Utilisation du "Dipstick" à Yaoundé
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1. Taga late eu ekaa 1 Introduction Le kit Dipstick permet l identification de l origine humaine ou non humaine des repas sanguins des culicid s Il a t test au laboratoire d Entomologie M dicale de l OCEAC Yaound Cameroun afin d appr cier sa sp cificit et sa sensibilit dans diff rentes conditions de conservation des pr l vements 2 Mat riel Moustiques Culex quinquefasciatus Anopheles gambiae An nili An funestus et galement des moustiques d levage Aedes aegypti Du sang humain a t utilis pour tester la sensibilit pour la sp cificit du sang d animaux poulet lapin singe Poulets et lapins sont des animaux de laboratoire servant au gorgement de nos moustiques d levage Le singe Cercopithecus aethiops appartient l animalerie du Cen tre Pasteur de Yaound Ainsi qu il est recommand dans le mode d emploi du kit les s rums ont t dilu s au 1 201 dans le tampon pr vu cet effet 3 M thodes Vingt pr l vements ont t test s chaque s ance soit avec les t moins 24 bandelettes par cuve T moins n gatifs pour chaque test nous avons utilis 3 m les d A aegypti T moins positifs 1 ou 2 par test ce sont des aegypti femelles gorg es sur l op rateur quelques instants avant le d but de la manipulation Lecture la qualit de la r action colorim trique sur la pastille a t optiquement appr ci et not en 4 c2. ensibilit en fonction de la digestion du repas sanguin Des femelles d A aegypti d levage ont t gorg es sur membrane avec du sang humain pr lev par ponction vei neuse sur anticoagulant ACD Des lots de moustiques ont t tu s 30 36 et 42 heures apr s le repas de sang et analys s imm diatement 14 Nombre d heures apr s Nb de tests r alis s Lecture le repas sanguin 30 3 a 42 T moin positif T moin n gatif La r action colorim trique est encore appr ciable 30 heures apr s le repas sanguin Par contre partir de 36 heures de digestion on observe seulement une aur ole faiblement color e sur la pastille 5 Discussion L analyse des r sultats des repas sanguins pris sur homme ou sur animaux permet d affirmer la bonne sp cificit du Dipstick Le Kit est efficace pour des techniques de conservation tr s diverses Ceci permet de travailler en gardant lechoix de la technique la mieux adapt e aux conditions de terrain En cas de digestion de sang humain inf rieure 30 heures la r action color e est suffisamment nette pour permettre de la diff rencier du sang simien Par contre en cas de digestion sup rieure 30 heures et dans le cas des s rums de singe la r ponse colorim trique est quivalente n est pas possible de les diff rencier et ce type de r action doit tre consid r e comme ininterpr table 6 Conclusion Le test Dipstick a une bon
3. es l tuve f sp cimens de la faune r siduelle matinale captur s par la m thode du spray bombe insecticide et conserv s dans un tube h molyse durant 4 jours l tuve g estomacs plac s dans un tube Eppendorf secetconser v s 4 C pendant 24 H h estomacs plac s dans un tube Eppendorf sec et con serv s 4 C pendant 72 H i estomacs plac s dans un tube Eppendorf sec etconser v s 4 C pendant Su Fonds Documentaire PETELE a b c d e f 4 h i T moin positif T moin n gatif La r action colorim trique s est correctement r v l e quelques soient les diff rentes conditions de conservation des pr l vements Une tr s bonne r activit du kit a t obtenue m me avec du sang conserv plus d un mois mais il semble qu au del d un mois de conservation 37 C la r action devienne moins sensible cas d Aucune alt ration de la source antig nique n a t observ e lors de l emploi de pyr thrino des de synth se comme moyen de capture des moustiques cas f La conservation des estomacs dans des tubes secs au r frig rateur diminue quelque peu l intensit de la r action color e cas h et i Il faut noter qu deux reprises le mauvais rin age des pilons fournis avec le Kit a t l origine de faux positifs I est d ailleurs conseill aux utilisateurs d utiliser des pipettes Pasteur avec bout arrondi la flamme 4 2 2 S
4. lasses le t moin n gatif est not une r action faiblement marqu e est not e une r action d une intensit moyenne est not e une r action intense et le t moin positif sont not s 4 R sultats 4 1 Sp cificit du Dipstick 4 1 1 Sang humain sang de poulet et de lapin Les femelles d A aegypti gorg es sur ces animaux de laboratoire ont t test es imm diatement apr s leur repas sanguin La lecture s est faite comparativementaux t moins positifs Nb de tests Lecture POULET 15 LAPIN 5 TEMOIN POSITIF 5 TEMOIN NEGATIF 4 gt Aucune r action positive n a t observ e avec le sang de poulet et de lapin 1 le kit est bien sp cifique Service d Entomologie m dicale de F OCEAC et Antenne ORSTOM de l OCEAC e Minist re de la Sant Publique du Cameroun Bull liais doc OCEAC n 99 Mars 2 2 AVR 1992 4 1 2 S rum humain s rum simien Les sangs humain et simien ont t pr lev s par ponction veineuse sur anticoagula ACD Les s rums ont t trait s en les diluant au 1 201 dans le tampon soit 2 pl de source antig ne 400 u de tampon Nb de tests r alis s lecture S rum humain 6 G t m positif S rum simien 7 T moin n gatif 4 L apparition d un halo l g rement color sur lepourtour de la pastille a t observ avec le s rum du cercopith que Cette r action est suffisamment diff rente de celle fai
5. ne sp cificit et il est efficient pour des repas sanguins conserv s selon divers protocoles Il est facile ex cuter dans un laboratoire norma lement quip Il satisfait donc l analyse desrepas sanguins pour une premi re approche des pr f rences trophiques de la faune culicidienne tropicale Bull liais doc OCEAC n 99 Mars 1992
6. te avec le s rum humain pour pouvoir les distinguer 4 1 3 S rum humain dilu dans du s rum de singe Pour envisager la possibilit de repas mixtes du s rum humain a t m lang dans du s rum de singe diff rentes dilutions Nb de tests r alis s lecture Dilution 1 2 2 Dilution 1 10 4 Dilution 1 50 2 Dilution 1 100 2 t m s rum humain 6 G t m n gatif 4 Oo M me en diluant le s rum humain au centi me aucune diff rence d intensit de la r action color e entre les diff rentes dilutions et le t moin positif n a t observ e 4 2 Sensibilit du Dipstick 4 2 1 Sensibilit en fonction de la conservation des pr l vements En vue d une utilisation plus sde chelle sur le terrain il importait de savoircomment le Dipstick r agirait en fonction de diff rentes conditions de conservation des pr l vements les exemples suivants ont t employ s a estomacs plac s dans un tube sec et maintenus pendant 24 H tuve 37 C b estomacs cras s sur papier filtre s ch s sur silicagel et maintenus l tuve pendant 24 H c estomacs cras s sur papier filtre s ch s sur silicagel et maintenus l tuve pendant 6 jours d estomacs cras s sur papier filtre s ch s sur silicagel et maintenus l tuve pendant plus d un mois e sp cimens de moustiques entiers conserv s dans un tube h molyse maintenus pendant 3 semain
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