Vibrio cholerae Agglutinating Sera [FR]
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1. S rums d agglutination de Vibrio cholerae FR 1 DOMAINE D APPLICATION Les s rums d agglutination de Vibrio cholerae sont destin s l identification s rologique de V cholerae desfins pid miologiques et diagnostiques Le s rum polyvalent 01 ZMO05 R30165001 est destin tre utilis dans des tests de d pistage par agglutination sur lame les s rums des sous types ZM06 R30165101 ZMO7 R30165201 peuvent tre utilis s dans des tests d agglutination sur lame et en tube comme d crit ci apr s Les tests s rologiques ont un objectif de d pistage et ils devront tre effectu s en compl ment et non pas en remplacement des proc dures de culture et de biochimie 2 RESUME ET EXPLICATION DU TEST Les suspensions additionn es de formol sont recommand es pour le test en tube mais certains op rateurs pr f rent utiliser des suspensions de s rum physiologique Les suspensions devraient tre mises en bullition pendant deux heures et demie avant d effectuer le test par agglutination sur lame pour liminer un certain nombre de r actions faussement positives et faussement n gatives Les sous types Inaba et Ogawa de V cholerae sont troitement apparent s et par cons quent des r actions crois es peuvent se produire Les s rums des sous types ont t absorb s de telle sorte qu aucune r action crois e ne devrait appara tre dans les tests d agglutination sur lame Des r actions crois es peuv2. y compris les gants doit tre limin comme s il s agissait de d chets biologiquement dangereux 6 1 4 Ne pas effectuer de pipetages la bouche Pour manipuler les chantillons et effectuer le dosage porter des gants usage unique et une protection des yeux Une fois le test termin se laver soigneusement les mains Ces r actifs contiennent du ph nol Bien que sa concentration soit faible le ph nol est connu comme tant toxique par ingestion et par contact avec la peau Ne pas avaler les r actifs Si l un d entre eux entre en contact avec la peau ou les yeux laver la zone en rin ant imm diatement et abondamment l eau Conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire il est fortement recommand de traiter les chantillons et r actifs comme s ils taient potentiellement infectieux et de les manipuler avec toutes les pr cautions n cessaires 6 2 PRECAUTIONS D ANALYSE 6 2 1 Ne pas utiliser les antis rums au del de la date de p remption indiqu e Eviter la contamination microbiologique des antis rums ceci pouvant provoquer des r sultats erron s et r duire la dur e de vie du produit 6 2 2 Ne pas modifier la proc dure du test ni le temps d incubation ou les temp ratures 6 2 3 Apr s emploi replacer les s rums la temp rature de conservation recommand e 7 PRELEVEMENT TRANSPORT ET CONSERVATION DES ECHANTILLONS Il est recommand d utiliser des cultures r centes
3. Ceci n indique pas n cessairement leur d t rioration et ne provoque normalement pas d interf rences avec les r sultats les s rums peuvent cependant tre clarifi spar centrifugation ou par filtration travers une membrane 0 45 um avant emploi Des s rums fortement troubles indiquent leur contamination et doivent tre jet s 6 PRECAUTIONS ET RESTRICTIONS D EMPLOI Destin exclusivement au diagnostic in vitro R serv exclusivement usage professionnel Pour des informations sur les composants potentiellement dangereux se r f rer aux fiches de s curit fournies par le fabricant et aux tiquettes du produit 6 1 INFORMATIONS DE SECURITE 6 1 1 REMARQUE Les V cholerae sont classifi s comme organismes de cat gorie 2 les manipuler conform ment aux directives appropri es en vigueur L quipement non jetable doit tre st rilis en utilisant une proc dure appropri e apr s l emploi bien que la m thode la plus appropri e soit la st rilisation par autoclave pendant au moins 15 minutes 121 C Le mat riel usage unique doit tre st rilis par autoclave ou incin r Les claboussures de mat riaux potentiellement infectieuxdoivent tre limin es imm diatement l aide d un papier absorbant et les surfaces contamin es doivent tre nettoy es avec un d sinfectant anti bact rien standard ou de l alcool 70 Le mat riel utilis pour le nettoyage des claboussures
4. gative ainsi que pour le s rum physiologique t moin l aspect de la suspension doit resterinchang Remarquer qu apr s l incubation nocturne 16 20 heures la suspension peut se d poser mais tous les s diments devraient tre remis en suspension en donnant une chiquenaude au tube Une agglutination dans le tube t moin indique une suspension de type R rugueux qui n est pas appropri e pour le test CONTROLE QUALITE Il est recommand de tester le produit tout au long de son utilisation avec des cultures positives et n gatives connues 10 INTERPRETATION DES RESULTATS Le titre de s rum est la derni re dilution montrant une agglutination positive Un titre galant ou approchant le titre inscrit sur le flacon doit indiquer une homologie Dans la majorit des cas les titres de 1 20e ou inf rieurs ne sont pas consid r s comme significatifs Cependant l absorption importante requise pour rendre le s rum Inaba Vibrio cholerae provoque souvent une faible activit homologue et dans ce cas un titre d 1 20e peut tre significatif 11 LIMITES DE LA METHODE Les tests s rologiques utilis s seuls ne fournissent rien de plus qu une identification pr somptive et un test de confirmation biochimique doit tre r alis Si des r sultats non concluants sont obtenus avec l agglutination sur lame les cultures peuvent tre pass es la vapeur pour r duire les r actions non sp cifiques 12 RESULTATS ATTEN
5. sur milieux non s lectifs par exemple sur g lose nutritive Ne pas utiliser de TCBS ou autres milieux s lectifs Pour de plus amples informations sur le pr l vement et la pr paration des chantillons consulter un manuel standard 8 PROCEDURE MATERIEL FOURNI Voir le paragraphe Composition du coffret MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI S rum physiologique 0 85 Lames de verre Anse bact riologique et bec bunsen Source de lumi re sur fond sombre Tubes essai et portoir Bain marie temp rature r glable avec thermom tre Chronom tre o N ooon e EM S rum physiologique additionn de formol 0 5 ou de ph nol 0 5 PROCEDURE DU TEST Test d agglutination sur lame Distribuer deux gouttes diff rentes 40 ul chacune de s rum physiologique sur une lame de verre Emulsionner les parties de la culture tester avec une anse dans chaque goutte de s rum physiologique pour obtenir une suspension uniforme assez dense Etape 1 Etape 2 Ajouter dans l une des suspensions utilis e comme t moin une goutte 40 ul de s rum physiologique et homog n iser Ajouter dans l autre suspension une goutte 40 ul d antis rum non dilu et homog n iser Etape 3 Faire osciller la lame pendant une minute et observer s il se produit une agglutination plus facilement visible sur un fond sombre clair par une lumi re indirecte Traiter la lame utilis e selon les r gl
6. DUS Agglutination visible en pr sence de cultures homologues 13 CARACTERISTIQUES SPECIFIQUES Le s rum polyvalent 01 ZMO5 R30165001 devrait montrer une agglutination visible dans le test sur lame avec les sous types V cholerae Les s rums Ogawa et Inaba devraient montrer une agglutination visible dans les tests d agglutination sur lame ou en tube respectivement avec les sous types Ogawa et Inaba V cholerae Les vibrions El Tor devraient tre diff renci s de V cholerae par biochimie 14 BIBLIOGRAPHIE 1 Isaacson M 1975 Practical aspects of a cholera surveillance programme S A Med J 49 1699 2 Wilson G S and Miles A A 1975 Vibrio cholerae antigenic structure Topley and Wilson s Principles of Bacteriology Virology and Immunity 6th ed London E Arnold Page 664 CONDITIONNEMENT REF ZMO5 R30165001 2 ml 2ZMO6G R30165101 225 ua 2 ml ZM07 R30165201 2 ml L gende des symboles REF R f rence de catalogue Dispositif m dical de diagnostic in vitro Consulter le mode d emploi Limite de temp rature temp rature de conservation Code de lot num ro de lot A utiliser avant date de p remption Derni re dilution montrant une agglutination positive fabricant S RIE CE IFU X7808A Juin 2013 r vis Remel Europe Ltd Clipper Boulevard West Crossways Dartford Kent DA2 6PT UK Pour tout support technique contacter le distributeur local
7. ent tre observ es avec les tests d agglutination en tube mais le titre est au moins quatre fois inf rieur au titre sp cifique inscrit sur le flacon Il faut rappeler que les vibrions El Tor ne peuvent tre diff renci s s rologiquement de V cholerae 3 PRINCIPE DE LA METHODE Les tests s rologiques sont bas s sur le fait que les anticorps contenus dans le s rum produits en r ponse l exposition des antig nes bact riens agglutinent visiblement les bact ries portant des antig nes homologues 4 REACTIFS COMPOSITION DU COFFRET S rums d agglutination de Vibrio cholerae 2ml ZMO5 R30165001 1 flacon compte gouttes bouchon bleu ZMO06 R30165101 1 flacon compte gouttes bouchon bleu ZMO07 R30165201 1 flacon compte gouttes bouchon bleu 5 DESCRIPTION PREPARATION POUR UTILISATION ET CONDITIONS DE CONSERVATION RECOMMANDEES Voir galement le paragraphe Pr cautions et restrictions d emploi 2C Les s rums doivent tre conserv s entre 2 et 8 C pour maintenir leur activit au moins jusqu la date inscrite sur le flacon S rums d agglutination de Vibrio cholerae Ils sont produits par des lapins et sont conserv s dans du ph nol 0 5 Chaque flacon dot d une t tine et d un compte gouttes doit contenir suffisamment de s rum pour r aliser 40 50 tests et chaque s rum est pr t l emploi Lors de leur conservation il arrive que certains s rums se troublent l g rement
8. es de d sinfection et d limination appropri es Test d agglutination en tube ZMO06 R30165101 ZMO7 R30165201 seulement L antig ne peut tre pr par en mulsionnant des fragments provenant d une culture pure dans du s rum physiologique pur isotonique ou contenant du formol 0 5 ou du ph nol 0 5 pour donner une suspension de faible concentration environ 10 bact ries ml Etape 1 Etape 2 Pr parer des dilutions en s rie d antis rum dans des volumes de 0 5 ml de s rum physiologique allant de 1 10e 1 320e Les tubes en verre avec un fond rond d environ 9 mm x 85 mm conviennent Etape 3 Introduire 0 5 ml de la suspension d antig ne dans chaque tube Ceci a pour effet de doubler la dilution d antis rum Etape 4 Pr voir un tube t moin contenant uniquement de la suspension et du diluant Etape 5 Agiter les tubes et laisser incuber pendant la nuit 16 20 heures 50 C Etape 6 Observer l apparition ventuelle d une agglutination 9 RESULTATS Agglutination sur lame L agglutination doit tre forte et clairement visible au bout d une minute Il ne doit se produire aucune agglutination visible dans la suspension t moin si ce n est pas le cas la suspension ne convient pas cette m thode d analyse Agglutination en tube Dans une r action positive une agglutination granulaire manifeste doit appara tre Dans le cas d une r action n
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