Cervista ® HPV HR 92-011, PRD-01560
Contents
1. test s des concentrations de 1 x 10 copies r action et de 1 x 10 copies r action en utilisant sauf indication contraire le test Cervista HPV HR Tous les chantillons ont donn des r sultats n gatifs Human papillomavirus type 1a Human papillomavirus type 44 Human papillomavirus type 6 Human papillomavirus type 53 Human papillomavirus type 11 Human papillomavirus type 67 Human papillomavirus type 42 Human papillomavirus type 70 Human papillomavirus type 43 G ne de contr le interne humain Les types de papillomavirus humain 67 et 70 ont donn des r sultats positifs avec Cervista HPV HR 1 x 10 et 1 x 10 copies r action En soumettant ces chantillons un titrage plus pouss des r sultats n gatifs ont t obtenus avec Cervista HPV HR 1 x 10 copies r action et 1 x 10 copies r action respectivement De plus l ADN extrait dun ensemble de douze chantillons cervicaux conserv s dans une solution PreservCyt et confirm s pr c demment contenir des types d HPV faible risque 6 42 43 44 53 ou 70 par PCR s quen age ont aussi t test s et ont donn des r sultats n gatifs avec le test Cervista HPV HR Pr cision La reproductibilit et la pr cision intra laboratoire du test Cervista HPV HR ont t d montr es par une tude de 21 jours avec trois op rateurs diff rents chacun ex cutant deux tests par jour sur des groupes d quipeme2. 66 et 68 Ce test ne d tecte pas l ADN de types d HPV faible risque 6 11 42 43 44 2 Le test Cervista HPV HR montre une r activit crois e deux types d HPV de risque inconnu Un r sultat positif pour HPV a t observ avec 5 000 copies r actions d HPV type 67 et 50 000 copies r actions d HPV type 70 3 Un r sultat n gatif n exclut pas la possibilit d infection par HPV parce que de tr s faibles taux d infection ou une erreur d chantillonnage peut causer un r sultat faussement n gatif 4 Le test a t valid pour tre utilis uniquement avec des chantillons de cytologie cervicale pr lev s dans une solution PreservCyt ou un liquide de conservation SurePathT 5 La performance du test Cervista HPV HR a t tablie en utilisant de l ADN extrait avec le kit d extraction Genfind 11 6 Une interf rence de test a t observ e pour des chantillons cervicaux pr lev s dans une solution PreservCyt contamin s par des taux lev s 2 de gel e spermicide et ou de cr mes fongiques lorsque l ADN a t isol avec le kit DNA Extraction Genfind Kit Dans ces conditions des r sultats faussement n gatifs peuvent tre obtenus 7 Une interf rence de test a t observ e pour des chantillons cervicaux pr lev s dans du liquide de conservation SurePath contamin s par de la gel e spermicide et ou des cr mes fongiques des taux de l ordre de 0 5 et du lubrifiant intime A
3. Cellules pavimenteuses atypiques de signification ind termin e CIN N oplasie intra pith liale cervicale ADN Acide d soxyribonucl ique FAM Colorant de carboxyfluoresc ine FRET Transfert d nergie de fluorescence FOZ Fold over zero signal d chantillon ou de contr le divis par le signal No Target Control gDNA ADN g nomique HIST2H2BE G ne d histone humaine 2 g ne H2be HPV Papillomavirus humain HR Haut risque Max Maximum Min Minimum MTA Automatisation moyenne de la production NTC Pas de contr le cible No Target Control Oligo Oligonucl otide Pap Test de cytology cervicale de Papanicolau Red Colorant rouge Redmont RFU Unit de fluorescence relative R SUM ET EXPLICATION DU TEST Environ 11 000 nouveaux cas de cancer du col de l ut rus invasif et plus de 3 500 d c s sont projet s annuellement aux tats Unis Pour le stade pr coce du cancer du col de l ut rus le taux de survie relatif 5 ans est de 92 et pour tous les stades du cancer du col de l ut rus le taux de survie 5 ans est d environ 72 Le cancer du col de l ut rus est caus par une infection persistente par le papillomavirus humain HPV 2 II a d j t d montr que le cancer du col de l ut rus pourrait tre ais ment vit par la mise en uvre de programmes de d pistage cytologiques et d HPV facilitant la d tection et le traitement de l sions pr canc reuses Plus de 100 typ
4. parer les m langes de r action V rifier que le type de plaque 96 puits est compatible avec le cycleur thermique sp cifique et le lecteur de plaque fluorescence utiliser avant de commencer le test 6 Utiliser uniquement du mat riel talonn Les contr les de test doivent tre ajout s leurs positions d sign es sur la grille de placement de test indiqu e sur la figure 2 afin que le logiciel Invader Call Reporter fonctionne correctement 8 8 Utiliser de l huile min rale fra che pour chaque configuration de r action ne pas remettre ces r actifs dans leur flacon d origine une fois qu ils ont t distribu s 9 Consulter la grille de placement des chantillons pour assurer que le m lange correct est ajout la colonne appropri e 10 Toujours placer l embout de la pipette pr s du fond du puits pour assurer que le m lange de r action est ajout au dessous de la couche d huile min rale M langer en remplissant et en vidant soigneusement l embout de la pipette 3 5 fois Les notes de proc dure 5 9 et 10 ne s appliquent pas au syst me Cervista MTA INTERPR TATION DES R SULTATS Un rapport signal bruit signal d chantillon mesur par rapport au signal d un puits de r action No Target Control est g n r pour chacune des trois r actions Ce rapport signal bruit est appel FOZ Fold Over Zero Un r sultat final positif ou n gatif ou ind termin pour un chantillon est g
5. 5 inf ri Recr er les imprim s de logiciel en utilisant le pr par pour les inf rieur au nombre p g i iout nombre correct d chantillons m langes de d chantillons ajout s r action la plaque Volume de m lange V rifier que des volumes de m lange de de r action en r action corrects ont t ajout s chaque puits exc s ajout la V rifier que les informations d talonnage sur le microplaque 96 puits mat riel sont jour 21 No Target Control affiche les r sultats suivants e Augmenter le gain pour l acquisition 1 e Augmenter le gain pour l acquisition 2 e Augmenter le gain pour les 2 acquisitions Les r glages de gain du lecteur de microplaque fluorescence sont trop bas et font tomber les valeurs du signal fluorescent brut au dessous de la sp cification minimum Augmenter les r glages de gain du fluorom tre pour les acquisitions d sign es de mani re ce que No Target Control produise un signal minimum de 600 RFU et relise la plaque Des erreurs surviennent pendant l importation des donn es V rifier les param tres de gain FAM et Red et relire la plaque compl tement Les lectures partielles de plaques ne sont pas autoris es V rifier les param tres de gain FAM et relire la plaque compl tement Les lectures partielles de plaques ne sont pas autoris es V rifier les param tres de gain R
6. HPV FOZ sont lt 0 7 HPV FOZ bas et 3 quand le gDNA FOZ moyen d un chantillon n gatif est lt 1 5 gDNA bas La figure 3 repr sente un r sum des crit res d appel de l chantillon d crits ci dessus Terminologie HPV FOZ Pour chaque HPV Oligo Mix diviser le signal FAM de l chantillon par le signal FAM de No Target control Rapport HPV FOZ La valeur de HPV FOZ la plus lev e des trois HPV Oligo Mixes divis e par la valeur la moins lev e HPV FOZ des trois HPV Oligo Mixes normalis e 1 0 si FOZ est inf rieur 1 0 gDNA FOZ moyen Valeur moyenne d termin e par les trois valeurs DNA FOZ g nomiques obtenues partir des trois m langes de r action calcul e en divisant le signal Red de l chantillon par le signal Red du No Target Control CV gDNA FOZ du coefficient de variation pour les valeurs gDNA FOZ g n r es par les trois HPV Oligo Mix Crit res R sultat g n r OUI OUI OUI OUI OUI IND CV lev IND HPV FOZ faible POS POS IND gDNA faible Figure 3 Crit res pour les chantillons et les t moins HPV CONTR LE DE LA QUALIT Contr le n gatif 1 No Target Control doit fournir les r sultats appropri s afin que les chantillons de cette plaque soient valides Si les contr les ne sont pas conformes ces crit res les chantillons et les contr les de cette plaque sont invalides et le test doi
7. Les chantillons cervicaux qui peuvent tre test s par le test Cervista HPV HR comprennent ce qui suit e Les chantillons pr lev s dans la solution PreservCyt de pr servation test du ThinPrep Pap l aide d un dispositif de pr l vement appropri e Les chantillons pr lev s dans le liquide de conservation SurePath l aide d un un dispositif de pr l vement appropri Les chantillons cervicaux dans la solution PreservCyt peuvent tre conserv s temp rature ambiante 20 30 C pendant un maximum de 24 semaines avant d effectuer le test Les chantillons cervicaux dans un liquide de conservation SurePathT peuvent tre conserv s temp rature ambiante 20 30 C pendant un maximum de 6 semaines avant d effectuer le test Le kit d extraction d ADN Genfind IREF 95 449 a t valid pour tre utilis avec le test Cervista HPV HR La proc dure recommand e pour l extraction d ADN d chantillons cervicaux dans une solution PreservCyt ou un liquide de conservation SurePath est incluse dans le mode d emploi du kit d extraction d ADN Genfind Les laboratoires ex cutant le test Cervista HPV HR avec une m thode d extraction diff rente de celle indiqu e dans le kit d extraction d ADN valid e Genfind sont responsables de la validation de cette m thode Les chantillons d ADN peuvent tre conserv s entre 2 C et 8 C pendant un maximum de quatre semaines Pour conserv
8. Site 2 500 490 98 0 96 6 Site 1 vs Site 3 500 500 100 0 99 4 Site 2 vs Site 3 500 490 98 0 96 6 Toutes les o o paires de site 1500 1 480 98 7 97 9 16 Substances interf rentes Quatre chantillons cervicaux un n gatif pour HPV trois positifs pour HPV et trois chantillons de lign es de cellules un n gatif pour HPV deux positifs pour HPV ont t test s avec additions de substances pouvant tre pr sentes dans l chantillon cervical Substances ajout es aux chantillons solution PreservCyt deux types de produit pour injection vaginale gel e spermicide deux types de cr me anti fongique et des chantillons cliniques n gatifs contenant du sang et du mucus visibles La solution PreservCyt le produit pour injection vaginale la gel e spermicide et les cr mes anti fongiques ont t ajout s deux concentrations 0 5 et 2 Ces concentrations ont t choisies afin de repr senter des situations extr mes pouvant survenir pendant le pr l vement d chantillons si le col de l ut rus n a pas t nettoy avant l obtention de l chantillon L ADN a t isol partir d chantillons purs et impurs en utilisant le kit d extraction d ADN Genfind et a t test avec le test Cervista HPV HR pour valuer les interf rences caus es par les substances introduites La gel e spermicide et les cr mes anti fongiques contenant du clotrimazole ou du miconazole une concentration d c
9. chaque utilisation Le m lange de r action pr par doit tre utilis dans les 30 minutes R ACTIFS ET MAT RIAUX SUPPL MENTAIRES Le logiciel Invader Call Reporter est un l ment n cessaire de ce test IVD Ce logiciel est fourni une fois avec la commande initiale du test Cervista HPV HR puis par la suite avec les mises jour du logiciel S adresser au distributeur local pour demander des copies suppl mentaires Le kit d extraction d ADN Genfind Genfind DNA Extraction Kit est un accessoire du test Cervista HPV HR S adresser au repr sentant local pour commander le kit d extraction d ADN Genfind REF 95 449 MAT RIAUX REQUIS MAIS NON FOURNIS Articles consommables Embouts de pipette filtre anti a rosol sans nucl ase Plaques en polypropyl ne 96 puits Feuilles scellantes transparentes pour plaques Huile min rale de qualit biologie mol culaire Tubes de polypropyl ne st riles de 2 0 ml et capuchons viss s Mat riel Syt me Cervista MTA pour les utilisateurs de l automatisation Pipettes M langeur Vortex Lecteur de plaque fluorescence Tecan Infinite F200 Tecan GENios ou BioTek FLx800 7 PC de bureau avec syst me d exploitation Microsoft Windows et logiciels Microsoft Excel et Adobe Reader Cycleur thermique ou four pouvant maintenir des temp ratures de r action appropri es PR L VEMENT DES CHANTILLONS EXTRACTION D ADN ET CONSERVATION POUR L ANALYSE
10. de toute pi ce d quipement composant ou consommable faisant l objet d un non respect de garantie et mettra en uvre les efforts raisonnables pour en cas de dysfonctionnement ou de bogue d un logiciel qui emp che un fonctionnement conforme aux sp cifications techniques apporter rapidement une correction ou une solution de rechange Hologic peut galement choisir de rembourser ou d octroyer un avoir au client pour un montant quivalent au prix d achat de l quipement du composant du logiciel du consommable ou du service d fectueux Les articles remplac s deviendront la propri t d Hologic Toutes les demandes seront initi es en contactant Hologic pendant la p riode de garantie applicable et trente 30 jours apr s la prise de connaissance de l infraction ou de la non conformit Hologic doit se voir accorder un acc s raisonnable la possibilit d inspecter tous les l ments concern s Si Hologic et le client ne sont pas en mesure de r soudre une demande et si le client na pas inform Hologic dans un d lai d un 1 an apr s la demande le client ne sera plus autoris intenter une action en justice par la suite Ces recours incluront l enti re responsabilit d Hologic et le recours exclusif du client en cas de non respect de la garantie Ils remplacent toute autre action en justice ou en recours LIMITE DE RESPONSABILIT HOLOGIC NE SERA PAS TENU POUR RESPONSABLE DE TOUTE PERTE DOMMAGE O FRAIS PARTICULIER ACCESSO
11. deux types d oligonucl otides sp cifiques s quentiels c d un oligonucl otide sonde et un oligonucl otide Invader se lient la s quence cible d ADN Lorsque ces oligonucl otides recouvrent la s quence cible par au moins une paire de bases une structure invasive se forme servant de substrat pour enzyme Cleavase L enzyme clive la portion 5 fragment de la sonde la position du recouvrement Les sondes sont pr sentes en exc dent molaire important et vont rapidement sur la s quence cible et se d tachent de sorte que de nombreux fragments 5 d tach s sont g n r s par s quence cible Les fragments cliv s se lient un oligonucl otide universel de transfert d nergie de fluorescence FRET en pingle cheveux cr ant ainsi une autre structure invasive reconnue par l enzyme Cleavase comme substrat L enzyme clive les oligonucleotides FRET entre le fluorophore et la mol cule quencher et produit un signal de fluorescence pendant que les fragments cliv s se mettent en mouvement Pour chaque copie de cible les r actions primaires et secondaires combin es r sultent en une amplification de signal de 10 107 fois par heure Les s quences de fragment et les oligonucl otides FRET sont universels puisqu ils ne sont pas compl mentaires la s quence cibl e Les r actifs pour ce test sont fournis sous forme de trois m langes d oligonucl otides qui d tectent les 14 types d HPV group s en fonction de leur rap
12. obtenir une liste des revendeurs du monde entier T l phone 608 273 8933 Site web www hologic com ec rer Repr sentant agr de la Communaut europ enne Hologic UK Ltd Link 10 Napier Way Crawley West Sussex RH10 9RA Royaume Uni 44 0 1293 522 080 AVIS AU DESTINATAIRE CONCERNANT LA LICENCE LIMIT E L acceptation de ce produit fourni par Hologic ou l un de ses distributeurs agr s inclut une licence limit e non exclusive et incessible en vertu de certains droits de propri t intellectuelle d tenus par Hologic L unique objet de cette licence est l utilisation du produit au moyen des m thodes pr vues Cette licence limit e ne comprend pas de licence d utilisation du produit pour la recherche ou le d veloppement de nouveaux produits la fabrication de produits la r tro ing nierie l am lioration de la technologie du produit ou tout autre but commercial Le client n est pas autoris transf rer ce produit un tiers quelque fin que ce soit sans le consentement crit explicite de Hologic Sauf stipulation contraire dans le pr sent paragraphe aucune licence n est accord e de mani re explicite implicite ou par pr clusion Afin d obtenir des informations concernant la disponibilit de licences suppl mentaires pour pratiquer les m thodologies brevet es veuillez contacter le service juridique l adresse ci dessous Legal Department Hologic Inc 502 South Rosa Rd Madison WI 53719 US
13. termes chu Les options apr s vente et les accessoires sont garantis pendant six 6 mois et les tubes rayon X sont garantis au prorata lin aire comme stipul dans le cahier des charges correspondant P riode de garantie Les pi ces de rechange sont garanties pendant le reste de la P riode de garantie ou pendant quatre vingt dix 90 jours compter de la livraison la dur e la plus longue pr valant Les consommables sont garantis conform ment aux sp cifications publi es pendant une p riode se terminant la date d expiration indiqu e sur leurs emballages respectifs Il est garanti que les prestations seront fournies dans les r gles de Part Hologic ne garantit pas que l utilisation des produits sera continue ou sans erreur ou que les produits fonctionneront avec des produits fournis par des tiers non agr s par Hologic L ENTI RE RESPONSABILIT D HOLOGIC EN MATI RE DE GARANTIE EST EXPLICITEMENT LIMIT E LA R PARATION O AU REMPLACEMENT DU PRODUIT LA DISCR TION D HOLOGIC ET SOUS LA FORME ORIGINALE D EXP DITION DU PRODUIT LA CORRECTION D UNE PRESTATION FAISANT L OBJET D UNE R CLAMATION O LA DISCR TION D HOLOGIC LE REMBOURSEMENT OU L OCTROI D UN AVOIR AU CLIENT POUR UNE SOMME QUIVALENTE AU PRIX O AUX HONORAIRES PRATIQU S PAR HOLOGIC LES GARANTIES SUSMENTIONN ES REMPLACENT ET EXCLUENT TOUTES LES AUTRES GARANTIES NON EXPLICITEMENT EXPOS ES DANS LES PR SENTES QU ELLES SOIENT EXPLICITES OU IMPLICIT
14. vision central ont servi de norme id ale pour d terminer la pr sence ou l absence de maladie En absence de donn es histologiques le manque de l sions cervicales visibles colposcopiquement et l absence de biopsie ont t consid r s comme signifiant une absence de maladie Il y a eu 1 347 sujets ASC US avec un tat de maladie connu histologie centrale ou colposcopie n gative et des r sultats de test Cervista HPV HR Les tableaux 5 et 6 repr sentent une comparaison entre les r sultats Cervista HPV HR et les r sultats de colposcopie histologie centrale 12 Tableau 5 R sultats de Cervista HPV HR par rapport aux r sultats de colposcopie histologie consensuelle CIN2 chez les femmes avec cytologie ASC US Cervista Colposcopie Histologie PER Positif N gatif Total Positif 64 705 769 N gatif 5 573 578 Total 69 1278 1 347 Inclut les r sultats ind termin s P CIN2 Histologie Aucun CIN ou CIN1 par histologie centrale ou colposcopie sans histologie centrale Tableau 6 R sultats de Cervista HPV HR par rapport aux r sultats de colposcopie histologie consensuelle CIN3 chez les femmes avec cytologie ASC US Cervista Colposcopie Histologie HPV HR Positif Negatif Total Positif 22 705 727 N gatif 0 573 573 Total 22 1 278 1 300 a Inclut les r sultats ind termin s P CIN3 incluant un ad nocarcinome in situ Au
15. 2 500 84 58 69 26 31 HPV 31 5 000 84 84 100 0 0 10 000 84 84 100 0 0 2 500 84 13 15 71 84 HPV 33 5 000 84 81 96 3 4 10 000 84 84 100 0 0 2 500 84 1 1 83 99 HPV 35 5 000 84 60 71 24 29 10 000 84 84 100 0 0 2 500 84 52 62 L 32 38 L HPV 39 5 000 84 84 100 0 0 10 000 84 84 100 0 0 2 500 84 84 100 0 0 HPV 45 5 000 84 84 100 0 0 10 000 84 84 100 0 0 2 500 84 77 92 7 8 HPV 51 5 000 84 84 100 0 0 10 000 84 84 100 0 0 2 500 84 21 25 63 75 HPV 52 5 000 84 84 100 0 0 10 000 84 84 100 0 0 2 500 84 64 76 20 24 HPV 56 5 000 84 83 99 1 1 10 000 84 84 100 0 0 2 500 84 60 71 24 29 HPV 58 5 000 84 84 100 0 0 10 000 84 84 100 o 0 2 500 84 16 19 68 81 HPV 59 5 000 84 79 94 5 6 L 10 000 84 84 100 0 0 2 500 84 40 48 44 52 HPV 66 5 000 84 84 100 0 0 10 000 84 84 100 0 0 2 500 84 43 51 41 49 HPV 68 5 000 84 84 100 0 0 10 000 84 84 100 0 0 19 Positif pour N gatif pour Copies r action ou HPV HPV Cible cellules ml extraites N n n 2 500 SiHa 97 500 Jurkat 84 0 0 84 100 SiHa Jurkat 5 000 SiHa 95 000 Jurkat 84 15 18 69 82 20 000 SiHa 80 000 Jurkat 84
16. 2 500 5 000 1 30 0 06 Moyenne 1 324 0 074 Exactitude et sp cificit compar es une m thode de PCR s quen age d ADN Une tude destin e valuer la capacit du test Cervista HPV HR pour d tecter l ADN d HPV haut risque provenant d chantillons cliniques a t r alis e Les chantillons ont t caract ris s en utilisant une m thode de g notypage d HPV qui utilise une amplification de la PCR d g n r e suivi de s quen age de type d HPV sp cifique La m thode de PCR s quen age a t utilis e comme le seul d terminant pour la pr sence d ADN d HPV L tude a port sur 192 chantillons conserv s dans une solution PreservCyt dont 189 ont eu des r sultats de s quen age clairs Parmi ces 189 chantillons deux chantillons taient ind termin s par le test Cervista HPV HR Les r sultats ind termin s n ont pas t inclus dans l analyse comparative du test Cervista HPV HR et les m thodes de PCR s quen age La proportion des r sultats n gatifs par PCR s quen age qui taient positifs par le test Cervista HPV HR tait de 5 187 Inversement la proportion des r sultats positifs par PCR s quen age qui taient n gatifs par le test Cervista HPV HR tait de 11 187 voir Tableau 9 ci dessous Lorsque l analyse a t faite de cette mani re une concordance g n rale de 91 4 171 187 IC de 95 86 5 95 0 a t observ e entre les m thodes avec une conco
17. 84 100 0 0 1 250 HeLa 98 750 Jurkat 84 65 77 19 23 HeLa Jurkat 2 500 HeLa 97 500 Jurkat 84 84 100 0 0 10 000 HeLa 90 000 Jurkat 84 84 100 0 0 10 000 84 2 2 82 98 Jurkat 20 000 84 0 0 84 100 100 000 84 0 0 84 100 Performance du test Cervista HPV HR sur des chantillons pr lev s dans un liquide de conservation SurePathT par rapport des chantillons pr lev s dans une solution PreservCyt Un total de 418 sujets ont particip une tude de pr l vements pour obtenir des chantillons cervicaux par paires pr lev s dans un liquide de conservation SurePath et dans une solution PreservCyt Solution sur chaque sujet Chaque paire d chantillons a t test e avec le test Cervista HPV HR Un pourcentage d accord total de 92 a t observ pour les r sultats obtenus sur les chantillons pr lev s dans le liquide de conservation SurePath par rapport aux r sultats obtenus sur les chantillons pr lev s dans la solution PreservCyt Tableau 16 R sum des r sultats du test Cervista HPV HR sur des chantillons cervicaux co pr lev s dans un liquide de conservation SurePath et dans une solution R f rences PreservCyt R sultats de En de l chantillon SurePathT PreservCyt Toial 418 418 Positif 29 4 29 2 Negatif 69 9 70 6 Ind termin 0 7 0 2 1 2 Nationa
18. A 01 608 273 8933 27 Le test Cervista HPV HR utilise des composants chimiques et sp cifiques Invader exclusifs couverts par les num ros de brevets am ricains 5 614 402 5 795 763 5 846 717 5 985 557 5 994 069 6 001 567 6 090 543 6 090 606 6 348 314 6 458 535 6 555 357 6 562 611 6 635 463 6 673 616 6 759 226 6 872 816 6 875 572 6 913 881 7 060 436 7 067 643 7 087 381 les num ros de brevets canadiens 2 163 015 2 203 627 les num ros de brevets australiens 694 736 731 062 737 449 738 849 744 369 779 443 781 188 le num ro de brevet japonais 3 665 648 le num ro de brevet europ en 711 361 Tous les brevets am ricains et trangers selon l applicabilit qui sont publi s ou peuvent l tre en ce qui concerne de telles applications pour les brevets et toutes les applications de brevets des tats Unis et trangers et brevets publi s l o ils sont applicables dont le sujet en totalit ou partiellement est apte au b n fice de la date d enregistrement de l un quelconque de ces brevets applications de brevets r pertori s dans cette notice de produit GARANTIE LIMIT E DU PRODUIT GARANTIES Le client d origine a la garantie que les performances du mat riel des fournitures et des logiciels sont conformes aux sp cifications publi es du produit pendant un 1 an compter de la date d installation le cas ch ant ou de la date de la livraison au premier des deux
19. CerVista HPV HR Cervista HPV HR 92 011 PRD 01560 UTILISATION PR VUE Le test Cervista HPV HR est pr vu pour deux utilisations 1 Servir de guide pour la prise en charge d un patient s il est utilis conjointement avec un examen de cytologie cervicale chez les femmes g es de 30 ans et plus 2 Servir au triage de patients pr sentant des cellules pavimenteuses de signification ind termin e apr s test de Pap ASC US afin de d terminer la n cessit de l orientation vers un sp cialiste de colposcopie V7 15 C 92 011 V96 30 C PRD 01560 Vos Hologic UK Ltd Link 10 Napier Way Crawley West Sussex RH10 9RA UK 44 0 1293 522080 Ne pas conserver dans un cong lateur sans givre Prot ger de la lumi re POUR L EXPORTATION UNIQUEMENT NE PEUT TRE VENDU AUX TATS UNIS NI AU CANADA TABLE DES MATI RES ABR VIATIONS UTILIS ES SYMBOLES HARMONIS S UTILIS S R SUM ET EXPLICATION DU TEST PRINCIPES DE LA PROC DURE R ACTIFS FOURNIS AVERTISSEMENTS ET PR CAUTIONS SP CIFICATIONS DE CONSERVATION ET DE MANIPULATION R ACTIFS ET MAT RIAUX SUPPL MENTAIRES MAT RIAUX REQUIS MAIS NON FOURNIS PR L VEMENT DES CHANTILLONS EXTRACTION D ADN ET CONSERVATION POUR L ANALYSE 1 PROC DURE DE TEST NOTES PROC DURALES INTERPR TATION DES R SULTATS CONTR LE DE LA QUALIT LIMITES CARACT RISTIQUES DE PERFORMANCE R F RENCES GUIDE DE D PANNAGE ABR VIATIONS UTILIS ES ASC US
20. ES PAR EFFET DE LA LOI OU AUTREMENT Y COMPRIS MAIS SANS S Y LIMITER TOUTES LES GARANTIES IMPLICITES DE QUALIT MARCHANDE ET D AD QUATION UN USAGE PARTICULIER CETTE GARANTIE LIMIT E EST ACCORD E UNIQUEMENT AU CLIENT D ORIGINE AUCUN TIERS Y COMPRIS MAIS SANS S Y LIMITER LES CLIENTS DU CLIENT NE PEUT EN B N FICIER NI S Y FIER CETTE GARANTIE EST NULLE SI LE PRODUIT EST C D PAR LE CLIENT UNE ENTIT QUI D TIENT MOINS DE CINQUANTE 50 POURCENT DU PRODUIT CERTAINS TATS N AUTORISENT PAS L EXCLUSION DES GARANTIES IMPLICITES PAR CONS QUENT IL EST POSSIBLE QUE LES EXCLUSIONS Cl DESSUS NE S APPLIQUENT PAS VOTRE CAS VOUS POUVEZ GALEMENT B N FICIER D AUTRES DROITS QUI VARIENT D UN TAT L AUTRE Ces garanties ne s appliquent pas un quelconque article qui a fait l objet d une r paration d un d placement ou d une modification effectu e par un personnel d entretien non agr par Hologic b est soumis une contrainte excessive notamment thermique ou lectrique une tension ou un mauvais usage c est stock entretenu ou utilis de mani re non conforme aux sp cifications ou instructions correspondantes d Hologic ou d est indiqu comme tant fourni conform ment une garantie n manant pas d Hologic ou pendant sa p riode de conception ou en l tat 28 DEMANDES DE GARANTIE ET RECOURS En cas de demande de garantie Hologic fournira des articles neufs ou r par s en remplacement
21. Ferenczy S Ratnam F Coutl e EL Franco Human Papillomavirus DNA versus Papanicolau Screening Tests for Cervical Cancer N Engl J Med 357 16 1579 1588 9 Wheeler CM WC Hunt M Schiffman PE Castle 2006 Human papillomavirus genotypes and the cumulative 2 Year risk of cervical cancer J Infect Dis 194 1291 1299 10 Saslow D Runowicz CD Solomon D Moscicki A B Smith RA Eyre HJ Cohen C American Cancer Society guideline for the early detection of cervical neoplasia and cancer CA Can Jour Clin 2002 53 342 362 11 Wright TC Jr Schiffman M Solomon D Cox JT Garcia F Goldie S Hatch K Noller KL Roach N Runowicz C Saslow D 2004 Interim guidance for the use of human papillomavirus DNA testing as an adjunct to cervical cytology for screening Obstet Gynecol 103 304 309 12 Hall JG Eis PS Law SM Reynaldo LP Prudent JR Marshall DJ Allawi HT Mast AL Dahlberg JE Kwiatkowski RW de Arruda M Neri BP and Lyamichev VI 2000 Sensitive detection of DNA polymorphisms by the serial invasive signal amplification reaction PNAS 97 15 8272 8277 GUIDE DE D PANNAGE PROC DURE DE TEST MANUEL POUR CERVISTA HPV HR Tableau 17 Guide de d pannage Probl me Cause possible Solution possible Le nombre Recalculer manuellement la quantit de d chantillons saisi m lange de r action n cessaire pour terminer dans l onglet du la plaque enti re logiciel Assay Volume insuffisant Selection est NS N t
22. IRE PUNITIF EXEMPLAIRE O INDIRECT Y COMPRIS MAIS SANS S Y LIMITER LES PERTES DE PROFITS DE DONN ES O DE JOUISSANCE R SULTANT DIRECTEMENT O INDIRECTEMENT DE LA VENTE DE LA MANIPULATION DE L ENTRETIEN OU DE L UTILISATION DU PRODUIT COMMAND O FOURNI OU DE TOUTE CAUSE Y AFF RANT SAUF EN CAS D ACCORD CRIT EXPLICITE ENTRE LES PARTIES L EXCEPTION D UN DOMMAGE CORPOREL OU D UN D C S DANS LA LIMITE R SULTANT D ACTES DE N GLIGENCE D ACTES INTENTIONNELLEMENT ABUSIFS O D OMISSIONS DE LA PART DE HOLOGIC EN AUCUNE CIRCONSTANCE HOLOGIC NE SERA TENU POUR RESPONSABLE EN VERTU D UNE TH ORIE JURIDIQUE O D UNE CAUSE QUELLE QU ELLE SOIT QUE CE SOIT SUR LA BASE D UNE GARANTIE D UN CONTRAT D UN D LIT D UNE N GLIGENCE OU DE TOUTE AUTRE TH ORIE M ME EN CAS DE NOTIFICATION D UNE TELLE POSSIBILIT ET NE SERA TENU DE VERSER UN QUELCONQUE MONTANT SUP RIEUR AU PRIX OU AUX HONORAIRES RE US PAR HOLOGIC Hologic Cervista Cleavase Invader Invader Call Reporter PreservCyt et ThinPrep sont des marques d pos es de Hologic Inc Toutes les autres marques commerciales marques d pos es dont il est fait r f rence dans cette notice de produit sont la propri t de leurs compagnies respectives Certains composants de l analyse d acide nucl ique comme par exemple des proc d s et compositions sp cifiques pour la manipulation ou la visualisation d acides nucl iques pour l analyse pourront tre couverts par un o
23. ND HPV FOZ faible Erreur d extraction d ADN soup onn e Inhibition de chantillon d ADN R p ter l extraction d ADN de l chantillon e V rifier que la proc dure appropri e a t suivie pour l extraction d ADN e Voir le mode d emploi section Carat ristiques de performance substances interf rentes Volume d ADN insuffisant Volume d lution insuffisant pendant l extraction d ADN R p ter l extraction d ADN de l chantillon V rifier que la proc dure appropri e a t suivie pour l extraction d ADN Nombre lev d chantillons d ADN avec des valeurs positives FAM FOZ dans les trois m langes de r action Erreur d extraction d ADN soup onn e Contamination soup onn e du r actif d extraction d ADN e R p ter l extraction d ADN de l chantillon e V rifier que la proc dure appropri e a t suivie pour l extraction d ADN 26 PANNES DU SYSTEME CERVISTA MTA Reportez vous la section Pannes du manuel d utilisation du Cervista MTA Num ro de la pi ce MAN 02378 002 pour les syst mes Cervista MTA Informations de contact Fabricant Hologic Inc 502 S Rosa Road Madison WI 53719 USA T l phone 608 273 8933 Site web www hologic com Assistance technique L acc s l Assistance technique en dehors des Etats Unis sera indiqu par votre repr sentant local Revendeurs Veuillez contacter Hologic pour
24. STROGLIDE des taux de l ordre de 0 5 lorsque l ADN a t isol avec le kit DNA Extraction Genfind Kit Dans ces conditions des faux n gatifs peuvent tre obtenus Les interf rences potentielles du lubrifiant intime ASTROGLIDE n ont pas t test es sur les chantillons cervicaux pr lev s dans une solution PreservCyt CARACT RISTIQUES DE PERFORMANCE Performance d essai clinique Une tude clinique multi centrique transversale et prospective a t men e pour valuer la performance du test Cervista HPV HR pour la d tection du papillomavirus humain et de n oplasie intra pith liale cervicale 2 ou plus lev CIN2 dans des chantillons de cytologie liquides Des chantillons de cytologie ThinPrep r siduels ont t pr lev s chez 3 540 femmes au cours d examens usuels de d pistage de cancer du col ut rin Cette tude comprenait 2 026 femmes g es de 30 ans et plus avec des r sultats de cytologie normaux WNL et 1 514 femmes g es de 18 ans et plus avec des r sultats ASC US Des chantillons de cytologie ont t pr lev s dans 89 sites cliniques dans tous les tats Unis L ADN a t extrait d chantillons cervicaux ThinPrep r siduels qui restaient apr s la fin des proc dures de d pistage du cancer du col ut rin usuelles L ADN a t ensuite test en utilisant le test Cervista HPV HR La performance analytique du test a t mesur e par rapport aux r sultats par PCR s quen ag
25. cun CIN ou CIN2 par histologie centrale ou colposcopie sans histologie centrale Chez les femmes avec cytologie ASC US la sensibilit clinique du test pour CIN2 tait de 92 8 IC de 95 83 9 97 6 et la valeur pr dictive n gative tait de 99 1 IC de 95 98 0 99 7 La sensibilit clinique et les valeurs pr dictives n gatives du test pour CIN 3 sont toutes deux de 100 IC de 95 84 6 100 et 99 4 100 Un nombre de variables cl s sont connues pour influer sur les caract ristiques de performance des tests HPV dans une tude clinique Ces variables comprennent mais sans s y limiter les techniques d chantillonnage cervical la qualit des r sultats de cytologie l ge de la population test e la pr valence de la maladie les m thodes de constatation de la maladie et les m thodes d interpr tation cytologique tant donn le nombre de variables applicables aux tests d HPV usuels entre les nombreux sites cliniques il est noter que de nombreux r sultats obtenus par l essai clinique Hologic sont semblables ceux obtenus dans les conditions d essai contr l es d crites dans l tude ASC US LSIL Triage Study ALTS 7 Une comparaison du plan de l tude de la pr valence de la maladie et des caract ristiques de performance cliniques pour l tude Hologic et ALTS est repr sent e au tableau 7 La diff rence des taux de CIN2 observ e entre les deux tudes peut refl ter les diff rences de p
26. d riv e empiriquement dans chaque r action La mesure de cette cible sert de m canisme de contr le de la qualit pour confirmer qu un r sultat n gatif n est pas caus par un chantillon insuffisant 1a Les oligos HPV forment une structure 1b Les oligos HIST2H2BE forment une structure invasive sur l ADN d HPV invasive sur l ADN g nomique 4 E soy TARGET 5 u ua i TARGET 5 r TARGET i 2 L enzyme Cleavase reconna t la structure et clive les oligosondes 3a Les fragments des oligosondes d HPV forment 3b Les fragments des oligosondes HIST2H2BE une structure invasive sur les oligos FAM FRET forment une structure invasive sur les oligos Red FRET e Bir UT Eo S FF __ I 7 D En m_m 4 L enzyme Cleavase reconna t la structure et lib re les fluorophores des oligos FRET cr ant un signal de fluorescence Fluorescence Fluorescence d o EAM D a k miT O SiT O p 4 seer CASAETT san CHAINES Figure 1 Repr sentation graphique du proc d chimique Invader dans Cervista HPV HR R ACTIFS FOURNIS Tableau 1 Cervista HPV HR Contenu Abr viation d Nombre de Nombre de R actif ak tsd e flacons et flacons et volume D iption d t Cacu He u volume de r actif de r actif EScrpuon SU composan REF 92 011 REF PRD 01560 HPV Oligo O1 Oligonucl otides avec affinit pour les types Hs ri capuchon bleu 1x 1400 ul 8 x 1 400 ul d HPV 51 56 et 66 en sus
27. e Les chantillons d ADN r siduels provenant des sujets ASC US et WNL ont t utilis s pour l amplification et le s quen age de la PCR Les chantillons d ADN ont t amplifi s en utilisant les amorces d termin es par consensus pour le g ne HPV L1 Une portion du g ne b ta globuline humain a t galement amplifi e en tant que contr le interne Les amplicons purifi s ont t utilis s comme mod les dans les r actions de s quen age multiples pour 14 types d HPV haut risque 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 66 et 68 Les donn es de s quen age ont t analys es en utilisant un logiciel d alignements de s quences vari s Une comparaison entre le test Cervista HPV HR et la m thode de PCR s quen age parmi les sujets ASC US et WNL a r sult en une concordance g n rale de 86 1 entre les deux m thodes IC de 95 84 9 87 3 La concordance de pourcentage positif entre les deux m thodes tait de 91 8 89 7 93 6 et la concordance de pourcentage n gatif tait de 84 2 IC de 95 82 7 85 7 La performance clinique du test Cervista HPV HR a te mesur e par rapport aux r sultats de colposcopie et d histologie Des chantillons de biopsie ont t pr lev s chez des femmes avec des r sultats de cytologie ASC US comme justifi par les normes des directives de soins chaque site clinique participant Les r sultats d histologie consensuels fournis par un groupe de r
28. ed et relire la plaque compl tement Les lectures partielles de plaques ne sont pas autoris es Probl mes de fluorom tre Voir le guide de d pannage dans le manuel d utilisation du logiciel Invader Call Reporter pour les probl mes de fluorom tre pouvant contribuer cette erreur La dur e d incubation a t plus longue que la dur e recommand e Confirmer que l incubation a t effectu e pendant la dur e sp cifi e la temp rature sp cifi e 22 No Target Control affiche les r sultats suivants M lange de r actifs insuffisant ou inconsistant Pr paration des m langes de r action incorrecte Ajout incoh rent de No Target Control ou du m lange de r action la microplaque S assurer que tous les chantillons r actifs et m langes de r action sont m lang s compl tement En ajoutant le m lange de r action chaque puits placer les embouts au fond du puits au dessous de l huile min rale et pipeter lentement de haut en bas 3 ou 4 fois V rifier que tout le liquide est expuls de l embout de la pipette chaque addition V rifier que le r actif correct a t ajout chaque puits V rifier que les volumes de r actif corrects ont t ajout s chaque puits V rifier que les informations d talonnage sur le mat riel sont jour Examiner visuellement les volumes des puits de la plaque pour s assurer qu ils son
29. ent uniquement la solution distribu e Ne pas toucher les embouts de pipette avec les mains Nettoyer les surfaces du laboratoire avec des produits appropri s vaporation d chantillon V rifier l ajout d huile min rale chaque puits Bulles d air dans les puits de r action Les m langes de r action pr par s n ont pas t utilis s pendant la p riode recommand e Si possible centrifuger les plaques avant l acquisition par fluorescence Utiliser les m langes de r action dans les 30 minutes de leur pr paration 25 L chantillon affiche un r sultat IND gDNA faible Nombre de cellules de l chantillon insuffisant Erreur d extraction d ADN soup onn e Quantit d ADN insuffisante utilis e dans le test e M langer l chantillon et r p ter l extraction d ADN e V rifier que le volume d chantillon correct a t ajout chaque puits e V rifier que la proc dure appropri e a t suivie pour l extraction d ADN Inhibition de l chantillon d ADN R p ter l extraction d ADN de l chantillon Voir le mode d emploi section Carat ristiques de performance substances interf rentes Le les chantillons d ADN peuvent ne pas avoir t compl tement d natur s V rifier que l chantillon a t d natur la temp rature correcte et pendant la dur e appropri e L chantillon affiche un r sultat I
30. er les chantillons au del de quatre semaines les placer dans un cong lateur entre 30 C et 15 C PROC DURE DE TEST L AIDE DU SYST ME CERVISTA MTA Reportez vous au manuel de l utilisateur du Cervista MTA Num ro de pi ce MAN 02378 002 pour l utilisation du syst me automatis afin d effectuer le test Cervista HPV HR PROC DURE DE TEST MANUEL CERVISTA HPV HR Proc dure de r action 1 Ajouter 10 Hi de chaque ADN de contr le et d chantillon trois puits d une plaque 96 puits comme indiqu sur la grille de placement des chantillons voir Figure 2 Mix 1 Mix 2 Mix 3 Mix 1 Mix 2 Mix 3 Mix 1 Mix 2 Mix 3 Mix 1 Mix 2 Mix 3 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A C1 C1 C1 S5 S5 S5 S13 S13 S13 S21 S21 S21 B C2 C2 C2 S6 S6 S6 S14 S14 S14 S22 S22 S22 C C3 C3 C3 S7 S7 S7 s15 S15 S15 S23 S23 S23 D NTC NTC NTC S8 S8 S8 S16 S16 S16 S24 S24 S24 E s1 S1 S1 s9 s9 s9 S17 S17 S17 S25 S25 S25 F S2 S2 S2 S10 S10 S10 S18 S18 S18 S26 S26 S26 G s3 s3 s3 S11 S11 S11 S19 s19 S19 S27 S27 S27 H S4 S4 S4 S12 S12 S12 S20 S20 S20 S28 S28 S28 Figure 2 Grille de la plaque de test Cervista HPV HR 2 Recouvrir chaque puits avec 20 ul d huile min rale et avec une feuille scellante de plaque pour minimiser l vaporation 3 Incuber les chantillons 95 C pendant 5 minutes dans un cycleur thermique 4 M langer les r actifs et l
31. es d HPV ont t document s dans la litt rature dont 40 environ infectent la r gion anog nitale et sont transmis sexuellement Parmi les types d HPV transmis sexuellement 14 g notypes oncog niques HPV16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 66 et 68 dits types haut risque HR s av rent tre l origine de la majorit des cancers du col de l ut rus La pr sence d ADN d HPV haut risque conjointement avec un r sultat cytologique quivoque ou ambigu ASC US chez une femme fait pr sager la pr sence d un risque lev de n oplasie intra pith liale sous jacente 2 ou 3 CIN 2 ou CIN 3 7 CIN 3 bien que seulement pr sent dans environ 5 des cas d ASC US est un pr curseur imm diat du cancer du col de l ut rus et sa d tection est donc tr s importante pour la prise en charge des patients Par cons quent l identification des femmes pr sentant une cytologie ASC US conjointement avec un risque lev d infection par HPV est une aide utile permettant aux cliniciens de choisir les femmes qui sont surveiller ou traiter plus agressivement D s 2002 des directives de prise en charge de patients ont t publi es par plusieurs groupes de professionnels de la sant des tats Unis recommandant pour les femmes des programmes de d pistage du cancer du col de l ut rus en fonction de l ge de la pr sence d anomalies cytologiques dans un chantillon de test de Pap et d autres facteurs 11 C
32. es directives de prise en charge de patients recommandent des tests pour d tecter la pr sence de types d HPV haut risque comme outil de d pistage r gulier conjointement avec un examen cytologique dans des cas sp cifiques Les recommandations principales des directives de pratique professionnelle les plus r centes 2006 Consensus Guidelines for the Management of Women with Abnormal Cervical Cancer Screening Tests comprennent 1 le d pistage des femmes de plus de 30 ans partir notamment d examens cytologiques et 2 la prise en charge des femmes de plus de 20 ans pr sentant des cellules ASC US Dans tous les cas les d cisions de prise en charge de patient refl tent les ant c dents cytologiques g n raux des patientes et autres facteurs de risque outre la pr sence ou l absence de types d HPV haut risque 511 PRINCIPES DE LA PROC DURE Le test Cervista HPV HR est un test qualitatif de diagnostic in vitro pour la d tection d ADN de 14 types d HPV haut risque les types 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 66 et 68 Le test Cervista HPV HR utilise le proc d chimique Invader m thode d amplification de signal pour la d tection de s quences d acide nucl ique sp cifiques Cette m thode utilise deux types de r actions isothermes une r action primaire qui a lieu sur la s quence d ADN cibl e et une r action secondaire qui produit un signal fluorescent voir Figure 1 Dans la r action primaire
33. es m langes de r action compl tement et de mani re homog ne avant l emploi 5 Pr parer les m langes de r action comme indiqu sur la feuille de pr paration du m lange imprim e en utilisant le logiciel Invader Call Reporter o conform ment aux calculs du tableau 2 Pr parer un m lange de r action pour chacun des trois m langes HPV Oligo Mix Tableau 2 Directives de pr paration du m lange de r action 6 T 8 Nombre de r actions Surtitrage chantillons et contr les k 25 COMME total Composant HPV Oligo Mix 1 2 ou 3 8k 1 25 Cleavase Enzyme Solution 2k 1 25 Volume du m lange total 10k 1 25 4d Diminuer la temp rature du cycleur thermique jusqu 63 C Ajouter 10 ul du m lange de r action appropri chaque puits contenant un contr le ou un chantillon voir Figure 2 en prenant soin de pipetter au dessous de l huile min rale Incuber la plaque 63 C pendant 4 heures Collecte des donn es 1 Toujours laisser la plaque atteindre la temp rature ambiante avant la lecture Si la plaque ne peut pas tre lue imm diatement la conserver entre 2 C et 8 C il est recommand de lire la plaque dans les 24 heures apr s la fin du test Placer la plaque 96 puits le puits A1 doit tre au coin sup rieur gauche dans le porte plaque du lecteur de plaque fluorescence Retirer le ruban d tanch it de la plaque D finir le type de p
34. hantillon de 2 ont donn des r sultats ind termin s et faussement n gatifs Pendant l extraction d ADN la gel e spermicide a interf r avec la s paration des billes magn tiques dans le tampon 10 mM Tris ce qui a r sult en une faible r cup ration d ADN et en un chantillon d ADN insuffisant pour les tests Cette interf rence se voyait l il nu Les concentrations des substances indiqu es ci dessus requises pour provoquer l chec des tests sont inhabituellement lev es et ne doivent pas exister dans les chantillons cliniques courants si le clinicien nettoie le col de l ut rus selon la proc dure normale avant de pr lever l chantillon de cellules pour le test de Pap Le test Cervista HPV HR a aussi t utilis pour des composants qui pourraient tre transf r s par inadvertance pendant l extraction d chantillon en utilisant le kit d extraction d ADN Genfind L ADN contenant trois concentrations 0 5 et 10 d thanol 70 ou des billes magn tiques Genfind a t test pour valuer l interf rence caus e par les substances introduites Une interf rence a t observ e quand 10 du volume de l chantillon d ADN contenait de l thanol 70 ou les billes magn tiques R activit crois e Un ensemble de bact ries fongus et virus pr sents habituellement dans le conduit anog nital f minin ainsi que plusieurs types de papillomavirus humains clon s faible risque ou
35. l Cancer Institute adresse Internet www cancer gov 2008 Meijer CJ Snijders PJ and Castle PE 2006 Clinical utility of HPV genotyping Gynecol Oncol 103 12 17 Wright TC Jr Massad LS Dunton CJ Spitzer M Wilkinson EJ and Solomon D 2007 2006 consensus guidelines for the management of women with abnormal cervical cancer screening tests Am J Obstet Gynecol 197 4 346 55 Sherman ME Schiffman M and Cox TJ 2002 Effects of age and human papilloma viral load on colposcopy triage data from the randomized Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance Low grade Squamous Intraepithelial Lesion Triage Study ALTS Jour Nat Can Inst 94 2 102 107 Davey DD Neal MH Wilbur DC Colgan TJ Styer PE and Mody DR 2004 Bethesda 2001 implementation and reporting rates 2003 practices of participants in the college of American Pathologists Interlaboratory Comparison Program in Cervicovaginal Cytology Arch Path Lab Med 128 1224 1229 20 6 Wright TC Jr Cox JT Massad LS Twiggs LB Wilkinson EJ 2001 Consensus Guidelines for the management of women with cervical cytological abnormalities JAMA 2002 287 2120 2129 7 Solomon D Schiffman M and Tarone R 2001 Comparison of three management strategies for patients with atypical squamous cells of undetermined significance baseline results from a randomized trial Jour Nat Can Inst 93 4 293 299 8 Mayrand MH E Duarte Franco Rodrigues SD Walter J Hanley 2007 A
36. laque pour tablir les coordonn es et la hauteur de la sonde pour le type de plaque particulier Enregistrer les param tres Lire la plaque enti re Deux acquisitions s par es sont requises FAM Excitation 485 nm mission 530 nm et Red Excitation 560 nm mission 612 nm Pour d tecter le signal HPV l instrument doit tre r gl pour d tecter d abord le colorant FAM Pour d tecter ADN g nomique de l chantillon l instrument doit tre r gl sur la d tection du colorant Red Ajuster le gain du lecteur de plaque fluorescence pour qu il soit dans la plage dynamique lin aire du lecteur conform ment aux directives du fabricant Le gain doit tre r gl de mani re ce que No Target Control NTC fournisse des valeurs dans la plage de contr le du lecteur avec un RFU minimum de 600 Les valeurs NTC des lectures FAM et Red ne doivent pas obligatoirement tre identiques NOTES PROC DURALES ET PR CAUTIONS 1 Les laboratoires doivent utiliser les bonnes pratiques de laboratoire et respecter toutes les exigences r glementaires f d rales nationales et locales applicables 2 M langer les chantillons les r actifs et les m langes de r action compl tement et uniform ment Utiliser des embouts de pipette anti a rosol jetables st riles et sans nucl ase pour chaque ajout et transfert afin d viter la contamination crois e 4 Utiliser des tubes de polypropyl ne jetables sans nucl ase pour pr
37. n r en fonction de l analyse de trois puits de r action s par s Le rapport entre les valeurs HPV FOZ g n r es par les trois m langes de r action d termine si un chantillon est positif Le rapport HPV FOZ est calcul en divisant la valeur HPV FOZ la plus haute de l un des trois m langes de r action par la valeur HPV FOZ la plus basse des trois Quand une valeur quelconque FOZ est inf rieure 1 elle est arrondie 1 pour le calcul du rapport Si le rapport HPV FOZ est sup rieur ou gal 1 525 l chantillon est positif pour HPV Cependant dans un sous groupe d infections m lang es les trois puits de r action peuvent g n r r un signal bien plus lev que le contr le Dans certains cas ces infections m lang es peuvent g n rer des signaux positifs ou d intensit semblable dans les trois puits de r action et par cons quent un rapport HPV FOZ inf rieur 1 525 Pour viter toute possibilit d obtenir un r sultat faussement n gatif cause des trois situations positives d crites ci dessus un deuxi me calcul est appliqu comme suit quand le rapport FOZ est inf rieur 1 525 mais si les trois valeurs FOZ de r action individuelle sont sup rieures ou gales une deuxi me valeur seuil de 1 93 l chantillon est positif pour HPV Un appel ind termin est g n r dans trois situations diff rentes 1 quand le CV entre les valeurs gDNA FOZ est 2 25 0 CV lev 2 quand les trois valeurs
38. nt attribu s individuellement Chaque test consistait en quatre plaques Diff rentes grilles de plaques taient utilis es pour les tests de la journ e Chaque test consistait en chantillons d ADN g nomique isol s provenant de deux lign es de cellules positives pour HPV SiHa Type 16 et HeLa Type 18 une lign e de cellules n gatives pour HPV Jurkat et des chantillons pr par s contenant de l ADN plasmidique et de l ADN Jurkat de HPV16 HPV18 HPV31 HPV33 HPV35 HPV39 HPV45 HPV51 HPV52 HPV56 HPV58 HPV59 HPV66 ou HPV68 Chaque chantillon a t test en double trois concentrations 2 500 copies r action les chantillons d ADN plasmidique ont fourni 57 4 675 1 176 r sultats positifs 5 000 copies r action les chantillons d ADN plasmidique ont fourni 97 2 1 143 1 176 r sultats positifs 10 000 copies r action les chantillons d ADN plasmidique ont fourni 100 0 1 176 1 176 r sultats positifs voir Tableau 15 18 Tableau 15 R sum des valeurs positives et n gatives pour chaque condition d chantillon test e Positif pour N gatif pour Copies r action ou HPV HPV Cible cellules ml extraites N n n 2 500 84 82 98 2 2 HPV 16 5 000 84 84 100 0 0 10 000 84 84 100 0 0 2 500 84 64 76 20 24 HPV 18 5 000 84 84 100 0 0 10 000 84 84 100 0 0
39. of Blank LoB et d une mesure de variance de la population SD partir de concentrations multiples de la cible HPV sp cifique directives CLSI NCCLS EP17 A Vol 24 N 34 Neuf chantillons d ADN caract ris s comme tant n gatifs pour HPV isol s d chantillons cervicaux ont t utilis s pour d terminer la valeur LoB Rapport FAM FOZ 1 20 Chaque ADN plasmidique d HPV a t test des concentrations de 7 500 5 000 2 500 et 1 250 copies par r action chacun dans un contr le de trois concentrations d ADN g nomique isol d une lign e de cellules n gatives pour HPV 10 ng 100 ng et 1 ug par r action Tous les chantillons positifs et n gatifs ont t test s en r plicats de huit La limite de d tection de chaque type d HPV est indiqu e dans le tableau 8 Les limites sont d crites en termes de rapport FAM FOZ et de plage du nombre de copies 14 Tableau 8 R sum de la sensibilit analytique du test Cervista HPV HR Type d ADN LoD LoD d HPV Nombre de copies r action Rapport FAM FOZ SD 16 1 250 2 500 1 34 0 08 18 1 250 2 500 1 34 0 08 31 1 250 2 500 1 30 0 06 33 2 500 5 000 1 31 0 07 35 5 000 7 500 1 34 0 09 39 2 500 5 000 1 30 0 06 45 1 250 2 500 1 31 0 06 51 2 500 5 000 1 35 0 09 52 1 250 2 500 1 28 0 04 56 1 250 2 500 1 37 0 10 58 2 500 5 000 1 35 0 09 59 2 500 5 000 1 35 0 09 66 2 500 5 000 1 30 0 06 68
40. opulation ainsi que les diff rences de v rification de la maladie 13 Tableau 7 Comparaison de l essai clinique Hologic et ALTS Crit re ALTS Hologic Nombre de sites d tats participants 4 4 89 22 ge moyen des sujets 29 33 Sujets avec colposcopie termin e 1149 1347 Sujets sans l sion sans biopsie 25 28 Sujets sans l sion pathologique avec biopsie 49 53 Sujets avec CIN1 15 14 Sujets avec CIN2 11 5 Taux de d tection pour CIN2 96 93 Taux de d tection pour CIN3 96 100 Valeur pr dictive n gative pour CIN2 98 9 99 1 Valeur pr dictive n gative pour CIN3 99 5 100 0 Taux d orientation vers un sp cialiste 57 57 de colposcopie Concordance PCR 82 7 86 1 Groupe de colposcopie imm diate de ALTS P Nombre de sujets avec tat de maladie connu et r sultats Cervista HPV HR Le taux d orientation chez les femmes de 30 ans et plus a t de 43 Sensibilit analytique L ADN plasmidique d HPV clon repr sentant les 14 types d HPV d tect s par le test Cervista HPV HR a t test pour d terminer la sensibilit analytique individuelle de chaque type sp cifique Les valeurs des limites de d tection individuelles Limit of Detection LoD ont t calcul es pour les 14 types d HPV 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59 66 68 en fonction d une mesure de la limite de blanc Limit
41. pension dans l eau et bande bleue et tampon MOPS pH 7 5 HPV Oligo 02 Oligonucl otides avec affinit pour les types Mix y capuchon jaune 1x 1400 ul 8 x 1 400 ul d HPV 18 39 45 59 et 68 en suspension et bande jaune dans l eau et tampon MOPS pH 7 5 03 HPV Oligo capuchon Oligonucl otides avec affinit pour les types MKS orange et bande 1x 1400 ul 8 x 1 400 ul d HPV 16 31 33 35 52 et 58 en suspension orange dans l eau et tampon MOPS pH 7 5 E Cleavase Enz due dans 140 mM yme suspendue dans m ns capuchon oo as MgCl 10 mM Tris pH 8 0 25 mM KCI a mauve et bande H H 0 25 Tween 20 0 25 Nonidet P40 mauve 25 glyc rol et 0 05 mg ml BSA C1 1 000 copies ul clon es avec l ADN d HPV de HPV capuchon 1 x 350 ul 8 x 350 ul type 51 et 3 000 copies ul clon es d ADN Control 1 transparent et H H d HIST2H2BE dans une solution de tRNA de bande noire levure et 10 mM Tris 0 1 mM tampon EDTA C2 1 000 copies ul clon es avec l ADN d HPV de HPV capuchon 1 x 350 ul 8 x 350 ul type 18 et 3 000 copies ul clon es d ADN Control 2 transparent et H H d HIST2H2BE dans une solution de tRNA de bande noire levure et 10 mM Tris 0 1 mM tampon EDTA C3 1 000 copies ul clon es avec l ADN d HPV de HPV capuchon 1 x 350 ul 8 x 350 ul type 16 et 3 000 copies ul clon es d ADN Control 3 transparent et H H d HIST2H2BE dans une solution de tRNA de bande noire levure et 10 mM Tris 0 1 mM tampon EDTA Pas de NTC contr le capuchon tRNA de le
42. prochement phylog nique c est dire des types viraux avec des s quences d ADN semblables Les oligonucl otides qui se lient au g ne de l histone humaine 2 H2be HIST2H2BE sont aussi pr sents dans ces trois m langes d oligonucl otides L HIST2H2BE sert de contr le interne produisant un signal semi quantitatif de l ADN cellulaire pr sent dans l chantillon Le format du test Cervista HPV HR permet la d tection simultan e de s quences d ADN d HPV et d HIST2H2BE dans un seul puits en utilisant deux s quences diff rentes de fragment 5 sur les sondes ainsi que deux oligonucl otides FRET diff rents ayant chacun un fluorophore distinct spectralement FAM et Red Comme pr vu les fragments 5 d tach s se lient uniquement avec leurs oligonucl otides FRET respectifs pour g n rer un signal sp cifique la cible voir Figure 1 Un r sultat positif indique la pr sence d au moins un des 14 types haut risque dans l chantillon d ADN Ce r sultat est repr sent par un signal fluorescent FAM qui se trouve au dessus d une valeur seuil d riv e empiriquement Pour chaque r action un r sultat n gatif est repr sent par un signal fluorescent FAM qui se trouve au dessous d une valeur seuil d riv e empiriquement Comme moyen de d termination de la quantit relative d ADN de l chantillon dans chaque r action l HIST2H2BE humain est mesur par un signal fluorescent Red qui se trouve au dessus d une valeur seuil
43. puits de r action Les m langes de r action pr par s n ont pas t utilis s pendant la p riode recommand e Si possible centrifuger les plaques avant l acquisition par fluorescence Utiliser les m langes de r action dans les 30 minutes de leur pr paration 24 L chantillon affiche un r sultat IND CV lev M lange d chantillons insuffisant ou incoh rent Ajout du m lange de r action incoh rent Ajout d chantillon incoh rent e S assurer que tous les chantillons et les r actifs sont m lang s compl tement e En ajoutant le m lange de r action chaque puits placer les embouts au fond du puits au dessous de l huile min rale et pipeter lentement de haut en bas 3 ou 4 fois e V rifier que tout le liquide est expuls de l embout de la pipette chaque addition e V rifier que l chantillon correct a t ajout chaque puits e V rifier que le volume d chantillon correct a t ajout chaque puits e V rifier que les informations d talonnage sur le mat riel sont jour e Examiner visuellement les volumes des puits de la plaque pour s assurer qu ils sont constants Contamination soup onn e pendant l ajout d chantillon Utiliser des embouts anti a rosol sans DNase RNase et des tubes st riles pendant la pr paration Porter des gants pour pr parer le test S assurer que les embouts des pipettes touch
44. rdance entre jours par site a t valu e en calculant la concordance de pourcentage entre tests pour deux tests quelconques trait s deux jours s par s dans un site pour toutes les paires possibles La concordance de pourcentage moyen et l intervalle de confiance de 95 exact unilat ral sont pr sent s d abord pour chaque site reproductibilit intra site inter test puis entre les trois sites reproductibilit inter site inter test La concordance entre sites a t valu e en calculant la concordance de pourcentage entre tests pour deux tests quelconques trait s deux sites diff rents pour toutes les paires possibles n 3 sites 1 et 2 sites 1 et 3 sites 2 et 3 La concordance de pourcentage moyen et l intervalle de confiance de 95 unilat ral sont pr sent s dans les tableaux 10 et 11 Tableau 10 Concordance de pourcentage entre jours intra site du test HPV HR Intervalle de Site Pourcentage confiance de 95 Nombre de Nombre de de unilat ral comparaisons concordances concordance Limite basse Site 1 200 200 100 0 96 3 Site 2 200 193 96 5 90 8 Site 3 200 200 100 0 96 3 Entre les 3 sites 600 593 98 8 96 9 Tableau 11 Concordance de pourcentage entre sites du test HPV HR Pourcentage Intervalle de confiance Sites Nombre de Nombre de de de 95 unilat ral comparaisons concordances concordance Limite basse Site 1 vs
45. rdance positive et n gative de 89 8 et 93 7 L respectivement IC de 95 82 5 94 8 et 85 8 97 9 Tableau 9 Comparaison entre le test Cervista HPV HR et la PCR avec s quen age sp cifique de type pour la d tection d ADN d HPV PCR S quen age Test Cervista HPV HR Positif Total 15 Reproductibilit Dans cette tude exp rimentale la reproductibilit g n rale du test Cervista HPV HR a t valu e trois sites en utilisant un groupe de cellules cultiv es positives et n gatives pour HPV et des chantillons cervicaux positifs et n gatifs pour HPV L ADN a t extrait de 2 ml d chantillon cervical ou de cellules cultiv es en suspension dans une solution PreservCyt L ADN a t extrait en utilisant le kit d extraction d ADN Genfind Seize chantillons ont t test s trois emplacements pendant cinq jours non cons cutifs pendant une dur e de deux semaines Deux lots de kits Cervista HPV HR et trois lots de kits d extraction d ADN Genfind ont t utilis s pour l tude La concordance jours site a t valu e en calculant la concordance de pourcentage entre tests pour les trois paires possibles chaque jour site La concordance de pourcentage moyen et l intervalle de confiance de 95 exact unilat ral sont pr sent s d abord pour chaque site reproductibilit intra site puis entre les trois sites reproductibilit inter site La conco
46. re sup rieur ou gal 1 50 2 1 50 sinon le contr le est invalide pour le gDNA faible 4 Le CV du signal gDNA FOZ moyen des trois m langes doit tre inf rieur 25 0 lt 25 0 Tableau 4 Contr le HPV et crit res d chantillon Rapport FOZ mix gDNA FOZ CV Contr le Mix 1 R HPV Control 1 2 1 525 sabfem nt lt 25 0 Contr le Mix 2 5 HPV Control 2 2 1 525 a lt 25 0 HPV Control 3 Contr le gt 1 525 Miga gt 1 50 lt 25 0 valide seulement V rification du test 1 Les r sultats d chantillon sont valides quand les contr les positifs et n gatifs fournissent des r sultats corrects Si No Target Control contr le n gatif est invalide ou si un r sultat pour le ou les contr les positifs est invalide tous les r sultats d chantillon de cette plaque sont invalides et le processus doit tre r p t Consultez les sections de d pannage se trouvant dans le mode d emploi et dans le manuel d utilisation du logiciel pour Invader Call Reporter Reportez vous la section d pannage du manuel d utilisation du Cervista MTA Num ro de pi ce MAN 02378 002 pour le syst me Cervista MTA 2 Toutes les sp cifications de contr le de la qualit doivent tre ex cut es conform ment aux r glements locaux et nationaux ou aux exigences d accr ditations LIMITES 1 Le test Cervista HPV HR d tecte l ADN de types HPV haut risque 16 18 31 33 35 39 45 51 52 56 58 59
47. risque ind termin ont t test s avec Cervista HPV HR pour valuer la r activit crois e ventuelle voir Tableaux 12 14 Tableau 12 Les organismes indiqu s ci dessous ont t ajout s la solution PreservCyt des concentrations d environ 1 x 10 cfu ml et 1 x 10 cfu ml L ADN de ces organismes et d une lign e de cellules n gative Jurkat 1x10 cellules ml a t extrait en utilisant le kit d extraction d ADN Genfind Tous les chantillons ont fourni des r sultats n gatifs avec le test Cervista HPV HR Candida albicans Proteus vulgaris Corynebacterium pseudodiptheriticum Staphylococcus aureus Enterococcus faecalis Staphylococcus epideridis Escherichia coli Streptococcus mitis Lactobacillus acidophilus Streptococcus pyogenes 17 Tableau 13 L ADN purifi obtenu partir des organismes indiqu s ci dessous a t test des concentrations de 1 x 10 copies r action et de 1 x 10 copies r action en utilisant Cervista HPV HR Tous les chantillons ont donn des r sultats n gatifs Herpes simplex virus type 1 HSV 1 Chlamydia trachomatis Herpes simplex virus type 2 HSV 2 Neisseria gonorrhoeae Virus de limmunod ficience humaine Neisseria meningitides type 1 HIV 1 r gions pol et env Mycoplasma hominis Tableau 14 Des chantillons d amplicon d ADN ou de PCR purifi s clon s pour les types d HPV suivants ont t
48. suffisant ou incoh rent e V rifier que le contr le correct a t ajout chaque puits e V rifier que le volume de contr le correct a t ajout chaque puits e V rifier les informations d talonnage sur le mat riel e Examiner visuellement les volumes des puits de la plaque pour s assurer qu ils sont constants Un des contr les corrects n ont pas t ajout s la plaque ou n ont pas t ajout s la position de plaque correcte V rifier que les contr les corrects ont t ajout s aux positions de plaque correctes La dur e d incubation a t plus courte que la dur e recommand e Confirmer que l incubation a t effectu e pendant la dur e sp cifi e la temp rature sp cifi e Contamination soup onn e pendant l ajout d chantillon Utiliser des embouts anti a rosol sans DNase RNase et des tubes st riles pendant la pr paration Porter des gants pour pr parer le test S assurer que les embouts des pipettes touchent uniquement la solution distribu e Ne pas toucher les embouts de pipette avec les mains Nettoyer les surfaces du laboratoire avec des produits appropri s vaporation ar PRE d chantillon V rifier l ajout d huile min rale chaque puits Orientation de plaque Pour scanner la plaque l orienter de mani re inappropri e ce que A 1 soit dans le coin sup rieur gauche Bulles d air dans les
49. t tre r p t voir Tableau 3 2 Le signal minimum pour les trois m langes doit tre sup rieur ou gal 600 RFU 2 600 3 Le CV du signal moyen FAM des trois m langes doit tre inf rieur 25 0 lt 25 0 sinon les chantillons et les contr les de cette plaque seront invalides et le test devra tre r p t voir Tableau 3 4 Le CV du signal gDNA moyen des trois m langes doit tre inf rieur 25 0 lt 25 0 Tableau 3 Crit res de No Target Control Pas de contr le cible Signal Signal CV o max suat P gDNA HPV et gDNA Valide 24 9 10 Contr les HPV 1 Les contr les HPV Contr les HPV 1 3 doivent fournir les r sultats appropri s pour que le test soit valide Si les contr les ne sont pas conformes ces crit res les chantillons de cette plaque sont aussi invalides et le test doit tre r p t voir Tableau 4 Un rapport HPV FOZ est d termin en divisant le HPV FOZ le plus lev des trois m langes de r action par le HPV FOZ le moins lev des trois m langes normalis 1 0 si inf rieur 1 0 Le contr le HPV 1 doit fournir une valeur HPV FOZ positive 2 1 525 pour uniquement HPV Oligo Mix 1 le contr le HPV 2 doit fournir une valeur HPV FOZ positive 2 1 525 pour uniquement HPV Oligo Mix 2 et le contr le HPV 3 doit fournir une valeur HPV FOZ positive 2 1 525 pour uniquement HPV Oligo Mix 3 Le gDNA FOZ moyen des trois m langes doit t
50. t constants CV lev e Utiliser des embouts anti a rosol sans HPY NTC nucl ase et des tubes st riles pour pr parer CV lev P les m langes de r action gDNA NTC Coniaminaton e Porter des gants pour pr parer le test EE a pendant e S assurer que les embouts des pipettes addition d chantillon he en tl lion d trbu s ou la pr paration du ouchent uniquement la solution distribu e m lange de r action b LE les embouts de pipette avec e Nettoyer les surfaces du laboratoire avec des produits appropri s vaporation V rifier l addition d huile min rale chaque d chantillon puits Bulles d air dans les Si possible centrifuger les plaques avant puits de r action l acquisition par fluorescence Les m langes de a e Utiliser les m langes de r action dans les Li 30 minutes de leur pr paration pendant la p riode recommand e e S assurer que tous les contr les et les M lange de contr les r actifs sont m lang s compl tement et Le les insuffisant ou uniform ment contr les incoh rent e En ajoutant le m lange de r action chaque affichent puits placer les embouts au fond du puits un r sultat au dessous de l huile min rale et pipetter T moin non lentement de haut en bas 3 ou 4 fois valide Ajout du m lange de e V rifier que tout le liquide est expuls de r action incoh rent l embout de la pipette chaque addition 23 Ajout de contr le in
51. u plusieurs brevets appartenant d autres parties De la m me mani re les acides nucl iques qui contiennent des s quences nucl otides sp cifiques pourront tre brevet s La fabrication l utilisation ou la vente de tels composants ou acides nucl iques pourra n cessiter une ou plusieurs licences Rien dans ce document ne peut tre interpr t comme une autorisation ou une licence implicite fabriquer utiliser ou vendre n importe lequel des composants ou acides nucl iques cit s sous l un quelconque de ces brevets 2011 Hologic Inc Num ro de pi ce 15 3053 901 R vision 103 HOLOGIC 29
52. vure et 10 mM Tris No Target bande noire Control AVERTISSEMENTS ET PR CAUTIONS 1 2 Pour usage diagnostic in vitro Les pr cautions de s curit universelles doivent tre utilis es pour manipuler tout tissu ou liquide humain Les chantillons doivent tre mis au rebut en fonction des sp cifications locales Ne pas rassembler les r actifs de lots diff rents ou de flacons diff rents dans le m me lot Ne pas utiliser les r actifs au del de leur date d expiration Les composants des produits r sidus de produit emballage peuvent tre consid r s comme des d chets de laboratoire Jeter les r actifs non utilis s et les d chets conform ment aux r glements nationaux et locaux applicables SP CIFICATIONS DE CONSERVATION ET DE MANIPULATION Conserver tous les r actifs entre 30 C et 15 C Ne pas utiliser les r actifs apr s la date d expiration indiqu e l ext rieur de l emballage Ne pas conserver dans un cong lateur sans givre Prot ger de la lumi re Avant l emploi retirer les r actifs du cong lateur et les laisser d geler pendant au moins 30 minutes temp rature ambiante ou en s assurant qu ils sont compl tement d gel s par inspection visuelle M langer les r actifs au vortex avant chaque utilisation Hologic recommande de ne pas soumettre les r actifs Cervista HPV HR plus de six 6 cycles de gel d gel Pr parer des m langes de r action avant
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