencontr es dans les tubes de pr l vement de plasma h parin perturbaient le test Lipoprint Tableau 14 Interf rences Interf rent Conc mg dl VLDL C mg dl Recouvrement LDL C mg dl Recouvrement HDL C mg dl Recouvrement Aucun 17 1 1 100 115 1 9 100 42 2 4 100 Bilirubine 20 15 0 9 89 115 2 2 100 45 1 6 107 H moglobine 500 28 0 3 165 106 2 0 92 40 2 0 95 H moglobine 200 18 0 2 106 116 0 7 101 40 0 6 95 Acide nicotinique 2 5 16 0 7 94 115 1 5 100 43 2 0 102 EDTA 200 16 1 0 94 114 0 4 99 44 1 2 105 H parine 14 U ml 20 0 4 118 113 1 4 98 41 1 9 98 14 Comparaison s rum plasma De
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