GAP IgG Helicobacter pylori GAP IgA Helicobacter pylori - Bio-Rad
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1. actifs Diluant pour chantillon de s rum Ajouter la totalit du contenu dans un r cipient de 500 mL Rincer le flacon l eau pour liminer les cristaux Ajouter 480 mL d eau d sionis e M langer soigneusement Tampon de lavage Ajouter la totalit du contenu dans un r cipient de 1 L Rincer le flacon l eau pour liminer les cristaux Ajouter 980 mL d eau d sionis e M langer soigneusement Solution de substrat M langer les solutions de substrat A et de substrat B volume volume Pr parer seulement la quantit n cessaire Pour 48 puits ajouter 3 mL de la solution de substrat A 3 mL de la solution de substrat B M langer soigneusement Employer cette solution dans l heure qui suit la reconstitution Conserver dans le noir ou recouvert d un papier aluminium Mode d emploi ELISA GAP IgG IgM IgA pour H pylori Page 2 La solution de lavage le diluant pour chantillon et les r actifs de la trousse sont stables 60 jours apr s le premier usage si entrepos 2 8 C Pr l vement des chantillons Les chantillons doivent tre des chantillons de s rum Le s rum doit tre s par des cellules aussit t que possible apr s pr l vement Ne pas utiliser d chantillons h molys s ou hyperlip miques Les chantillons de s rum peuvent tre gard s au r frig rateur 2 8 C jusqu 10 jours Si les chantillons de s rum ne peuvent tre analys s dans cette p riode ils doivent2. diff rents GAP IgG Moyenne Ecart type Coefficient de U mL U mL Variation 20 6 22 10 6 GAP IgA U mL U mL Variation 9 8 5 24 3 2 4 Coefficient de Variation 10 0 Limites de la m thode Moyenne U mL Les tests GAP IgG IgA et IgM permet un dosage quantitatif de la pr sence d anticorps sp cifiques au H pylori mais n est pas indicatif du titre de l anticorps Un r sultat positif ne distingue pas colonisation et infection par H pylori et n indique pas la pr sence de maladie gastro intestinale Un r sultat n gatif n exclut pas la pr sence d anticorps anti H pylori La colonisation par H pylori peut tre pr sente un stade tr s pr coce ou le titre de l anticorps peut tre insuffisant pour tre d tect par le test Plusieurs quipes ont rapport que des personnes g es de plus de 50 ans ont t atteintes tr s probablement d infection par H pylori et peuvent montrer un taux tr s bas mais d tectable d anticorps anti H pylori sans montrer aucun sympt me clinique De plus l incidence de la s ropositivit peut varier en fonction de la population a Les tests GAP IgG IgA ou IgM ne doivent tre utilis s que pour les patients ayant des signes et des sympt mes cliniques li s une gastrite Le test ne doit pas tre utilis pour les patients asymptomatiques Mode d emploi ELISA GAP IgG IgM IgA pour H pylori Bio Rad Laboratories 3 bouleva
3. tre conserv s 20 C Dilution de l chantillon de s rum Chaque chantillon de s rum doit tre dilu avec du diluant pour chantillon Ajouter 25 uL de chaque s rum de patient 5 mL de diluant pour chantillon M langer soigneusement Les contr les et les calibrateurs sont fournis pr dilu s et pr ts l emploi Dosage l Tous les r actifs et les chantillons doivent tre port s temp rature ambiante 18 25 C avant utilisation S lectionner le nombre de puits n cessaire aux dosages 2 Pipeter 100 uL d talons d chantillons de contr les et de patients dilu s dans les puits correspondants Les contr les et les calibrateurs sont pr dilu s et pr ts l emploi Recouvrir la plaque avec un film plastique et incuber pendant 60 minutes 24 2 C 3 Apr s incubation jeter le contenu de tous les puits dans l vier Laver les puits trois fois avec 300 uL de tampon de lavage S cher soigneusement sur papier absorbant avant de r aliser l tape suivante 4 Ajouter 100 uL de conjugu enzymatique dans tous les micropuits Recouvrir la plaque avec un film plastique et incuber pendant 30 minutes 24 2 C 5 La solution de substrat doit tre pr par e avant de r aliser l tape suivante Voir le paragraphe Pr paration des r actifs pour plus d information 6 Apr s incubation jeter le contenu de tous les puits dans l vier Laver les puits trois fois avec 300 uL de tampon de lav
4. CIZO M GAP IgG Helicobacter pylori GAP IgA Helicobacter pylori GAP IgM Helicobacter pylori Num ro de catalogue GAP IgG 404 2002 Num ro de catalogue GAP IgA 404 3002 Num ro de catalogue GAP IgM 404 1002 96 tests par trousse Mode d emploi Avant de vous servir du produit pour la premi re fois veuillez prendre connaissance du mode d emploi Application Ce test immunoenzymatique est utilis pour le d pistage quantitatif des anticorps IgG IgA ou IgM sp cifiques de Helicobacter pylori Ces r actifs doivent tre utilis s uniquement pour un diagnostic in vitro But du dosage Helicobacter pylori a t retrouv e dans des chantillons de biopsies d pith lium gastrique d montrant une gastrite type B active Bien que l origine de l infection soit inconnue des rapports d montrent que l infection H pylori est associ e la gastrite chronique 7 Une corr lation a t d montr e entre la pr sence de H pylori et les l sions gastriques dans certains cas d ulc res du duod num La gu rison compl te de la gastrite apr s radication de l organisme a aussi t rapport e H pylori est un b tonnet en spirale recourb et gram n gatif de 0 2 0 8 um de large et 0 5 5 um de long Il colonise la partie profonde de la couche de gel muqueux et la surface apicale des cellules pith liales de la muqueuse gastrique Il peut aussi se retrouver dans l interstice entre deux cellules pith liales
5. age S cher soigneusement sur papier absorbant avant de r aliser l tape suivante 7 Ajouter 100 uL de la solution de substrat nouvellement pr par e dans tous les puits Incuber la plaque dans l obscurit 24 2 C pendant 10 minutes 8 Apr s exactement 10 minutes ajouter le plus rapidement possible 50 uL de la solution d arr t dans 67004BR _fre DEC2003 chacun des micropuits M langer les r actifs en tapotant la plaque 9 Lire les absorbances 450 nm La microplaque doit tre lue dans les 30 minutes suivant l addition de la solution d arr t Utiliser un algorithme pour courbe quadratique pour la courbe talon et le calcul des r sultats Contr le de la qualit Selon les bonnes pratiques de laboratoire un contr le positif et un contr le n gatif doivent tre dos s en parall le avec les s rums des patients L obtention de r sultats incorrects pour les contr les peut indiquer une erreur de manipulation la d t rioration des r actifs ou une mauvaise manipulation des chantillons GAP IgG GAP IgA GAP IgM lt 10 U mL lt 10U mL lt 10 U mL 25 50 U mL 25 50 U mL 40 70 U mL lt 0 2mOD lt 0 2mOD lt 0 2 mOD Interpr tation des r sultats GAP IgG GAPIgA GAPIgM 12 5 20 12 5 20 30 40 Un patient avec des r sultats quivoques doit tre retest 2 semaines plus tard et le second chantillon doit tre test simultan ment avec le premier GAP IgG valeurs attendue
6. de la muqueuse La pr sence de H pylori peut tre d tect e par des m thodes invasives ou non invasives Parmi les m thodes invasives l analyse peut tre r alis e partir de biopsie culture histologie ou test l ur ase rapide Les r sultats faussement n gatifs sont courants parce que le H pylori est distribu de fa on tr s in gale dans les tissus Parmi les m thodes non invasives il y a aussi le d pistage d anticorps anti H pylori et le test l ur e en cours d inspiration l aide d ur e radioactive Le m canisme d infection par H pylori n est pas bien compris Il peut survivre dans la muqueuse gastrique possiblement pendant plusieurs ann es H pylori est Mode d emploi ELISA GAP IgG IgM IgA pour H pylori Page 1 aussi commun chez les individus consid r s en bonne sant sans sympt mes cliniques de la maladie Principe du test Les kits GAP IgG IgA et IgM sont des dosages ELISA quantitatifs pour le d pistage d anticorps sp cifiques de H pylori dans le s rum humain Les s rums dilu s des patients sont d pos s dans les puits de microtitration recouverts d antig nes de H pylori partiellement purifi s Les anticorps du s rum sp cifiques de H pylori r agiront avec les antig nes sur les puits Les anticorps non sp cifiques sont limin s par lavage Un conjugu enzymatique anti IgG IgA et IgM humain est ajout et se fixe au complexe antig ne anticorps Le conjugu enzymat
7. e microplaques Eprouvettes gradu es de 25 50 et 100 uL Pipettes de 5 et 10 mL Eprouvettes gradu es 500 et 1000 mL Tubes dilution chantillons 13x100 mm Film plastique Eau d sionis e Pr cautions Les composants d origine humaine utilis s dans la pr paration de ce produit ont t test s selon des m thodes approuv es par la FDA et trouv s non r actifs en antig nes de surface de l h patite B HBsAg en anticorps anti HIV 1 2 et en anticorps anti HCV Ces composants n ont pas t test s pour les anticorps anti HCV HIV 2 HTLV I ou HTLV II Du fait qu aucune m thode ne peut garantir de fa on absolue l absence d agents infectieux les composants de ce produit doivent tre consid r s comme potentiellement infectieux et manipul s avec les m mes pr cautions d usage que les chantillons patients Certains r actifs du kit contiennent de l azoture de sodium comme conservateur L azoture de sodium peut r agir avec le plomb et le cuivre des canalisations pour former des azides m talliques explosifs Apr s vacuation de ces produits dans les canalisations faire couler de l eau abondamment afin d viter toute accumulation d azoture Le dim thyl sulfoxide et H2SO0 sont irritants pour la peau et les yeux Eviter le contact avec la peau et les yeux Porter des gants et des lunettes de protection S il y a contact avec la peau ou les yeux laver avec de l eau au moins 5 minutes Pr paration des r
8. ique exc dentaire est limin par lavage Apr s addition du substrat enzymatique l intensit de la coloration est proportionnelle la quantit d anticorps pr sent dans le s rum patient Composition du coffret PLA H pylori Puits recouverts d antig nes 1 sachet de 96 puits de microtitration recouverts d antig nes de H pylori CAL 0 4 Etalons 5 x 1 mL 0 12 5 25 50 et 100 unit s mL d anticorps anti H pylori dans du s rum humain dilu CTRL Contr les 1 x 1 mL Positif et 1 x 1 mL N gatif en anticorps anti H pylori dans du s rum humain dilu DIL SPE 25X Diluant pour le s rum concentr 1 x 20 mL de solution saline de phosphate avec du Tween CONJ ENZ Conjugu enzymatique 1 x 10 mL d anticorps anti IgG IgA ou IgM humains conjugu s la p roxydase de raifort dans du tampon TRIS BSA SUBS A TMB Solution de substrat A 1 x 8 mL de TMB dans un tampon ac tate de DMSO SUBS B H202 Solution de substrat B 1 x 8 mL de peroxyde d hydrog ne dans un tampon ac tate BUF WASH 50X Tampon de lavage concentr 50x 1 x 20 mL de solution saline de phosphate avec du Tween SOLN STOPPING Solution blocante 1 x 6 mL de 1 N H2SO3 Conserver 2 8 C Les talons les contr les et le diluant pour le s rum contiennent 0 09 d azoture de sodium comme agent de conservation 67004BR _fre DEC2003 Mat riel compl mentaire n cessaire Lecteur de microplaques Laveur d
9. rd Raymond Poincar 92430 Marnes la Coquette France Tel 33 0 1 47 95 60 00 Fax 33 0 1 47 41 91 33 Contacts Bio Rad United States 1 800 227 1600 Australia 61 2 9914 2800 Austria 43 1 877 8901 Belgium 32 9 385 5511 Canada 905 712 2771 France 33 1 4960 6834 Germany 49 89 31884 0 Netherlands 31 318 540666 Hong Kong 852 2 789 3300 Italy 39 2 216091 Japan 81 3 5811 6266 New Zealand 64 9 443 3099 Spain 34 1 661 7085 Sweden 46 8 627 5000 Switzerland 41 1 809 5555 United Kingdom 44 1 442 232552 SYMBOLES A rerp r de conservation PRESS BR Pr caution voir des instructions Pour un diagnostic in vitro N de catalogue Distributeur Biomerica Inc 1533 Monrovia Ave Newport Beach California 92663 USA ee rer conform ment la directive 98 79 de la CE sur les dispositifs m dicaux de diagnostic in vitro MDSS Burckhardtstrasse 1 30163 Hannover Allemagne 12 2003 CE 67004BR _fre DEC2003
10. s Des essais cliniques du test GAP IgG H pylori ont t r alis s dans quatre centres diff rents Un chantillon de 173 patients pr sentant des sympt mes de gastrite a t test Le tableau suivant pr sente le pourcentage de patients par diagnostic ayant un r sultant positif avec le test GAP IgG Diagnostic Pourcentage Gastrite Chronique Atrophique 85 100 Gastrite Superficielle 70 95 Ulc re Duod nal 85 95 Ulc re l estomac 70 90 Mode d emploi ELISA GAP IgG IgM IgA pour H pylori Page 3 Sensibilit et sp cificit Des essais cliniques du test GAP IgG IgA et IgM ont t r alis s dans quatre centres Des patients pr sentant des sympt mes de gastrite ont t test s Les chantillons de biopsies de ces patients ont t analys s par culture coloration histologique et ou test d ur ase Les r sultats du GAP ont t compar s ceux de l tude histologique Pr cision intra s rie La pr cision intra s rie a t calcul e sur 12 r plicats de trois chantillons de s rum GAP IgG Moyenne Ecart type Coefficient de U mL U mL Variation Moyenne Ecart type Coefficient de U mL U mL Variation 6 3 Moyenne Ecart type Coefficient de U mL U mL Variation 67004BR fre DEC2003 Pr cision inter s rie La pr cision inter s rie a t calcul e en dosant trois chantillons de s rum lors de 10 dosages distincts avec quatre op rateurs
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