Gélose CN pour Pseudomonas
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1. BIOKAR DIAGNOSTICS G lose CN pour Pseudomonas DOMAINE D UTILISATION La g lose CN pour Pseudomonas est un milieu s lectif utilis pour l isolement et le d nombrement de Pseudomonas aeruginosa dans les eaux embouteill es les eaux de piscines les eaux destin es la consommation humaine HISTORIQUE La formule du milieu de base constitue une modification du milieu de King A dans lequel le chlorure de magn sium et le sulfate de potassium favorisent la production de pyocyanine En 1951 Lowbury pr conisa l utilisation de c trimide dans un milieu s lectif pour l isolement des Pseudomonas En raison de l am lioration de la puret de l agent inhibiteur sa concentration fut r duite par Lowbury et Collins en 1955 Goto et Enomoto ont montr que l addition d acide nalidixique avec diminution de la concentration en c trimide permettait une meilleure r cup ration de Pseudomonas aeruginosa avec un renforcement corr latif de la production de pigment tandis que les contaminants Proteus Klebsiella Providencia de la flore associ e taient fortement inhib s PRINCIPES La peptone pancr atique de g latine et l hydrolysat acide de cas ine constituent les substrats nutritifs n cessaires la multiplication rapide des Pseudomonas La production de pyocyanine pigment bleu non fluorescent soluble dans l eau et le chloroforme est stimul e en pr sence de chlorure de magn sium et de sulfate de potassium Les levures co2. M0O7008 Milieu de base d shydrat sans glyc rol Flacon de 500 g BK165HA 3 5 BIOKAR Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 SUPPORT PHOTO R f rence BK165HA BM07008 BIOKAR DIAGNOSTICS Domaine d utilisation Isolement et d nombrement de Pseudomonas aeruginosa dans les eaux Pseudomonas aeruginosa Colonie caract ristique Couleur bleu vert G lose CN pour Pseudomonas R f BMO7008 Incubation 21 44 heures 36 C filtration sur membrane Colonies caract ristiques bleu vert production de pyocyanine 4 5 BIOKAR Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES Lowbury E J L and Collins A G 1955 The use of a new cetrimide product in a selective medium for Pseudomonas aeruginosa J Clin Pathol 8 47 Brown V I and Lowbury E J L 1965 Use of an improved Cetrimide Agar Medium and other culture methods for Pseudomonas aeruginosa J Clin Pathol 18 752 Goto S and Enomoto S 1970 Nalidixic acid cetrimide agar new selective plating medium for the selective isolation of Pseudomonas aeruginosa Arr t du 19 juin 2000 JO du 20 juillet 2000 modifiant l arr t du 14 octobre 1937 m
3. de aaia a a eai ea 15 0 mg Agar agar bact riologique ss sseseneeesenrrreerernrrstereserrrnnerenenreenne 11 09 pH du milieu pr t l emploi 25 C 7 1 0 2 CONTR LE QUALITE Milieu d shydrat de base poudre blanc cr me fluide et homog ne Milieu pr par complet g lose blanch tre R ponse culturale typique sur milieu complet apr s 44 heures d incubation 36 C Microorganismes Croissance Kai Rapport de productivit 1 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 66 lt R2 lt 150 Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 Pr gt 70 1 Enterococcus faecalis CCM 2541 inhib e Rapport de productivit R selon NF T 90 461 Rapport de productivit PA selon XP CEN ISO TS 11133 2 2 5 BIOKAR Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 STOCKAGE CONSERVATION Milieu de base d shydrat sans glyc rol 2 30 C La date de p remption est mentionn e sur l tiquette Milieu de base pr par en flacons non recommand Milieu complet pr par en bo tes 30 jours 2 8T titre indicatif Milieu pr coul en bo tes de Petri __Stocker entre 2 et 8 C l abri de la lumi re La date de p remption est mentionn e sur l tiquette PRESENTATION Code Milieu complet pr coul en bo tes de Petri 55 mm Coffret de 10 bo tes B
4. iante d poser la membrane en veillant ce que le contact soit parfait __Incuber 36 C pendant 21 et 44 heures LECTURE Proc der au comptage des bo tes ne contenant pas plus de 150 colonies Les colonies produisant une pigmentation bleu vert pyocyanine seront compt es comme Pseudomonas aeruginosa confirm s Les colonies ne produisant pas de pyocyanine mais pr sentant une fluorescence sous rayonnement ultraviolet 360 nm seront consid r es comme Pseudomonas aeruginosa pr sum s Les colonies montrant une pigmentation brun rouge tre sans pr senter de fluorescence seront galement consid r es comme Pseudomonas aeruginosa pr sum s Les colonies pr sum es tre des Pseudomonas aeruginosa devront tre soumises des tests de confirmation tels que production d ammoniac partir d ac tamide production d oxydase fluorescence sur milieu de King B FORMULE TYPE du milieu complet pouvant tre ajust e de fa on obtenir des performances optimales Pour 1 litre de milieu Peptone pancr atique de g latine s ssssseneeseenneeseerrnsrrrr nenene 16 0 g Hydrolysat acide de cas ine ssnneeseeeeeeeeeenerestrreserrrnnrernnneeenee 10 0 g DO UE IAO EEEE EEE O E 10 0 mL Sulfate de potassium 5 22 ar da dede en dense ne dette date un 10 0g Chlorure de MAgN SILM EL ares dr nn ls ae nf a a tente 149 se C ITIMIQS rie ten a rm Re E tt ten ne bd 5 0 2g Acide Na lIdHIQU eus des
5. ntaminantes sont inhib es par le c trimide __L acide nalidixique bloque la r plication de l ADN des germes sensibles cet agent antibact rien Le milieu favorise galement la production de pigments pyoverdine pyorubine par certaines souches de Pseudomonas aeruginosa PREPARATION Mettre en suspension 48 6 g de milieu de base d shydrat BK165 dans 1 litre d eau distill e ou d min ralis e Ajouter 10 mL de glyc rol Porter lentement le milieu bullition sous agitation constante et ly maintenir durant le temps n cessaire sa dissolution __ R partir en tubes ou en flacons __ St riliser autoclave 121 C pendant 15 minutes NOTA Une liqu faction partielle de lagar entra nera in vitablement une alt ration significative de la consistance du gel du milieu solidifi apr s st rilisation et refroidissement 1 5 BIOKAR Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 MODE D EMPLOI __Refroidir et maintenir 47 C Couler en bo tes de Petri st riles l paisseur de g lose doit tre gale 5 mm Laisser solidifier sur une surface froide Filtrer st rilement sur membrane un volume d termin de l chantillon tester A la surface des bo tes ainsi pr par es ou du milieu pr coul BM070 ramen pr alablement temp rature amb
6. odifi relatif au contr le des sources d eaux min rales NF T 90 461 Juillet 2001 et NF T 90 461 A1 Juin 2005 Qualit de l eau Microbiologie Contr le qualit des milieux de culture XP CEN ISO TS 11133 2 V 08 104 2 Janvier 2004 Microbiologie des aliments Guide pour la pr paration et la production des milieux de culture Partie 2 Guide g n ral pour les essais de performance des milieux de culture NF EN ISO 16266 T 90 419 Ao t 2008 Qualit de l eau D tection et d nombrement de Pseudomonas aeruginosa M thode par filtration sur membrane Les mentions port es sur l tiquette sont pr dominantes sur les formules ou les instructions d crites dans ce document Les informations et les sp cifications contenues dans cette fiche technique ont t tablies la date du 2008 07 23 Elles sont susceptibles d tre modifi es tout moment sans pr avis Code document BK165 F 2002 10 4 5 5 BIOKAR Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34
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