HTLV I/II ELISA 3.0
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1. ou simple A longueurd onde 13 Solution d hypochlorite de sodium 5 ou eau de Javel liquide domestique AWN D Y PR PARATION DES R ACTIFS 1 CONJUGU Le CONJUGU doit tre pr par imm diatement avant utilisation Diluer le conjugu au 1 500 dans le diluant fourni avec la trousse par exemple 10 ul de conjugu pour 5 ml de diluant Utiliser exclusivement des r cipients et tubes en polypropyl ne Un volume de 12 0 mi de CONJUGU DE TRAVAIL est n cessaire pour chaque microplaque TABLEAU DE PR PARATION DU CONJUGU Nombre de tests Vol de conjugu ul Vol de diluant ml 24 10 0 5 0 48 15 0 7 5 72 20 0 10 0 96 24 0 12 0 TAMPON DE LAVAGE Le TAMPON DE LAVAGE doit tre pr par imm diatement avant utilisation Diluer 1 volume de CONCENTR DE LAVAGE dans 19 volumes d eau distill e Bien m langer Un volume d approximativement 400 mi de tampon de lavage est n cessaire pour laver 1 plaque PROC DURE IMPORTANT Les immunodosages de ce type sont sensibles la temp rature et d pendent de la dur e du test Le respect absolu de la proc dure d analyse garantit le fonctionnement optimal du test Le non respect de la proc dure recommand e peut conduire l obtention de r sultats aberrants 1 Sortir la microplaque du sachet aluminium Secouer les flacons de pr l vement et de contr le avant utilisation Remplir un r servoir r a2. Ed Diagnostics M HTLV I I ELISA 3 0 CE 0123 DATE DE R VISION 11 05 Remarque modifications en MBN 0011 FRA 1 surbrillance 21080 096T trousse de 96 tests REF 21080 192T trousse de 192 tests 21080 480T trousse de 480 tests NOM ET APPLICATIONS Le test HTLV NII ELISA 3 0 de MP Diagnostics MPD est un test Elisa destin la d tection des anticorps dirig s contre les virus HTLV I et HTLV II dans le s rum ou le plasma humain Il est pr vu pour tre utilis comme test de d pistage les tests positifs devront tre confirm s INTRODUCTION Les r centes tudes pid miologiques men es aux tats Unis et en Europe confirment l existence d une pr valence mixte de chacun des deux virus HTLV I et HTLV II au sein de diverses populations risque tels que les consommateurs de drogue par voie intraveineuse et les sujets ayant subi une ou plusieurs transfusions tant donn e la r activit crois e entre les s rums anti HTLV I et anti HTLV II d une part et le lysat viral d autre part la premi re g n ration de tests de d pistage utilisait le lysat viral du HTLV I et la deuxi me g n ration utilisait le lysat viral du HTLV I et des antig nes recombinants Cependant les immunodosages de premi re et deuxi me g n ration utilisant le lysat viral des HTLV I II qui sont actuellement disponibles manquent de sensibilit pour l identification du HTLV II et pr sentent un niveau important de
3. 3 NE PAS MODIFIER OU CHANGER DES R ACTIFS PROVENANT DE TROUSSES DIFF RENTES La correspondance des contr les conjugu et microplaques a t tudi e pour un fonctionnement optimal Utiliser uniquement les r actifs fournis avec la trousse 4 Ne pas utiliser les composants de la trousse au del de la date de p remption figurant sur l emballage de la trousse 5 viter toute contamination microbienne des r actifs lors de louverture des flacons et du pr l vement des aliquots de produit Ceci r duirait pr matur ment la dur e de conservation des trousses et pourrait conduire l obtention de r sultats erron s Utiliser des techniques aseptiques notamment les pipettes ou les embouts de pipette jetables lors du pr l vement des aliquots de produit dans les flacons 6 Afin d viter toute contamination crois e utiliser un nouvel embout de pipette pour chaque chantillon et ne pas toucher le haut ou le bas des bandelettes le bord des puits ou le liquide qu ils contiennent avec les doigts ou embout de la pipette 7 Il est recommand de nettoyer la verrerie devant tre utilis e pour les r actifs l aide d acide chlorhydrique 2 M et de la rincer abondamment l eau distill e ou d sionis e avant utilisation 8 Pour des r sultats optimaux laisser tous les r actifs et chantillons arriver temp rature ambiante 25 C 3 C avant utilisation Apr s utilisation les replacer imm diatement entre
4. ait t pr alablement essuy e et s ch e l aide de papier absorbant Le mat riel utilis y compris les gants jetables doit tre limin comme s il s agissait de mat riaux susceptibles de pr senter un danger biologique Ne pas mettre l autoclave les mat riaux contenant de lhypochlorite de sodium 14 Mettre tous les mat riaux utilis s et contamin s l autoclave 121 C 15 p s i pendant 30 minutes avant limination Il est galement possible de d contaminer les mat riaux dans une solution d hypochlorite de sodium 5 pendant 30 60 minutes avant de les liminer dans des sacs poubelle pour produits pr sentant un danger biologique 15 D contaminer tous les produits chimiques et r actifs utilis s en y ajoutant le volume d hypochlorite de sodium n cessaire pour arriver une concentration finale d au moins 1 Laisser reposer pendant 30 minutes pour garantir le succ s de la d contamination PR CAUTIONS D UTILISATION 1 Les chantillons s riques ou plasmatiques recueillis dans l EDTA l h parine ou le citrate de sodium peuvent tre utilis s Avant de les stocker v rifier que les caillots sanguins ou les cellules sanguines ont t s par s par centrifugation 2 Le fonctionnement optimal du test n est possible que dans le RESPECT ABSOLU de la proc dure d crite dans ce mode d emploi Le non respect de cette proc dure peut conduire l obtention de r sultats aberrants
5. composant d chantillons al atoires de donneurs de sang 5 000 d chantillons cliniques 200 et d chantillons potentiellement contaminants 100 a t test La sp cificit diagnostique constat e sur les chantillons al atoires de donneurs de sang sur les chantillons cliniques et sur les chantillons potentiellement contaminants est respectivement de 99 8 98 et 97 Le test HTLV III ELISA 3 0 de MPD montre une sp cificit lev e sup rieure 99 pour les trois s ries d chantillons test es Reproductibilit La reproductibilit inter lots et intra lot du test HTLV NII ELISA 3 0 de MPD a t d termin e en interne l aide des contr les de la trousse d un chantillon HTLV I positif d un chantillon HTLV IIl n gatif et d ACCURUN 24 un s rum de contr le multiparam trique de BBI Inter lots deux lots de microplaques ont t analys s quatre reprises avec trois extraits identiques de chaque contr le de la trousse et huit extraits identiques des chantillons restants chaque fois Intra lot un lot de microplaques a t analys deux fois dans la m me journ e avec huit extraits identiques de chaque chantillon incluant les contr les de la trousse pour chaque cycle d analyse sur quatre jours Les r sultats indiquent un coefficient de variation CV de 3 8 pour les chantillons analys s LIMITES DE LA M THODE Les r sultats positifs de fa on r p t e avec le
6. du test Jeter les gants dans des sacs poubelle destin s aux mat riaux pr sentant des dangers biologiques Se laver abondamment les mains par la suite 5 Il est fortement recommand de proc der ce test dans un local pr vu pour les op rations pr sentant des dangers biologiques 6 Ne pas placer d aliments et de boissons proximit des produits 7 En cas d accident ou de contact avec les yeux rincer imm diatement avec une grande quantit d eau et consulter un m decin 8 Consulter imm diatement un m decin en cas d ingestion de substances contamin es ou de mise en contact avec des plaies ouvertes ou autres l sions cutan es 9 L acide chlorhydrique peut causer des br lures VITER TOUT CONTACT En cas de contact avec la peau laver abondamment avec de leau 10 viter tout contact de l acide chlorhydrique avec des agents oxydants ou des m taux 11 Ne pas exposer le tampon et le comprim de substrat une forte luminosit Utiliser des pinces non m talliques pour manipuler le comprim d OPD 12 Ne jamais ajouter d eau la Solution d arr t 13 Essuyer imm diatement les claboussures de substances potentiellement infectieuses l aide de papier absorbant et nettoyer la zone contamin e l aide d une solution d hypochlorite de sodium 1 avant de reprendre le travail L hypochlorite de sodium ne doit tre utilis sur les claboussures contaminantes acides moins que la zone n
7. et jeter le film adh sif 19 l aide d une pipette canaux multiples 100 Hl ajouter 100 ul de SOLUTION D ARR T dans chaque puits M langer d licatement en tapotant la plaque 20 D terminer labsorbance de chaque puits 450 nm Sur un appareil utilisant une longueur d onde double la longueur d onde de r f rence doit tre 620 nm REMARQUE La lecture de l absorbance doit tre effectu e dans l heure qui suit l ajout de la SOLUTION D ARRET CONTR LE DE QUALIT 1 Le BLANC et le CONTR LE N GATIF doivent tre analys s en double et le CONTROLE POSITIF en triple sur chaque plaque pour chaque lot de pr l vements 2 L absorbance du blanc doit tre lt 0 100 3 L absorbance des valeurs de contr le n gatif doit tre gt 0 000 et lt 0 100 apr s soustraction de la valeur du blanc 4 Au moins 2 des 3 valeurs du contr le positif doivent pr senter une absorbance gt 0 800 apr s soustraction du blanc Les valeurs non comprises dans cet intervalle ne doivent pas tre utilis es pour calculer la moyenne du contr le positif RCX 5 Si2 des valeurs de contr le positif ou plus s cartent de la MOYENNE de plus de 30 le cycle d analyse est INVALIDE et doit tre renouvel 6 Pour que le test soit valable la diff rence entre les absorbances moyennes du contr le positif et du contr le n gatif RCX NRCX doit tre de 0 700 Dans le cas contraire le d roulement des op
8. faux positifs au sein des s rums de sujets non infect s La d tection des anticorps dirig s contre les HTLV I et HTLV II n cessite l utilisation d un test HTLV I II ELISA fortes sensibilit et sp cificit Le test HTLV III ELISA 3 0 de MP Diagnostics emploie uniquement une combinaison d antig nes recombinants Ce mode de test garantie la d tection du HTLV I tout comme du HTLV II par des pitopes sp cifiques Le test HTLV I II ELISA de 3 0 MP Diagnostics est pr vu pour tre utilis comme test qualitatif pour la d tection des anticorps dirig s contre les virus HTLV I et HTLV II dans le s rum ou le plasma humain Le test est pr vu pour le d pistage initial et n cessite l analyse r p t e des pr l vements initialement positifs ainsi que la confirmation du caract re positif reproductible des pr l vements l aide de tests suppl mentaires tels que le HTLV BLOT 2 4 MPD DESCRIPTION DES SYMBOLES UTILIS S Les symboles graphiques utilis s sur les produits et emballages des produits MP Diagnostics ci dessous Ces symboles sont ceux qui apparaissent le plus fr quemment sur les dispositifs m dicaux et sur leurs emballages lls sont d crits plus en d tails dans la notice de normalisation British and European Standard BS EN 980 20083 Utiliser avant Dispositif m dical Z Synonyme usage diagnostique Date de p remption in vitro Code du lot de fabrication Num ro du TE Synonymes catalog
9. test HTLV III ELISA 3 0 de MPD indiquent la possible pr sence d anticorps dirig s contre le HTLV I II dans le pr l vement Un r sultat N GATIF au test HTLV I II ELISA 3 0 de MPD signale l absence probable d anticorps d tectables dirig s contre le HTLV I II dans le pr l vement Cependant on ne dispose pas de suffisamment d l ments pour exclure la possibilit d une transmission du HTLV I II dans les chantillons sanguins apparaissant comme n gatifs au test HTLV I II ELISA 3 0 de MPD Un r sultat N GATIF ne permet donc pas d exclure la possibilit d une exposition au HTLV I II ou d une infection par le virus La possibilit de faux positifs doit tre prise en compte avec les trousses d analyse de ce type La proportion de faux positifs d pend de la sensibilit et de la sp cificit de la trousse d analyse Pour la plupart des tests de d pistage plus la pr valence de l anticorps anti HTLV Il est lev e dans une population plus la proportion de faux positifs est r duite LIMITES DE GARANTIE MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd Le fabricant ne garantit explicitement la trousse d analyse que 85 Science Park Drive pour un usage diagnostique in vitro sous r serve que soient 04 01 The Cavendish respect es les sp cifications et limites d crites dans le mode Singapore Science Park d emploi du produit et que celui ci soit utilis conform ment aux Singapour 118259 pr sentes instructions Le fabric
10. 1 1 221 F1 1 144 G1 1 298 Total 3 663 Moyenne 3 663 3 1 221 RCX Chaque valeur du contr le positif doit tre gt 0 800 unit Si l une des valeurs de contr le positif ne remplit pas les crit res ci dessus celle ci doit tre exclue car elle peut entrainer l obtention de r sultats aberrants La moyenne du contr le positif RCX doit alors tre recalcul e d apr s les valeurs de contr le positif restantes Toutes les valeurs de contr le positif restantes doivent r pondre aux crit res ci dessus sans quoi l analyse est invalide et doit tre renouvel e 3 Calcul de la diff rence entre RCx et NRCx Exemple NRCX 0 021 RCX 1 221 RCX NRCX 1 221 0 021 1 200 Pour que le test soit valide la valeur RCX NRCX doit tre de 0 700 Dans le cas contraire une manipulation incorrecte ou une d t rioration des r actifs peut tre mise en cause et l analyse doit tre renouvel e 4 Calcul de la valeur SEUIL Valeur SEUIL 0 450 NRCXx Exemple NRCx 0 021 Valeur SEUIL 0 450 0 021 0 471 INTERPR TATION DES R SULTATS 1 Les pr l vements dont les valeurs d absorbance sont lt la valeur SEUIL sont consid r s comme n gatifs au test HTLV I II ELISA 3 0 de MPD 2 Les pr l vements dont les absorbances sont sup rieures ou gales la valeur SEUIL sont consid r s comme initialement positifs d apr s les crit res du test HTLV IIl ELISA 3 0 de MPD et doivent tre r analys
11. 2 et 8 C pour conservation 9 Utiliser exclusivement de l eau d sionis e ou distill e de qualit r actif pour diluer les r actifs 10 Tous les r actifs doivent tre convenablement m lang s avant utilisation 11 La solution de conjugu de travail et le tampon de lavage dilu doivent tre pr par s juste avant utilisation 12 Ne pas exposer les r actifs ou r aliser les analyses dans une zone pr sentant un niveau lev de vapeurs chimiques d sinfectantes par exemple des vapeurs d hypochlorite au cours de leur conservation ou de l incubation Une telle mise en contact inhibe la r action de coloration Ne pas exposer non plus les r actifs une forte luminosit 13 Ne sortir les microplaques de leur pochette de conservation qu au moment pr cis de leur utilisation Les bandelettes non utilis es dont l emballage a t ouvert doivent tre conserv es entre 2 et 8 C dans leur pochette de conservation avec l agent de dessiccation fourni 14 Les contr les de la trousse doivent tre dos s en m me temps que les chantillons des patients chaque cycle de test 15 Prendre soin de ne pas toucher ou clabousser le bord du puits avec le conjugu Ne pas souffler dans la micropipette Il est recommand de proc der dans la mesure du possible un pipetage inverse 16 L utilisation d chantillons fortement h molys s de s rums non totalement coagul s d chantillons plasmatiques contenant de
12. 6 2 Kalyanaraman V S et al A new subtype of human T cell Courriel mpbiosuisse mpbio com leukemia virus HTLV II associated with a T cell variant of hairy cell leukemia Science 1982 218 571 573 3 Williams A E et al Seroprevalence and epidemiological correlates of HTLV I infection in U S blood donors Science 1988 240 643 646 4 Lipka J J et al 1990 Enhancing the sensitivity of HTLV immunoassays in Human Retrovirology HTLV Edt W A Blattner Raven Press NY pp 409 475 5 Lee H et al High rate of HTLV II infection in seropositive IV drug abusers in New Orleans Science 1989 244 471 475 6 Lipka J J et al Modified Western Blot Assay for confirmation and differentiation of Human T cell Brevet australien 613350 667189 690540 Lymphotropic Virus Type l and Il J Infect Dis 1991 Brevet tats Unis 5 066 579 5 614 366 164 400 403 5 763 572 5 814 441 5 871 933 5 643 714 7 LipkaJ J et al Segregation of Human T Cell Lymphotropic Brevet canadien 1337799 Virus Type l and Il infections by Antibody Reactivity to Unique Brevet europ en 0395634 Viral Epitopes J Infect Dis 1992 165 268 272 Brevet japonais 2559482 8 Hadlock K G Goh C J Bradshaw P A Perkins S Lo J Habbas R K Kaplan L and Foung S K H Delineation of an Immunodominant and highly HTLV specific epitope within the HTLV I transmembrane glycoprotein Blood 1995 68 4 392 1399 9 Varma M Rudolph D Knu
13. ant d cline toute responsabilit T l 65 6775 0008 explicite ou implicite y compris celle implicite ou explicite li e Fax 65 6775 4536 la qualit marchande l aptitude l emploi ou le fonctionnement Courriel enquiry_ap mpbio com implicite une autre fin particuli re Le fabricant ne peut s engager que sur un remplacement ou un remboursement du produit Le fabricant ne peut tre tenu responsable par l acheteur ou toute autre partie d aucune d t rioration blessure ou perte financi re r sultant de l utilisation du produit Medical Technology Promedt EC REP Consulting GmbH PROBL MES TECHNIQUES R CLAMATIONS Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Dans l ventualit d un probl me technique d une r clamation Allemagne proc der comme suit T l 49 68 94 58 1020 Fax 49 68 94 58 1021 1 Noter le num ro de lot de la trousse et sa date de Courriel info mt procons com p remption 2 Conserver les trousses et les r sultats obtenus 3 Contacter le bureau MP Biomedicals le plus proche ou votre distributeur local Bureaux r gionaux BIBLIOGRAPHIE MP Biomedicals Suisse S A Halle de Fret Aeroport 1 Poisez B J etal Detection and isolation of type C retrovirus P O Box 1015 particles from fresh and cultured lymphocytes of a patient 1211 Gen ve 5 with cutaneous T cell lymphoma Proc Natl Acad Sci USA Suisse 1980 77 7145 7419 T l 4122 788 1908 Fax 4122 788 198
14. ar des particules doivent tre filtr s 0 45 um ou centrifug s avant analyse Le s rum des patients peut tre inactiv mais ceci n est pas indispensable au fonctionnement optimal du test Pour l inactiver proc der comme suit 1 Retirer les bouchons des r cipients contenant le s rum 2 Chauffer le s rum 56 C pendant 30 minutes au bain marie 3 Laisser refroidir le s rum avant de refermer les bouchons 4 Le s rum peut tre congel pour tre conserv jusqu l analyse Il est d conseill de soumettre le s rum des patients des cycles r p t s de cong lation d cong lation MAT RIEL SUPPL EMENTAIRE N CESSAIRE NON FOURNI AVEC LE KIT 1 Papier absorbant jetable pour paillasse et serviettes en papier Tubes ou r cipients en polypropyl ne Pipettes gradu es 5 ml 10 ml Pipette canaux multiples capable de distribuer 50 pl 100 ul et 200 ul Pipette capable de distribuer 1 1000 pl Embouts de pipette jetables 7 R servoirs r actifs cuves rectangulaires ayant une capacit de 25 ml 8 Eau d sionis e ou distill e de qualit r actif 9 Flacons 500 ml 1 litre 10 Laveur de microplaque ELISA Il est galement possible de proc der un lavage manuel l aide d une pipette canaux multiples d livrant des doses de 0 3 ml et d un dispositif d aspiration 11 Un incubateur 37 1 C 12 Un lecteur de plaque en microdosage double A A
15. chel M Switzer W Hadlock Le nom et le logo Genelabs sont conc d s K G Velligan M Chan L Foung S K H and Lal R B sous licence par Genelabs Technologies Inc Enhanced specificity of truncated transmembrane protein for serologic confirmation of HTLV I and HTLV II infection by Western Blot assay containing recombinant envelope glycoproteins J Clin Micro 1995 33 12 3239 3244
16. ctif de DILUANT l aide d une pipette canaux multiples ajouter 200 ul de DILUANT dans tous les puits 200 yl Les puits A1 et B1 font office de 20 ul BLANCS NE PAS AJOUTER DE PR L VEMENT DANS CES PUITS Ajouter 20 ul de diluant suppl mentaires dans ces puits Ajouter 20 ul du pr l vement dans le 20 ul puits d sign cet effet en commen ant par le puits H1 Ceci permettra d obtenir une dilution finale du pr l vement de 1 11 NE PAS METTRE DE PR L VEMENT DANS UN PUITS SANS DILUANT Une fois les pr l vements analyser 20 ul ajout s ajouter 20 ul de CONTROLE NEGATIF par puits dans les puits C1 et D1 10 11 12 13 14 15 16 Ajouter 20 ul de CONTR LE POSITIF par puits dans les puits E1 F1 et G1 M langer soigneusement en tapotant d licatement de chaque c t de la microplaque tout en veillant ce que la plaque reste bien plat sur la paillasse Recouvrir la microplaque avec pr caution l aide de l un des films adh sifs fournis afin d viter toute vaporation pendant lincubation Incuber pendant 60 minutes 37 C Ne pas incuber au bain marie Pr parer le CONJUGU comme indiqu dans la section PR PARATION DES R ACTIFS avant de laver la microplaque Retirer et jeter le film adh sif puis laver la microplaque l aide de TAMPON DE LAVAGE DILU selon l une des deux m thodes recommand es Laveur automatique ou semi a
17. ent stables jusqu la date de p remption indiqu e sur la trousse Ne pas congeler les r actifs 3 Apr s ouverture le contenu de la trousse reste stable pendant 12 mois Toute trousse ferm e ou ouverte devient obsol te la premi re date de p remption 4 Des cristaux peuvent se former lorsque le Concentr de lavage de plaque 20x est conserv entre 2 et 8 C Ils doivent tre dissous par r chauffement 37 C avant utilisation 5 Un pr cipit peut se former lorsque le Diluant est conserv entre 2 et 8 C Ceci na aucune incidence sur le fonctionnement de la trousse 6 Les barrettes de microplaque non utilis es et dont l emballage a t ouvert doivent tre conserv es avec l agent de dessiccation fourni entre 2 et 8 C dans un sachet ferm RECUEIL TRANSPORT ET CONSERVATION DES PRELEVEMENTS Les chantillons s riques ou plasmatiques recueillis dans l EDTA lh parine ou le citrate de sodium peuvent tre utilis s Avant de les stocker v rifier que les caillots sanguins ou les cellules sanguines ont t s par s par centrifugation Les chantillons doivent tre conserv s entre 2 et 8 C si analyse doit tre r alis e dans les 7 jours suivant le pr l vement et congel s 20 C ou temp rature inf rieure si l analyse doit tre r alis e plus de 7 jours apr s Il est pr f rable d utiliser des chantillons clairs non h molys s Les chantillons lip miques ict riques ou contamin s p
18. la fibrine ou d chantillons ayant subi une contamination microbienne risque de conduire l obtention de r sultats erron s 17 NE PAS INCUBER LES PLAQUES AU BAIN MARIE 18 Les incubateurs CO ne doivent pas tre utilis s 19 Lors de lincubation 37 C toute vaporation doit tre vit e Couvrir les plaques laide des films adh sifs couvre plaques fournis 20 viter d ouvrir et fermer trop fr quemment la porte de lincubateur au cours des tapes d incubation 21 Ne pas conserver la solution d arr t dans un r cipient peu profond et ne pas la replacer dans le flacon de stockage apr s utilisation 22 V rifier que le bas de la plaque est propre et sec et que la surface du liquide ne pr sente aucune bulle avant de lire les r sultats sur la plaque Supprimer les bulles du puits par exemple en tapotant d licatement 23 Avant utilisation v rifier que les quipements automatis s s ils sont utilis s sont valid s 24 Il est fortement recommand de proc der r guli rement l entretien du syst me d aspiration de lavage afin d viter la contamination des sp cimens n gatifs par les sp cimens fortement positifs INSTRUCTIONS DE CONSERVATION 1 Conserver la trousse HTLV I II ELISA 3 0 de MPD et ses composants entre 2 et 8 C en dehors des p riodes d utilisation 2 Lorsqu ils sont conserv s entre 2 C et 8 C tous les r actifs et toutes les bandelettes de test ferm s ou non ouverts rest
19. ntre 450 nm Le fonctionnement du test HTLV I II ELISA 3 0 de MPD pour la d tection des anticorps dirig s contre le HTLV I et le HTLV II a donc t valu l aide de la version OPD Les r sultats obtenus figurant ci dessous ont t tendus la version TMB REMARQUE l tude australienne a t men e avec les deux types de substrat OPD et TMB et a affich des r sultats identiques 155 155 pour les deux types de substrat gt 99 9 Sensibilit 420 chantillons positifs test ELISA et ou transfert Western ont fait l objet de trois valuations men es dans trois laboratoires diff rents en interne pour la premi re en Su de et en Australie pour les deux autres L tude su doise n 163 r v le une sensibilit comparable un syst me d analyse de pointe L valuation australienne n 155 montre une sensibilit de 100 contre 99 pour l valuation en interne 105 106 r alis e avec des chantillons commerciaux et un panel de contr le titrage variable PRP206 Le seul chantillon r v l n gatif par le test HTLV I II ELISA 3 0 de MPD lors de l valuation en interne avait galement donn des r sultats n gatifs lors d un test ELISA concurrent et des r sultats ind termin s par transfert Western avec la pr sence de bandes GD21 et p19 peu marqu es Les trois valuations indiquent une sensibilit globale sup rieure 99 7 Sp cificit Un total de 5 300 chantillons se
20. rations peut tre mis en cause et l analyse doit tre renouvel e Si la diff rence entre ces absorbances MOYENNES RCX NRCX est syst matiquement faible la possibilit d une d t rioration des r actifs peut tre envisag e R SULTATS Chaque microplaque doit tre prise en compte s par ment lors du calcul et de l interpr tation des r sultats de l analyse ind pendamment du nombre de plaques utilis es au cours d une m me analyse LES VALEURS D ABSORBANCE MOYENNE DU BLANC DOIVENT ETRE D DUITES DE TOUTES LES VALEURS D ABSORBANCE DE LA PLAQUE AVANT L INTERPR TATION DES R SULTATS La pr sence ou l absence d anticorps sp cifiques dirig s contre le HTLV I II est d termin e par comparaison de labsorbance des pr l vements par rapport la VALEUR SEUIL VS de la plaque La VALEUR SEUIL est calcul e par addition de 0 45 unit d absorbance l absorbance moyenne NRC VALEUR SEUIL 0 45 NRCX CALCUL DES R SULTATS 1 Calcul de l absorbance moyenne du contr le n gatif NRCX Exemple Puits N Absorbance C1 0 020 D1 0 022 Total 0 042 Moyenne 0 042 2 0 021 NRCX Chaque valeur du contr le n gatif devrait tre lt 0 100 unit Si l une des valeurs de contr le n gatif ne r pond pas aux deux crit res ci dessus l analyse est invalide et doit tre renouvel e 2 Calcul de l absorbance moyenne du contr le positif RCX Exemple Puits N Absorbance E
21. s en double avant interpr tation 3 Les pr l vements apparaissant comme positifs apr s renouvellement de l analyse peuvent tre interpr t s comme tant positifs reproductibles vis vis des anticorps dirig s contre les virus HTLV I II d apr s les crit res du test HTLV I II ELISA 3 0 de MPD 4 Les pr l vements initialement positifs apparaissant comme n gatifs apr s renouvellement de l analyse sont consid r s comme n gatifs d apr s les crit res du test HTLV I II ELISA 3 0 de MPD 5 Les pr l vements apparaissant comme positifs reproductibles au test HTLV I II ELISA 3 0 de MPD doivent tre soumis des analyses suppl mentaires l aide d autres tests plus sp cifiques tels que le test HTLV BLOT 2 4 de MPD CARACT RISTIQUES SP CIFIQUES DE FONCTIONNEMENT Le test HTLV I II ELISA 3 0 de MPD version TMB est quivalent au test HTLV III ELISA 3 0 de MPD version OPD D un point de vue technique et biologique ils se caract risent par leur similarit en termes de conditions d utilisation e sp cifications propri t s conception mode de mise en uvre principe de fonctionnement e liquides organiques et r actifs Les deux essais sont toutefois diff rents en termes de e substrat utilis OPD contre TMB e type et volume de solution d arr t requis acide sulfurique contre acide chlorhydrique longueur d onde retenue pour la lecture du test 492 nm co
22. tensit du produit r actionnel jaune est mesur e par spectrophotom trie 450 nm et elle est proportionnelle la quantit d anticorps pr sente dans le pr l vement L MENTS DE LA TROUSSE Description du mat riel Quantit fournie MICROPLAQUE HTLV 1 PLAQUE 2 PLAQUES 5 PLAQUES Douze barettes de 8 puits par SGtests 192tests 480 tests plaque Chaque puits de la microplaque contient des prot ines recombinantes adsorb es du HTLV I et du HTLV II Conserver entre 2 C et 8 C cona A CONTR LE N GATIF 1 2 3 S rum humain normal anti VHC ampoule ampoules ampoules anti VIH 1 2 anti HTLV II et AgHBSs n gatif Contient du thiomersal et de l azide de sodium comme conservateurs Contenu 280 ul par ampoule Conserver entre 2 C et 8 C A CONTR LE POSITIF 1 2 4 S rum humain inactiv fort ampoule ampoules ampoules titrage en anticorps anti HTLV I Il et anti VHC anti VIH 1 2 et AgHBSs n gatif Contient du thiomersal et de l azide de sodium comme conservateurs Contenu 300 ul par ampoule Conserver entre 2 C et 8 C A DILUANT 1 1 2 Solution saline base de Tris flacon flacon flacons contenant du s rum de ch vre normal trait par la chaleur de l albumine s rique bovine et des stabilisants Contient du Bronidox comme conservateur Contenu 100 ml par flacon Conserver entre 2 C et 8 C A SOLUTION DE LAVAGE 1 1 2 CONCENTREE 20X flacon flacon flacons Sol
23. ttre une infection MANIPULER LES PR L VEMENTS TESTER ET LES CONTR LES POSITIFS ET N GATIFS COMME S IL S AGISSAIT D AGENTS POTENTIELLEMENT INFECTIEUX Il est recommand de manipuler les composants et les sp cimens analyser conform ment aux Bonnes Pratiques de Laboratoire Ils doivent galement tre limin s dans le respect des r gles de s curit en vigueur Le Contr le positif et le Contr le n gatif contiennent du thiomersal et de l azide de sodium L azide de sodium peut r agir au contact du cuivre et du plomb pr sents dans certaines tuyauteries pour former des sels explosifs Les quantit s utilis es dans cette trousse sont limit es Toutefois lors de leur limination les substances contenant des azides doivent tre rinc es abondament afin d viter la formation d azides m tallis s dans les tuyauteries Ci apr s figurent les nonc s des dangers R et mesures de s curit S correspondants R20 21 22 Nocif par inhalation par contact avec la peau et par ingestion R32 Au contact d un acide d gage un gaz tr s toxique S7 32 Conserver le r cipient bien ferm Ne pas respirer les vapeurs 935 Ne se d barrasser de ce produit et de son r cipient qu en prenant toutes les pr cautions d usage S36 Porter un v tement de protection appropri S46 En cas d ingestion consulter imm diatement un m decin et lui montrer l emballage ou l tiquette Le diluant contient du Bronidox et d
24. u Tris celui ci est class comme irritant Xi par les directives applicables de la Communaut europ enne CEE Ci apr s figurent les nonc s des dangers R et mesures de s curit S correspondants R36 38 Irritant pour les yeux et la peau S26 28 En cas de contact avec les yeux laver imm diatement et abondamment avec de l eau et consulter un sp cialiste Apr s contact avec la peau se laver imm diatement et abondamment avec de l eau La solution concentr e de lavage de plaque 20X contient du chloroac tamide 2 class comme irritant Xi par les directives applicables de la Communaut europ enne CEE Ci apr s figurent les nonc s des dangers R et mesures de s curit S correspondants R22 43 Nocif en cas d ingestion Peut entra ner une sensibilisation par contact avec la peau S22 36 37 45 Ne pas respirer les poussi res Porter un v tement de protection et des gants appropri s En cas d accident ou de malaise consulter imm diatement un m decin si possible lui montrer l tiquette 1 viter toute contamination microbienne des r actifs lors de louverture des flacons et du pr l vement des aliquotes de produit 2 Ne pas pipeter avec la bouche 3 Manipuler les sp cimens tester les microplaques et les Contr les positifs et n gatifs comme s il s agissait d agents potentiellement infectieux 4 Porter une blouse de laboratoire et des gants jetables pendant le d roulement
25. ue Num ro de lot Num ro de lot de fabrication Attention E AN Voir les instructions Limites de d utilisation temp rature Repr sentant agr dans la Communaut europ enne Fabricant Contenance suffisante pour lt n gt tests Consulter les instructions d utilisation Ne pas r utiliser dE PRINCIPES CHIMIQUES ET BIOLOGIQUES DU TEST Les puits de la microplaque sont recouverts d un m lange d antig nes recombinants du HTLV I et du HTLV II correspondant aux segments fortement antig niques de ces deux virus Les chantillons de s rum ou plasma humain dilu s dans un tampon diluant sont mis en incubation dans ces puits Les anticorps sp cifiques anti HTLV I II s il sont pr sents se fixeront sur les antig nes immobilis s sur la phase solide Les puits sont lav s abondamment afin d liminer les substances non fix es et un anticorps de ch vre anti IgG humaine purifi par affinit et marqu la peroxydase de raifort est ajout aux puits Cet anticorps marqu se fixera sur tout complexe antig ne anticorps pr alablement form et les anticorps marqu s non fix s en exc s seront limin s par lavage Une solution de substrat contenant du 3 3 5 5 t tram thylbenzidine TMB est alors ajout e chaque puits L apparition d une coloration bleue apr s ajout du substrat indique la pr sence d anticorps sp cifiques La r action est interrompue par ajout d acide chlorhydrique L in
26. ution phosphate saline tamponn e avec du Tween 20 Contient du chloroac tamide comme conservateur Contenu 120 ml par flacon Conserver entre 2 C et 8 C CONJUGU 1 2 3 Anticorps anti IgG humaine de ampoule ampoules ampoules ch vre marqu la peroxydase de raifort Contenu 45 ul par ampoule Conserver entre 2 C et 8 C suss rme A SUBSTRAT 1 2 5 Tampon contenant du 3 3 5 5 flacon flacons flacons t tram thylbenzidine TMB Conserver dans l obscurit entre 2 C et 8 C Contenu 12 5 ml par flacon SOLN sror e fi SOLUTION D ARR T 1 1 2 Solution d acide chlorhydrique flacon flacon flacons 1N Conserver dans l obscurit entre 2 C et 8 C Contenu 30 ml par flacon FILMS COUVRE PLAQUES 4 8 20 Films adh sifs pour couvrir la pi ces pi ces pi ces microplaque pendant l incubation MODE D EMPLOI 1 1 1 exemplaire exemplaire exemplaire Bronidox est une marque d pos e de Henkel Chemical Co PR CAUTIONS D UTILISATION 1 Utilisation r serv e au diagnostic in vitro 2 Utilisation r serv e aux professionnels 3 Consulter l emballage du produit pour conna tre les composants susceptibles de pr senter un risque biologique INFORMATIONS RELATIVES LA S CURIT ET LA SANT ATTENTION Cette trousse contient des substances d origine humaine Aucune N technique de test ne permet de garantir totalement que les produits sanguins humains ne vont pas transme
27. utomatique de microplaque Laver six 6 reprises avec au moins 300 pl par puits et par lavage Lavage manuel de la microplaque aspirer la totalit du contenu des puits en abaissant d licatement l embout de l aspirateur jusqu au fond de chaque puits ATTENTION NE PAS RAYER LA SURFACE INTERNE DES PUITS Remplir la totalit de la plaque avec au moins 300 ul puits puis aspirer imm diatement dans le m me ordre R p ter ce cycle six 6 reprises S cher la microplaque en la retournant sur un papier absorbant et en tapotant fermement Il ne doit pas subsister de tampon de lavage Tout r sidu de tampon de lavage risque d inhiber l apparition de la coloration pendant l incubation avec le substrat Remplir un r servoir r actifs avec le CONJUGU l aide d une pipette canaux multiples ajouter 100 ul dans chaque puits Poser un nouveau film adh sif Incuber la microplaque pendant 30 minutes 37 C Ne pas incuber au bain marie Retirer et jeter le film adh sif Renouveler les tapes de lavage 11 et 12 Remplir un r servoir r actif avec du SUBSTRAT l aide d une pipette canaux multiples ajouter 100 pl de SOLUTION DE SUBSTRAT dans chaque puits Poser un film couvre plaques 20 Hl 60 minutes 300 ul par puits par lavage 100 ul 30 minutes 100 ul 17 Incuber pendant 15 minutes l obscurit 15 minutes 37 C Ne pas incuber au bain marie 18 Retirer
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