QuantimalTM pLDH Malaria CELISA
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1. Cellabs Quantimal pLDH Malaria CELISA INTENDED USE Malaria can be diagnosed by many methods It is well established that the presence of pLDH in clinical blood samples is indicative of active infection and its absence reflects the cure or the lack of malaria infection Unlike histidine rich proteins like HRP 2 the pLDH enzyme is secreted only by live parasites and survives only briefly in the patient blood The Quantimal pLDH Malaria CELISA test can therefore be used to detect current and active infection as well as assist in monitoring anti malarial chemotherapy The Quantimal pLDH CELISA kit detects the enzyme lactic dehydrogenase pLDH common to all Plasmodium spp This is a confirmatory test for active and current human malaria Quantimal pLDH Malaria CELISA can also be used to monitor anti malarial chemotherapy to monitor resistance of Plasmodium parasites to chemotherapy and for in vitro evaluation of anti malarial drugs It is not intended to replace the conventional blood film diagnosis The sandwich ELISA principle is employed Quantimal pLDH Malaria CELISA can be used with a variety of clinical samples such as whole blood patient blood culture drug resistance studies plasma or serum CONTENTS OF THE KIT Standard Bulk pack Celisa plate 2 x 96 wells single use 2 plate 10 plates conmo Positive Control 1x 0 5 mL 1x 1 0 mL contro Negative Control 1x2 5mL 1x5 0 mL Enzyme Conjugate 200x 1x 0 12 mL 1x 0 7 mL2. magnetic stirrer until all crystals are dissolved For each microplate add 50mL PBS Tween concentrate to 950mL of distilled water Label the bottle and store at 2 8 C This buffer is used for diluting test samples diluting the conjugate concentrate and washing the microplates Preparation of samples Collect patient blood by standard venipuncture procedure using an anticoagulant Blood specimens should be stored below 10 C if the analysis is delayed Fresh refrigerated or frozen samples of serum plasma or blood may be used Avoid contamination by collecting aseptically The J is culture supernatant and the is RPMI Prepare the koma by diluting 1 in 2 with the tm Blood plasma or serum samples are to be prepared by diluted using 1x WASH BUFFER ensuring proper mixing Assay Procedure Bring all reagents to room temperature 18 25 C before use Prepare WASH BUFFER see Preparation of Wash Buffer Remove required number of MPMW strips Reseal the foil bag containing unused microwell strips immediately with tape Pipette 100uL of the SAMPLE positive control Loro or known positive and negative control Er into individual microwells Include two positive and two negatives in each assay run Cover and incubate for one 1 hour at 37 C in a humid chamber In the last 10 minutes of the incubation period prepare the working strength CONJUGATE Add 5uL of conjugate concentrate MPPOI to 995uL of conjugate diluent MPCD and mix th
3. 0 5ml 1x1 0ml cowtrot Contr le N gatif 1x2 5 ml 1x 5 0 ml Conjugue enzymatique 200x 1x0 12 ml 1x0 7 ml MPCD Diluant pour conjugu 1 x 24 ml 1x 120 ml PBS Tween 20x 1x 125 ml 1 x 500 mi Substrat Chromog ne TMB 20x 1x 1 2 ml 1 x 7 0 ml MPSB Tampon de substrat 1 x 24 ml 1x 125 ml MPSS Solution d rr t 1x12 ml 2x30ml MATERIELS REQUIS NON FOURNIS Eau distill e micropipettes et embouts verrerie propre ou r cipients plastiques pour solutions chambre humide laveur ELISA ou bouteille de rin age lecteur de plaques ELISA capable de lire 450nm or 450 620nm PRECAUTIONS Produit usage uniquement in vitro Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur l tiquette Si I amp mballage est abim contactez votre fournisseur local pour un remplacement Ne pas m langer les r actifs de coffrets diff rents Certains r actifs contiennent du Thimerosal comme pr servatif qui est un poison Manipulez ces r actifs avec soin La solution d rr t est corrosive Evitez tout contact avec la peau les yeux ou les membranes muqueuses Ajoutez les r actifs en vitant tout risque de contamination crois e des puits Evitez d xposer le substrat chromog ne la lumi re Les chantillons cliniques et les contr les doivent tre consid r s comme potentiellement infectieux et jet s selon les proc dures ad quates Consultez la fiche de s curit du produit notice MSDS pour plus amples informations INSTRUCTIONS D EMPLOI Pr pa
4. 50nm or 450 620nm Negative Control O D lt 0 2 Positive Control O D gt 1 5 The cut off value COV can be determined by testing a number of known negative samples The COV mean OD plus 3 standard deviations All specimens with an absorbance value O D above the COV should be considered positive for bLDH A positive result indicates the presence of pLDH from Plasmodium falciparum Plasmodium vivax Plasmodium ovale Plasmodium malariae or Plasmodium knowlesi This is suggestive of a current infection NOTE The Quantimal pLDH Malaria CELISA kit does not distinguish between different species of Plasmodium infections To detect specific infection caused by Plasmodium falciparum contact Cellabs Pty Ltd for information on the Malaria Antigen HRP 2 CELISA WASTE DISPOSAL Dispose of any unused component as bio hazardous waste For more information please refer to the MSDS INDEMNITY NOTICE Modifications or changes made in the recommended procedure may affect the stated or implied claims and performance of the kit Cellabs and its agents or distributors are not liable for damages under these circumstances CelLabs Quantimal pLDH Malaria CELISA PRINCIPE DU TEST ET INDICATIONS D EMPLOI Le paludisme peut tre diagnostiqu de diverses fa ons Il est tabli que la pr sence de pLDH dans les chantillons sanguins cliniques refl te une infection palud enne active et son absence refl te I bsence ou la gu rison de Infection A
5. Conjugate Diluent 1x24 mL 1x 120 mL PBS Tween 20x 1x 125 mL 1 x 500 mL Substrate Chromogen TMB 20x 1x1 2mL 1x 7 0 mL MPSB Substrate Buffer 1x24 mL 1x 125 mL MPSS Stopping Solution 1x12mL 2x30 mL Store at 2 8 C Expiry dates are clearly marked on each kit component and on the box Expiry dates do not change once opened MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED Distilled water micropipettes and tips clean glassware or plastic containers for solutions humid chamber ELISA washer ELISA plate reader to read absorbances at a single wavelength of 450nm or at dual wavelength of 450nm and 620nm PRECAUTIONS For in vitro diagnostic use only Do not use after the expiry date shown on the label If protective packaging is damaged contact your local distributor and ask for a replacement Do not mix reagents from different kits Thimerosal preservative added to some components is a poison Exercise caution when handling these components The stopping solution is corrosive Avoid contact with skin eye and mucous membranes Dispense all reagents with care to avoid cross contamination of wells Avoid exposure of the substrate to light Treat all clinical and control material as though potentially infectious and dispose of in accordance with local operating regulations For further information please refer to Material Safety Data Sheet INSTRUCTIONS FOR USE Preparation of Wash Buffer If crystals are present pre warm the concentrate to dissolve and stir on a
6. ESULTATS Lecture visuelle Observer I ntensit couleur des chantillons et des contr les Les contr les positifs doivent tre bleu avant I tape d rr t et jaune apr s Lecture spectrophotom trique Lire les r sultats dans un spectrophotom tre a microplaque ELISA calibr I ir 450 nm ou 450 nm 620 nm Pour tre valides les valeurs de contr les n gatifs doivent tre comme suit OD Value 450nm 450 620nm Contr le N gatif Contr le Positif Les chantillons de sang n gatifs doivent donner une densit optique inf rieure 0 2 unit s de D O N anmoins afin de compenser pour les variations inter laboratoires nous recommandons chaque laboratoire d nclure un certain nombre d amp chantillons n gatifs confirm s afin d talonner le seuil discriminant entre positif et n gatif DECHETS Jetez tout composant inutilis dans la poubelle aux d chets biologiques Consultez la fiche de s curit du produit notice MSDS pour plus amples informations SENSIBILIT SPECIFICITE ET AUTRES DONNEES DU TEST Contactez Cellabs ou votre distributeur pour l btenir NOTICE D INDEMNITE Toute modification ou variation du protocole d amp mploi recommand peut affecter les performances annonc es du produit Un r sultat positif ou n gatif n xclue pas la pr sence d utres agents causatifs sous jacents Cellabs et ses agents et distributeurs ne sont l galement responsables d ucun dommage dans de telles circonstances FIGURE 1 Qua
7. I nverse des prot ines riches en histidine comme IGIRP 2 I amp nzyme pLDH est secr t e uniquement par le parasite palud en vivant et sa demi vie sanguine est br ve La trousse QuantimalE pLDH peut par cons quent tre utilis pour diagnostiquer une infection palud enne active ainsi que dans le suivi th rapeutique anti palud en La trousse QuantimalE pLDH CELISA d tecte l amp nzyme de d shydrog nase lactique pLDH commun tous les Plasmodium spp C st un test de confirmation d ne infection palud enne chez Itiomme La trousse Quantimal pLDH CELISA peut aussi tre utilis e pour suivre la chimioth rapie anti palud enne pour mesurer la r sistance des parasites Plasmodium aux anti palud ens et pour l amp valuation in vitro de nouveaux m dicaments anti palud ens Ce test n st pas con u pour replacer le test diagnostic conventionnel de malaria la goutte paisse Le principe utilis est la m thode ELISA en sandwich La trousse Quantimal pLDH CELISA peut tre utilis e avec divers types d amp chantillons tels que le sang total sous anti coagulant les cultures de sang de patients infect s tudes de chimiosensibilit le plasma ou le s rum de patients ainsi qu vec le surnageant de cultures palud ennes de laboratoire Les chantillons de plasma peuvent tre utilis s directement COMPOSITION DU COFFRET Standard Recherche Plaque CELISA 1 x 96 puits usage unique 2 plaque 10 plaques conmo Contr le Positif 1x
8. ntimal pLDH Malaria CELISA Dilute oomro 4 in 2 Dilute test sample 1 in 2 in Loma f in WASH BUFFER CA Diluted DILUTED SAMPLE Add 100uL to individual MPMW wells and incubate for 1 hour in a humid chamber at 37 C Wash 4x with WASH BUFFER Add 100uL prepared CONJUGATE to each well Incubate for 1 hour in a humid chamber at 37 C Wash 4x with WASH BUFFER Add 100uL of prepared SUBSTRATE to each well Incubate for 15 minutes in the dark at RT Add 50uL MPSS to each well Read visually at 450nm or 450 620nm EXPLANATION OF SYMBOLS lil Consult Instructions for Use Cellabs Pty Ltd Unit 7 27 Dale Street PO Box 421 In Vitro Diagnostic Medical Device Brookvale NSW 2100 Australia Tel 61 2 9905 0133 Fax 61 2 9905 6426 Temperature Limitation Web hitp www cellabs com au 8 C Email sales cellabs com au 2 C LOT Batch WMDE Ec ae Bergerweg 18 P 6085 AT Horn Control Positive The Netherlands CONTROL Control Negative ME LM7 6 ersion 11 November 2013 Use By Expiration Date Do Not Re use 63 ET
9. on de travail de CONJUGATE Ajouter 5uL de conjugu concentr IMAPO 995uL de diluant de conjugue MACD et m langer vigoureusement pr voir 1 mL de solution de travail par barrette de 8 micropuits Laver les micropuits au laveur automatique ou manuellement comme suit Vider le contenu des micropuits Remplir les micropuits de WASH BUFFER R p ter l p ration quatre 4 fois Apres le cinqui me lavage rabattre vigoureusement la plaque de micropuits invers e sur une serviette absorbante jusqu ce qu ucun liquide n n sorte NB op rez cette tape avec pr caution en serrant le cadre de la plaque micropuits pour viter quds ne s n d logent 7 Ajouter 100 pi de conjugu dilu dans chaque puits Incuber une 1 heure a 37 C en chambre humide 8 Dans les 10 derni res minutes de Incubation pr parer la solution de travail de SUBSTRATE Ajouter 50uL de substrat chromog ne MPSC 950uL de tampon de substrat MPSB et m langer vigoureusement pr voir 1mL de solution de travail par barrette de 8 micropuits Cette solution de travail est stable pendant 30 minutes 9 R p ter le lavage comme l tape 6 10 Ajouter 100uL de frais et incuber couvert l bscurit pendant 15 minutes temp rature ambiante 11 Ajouter 50uL de solution d rr t IMPssl Taper la plaque pour m langer 12 Lire les r sultats visuellement ou au spectrophotom tre 450 nm ou a 450nm 620 nm calibr a I ir LECTURE DES R
10. oroughly allow 1mL per strip of 8 wells Wash the wells preferably using an automatic plate strip washer or manually as follows Empty contents from the wells Refill with the WASH BUFFER Repeat this process a further four 4 times After the fifth wash bang inverted wells dry on absorbent tissue NB take care when flicking out plates hold side of frame firmLy to hold strips in place Add 100uL of diluted CONJUGATE to each well Incubate for one 1 hour at in a humid 37 C chamber In the last 10 minutes of the incubation period prepare the working strength SUBSTRATE Add 50uL of substrate chromogen MPSC to 950uL of substrate buffer MPSB and mix thoroughly allow 1mL per strip of 8 wells The stability of the solution is 30 minutes 9 Repeat washing as in step 6 10 Add 100pL of fresh and incubate in the dark covered at room temperature for 15 minutes 11 Add 50uL of Stopping Solution IMPssl Tap the plate to mix 12 Read the results visually or in a spectrophotometer at 450nm or 450nm 620nm blanking the machine on air READING AND INTERPRETATION OF RESULTS AND DIAGNOSIS Visually Observe the colour intensity of the control and specimen wells The Positive Control should be blue before and yellow after stopping Photometrically Read the microwell plate at 450nm or 450 620 in a compatible ELISA plate reader blanked against air For the test results to be accepted the controls must read as follows O D Value 4
11. ration du tampon de lavage Si des cristaux apparaissent r chauffer le r actif pour les dissoudre sur un agitateur magn tique jusqu leur disparition totale Pour chaque plaque de micropuits ajouter 50ml de concentr PBS Tween a 950ml d au distill e Libeller la bouteille et conserver 2 8 C Ce tampon est utilis pour diluer les chantillons d essai concentr de conjugu et laver les plaques Pr paration des chantillons de sang Collecter I amp chantillon patient par ponction veineuse normale sous anticoagulant Congeler les chantillons sanguins en dessous de 10 C si I nalyse est retard e Pr paration des chantillons de s rum ou plasma Ramener temp rature ambiante avant I sage Contr les Positifs et N gatifs Ramener les r actifs temp rature ambiante avant Idisage Mode D emploi Ramener tous les r actifs temp rature ambiante 18 25P PC avant I mploi Pr parer le voir Pr paration du Tampon de Lavage Retirer le nombre requis de micropuits IMPMWI Imm diatement refermer le sac contenant les micropuits restants avec du ruban adh sif Ajouter 100uL de SAMPLE de contr le positif I ou chantillon patient positif et de contr le n gatif MPCD ou lw T1 dans chaque micropuits Inclure deux contr les positifs et deux contr les n gatifs dans chaque s rie de dosage Couvrir et incuber une 1 heure 370C en chambre humide Dans les 10 derni res minutes de l ncubation pr parer la soluti
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