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1. RS et les animaux sont maintenus dans les l environnement si RE Classe 2 conditions d finies pour les locaux de a type L2 s ils relarguent des particules relargant des particules virales de classe 2 JP 8 gt F Si virales et tous les animaux sont autoclav s et incin r s infect s par un agent pathog ne du groupe 2 Animalerie A3 Relargant des particules virales de classe 3 conditions d finies pour l animalerie A1 ou et les animaux sont maintenus dans les Classe 3 7 lt Be Er infect s par un agent pathog ne du conditions d finies pour les locaux de groupe 3 type L3 et tous les animaux sont autoclav s en sortie de zone et incin r s Animalerie A4 Relargant des particules virales de classe 4 conditions d finies pour l animalerie A1 ou et les animaux sont maintenus dans les Classe 4 5 N S S infect s par un agent pathog ne du conditions d finies pour les locaux de groupe 4 type L4 et tous les animaux sont autoclav s en sortie de zone et incin r s 34 IV ANNEXES ANNEXE 1 DESCRIPTION DES NIVEAUX DE CONFINEMENT A METTRE EN UVRE DANS DES ETABLISSEMENTS D EXPERIMENTATION ANIMALE OU SONT UTILISES DES AGENTS BIOLOGIQUES PATHOGENES OU OGM Les normes de confinement des laboratoires L1 L2 L3 L4 ont t transpos es en normes de confinement des animaleries A1 A2 A3 A4 Tableau adapt des recommandations de la Commission de G nie G n tique janvier 2000 NIVEAUX DE CONFINE
2. l exp rimentation sur animaux vivants ils devront avoir suivi au pr alable une formation de niveau II La formation particuli re la chirurgie obligatoire pour les personnes autoris es exp rimenter qui sont responsables de protocoles incluant des interventions chirurgicales Les personnels techniques r alisant des actes chirurgicaux sont encourag s suivre cette formation mais celle ci n est pas exigible dans la mesure o ils pratiquent obligatoirement sous la responsabilit d une personne form e et autoris e pour la chirurgie Si seules les formations r glementaires sont exigibles il est bien s r fondamental d tre form correctement avant d entreprendre des protocoles impliquant des animaux A cette fin il est recommand de participer des formations sp cialis es qui permettent la fois un apprentissage initial et une actualisation des savoir faire I 4 LES REGISTRES Le registre des entr es sorties permet d assurer une tra abilit des animaux utilis s 7 Il doit tre tabli aussi bien pour les animaux acquis que pour les animaux n s dans l Etablissement Les Rongeurs peuvent tre identifi s par lot dans la mesure o le nombre d animaux par lot est indiqu sur le registre ils ne sont alors r pertori s qu au moment du sevrage En t te du registre doivent figurer le nom de l Etablissement la nature des activit s exerc es exp rimentation animale le nom du directeur de l Etabl
3. une p riode d acclimatation pendant laquelle un contr le de l tat sanitaire des animaux est pr conis 3 Les animaux sont de statut sanitaire inconnu c est une situation dangereuse qu il faudrait viter Le mieux est d effectuer une d contamination par c sarienne aseptique ou un transfert d embryons assorti d une cong lation de s curit A d faut les animaux doivent obligatoirement tre mis en quarantaine isol s de mani re tr s stricte et test s sachant qu il est tr s difficile d appr cier l tat sanitaire de l ensemble des animaux introduits au vu d une seule s rie d analyses IIL 4 3 Introduction de mat riel biologique L utilisation de mat riel biologique tumeurs sperme cellules s rum peut conduire l introduction d agents pathog nes C est pourquoi il est pr f rable de tester ce mat riel avant toute exp rimentation ou au minimum de mener les exp rimentations en strict confinement jusqu ce qu il soit test et confirm non contamin Le mat riel biologique est test par la technique d antibody production test qui consiste injecter ce mat riel un animal puis rechercher la pr sence d anticorps dans le s rum Cependant ces tests sont longs temps de s roconversion de l animal inocul et co teux Is ne permettent que la recherche des virus des rongeurs or certains animaux de laboratoire peuvent avoir t contamin s involontairement avec
4. Pseudomonoas aeruginosa Corynebacterium kutscheri KKI x Maladie de Tyzzer Helicobacter sp Bact ries opportunistes PARASITES Hymenolepsis nana Syphacia sp Aspicularis tetraptera Spironucleus muris Giardia muris Encephalitozoon cuniculi K j Entemoeba muris Trichomonas sp Myobia musculi Myocoptes musculinus Radfordia affinis Pneumocystis carinii DERMATOPHYTES Toutes les interf rences avec les r sultats exp rimentaux ne sont pas encore connues et l importance de certains agents infectieux n est pas compl tement valu e C est le cas tout particuli rement pour les Parvovirus et Helicobacter signalisation dans les diff rents tableaux ci dessus par importance incertaine Par ailleurs tout micro organisme opportuniste peut devenir pathog ne pour les animaux immunod ficients 46 ANNEXE 4 EXEMPLE D INFORMATION A RECUEILLIR LORS DE TRANSFERTS Inserm Institut national De la sant et de la recherche m dicale INFORMATIONS SANITAIRES RODENT HEALTH INFORMATIONS Animaux envoy s sent animals Esp ce species Nombre Number Lign e strains Statut immunitaire immune status L Comp tent competent L Immunod prim immunodeficient L Inconnu unknown Pour les OGM classe A1 C A2 C A3 Etablissement exp diteur Consignor Nom Name Adresse Adress V t ri
5. avant entr e surbottes et sortie du laboratoire 3 Douche pour d contaminer les travailleurs optionnel 4 Lavage des mains lavabos avec robinets x gt non oui 1 oui oui pouvant tre manoeuvr s sans les mains oui murs plafonds PE eea i sols ls R sistance des surfaces l eau nettoyage ais oui sols SoS TSA i oui sols oui sols murs et r sistants sans endroits inaccessibles au nettoyage plafonds aux nettoyants chimiques 6 Surface des paillasses imperm able l eau r sistante aux acides alcalis solvants et oui oui oui oui d sinfectants 7 Lutte efficace contre les vecteurs par exemple i oui oui oui oui rongeurs et insectes oui dans le oui dans le labo double labo double entr e 2 entr e 9 quipement de base sp cifique dans le s oui laboratoire mat riel marqu c Pratiques op ratoires oui acc s 1 Stockage des agents biologiques en lieu s r prot g 2 Manipulation des mati res infect es et de tout animal contamin dans un syst me appropri de optionnel oui oui confinement 3 3 Utilisation de conteneurs sp cifiques pour FTES contamin es objets piquants ou tranchants souill s 4 4 Contr le de la diss mination des a rosols form s de la diss mination des a rosols form s E 6 Inactivation mat riel contamin et d chets Inactivation mat riel contamin et d chets ee 7 D contaminati
6. cr PARIS DESCARTES liji Inserm PARIS D DIDEROT Recommandations pour la mise en place et le fonctionnement d un tablissement d exp rimentation animale utilisant des rongeurs et des lagomorphes GUIDE PRATIQUE Recommandations pour la mise en place et le fonctionnement d un Etablissement d Exp rimentation Animale utilisant des rongeurs et des lagomorphes Ont collabor l laboration de ce document Bernard Andrieux Minist re de la Recherche Laurence Bernard Touami Institut Jacques Monod Universit Paris 7 Virginie Dangles Marie Centre de recherche Institut Curie Chrystophe Ferreira Universit Paris 5 Val rie Geoffroy Inserm U606 Universit Paris 7 C cile Goujet Zalc SEAT CNRS UPS 44 Fran oise Helms Bureau de la Recherche Universit Paris 7 Anne Janin Inserm U728 Universit Paris 7 Anne Joutel Inserm U740 Universit Paris 7 Fran ois Lachapelle Bureau Exp rimentation Animale Inserm Isabelle Le Parco Institut Jacques Monod CNRS UMR 7592 Universit Paris 7 Paris 6 S bastien Paturance CDTA Orl ans CNRS Marika Pla Institut Universitaire d H matologie Universit Paris 7 Brigitte Rault Bureau Exp rimentation Animale Inserm Armelle Van Es Institut de la Clinique de la Souris Ilkirch Ont collabor l expertise de ce document Denise Aubert ENS Lyon Anna Bogdanova Universit de Lille 1 C cile Calleja INRA St
7. 60 superficiels puis des organes superficiels internes Pneumonies dans P certaines lign es de rat G n ralement Tr s interf rant Parasites asymptomatique chez les surtout pour les A gt intracellulaires she adultes Infections des tudes long terme Es Epith lium ER Transmission respiratoire organes cibles otites Tractus respiratoire eee Mycoplasma sp Souris rat lapin elle Faible Faible conjonctivites infections syst me Oise ulmonis cochon d inde moyenne respiratoires et du tractus immunitaire y P y P moyenne ce ae A transferts ke g nital Morbidit et reproduction a tractus g nital ce d embryons mortalit augment es par toxicologie oia i ra Diagnostique combinaison avec d autres nutrition f s rologique infections pneumotropiques oncologie Pn g n ralement asymptomatique Inflammations suppuratives K Pns peau Variable otites o Re Pathog ne Rongeurs or SE tuniste P BANES selon Mu g n ralement Peau pn tractus CPP Re Pasteurella sp pneumotropica externes 52 Variable 8 t pn multicida tr s Ph te et asymptomatique respiratoire mu lapin multocida Mu a fr quentes chez olytropiqu lisolat Pathologies multiples le lapin p diffusion sanguine telles que rhinites conjonctivites pneumonies G n ralement Reproduction foie asymptomatique poumon Js Tractus 2 i 5 Risque
8. Salmonella sp Mammif res Variable Faible pathologies variables selon m tabolisme que intestinal 3 ss zoonotique les cas Pathog ne chez les glucidique et IDp hormonal G n ralement Set asymptomatique Signes as cliniques non sp cifiques AR Nombreuses Streptococcus Cobaye Fosses nasales ND ND oem tteiite Tractus respiratoire ne pneumoniae H te naturel oreille moyenne q foie tyro de ire homme broncho pulmonaire diff rentes d gradation de l tat g n ral septic mie 42 BACTERIES Suite INFECTIOLOGIE ORGANO INTERFERENCE AVEC SSENT HOTE TROPISME Morbidit Mortalit SIGNES CLINIQUES LA RECHERCHE PPS RES H patite chronique et risque Tractus gastro intestinal Souris R augment de tumeurs toxicologie oncologie Nombreuses pen Tractus intestinal Jusqu Faible E k H licobacter sp rat h patique Inflammation du carcinogen se souches foie 100 3 10 y eee hamster gros intestin avec prolapsus Interf rences pas encore diff rentes rectal 5 chez IDp toutes connues H te naturel N uds Asymptomatiques le plus Streptococcus B homme lymphatiques ND ND souvent rarement Tractus respiratoire Souche D agent hemolytic Souris cervicaux pneumonie Surtout pour les opportuniste rat poumons IDp cobaye Asympt matique le plus Souris 2 Nasopharynx tube souvent Parfois dermatite DAN Staph
9. la m thode la plus adapt e est l analyse de s rums et de pr l vements f ces urine s cr tions nasales issus de tout ou partie de la population h berg e Il peut exister une importante variabilit entre les r sultats des diff rents laboratoires de diagnostic c est pourquoi il est recommand l Etablissement de s assurer de la d marche qualit des prestataires qui effectuent les tests si le prestataire n est pas certifi ISO s rie 9000 ou EN 45001 il est judicieux de s assurer qu il suit au minimum les recommandations de la FELASA La d marche qualit implique que les proc dures soient crites d taill es et accessibles 25 IIL 2 5 Conduite tenir devant un r sultat positif Dans le cadre du programme de surveillance sanitaire l Etablissement doit avoir d fini son propre plan d urgence en cas de d tection d agents pathog nes plan qui n cessite l intervention d une personne comp tente capable d interpr ter les r sultats des contr les et de mettre en uvre les mesures adapt es Il faut garder l esprit qu un contr le n gatif ne garantit pas de mani re absolue l absence des pathog nes recherch s dans la population il indique leur absence sur les animaux test s d o l importance du choix de ces animaux pour repr senter au mieux la population Pour d terminer la conduite tenir dans le cas de r sultat positif confirm il importe de prendre en consi
10. 0 Epizootie conjonctivite immunologie Scialodacryoadenite glandes salivaires 7 Hz infectieux M coulement nez yeux tractus g nital SDA et lacrymales D g Pulmonis ulc ration de la corn e reproduction zootechnie Zoonose majeure Variable selon l ge Transmission intra l esp ce la souche des ut rine Contaminant Souris Principalement Variable 2RiMAUX ainsi que le fr quent des tumeurs hamster E sous type de virus SNC foie transplantables de Lymphocytic rein glandes de 0 S De Hu rongeurs ae G n ralement circulation sanguine lign es cellulaires choriomeningitis salivaires tissues ND 100 i i chiens 4 asymptomatique chez la immunologie stocks viraux virus virus LCMV lympho des et selon le el primates 2 ora souris adulte apr s oncologie leuc mies 1 h matopo tique virus A humains infection naturelle Augmente la Glom rulon phrite sensibilit de la tardive 7 10mois souris au virus de l ectrom lie Guineapi Dyspn e prostration Pathologie pig Cochon Tractus Faible Pr s de PE p j d multifactorielle le adenovirus a lue hypothermie et mort par Tractus respiratoire d inde respiratoire 5 100 virus seul est GPAdV bronchopneumonie A insuffisant Tr s variable selon les souches de g n ralement inapparent ne Peau organes SD AUDE Tr s interf rant tout aere Lor Souris POTBADES e 3
11. D EXPERIMENTATION ANIMALE L ensemble qui comprend les pi ces destin es h berger les animaux les pi ces de stockage et de service qui sont li es et les pi ces o se d roulent les exp rimentations que ces pi ces soient contigu s ou parses constitue un Etablissement d Exp rimentation Animale Etablissement Tout Etablissement doit tre agr par arr t du pr fet du d partement apr s la visite conjointe des locaux avec les minist res de tutelle et avis favorable des services d concentr s du minist re de l agriculture direction d partementale des services v t rinaires DDSV Cet agr ment repose sur la conformit des locaux aux dispositions de l arr t du 19 avril 1988 5 conception qualit gestion espaces registres et la formation appropri e des personnels L agr ment limite les domaines d activit les esp ces animales utilis es et les protocoles mis en uvre Il est d livr pour cinq ans et renouvelable sur demande crite L Etablissement est plac sous la responsabilit d un directeur qui r pond du bien tre des animaux et du bon fonctionnement des installations I 3 LES PERSONNELS La l gislation qui encadre troitement l exp rimentation animale formule des exigences de formations qui sont adapt es aux diff rents types d activit des personnels Actuellement on distingue quatre types de formations r glementaires La formation de niveau I destin e aux pe
12. Selon la CGG un organisme g n tiquement modifi OGM recouvre toute entit biologique non cellulaire cellulaire ou multicellulaire capable de se reproduire ou de transf rer du mat riel g n tique et dont les caract ristiques ont t modifi es autrement que par multiplication ou recombinaison naturelle Concr tement un animal g n tiquement modifi est un animal dont le g nome a t modifi autrement que par mutation spontan e Les r gles de confinement sont adapt es aussi bien aux animaux infect s exp rimentalement qu ceux qui sont g n tiquement modifi s 33 Tableau 5 Classement et exigences de confinement des rongeurs et lagomorphes OGM ou infect s par des agents pathog nes d apr s la CGG Classe des it Confinement physique D finition animaux L1 L2 L3 L4 Annexe 1 Abritant un g ne ne leur conf rant aucun effet nuisible pour l homme ou l environnement i 24 Animalerie A1 f conditions habituelles d levage avec des Classe 1 ne relargant jamais de particules virales ou A i Ea 3 barri res physiques limitant intrusion et tout au plus de classe 1 GE vasion ou infect s par un agent pathog ne du groupe 1 Abritant un g ne mobilisable ayant un effet nuisible pour l homme ou fade j SPONE S Animalerie A2 l environnement ou conf rant l animal un 7 boi SR conditions d finies pour l animalerie Al effet nuisible pour l homme ou gt
13. des agents pathog nes humains ex des souris SCID qui peuvent h berger EBV et Chlamydia L alternative ces tests repose sur le diagnostic mol culaire par PCR ou RT PCR directe sur le mat riel biologique qui permet aussi la d tection des agents pathog nes humains ex HIV HBV HCV EBV 32 ILS REGLES DE CONFINEMENT POUR LES ANIMAUX INFECTES ET GENETIQUEMENT MODIFIES Les animaux infect s par des agents biologiques pathog nes sont class s en quatre groupes en fonction de l agent pathog ne qu ils h bergent et du risque que celui ci repr sente pour l Homme Le groupe 1 comprend les agents biologiques non pathog nes pour l Homme Le groupe 2 comprend les agents biologiques pouvant provoquer une maladie chez l Homme leur propagation dans la collectivit est peu probable il existe g n ralement une prophylaxie ou un traitement efficace Le groupe 3 comprend les agents biologiques pouvant provoquer une maladie grave et contagieuse chez l Homme il existe une prophylaxie et ou un traitement efficace Le groupe 4 comprend les agents biologiques qui provoquent des maladies graves et tr s contagieuses chez l Homme il n existe g n ralement ni prophylaxie m dicamenteuse ni traitement efficace contre ces agents Les animaux g n tiquement modifi s sont actuellement r partis en quatre classes par la Commission de G nie G n tique CGG en fonction de l importance du risque qu ils pr sentent tableau 5
14. des locaux en Faible co t Canc rig ne Toxique Tr s irritant Odeur piquante N cessit de calfeutrer les pi ces Formald hyde l absence d animaux Actif en pr sence de mati res f e Ji pendant le processus de d contamination du mat riel en organiques SiE as d contamination Inactif sur le prion son action le prot ge m me de m thodes ult rieures d inactivation Oxydant puissant Action rapide sous forme vaporis e Absence de r sidus se d contamination des locaux d compose en eau et oxyg ne i pr sence possible des animaux Actif sur les ufs d oxyures et Incompatible avec les mat riaux Peroxyde d hydrog ne p pos yu absorbants ex cellulose selon la concentration utilis e d contamination du mat riel en sas le prion selon la concentration utilis e Compatible avec la d contamination du mat riel lectronique N cessit d un g n rateur de vapeur Acide perac tique Utilis sous forme gazeuse pour la d contamination des isolateurs D composition inoffensive eau oxyg ne acide ac tique peroxyde d hydrog ne Co t lev Peut tre corrosif pour certains m taux aluminium en particulier et certaines mati res plastiques polycarbonates Activit r duite en pr sence de mati res organiques D sinfectant de niveau d activit interm diaire champignons mais non les spores D sinfectant de faible niveau d activit ne tue pas
15. es sur la recherche d anticorps sp cifiques 2 Des animaux sentinelles Cette option pr sente l avantage d viter le sacrifice d animaux pr cieux Les animaux sentinelles sont des animaux de lign es non consanguines qui doivent avoir un statut sanitaire SPF voire SOPF avant leur introduction dans l unit tester Au moment du contr le ils doivent tre g s au minimum de 6 8 semaines pour la s rologie les anticorps d origine maternelle doivent avoir disparu et avoir t h berg s au moins 6 voire 9 semaines dans l unit tester Ils peuvent tre mis soit en contact direct avec les autres animaux passage dans diff rentes cages avec les risques de diss mination de pathog nes et d agression que cela comporte soit en contact indirect par la m thode du dirty bedding qui consiste ajouter dans la cage des animaux sentinelles de la liti re souill e provenant des autres cages Cette m thode peut tre optimis e en ajoutant en plus des aliments et de l eau de boisson issus de ces autres cages Le mode d exposition indirecte n est cependant pas tr s performant pour mettre en vidence certains agents pathog nes comme les virus Senda LDV ou CAR Bacillus dont la transmission se fait par contact direct avec l animal infect Dans le cas d un h bergement conventionnel il est plus judicieux de placer les animaux sentinelles en bas des portoirs endroit o l exposition aux agents pathog nes est
16. examens microscopiques Les animaux g s sont moins sensibles aux endoparasites c est pourquoi il est pr f rable de choisir des animaux jeunes 3 5 semaines pour la d tection des parasites La technique employ e doit tenir compte du cycle de vie du parasite recherch par exemple le scotch test sur la r gion p ri anale est inappropri pour mettre en vidence les ufs d Aspicularis tetraptera qui doivent tre recherch s par examen direct du contenu c cal ou par la technique de flottaison 24 LII 2 4 5 Techniques de biologie mol culaire Elles comprennent les techniques de PCR RT PCR Q PCR et puces ADN ou ARN qui sont bas es sur la mise en vidence directe du mat riel g n tique des pathog nes Elles permettent d obtenir une r ponse rapide et sp cifique et de savoir si un animal est porteur d un pathog ne d fini il est noter que les animaux immunod ficients infect s sont des porteurs excr teurs chroniques La PCR est actuellement la seule m thode pour identifier les esp ces d Helicobacter dont hepaticus bilis et typhlonicus La PCR est combiner avec les m thodes traditionnelles pour confirmer ou infirmer des r sultats positifs ex pour le Parvovirus la PCR partir de n uds lymphatiques m sent riques permet de confirmer un r sultat positif en ELISA Enfin la PCR permet de tester le mat riel cages et l environnement filtres de la pi ce d h bergement gt Limites des techniqu
17. filtre HEPA 0 3 u d compression enceintes pr filtre de sortie m dia filtre charbon actif 50 Annexe 5 2 Contr le et maintenance a C Contr les e Avant une remise en route v rifier que les portes des 2 enceintes sont correctement ferm es les manom tres de pression Kimo sont bien horizontaux et que le niveau de liquide est bien 0 l arr t e Fn service le bon fonctionnement des armoires est r guli rement v rifi par observation des manom tres de pression qui doivent indiquer une surpression de 5 mm H20 graduations e Une alarme sonore est mise par le moteur en cas de dysfonctionnement En cas de coupure lectrique l alarme ne se d clenche pas mais le relais d alimentation est pris par l onduleur de s curit Nettoyage e Une fois par semaine lors du change la sciure pr sente dans le fond des armoires est limin e l aide des pelles et balayettes r serv es cet effet e Une fois par trimestre l int rieur de chaque armoire est enti rement d contamin d montage des blocs d aspiration soufflage et pulv risation essuyage avec de l incidine et l ext rieur est nettoy inox et vitres avec un produit adapt e Une fois par an ou d s que possible pi ce libre l ensemble des armoires et moteurs d une m me pi ce subissent une d sinfection par brumisation de Cleansinald Maintenance Changement des filtres e Filtres m dia cai
18. optimale 19 II 2 3 2 Nombre d animaux Le nombre d animaux tester est adapter nous allons le voir en fonction du type d h bergement et de la taille de l unit contr ler Il est important de noter que si ce nombre est insuffisant des r sultats n gatifs ne seront pas repr sentatifs de la situation sanitaire de la population H bergement conventionnel en cages ouvertes La formule propos e par PILAR Institute for Laboratory Animal Research d finit le nombre des animaux pr lever au hasard dans une unit Nombre d animaux pr lever log 0 05 log N O 0 05 correspond un intervalle de confiance de 95 et N au pourcentage d animaux non infect s Cette formule repose sur les hypoth ses que la population contr ler est sup rieure 100 animaux que les animaux des deux sexes sont infect s de la m me fa on et que l agent infectieux est normalement distribu A titre d exemple pour d tecter un agent infectieux pr sent avec une pr valence hypoth tique de 30 le nombre d animaux tester dans une unit est de log 0 05 log 1 0 3 8 4 soit 9 animaux On choisira comme chantillon repr sentatif des animaux sevr s g s de 3 semaines des jeunes adultes entre 10 et 14 semaines et des adultes g s de plus de 6 mois 12 Il faut veiller ne pas prendre des animaux trop g s car le taux d anticorps non sp cifiques augmente avec l ge Les infecti
19. ou ampoules impr gn es de spores bact riennes non pathog nes qui sont introduites avant st rilisation dans l endroit jug le moins accessible aux agents st rilisants A l issue du processus de st rilisation les indicateurs sont mis dans des milieux de cultures appropri s susceptibles d assurer le d veloppement optimal des spores L absence de d veloppement de spores t moigne alors de l efficacit de la proc dure de st rilisation Apr s st rilisation des bo tes de g lose sont mises au contact des surfaces tester ou ouvertes l air ambiant L absence de d veloppement de micro organismes permet de v rifier l efficacit du processus de d contamination du mat riel et des surfaces Indicateurs chimiques L utilisation de bandes bandelettes ou ampoules introduites avant st rilisation permettent par leur changement de couleur de contr ler les param tres physiques n cessaires la st rilisation mais ne permettent pas de confirmer la destruction totale des germes et des spores 11 II 3 EQUIPEMENTS IL 3 1 Equipements g n raux On entend par quipement Le circuit et le syst me de traitement de l air Le syst me de traitement de l eau Le mat riel de stabulation bac de cages grilles couvercles et biberons isolateurs portoirs armoires ventil es Les hottes de change Le mat riel de laverie machine laver les cages machine laver les biberons L
20. pour les m taux Inactiv par les mati res organiques Irritant pour la peau et les muqueuses Dur e de conservation limit e pour la solution dilu e Sensible la lumi re et la chaleur Glutarald hydes Formulations 2 D sinfection de haut niveau pour quipement sensible la chaleur Non corrosifs pour les m taux Actifs en pr sence de mati res organiques La st rilisation peut se faire en 6 10 heures Extr mement irritants pour la peau et les muqueuses La dur e de conservation diminue lorsqu il est dilu efficacit de 14 30 jours selon la formulation Co t lev Compos s ph noliques D sinfectants niveau d activit faible ou interm diaire Nettoient les sols les murs et le mobilier Laissent un film r siduel sur les surfaces Disponibles sur le march avec ajout de d tergents pour un nettoyage d sinfection en une seule tape Peuvent tre absorb s par la peau ou le caoutchouc Un usage r p t peut rendre collants certains rev tements de sol synth tiques Compos s d ammonium quaternaire En raison de leur pouvoir d tergent ils entrent dans la composition de nombreux produits d tergents d sinfectants pour sols surfaces et mobilier D sinfectants faible niveau d activit Non corrosifs Utilisation limit e comme d sinfectants car peu actifs sur les virus et les spores bact riennes Sous forme gazeuse d contamination
21. C3H BALB c DBA 2 TE a Ectromelia virus 1 lympho des foie Variable Variable 5 syst mes et vaccina antigen rat Pustules l thargie rate x fonctions Contaminant du prostration mort subite mat riel bioloeioue N croses multiples rate g que gg lymphatiques thymus foie 40 VIRUS Fin INFECTIOLOGIE INTERFERENCE AGENT HOTE ee ee 3 AVEC LA REMARQUES Morbidit Mortalit Q RECHERCHE Mouse MAR 0 par Asymptomatique SNC MAdl Treotion Souris polytropique naturelle par adenovirus poA MAd ND infection infection naturelle rein tractus MAdI type let2 naturelle sauf chez les IDp gastro intestinal intestin exceptionnelle Asymptomatique m me chez IDp Exceptionnellement Tractus gastro Contaminant Reovirus Tics chez le jeune intestinal occasionnel type 3 Rongeurs dizestif Faible Faible diarrh es jaunisse immunologie des tumeurs et Reo 3 8 alop cie carcinogen se lign es abdominale avec apoptose cellulaires n crose h patique et foie jaune Asymptomatique Contaminant Virus pouvant tre si T bre f du mat riel po 2 d tect dans les PA A biologique Hantavirus Rongeurs rectes ND ND poumons 10 jours es Transmission D R apr s l infection p i iue principalement puis dans l urine et paner T par les variable chez la salive Phone a rosols 41 BACTERI
22. ES ORGANO INFECTIOLOGIE INTERFERENCE AGENT HOTE TROPISME SIGNES CLINIQUES AVEC LA REMARQUES Morbidit Mortalit RECHERCHE F ces d shydrat s prolapsus rectal d incidence variable Tractus gastro Citrobacter EERE A 3 taille r duite et ou mortalit intestinal test Faible Variabl ae 5 ee rodentium souris CRIS Hs anabe au sevrage morbidit et immunologie mortalit augment e chez oncologie IDp G n ralement subclinique athologies plus fr quentes R Parasite p gies p q Syst me gastro f S Variable chez les jeunes sevrage 3 intracellulaire Clostridium Variable p intestinal et cardio x iliformi M if Intestin foie selon 2 Anorexie diarrh es i obligatoire piliformis ammif res A peut tre 5 ee pulmonaire Foie i Tyzzer c ur Ph te et re inflammation de l il um toxicologie diagnostique par y Pisolat n croses focales foie et ou ge IFA ELISA zootechnie c ur ad nopathie PCR m sent rique Polytropique En g n ral inapparent chez 24 i tet is Si Pr dilection Jusqu Re RUTIS Signes x Souris rat tractus 100 cliniques ap paraissent apres Dermatologie Corynebacterium TA immunosuppression stress Infections hamster cochon respiratoire signes Faible 3 immunologie kustcheri a i Ge ou co infection Abces naturelles rares d inde oreille moyenne cliniques 5 x oncologie ne
23. L obtention et le maintien des diff rents statuts pr sent s dans le tableau 2 passent par un environnement contr l notion de barri re et par la mise en place d un programme de surveillance sanitaire des animaux I 2 CONTROLES SANITAIRES IIL 2 1 Rappel de quelques d finitions et g n ralit s e Une unit microbiologique est une entit microbiologiquement ind pendante dans laquelle par convention tous les animaux poss dent le m me statut sanitaire Selon l organisation de l Etablissement il peut s agir de la structure dans sa totalit d une seule pi ce d h bergement d une armoire ventil e d un isolateur e La pr valence est le pourcentage d animaux porteurs d un pathog ne donn dans une population e Une infection r sulte de la pr sence et de l activit d un agent bact rien ou viral e Une infestation est une maladie r sultant de la pr sence et de l activit d un agent parasitaire e Une pizootie est une maladie qui affecte simultan ment un grand nombre d animaux e Une enzootie est une maladie qui s vit en permanence dans une population animale e Une zoonose est une maladie qui se transmet de l animal l homme et vice versa e Un agent opportuniste est une bact rie un virus un champignon ou un parasite normalement non pathog ne mais qui peut le devenir dans certaines circonstances immunod ficience inn e ou acquise des animaux surcontamination Les opportunistes les plus fr quent
24. MENT MESURES DE CONFINEMENT L1 AI L2 A2 L3 A3 L4 A4 Prescription Prescription Prescription Prescription a Conception du laboratoire 1 Signalisation du laboratoire pictogramme danger non oui oui oui biologique 2 Laboratoire s par des autres locaux au moins par OO te oui oui oui oui 4 Acc s DL et verrouillable oui GA un oui Ea un Acc s Eo n pour les seuls travailleurs autoris s Ea Possibilit de fermer herm tiquement le lieu de ion travail pour permettre la d sinfection 6 Filmation de txir extrait du lieu dewavail oui EE oui ES 6 Fin de Fire du lieu dewavail n de l air extrai lieu de travail ES n ES 7 Filtration de l air entrant dans le lieu de travail 8 Pr sence d une fen tre d observation ou d un syst me quivalent permettant de voir les non non oui oui occupants 10 Maintien d une pression n gative dans le A i D non non oui 2 oui laboratoire par rapport aux zones voisines 11 Alarme pour d tecter tout A a ui ES z Em ES ui ES A a de la pression de l air 12 Approvisionnement en nergie M ne CE ue de PP 8 q opiomel a CE b A internes Em oui opel type II Pope type II oui EE Il 1 Poste de s curit a ou opel Pope ou EE MI 35 NIVEAUX DE CONFINEMENT MESURES DE CONFINEMENT Li AI L2 A2 L3 A3 L4 A4 Prescription Prescription Prescription Prescription Change V tements complet V tement de protection i i adapt s et
25. Un h bergement dans un isolateur ou un portoir ventil en d pression est pr f rable Un contr le sanitaire doit tre r alis g n ralement partir d animaux sentinelles test s apr s un minimum de deux semaines d exposition avec les animaux en quarantaine une dur e de quatre huit semaines est cependant conseill e Si le r sultat du contr le est satisfaisant les animaux pourront tre introduits Dans le cas contraire une d rivation par c sarienne ou par transfert d embryons sera n cessaire 31 III 4 2 L introduction d animaux Trois cas de figure peuvent se pr senter 1 Les animaux sont de statut sanitaire connu et compatible avec l Etablissement ils proviennent le plus souvent d leveurs agr s les animaux sont produits dans des zones SPF ou SOPF La quarantaine peut alors se r duire une p riode d acclimatation des animaux avant leur utilisation 2 Les animaux proviennent d un tablissement qui maintient ses animaux sous barri re et pr sente un dossier sanitaire satisfaisant Celui ci devrait comprendre l historique des contr les au minimum les trois derniers r alis s En compl ment de ce bilan il est souhaitable de conna tre les modalit s du programme de surveillance sanitaire l organisation et le fonctionnement de l tablissement fournisseur ainsi que les ventuels traitements m dicamenteux qui ont pu tre mis en place cf annexe 4 La quarantaine correspond
26. agent pathog ne est la d contamination des lign es par c sarienne aseptique transfert d embryons FIV ou ICSI associ e une d sinfection du mat riel et des locaux et la mise en place d un vide sanitaire absence d animaux pendant une dur e adapt e la survie dans le milieu du pathog ne identifi gt La c sarienne aseptique Cette m thode consiste pratiquer une hyst rectomie aseptique sur une femelle contamin e av r e ou suppos e et faire lever les nouveaux n s par une femelle nourrice de statut sanitaire contr l Cette m thode n cessite une synchronisation entre l hyst rectomie qui doit tre pratiqu e le plus pr s possible de la date pr sum e de mise bas et la mise bas de la nourrice dont les petits sont euthanasi s L hyst rectomie aseptique n emp che cependant pas le passage ventuel de pathog nes transmission verticale de la m re au f tus comme Mycoplasma pulmonis 26 Le transfert d embryons La m thode consiste accoupler un m le fertile avec une femelle superovul e par un traitement hormonal permettant d augmenter le nombre d ovocytes produits et de synchroniser son cycle ovarien avec celui de la femelle receveuse Les oviductes contenant les embryons sont pr lev s par l exp rimentateur les embryons sont ensuite r cup r s et lav s dans des bains successifs de milieu appropri de fa on ce que d ventuels contaminants soient limin s par dilut
27. aine et contr le sanitaire open with quarantine L Introduction directe open Suivi sanitaire health surveillance Fr quence des bilans monitoring frequency ClAnnuelle annually O Bisannuelle semi annually L Trimestrielle quaterly L Mensuelle monthly L Autre other pr cisez explain Animaux test s health status determined by C Animaux sentinelles sentinel program e nb cages sentinelles nb cages dans la pi ce sentinel boxes per animal boxes in the room e nb d animaux sentinelles cage mice per sentinel box e sentinelles par contact L Direct direct sentinel C Indirect liti re souill e dirty bedding sentinel L Pr lev s au hasard animals sampled directly e nombre effectif global de la pi ce Number per total animals in the room Acc s des chercheurs aux zones d h bergement does research staff access to the animal facility C Oui yes non no Retour possible des animaux sortis de l animalerie can rodents be returned to room facility after removal C Oui yes non no 48 Pathog nes d tect s ou autre probl me sanitaire concernant la pi ce d h bergement des animaux import s List of pathogens or other health problems in room Pathog nes mis en vidence dans l animalerie au cours des 6 derniers mois Lis tof pathogens or potential pathogens present in other rodent rooms during the last 6 months Mesures sanit
28. aires mises en uvre traitement ventuel d tailler d contamination des locaux repeuplement management of detected pathogens 49 ANNEXE 5 DOSSIER TYPE ARMOIRE VENTILEE R dacteur V rificateur Approbateur Qualit Responsable Qualit RMQ Qualit Directeur Animalerie Nom Anne Dupont Administratif Nom Bruno Martin Date 18 03 2004 Nom Marie Durand Date 18 03 2004 Date 18 03 2004 Annexe 5 1 __ Fiche signal tique Armoires ventil es Mod le Marque N d inventaire Date de mise en service Emplacement pi ces de stabulation Animalerie Responsable Contact maintenance panne Caract ristiques particuli res et consignes importantes notice d utilisation et d entretien e dimensions Enceintes type A 1460 x 650 x 1830 mm Enceinte type B 1460 x 450 x 1830 mm e 6 ensembles de 2 enceintes en surpression type A aliment es par caisson de soufflage un caisson pour 2 armoires e ensemble de 2 enceintes type A lenceinte type B aliment es par caisson de soufflage un caisson pour 3 armoires e capacit s Enceintes type A 84 cages type 2 ou 112 cages type 1 sur 6 tag res Enceinte type B 42 cages type 2 ou 56 cages type 1 sur 6 tag res e Caissons de soufflage avec variateur de vitesse et alarme e Filtration Caissons de soufflage moteur pr filtre d entr e m dia
29. croissance des micro organismes sur les tissus vivants Un agent st rilisant d truit toutes les cellules vivantes les spores viables et les virus Il n y a pas de d sinfection ou de st rilisation efficace sans nettoyage humide pr alable l aide de d tergents IL 2 2 Principaux agents d sinfectants et st rilisants Il est noter que plusieurs facteurs peuvent modifier l efficacit des agents pr sent s dans le tableau 1 pr sence de mati res organiques sang s rum expectorations temp rature humidit relative concentration et temps de contact C est pourquoi il est imp ratif de suivre les recommandations des notices techniques pour obtenir une action optimale de ces produits Tableau 1 Propri t s d action des principaux agents d sinfectants et st rilisants d apr s 10 11 D sinfectant Usages Avantages Inconv nients Alcool thanol 70 D sinfectant niveau d activit interm diaire D sinfection des surfaces Sans r sidus Ne tache pas Pas de p remption Volatil en contradiction avec le temps de contact long requis pour l activit d sinfectante Inactiv par les mati res organiques Peut durcir le caoutchouc ou d t riorer les colles Hypochlorite de sodium eau de Javel D sinfectant niveau d activit interm diaire D sinfection des surfaces Faible co t Actif sur le prion concentration et temps de contact adapter Corrosif
30. ct riennes et sont lourdes mettre en uvre 23 IIT 2 4 3 Cultures bact riennes Elles permettent l isolement des micro organismes par l utilisation de milieux de culture s lectifs et non s lectifs pour la croissance Les micro organismes sont ensuite identifi s d apr s leurs caract ristiques morphologiques et biochimiques Limites des cultures bact riennes Certains kits type galeries API destin s aux cultures bact riennes humaines ne permettent pas d identifier les souches bact riennes des animaux de laboratoire telles que Pasteurella et Citrobacter rodentium Ces galeries peuvent toutefois tre utilis es pour une premi re approche d identification Certaines bact ries sont tr s difficiles cultiver telles que Clostridium piliformis Helicobacter sp et Streptobacillus moniliformis De plus certains agents pathog nes ne sont pas retrouv s dans les l sions qu ils ont induites ex Citrobacter rodentium 111 2 4 4 Examens microscopiques La recherche des parasites externes et internes chez les animaux de laboratoire se fait par une combinaison de techniques observation directe la loupe binoculaire pelage contenu intestinal technique de flottaison scotch test Pour les n matodes il est n cessaire de croiser ces diff rentes techniques en raison des diff rentes phases de leur cycle de vie adultes larves et ufs et des diff rents sites de colonisation chez leur h te Limites des
31. d ration les questions suivantes 1 Le micro organisme mis en vidence fait il partie de la liste d exclusion de l Etablissement Chaque Etablissement d termine ses objectifs sanitaires et par cons quent sa liste d exclusion de micro organismes Le programme de surveillance sanitaire peut ne pas se limiter la liste d exclusion La d tection par exemple d un germe opportuniste est sans incidence sur le statut SPF des animaux et en pratique il est inutile de r aliser une d contamination dans une animalerie conventionnelle suite la pr sence d amibes De m me en l absence de sympt me clinique la pr sence de bact ries ne justifie pas syst matiquement un traitement antibiotique 2 Existe t il des interf rences potentielles avec les exp riences mises en uvre Il incombe chaque exp rimentateur d identifier avec la personne comp tente les interf rences possibles entre les pathologies et ses r sultats exp rimentaux 3 Des manifestations cliniques sont elles pr sentes 4 Existe t il un risque pour l Homme En cas de r ponse affirmative l une de ces questions des mesures d limination du pathog ne doivent tre prises Selon l agent pathog ne et son mode de transmission il peut s agir d un traitement m dicamenteux ex lors de parasitisme ou d un arr t momentan de la reproduction ex en pr sence de MHV ou de virus Senda La mesure d limination la plus efficace de l
32. du portoir sera donc plus r aliste IIT 2 6 2 D tection du virus Mouse Parvovirus l aide de deux m thodes diagnostiques test ELISA et PCR Le tableau 4 pr sente les quatre situations possibles Tableau 4 28 Interpr tation Cas 1 l animal test a t expos au Mouse Parvovirus et a eu le temps de d velopper un titre suffisant d anticorps d tectable par ELISA une autre m thode s rologique IFA ou HAI pourrait le confirmer et la PCR effectu e sur les n uds lymphatiques a mis en vidence la pr sence du virus l excr tion virale est tr s probable Cas 2 l animal a t expos au Mouse Parvovirus et a eu le temps de d velopper un titre d anticorps d tectable par ELISA une autre m thode s rologique IFA ou HAI pourrait le confirmer et le r sultat PCR n gatif indique que l animal n est probablement pas excr teur du virus au moment du test Cependant un animal adulte immunocomp tent infect par le Mouse Parvovirus peut pr senter des phases intermittentes d excr tion virale Cas 3 l animal n a pas eu le temps de d velopper des anticorps d tectables par ELISA ou est immunod ficient et le r sultat PCR positif indique que l animal est en infection aigu ou en infection chronique s il est immunod ficient l excr tion virale est donc tr s probable Cas 4 L animal n a pas d velopp un taux d anticorps d tectables par ELISA une autre m th
33. e des ANIMAUX sessssessesesenenennnnennnnnnnnses 30 II 4 Gestion des introductions d animaux et de mat riel biologique ss 31 I4 1 La quarantaine Mie nn en ne M en ann etat diese 31 11 42 L introduction d animaux hi nine E EEEE N E SR E N aies 32 IIL 4 3 Introduction de mat riel biologique ss 32 II 5 R gles de confinement pour les animaux infect s et g n tiquement modifi s 0000 33 Annexe 1 Description des niveaux de confinement mettre en uvre dans des tablissements d exp rimentation animale o sont utilis s des agents biologiques pathog nes ou OGM 35 Annexe 2 Interf rences des principaux agents infectieux avec les r sultats exp rimentaux 38 Annexe 3 Contr le sanitaire exemples d agents pathog nes murins rechercher sessen 45 Annexe 4 Exemple d information recueillir lors de transferts d animaux Annexe 5 Dossier type Armoire ventil e sise An nexe 5 l Fich signal nique sisisshnmints a tan o I ARE E Annexe 5 2 Contr le et maintenance Annexe 5 3 Mode d emploi Annexe 5 4 Mode op ratoire Changement des filtres Annexe 6 R f rences bibliographiques n se Introduction En France un Etablissement d Exp rimentation Animale est une structure dont le statut juridique est d fini par le d cret 87 848 du 19 octobre 1987 Ce terme recouvre des entit s qui peuvent avoir des missions vari es et donc des niveaux d
34. e l ensemble En effet certaines infections asymptomatiques pour une esp ce peuvent tre particuli rement d l t res pour une autre Bordetella bronchiseptica peu pathog ne pour le lapin est tr s pathog ne pour le cobaye Chez les animaux ax niques et gnotox niques h berg s en isolateur il faut surtout rechercher les germes environnementaux bact ries car le risque d introduire des virus ou des parasites est faible Chez les animaux de statut SOPF il faut largir la recherche aux agents opportunistes Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Pneumocystis carinii Staphylococcus sp Il est important de conserver un historique des r sultats particuli rement pour les agents pathog nes de faible pr valence ex Mycoplasma pulmonis dont la pr valence est g n ralement limit e 30 et en cas d h bergement en portoirs ventil s diss mination plus lente et limit e des agents pathog nes Lors de transfert d animaux cet historique regroupant les r sultats sur les 18 derniers mois doit pouvoir tre mis disposition des destinataires 21 IIL 2 4 M thodes de d pistage II1 2 4 1 S rologie Bas e sur la mise en vidence des anticorps cette m thode est adapt e au d pistage des infections virales mais elle est inappropri e pour d tecter les infections bact riennes gt Sensibilit et sp cificit des tests s rologiques Les quatre situations expos es dans le tableau 3 peuvent se pr
35. e mat riel de d contamination et de st rilisation Le maintien d un bon tat sanitaire des animaux h berg s d pend du bon fonctionnement de ces quipements et de leur entretien rigoureux La protection des animaux comme celle des exp rimentateurs n cessite des locaux d di s et un mat riel ad quat La manipulation de produits toxiques chimiques ou radioactifs doit suivre la r glementation en vigueur Les quipements doivent faire l objet d une maintenance appropri e Il est galement important de mettre en place des dispositifs d alarme de secours et de proc dures d urgence en cas de panne C est pourquoi il est pr conis d tablir pour chaque quipement un dossier technique dont l objet principal est de fournir 1 PRE Une fiche signal tique de l appareil comprenant les marque et mod le la date de mise en service le responsable nom et coordonn es contacter pour le service de maintenance en cas de panne et n contrat maintenance si besoin la localisation implantation et les caract ristiques techniques particuli res Une fiche contr le et maintenance dans laquelle figurent les proc dures de mise en service nettoyage entretien et contr le du bon fonctionnement efficacit ainsi que si c est opportun les produits r actifs ou consommables n cessaires son fonctionnement Une fiche mode d emploi Une fiche consignes de s curit ou modes op ratoires particuliers s
36. ent Elle ajoute une barri re physique entre les cages micro environnement et la pi ce macro environnement Elle est souvent constitu e de plusieurs compartiments qui permettent d isoler des groupes de cages Elle est munie d un syst me de ventilation active propre et doit tre imp rativement quip e d un syst me d alarme en cas de panne de ce syst me car toute d faillance interrompant le renouvellement d air dans les cages peut devenir fatale pour les animaux si elle n est pas d tect e et corrig e rapidement attention aux week ends Figure 3 Armoire ventil e 14 Avec le portoir ventil fig 4 les cages couvercle filtrant sont ventil es individuellement IVC Individually Ventilated Cage car elles sont chacune raccord es un circuit g n ral qui fournit et extrait en permanence de l air filtr filtre HEPA fig 5 Les param tres d environnement l int rieur des cages ventil es sont ainsi am lior s par rapport aux cages couvercle filtrant statique et la fr quence du change peut tre ainsi diminu e Ce syst me permet une densification du nombre de cages au m tre carr diminue les risques d allergies du personnel et de contamination des animaux et de l environnement Les cages peuvent tre mises en pression positive ou n gative selon la cible prot ger du point de vue microbiologique animaux h berg s et manipulateur ou environnement Avec ce dispositif chaque cage est une unit mic
37. ers une population d animaux colonie dans la fig 8 peut avoir lieu par contact direct entre animaux et ou indirect par des vecteurs anim s ou inanim s Les sources de contamination sont multiples rongeurs contamin s insectes personnel mat riel aliment eau et les voies de transmission sont vari es oro f cale placentaire a rienne fig 8 Figure 8 Sources de contaminations des rongeurs et lagomorphes de laboratoire Personnel Be Insectes t A Contact R servoir C LE Mat riel A Vecteurs re E inanim s Aliment Liti re Vecteurs anim s Poussi res a rosols Transmission a rienne 30 Afin de conserver le statut sanitaire choisi pour les animaux des mesures doivent tre mises en place dans l organisation de l Etablissement Des barri res efficaces doivent emp cher l intrusion de rongeurs sauvages et d insectes Un bon renouvellement d air est indispensable ventilation efficace La mise en place de pressions contr l es dans les diff rents locaux permet de r duire la diss mination des agents pathog nes une surpression limite les risques de contamination ext rieure recommand e pour une zone SPF et une d pression limite la propagation de micro organismes dans l environnement recommand e pour une zone de quarantaine ou une zone confin e L acc s de l Etablissement doit tre strictement limit au personnel autoris les personnes qui y p n tre
38. es de biologie mol culaire Ces techniques sont difficilement applicables en routine pour tester un grand nombre d animaux et il faut conna tre les tissus cibles pour chaque agent pathog ne recherch De plus certains agents pathog nes peuvent persister l tat latent dans l organisme excr tions intermittentes Faux n gatifs On peut observer des r sultats faussement n gatifs si la qualit des chantillons n est pas bonne rendement insuffisant dans l extraction des acides nucl iques d gradation des acides nucl iques pr sence de contaminants inhibant la r action PCR si la m thodologie utilis e n est pas correcte amorces oligonucl otidiques choisies dans une s quence d l t e ou bien encore si le tissu analys n est pas appropri Faux positifs La moindre contamination de l chantillon dans la mesure o la PCR est une m thode tr s sensible peut donner un r sultat positif II 2 4 6 Cas particuliers Chez les rongeurs immunod ficients inn s ou acquis apr s irradiation ou chez les animaux g n tiquement modifi s avec des r percussions sur le syst me immunitaire connues ou ignor es de l exp rimentateur les techniques s rologiques sont inappropri es Il faut dans ce cas utiliser des techniques de biologie mol culaire type PCR et RT PCR et rechercher des l sions plus fr quemment que chez les animaux immunocomp tents Chez les lapins h berg s en groupes de taille r duite
39. exigence et de contrainte diff rents les uns des autres Ces missions peuvent concerner aussi bien la g n ration la conservation et l h bergement d animaux que leur distribution ou se r duire parfois la simple r alisation de protocoles exp rimentaux L objectif de ce document est de fournir au responsable d un Etablissement d Exp rimentation Animale ainsi qu aux utilisateurs de cet Etablissement des informations sur les principes de base concernant l h bergement des rongeurs et des lagomorphes afin de garantir une exp rimentation animale de qualit Le document propos fait tout d abord le point sur les aspects r glementaires auxquels est soumis un Etablissement d Exp rimentation Animale aborde ensuite les principes d am nagement et d entretien des locaux pour finir sur les moyens de contr le et de ma trise du statut sanitaire des animaux Le lecteur trouvera galement en annexe un ensemble de donn es techniques I CADRE REGLEMENTAIRE I 1 LES TEXTES Depuis 1987 le d cret n 87 848 1 d finit les conditions dans lesquelles peuvent tre pratiqu es les exp riences sur des animaux vert br s Il a t modifi par le d cret 2001 464 du 29 mai 2001 et compl t par le d cret 2005 264 du 22 mars 2005 2 3 Ces textes sont inclus dans la partie r glementaire du code rural 4 Enfin trois arr t s de 1988 d finissent les modalit s d application de ces d crets 5 6 7 I 2 L ETABLISSEMENT
40. filtres peuvent tre r utilis s apr s lavage l eau savonneuse et s chage Il est important d en avoir plusieurs jeux et de limiter le nombre de r utilisations Ils sont chang s lorsqu ils sont ab m s trop cras s ou d chir s e Pr filtre de sortie et filtre charbon actif Situ s lat ralement l ext rieur des armoires c t oppos l arriv e d air 1 D visser les 4 crous a lettes en plastique noir et d monter l ensemble support de pr filtre Enlever l pingle de maintien en fil puis le pr filtre Changer le filtre charbon actif si besoin Remplacer le pr filtre par un propre et remettre l pingle Remettre le support en place et revisser les crous ne D D NB Les pr filtres peuvent tre r utilis s apr s lavage l eau savonneuse et s chage Il est important d en avoir plusieurs jeux et de limiter le nombre de r utilisations e Filtres absolus Situ s dans les caissons de soufflage 1 D connecter l alimentation g n rale de l armoire 2 D visser les vis ailettes de la plaque arri re du caisson de soufflage 3 D visser les crous de la bride de serrage du filtre l aide d une cl puis enlever la bride 4 D gager le filtre absolu usag 5 Monter le filtre absolu neuf en ayant soin de mettre la face recouverte du joint en appui sur la paroi interne du caisson v rifier que le filtre est bien centr sur son support 6 Rembo ter la bride sur ses goujons et proc der ensu
41. i n cessaire Une fiche documents associ s contenant ou indiquant pr cis ment o les trouver les divers documents utiles se rapportant l appareil Exemple plan d ensemble contrat de maintenance documents r glementaires Un exemple de dossier pour des armoires ventil es est fourni en annexe 5 12 IL 3 2 H bergement des animaux 1 Les objectifs L h bergement des animaux doit garantir le bien tre des animaux tout en r pondant aux exigences sanitaires et exp rimentales Aussi les cages doivent satisfaire aux crit res suivants transparence surveillance visuelle des animaux tanch it facilit de nettoyage et de d sinfection r sistance aux chocs et aux proc d s de nettoyage d sinfection Diff rents types de mat riaux plastiques polycarbonate polysulfone polyetherimide r pondent ces exigences et sont utilis s par les fabricants qui proposent une gamme vari e de cages 2 Les cages La cage de base classique est constitu e d un bac plastique fond plein qui sera garnie de liti re recouvert d une grille en acier inoxydable comprenant une mangeoire et un emplacement pour le biberon D un point de vue sanitaire la diss mination des pathog nes entre des cages de ce type est moins contr l e a rosols en particulier c est pourquoi on parle de cage ouverte comprendre ouverte sur l environnement La cage classique est souvent utilis e dans le cadre d un h bergement conventionne
42. ion Ils sont r implant s par chirurgie aseptique dans l infundibulum de la femelle pseudo gestante obtenue par accouplement avec un m le vasectomis de statut sanitaire contr l Le transfert d embryon est la technique privil gier pour d contaminer des lign es infect es par un agent pathog ne passant la barri re placentaire Helicobacter Pasteurella LCM KRV Son efficacit vis vis des mycoplasmes est plus incertaine gt La f condation in vitro FIV Le sperme est r colt sur des m les de la lign e d contaminer il peut tre utilis directement ou congel Des ovocytes sont produits par des femelles superovul es et mis en contact direct avec le sperme Apr s 48h 72h de culture les morulas sont r implant es dans des femelles pseudo gestantes Toutefois les rendements de FIV sont faibles et certaines lign es sont r fractaires gt La f condation in vitro par Intra Cellular Sperm Injection ICSD Cette m thode consiste injecter la t te d un spermatozo de dans un ovocyte Elle donne d excellents rendements toutefois elle n cessite un quipement lourd et une tr s bonne ma trise de la micro injection Dans tous les cas de contamination av r e il faut rechercher l origine de la contamination afin de pr venir les r cidives La pr sence d agents opportunistes comme d agents pathog nes indique une rupture de barri re sanitaire et impose une r vision des proc dures de foncti
43. issement le nom et la qualification de la personne assurant la responsabilit de l entretien des animaux h berg s Le registre doit comporter autant de chapitres qu il y a d esp ces animales d tenues Il doit tre conserv pendant cinq ans Le registre de visite sert consigner tous les v nements li s au fonctionnement de l Etablissement programme de prophylaxie anomalie de la climatisation ou de la r gulation des param tres physiques mortalit anormale des animaux s quence de d sinfection des locaux entretien des machineries visites de personnes invit es et dysfonctionnements divers Il doit tre conserv au moins cinq ans Le registre des m dicaments sert consigner les entr es et les sorties des m dicaments dans le cadre exclusif de la r alisation des protocoles exp rimentaux 8 Ce registre doit tre conserv pendant dix ans Sa tenue est sous la responsabilit d une personne autoris e exp rimenter qui aura t d sign e par courrier comme le responsable m dicaments aupr s de la Direction D partementale des Services V t rinaires et de l AFSSAPS II LOCAUX ET EQUIPEMENTS IL 1 PRINCIPALES CARACTERISTIQUES DES LOCAUX Les diff rents types de pi ces pr voir dans une animalerie sont Des pi ces d h bergement de pr f rence s par es pour chaque esp ce animale Des pi ces d h bergement confin pour les animaux transg niques ou infect s Un local isol de quaran
44. ite l inverse du d montage ANNEXE 6 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1 D cret en Conseil d Etat n 87 848 du 19 octobre 1987 pris pour l application de l article 464 du code p nal et du troisi me alin a de l article 276 du code rural et relatif aux exp riences pratiqu es sur les animaux 2 D cret n 2001 464 du 29 mai 2001 modifiant le d cret n 87 848 du 19 octobre 1987 pris pour l application de l article 454 du code p nal et du troisi me alin a de l article 276 du code rural et relatif aux exp riences pratiqu es sur les animaux 3 D cret n 2005 264 du 22 mars 2005 portant cr ation d un comit national de r flexion thique sur l exp rimentation animale 4 Code rural Livre II partie r glementaire Titre Ier Chapitre IV Section 5 Sous section 3 Exp rimentation sur l animal R 214 87 R 214 130 5 Arr t du 19 avril 1988 fixant les conditions d agr ment d am nagement et de fonctionnement des tablissements d exp rimentation animale 6 Arr t du 19 avril 1988 fixant les conditions de pratiquer des exp riences sur les animaux J Arr t du 19 avril 1988 fixant les conditions de fournitures aux laboratoires agr s des animaux utilis s des fins de recherches scientifiques ou exp rimentales 8 Arr t du 21 mai 2003 relatif la d livrance et l utilisation de m dicaments employ s par les tablissements disposant d un agr ment pour pratiquer l exp rimenta
45. l s en groupes sociaux harmonieux Les cages doivent avoir des dimensions et des quipements tablettes permettant aux animaux de faire de l exercice mais aussi de se cacher Des sols pleins doivent tre pr f r s aux sols grillag s pour pr venir les l sions des pattes Si le choix est fait d un h bergement sur liti re absorbante sciure de bois non r sineux ou papier absorbant celle ci doit tre chang e deux trois fois par semaine pour limiter les d gagements d ammoniac Les zones d h bergement lapin doivent r pondre aux contraintes li es l esp ce temp rature pr filtrations des extractions pour viter le colmatage des filtres par les poils 16 HI GESTION SANITAIRE DES ANIMAUX Les modalit s d h bergement des animaux d pendent des esp ces du statut sanitaire recherch et des contraintes de s curit qui d coulent des protocoles mis en uvre infection par des micro organismes induction de modifications g n tiques administration de produits toxiques aux animaux IIL 1 STATUT SANITAIRE DES ANIMAUX L obligation faite par la r glementation de maintenir les animaux dans des conditions satisfaisantes et l int r t scientifique de ma triser les interf rences entre le statut microbien des animaux et les exp rimentations a amen les professionnels d finir cinq statuts sanitaires diff rents qui sont pr sent s dans le tableau 2 Tableau 2 Classement des diff rents statuts sa
46. l avec en moyenne un change par semaine Il est cependant possible d ajouter un couvercle plastique quip d un filtre on parle alors de cage couvercle filtrant fig 1 Le filtre rajoute une barri re physique suppl mentaire entre la cage et l ext rieur r duisant ainsi les risques de contamination des animaux et de l environnement et la diffusion d allerg nes En contrepartie le renouvellement de l air dans la cage est r duit avec pour cons quence une l vation des param tres environnementaux temp rature humidit taux d ammoniaque et taux de dioxyde de carbone plus rapide qu en cage ouverte d o la n cessit avec ce dispositif d adapter en cons quence la fr quence du change 1 2 fois par semaine selon la densit en animaux Figure 1 Cage couvercle filtrant 3 Les modes d h bergement Les cages peuvent tre plac es sur un portoir simple dans une armoire ventil e enceinte prot g e sur un portoir ventil ou encore dans un isolateur 13 Le portoir simple fig 2 est g n ralement constitu d tag res en acier inoxydable sur lesquelles sont d pos es les cages ouvertes ou couvercle filtrant C est un quipement l mentaire et conomique Figure 2 Portoir simple L armoire ventil e fig 3 est une solution int ressante pour la protection sanitaire ou permettre des cycles invers s m me si sa capacit d h bergement reste limit e compar e son volume d encombrem
47. les mycobact ries et les spores tue les bact ries v g tatives la plupart des virus et des 10 IL 2 3 Autoclavage L autoclavage est une m thode de st rilisation par chaleur humide l agent st rilisant tant la vapeur d eau satur e sous pression qui permet de st riliser aliment liti re eau mat riel et d inactiver certains d chets infectieux et ou OGM avant leur limination Il n cessite un quipement sp cifique autoclave dont l achat et le fonctionnement repr sentent un co t important et dont l utilisation est r glement e r vision d cennale de l appareil et formation sp cifique des utilisateurs formation agr e de conducteur d autoclave Lors de son utilisation il faut choisir le cycle adapt au type de mat riel st riliser ex 120 C pendant 20mn pour les cages autoclavables ou l aliment et v rifier le bon d roulement de ce cycle temp rature et dur e du plateau de st rilisation Cette m thode permet l inactivation des prions cycle de 18 mn 134 C IL 2 4 Contr les de st rilisation et de d sinfection Les contr les peuvent se situer deux niveaux d une part en v rifiant le bon d roulement du processus de st rilisation contr le des param tres physiques et chimiques et d autre part en contr lant la st rilit des mat riels Ces contr les sont r alis s l aide d indicateurs biologiques ou chimiques Indicateurs biologiques Il s agit de bandelettes
48. mbre d animaux test s Aussi du fait de la taille r duite de la population tester dans le cas des h bergements en isolateurs ou en armoires ventil es et du manque de place il est recommand d introduire 3 5 sentinelles et de compenser ce faible nombre en les mettant en contact direct et ou indirect avec le plus grand nombre possible d animaux ou de liti res d aliments et d eau de boisson provenant de cages diff rentes 1112 3 3 P riodicit des contr les sanitaires et agents pathog nes rechercher Il est pr conis de r aliser des contr les tous les 3 mois il est noter que dans le cas de transfert d animaux entre tablissements un bilan sanitaire de moins de 3 mois est g n ralement demand par le destinataire Cette fr quence peut tre modul e selon le fonctionnement de l Etablissement les pathog nes recherch s et la taille de l chantillon test Par exemple en cas d introductions fr quentes d animaux ou de mat riels biologiques dans l unit tester 3 5 animaux par mois permet de d tecter pr cocement une infection De la m me fa on la recherche du virus MHV qui est tr s r pandu et interf re fortement avec les r sultats exp rimentaux peut tre aussi programm e chaque mois Dans les Etablissements o plusieurs esp ces animales sont h berg es le statut sanitaire de chaque esp ce doit tre valu et le bilan sanitaire de chacune doit comporter les r sultats positifs d
49. naire r f rent vet Tel Fax E mail Responsable de l animalerie responsible of the facility Tel Fax E mail H bergement Housinq e Nombre approximatif d animaux h berg s au total dans la structure Number of animals housed in the entire facility e Nombre approximatif d animaux dans la pi ce h bergeant les animaux envoy s Number of animals housed in the room e Syst me d h bergement Caging system L Conventionnel Conventional C Cage couvercle filtrant Filter topped cages C Portoir ventil Ventilated Racks C Isolateur Microisolator e Existe t il une zone d levage breeding zone C Oui yes non no e Hotte de change change station C Oui yes non no 47 V tements de protection Protective Clothing L Non none L Blouse lab coat L Gants gloves L Charlotte hair bonnet C Masque mask L Surhausses shoe covers L Autre other Provenance des animaux animals origines L Fournisseurs agr s breeders L Elevage interne self breeding L Autres sources collaboration multiple sources gt Nb approximatif d animaux introduits par an number of introduced animals per year Gestion des introductions animal facility status C Pas d introduction closed L Introduction apr s transfert d embryons open with embryo transfert C Introduction apr s mise en quarant
50. nitaires et des types d h bergement auxquels ils sont associ s Statut sanitaire DEFINITION H bergement Statut des animaux h bergeant une 1 Holox nique flore microbienne susceptible de Conventionnel conventionnel renfermer des organismes pathog nes pour l esp ce 2 H t rox nique SPF Specific Pathogen Free EOPS Exempt d Organismes Pathog nes Sp cifiques IOPS Indemne d Organismes Pathog nes Sp cifiques Statut des animaux exempts des agents pathog nes majeurs associ s une liste Le plus souvent celle tablie par la FELASA Zone prot g e Statut des animaux qui n h bergent ni agent pathog ne ni agent opportuniste Ce statut a t sp cialement cr pour les rongeurs immunod ficients Recommand en isolateur en condition st rile 3 H t rox nique SOPF Specific Opportunistic and Pathogen Free Animaux ax niques porteurs d un ou 2 Isolateur en condition 4 Gnotox nique plusieurs micro organismes connus st rile non pathog nes 5 Ax nique Animaux indemnes de micro Isolateur en condition germ free organismes d tectables st rile Recommandations de la Federation of European Laboratory Animal Science Associations 12 17 Le statut ax nique est principalement recherch pour le maintien et la d contamination des lign es le statut Gnotox nique est surtout recherch en microbiologie
51. nt doivent rev tir une tenue propre comportant au minimum une blouse des gants un masque une charlotte et des sur chausses Des protections suppl mentaires change complet combinaison peuvent tre n cessaires en fonction du niveau de confinement ou de protection de l Etablissement souhait Les locaux doivent tre maintenus dans un tat satisfaisant de propret Tout mat riel et consommable entrant dans l animalerie liti re nourriture cage eau instruments chirurgicaux doit tre convenablement d contamin au pr alable Les animaux doivent toujours tre manipul s avec des gants fins La circulation du personnel et du mat riel doit se faire du secteur propre vers le secteur sale I 4 GESTION DES INTRODUCTIONS D ANIMAUX ET DE MATERIEL BIOLOGIQUE L introduction d animaux vivants ou de mat riel biologique constitue un risque de contamination important qu il est n cessaire de ma triser L encore il incombe chaque Etablissement de d finir sa limite de tol rance en mati re d interf rences statut sanitaire programmes de recherche IL 4 1 La quarantaine D une mani re g n rale il est pr f rable de r aliser une p riode d isolement et d valuation de l tat de sant des animaux dans un local de quarantaine avant de les introduire dans l animalerie Ce local doit tre s par du reste des locaux tant d un point de vue physique un sas et une d pression que d un point de vue fonctionnel
52. ode s rologique IFA ou HAI pourrait le confirmer et la PCR ne met pas en vidence la pr sence du virus l animal n est pas infect Cette illustration souligne l importance en p riode de quarantaine a De croiser les m thodes diagnostiques pour viter surtout les faux n gatifs b De ne pas introduire trop vite les animaux un minimum de 10 15 jours est indispensable pour l observation d une s roconversion c De conna tre le statut immunitaire de l animal risque de faux n gatif en s rologie pour un animal immunod ficient d De conna tre les particularit s de l agent pathog ne recherch dans le cas du Mouse Parvovirus il y a des p riodes intermittentes d excr tion virale chez un animal adulte immunocomp tent infect le temps de s roconversion est long minimum 6 semaines et la souche C57B16 est r sistante ce virus peu ou pas de s roconversion III 2 7 Conclusion Il est pr f rable de privil gier la pr vention des risques sanitaires plut t que d avoir radiquer un agent pathog ne Le programme de surveillance sanitaire doit tre tabli en fonction des besoins Le budget pr voir pour les contr les sanitaires est certes tr s important mais l impact des agents pathog nes qui interf rent avec le r sultat des exp riences est lui aussi tr s co teux 29 III 3 MAINTIEN DU STATUT SANITAIRE DES ANIMAUX La transmission d un agent pathog ne de son r servoir v
53. on purification Par exemple l antig ne NS 1 prot ine de l enveloppe commune tous les parvovirus utilis dans les tests ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay ne permet pas de caract riser les diff rentes esp ces de parvovirus mis en vidence En g n ral l ELISA et IFA immunofluorescence indirecte sont des tests plus sensibles mais moins sp cifiques que le test de HAI hem agglutination inhibition D autres techniques comme le western blot sont performantes mais ne sont pas utilis es en routine pour des raisons techniques et financi res 22 gt Limites des tests s rologiques a Cas de r sultats n gatifs Le r sultat d un test s rologique peut tre n gatif sur un animal infect test en p riode d incubation trop jeune immunod ficient ou immunotol rant De plus le fait de r aliser des pools de s rums peut faire passer le titre en anticorps ainsi dilu s sous le seuil de d tectabilit du test et conduire un r sultat n gatif C est la raison pour laquelle il n est pas conseill de m langer les s rums b Cas de r sultats positifs Des r sultats positifs peuvent tre obtenus chez des animaux non infect s mais atteints d une maladie auto immune ou inocul s avec du mat riel biologique ou encore porteurs d anticorps maternels On parle de faux positifs L existence de r actions crois es par exemple entre le virus Senda et Paramyxovirus humain ou entre Hanta
54. on des quipements avant sortie du ES ES ui ES laboratoire centrifugeuses PSM 36 oui dans le Pr sence d un autoclave oui sur le site Fo b timent Lexique Oui exigence Non pas d exigence Optionnel doit tre d cid au cas par cas sur la base de l valuation des risques la suite de laquelle ces mesures devront ou non tre appliqu es 1 Pour les nouvelles installations 2 Des d rogations exceptionnelles cette prescription peuvent tre accord es Consulter le paragraphe III de l annexe IIL 1 du Guide de la CGG 3 Lorsque des animaux de laboratoire sont d lib r ment contamin s par un ou plusieurs agents pathog nes ils doivent tre manipul s ou h berg s dans des locaux r pondant aux conditions et niveaux de confinement requis du fait de la classification du ou des agents pathog nes utilis s 37 ANNEXE 2 INTERFERENCES DES PRINCIPAUX AGENTS INFECTIEUX AVEC LES RESULTATS EXPERIMENTAUX Illustr es par le tableau ci dessous et issues des textes de r f rence suivants Natural pathogens of laboratory mice rats and rabbits and their effects on research D G Baker Clinical microbiology reviews 1998 4 231 266 Implication of infectious agents on results of animal experiments W Nicklas F Homgerger B Illgen Wilcke K Jacobi V Kraft I Kunstyr M Mahler G Pohilmeyer Esch Laboratory animals 1999 33 S1 S1 39 S1 87 Recommandations fo
55. onnement circulation du personnel tenue vestimentaire sp cifique nettoyage du mat riel Par ailleurs une cryoconservation syst matique des lign es pr cieuses est vivement recommand e de fa on pouvoir red marrer rapidement l levage d une lign e en cas de contamination 21 III 2 6 Exemples LII 2 6 1 D tection du virus MHV en fonction du mode d h bergement Dans le cas d un h bergement en cages ouvertes population sup rieure 100 animaux la pr valence du MHV agent pathog ne tr s contagieux sera d au moins 50 D apr s la formule ILAR le pr l vement au hasard de 5 animaux log 0 05 log 0 5 dans l unit devrait tre suffisant pour mettre en vidence l infection Dans le cas d un h bergement en portoirs ventil s la diss mination des pathog nes tant plus lente on peut consid rer que la pr valence du MHV sera d environ 10 Si on applique la formule ILAR en rempla ant le nombre d animaux par le nombre de cages qui doit tre sup rieur 100 et en consid rant que dans chaque cage unit microbiologique 4 animaux sur 5 sont contamin s soit 80 la pr valence du MHV est donc 0 1 x 0 8 0 08 log 0 05 log 1 0 08 36 cages Il faudrait donc pr lever une souris dans au moins 36 des cages du portoir pour d tecter le MHV dans l unit L utilisation d animaux une ou plusieurs sentinelles permettant de tester par contact direct ou indirect au moins 36 cages
56. ons tr s contagieuses ayant une pr valence lev e plus de 50 comme g n ralement le MHV pourront tre d tect es en testant un nombre d animaux moins important que les infections peu contagieuses qui pr sentent elles une faible pr valence H bergement en portoirs ventil s en cages couvercle filtrant Le pr l vement d animaux au hasard selon la formule de l ILAR n est plus applicable car chaque cage est une unit microbiologique distincte C est pourquoi un programme de surveillance qui utilise des animaux sentinelles est le plus appropri Le nombre d animaux sentinelles utiliser est toujours difficile valuer L objectif est de mettre les sentinelles en contact direct ou indirect avec le contenu d un maximum de cages Une sentinelle mise en contact avec les liti res l eau de boisson et les aliments de l ensemble des cages d un portoir ventil permettra ainsi une valuation satisfaisante du statut sanitaire des animaux de ce portoir 20 Petit nombre d animaux h berg s en isolateurs ou en armoires ventil es Selon les lois statistiques il faut tester un chantillon proportionnellement plus important dans une population de faible effectif par rapport une population de grande taille pour d pister un agent pr sent avec la m me pr valence dans chacune des deux populations Dans une petite population la probabilit de trouver un r sultat positif en pr levant des animaux au hasard augmente avec le no
57. ootie Epizootie o Sa 2 avec autres agents Mouse mais jusqu lors de la premi re Hautement infectieux PVM hepatitis 3 Jusqu 100 chez contamination interf rent tous 3 Souris Polytropique 3 3 Sendai salmonella virus 100 nouveaux asymptomatique chez syst mes et Contamination MHV n s l adulte diarrh e et mort fonctions ete des cellules pizootie chez les nouveaux n s p Mort chez les IDp ES sans changer leur n croses multifocales pluripotence Signes cliniques seulement suite Syst me gastro Rotavirus infection p ri natale intestinal Tres contagieux murin Souris Intestin ND ND Chers jeunes diarrh e physiologie g n rale Interaction avec autres EDM jaune l thargie nutrition zootechnie agents MHV abdomen gonfl Tr s contagieux pendant de la souche 3 ransmission ut rine D pendantde 1 h Syst me T iss m Mouse Cellules en et du virus Allant ee possible Tr s r sistant Te Souris mitose d asymptomatique Lara o ti ig dans l environnement rat ibroblastes ariable ariable l tal avec r quent contaminant MVMp et fibrobl p Variable Variable C57BL 6 l tal ne C D Fr q i D P hamster 1 et lympho T h morragie intestinale ct ie des tumeurs i DBA 2 ou r nale C3H transplantables BALB c hybridomes et lign es cellulaires Cellules en Syst me j LSA Fr quent contaminant Mouse mitose immunitaire conne parvo
58. paralysies c cit s Forte mortalit chez les IDp Protozoaires ids prostration fla Ie P PEF om de a Tractus gastro Favorise ag Po Rat souris Intestin Variable Variable E intestinal les Giardia muris l abdomen et mort S S immunologie surinfections Spironucl us muris S muris signes cliniques plus fr quents chez animaux au sevrage et IDp ibes Rares infection chez Mammif res Intestin Variable 0 souris et lapin ND Commensal intestinal Entamoeba sp A subclinique POR Tr s G n ralement sub D 3 se contagieux a rosols clinique Perte de Risque oids prostration P p Incidence faible Zoonotique prolapsus rectal chez 5 Oxyures immunologie faible pour immuno Rongeurs sujets fortement ne Syphacia muris DR transport d prim s pr dilection Caecum colon Forte 0 infest s IDp plus Syphacia oblevata AA ne intestinal S oblevata p d esp ce sensibles S muris Aspicularis tetraptera Pas croissance ufs tr s signes cliniques plus P j comportement r sistants fr quents chez dans animaux au sevrage is l environ et IDp nement z Diarrh es perte de nas Lapin cochon Variable ee 4 Coccidies ai poids ent rite et Tractus gastro K d inde Intestin h te Faible on Nombreuses esp ces Genre Emeiria sai Gags mort principalement intestinal rat souris sp cifique chez jeune lapin G n ralemen
59. r health monitoring of rodent and rabbit colonies in breeding and experimental units W Nicklas P Baneux R Boot T Decelle A A Deeny M Fumalli amp B Illgen Wilcke Laboratory Animals 2002 36 1 20 42 Infectious Diseases of Mice and Rats J R LINDSEY G A BOORMAN M J COLLINS C H HSU G L VAN HOOSIER amp J E WAGNER 1991 National Research Council Remarques Certains agents infectieux qui ne figurent pas dans les recommandations de la liste FELASA pourront tre recherch s Chacun doit avoir sa propre liste d exclusion des agents pathog nes Par exemple lors des greffes ou d injections il est recommand de rechercher les agents transmissibles l animal et pr sents dans le mat riel biologique utilis virus LDV ou Lactate Deshydrogenase elevating Virus De m me d autres agents infectieux doivent tre d pist s selon le domaine de recherche et les animaux utilis s Syst me respiratoire CAR bacillus Pneumocystis carinii SNC muscles reproduction Toxoplasma gondii Immunod prim s tous les agents opportunistes Morbidit nombre d animaux infect s par une maladie donn e pendant un temps donn dans une population 38 VIRUS ROLNO INFECTIOLOGIE INTERFERENCE AGENT HOTE TR OPISME SIGNES CLINIQUES AVEC LA REMARQUES Morbidit Mortalit RECHERCHE G n ralement Tr s contagieux LE ES a rosol interaction 0 adultes enz
60. rasbourg Jean Marie Heli s Universit de Strasbourg Monique Pressac Universit Paris 5 Sommaire I CADRE R GLEMENTAIRE nn sache 6 LE CON 22 US PRE RE RER ER RENE 6 I 2 L Etablissement d exp rimentation animale ses 6 ES Les personnels intimes TE E Done n ste da tU Re DS ETE T 6 d Les R I E AEE EAEI EEOAE E E eee sn este eee teste no essor eg os 7 IH LOCAUX ET EQUIPEMENTS ssssesesssessseseossesseeseossesseeseossesoeeseossossesseossessesseossossoseesesessosee 8 II 1 Principales caract ristiques des locCaUX sescssossesesocsossescsocsocsesosoosossesossossssesocsossssesocsosessoseoee 8 II 2 Entretien et d contamination des quipements et des locaUX essesesossoessscsocsosssscsocsossssoseoee 9 2 1 Pr ambule 5235565 han ans nr E E EE e eE E E EE E E EEEE es 9 II 2 2 Principaux agents d sinfectants et st rilisants sseeseeseeseseseessesrterrsreersstrrtssertesresrenrsserrrnserrenresrenens 9 1 23 Auto lavages ssre hein anna tin nanas PAM HR Eten nt nes 11 II 2 4 Contr les de st rilisation et de d sinfection 11 I 3 Edqiipements 555sssssessesirrsenesesnnesenienesstiisnsstniisereeeiense nee e ent nt sent noosus ce ons en es oe 12 11 3 1 Equipements g n raux sise tente EE EEEE Monnet te en fee tat de seen as een 12 11 3 2 H bergement des animaux trs rE ee eee ET et te asie tente its 13 III GESTION SANITAIRE DES ANIMAUX ssmennnnrnmmnnnnnennsnssnnennensennee 17 TII 1 Statut sanitaire des animau
61. robiologique voir IIL 2 1 part enti re condition de respecter des proc dures de manipulations strictes La coh rence du syst me implique par cons quent de maintenir galement sous barri re les animaux lors d op rations risque du point de vue sanitaire c est pourquoi le change doit tre r alis sous hotte fig 6 et les manipulations sous PSM Figure 4 Portoir ventil Figure 5 Cage couvercle filtrant pour portoir ventil 15 Figure 6 Hotte de change L isolateur fig 7 est une enceinte de protection flux turbulent bioconfinement qui permet une protection absolue de l animal de l utilisateur et de l environnement l air qui entre dans l isolateur et l air vacu sont filtr s par un filtre HEPA la manipulation des animaux peut s effectuer sans rupture du confinement puisque les animaux sont manipul s directement dans l isolateur l aide de manchettes souples avec gants interchangeables L isolateur peut fonctionner en pression positive ou n gative La faible capacit d h bergement en comparaison du volume d encombrement l investissement important du point de vue financier et la charge de travail pour le personnel en limite l utilisation pour des besoins particuliers production d animaux immunod ficients confinement de niveau 3 ou 4 Figure 7 Isolateur L h bergement des lapins peut se faire en parcs ou en cages Lorsque c est possible les animaux doivent tre stabu
62. rsonnes responsables de projets de recherche qui doivent demander formulaire cerfa 50 4340 aupr s de la DDSV de leur lieu d activit une autorisation d exp rimenter sur l animal vivant Cette autorisation personnelle ne peut tre obtenue que sous condition de suivi de cette formation de niveau I et d une formation initiale d au moins quatre ann es d tudes sup rieures dans les sciences biologiques ou de deux ann es d tudes sup rieures et de cinq ann es d exp rience professionnelle sous la responsabilit d une personne b n ficiant d une autorisation d exp rimenter L autorisation d exp rimenter est accord e pour cinq ans dans des limites concernant les domaines types d activit et esp ces animales utilis es Elle est renouvel e aupr s de la DDSV sur demande crite de l exp rimentateur Celui ci doit galement mentionner par crit toute modification ventuelle de son activit La formation de niveau II destin es aux personnes qui participent directement aux exp rimentations sur les animaux de laboratoire N anmoins la pratique des personnes ayant suivi la formation de niveau II ne peut se faire que sous la direction et le contr le d une personne titulaire d une autorisation d exp rimenter dont la responsabilit doit se limiter au contexte d une quipe La formation de niveau III destin e aux personnels charg s de l entretien et de l h bergement des animaux S ils participent
63. s sont Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Proteus sp e Un porteur sain est un animal qui ne pr sente pas de signe clinique de maladie infectieuse infection contr l e mais qui est potentiellement contaminant Le nombre d animaux infect s est souvent tr s sup rieur au nombre d animaux qui pr sentent des signes cliniques e Un r servoir est un animal porteur p renne d un agent pathog ne gt Un vecteur est un support anim ou inanim qui permet le transport et ou la transmission d un agent pathog ne IIL 2 2 Programme de surveillance sanitaire Il existe quatre raisons fondamentales de r aliser des contr les sanitaires Le risque zoonotique Les performances zootechniques Les interf rences possibles avec les r sultats exp rimentaux cf annexe 2 Les transferts d animaux ou de mat riels biologiques entre les Etablissements Chaque Etablissement fixe son niveau de qualit sanitaire d finition d une liste de micro organismes ind sirables liste d exclusion et met en place des mesures pr ventives barri res afin de l obtenir et de le maintenir Le programme de surveillance sanitaire permet de v rifier l efficacit de ces mesures et permet de savoir si le niveau sanitaire fix est atteint 18 L observation quotidienne des animaux obligation premi re du programme de surveillance sanitaire n tant pas suffisante pour d tecter des infections ou infestations inapparentes il es
64. senter l issue d un test diagnostique le test peut tre positif ou n gatif et l animal test peut tre porteur animal malade ou non porteur animal sain du pathog ne Tableau 3 Cas possibles de r sultats de tests s rologiques Animal malade Animal sain Test positif Vrai positif Faux positif Test n gatif Faux n gatif Vrai n gatif En statistique la sensibilit d un test est sa capacit de donner un r sultat positif lorsque l animal test est malade et sa sp cificit est sa capacit de donner un r sultat n gatif lorsque l animal test est sain Ces valeurs sont g n ralement donn es en pourcentage Sensibilit vrais positifs vrais positifs faux n gatifs Sp cificit vrais n gatifs vrais n gatifs faux positifs Ainsi plus un test est sensible plus le nombre de faux n gatifs est faible et plus un test est sp cifique plus le nombre de faux positifs est faible Les tests tr s sensibles sont surtout utiles pour s assurer qu une maladie n est pas pr sente notamment pendant la p riode de quarantaine Ensemble la sensibilit et la sp cificit d un test donnent une appr ciation de sa validit intrins que mais elles ne veulent rien dire prises s par ment par exemple un test avec une sensibilit de 95 n a aucune valeur si sa sp cificit n est que de 10 La sp cificit d un test d pend principalement de l antig ne utilis et de son mode de pr parati
65. sson et armoire sont des pr filtres permettant de retenir l essentiel de la poussi re de sciure en suspension Ils sont nettoy s chaque semaine aspiration puis lavage l eau savonneuse puis s chage et sont chang s lorsqu ils sont ab m s trop cras s ou d chir s e Filtres charbon actif armoire ne se nettoient pas sont chang s lorsqu ils ne sont plus efficaces odeurs soit environ tout les 6 8 mois e Filtres absolus caisson ne se nettoient pas sont chang s lorsqu ils sont colmat s diff rence de pression observ e au Kimo lt 5 mm puissance maximale du moteur soit environ tous les ans Annexe 5 3 Mode d emploi En utilisation normale 1 Ouvrir la porte 2 Prendre ou remettre des cages dans l armoire 3 Refermer la porte aussi rapidement que possible Par pi ce on ne doit ouvrir qu une seule armoire la fois et la refermer d s que possible Remarque les armoires sont en fonctionnement permanent sauf si aucun animal n y est pr sent Annexe 5 4 Mode op ratoire Changement des filtres Pour chaque entretien changement de filtre veiller d abord arr ter le moteur e Pr filtre de soufflage Situ s en fa ade des caissons de soufflage 1 Faire coulisser lat ralement le support de pr filtre 2 Enlever l pingle de maintien en fil puis le pr filtre 3 Le remplacer par un pr filtre propre et remettre l pingle 4 Remettre le support en place NB Les pr
66. symptomatique l cas clinique 4000 10000 animaux infect s sauf Interf rence avec Theiler s murine Muqueuse pizootie GDVII SNC mod les de autres infections encephalomyelitis Souris rat intestinale puis Faible Faible Apres diss mination maladies virales Contaminant virus TMEV foie rate et SNC dans le SNC paralysies neurologiques du mat riel uni ou bilat rales biologique poliomy lites avec n crose et d my linisation nes ee SNC tractus gastro asymptomatique sauf Cellules en mitose Pathog ne intestinal appareil a chez les animaux IDp Ait Rat polytropique en p riode en reproducteur Transmission intra Kilham s rat Virus SA A ND cas cliniques 2 hamster 1 pr dilection foie et f tale et poumon foie ut rine a sporadiques avec mort A cerveau embryons p rinatale Pe x immunologie l sions et h morragies ie oncologie c r brales Cellules en mitose FAROBene T ratog ne D veloppement AUS A Rat en p riode Transmission intra Toolan s H1 virus embryons ND Asymptomatique par f tal zootechnie ji hamster 1 f tale et ut rine intestin tumeurs re infection chez l adulte foie os oncologie p rinatale Tractus respiratoire Enzootie g n ralement syst me lacrymal Rat coronavirus Tractus ne interaction avec ue asymptomatique salivaire oculaire RCV respiratoire3 A oi x autres agents Rat Los Forte
67. t d animaux h berg s et le mode d h bergement de maintenir une humidit comprise entre 45 et 65 une temp rature constante et compatible avec la biologie et la physiologie de chaque esp ce 20 24 C pour les rats et souris 15 21 C pour les lapins I 2 ENTRETIEN ET DECONTAMINATION DES EQUIPEMENTS ET DES LOCAUX IL 2 1 Pr ambule Le maintien des locaux dans un tat de propret irr prochable constitue bien entendu un l ment cl dans le maintien de l tat sanitaire des animaux A cet gard l utilisation d un mat riel de nettoyage d di chaque pi ce permet d viter les contaminations crois es Le nettoyage permet l limination physique des mati res trang res poussi re salet s mati res organiques La d contamination consiste liminer les micro organismes pathog nes Un agent d tergent ou agent de surface d tersif surfactant est un compos chimique dot de propri t s tensioactives le rendant capable d enlever les salissures L utilisation d un agent d tergent d tersion chimique est un l ment d hygi ne fondamental puisqu il permet d liminer une grande partie des bact ries pr sentes sur les surfaces nettoy es Un agent d sinfectant ou germicide inhibe ou d truit les micro organismes tels que bact ries virus ou protozoaires l exception des spores bact riennes Un d sinfectant est utilis pour des supports inanim s alors qu un antiseptique inhibe la
68. t asymptomatique L sions r nales fibroses et des Tractus gastro Risque Lapin autres Epith lium Variable m ninges intestinal rein Zoonotique Encephalitozoon PE cuficuli animaux intestinal puis forte non Faible enc phalites avec SNC faible de laboratoire polytropique d tection sympt mes immunologie personnes immuno neurologiques oncologie d prim es 44 L gendes des tableaux infection exp rimentale exceptionnelle ou h te alternatif principal hors infection exp rimentale variable selon les souches ND non d crit IDp Immuno d prim s 45 ANNEXE 3 CONTROLE SANITAIRE EXEMPLES D AGENTS PATHOGENES MURINS A RECHERCHER ZOONOSE Importance Haute Moyenne Basse Incertaine VIRUS Virus de la choriom ningite lymphocytaire Ectrom lie Virus de l H patite Murine gt lt Virus de Senda Virus de Theiler Virus de la pneumonie murine Cytom galovirus murin Rotavirus murin Reovirus type 3 Adenovirus murins K Virus K Poliomavirus murin gt lt norovirus Virus minute murin Autres parvovirus murins BACTERIES Salmonella enteridis Mycoplasma pulmonis Pasteurella pneumotropica Citrobacter freundi Streptocoque B h molytique Strepto B h mo Groupe D Staphylococcus aureus Klebsiella pneumoniae
69. t n cessaire de la compl ter par la recherche r guli re de pathog nes au moyen de m thodes de diagnostic appropri es et partir d un chantillon repr sentatif de la population surveiller Un change d informations r sultats exp rimentaux non reproductibles faible taux de reproduction taux de mortalit lev diarrh es entre tous les personnels de l Etablissement fait galement partie int grante d un programme de surveillance sanitaire efficace IIL 2 3 Organisation des contr les sanitaires Un programme de surveillance sanitaire doit d finir le nombre et la qualit des animaux tester la p riodicit des contr les mettre en uvre ainsi que la liste des pathog nes rechercher Cette liste doit s appuyer sur les recommandations de la FELASA 12 La liste propos e n est pas une liste d exclusion obligatoire elle d finit un ensemble d agents qu il est recommand de d pister et est susceptible d tre modifi e en fonction de l volution des connaissances II 2 3 1 Choix des animaux Les animaux contr l s doivent tre repr sentatifs de l unit microbiologique surveiller Il est possible de choisir 1 Des animaux pr lev s au hasard dans l unit N anmoins il faut savoir que toute modification g n tique ou exp rimentation sur un animal peut alt rer sa r ponse immunitaire et donc induire des r sultats faux n gatifs ou faux positifs lors des analyses bas
70. taine ou d acclimatation Des salles d exp rimentation ou d autopsie s par es des pi ces de stabulation Des locaux s par s pour entreposer la nourriture et les liti res Un local s par pour entreposer les cages propres et le mat riel n cessaire l animalerie Une laverie Le rev tement des locaux et du mobilier doit tre en mat riaux r sistants tanches facilement lavables et d sinfectables Les acc s portes et fen tres doivent prot ger l animalerie de toute intrusion et vasion Le syst me de ventilation et de traitement de lair climatisation et filtration doit permettre de fournir de l air pur et de le renouveler Ce renouvellement permet de r duire les odeurs et de diminuer la concentration de gaz toxiques ammoniac de poussi res copeaux de sciure et d agents pathog nes sans pour autant induire de courants d air Dans les locaux d h bergement des lapins il est n cessaire de placer des pr filtres pour viter la saturation des filtres du syst me par les poils des animaux Le syst me de ventilation et de traitement de l air devrait tre ind pendant pour chaque pi ce de l animalerie Concernant les conditions d ambiance respecter pour le bien tre des animaux des lignes directrices sont consultables dans l Annexe A de la Convention STE 123 9 A titre d exemple il est recommand d assurer un renouvellement d air compris entre 8 et 20 volumes heure selon la densi
71. tion animale 9 Convention europ enne sur la protection des animaux vert br s utilis s des fins exp rimentales ou d autres fins scientifiques STE 123 Conseil de l Europe 1986 10 Disinfectants in laboratory animal science what are they and who says they work Amy Ingraham BA RLATG and Tammy Marotta Fleischer Lab Animal 2003 32 36 40 11 Guide de prevention des infections Sant Canada 1998 vol 24S8 http www phac aspc gc ca publicat ccdr rmtc 08pdf cdr24s8f pdf12 12 Recommandations for health monitoring of rodent and rabbit colonies in breeding and experimental units W Nicklas P Baneux R Boot T Decelle A A Deeny M Fumalli amp B Illgen Wilcke Laboratory Animals 2002 36 1 20 42
72. virus Souris Polytropique Asymptomatique et oncologie Rejet des transplantables MPV Rat avec ND 0 apathog nique m me allogreffes D n IE rat eue Virus persistant Tr s Parvovirus pr dilection chez les IDp Interf rences pas r sistant dans RPV pour organes encore toutes Mise l environnement lympho des connues Souris G n ralement Pneumonia TE 20 asymptomatique sauf ER Possible chez cochon iris of hamster Tractus souris 0 sauf ID chez les animaux ele d inde et lapin preuve mice PVM cochon respiratoire 50 rat P athymiques pneumonie diab te BS en s rologie mais sans d inde hamster chronique maciation et isolation du virus lapin 1 mort G n ralement asymptomatique Tr s contagieux enzootie Epizootie interaction avec P Souris Tractus respiratoire s Para tat lors de la premi re ae des infection bact riennes influenza 4 Tractus Jusqu Jusqu contamination Ba synergie avec hamster 3 3 canc rologie virus type 1 respiratoire 100 100 dyspn e retard de Mycoplasma Sendai Cochon croissance mort jeunes embryologie ulmonis d inde l apoptose p avec n crose inflammatoire de l pith lium respiratoire Contaminant du mat riel biologique 39 VIRUS Suite AGENT HOTE re SIGNES CLINIQUES AVEC LA REMARQUES Morbidit Mortalit RECHERCHE G n ralement a
73. virus et Mycoplasma pulmonis peut galement conduire des r sultats faux positifs Enfin des erreurs techniques par exemple contamination de l chantillon par un chantillon contr le positif sont toujours possibles En r sum en prenant en compte tous ces l ments il appara t qu un seul r sultat s rologique positif pour un agent pathog ne donn n est pas significatif et n cessite la mise en place de proc dures de confirmation utilisation d une autre m thode diagnostique sur le m me pr l vement tests sur de nouveaux chantillons contr le recommand par un autre laboratoire de diagnostic 111 2 4 2 Autopsies et analyses histologiques Les animaux test s dans les contr les les animaux malades ou trouv s morts devraient tre syst matiquement autopsi s afin de mettre en vidence des l sions macroscopiques dont l histopathologie dans le cas de l sions pathognomoniques pourra d terminer l tiologie Limites de l autopsie et des analyses histologiques Beaucoup d agents pathog nes des animaux de laboratoire sont cliniquement silencieux et causent peu ou pas de l sions visibles ex Mouse Parvovirus MHV et ce d autant plus que les animaux sont immunocomp tents Il est possible de proc der des colorations histologiques sp cifiques ex Steiner pour la d tection d Helicobacter ou Clostridium piliformis mais elles ne permettent pas toujours d identifier les esp ces ba
74. x sssssnssecenr sens os nu sen enr e nerne ones tt neren en deone cette rites tasse 17 II 2 Contr les sanitaires ne nie een nn rs dis es nt os est situe ea dis reses te 18 IIL2 1 Rappel de quelques d finitions et g n ralit s 18 IIL2 2 Programme de surveillance sanitaire 18 IIL2 3 Organisation des contr les sanitaires 19 123 1 CROIX d s Animalerie an ennemi he aa d meet 19 111 2 3 2 Nombre d animaux sens r e a Ee a ee a e a a R NEEE REEERE AERE EEES 20 III 2 3 3 P riodicit des contr les sanitaires et agents pathog nes rechercher 21 TIL 24 M th d s d d pistage nes fente e ea ie dernier detre 22 HI24 1 sS rologie nantes ea Mens de tendent id bats A ht 22 111 2 4 2 Autopsies et analyses histologiques ss 23 M243 Cultures bact riennes ati nie Mortier di ti doter 24 H244 EXAMENS MICTOSCOPIQUES sssrin sernir sroine dt d tendre den SpE ed nt eSP ESE 24 111 2 4 5 Techniques de biologie mol culaire 25 IL 2 4 6 Cas particuliers eare tnt entiere et ile Rte te SEEST it 25 IIL2 5 Conduite tenir devant un r sultat positif ss 26 IOa AS DAE o ESE E EEE EEE As Mis dan En raser ent ne Msn er nt te et ete nt nt diet ts te 28 111 2 6 1 D tection du virus MHV en fonction du mode d h bergement ss 28 111 2 6 2 D tection du virus Mouse Parvovirus l aide de deux m thodes diagnostiques test ELISA et IO RE RE D TE A D 0 28 IK 2 7 Conclusions ss ist nn een TE 29 II 3 Maintien du statut sanitair
75. ylococcus rat SoA SRE Immunologie tudes de Agent digestif bas pelage ND ND ulc rative surinfection DRE aureus homme S vieillissement opportuniste et peau Surtout pour les IDp abc s faciaux et orbitaux H te Nasopharynx Asympt matique chez le rat naturel Souris conjonctivite k oreille moyenne RSS Zoonose fi vre de Streptobacillus rat nes diarrh e maciation et forte i e tractus respiratoire ND ND CURE Infection rare Haverhill ou de la moniliformis Souris A mortalit pizootie arthrite et abc s sous F morsure du rat cobaye p chronique et amputations cutan s homme enzootie 43 PARASITES G n ralement asymptomatique signes cliniques non sp cifiques perte de INFECTIOLOGIE INTERFERENCE AGENT HOTE Re None AVEC LA REMARQUES Morbidit Mortalit RECHERCHE Variable selon les Acariens souches Myobia musculi Souri Amaigrissement Animaux Myocoptes TS Peau poil Variable Faible prurit alop cie Immunologie sans poils musculinus partielle autophagie non infect s Radfordia affinis L sions g n ralement dorsales bas du dos Les rats et les souris Dermatophytes Cobaye lapin es Microsporum spp homme Peau poil ND ND Asymptoimatigue le Infestation rare AR i plus souvent repr sentent Trichophyton spp souris rat pas un risque zoonotique important

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