Coombs contrôles négatifs, Comparaison entre deux
Contents
1. ID Diluent 2 Proc dure gt Un sero contr le s rum contenant des anticorps doit tre effectu une fois par jour par chaque TAB qui effectue des tests de compatibilit et lors d un changement de lot de r actifs selon la m me proc dure h maties d un donneur sero contr le comme plasma gt Tout test de compatibilit doit tre accompagn d un test direct l antiglobuline humaine 4 ou d une identification d anticorps avec auto contr le Marche suivre M langer 10 ul de culot rythrocytaire dans 1 ml de diluent 2 1 2 Pipeter 50 ul de chaque suspension d h maties dans le puits correspondant 3 Distribuer 25 ul de plasma s rum dans chaque puits 4 Incuber 15 min 37 C 5 Centrifuger lire protocoler les r sultats Interpr tation L absence d agglutination dans toutes les phases signifie que le sang du donneur est compatible avec celui du receveur Les lectures se font macroscopiquement et les r sultats n gatifs sont contr l s au microscope technique en tubes lorsque les tests de compatibilit sont effectu s pour un patient allo immunis Un r sultat positif apr s adjonction d h maties contr les technique en tubes permet de valider un r sultat n gatif de test de Coombs Travail de dipl me Anne Delarze Attitude face une incompatibilit La pr sence d h molye ou d agglutination r action positive signe une incompatibilit et n cessite une analyse critique des r2. D cantation 400 rpm Pour les 3 lavages habituelle ment r alis pour les tests de Coombs cette centrifugeuse prend environ 5 minutes Lors de problemes avec un lave globules il est possible de modifier les param tres afin d obtenir des r sultats plus satisfaisants Les deux principaux param tres sur lesquels il est possible de jouer sont la vitesse de centrifugation et la vitesse de d cantation Si on d cide d augmenter la vitesse de centrifugation il restera une plus grande quantit d rythrocytes au fond du tube Si on augmente la vitesse de d cantation les tubes seront plus d cant s 3 4 Rencontre avec les repr sentantes Bio rad et Medion Le 12 et 13 janvier 2012 Mesdames Anna Galvani repr sentante Bio rad et Marika Villeumier repr sentante Medion sont venues l UMT afin de pr senter leur lave globules et r pondre quelques questions ll en ressort de ces entretiens que le laboratoire UMT est l un des seuls laboratoires tre confront des probl mes r currents de Coombs contr le n gatifs Selon Mme Galvani l UMT tant un grand laboratoire les laves globules tournent trop souvent par rapport une utilisation habituelle Il serait peut tre judideux de proc der des maintenances quotidiennes et du fournisseur plus fr quentes Pour elle la quantit d rythrocytes au d part a une grande importance une grosse goutte d rythrocytes est amplement suffisante voire d j superflue 3 5 Lav
3. la main soit avec le lave globules Pr parer une suspension 3 d h maties dans de l Immusol Distribuer 2 gouttes de plasma 1 goutte de suspension rythrocytaire 2 gouttes de Liss Incuber 15 minutes 37 C Laver3fois Ajouter 2 gouttes de s rum de Coombs Centrifuger Lire macroscopiquement puis au microscope Ajouterle Coombs contr le en cas de Coombs direct n gatif Travail de dipl me Anne Delarze Centrifuger Lire macroscopiquement ds 4 3 3 Que faire en cas de Coombs contr le n gatif Lors de Coombs contr le n gatifs la proc dure suivante a t suivie les deux premiers points ont t effectu s pour touts les cas les suivants on t effectu s si les deux premiers cas sortaient toujours n gatifs 1 Ajouter une goutte de Coombs contr le 2 Refaire le test a partir de la m me solution framboise avec les m mes r actifs 3 Refaire le test a partir de la m me solution framboise avec d autres r actifs 4 Refaire le test depuis le d but en lavant le tube une autre position 5 Refaire le test avec la nouvelle solution framboise et les m mes r actifs 6 Refaire le test avec la nouvelle solution framboise et d autres r actifs 4 4 R actifs 14070 23 10 08 2012 utilis s 14070 24 20 11 2012 14070 24 21 11 2012 4 4 1 DiaClon 14070 25 20 09 2013 Coombs Serum Anti IgG Anti C3d 5 14070 25 20 09 2013 635012001 03 03 2012 Tableau 3 Lots de 635012001 03 03 2012 s
4. au laboratoire UMT 0ooooocococcccccoccconononcncnnnns 43 8 4 Annexe 3 Cas de Coombs contr les n gatifs r pertori s par les TAB 46 8 5 Annexe 4 Liste des tubes donneurs ss 47 8 6 A A ea araa aiana aiaa 49 8 7 Annexe 6 Totalit des cas de figures de Coombs contr le poste 54 8 8 Annexe 7 Param tres Medion Eka 55 8 8 1 Param tres artis 55 8 8 2 Param tres de programme sienne SEENEN DEE 55 R f rences bibltosrapbloues 56 10 Table des lustro ds 58 Travail de dipl me Anne Delarze Pr sentation du laboratoire Le laboratoire de UMT est situ au 18 me tage du b timent hospitalier principal du CHUV Lausanne il fait partie du Service R gional Vaudois de Transfusion Sanguine SRTS VD Ce service est une fondation but non lucratif Il est l un des treize services membres du Service de Transfusion Sanguine de la Croix Rouge Suisse STS CRS U L UMT s occupe de la distribution de tous les produits sanguins du CHUV mais aussi de demandes externes provenant d autres h pitaux Le laboratoire est divis en deux parties les urgences et la routine Les urgences sont ouvertes 24h sur 24 7 jours sur 7 Elles traitent les demandes urgentes les demandes des blocs op ratoires et les commandes de plaquettes et de plasma frais congel Le laboratoire de routine lui est ouvert de 7h 15h30 les jours ouvrables et traite les anal
5. e R sultat s positif s gt analyses suppl mentaires Sp cificit Analyses compl mentaires IgG seule ou non Elution 1 4 D pistage d anticorps irr guliers l D termination des sous classes 2 l OTT IgM O IgA TTT GENEE Elution 1 4 TTT D pistage d anticorps irr guliers 4 1 L lution doit tre faite si o Le cas est inconnu Un nouvel alloanticorps circulant a t mis en vidence Letitre du TDA a augment d au moins trois dilutions La derni re demande date de plus de six mois quel que soit l volution du titre de Coombs La derni re d termination du TDA n tait pas de sp cificit IgG o o Une h molyse est suspect e ou que le s rum est tres ict rique dans les cas douteux demander l avis du m decin de l UMT 2 Les sous classes IgG doivent tre d termin es lorsque o L lution est positive Il s agit d un nouveau n m me si l lution est n gative TDA polysp cifique La technique de r f rence est la technique en tubes La technique en gel ne doit pas tre utilis e en routine Technique en tubes Serum de Coombs avec anti C3d Medion R a ctifs sp cifiques e S rum de Coombs polysp cifique e H maties contr les pour le test de Coombs Proc dure l Laver 3 fois les h maties tester 2 Pr parer une suspension d h maties 3 5 dans du NaCI 0 9 3 Distribuer 2 gouttes de s rum de Coombs et une goutte de suspensio
6. r action d agglutination Travail de dipl me Anne Delarze 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 9 R f rences bibliographiques Ma vie ton sang Organisation Le Service R gional Vaudois de Transfusion Sanguine SRTS VD page web Acc s http www mavietonsang ch vaud index php option com content amp view article amp id 7 amp ltemid 7 page consult e le 23 01 2012 Service de transfusion sanguine CRS Principe d immuno h matologie et analyses pr transfusionnelles chez le patient recommandations de l ASMT et du STS CRS l attention du personnel de laboratoire et des tablissements de soin polycopi version 2 mise jour le 15 08 2009 G Canellini J Conne J D Tissot S Waldvogel Immunoh matologie base de m decine transfusionnelle polycopi cinqui me dition mise jour ao t 2010 A Chambaz Travail de dipl me Test de Coombs direct vs autocontr le en Coombs indirect ESsant polycopi avril 2008 me G S bahoun H matologie clinique et biologique livre Rueil Malmaison Arnette 2 dition 2005 J Conne Test direct l antiglobuline humaine protocole de laboratoire UMT janvier 2007 J Conne Test de compatibilit majeur protocole de laboratoire UMT janvier 2007 Immusol Notice not e sur la bouteille d Immusol Medion Diagnostics Enlisst l notice D dingen 2006 Bio Rad Coombs Serum IgG
7. C de petits cristaux se forment Ces Travail de dipl me Anne Delarze cristaux peuvent par la suite obstruer un tuyau du lave globules les h maties ne seront donc pas suffisamment lav es 2 4 2 Enlisst Il L Enlisst 11 est une solution de Liss Low lonic Strengh Solution solution faible concentration ionique produite par le fabricant Medion Elle est utilis e pour les tests de Coombs indirect mais n est pas indispensable Elle permet uniquement d acc l rer la r action et donc r duire le temps d incubation Pour ce faire cette solution agit sur le pH la force ionique du milieu et facilite la fixation des anticorps sur les antig nes P Dans le plasma les rythrocytes sont loign s les uns des autres par le potentiel z ta Ce potentiel correspond la diff rence entre les charges lectriques des deux couches de cations entourant les h maties A cause de cette loignement rythrocytaire les IgG qui sont de petites mol cules ne peuvent pas se lier il n y a donc pas d agglutination Pour que l agglutination ait lieu le potentiel z ta doit tre r duit c est le r le de la solution de Liss Force de r pulsion entre les 2 ern Z globules rouges A Ki K Fa mmm l d A f S ken A PES Couche cationique D Couche anionique autour de la membrane rythrocytaire potentiel potentiel z ta Fig 7 Potentiel z ta 2 4 2 1 Compositi
8. e le 20 03 12 Fig 4 Voie classique de la cascade du compl ment Simplification du sch ma du cours d immunoh matologie G Canellini J Conne J D Tissot S Waldvogel Immunoh matologie base de m decine transfusionnelle polycopi cinqui me dition mise jour ao t 2010 Fig 5 6 Test de Coombs direct et test de Coombs indirect Wikip dia H magglutination Sch ma explicatif du test direct et indirect l antiglobuline page web Acc s http fr wikipedia org wiki Fichier Coombs_test_schematic_fr png page consult e le 19 01 12 Fig 7 Potentiel z ta Tout sur la transfusion Sp cial immuno h matologie rythrocytaire Potentiel z ta 2011 page web Acc s http www toutsurlatransfusion com immuno hematologie anticorps potentiel zeta php Figure 8 Serum de Coombs DiaMed Instrumentation Test sera and reagents for conventional techniques Antihuman globulin sera Coombs Serum IgG page web Acc s http www diamed ch product_detail aspx id 4838 navvis yes page consult e le 24 01 2012 Fig 9 10 11 12 Image r sultats de Coombs et Coombs contr le Austin Community College Unit 6 Grading Agglutination Reactions page web Acc s http www austincc edu mlt bb Grading 20Agglutination 20Reactions jpg page consult e le 20 03 12 Fig 13 Lave globule Medion Bio Rad Products Instrumentation Instrumentd for DiaMed conventional techniques DiaCent CW page web Acc s http www diamed ch
9. 5 2 Avantages et inconv nients des deux laves globules La majeure partie des r actifs utilis s Le temps de lavage est plus long pour les tests sont fabriqu s par Le programme donn par le fabricant Medion Coombs contr le Enlisst ll doit tre modifi pour un bon DiaMed Immusol Les tubes sont propres lorsqu ils sont sortis de la machine Le temps de lavage est plus rapide Le programme donn par le fabricant fonctionne correctement sans avoir besoin de le modifier Les tubes peuvent tre mis et enlev s facilement Le lave globules est l ger Le couverde est transparent on peut donc voir ce qu il se passe dans le lave globules fonctionnement Les tubes sont plus difficiles mettre et sortir Le lave globule est deux fois plus lourd que le DiaMed Pas de visibilit l int rieur du lave globules une foisle couvercle ferm Les tubes sont sales lorsqu ils sont sortis de la machine Le rotor n est pas rond Tableau 1 Avantages et inconv nients des deux laves globules Travail de dipl me Anne Delarze Partie pratique 4 1 Objectifs Les objectifs pour la partie pratiques sont les suivant D terminer si la quantit d rythrocytes au d part une influence sur le r sultat du Coombs contr le Standardiser la concentration de la suspension rythrocytaire D terminer s il y a une diff rence entre le premier lavage fait la main et celui fait par l autom
10. CI Autom y D I Medion Pi Medion Medion Pi Medion Vedon Pi Medion D EA 22 4 4 1 H DI 4 y D 4 H A H D 4 H D 4 y A 4 4 29 1 H H 4 Travail de dipl me o Medion Pl s ra gt E n a HE a y Er e E cts S z E a5 KE E Anne Delarze R sultats Coombs contr le CI Man Cl Main E E RI SC 3 Cl Autom Medion P H H Ft H Anne Delarze Travail de dipl me z kel aL E z E S i ja SS LE Si EE ES 1 SIB 5 3 ES BS BS SES ES H O ES qe Ss de Go SE ES E EE se ELA SS E A E E EE Se EEE Travail de dipl me Anne Delarze 8 7 Annexe 6 Totalit des cas de figures de Coombs contr le positifs K WS i 4 gouttes automate Szen P2 en P1 ee P2 Travail de dipl me Anne Delarze 8 8 Annexe 7 Param tres Medion 8 8 1 Param tres globaux 151 Volume Adjust Rotor 24 places Shakings Susp Agit D SpinDown SuspensionM Agit SpinM SpinDe cant M Valeur de correction du volume de remplissage du s rum Physiologique O pas de correction du
11. Une r action positive avec une agglutination plus ou moins forte indique une r action entre des anticorps et des antig nes rythrocytaires Une r action n gative aucune agglutination visible indique qu il n y a pas de r action anticorps antig ne Pour valider les r sultats chaque test de 10 Coombs n gatif doit tre confirm par un contr le positif le Coombs contr le Travail de dipl me Anne Delarze Fig 10 Coombs n gatif aucune agglutination visible 2 4 4 Coombs Contr le Le Coombs contr le est une suspension d h maties humaines sensibilis es avec des anticorps IgG humains Le contr le employ l UMT est fabriqu par Medion Il est utilis lorsqu un test de Coombs est n gatif I permet de d tecter les faux n gatifs qui pourraient tre d un oubli d ajout de r actif ou un lavage mal effectu 1 Si le test de Coombs est r ellement n gatif les h maties du Coombs contr le r agissent avec les anticorps du s rum de Coombs qui sont encore libres car non fix s lors du test de Coombs et forment une agglutination Cependant bien qu il n y ait aucune agglutination visible il se peut que le test de Coombs soit l g rement positif mais que les agglutinations ne soient pas visible macroscopiquement Si apr s l adjonction du Coombs contr le il n y a aucune r action il faut recommencer le test en suivant m ticuleusement toutes les tapes afin d obtenir un r sultat positif Ce
12. gatifs lors des tests effectu s avec 4 gouttes d h maties et seulement 0 6 des cas sont sortis n gatifs lorsqu une seule goutte se trouvait dans le tube de d part Il est donc difficile de faire des statistiques sur si peu de r sultats n gatifs et de d duire la cause li e au probl me des Coombs contr les n gatifs Ces cas sont r pertori s dans le tableau 8 de la page suivante Il d taille quelles mesures ont t prises suite la d couverte d un Coombs contr le n gatif Il a vite t constat qu aucun des tests effectu s n a pu tre confirm n gatif Pour 18 des cas seuls les deux premiers points de la proc dure en cas de contr le n gatif voir chapitre 4 3 3 ajout d une goutte de Coombs contr le et refait le test partir de la m me solution framboise ont t r alis s donnant de suite une agglutination visible l il nu Un seul cas cas 11 sur DiaMed a n cessit la reprise du test depuis le d part En observant les r sultats du tableau il est claire que le probl me de Coombs contr le n gatif ne provient pas des lavages En effet en reprenant exactement les m mes conditions soit la m me solution framboise et les m mes r actifs les r sultats passent d un r sultat n gatif une agglutination faible l g re voire dans certains cas forte On peut donc se demander quels param tres entrent r ellement en compte lors des Coombs contr les n gatifs et s il est r ellement possible de r d
13. notice Cressier 2010 Medion Girofls Diagnostics Coombs control notice D dingen 2010 Bio Rad Products Instrumentation Instrumentd for DiaMed conventional techniques DiaCent CW page web Acc s http www diamed ch product_detail aspx id 615 amp navvis yes page consult e le 10 01 2012 DiaMed Mode d emploi centrifugeuse lave globules DiaCent CW mode d emploil Cressier 277 dition 1998 Medion Dagnostics Products Centrifuges DAC III D dingen 2006 page web Acc s http www medion diagnostics ch e zentrifugen htm page consult e le 10 01 12 Medion Diagnostics DAC III mode d emploi mode d emploi D dingen 2010 Larousse Chimiotaxie page web Acc s http www larousse fr dictionnaires francais chimiotaxie 15353 page consult e le 02 04 2012 Travail de dipl me Anne Delarze 17 Wikip dia Opsonisation 04 03 2012 page web Acc s http fr wikipedia org wiki Opsonisation page consult e le 02 04 2012 Travail de dipl me Anne Delarze 10 Table desillustrations Image de la page titre Lave globules Diamed idem Fig 13 H Lave globule Medion idem Fig 16 Fig 1 Sch ma personnel Synth se de plusieurs sch mas Fig 2 3 Anticorps de type IgM et IgG Beltina org encyklopedia of health Immunoglobulin what is and definition page web Acc s http www beltina org health dictionary immunoglobulin a d e g m ida igd ige igg igm therapy html page consult
14. peu plus forte que les r sultats des deux programmes Medion Le tableau suivant est utile afin de comparer les cas selon leur force d agglutination par rapport au programme utilis ou la quantit de mat riel pr sente dans le tube de d part sans tenir compte de la sorte de test effectu Fo 4 gouttes 10 6 38 3 48 9 36 9 50 0 13 0 A EC 52 4 40 5 Tableau 17 Comparaison des forces d agglutination sans tenir compte de la sorte de test effectu Les constatations suivantes ont t observ es pourle lave globules DiaMed e Les forces d agglutinations se trouvent principalemententre et e Les 1 goutte de d part donne des agglutinations plus fortes que les 4 gouttes e Les r sultats des 1 lavages manuel et automate agglutinent souvent Pour le programme 1 de Medion e Les r sultats se trouvent principalement entre et Les 1 goutte de d part donnent des agglutinations plus fortes que les 4 gouttes Les 1 lavages manuel et automate donnent des r sultats faibles et l gers plus ou moins identiques Les r sultats tr s faibles et forts ont un rapport invers en effet le lavage manuel donne souvent des agglutinations fortes et le lavage par automate souvent des agglutinations faibles Pour le programme 2 de Medion e Les r sultats semblent plus dispers s e Les for s d agglutination faibles et l g res sont le plus repr sent es e Les 1 goutte de d part ont te
15. rum de Coombs 635012001 03 03 2012 635012001 03 03 2012 635012002 31 03 2012 Control Girofls 4 4 2 Coombs ul 344 018 1A 11 11 2012 Tableau 4 Lot de Coombs contr le 4 4 3 Entliss Ile Travail de dipl me Anne Delarze Tableau 5 Entliss 118 Travail de dipl me Anne Delarze 4 4 4 Immusol 66011101 12 09 2013 Tableau 6 Immusol 4 5 R sultats des tests effectu s 4 5 1 Forces d agglutination La force d agglutination permet de quantifier la force de la r action Normalement plus les h maties sont sensibilis es plus la r action devrait tre forte sauf pour les cas d effet de zone A UMT la force d agglutination du Coombs contr le n est habituellement pas prise en compte En effet le but est simplement d observer une agglutination pour valider les tests de Coombs Toutefois ce travail de dipl me jouant sur plusieurs comparaisons de m thodes et d appareils il est important de quantifier ces agglutinations afin de pouvoir comparer les diff rents r sultats obtenus Cinq forces d agglutination sont prises en compte Tr s forte Toutes les h maties sont agglutin es le surnageant est clair S Les h maties sont agglutin es en plusieurs amas de taille moyenne le Forte moyenne f surnageant est clair L g re po Une partie des h maties sont agglutin es en petits amas les autres se trouvent dans le surnageant qui le rend tr s l g rement rouge A Une partie des h mati
16. sultats Dans ce cas des analyses compl mentaires sont souvent n cessaires par exemple une recherche d anticorps irr guliers Tous les cas douteux ou difficiles sont soumettre au m decin de l UMT Documents li s r f rences 1 IT RE Interpr tation des r sultats en immuno h matologie 2 IT RE Analyses immuno h matologiques_ r actifs 3 PO RE Tra abilit de la demande au r sultat d analyse 4 IT RE Test direct l antiglobuline humaine GESTION DU DOCUMENT Auteur s Jocelyne Conne Validation janvier 2007 Giorgia Canellini Jean Daniel Tissot Lilly Habegger Approbation Jocelyne Conne Lib ration par le service AQ Jocelyne Conne Christel Bonny Travail de dipl me Anne Delarze 8 4 Annexe 3 Cas de Coombs contr les n gatifs r pertori s par les TAB 27 12 11 10 01 12 Urgences 10 01 12 27 01 12 12 12 0637617 0637716 0594562 0594833 0595023 0595023 0595256 0595848 0638275 0638275 0638275 0596624 0639007 0597318 0597585 0597587 Coombs indirect Coombs indirect Sur 4 flacons 1 seul avec le Coombs contr le n gatif Coombs contr le n gatifs deux fois de suite Sur 4 flacons 1 seul avec le Coombs contr le n gatif Sur 2 flacons 1 seul avec le Coombs contr le n gatif Recherche 12 cellules 2 H Coombs contr les n gatifs Travail de dipl me Anne Delarze 8 5 Annexe 4 Liste des tubes donneurs i fe fe en
17. Certaines de os classes peuvent tre divis es en sous dasses Pi Site de fixation de l antig ne R gion hypervariable Cha ne l g re Pont disulfure Zone de fixation du compl ment R gion constante Cha ne lourde Fig 1 Immunoglobuline de type IgG En immunoh matologie la plupart des immunoglobulines sont de type IgM ou IgG Ces deux sortes d anticorps ont certaines sp cificit s qui peuvent tre importantes en immunoh matologie 2 1 2 1 Immunoglobulines de type IgM Les IgM sont g n ralement des h t roanticorps Ce sont des anticorps froids qui se fixent sans artifice technique sur la membrane rythrocytaire et produisent une agglutination in vitro en milieu salin NaCl 0 9 une temp rature situ e entre 4 et 22 C Ces anticorps ne peuvent pas traverser la barri re pla ntaire 1 Travail de dipl me Anne Delarze IgM Fig 2 Anticorps de type IgM 2 1 2 2 Immunoglobulines de type IgG Les IgG sont g n ralement des alloanticorps Ils se fixent la membrane rythrocytaire mais ne produisent pas d agglutination in vitro en milieu salin Ce sont des anticorps chauds leur temp rature optimale pour la r action d agglutination in vitro est de 37 C Contrairement aux IgM les IgG ont besoin d artifices techniques pour l agglutination r actif de Coombs albumine enzymes Ils sont g n ralement produits par immunisation suite un transfert d antig nes grossesse ou transfusion
18. Ces anticorps peuvent passer la barri re placentaire 7 IgG Y Fig 3 Anticorps de type IgG 2 1 3 Le compl ment Le syst me du compl ment est une cascade biochimique complexe du syst me immunitaire compos d une trentaine de prot ines membranaires ou circulantes dans le plasma L activation du compl ment provoque selon la voie d activation une cytolyse une chimiotaxie une opsonisation ou une inflammation Les anticorps capables d activerle compl ment sont des h molysines Leur activation apr s fixation sur la membrane rythrocytaire d pend de leur quantit de leur classe ou sous classe et de leurs propri t s Voie mannan Voie classique binding lectin Voie alterne Surfaces microbiennes Surfaces microbiennes C1r du compl ment Fig 4 Voies d activation de la cascade du compl ment Travail de dipl me Anne Delarze Les h maties recouvertes de C3b sont d truites par le foie Lors du test de Coombs on ne recherche pas la pr sence de C3b car il est instable Mais la pr sence de son produit de d gradation qui est beaucoup plus stable le C3d 1 2 Test de Coombs direct Le test de Coombs direct appel galement test direct l antiglobuline permet de d terminer si des h maties ont t sensibilis es in vivo par des anticorps de type IgG ou des fractions du compl ment C3d Ces anticorps sont mis en vidence par un s rum de Coombs polysp cifique qui contie
19. Refait le test avec la m me solution framboise as po a Ajout d une goutte de Coombs contr le total 2 gouttes de CC Medion programme 2 Refait le test avec la m me solution framboise Pr des on Medion programme 1 Refait le test avec la m me solution framboise EE Medion programme 1 Refait le test avec la m me solution framboise 2 a Ajout d une goutte de Coombs contr le total 2 gouttes de CC Elle Medion programme 2 Refait le test avec la m me solution framboise EE E Medion programme 1 Refait le test avec la m me solution framboise SR EIESEN Medion programme 1 Refait le test avec la m me solution framboise DEES Medion programme 1 Refait le test avec la m me solution framboise Tableau 8 D tail des cas de Coombs contr les n gatifs Travail de dipl me Anne Delarze Le tableau suivant est un r capitulatif simplifi du tableau 8 il permet de voir plus clairement dans quels cas les Coombs contr les sont sortis n gatifs ETS O O Toes CEE TIRE Tableau 9 R capitulatif des cas de Coombs contr les n gatifs Coombs Indirect 1er lavage manuel Coombs indirect 1er lavage automate On constate qu une grande partie des cas 15 cas sur 19 sont apparus lors des tests effectu s avec 4 gouttes d h maties dans le tube de d part Il n y a eu aucun probl me avec le lave globules DiaMed lorsque le protocole indiquant de d poser 1 goutte de sang da
20. S gt x es Sp gt i gt A 0 O O O A A A B 1964 H008012006923 tr s l g rement trouble A 1957 o x o o O O O l 2 3 4 5 7 10 JD 12 13 14 JS 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Travail de dipl me Anne Delarze 1958 H008012008593 tr s l g rement trouble 1976 Os CS eme meme one Jo En ES ES SS Tubes 10 S Travail de dipl me 8 6 Annexe 5 R sultats Cor EH E F See E En E an _ E E R sultats Coombs controle Cl Main Vedon P H nje ebe be ES ES Anne Delarze Cl Main Medion P2 H Cl Wa Medion PA tt Hi H Cl Wan Medion P2 H H HH H tH tH tt Ht HH Tubes 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Travail de dipl me Anne Delarze R sultats Coombs contr le Cl Autom Medion PA H Cl Autom Medion P H D D Cl Man Cl Man Medion PL Medion 2 Medion Medion 2 H H H H H H H Travail de dipl me Anne Delarze R sultats Coombs contr le Tubes D D CI Man Cl Main Cl Autom
21. Travail de dipl me Coombs contr les n gatifs Comparaison entre deux laves globules Anne Delarze 51 vol e cole Sup rieure de la Sant Stage d immunoh matologie UMT BH 18 CHUV Novembre 2011 Avril 2012 Responsable accompagnante Mme Jocelyne Conne Travail de dipl me Anne Delarze Sommaire Dans le laboratoire de l Unit de M decine Transfusionnelle UMT comme dans la plupart des laboratoires l utilisation d automates pour la r alisation des tests devient de plus en plus fr quente Les automates ont entre autre l avantage de standardiser les m thodes Certains tests comme les tests de Coombs en tubes dont il est sujet dans ce travail sont un mixe entre manuel a et automate Ces tests pourraient tre r alis s enti rement par un automate mais l UMT tient garder la m thode manuelle Le recul par rapport aux r sultats obtenus par automate n a pas t jug assez important par rapport celui des tests en tubes De plus certains tests d immunoh matologie ne pourront jamais tre r alis s enti rement par automate il est donc important de garder un savoir faire manuel L automate utilis quotidiennement pour les tests de Coombs en tubes est un lave globules Cet automate a pour fonction de laver les globules rouges afin d liminer le plasma et les prot ines qu il contient l tape du lavage est tr s importante si celle ci est mal effectu e les r sultats peuvent tre fauss s
22. acomparaison 1 et 2 pr s de la moiti des r sultats sontidentiques e Pourles comparaisons 3 4 et 5 un peu moins de la moiti des r sultats sont identiques e Pour les comparaisons 1 3 4 et 5 un tiers des agglutinations du Coombs contr le sont identiques et de force e Pour les comparaisons 4 et 5 les r sultats sont assez proches Les programmes Medion ont toutefois tendance agglutiner plus fortement que le programme DiaMed e Pourla comparaison 3 on remarque que les agglutinations ne sont pas forc ment plus fortes avec le programme 1 qu avec le programme 2 Le tableau 13 permet de voir la diff rence de force d agglutinations selon les situations test es Comme mentionn pr c demment pour plus de pr cision la diff rence entre et a t faite Les diff rences d agglutinations ont donc t fait selon le m me principe d o une diff rence d une croix entre et de deux croix entre et et une diff rence de trois croix entre et Tableau 13 Diff rence de force d agglutination L analyse de toutes ces comparaisons a permis plusieurs constations Premi rement bien qu il s agisse de comparaisons de param tres diff rents on observe entre 40 et 50 de r sultats avec une force d agglutination identique 1 colonne du tableau 13 Deuxi mement pour environ 40 des cas la diff rence entre les deux tests compar s n est que d une croix Au total il y a donc Travail de dipl
23. anticorps susceptibles de se fixer sur les h maties du donneur Destinataires Techniciennes en analyses biom dicales TAB de l UMT Modifications apport es par rapport la version pr c dente Remplace IT RE Tests de compatibilite_VO4 Mode op ratoire Toutes les proc dures d crites dans cette instruction de travail sont effectu es par une TAB de l UMT selon les disponibilit s Pour plus de d tails concernant l ex cution des analyses et l interpr tation des r sultats respectivement les chantillons et r actifs utiliser se r f rer aux documents 1 2 Les r sultats d analyses sont protocol s sur les listes de travail comme d crit dans le document 3 Afin d observer au mieux la compatibilit diff rents points sont observer gt S lection du sang du donneur en fonction des groupes sanguins ABO et Rh sus du receveur gt S lection d unit s de sang ph notyp es lorsque le receveur poss de des anticorps irr guliers gt S rocompatibilit assur e par des tests de compatibilit in vitro entre le sang du donneur et du receveur Techniques Bien que la technique en tubes soit recommand e les deux techniques en tubes ou en gel peuvent tre utilis es Technique en tubes Le r actif de Coombs utilis ne contient pas d anti C3d R actifs sp cifiques e S rum de Coombs polysp cifique sans anti C 3d e H maties contr les pour le test de Coombs e Solution de Liss e Sero
24. ate pour le Coombs Indirect Raccourcir le temps de lavage du lave globules Medion D terminer quel programme est le plus efficace pour le lave globules Medion 4 2 Mat riel et M thodes 4 2 1 Mat riel 1 2 1 1 Sang EDTA Chaque jour UMT re oit des pr l vements de donneurs afin de r aliser des analyses immunoh matologiques Ces chantillons sont conserv s 24 heures 4 C puis sont limin s Comme tous les tubes re us l UMT les tubes donneurs sont pr lev s sur EDTA Ces tubes donneurs ont plusieurs avantages Premi rement la probabilit d avoir des tests de Coombs positifs est faible En effet les donneurs sont th oriquement sains et un d pistage d anticorps est effectu lors du premier don ou suite une grossesse Deuxi mement ils permettent de ne pas utiliser les tubes patients qui doivent tre conserv s en cas de tests compl mentaires effectuer Finalement ils contiennent un volume important de sang pour r aliser plusieurs tests de Coombs avec diff rents param tres Pour ce travail 50 donneurs ont t test s en parall le sur les deux laves globules liste des tubes Annexe 4 4 2 1 1 S rum de Coombs utilis pour la partie pratique Pour la partie pratique les r actifs fournis par Bio Rad ont t utilis s Ceux si contiennent des IgG et du C3d 4 2 2 M thodes Les objectifs ne sont pas tout fait identiques pour les deux laves globules voir chapitre 4 1 Afin de raccourci
25. contr le contr le positif Proc dure gt Deux phases distinctes sont habituellement effectu es 1 en milieu Liss modifi 37 C 2 l antiglobuline humaine Coombs indirect gt Une seule lecture est effectu e Travail de dipl me Anne Delarze gt Un sero contr le s rum contenant des anticorps doit tre effectu une fois par jour par chaque TAB qui effectue des tests de compatibilit et lors d un changement de lot de r actifs selon la m me proc dure h maties d un donneur sero contr le comme plasma Le plasma doit tre distibu avant les h maties Tout test de compatibilit doit tre accompagn d un test direct l antiglobuline humaine 4 ou d une identification d anticorps avec auto contr le Marche suivre 1 2 3 D a 49 N 9 E ER O l Laver une fois 2 3 gouttes d rythrocytes Pr parer une suspension d h maties 3 5 dans du NaCI 0 9 Distribuer dans des tubes en verre 2 gouttes de plasma 1 goutte de suspension rythrocytaire 2 gouttes de Liss Incuber 10 15 min 37 C Laver trois fois Ajouter 2 gouttes de s rum de Coombs Centrifuger lire protocoler les r sultats Ajouter une goutte d h maties contr les dans chaque tube n gatif Centrifuger lire En cas de r action n gative recommencer toute la proc dure Protocoler les r sultats Technique en gel R actifs so cifiques Sero contr le contr le positif Cartes Diamed Liss Coombs
26. contr les pour le test de Coombs Proc dure l 2 3 Laver 3 fois les h maties tester Pr parer une suspension d h maties 3 5 dans du NaCI 0 9 Mettre 2 gouttes de s rum de Coombs monosp cifique dans un tube et ajouter une goutte de suspension d h maties Centrifuger lire contr ler au microscope les r sultats n gatifs Si tout est n gatif ajouter une goutte d h maties contr les dans le tube anti IgG Centrifuger lire Si n gatif recommencer la proc dure Protocoler les r sultats Titre d un TDA IgG La seule technique utilis e l UMT est la technique en tubes Technique en tubes R actifs sp cifiques S rum de Coombs monosp cifique anti IgG Travail de dipl me Anne Delarze H maties contr les pour le test de Coombs Proc dure P Laver 3 fois les h maties tester 2 Pr parer une suspension d h maties 3 5 dans du NaCI 0 9 3 Pr parer des dilutions g om triques du s rum de Coombs monosp cifique IgG avec du NaCl physiologique 4 Distribuer 2 gouttes de s rum de Coombs monosp cifique de chaque dilution jusqu 1 128 et une goutte de suspension rythro cytaire dans un tube D M langer centrifuger lire contr ler les r sultats n gatifs au microscope 6 Protocoler les r sultats 7 Si le r sultat est toujours positif avec une dilution de 1 128 poursuivre les dilutions jusqu 1 2048 Interpr tation La derni re dilution laquelle
27. e De se fait si le test de Coombs doit tre r alis plusieurs reprise il n y aura plus assez de mat riel pour effectuer d ventuelles analyses suppl mentaires A lUMT deux tests de Coombs sont pratiqu s le test de Coombs direct et le test de Coombs indirect Ces deux tests utilisent les m mes r actifs mais leur protocole respectif est quelque peu diff rent 2 1 Rappel th orique pour la compr hension du sujet 2 1 1 Antigenes Les antig nes sont constitu s de prot ines et d hydrates de carbone lls ont la particularit de provoquer une r ponse immune puis de r agir avec le produit de cette r ponse les anticorps Travail de dipl me Anne Delarze Travail de dipl me Anne Delarze Il existe plusieurs sortes d antig nes e Les h t roantig nes provenant d une autre esp ce e Les alloantig nes provenant d un autre individu mais de la m me esp ce e Les autoantig nes appartenant l individu II 2 1 2 Anticorps Les anticorps sont les produits de la r action immune Ce sont des prot ines immunoglobulines produit par les lymphocytes B suite une exposition des antig nes Ils ont la capacit de se fixer sp cifiquement aux antig nes r action r versible et d activer le syst me du compl ment Les immunoglobulines se classent selon la structure de leur r gion constante et de leur cha ne lourde ll existe cinq dasses d immunoglobulines diff rentes les IgG IgA IgM lgD et IgE
28. e En effet les tests sortis n gatifs puis positif par la suite partir de la m me suspension rythrocytaire et des m mes r actifs montrent clairement que ni les lavages ni la concentration de la suspension ne sont en cause Les 1 lavages lors des tests de Coombs indirects ont montr s qu ils donnaient des r sultats plus ou moins identiques Cependant il serait int ressant au niveau du laboratoire de choisir le lavage automatique car il permettrait une meilleure standardisation des tests Le lavage manuel bien que facile r aliser est effectu par plusieurs personnes diff rentes selon la quantit d NaCl ajouter aux h maties pour les laver et leur m lange le lavage peut tre l g rement diff rent Les deux programmes test s sur l automate Medion ont montr s qu ils donnaient des r sultats semblables Le but principal du nouveau programme Medion calqu sur le programme DiaMed tait de diminuer le temps de lavage Ce but a t atteint le temps a t diminu de presque la moiti Cette diff rence n est pas n gligeable notamment lorsque les tests doivent tre effectu s en urgence Cependant le programme ne peut pas encore tre utilis au laboratoire il doit d abord tre valid Des essais sur les tests de Coombs positifs devraient tre r alis s De plus il serait judicieux d instaurer dans la maintenance quotidienne des laves globules un rin age des t tes de centrifugations afin d liminer les pe
29. endre garde lors des observations effectu es sur ces r sultats Les cas de Coombs contr les n gatifs ont montr s que les r sultats n taient pas fiables cent pour cent r sultats diff rents pour des tests effectu s partir de la m me suspension rythrocytaire et des m mes r actifs 6 Conclusion Il faut pr dser ou avant la mise en place de ce travail de dipl me le laboratoire avait d j recherch comprendre l origine des Coombs contr le n gatifs Les tests s taient focalis s sur les r actifs et leur conservation Selon les fabricants le s rum de Coombs et le Coombs contr le doivent tre conserv s a une temp rature situ e entre 2 et 8 C Ceci n est pas toujours possible au laboratoire UMT En effet les r actifs utilis s au laboratoire des urgenc s se trouvent temp rature ambiante 24h 24 tandis que ceux du laboratoire de routine se trouve temp rature ambiante durant les heures d ouverture du laboratoire et sont conserv s au r frig rateur durant la nuit Les tests effectu s avaient donc pour but de comparer les r sultats des analyses selon la temp rature laquelle les r actifs taient conserv s ll en est ressorti que la plupart des r sultats taient semblables La m thode de conservation des r actifs l UMT n a donc pas t modifi e Cependant l origine du probl me et le fonctionnement des laves globules DiaMed et Medion sont rest s mal connus Ce travail de dipl me a donc
30. es 16 3 3 1 Description Li NN es raran arar an araana aaar an 17 332 Foncionnement EE 17 3 4 Rencontre avec les repr sentantes Bio rad et Medion 17 3 5 Laves globules DiaMed et Medon 17 A A iaaea a enile TAE EAEEREN TERNS 17 3 5 2 Avantageset inconv nients des deux laves globules cccocoonnccnnconoccnnnoconcnnnononocononos 18 Parti pratiQUe iseic panene kotan ieaiai e aaa aa EEE EE eme send R EE EEEE EEE a aR 19 4 1 Object deele ee Ee N E 19 4 2 Materiel et M thodes ees dina aia Ee 19 4 2 1 Mat riel sister tete ege e EES 19 a22 Ee E E EEN 19 Travail de dipl me Anne Delarze D N DQ H 9 4 3 lege DEE 23 43 1 Coombs dile Ct rmecnnsiisinn rra iia vai 23 4 3 2 COOMbSINdITE EE 23 4 3 3 Que faire en cas de Coombs contr le n gantf 24 44 SA e Eee naea TENE E aE ENERE EP ERRASSE 24 4 4 1 DiaClon Coombs Serum Anti lgG Ant C30 24 4 42 COOMbs Control Ciro EE 24 A A ed no 24 AAA Intesa 26 4 5 R sultats des tests effectu s seen 26 4S1 Forc s d aggl tination 522 em A A lic 26 4 5 2 R sultats de Coombs contr les n gatifs ccoooonnccnncoooccnnncnonccnnononnccnnonnnnccnnncononononons 27 4 5 3 R sultats de Coombs contr les positifs 30 Discussion E E 36 CONCISO E 36 REMETCIS MENE Suscribe rf rie 37 O eebe eege ebe 38 8 1 A A O EE E EE 38 8 2 Annexe 1 Protocole Coombs direct utilis au laboratoire UMT nesnesesesssesssesesssns 39 8 3 Annexe 2 Protocole Coombs indirect utilis
31. es globules DiaMed et Medion 3 5 1 Diff rences Les programmes utilis s sur les deux laves globules sont tr s diff rents L automate Medion met 2 minutes de plus que le DiaMed pour r aliser les 3 lavages Il a aussi t constat que le mod le Medion terminait son cycle de lavages avec moins d rythrocytes que celui de DiaMed De plus gr ce Travail de dipl me Anne Delarze un param tre de l appareil Medion le DSpinDown les tubes sortent plus propre que du lave globules DiaMed Ce param tre consiste en une centrifugation permettant aux h maties se trouvant sur la paroi du tube de se glisser au fond de celui d Autre diff ren importante le lave globules DiaMed permet de modifier les param tres pour chaque programme Pour le lave globules Medion la programmation se faiten deux temps les param tres globaux et les param tres de programme Une fois les param tres globaux introduits ils resteront les m mes pour tous les programmes introduits par la suite Les param tres de programme peuvent eux tre introduits diff remment pour chaque nouveau programme En r pertoriantles probl mes de Coombs contr le n gatif sur un mois l UMT a constat qu il y avait plus de probl mes sur l automate du laboratoire des urgences que sur celui de la routine Annexe 3 Cependant il ne faut pas oublier que ce laboratoire est ouvert 24h 24 il est donc normal que le nombre de Coombs contr le n gatifs soit plus lev 3
32. es sont agglutin es en tr s petits amas les autres se trouvent dans le surnageant ce qui le rend tr s l g rement rouge Une partie des h maties sont agglutin es en tr s petits amas peine Tr s faible visible l oeil nu les autres se trouvent dans le sumageant ce qui le rend rouge Tableau 7 Forces d agglutination Lors de la partie pratique la diff renciation a t faite entre une agglutination faible et une agglutination tr s faible Cela donne ainsi une indication suppl mentaire pour les r sultats qui pourra peut tre aider la compr hension des cas de Coombs contr les n gatifs Il ne faut pas oublier que ces agglutinations sont lues l il nu Chaque TAB aura donc sa propre perception de la force d agglutination Il se peut que d une personne l autre les r sultats soit l g rement diff rents Dans le cas de ce travail de dipl me une seule personne effectu les tests et lu les r sultats il est donc possible de comparer les r sultats des tests Travail de dipl me Anne Delarze Agglutination tr s forte Agglutination forte moyenne et Agglutination l g re Agglutination faible et tr s faible E ei Fig 19 Forces d agglutinations 4 5 2 R sultats de Coombs contr les n gatifs En tout 2 7 des tests ont r v l s un Coombs contr les n gatifs soit 19 cas sur les 700 tests effectu s avec diff rents param tres 2 1 de ces cas sont sortis n
33. faux n gatifs et retarder la livraison des produits sanguins L UMT poss de deux laves globules de marques diff rentes Bien qu ils soient utilis s pour effectuer les m mes tests leurs programmations ne sont pas identiques Ce travail de dipl me a pour but une meilleure compr hension du mode de fonctionnement de ces laves globules et de l influence des diff rents param tres de programmation afin de r duire voire liminer les probl mes de faux n gatifs et diminuer le temps de lavage Pour cela une comparaison entre plusieurs programmations a t effectu e sur les deux laves globules en parall le Abstract In the labor of the transfusion medicine Unit TMU like in others the use of automatons for tests execution is becoming more and more common Some tests like Coombs in tube as discussed in this work topic is a mix between manual and automated test These tests could be realized exdusively by an automaton but the TMU tends to keep the manual technique Indeed retrospectively the results obtained by automatons haven t been considered as important as the ones obtained manually in tubes The automaton daily used for the combs tests in tube is a cellwashing centrifuge As its name mentions it the function of this machine is to wash the red cells in purpose to remove the plasma and its proteins The washing step is very important if this one fails the results may be skewed false negatives and this may delay the delivery of t
34. glutinent de la m me mani re l g rement ou faiblement e Pourles programmes 1 et 2 de Medion un peu moins de 50 des cas agglutinent de mani re identique Ces agglutinations identiques sont souvent faibles e Pour tous les programmes les Coombs contr les agglutinent mieux lorsqu une seule goutte d h maties tait pr sente dans le tube de d part Travail de dipl me Anne Delarze Le tableau suivant compare les r sultats des 3 programmes DiaMed et Medion aux tests effectu s Coombs direct et indirect avec 1 lavage main ou automate Il ne tient pas compte du nombre de gouttes d h maties dans le tube de d part R sultats en Tableau 16 Comparaison des cas selon le test et le programme utilis Travail de dipl me Anne Delarze Dans ce tableau on voit que peu de cas de figures ressortent plus que les autres Il est donc plus difficile interpr ter Cas de figures les plus fr quents e Le lave globules DiaMed donne des agglutinations avec une croix de plus que les programmes Medion e Les lave globules DiaMed et le Medion en programme 1 donnent des agglutinations avec une croix de plus que le programme 2 de Medion Autres constatations e Pour les deux sortes de Coombs indirect lavage main ou automate environ 25 des cas agglutinent de mani re identique de force e Pourle Coombs indirect avec le 1 lavage la main on constate une l g re tendance de l appareil DiaMed donner une agglutination un
35. he blood products The TMU owns two cellwashing centrifuges of different brands Although they are used to proceed the same tests their programming is not the same This diploma work has for objective to present a better comprehension of the operating mode of these cellwashing centrifuges and the influence of different programming parameters in order to reduce not to say to rule out the false negatives problematic and to decrease the washing time For this a comparison between several programming has been completed on these two cellwashing centrifuges in parallel Mots cl s Keywords Immunoh matologie Immunohematology Test de Coombs en tube Coombs in tube Lave globules Cellwashing centrifuge Automate Automaton Manuel Manual Travail de dipl me Anne Delarze Table des mati res Sir 2 e le nds re ERRES E EE A EESE 2 Mots cl s O AM 2 Pr sentation E A O 5 lat ge A EP e ED eA a A E aa AER 5 2 1 Rappel th orique pour la compr hension du sujet 5 LLL ANSE NES O ele 5 2 12 e ee ue CN 7 2 13 Le compl EE 8 1 2 Testd Coombs le GE 9 2 3 Testide Coombsindi Clannad incitan eaten gees 9 2 4 R actifs utilis s pour les tests de Coombs 10 2 41 o Or EEE EIEEE Ae REEE AAEE E Rae 10 A a nn 11 2 4 3 Coombs serum licor ira 12 2 44 Coombs Controle inocencia 13 aves elo lle a idas 14 3 1 E EE 14 3 2 Lave globules DiaMed iia ii nd 14 3 2 1 DA ad 15 3 2 2 Fonctionnement ias 15 3 3 Lave globules M dion ssssdasssenain enge eng
36. iglobuline Tout comme pour le test de Coombs direct les lavages sont tr s importants S ils ne sont pas bien effectu s les r sultats peuvent appara tre faussement n gatifs Le test de Coombs indirect est utilis pour les tests de compatibilit majeur plasma du receveur h maties du donneur pour la recherche d anticorps irr guliers dans le plasma du patient plasma tester h maties avec antig nes connus mais aussi pour la recherche d un ph notype rythrocytaire h maties tester antis rum contenant des anticorps connus 2 4 R actifs utilis s pour les tests de Coombs 2 4 1 ImmusolCompacte Pour le lavage des h maties le service de transfusion sanguine CRS recommande l utilisation d une solution saline isotonique dont le pH est compris entre 7 0 et 7 5 A PUMT la solution utilis e pour les suspensions les lavages etles dilutions est l Immusol Compact SS 2 4 1 1 Composition de l Immusol Compact L Immusol Compact est un concentr de phosphate onique PBS il contient 0 4 de sodium azide et son pH est de 7 3 0 2 Il est dilu 20x avec de l eau d min ralis e avant son emploi 8 2 4 1 2 Stabilit de l Immusol Compact e L Immusol Compact se conserve entre 15 et 30 C jusqu la date de p remption Une fois dilu il doit tre utilis dans les 12 semaines Il est important de le stocker la temp rature indiqu e par le fabricant car une temp rature inf rieure 15
37. lave globules est le suivant un tube contenant une goutte d rythrocytes est introduit dans le lave globules Une fois le programme de lavage lanc le tube est rempli avec de l Immusol centrifug puis d cant Et ceci pour les 3 cycles A la fin le tube ne contient plus que des h maties lav es 3 2 Lave globules DiaMed Le lave globules DiaMed est un DiaCent CW Install l UMT en 2003 il est utilis dans le laboratoire de routine o quelques cas de Coombs contr le n gatifs sont recens s par mois Travail de dipl me Anne Delarze 3 2 1 Description 121 Laveuse centrifugeuse de cellules automatique 24 tubes dispos s dans 4 porte tubes Suspensions cellulaires ajust es Vitesse maximum de 2500 rotation par minute rpm Tempset vitesse de centrifugation ajustables Dimension 31 cm 27 cm 40 cm Poids 9 2 Kg Arriv e de l Immusol T te de centrifugeuse avec porte tubes Panneau de commande Fig 13 Lave globule DiaMed 3 2 2 Fonctionnement Selon l tape du programme le sens de rotation n est pas le m me Lors de la centrifugation du lavage et de la mise en suspension la rotation se fait dans le sens des aiguilles d une montre Lors de la d cantation la rotation se fait dans le sens contraire H La force centrifuge permet l Immusol qui arrive dans la t te de centrifugeuse de se r partir uniform ment dans les tubes La rotation dans le sens des aiguilles d une m
38. mbs contr les positifs Les tableaux contenant tous les r sultats des tests de Coombs effectu s durant la partie pratique de ce travail sont r pertori s dans l annexe 5 Afin d obtenir des r sultats plus daire ces r sultats ont t compar s puis convertis en pourcentage Les comparaisons ont t faites sur les crit res suivants 1 goutte vs 4 gouttes dans le tube de d part e 1 lavage manuel vs 1 lavage par automate lors des tests de Coombs indirect e Programme 1 de Medion vs programme 2 de Medion e Programme DiaMed vs programme 1 de Medion e Programme DiaMed vs programme 2 de Medion e Diff rence de force d agglutination entre les deux param tres compar s e Rapport de force entre les deux param tres compar s Cas de figures les plus souvent observ s e Cas de figure selon le test effectu et le lave globules utilis e Cas de figure selon la quantit d h maties au d part et le lave globules utilis e Force d agglutination selonl appareil utilis Travail de dipl me Anne Delarze Lors de l analyse des r sultats certains cas de figures se sont distingu s Le tableau suivant se base sur ces cas r sultats de tous les cas de figure en annexe 6 compi comp2 comp 3 compa comp 5 33 0 45 5 25 0 29 5 30 7 en am 1606 ne 100 ES oe am ax Tableau 12 Cas de figures les plus observ s Gr ce ce tableau 12 les observations suivantes ont pu tre constat es Pour l
39. me Anne Delarze entre 80 et 90 des cas o les r sultats sont identiques ou quasi identiques 1 et 2777 colonne du tableau 13 Le tableau suivant permet d tudier le rapport de force entre les deux tests compar s F goutte goutte Vs 4 gouttes Manuel Vs Automate Medion P1 VS Medion P2 DiaMed VS MedionP1 Diamed VS Medion P2 Tableau 14 Rapport de force entre les comparaisons Gr ce ce tableau 14il a t constat que e Dans un tiers des cas le rapport de force entre les deux param tres a d montr qu une goutte d h matie dans le tube de d part et que le lave globule DiaMed ont tendance donner des agglutinations plus fortes que les quatre gouttes de d part et les programmes Medion e Dans un tiers des cas le 1 lavage effectu l aide de l automate donne des r sultats d agglutinations plus fortes que le lavage fait manuellement e Les programmes 1 et 2 de Medion donnent des rapports de forces plus ou moins identiques Travail de dipl me Anne Delarze Afin de mieux comprendre l influence des trois diff rents programmes sur la force d agglutination du Coombs contr le les tests de Coombs direct avec 1 ou 4 gouttes ont t compar s Lave globules gt em 20 o EE a a o EE A gt WEE EE Tableau 15 Cas de figure selon le nombre de gouttes et l appareil utilis Il en ressort que e Pour le programme DiaMed environ 50 des cas ag
40. n rythrocytaire dans un tube Centrifuger lire 5 V rifier les r sultats n gatifs au microscope puis ajouter une goutte d h maties contr les Centrifuger lire Si la r action est n gative recommencer la proc dure Protocoler les r sultats Technique en tubes Serum de Coombs sans anti C3d Diamed R actifs sp cifiques Travail de dipl me Anne Delarze S rum de Coombs polysp cifique H maties contr les pour le test de Coombs Proc dure A 2 3 7 8 Laver 3 fois les h maties tester Pr parer une suspension d h maties 3 5 dans du NaCI 0 9 Distribuer une goutte de s rum de Coombs et une goutte de suspension rythrocytaire dans un tube Centrifuger lire V rifier les r sultats n gatifs au microscope puis ajouter une goutte d h maties contr les Centrifuger lire Si la r action est n gative recommencer la proc dure Protocoler les r sultats Technique en gel R actifs sp cifiques Cartes Diamed LISS Coombs Diluent Diamed ID Diluent 2 Proc dure 1 2 3 M langer 20 ul de sang total ou 10 ul de concentr rythrocytaire dans 1 ml de diluent 2 Distribuer 50 ul de la suspension rythrocytaire dans chaque puits Centrifuger lire protocoler les r sultats Sp cificit d un TDA La seule technique utilis e l UMT est la technique en tubes Technique en tubes R actifs sp cifiques S rum de Coombs monosp cifique H maties
41. ndance donner des agglutinations plus fortement que les 4 gouttes Travail de dipl me Anne Delarze e _Les r sultats du 1 lavage effectu par l automate agglutinent plus que ceux fait la main 5 Discussion des r sultats Une partie des objectifs fix s au chapitre 4 1 ont pu tre atteints gr ce aux diff rents tests effectu s En effet les r sultats obtenus pour les Coombs contr les n gatifs montrent clairement qu une trop grande quantit d h maties rend leur lavage moins efficace et pose un plus grand nombre de probl mes La standardisation de la suspension rythrocytaire 3 gr ce un talon visuel a permis de partir sur les m mes bases pour chaque test effectu Cependant la m thode tant visuel et chaque chantillon de sang tant diff rent il est difficile d obtenir une suspension de 3 r guli re Les comparaisons entre les r sultats de Coombs indirect suite un 1 lavage ex cut la main ou par automate ont montr s que la diff rence entre ces deux modes de lavage tait faible Pour le lave globules Medion l analyse des r sultats a d montr que les deux programmes test s sur cet automate taient plus ou moins quivalents Toutefois un plus grand nombre de Coombs contr le n gatifs ont t constat s avec le nouveau programme ce qui s explique en grande partie par le fait que la plupart de ces cas taient des tests effectu s avec 4 gouttes d h maties Il faut toutefois pr
42. ns le tube de d part est respect Les deux programmes Medion ont chacun eu un cas n gatif lors d un test de Coombs direct n gatif Seuls deux cas ont t r pertori s en Coombs indirect alors que dans la vie quotidienne du laboratoire il est plus fr quent d obtenir un contr le n gatif lors d un Coombs indirect que lors d un Coombs direct Annexe 3 Si on ne prend en compte que les contr les n gatifs tableau 10 on constate que la moiti des cas ont t observ s avec le programme 2 de Medion et que trois quarts des cas sont dus une quantit excessive de mat riel dans le tube de d part Medion Programme 1 Medion Programme 2 4 gouttes 15 78 9 Tableau 10 Pourcentage de Coombs contr les n gatifs selon le lave globule et la quantit de mat riel au d part Travail de dipl me Anne Delarze Le tableau suivant donne un pourcentage des Coombs contr les n gatifs par rapport au total des tests effectu s pour un param tre Comme pour le tableau pr c dent on observe clairement un plus grand nombre de contr le n gatif lors de Coombs direct avec le programme 2 de Medion et avec les 4 gouttes d h maties dans le tube d part Toutefois on remarque que par rapport au total des tests effectu s peu de r sultats sont n gatifs zeen Jee ZZ P e A Tableau 11 Pourcentage de Coombs contr les n gatifs selon le nombre total de test effectu s pour un param tre donn 4 5 3 R sultats de Coo
43. nt en g n ral des anti immunoglobulines humaines et des anti C3d humains L ajout du s rum de Coombs cr e des ponts entre les mol cules fix es sur les h maties provoquant ainsi une agglutination Pour que la r action puisse tre positive il faut au minimum 200 mol cules d lg sur un rythroqyte Si les immunoglobulines sont en trop faible quantit le test appara tra n gatif En cas de r action positive avec le s rum de Coombs polysp cifique des r actifs monosp dfiques sont utilis s afin de d terminer la sp cifidt des anticorps fix s sur les h maties IgG IgM IgA C3d Antig ne la surface du globule rouge Anticorps humain anti rythrocytaire Antiglobuline AGH R actif de Coombs Globules rouges sensibilis s GRS chez Ajout de l antiglobuline Agglutination Ponts form s par un patient ayant une an mie h molytique aux GRS lav s l antiglobuline fix e aux anticorps immunologique Anticorps humains fix s humains aux antig nes des globules Fig 5 Test de Coombs direct ou Test direct l antiglobuline Une des tapes les plus importantes du test de Coombs est celle des lavages Cette tape permet d liminer le plasma en exc s autour des h maties En cas de mauvais lavages les prot ines se trouvant dans le plasma peuvent neutraliser le s rum de Coombs le rendant indisponible pour les h maties sensibilis es Le r sultat du test est donc faussement n gatif Le Co
44. nt l ex cution des analyses et l interpr tation des r sultats respectivement les chantillons et r actifs utiliser se r f rer aux documents 1 2 Les r sultats d analyses sont protocol s sur les listes de travail comme d crit dans le document 3 Indications Situations n cessitant un TDA avec recherche de C3d Examen demand par un client m me si d j effectu depuis moins de 3 jours Echantillon de donneur examen demand par le m decin de l UCA Echantillon foetal Echantillon de nouveau n Patient devant subir une greffe Investigation de r actions transfusionnelles WV WW WWW V Situations n cessitant un TDA sans recherche de C3d gt Test pr transfusionnel accompagnant un d pistage d anticorps irr guliers gt D termination d antig nes rythrocytaires par la technique en Coombs indirect gt Titration des anticorps irr guliers gt Situations n cessitant directement une recherche des sp cificit s gt Dernier r sultat du TDA positif gt Demande sp cifique d un Coombs IgA gt Pr sence d agalutinines froides de spectre thermique gt 22 C gt Auto contr le positif Principes e Pas d ant riorit s gt s rum de Coombs polysp cifique avec ou sans C3d selon la situation Travail de dipl me Anne Delarze e R sultats positif gt d termination des sp cificit s IgG C3d gM IgA Le r actif anti lgG dilu est utilis en parall le permet de pr venir un effet de zone
45. ntiellement cette petite diff rence L g re _ O diff rence d Q O O Fig 14 Rotor Bio Rad Fig 15 Porte tubes lorsqu il se vu depuis dessus trouve l horizontal 3 3 Lave globules Medion Le lave globules Medion est un DAC lll Install l UMT en 2010 il est utilis dans le laboratoire des urgences o plusieurs cas de Coombs contr le n gatif sont recens s par mois 1 Arriv e de l Immusol Panneau de commande T te de centrifugeuse avec porte tubes Fig 16 Lave globules Medion Travail de dipl me Anne Delarze 3 3 1 Description Da Laveuse centrifugeuse de cellules automatique 24tubes Tempset vitesse de centrifugation ajustables Vitesse maximum 3500rpm Dimensions 28 cm 33 cm 39 5 cm _Poids 23kg 3 3 2 Fonctionnement Tout comme pour le lave globules DiaMed la rotation se fait dans un sens lors des lavages de la centrifugation ou de la suspension et dans l autre sens pour la d cantation principe des tubes bloqu s la verticale Cependant le rotor est rond et chaque tube peut bouger individuellement ils sont donc tous trait s de la m me mani re Suite de nombreux probl mes le programme enregistr sur ce lave globules a du tre modifi plusieurs reprises Un lavage est constitu de 3 cycles identiques Pour un cycle le programme estle suivant Remplissage des tubes avec 3 ml d Immusol Centrifugation 2500 rpm pendant 45 secondes
46. ombs direct est utilis dans plusieurs cas par exemple lors d un bilan d incompatibilit foeto maternelle suite une an mie immuno h molytique ou encore comme analyse compl mentaire suite une r action transfusionnelle 2 3 Test de Coombsindirect Le test de Coombs indirect permet de r v ler la pr sence d un complexe antig ne anticorps la surface des h maties Tout comme pour le Coombs direct les IgG sont recherch s Le but de ce test est de sensibiliser les h maties avec les anticorps contenus dans un plasma ou un antis rum Si l antig ne correspondant l anticorps est pr sent la surface des h maties les anticorps vont se Travail de dipl me Anne Delarze fixer Celles ci tant trop loign es pour se fixer entre elles le r actif de Coombs va leur permettre d agglutiner La proc dure du test de Coombs indirect est quelque peu diff rente de celle du Coombs direct En effet afin de sensibiliser les h maties in vitro celles ci doivent tre incub es 37 C temp rature optimale pour les r actions antig ne anticorps de type IgG 3 Y 4 A p gt Anticorps d un s rum Incubation des globules Complexes antig ne anticorps Ajout de l AGH Agglutination car les humain reconnaissant dans le s rum humain la surface des globules GRS apr s lavage globules rouges sont un antig ne des GRS sensibilis s rythrocytaire Fig 6 Test de Coombs indirect ou Test indirect l ant
47. on de l Enlisst I10 L Entlisst 1l contient de l albumine bovine de la glycine de la g latine et un agent conservateur Il est tamponn avec du phosphate 2 4 2 2 Stabilit L Enlisst 11 doit tre conserv temp rature ambiante Il ne faut pas le r frig rer car l albumine bovine pr dpite froid Une fois ouvert le r actif reste stable 45 jours tant qu il ne d passe pas la date de p remption 7 Anne Delarze Travail de dipl me 2 4 3 Coombs serum IgG L UMT utilise deux sortes de s rum de Coombs e Anti Human Globuline Mono type Medion Contient des IgG et du C3d Utilis quand la recherche du C3d a un sens au niveau clinique par exemple en cas d an mie h molytique Coombs serum lgG Bio Rad Oo Contient des IgG polysp cifiques mais pas de C3d Oo Selon le fabricant L importance d un anticompl ment dans un r actif polysp cifique est discutable tant donn que les anticorps qui ne peuvent tre d tect s que par leur aptitude a se lier 10 au compl ment fix s sont rares EH mang mg zapen ca a Ge Lg Fig 8 S rum de Coombs IgG 2 4 3 1 Composition du Coombs serum IgG Le Coombs s rum lgG contient des anti lgG polysp cifiques de lapin ainsi qu une solution de conservation 2 4 3 2 Stabilit Le s rum est stable jusqu sa date de p remption s il est conserv entre 2 et 8 C Di 2 4 3 3 Interpr tation des r sultats
48. on et compromettre les r sultats 4 3 1 Coombs direct Mettre 1 ou 4 gouttes d rythrocytes dans un tube Laver3 foisles h maties tester Pr parer une suspension d h maties 3 dans de l Immusol Distribuer 1 goutte de s rum de Coombs 1 goutte de la suspension rythrocytaire Centrifuger Lire macroscopiquement Ajouterle Coombs contr le en cas de Coombs direct n gatif Centrifuger S 6 S Lire macroscopiquement ds 4 3 2 Coombsindirect Comme indiqu dans le chapitre 2 3 Coombs Indirect le test de Coombs indirect est utilis de diff rentes mani res A l UMT la majeure partie des probl mes rencontr s avec le Coombs contr le touchent les tests de compatibilit C est pourquoi les tests de Coombs indirect ont t effectu s uniquement pour les tests de compatibilit Pour un test de compatibilit on fait r agir le plasma du patient avec les rythrocytes du donneur Dans le contexte de ce travail il serait possible d utiliser du NaCl la place du s rum car le but est d obtenir une r action n gative Cependant il est plus int ressant de travailler avec du plasma pour se trouver dans des conditions r elles Il a donc t choisi pour des raisons de facilit de travailler avec le plasma et les rythrocytes du donneur ainsi les conditions sont r elles et le test est forc ment n gatif Mettre 1 ou 4 gouttes d rythrocytes dans un tube Laver 1foisles rythrocytes soit
49. ontre permet le basculement des portes tubes vers l ext rieur Dans l tape de d cantation la rotation se fait dans le sens contraire ainsi les port tubes sont bloqu s dans une position quasi verticale et la force centrifuge les vide jusqu une volume pr d fini 7 Le programme utilis sur ce lave globules est le programme de r f rence donn dans le mode d emploi du fournisseur DiaMed Cependant il est possible de d finir ses propres programmes si on le d sire par exemple si la sensibilit du proc d n est pas suffisante Un lavage est constitu de 3 cycles identiques Pour un cycle le programme est le suivant Lavage pendant 25 secondes 2100 rpm Injection d Immusol pendant 3 8 secondes Pause de 4secondes Injection d Immusol pendant 3 5 secondes D cantation pendant 8 secondes 500 rpm Travail de dipl me Anne Delarze Pour les 3 lavages habituellement r alis s pour les tests de Coombs cette centrifugeuse prend environ 3 minutes Il faut pr ciser que le rotor du lave globules DiaMed n est pas rond contrairement celui de chez Medion Lors de la centrifugation les tubes ne sont donc pas tous trait s exactement de la m me mani re Lorsque les portes tubes basculent vers l ext rieur les tubes ne se retrouvent pas tous au m me niveau Cependant lors de la r alisation de la partie pratique il n a pas pu tre d montr que la diff rence entre les forces d agglutination tait due esse
50. permis au laboratoire UMT de mieux comprendre le fonctionnement ces deux automates Il est important d tre conscient que les r sultats obtenus dans travail ne sont pas significatifs En effet aucun Coombs contr le n gatif n a pu tre confirm n gatif et la quantit des tests qui ont pos s probl me par rapport la totalit des tests est beaucoup trop minime 19 cas sur 700 pour en d duire r ellement quelque chose Il avait d j t observ lors du travail quotidien au laboratoire que la quantit d h maties mise dans le tube de d part n tait pas la m me selon la TAB effectuant l analyse Le choix de confronter la quantit indiqu e dans le protocole une quantit excessive d h maties a permis de constater clairement que 4 gouttes provoque un plus grand nombre de Coombs contr les n gatifs Il serait toutefois int ressant de poursuivre l exp rience en comparant des quantit s plus proches deux gouttes d h maties par exemple Travail de dipl me Anne Delarze Afin de standardiser la suspension rythrocytaire un talon visuel pourrait tre introduit au laboratoire Cependant comme indiqu auparavant cet talon a certaines limites tant essentiellement visuel il sera de toute mani re l g rement diff rent selon la personne effectuant le test On peut aussi se demander suite aux r sultats de Coombs contr les n gatifs obtenus si un talon visuel r soudrait r ellement une partie du probl m
51. probl me peut tre d des lavages insuffisants une contamination de la solution saline isotonique ou un s rum de Coombs inactif voire contamin H Travail de dipl me Anne Delarze Fig 11 Coombs contr le positif Fig 12 Coombs contr le n gatif 2 4 4 1 Composition du Coombs Contr le Le Coombs contr le est constitu d une suspension d h maties humaines de groupe O Rh sus positif une concentration de 5 sensibilis es avec des anticorps lgG humains anti D incomplet en solution isotonique tamponn e contentant des agents conservateurs 1 2 4 4 2 Stabilit S il est conserv entre 2 8 C le Coombs contr le est stable jusqu la date de p remption Cependant la r activit du produit peut diminuer l g rement au fil du temps Certains signes montre une d t rioration du produit par exemple une h molyse un assombrissement des cellules ou encore l apparition spontan e d amas H Laves globules 3 1 G n ralit s Comme mentionn pr c demment les lavages sont une tape tr s importante lors des tests de Coombs S ils sont mal effectu s le r sultat du test peut tre fauss L UMT poss de deux laves globules de marques diff rentes e Dela marque Medion Utilis au laboratoire des urgences e Dela marque DiMed Utilis au laboratoire de routine firme ratach e Bio Rad Ces laves globules nous permettent un lavage rapide et standardis des tubes Le principe g n ral d un
52. product_detail aspx id 6158navvis yes page consult e le 10 01 2012 Fig 14 15 17 18 Sch ma personnel Travail de dipl me Fig 16 Fig 19 Anne Delarze Lave globule Medion Medion Dagnostics Products Centrifuges DAC III D dingen 2006 page web Acc s http www medion diagnostics ch e zentrifugen htm page consult e le 10 01 12 Forces d agglutinations Austin Community College Unit 6 Grading Agglutination Reactions page web Acc s http www austincc edu mlt bb Grading 20Agglutination 20Reactions jpg page consult e le 20 03 12 Life s blood Granding reactions page web Acc s http faculty matemadison edu mljensen BloodBank lectures Basic_Labora tory_ techniques amp Reagents htm
53. r le temps de lavages de l automate Medion plusieurs programmes ont t test s parall lement Pour cela deux programmes diff rents ont t d finis Programme 1 programme Medion actuellement utilis Programme 2 programme proche de celui de DiaMed Travail de dipl me Anne Delarze La signification de chaque param tre pr sent dans le tableau 2 se trouve dans l Annexe 7 Volume Adjust Rotor places Shakings Suspension Agitation Dspin Down Suspension M Agit Spin M Spin Decant M Cycle SalWash ml Wash rpm Twash sec os ox nn CE CT TS cet x Tableau 2 Param tres des programmes Medion 1 et 2 Les param tres du programme 2 de Medion ont t modifi s afin qu ils soient le plus proches possible du programme de DiaMed Cependant le mode de param trage des deux appareils tant diff rent il n a pas t possible de les rendre parfaitementidentiques Travail de dipl me Anne Delarze Les sch mas qui suivent repr sentent les tests effectu s sur chaque lave globules Pour le lave globule DiaMed 1 lavage Incubation L gende y 1 goutte au d part y 4 gouttes au d part Fig 17 Sch ma de la partie pratique sur lave globules DiaMed Travail de dipl me Anne Delarze Pour le lave globule Medion 1 lavage 1 lavage Incubation Incubation 3 cycles lavage 3 cycles lavage L gende y 1 goutte au d part y 4 goutte
54. s au d part P1 P2 Xx Analyse pr we mais non effe ctu e Fig 18 Sch ma de la partie pratique sur lave globules Medion Les analyses biff es taient pr vues mais n ont pas pu tre effectu es En effet pour les cas de Coombs contr les n gatifs n cessitant la r p tition du test la quantit de globules rouges tait insuffisante pour r aliser toutes les analyses Le protocole officiel des tests de Coombs indiquant que les tests doivent tre effectu s avec une goutte d rythrocytes les analyses effectu es avec 4 gouttes ont t abandonn es Travail de dipl me Anne Delarze 4 3 Protocoles Pour r aliser les tests de Coombs les protocoles tablis et valid s par le laboratoire UMT ont t utilis s Afin rendre la m thode plus r guli re une solution framboise talon 3 a servi d exemple pour toutes les autres suspensions Le protocole initial mentionne de mettre une goutte d rythrocytes par tube Dans le cadre de ce travail de dipl me il a t d cid de tester le protocole avec 1 ou 4 gouttes au d part afin de d terminer l influence d une trop grande quantit d h maties Il est important de pr dser que les t tes de centrifugations des deux laves globules ont t rinc es l eau chaude avant le d but de la partie pratique Ceci est rarement fait dans le quotidien du laboratoire mais a permis d enlever d ventuels petits cristaux d Immusol qui auraient pu se former dans les tuyaux de distributi
55. t de zone Erythrocyte H matie Opsonisation Anne Delarze Mouvement d une cellule ou d un organisme en r ponse un stimulus O 16 chimique Lyse de la cellule destruction de la cellule Effet observ lors de la pr sence d une trop grande quantit d anticorps cette quantit emp che les h maties d agglutiner Le tests peut para tre n gatifs alors qu en r alit il est positif Les dilutions du s rum de Coombs IgG permettent de contourner cet effet Synonyme de globule rouge Synonyme de globules rouge Processus biochimique par lequel une mol cule recouvre la membrane d une cellule cible pour favoriser sa phagocytose ingestion de la particule trang re afin de la d truire II Travail de dipl me Anne Delarze 8 2 Annexe 1 Protocole Coombs direct utilis au laboratoire UMT Test direct l antiglobuline humaine Contexte et objectif But du document Ce document fixe les indications et la mani re d effectuer un test direct l antiglobuline humaine TD A permettant de mettre en vidence des anticorps ou du compl ment la surface des h maties Il tablit Ia marche suivre face un auto contr le ou un TDA positif Destinataires Techniciennes en analyses biom dicales TAB de l UMT Mode op ratoire G n ralit s Toutes les proc dures d crites dans cette instruction de travail sont effectu es par une TAB de l UMT selon les disponibilit s Pour plus de d tails concerna
56. tits cristaux d Immusol et donc de s assurer de bonne la distribution de la solution dans les tubes Les difficult s rencontr es lors de travail ont plut t t d ordres techniques En effet la mise en place des tests pour 50 donneurs a demand une tr s bonne organisation de la partie pratique avant de commencer les exp riences La deuxi me difficult rencontr e t de rester r guli re lors de la lecture des forces d agglutination Et enfin la mise en commun des r sultats a t complexe notamment pour obtenir des tableaux lisibles et fadles comprendre D un point de vue personnel j ai trouv ce travail int ressant ll m a permis de me confronter un probl me quotidien au laboratoire UMT et d essayer d y rem dier La partie pratique n a pas t vidente le nombre de tubes tant cons quent une bonne ma trise de la gestion de l organisation et une grande concentration taient indispensables 7 Remerciements Je tiens remercier Mme Jocelyne Conne qui m a suivie et conseill e durant mon travail de dipl me ainsi que toutes les TAB pour leur collaboration Je remercie galement Mme Alexandra Durrer pour la traduction en anglais du sommaire et Mesdames Marika Vuilleumier et Anna Galvani repr sentes Medion et DiaMed pour leur disponibilit les r actifs fournis ainsi que les laves globules aimablement pr t s Travail de dipl me 8 Annexes 8 1 Lexique Chimiotaxie Cytolyse Effe
57. uire voire liminer le probl me Travail de dipl me Anne Delarze L gende Medion programme 1 Medion programme 2 S BEER Coombs direct 4 gouttes Ajout d une goutte de Coombs contr le total 2 gouttes de CC Medion programme 2 Refait le test avec la m me solution framboise ed Ajout d une goutte de Coombs contr le total 2 gouttes de CC Medion programme 2 Refait le test avec la m me solution framboise Ajout d une goutte de Coombs contr le total 2 gouttes de CC Medion programme 2 Refait le test avec la m me solution framboise de bouteille contr le d Ajout d une goutte de Coombs contr le total 2 gouttes de CC Medion programme 2 Refait le test avec la m me solution framboise Ajout d une goutte de Coombs contr le total 2 gouttes de CC Medion programme 2 Refait le test avec la m me solution framboise Ajout d une goutte de Coombs contr le total 2 gouttes de CC Medion programme 2 Refait le test avec la m me solution framboise Coombs indirect 1 goutte Ajout d une goutte de Coombs contr le total 2 gouttes de CC 1er lavage automate Refait le test avec la m me solution framboise Medion programme 1 Coombs indirect 1 goutte Ajout d une goutte de Coombs contr le total 2 gouttes de CC Ler lavage la main Refait le test avec la m me solution framboise Medion programme 1 Ajout d une goutte de Coombs contr le total 2 gouttes de CC Medion programme 2
58. une agglutination est observ e donne le titre du test de Coombs D termination des sous classes IgG La technique de r f rence est la technique en gel Technique en gel R actifs sp cifiques Cartes Diamed DAT lgG1 lgGs Diluent Diamed ID Diluent 2 Proc dure 1 2 3 Laver 3 fois les h maties tester M langer 10 ul d h maties concentr es et lav es dans un ml de diluent 2 Distribuer 50 ul de la suspension rythrocytaire dans chaque puits Centrifuger lire protocoler les r sultats Documents li s r f rences le 2 3 4 IT RE Interpr tation des r sultats en immuno h matologie IT RE Analyses immuno h matologiques_r actifs PO RE Tra abilit de la demande au r sultat d analyse IT RE Recherche et caract risation des anticorps anti rythroc ytaires GESTION DU DOCUMENT Auteur s Jocelyne Conne Validation janvier 2007 Giorgia Canellini Lilly Habegger Jean Daniel Tissot Approbation Jocelyne Conne Lib ration par le service AQ Jocelyne Conne Christel Bonny Travail de dipl me Anne Delarze 8 3 Annexe 2 Protocole Coombs indirect utilis au laboratoire UMT Test de compatibilit majeur Contexte et objectif But du document D tailler la mani re d effectuer les tests de compatibilit c est dire la mise en pr sence du plasma ou du s rum du receveur et des h maties du donneur pour permettre de d tecter chez le receveur des
59. volume de remplissage Nombre de place disponible dans le rotor Nombre d agitations Nombre de secousses apr s la pr paration d une suspension Activer ou d sactiver la possibilit de r glage du parametre de programme DSpinDown Activer ou d sactiver la possibilit de r glage du param tre de programme SalSusp ml n est utile que quand on fait une suspension Activer ou d sactiver la possibilit de r glage du param tre de programme Agit Spin Activer ou d sactiver la possibilit de r glage du param tre de programme SpinDecant 8 8 2 Param tres de programme Da Cycle SalW ash ml Wash rpm TWash sec Decant rpm DSpinDown Agit Spin Spin rpm Tspin sec SpinDe cant Nombre de cycle de lavage Volume de remplissage du s rum physiologique par tube Vitesse de rotation pour la marche de la centrifugeuse pendant un cycle de lavage Dur e de la centrifugation d un cycle de lavage Vitesse de rotation lors dela d cantation pendant un cycle de lavage Activer ou d sactiver le cycle de centrifugation n cessaire pour s parer les gouttes sur la paroi des tubes Activer ou d sactiver l agitation qui a lieu avantle cycle de centrifugation destin la r action d a gel utination Vitesse de rotation pour la centrifugation pour la r action d agglutination Dur e de centrifugation pour la r action d agglutination Activer ou d sactiver la d cantation apr s le cycle de centrifugation pour la
60. yses de routine et celles des donneurs L UMT suit les recommandations de l Association Suisse de M decine Transfusionnelle ASMT et du Service de Transfusion Sanguine de la Croix Rouge Suisse STS CRS Swissmedic cautionne dans la totalit ces recommandations qui d crivent les m thodes appropri es utiliser dans le cadre du bilan pr transfusionnel afin de compatibiliser les groupes sanguins des produits sanguins labiles avec ceux du patient Hl Introduction Depuis plusieurs mois les technicien ne s en analyses biom dicales TAB de UMT ont pu constater que le contr le effectu lors des tests de Coombs en tubes n tait pas toujours positif comme il devrait l tre Le test de Coombs est l un des tests les plus importants d immunoh matologie il fait partie des tests de base L antiglobuline contenue dans le s rum de Coombs permet de d celer la pr sence d anticorps anti rythrocytaires irr guliers ou de fractions du compl ment la surface des globules rouges La plupart des anticorps pr sents chezles patients sont des alloanticorps de type IgG En cas de Coombs contr le n gatif les produits sanguins ne peuvent pas tre d livr s Il faut refaire le test jusqu l obtention d un contr le positif ce qui peut provoquer une perte de temps non n gligeable Cela retarde la lib ration des produits sanguins et donc la transfusion De plus dans certains cas la quantit d chantillon disponible est tr s faibl
Download Pdf Manuals
Related Search