VitriFreezeTM VitriThawTM VitriFreezeTM VitriThawTM
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1. 1 Con una pipeta atenuada o un dispositivo adecuado deposite como m ximo 2 blastocitos en un volumen de aproximadamente 0 3 pl de VitriFreeze 2 en el fondo del extremo del tubo de vitrificaci n 2 Coloque el tubo de vitrificaci n en la cubierta externa y s llelo como se indica en las instrucciones de uso del dispositivo HSV 3 Sumerja el dispositivo sellado en el nitr geno l quido Descongelaci n 1 Retire el tubo de vitrificaci n de la cubierta externa como se indica en las instrucciones de uso del dispositivo HSV 2 Sumerja inmediatamente el tubo de vitrificaci n en un medio de descongelaci n VitriThaw 1 previamente calentado 37 C y deje que se descongele entre 1 y 3 minutos 3 Transfi ralo al medio de descongelaci n VitriThaw 2 37 C y d jelo all durante 2 minutos 4 Transfi ralo al medio de descongelaci n VitriThaw 3 37 C y d jelo all durante 2 minutos 5 Por ltimo transfi ralo al medio de descongelaci n VitriThaw 4 37 C y l velo al menos durante 1 minuto 6 Transfi ralo al medio de cultivo de blastocitos para continuar con el cultivo de c lulas FertiPro N V Industriepark Noord 32 8730 Beernem Belgium Tel 32 0 50 79 18 05 Fax 32 0 50 79 17 99 URL www fertipro com E mail info fertipro com CE 0344 10 02 15 11 542. enne selon des proc d s tablis Par cons quent manipuler les sp cimens dans les conditions pr vues pour les agents susceptibles de transmettre le VIH ou l h patite Toujours porter des v tements de protection lors de la manipulation des sp cimens Toujours travailler dans des conditions d hygi ne strictes par ex poste de travail flux d air laminaire classe ISO 5 pour viter une ventuelle contamination Ne doit tre utilis que dans le but d crit ici La s curit long terme de la vitrification d embryons sur les enfants n s de cette proc dure est inconnue M V rifier que tous les milieux soient bien m lang s avant utilisation Nous vous recommandons fortement de bien lire toutes les tapes de la proc dure de vitrification r chauffage avant de commencer l op ration tapes pr liminaires Dans une bo te 4 puits remplir le premier puits avec 3001 de milieu de pr incubation le deuxi me avec la solution VitriFreeze 1 et le troisi me avec la solution VitriFreeze 2 Ensuite ouvrir autant de paquets de dispositifs HSV que n cessaire pour l tape de vitrification en tenant compte du fait qu 1 dispositif de vitrification haute s curit peut con tenir jusqu 2 embryons Installer de facon pratique sur la paillasse les parties distinctes du dispositif HSV en vue d un acc s simple ult rieurement dans la proc dure Pr paration de la cong lation Transf rer les embryons depuis le m
3. digt oder der Container offen oder defekt ist HINWEIEZOR LAGERUNG Lagern zwischen 2 8 C Vor Gebrauch nicht einfrieren Vor Sonnenlicht sch tzen Die Produkte k nnen nach dem ffnen bis zu 7 Tage lang ohne SicherheitseinbuBen verwendet werden sofern sterile Bedingungen gewahrt bleiben und die Produkte bei 2 8 C aufbewahrt werden Nach dem Verfalldatum nicht mehr benutzen Nach dem Transport f r maximal 5 Tage stabil bei Lagerung unter erh hten Temperaturen lt 37 C WARNUNGEN UND ANDERE VORSICHTSMASSNAHMEN StandardmaBnahmen zur Pr vention von Infektionen infolge der Verwendung von aus Humanblut oder plasma her stellten Medizinprodukten beinhalten die Spenderauswahl das Screening einzelner Spenden und Plasmapools hinsi chtlich bestimmter Infektionsmarker und die Durchf hrung wirksamer Schritte zur Inaktivierung Eliminierung von Viren w hrend der Herstellung Dessen ungeachtet kann die M glichkeit der bertragung von Infektionserregern bei Verabreichung von aus Humanblut oder plasma hergestellten Medizinprodukten nicht vollst ndig ausge schlossen werden Dies gilt auch f r die M glichkeit der bertragung unbekannter oder neuer Viren und anderer Krankheitserreger Es liegen keine Berichte ber best tig te Virusiibertragungen mit Albumin vor das nach den Spezifikationen des Europ ischen Arzneibuchs mit etabli erten Verfahren hergestellt wurde Alle Proben sind daher so zu handh
4. hren 1 Hiraoka K Kinutami M et al 2004 Blastocoele collapse by micropipetting prior to vitrification gives excellent survival and pregnancy outcomes for human day 5 and 6 expanded blastocysts Hum Reprod 19 2884 2888 2 Kuleshova L and Lopata A 2002 Vitrification can be more favourable than slow cooling Fertil Steril 78 449 454 3 Son W Y Yoon S H Yoon H J Lee S M and Lim J H 2003 Pregnancy outcome following transfer of human blastocyst vitrified on electron microscopy grids after induced collapse of the blastocoele Hum Reprod 18 137 139 4 Vanderzwalmen P Bertin G Debauche C H Standaert V And Schoysman R 2000 In vitro survival of metaphase Il oocytes and blastocysts after vitrification in an Hemi Straw HS system Fertil Steril 74 Suppl 215 5 Vanderzwalmen P Bertin G Debauche C H Standaert V van Roosendaal E Vandervorst M Bollen N Zech H Mukaida T Takahashi K And Schoysman R 2002 Births after vitrification at morula and blastocyst stages effects of artificial reduction of the blastocoelic cavity before vitrification Hum Reprod 17 744 751 6 Vanderzwalmen P Bertin G Debauche C H Standaert V Bollen N van Roosendaal E Vandervorst M Schoysman R and Zech H 2003 Vitrification of human blastocyst with the Hemi Straw carrier application of assisted hatching after thawing Hum Reprod 7 1 8 7 S Shen X Yang M J
5. lation 1 pendant 3 minutes 3 Transf rer la paillette dans le milieu de d cong lation VitriThaw 2 37 C et la laisser dans ce milieu pendant 2 minutes 4 Transf rer la paillette dans le milieu de d cong lation VitriThaw 3 37 C et la laisser dans ce milieu pendant 2 minutes 5 Transf rer enfin la paillette dans le milieu de d cong lation VitriThaw 4 37 C et la laver pendant au moins 1 minute 6 Transf rer la paillette dans le milieu de culture des blastocystes pour la poursuite de la culture cellulaire BIBLIOGRAPHY BIBLIOGRAFIA BIBLIOGRAPHIE BIBLIOGRAPHIE BIBLIOGRAF A VitriFreeze_Thaw_10 02 15 indd 2 VitriFreeze VitriThaw Medium f r Vitrifizierung und Auftauen menschlicher Embryonen Dokument Bezugsziffer FPO9 146 R01 B 4 Aktualisierung 10 02 2015 VERWENDUNGSZWECK VitriFreeze und VitriThaw VitriFreeze Thaw sind gebrauchs fertige Medien in einem Set f r die Vitrifizierung und zum Auftauen menschlicher Embryonen HINTERGRUND Vitrifizierung d h die Konservierung bei sehr niedrigen Temperaturen ohne Einfrieren kann gegen ber einer langsa men Senkung der Temperatur von Vorteil sein Kuleshova und Lopata 2002 Die Vitrifikation wurde aufgrund der uneinheitlichen Ergebnisse beim langsamen Einfrieren von Blastozysten als Alternativverfahren eingef hrt Durch Verwendung ultraschneller Vitrifizierungsverfahren konnten die Erfolgsquoten der Vitrifizierung erh ht werden Die Vitri
6. medios est n bien mezclados antes de utilizarlos Recomendamos fervientemente leer todos los pasos del procedimiento de vitrificaci n calenta miento antes de iniciar el proceso Pasos preliminares En una placa de 4 pocillos llene el primer pocillo con 300 ul del medio de preincubaci n el segundo con la soluci n VitriFreeze 1 y el tercero con VitriFreeze 2 A continuaci n abra tantos paquetes de dispositivos HSV como sea necesa rio para el paso de vitrificaci n teniendo en cuenta que el dispositivo HSV 1 pueden tener hasta 2 embriones Coloque convenientemente las partes separadas del dispositivo HSV en el rea de trabajo para poder acceder con facilidad m s adelante durante el proceso Preparaci n para congelaci n Transfiera los embriones del medio de cultivo de las c lulas de blastocito a cada una de las soluciones VitriFreeze seg n el siguiente esquema Pre Vitri Vitri Etapa incub Freeze 1 Freeze 2 Temperatura Blastocito inicial Temperatura M rula 2 r 30 ambiente Blastocito BI expandido rd 3 30 37 C Blastocito BI expandido encogi Temperatura miento artificial 2 2 30 ambiente Antes de iniciar el procedimiento de vitrificaci n a fin de reducir el efecto negativo del blastocoel los blastocitos expandidos deben colapsar medi ante reducci n artificial con una pipeta de vidrio el volumen del blastocoel Vanderzwalmen et al 2002 Son et al 2003 Hiraoka 2004 Vitrificaci n
7. 02 2015 USO ESPEC FICO VitriFreeze y VitriThaw VitriFreeze Thaw son un conjunto de medios listos para usar para la vitrificaci n y la descongel aci n de embriones humanos INFORMACI N COMPLEMENTARIA La vitrificaci n que es la preservaci n a temperaturas extremadamente bajas sin congelaci n puede ser m s favorable que el enfriamiento gradual Kuleshova y Lopata 2002 Debido a la diversidad de resultados obtenidos despu s de la aplicaci n de m todos de congelaci n gradual para blastocitos se introdujo la vitrificaci n como enfoque alternativo Los ndices de satisfacci n de la vitrificaci n aumentaron con el uso de procedimientos de vitrificaci n ultra r pidos Hace ya varios a os la vitrificaci n de blastocitos y embrio nes con diferentes portadores de embriones tuvo como resultado gran cantidad de embarazos A fin de lograr la vitrificaci n as ptica de blastocitos se desarroll el kit de vitrificaci n de alta velocidad HSV Cryo Bio System Vanderzwalmen et al 2000 El extremo del tubo HSV se cre de modo que pueda mantener los blastoci tos en un volumen muy peque o de soluci n lo que brinda tasas de enfriamiento y descongelaci n r pidas en com paraci n con las obtenidas mediante la inmersi n de tubos pl sticos de 0 25ml sellados en nitr geno l quido Como alternativa se encuentra disponible un m todo as ptico en forma de tubo VitriSafe de FertiPro N V COMPOSICI N Vitr
8. 1 805 850 mOsm kg gt Terreno Scongelamento VitriThaw 2 535 565 mOsm kg gt Terreno Scongelamento VitriThaw 3 405 435 mOsm kg Sterilit SAL 10 Endotossine lt 0 25 EU ml Test su embrioni murini blastocisti dopo 96 ore gt 80 Utilizzo di prodotti secondo farmacopea Ph Eur o USP se applicabile Il certificato delle analisi e MSDS sono disponibili su richiesta Non usare il prodotto se scolorito opaco o se presenta qualsiasi segno di contaminazione microbica Non usare il prodotto se il sigillo del contenitore aperto o in presenza di difetti durante la consegna del prodotto ISTRUZIONI FER TA CONSERVAZIONE Conservare a temperatura compresa tra i 2 8 C Non congelare prima dell uso Mantenere lontano dalla luce del sole prodotti possono essere usati in modo sicuro entro 7 giorni dall apertura se sono state mantenute le condizioni di sterilit e i prodotti sono stati conservati a 2 8 C Non usare dopo la data di scadenza Idoneo per il trasporto o lo stoccaggio a breve termine fino a 5 giorni a 37 C a temperature elevate AVVERTENZE E PRECAUZIONI Le misure standard per prevenire le infezioni derivanti dall uso di medicinali preparati dal sangue umano o dal plas ma includono la selezione di donatori il monitoraggio delle donazioni individuali e dei pool plasmatici alla ricerca dei marcatori specifici di infezione e l integrazione di fasi di pro duzione efficaci
9. Abeyta S L Benedict M P Rosen M I Cedars 2008 Vitrification using a closed cryo top system significantly improves day 3 embryo survival compared to slow freezing Fertil Steril 90 Suppl 1 8293 8293 8 Zech N H Lejeune B Zech H Vanderzwalmen P 2005 Vitrification of hatching and hatched human blastocysts effect of an opening in the zona pellucida before vitrification Reproductive BioMedicine Online 11 No 3 355 36 9 Jelinkova L Ditzel N Reeka N Gagsteiger F Moosova M Pavelkova J Rezabek K 2006 The removal of ZP from blastocysts before vitrification increased their survival and also their implantation rates Abstracts of the 22nd Annual Meeting of the ESHRE Prague Czech Republic 18 21 June 2006 10 Shebl O Ebner T Sommergruber M Sir A Tews G 2009 Cryopreserved blastocysts have a lower implantation but an equal live birth rate as compared to fresh blastocysts of the same quality a case control study Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica 88 No 8 944 947 11 Ebner T Vanderzwalmen P Shebl O Urdl W Moser M Zech N H Tews G 2009 Morphology of vitrified warmed day 5 embryos predicts rates of implantation pregnancy and live birth Reproductive BioMedicine Online 19 No 1 72 78 VitriFreeze VitriThaw ES Medio para vitrificar y descongelar embriones humanos Referencia del documento FP09 146 RO1 B 4 Actualizaci n 10
10. VitriFreeze VitriThaw Medium for vitrification and thawing of human embryos Doc reference FPO9 146 R01 B 4 Update 10 02 2015 INTENDED USE VitriFreezeandVitriThaw VitriFreeze Thaw areasetofready to use media for vitrification and thawing of human embryos BACKGROUND Vitrification which is preservation at extremely low tem peratures without freezing can be more favourable than slow cooling Kuleshova and Lopata 2002 Due to vari able results after application of slow freezing methods for blastocysts vitrification was introduced as an alternative approach The success rates of vitrification have been increased with the use of ultra rapid vitrification procedures Since several years vitrification of blastocysts and embryos using different embryo carriers has resulted in many pregnancies In order to accomplish aseptic vitrification of blastocysts the HSV High security vitrification kit Cryo Bio System was developed Vanderzwalmen et al 2000 The tip of the HSV straw is designed to hold the blastocysts in a very small vol ume of vitrification solution allowing fast cooling and thawing rates as compared to those achieved by immersion of sealed 0 25ml plastic straws into liquid nitrogen An alternative aseptic method is now also available in the shape of the VitriSafe straw available from FertiPro N V COMPOSITION VitriFreeze Thaw are DMSO ethylene glycol based vitrifica tion media that also contain PBS s
11. aben als ob sie HIV oder Hepatitis bertragen k nnten Bei der Handhabung von Proben ist stets Schutzkleidung zu tragen Stets unter streng aseptischen Bedingungen arbeiten z B in einer Laminar Flow Arbeitsbank ISO Klasse 5 um eine m gliche Kontamination zu vermeiden Nur f r den bestimmungsgem en Gebrauch Die langfris tige Unbedenklichkeit einer Vitrifizierung von Embryonen im Hinblick auf die sp ter daraus geborenen Kinder ist unbekannt METHODEN un Alle Medien vor dem Gebrauch gut mischen Es wird dringend empfohlen sich vor Beginn des Verfahrens alle Schritte zur Durchf hrung der Vitrifizierung Erw rmung durchzulesen Vorbereitungsschritte In einer Zellkulturschale mit 4 Kavit ten die erste Kavit t mit 300pl Pr inkubationsmedium die zweite Kavit t mit Vitrifreeze 1 und die dritte mit Vitrifreeze 2 L sung f llen Als N chstes die f r die Vitrifizierung ben tigte Anzahl von Packungen mit HSV Vorrichtungen ffnen 1 HSV Vorrichtung kann bis zu 2 Embryonen aufnehmen Die einzelnen Packungen mit HSV Vorrichtungen auf dem Arbeitstisch bereitlegen um sie sp ter w hrend des Verfahrens rasch griffbereit zu haben Vorbereitung des Einfrierens Die Embryonen aus dem Blastozysten zellkulturmedium in folgender Reihenfolge und Dauer in jede der Vitrifreeze L sungen berf hren Pr Vitri Vitri Stadium inkub lt Freeze 1 Freeze2 Temperatur Fr he Blastozyste Raum Morulae r e 30 temperatur Blas
12. ans l ordre indiqu ci dessus Bo tes puits par ex Nunc 144 444 R servoir de cong lation avec azote liquide Bain marie pouvant maintenir le 37 C Pipettes att nu es Pince Dispositif de vitrification dispositif de vitrification haute s curit HSV Cryo Bio System Poste de travail flux d air laminaire classe ISO 5 Microscope Minuteur de laboratoire VITRIFREEZE THAW ET CULTURE D EMBRYONS Les milieux VitriFreeze Thaw peuvent tre utilis s en asso ciation avec les milieux FertiCult Flushing IVF et G3 avant la cong lation et apr s la d cong lation Composition chimique pH entre 7 20 7 40 Osmolalit gt Milieu de pr incubation VitriFreeze 270 290m0sm kg gt Milieu de d cong lation VitriThaw 4 270 290mOsm kg gt Milieu de d cong lation VitriThaw 1 805 850 mOsm kg gt Milieu de d cong lation VitriThaw 2 535 565 mOsm kg gt Milieu de d cong lation VitriThaw 3 405 435 mOsm kg St rilit SAL 10 Endotoxines lt 0 25 EU ml Test MEA de survivance embryonnaire blastocytes apr s 96h gt 80 Utilisation de produits de la pharmacop e europ enne Ph Eur ou am ricaine USP le cas ch ant Le certificat d analyse et la fiche toxicologique sont disponibles sur demande 10 02 15 11 54 V RIFICATIONS AVANT UTILISATION Ne pas utiliser le produit s il est d c
13. cial shrinkage 2 x 30 temperature Before starting the vitrification procedure in order to reduce the negative effect of the blastocoel expanded blastocysts should be collapsed by reducing artificially with a glass pipette the volume of the blastocoel Vanderzwalmen et al 2002 Son et al 2003 Hiraoka 2004 Vitrification 1 Using an attenuated pipette or an equally suitable device deposit maximum 2 blastocysts in a volume of approxi mately 0 3pl of VitriFreeze 2 in the gutter of the tip of the vitrification straw 2 Place the vitrification straw in the outer sheath and seal it as indicated in the instructions for use of the HSV device 3 Plunge the sealed device into the liquid nitrogen Thawing 1 Remove the vitrification straw from the outer sheath as indicated in the instructions for use of the HSV device 2 Immediately plunge the vitrification straw into pre heated VitriThaw Thawing medium 1 37 C and leave in thawing 1 for 3 minutes 3 Transfer into VitriThaw Thawing medium 2 37 C and leave in this medium for 2 minutes 4 Transfer into VitriThaw Thawing medium 3 37 C and leave in this medium for 2 minutes 5 Finally transfer into VitriThaw Thawing medium 4 37 C and wash for at least 1 minute 6 Transfer into blastocyst culture medium for continued cell culture VitriFreeze VitriThaw a Terreno per vetrificare e scongelare embrioni umani Documento di riferimento FPO9 146 R01 B 4 Aggior
14. en un periodo corto de tiempo a elevadas temperatura periodos superiores a 5 d as a 37 C ADVERTENCIAS Y PRECUACIONES Las medidas est ndares para prevenir infecciones causadas por el uso de productos medicinales preparados a partir de sangre o plasma humanos incluyen la selecci n de donantes el an lisis de las donaciones individuales o los grupos de plasma para buscar marcadores de infecci n y la incorporaci n de los pasos de fabricaci n efectivos para la inactivaci n eliminaci n de virus No obstante cuando se administran productos medicinales preparados a partir de sangre o plasma humanos no puede excluirse por completo la posibilidad de transmitir agentes infecciosos Lo mismo ocurre con los virus desconocidos o emergentes y otros pat genos No se informaron transmisiones de virus compro badas con la alb mina fabricada seg n las especificaciones de Farmacopea Europea mediante los procesos estableci dos Por lo tanto todos los espec menes deben manipularse como si fuesen capaces de transmitir VIH o hepatitis Utilice siempre vestimenta de protecci n cuando manipule espec menes Trabaje siempre en condiciones de higiene estrictas por ejemplo estaciones de flujo de aire laminar clase ISO 5 para evitar la posible contaminaci n Solo para uso espec fico La seguridad a largo plazo de la vitrificaci n de embriones aplicada a ni os nacidos a partir de este procedimiento se desconoce Aseg rese de que todos los
15. enfolge zu verwenden NICHT IM SET ENTHALTENES MATERIAL Zellkulturschalen mit Kavit ten z B Nunc 144 444 Einfriertank mit Fl ssigstickstoff Wasserbad eingestellt auf stabile 37 C attenuierte Pipetten Pinzette Vitrifizierungsvorrichtung HSV Vorrichtung Cryo Bio System Arbeitsbank zum sterilen Arbeiten Laminar Flow bzw LAF Bench ISO Klasse 5 Mikroskop Stoppuhr VITRIFREEZE THAW UND EMBRYONENKULTURMEDIUM VitriFreeze Thaw kann vor dem Einfrieren und nach dem Auftauen mit FertiCult Medien Sp lmedium IVF Medium und G3 Medium kombiniert werden PRODUKTSPEZIFIKATIONEN Chemische Zusammensetzung pH Wert zwischen 7 20 7 40 Osmolarit t gt VitriFreeze Pr inkubationsmedium 270 290 mOsm kg gt VitriThaw Auftaumedium 4 270 290 mOsm kg gt VitriThaw Auftaumedium 1 805 850 mOsm kg gt VitriThaw Auftaumedium 2 535 565 mOsm kg gt VitriThaw Auftaumedium 3 405 435 mOsm kg Sterilit t SAL 10 Endotoxine lt 0 25 EU ml Mouse Embryo Assay Blastozysten nach 96h gt 80 Gebrauch von Ph Eur oder USP Grad Produkten gegebenenfalls Analysebescheinigung und Sicherheitsdatenblatt sind auf Anfrage erh ltlich e O GEBRAUCH Benutzen Sie das Produkt nicht mehr wenn es verf rbt ist wolkig oder wenn es irgendeine Form von mikrobiell Kontamination aufweist Benutzen Sie das Produkt nicht wenn bei Lieferung das Siegel besch
16. fizierung von Blastozyten und Embryonen unter Verwendung verschiedener Embryonentr ger wird seit Jahren erfolgreich durchgef hrt wie zahlreiche Schwangerschaften belegen Zur Durchf hrung einer aseptischen Vitrifizierung von Blastozyten wurde das HSV High Security Vitrifizierungskit Cryo Bio System entwickelt Vanderzwalmen et al 2000 Die Spitze des HSV Halms ist so gestaltet dass sich die Blastozysten dort in einem sehr geringen Volumen an Vitrifizierungsl sung befinden Dies erlaubt eine schnellere Abk hl und Auftaugeschwindigkeit als bei der Immersion versiegelter 0 25ml Kunststoffhalme in Fl ssigstickstoff Mit dem VitriSafe Halm von FertiPro N V erh ltlich ist nun auch eine aseptische Alternativmethode verf gbar ZUSAMMENSTELLUNG VitriFreeze Thaw sind Vitrifizierungsmedien auf DMSO Ethylenglycolbasis die auBerdem PBS Saccharose Ficoll und Humanserumalbumin 10 20g Liter enthalten VitriFreeze Thaw enthalten keine Antibiotika IM SETENTHATTENES MATERIALE ___ VitriFreeze kit VF_KIT1 1 Ampulle mit VitriFreeze Pr inkubationsmedium 5ml 1 Ampulle mit VitriFreeze Einfriermedium 1 1ml 1 Ampulle mit VitriFreeze Einfriermedium 2 1ml VitriThaw kit VT_KIT1 1 Ampulle mit VitriThaw Auftaumedium 1 5ml 1 Ampulle mit VitriThaw Auftaumedium 2 1ml 1 Ampulle mit VitriThaw Auftaumedium 3 1ml 1 Ampulle mit VitriThaw Auftaumedium 4 1ml Die Medien sind in der vorstehend angegebenen Reih
17. iFreeze Thaw son medios de vitrificaci n a base de glicol de etileno DMSO que tambi n contienen PBS sacarosa Ficoll y alb mina s rica humana 10 20g Litro VitriFreeze Thaw no contiene antibi ticos MATERIAL QUE SE INCLUYE A Kit VitriFreeze VF_KIT1 1 recipiente del medio de preincubaci n VitriFreeze 5ml 1 recipiente del medio de congelaci n VitriFreeze 1 1ml 1 recipiente del medio de congelaci n VitriFreeze 2 1ml Kit VitriThaw VT_KIT1 1 recipiente del medio de descongelaci n VitriThaw 1 5ml 1 recipiente del medio de descongelaci n VitriThaw 2 1ml 1 recipiente del medio de descongelaci n VitriThaw 3 1ml 1 recipiente del medio de descongelaci n VitriThaw 4 1ml Los medios deben utilizarse en el orden mostrado ante riormente MATERIAL QUE NO SE INCLUYE el placa de pocillos por ejemplo Nunc 144 444 dep sito de congelaci n con nitr geno l quido ba o de agua capaz de mantener 37 C pipetas atenuadas f rceps dispositivo de vitrificaci n dispositivo HSV Cryo Bio System estaci n de flujo de aire laminar clase ISO 5 microscopio temporizador VITRIFREEZE THAW Y CULTIVO DE EMBRIONES VitriFreeze Thaw pueden utilizarse con un medio FertiCult lavado FIV y G3 antes de la congelaci n y la descon gelaci n ESPECIFICA UCTO Composici n qu mica pH entre 7 20 7 40 Osmolalidad gt Medio de preincubaci n VitriF
18. ilieu de culture des blastocystes vers chacune des solutions VitriFreeze selon le plan suivant Pr Viti Vitri Stade incub Freeze1 Freeze2 Temp rature Stade pr coce de Temp rature blastocyste morula 2 2 30 ambiante Blastocyste Blastocyste expans 2 3 30 37 C Blastocyste Blastocyste expans r tr cissement Temp rature artificiel 2 2 30 ambiante Avant de d buter la proc dure de vitrification afin de r duire l effet n gatif du blastoc le les blastocystes expans s doivent tre effondr s par r duction artificielle avec une pipette en verre du volume du blastoc le Vanderzwalmen et al 2002 Son et al 2003 Hiraoka 2004 Vitrification 1 l aide d une pipette att nu e ou d un dispositif quiva lent d poser 2 blastocystes maximum dans un volume d approximativement 0 3pl de solution VitriFreeze 2 dans la goutti re de l extr mit de la paillette de vitrification 2 Placer la paillette de vitrification dans la paillette externe etla fermer herm tiquement comme indiqu dans le mode d emploi du dispositif HSV 3 Plonger le dispositif scell dans l azote liquide D cong lation 1 Retirer la paillette de vitrification de la paillette externe comme indiqu dans le mode d emploi du dispositif HSV 2 Plonger imm diatement la paillette de vitrification dans le milieu de d cong lation VitriThaw 1 pr chauff 37 C et la laisser dans la solution de d cong
19. ione basati su DMSO etilen glicole che contengono anche PBS saccarosio Ficoll e albumina sierica umana 10 20g Litro VitriFreeze Thaw non contiene antibiotici MATERIALE INCLUSO NEDIOT o Kit VitriFreeze VF_KIT1 1 fiala di terreno da Pre incubazione VitriFreeze 5ml 1 fiala di terreno Congelamento VitriFreeze 1 1ml 1 fiala di terreno Congelamento VitriFreeze 2 1ml Kit VitriThaw VT_KIT1 1 fiala di terreno Scongelamento VitriThaw 1 5ml 1 fiala di terreno Scongelamento VitriThaw 2 1ml 1 fiala di terreno Scongelamento VitriThaw 3 1ml 1 fiala di terreno Scongelamento VitriThaw 4 1ml terreni devono essere usati secondo l ordine sopra visu alizzato MATERIALE NON COMPRESO NEL KIT piastre a pozzetti e g Nunc 144 444 serbatoio da congelamento con azoto liquido bagno d acqua capacit di mantenimento fino a 37 C pipette assottigliate pinze strumento da vetrificazione strumento HSV Cryo Bio System LAF bench ISO Class 5 microscopio lab timer VITRIFREEZE THAW E EMBRIOCOLTURA VitriFreeze Thaw pu essere usato insieme al terreno FertiCult Flushing IVF e G3 prima del congelamento e dopo lo scongelamento SPECIFICHE DEL PRODOTTO Composizione chimica pHtra7 20 7 40 Osmolalit gt Terreno da Pre incubazione VitriFreeze 270 290m0sm kg gt Terreno Scongelamento VitriThaw 4 270 290mOsm kg gt Terreno Scongelamento VitriThaw
20. namento 10 02 2015 USO PREVISTO VitriFreeze e VitriThaw VitriFreeze Thaw sono un gruppo di terreni pronti all uso per vetrificare e scongelare embrioni umani PREMESSA La vetrificazione che la preservazione a temperature estremamente basse senza congelamento pu essere pi favorevole rispetto al raffreddamento lento Kuleshova e Lopata 2002 A causa dei risultati variabili in seguito all applicazione di metodi di congelamento lento per le blastocisti stata introdotta la vetrificazione come approc cio alternativo La percentuale di successo della vetrificazione aumentata con l uso delle procedure di vetrificazione ultrarapida Da molti anni la vetrificazione di blastocisti ed embrioni usando diversi carrier per embrioni ha consentito molte gravidanze Per ottenere una vetrificazione asettica di blastocisti stato sviluppato il kit di vetrificazione di sicurezza HSV High Cryo Bio System Vanderzwalmen et al 2000 La punta della paillette di HSV stata progettata per tenere le blastocisti in un volume molto piccolo di soluzione di vetrificazione con sentendo una velocit di raffreddamento e congelamento rapida rispetto a quanto si realizza mediante immersione delle paillette di plastica da 0 25ml in azoto liquido Ora anche disponibile un metodo asettico alternativo sotto forma della paillette VitriSafe disponibile presso FertiPro N V COMPOSIZIONE VitriFreeze Thaw sono terreni per la vetrificaz
21. olor trouble ou en cas de suspicion de contamination microbienne Ne pas utiliser le produit si le scell du contenant est rompu ou d fectueux la livraison du produit Stocker entre 2 et 8 C Ne pas congeler avant utilisation Tenir l abri du soleil Les produits peuvent tre utilis s en toute s curit jusqu 7 jours apr s ouverture si des conditions de st rilit sont respect es et si les produits sont conserv s entre 2 et 8 C Ne pas utiliser une fois la date de p remption d pass e Stable apr s transport maximum 5 jours temp rature lev e lt 37 C AVERTISSEMENTS ET MESURES DE SECURITE Les mesures standard pour pr venir les infections r sultant de l utilisation de m dicaments pr par s partir de sang ou de plasma humains incluent la s lection des donneurs la recherche de marqueurs sp cifiques d infection sur les dons individuels et les m langes de plasma et l inclusion d tapes de fabrication efficaces pour l inactivation limina tion virale Cependant lorsque des m dicaments pr par s partir de sang ou de plasma humains sont administr s la possibilit de transmission d agents infectieux ne peut tre totalement exclue Ceci s applique galement aux virus inconnus ou mergents et autres agents pathog nes Aucune transmission de virus n a t rapport e avec l albumine fab riqu e conform ment aux sp cifications de la Pharmacop e Europ
22. per inattivare rimuovere i virus Nonostante ci in corso di somministrazione di prodotti preparati da sangue umano o da plasma non pu essere totalmente esclusa la possibilit di trasmettere agenti infettivi Questo si applica anche a virus o ad altri patogeni sconosciuti o emer genti Non esistono rapporti che testimonino di trasmissioni di virus attraverso l albumina prodotta in conformit con le specifiche dalla Farmacopea europea mediante i procedi menti stabiliti Pertanto maneggiare tutti i campioni come fossero in grado di trasmettere HIV o epatite Indossare sempre guanti protettivi quando si maneggiano i campioni Lavorare sempre rispettando rigorosamente le condizioni igieniche e s LAF bench ISO Classe 5 per evitare la possibile contaminazione Solo per l uso previsto La sicurezza a lungo termine della vetrificazione di embrioni sui bambini nati seguendo questa procedura non nota METODI Accertarsi che i terreni siano ben miscelati prima dell uso Prima di iniziare la procedura si raccomanda vivamente di leggere tutte le fasi della procedura di vetrificazione riscaldamento Fasi preliminari In una piastra a 4 pozzetti riempire il primo pozzetto con 300 ul di terreno da Pre incubazione il secondo con soluzione VitriFreeze 1 ed il terzo con VitriFreeze 2 Quindi aprire il numero di strumenti HSV richiesti per la fase di vetrificazi one tenendo conto che 1 strumento HSV pu contenere fino a 2 embrioni P
23. reeze 270 290 mOsm kg gt Medio de descongelaci n VitriThaw 4 270 290 mOsm kg gt Medio de descongelaci n VitriThaw 1 805 850 mOsm kg gt Medio de descongelaci n VitriThaw 2 535 565 mOsm kg gt Medio de descongelaci n VitriThaw 3 405 435 mOsm kg Esterilidad SAL 10 Endotoxinas lt 0 25 EU ml Ensayo en embri n de rat n blastocitos despu s de 96 hrs gt 80 Uso de productos que se adecuan a los requisitos de Ph Eur Farmacopea Europea o USP Farmacopea de Estados Unidos en caso de ser necesario Puede obtenerse el certificado de an lisis y las hojas de datos de seguridad del material a pedido TECHNICAL SUPPORT SUPPORTO TECNICO ASSISTANCE TECHNIQUE TECHNISCHE UNTERSTUTZUNG ASISTENCIA T CNICA o Lr No utilice el producto si se descolora adquiere una apariencia turbia o si muestra alguna evidencia de contaminaci n microbiana No utilice el producto si el precinto del envase est abierto o presenta alg n defecto cuando se entrega el producto Guarde el producto a una temperatura de 2 a 8 C No enfr e el producto antes del uso Aleje el producto de la luz solar Los productos pueden utilizarse de manera inocua hasta 7 d as despu s de que se abran cuando se mantienen las condiciones de esterilidad y los productos se almacenan a entre 2 y 8 C No utilice el producto luego de la fecha de vencimiento Indicado para ser transportado o almacenado
24. ryons a abouti de nombreuses grossesses Le kit de vitrification haute s curit HSV Cryo Bio System a t mis au point Vanderzwalmen et al 2000 afin de r aliser une vitrification aseptique des blastocystes L extr mit de la paillette HSV est concue pour contenir les blastocystes dans un tr s petit volume de solution de vitrification ce qui permet des vitesses de refroidissement et de d cong la tion rapides par rapport celles obtenues par immersion dans l azote liquide de paillettes en plastique de 0 25ml ferm es herm tiquement Une autre m thode aseptique est d sormais disponible avec la paillette VitriSafe disponible chez FertiPro N V COMPOSITIO VitriFreeze Thaw sont des milieux de vitrification base de DMSO thyl ne glycol qui contiennent galement du PBS du saccharose du Ficoll et de l albumine s rique humaine 10 209 litre Les milieux VitriFreeze Thaw ne contiennent pas d antibiotiques Kit VitriFreeze VF_KIT1 1 flacon de milieu de pr incubation VitriFreeze 5ml 1 flacon de milieu de cong lation VitriFreeze 1 1ml 1 flacon de milieu de cong lation VitriFreeze 2 1ml Kit VitriThaw VT_KIT1 1 flacon de milieu de d cong lation VitriThaw 1 5ml 1 flacon de milieu de d cong lation VitriThaw 2 1ml 1 flacon de milieu de d cong lation VitriThaw 3 1ml 1 flacon de milieu de d cong lation VitriThaw 4 1ml Les milieux doivent tre utilis s d
25. t 0 25 EU ml Mouse Embryo Assay blastocysts after 96h gt 80 Use of Ph Eur or USP grade products if applicable The certificate of analysis and MSDS are available upon request VitriFreeze_Thaw_10 02 15 indd 1 FRE USE HECKE i Do not use the product if it becomes discoloured cloudy or shows any evidence of microbial contamination Do not use the product if seal of the container is opened or defect when the product is delivered STORAGE INSTRUC TIONS raea ea Store between 2 8 C Do not freeze before use Keep away from sunlight The products can be used safely up to 7 days after opening when sterile conditions are maintained and the products are stored at 2 8 C Do not use after expiry date Stable after transport max 5 days at elevated temperature lt 37 C WARNINGS AND PRECAUTIONS Standard measures to prevent infections resulting from the use of medicinal products prepared from human blood or plasma include selection of donors screening of individual donations and plasma pools for specific markers of infection and the inclusion of effective manufacturing steps for the inactivation removal of viruses Despite this when medici nal products prepared from human blood or plasma are administered the possibility of transmitting infective agents cannot be totally excluded This also applies to unknown or emerging viruses and other pathogens There are no reports of proven vir
26. te la paillette di vetrificazione nel terreno Scongelamento VitriThaw 1 pre riscaldato 3 Trasferire nel terreno Scongelamento VitriThaw 2 37 C e lasciare in questo terreno per 2 minuti 4 Trasferire nel terreno Scongelamento VitriThaw 3 37 C e lasciare in questo terreno per 2 minuti 5 Trasferire infine nel terreno Scongelamento VitriThaw 4 37 C e lavare per almeno 1 minuto 6 Trasferire nel terreno di coltura di blastocisti per proseguire la coltura cellulare VitriFreeze VitriThaw Milieux pour la vitrification et la d cong lation d embryons humains R f rence du document FPO9 146 RO1 B 4 Mise jour 10 02 2015 UTILISATION PR VUE VitriFreeze et VitriThaw VitriFreeze Thaw sont des milieux pr ts l emploi pour la vitrification et la d cong lation d embryons humains CONTEXTE La vitrification qui est une m thode de conservation temp ratures extr mement basses sans cong lation peut s av rer plus favorable que le refroidissement lent Kuleshova et Lopata 2002 En raison de r sultats variables apr s l application de m thodes de refroidissement lent des blastocystes la vitrification a t introduite comme approche alternative Les taux de succ s de la vitrification ont augment avec l utilisation de proc dures de vitrification ultra rapides Depuis plusieurs ann es la vitrification de blastocystes et d embryons l aide de diff rents dispositifs de transport d emb
27. tozyste erwei terte Blastozyste r y 30 37 C Blastozyste erwei terte BI artifizielle Raum Schrumpfung Fad e 30 temperatur Vor Beginn der Vitrifizierung sollte die Blastozele in erweiterten Blastozysten mithilfe einer Glaspipette k nstlich kollabiert werden um ihre unerw nschte Auswirkungen zu reduzieren Vanderzwalmen et al 2002 Son et al 2003 Hiraoka 2004 Vitrifizierung 1 Mit einer attenuierten Pipette oder einer ebenso geeigneten Vorrichtung maximal 2 Blastozysten in einem Volumen von ca 0 3pl VitriFreeze 2 in die Rinne an der Spitze des Vitrifizierungshalmes geben 2 Den Vitrifizierungshalm in die AuBenh lse geben und versiegeln wie es in den Anweisungen zur Verwendung der HSV Vorrichtung beschrieben ist 3 Die versiegelte Vorrichtung in den Fliissigstickstoff eintauchen Auftauen 1 Den Vitrifizierungshalm aus der AuBenh lse nehmen wie es in den Anweisungen zur Verwendung der HSV Vorrichtung beschrieben ist 2 Den Vitrifizierungshalm sofort in das bereits auf 37 C erw rmte VitriThaw Auftaumedium 1 geben und 1 bis 3 Minuten lang auftauen lassen 3 In VitriThaw Auftaumedium 2 37 C berf hren und 2 Minuten in diesem Medium lassen 4 In VitriThaw Auftaumedium 3 37 C berf hren und 2 Minuten in diesem Medium lassen 5 SchlieBlich in VitriThaw Auftaumedium 4 37 C berf hren und mindestens 1 Minute waschen 6 Zur weiteren Zellkultur in Blastozysten kulturmedium berf
28. u convenire disporre le parti separate dello strumento HSV sul banco di lavoro per facilitare il successivo accesso nella procedura Preparazione congelamento Trasferire gli embrioni dal terreno di coltura cellulare di blastocisti in ciascuna delle soluzioni VitriFreeze usando lo schema seguente Pre Vitri Vitri Fase incub Freeze 1 Freeze 2 Temperatura Blastocisti precoce Temperatura Morula z 2 30 ambiente Blastocisti Blastocisti espansa 2 y 30 37 C Blastocisti Blasto cisti espansa con Temperatura trazione artificiale 2 r 30 ambiente Prima di iniziare la procedura di vetrificazione per ridurre l effetto negativo del blastocele le blastocisti espanse devono essere collassate riducendo artificial mente il volume del blastocele con una pipetta di vetro Vanderzwalmen et al 2002 Son et al 2003 Hiraoka 2004 Vetrificazione 1 Usando una pipetta assottigliata o altro strumento idoneo depositare al massimo 2 blastocisti in un volume di circa 0 3 pl di VitriFreeze 2 nella scanalatura della punta della paillette di vetrificazione 2 Posizionare la paillette di vetrificazione sul bordo esterno e sigillare come indicato nelle istruzioni per l uso dello strumento HSV 3 Immergere lo strumento sigillato nell azoto liquido Scongelamento 1 Rimuovere la paillette di vetrificazione dal bordo esterno come indicato nelle istruzioni per l uso dello strumento HSV 2 Immergere immediatamen
29. ucrose Ficoll and human serum albumin 10 20g Liter VitriFreeze Thaw do not contain antibiotics MATERIAL INCLUDED WITH THE KIT o VitriFreeze kit VF_KIT1 1 vial of VitriFreeze Pre incubation medium 5ml 1 vial of VitriFreeze Freezing medium 1 1ml 1 vial of VitriFreeze Freezing medium 2 1ml VitriThaw kit VT_KIT1 1 vial of VitriThaw Thawing medium 1 5ml 1 vial of VitriThaw Thawing medium 2 1ml 1 vial of VitriThaw Thawing medium 3 1ml 1 vial of VitriThaw Thawing medium 4 1ml The media should be used in the order displayed above MATERIAL NOT INCLUDED WITH THE KIT well dishes e g Nunc 144 444 freezing tank with liquid nitrogen water bath able to hold 37 C attenuated pipettes forceps vitrification device HSV device Cryo Bio System LAF bench ISO Class 5 microscope lab timer VITRIFREEZE THAW AND EMBRIOCULTORE oe VitriFreeze Thaw can be used in combination with FertiCult media Flushing IVF and G3 before freezing and after thawing PRODUCT SPECIFICATIONS Chemical composition pH between 7 20 7 40 Osmolality gt VitriFreeze Pre incubation medium 270 290mOsm kg gt VitriThaw Thawing medium 4 270 290m0sm kg gt VitriThaw Thawing medium 1 805 850 mOsm kg gt VitriThaw Thawing medium 2 535 565 mOsm kg gt VitriThaw Thawing medium 3 405 435 mOsm kg Sterility SAL 103 Endotoxins l
30. us transmissions with albumin manufactured to European Pharmacopoeia specifications by established processes Therefore handle all specimens as if capable of transmitting HIV or hepatitis Always wear protective clothing when handling specimens Always work under strict hygienic conditions e g LAF bench ISO Class 5 to avoid possible contamination Only for the intended use The long term safety of embryo vitrification on children born following this procedure is unknown METHOD Ensure all media are well mixed before use We strongly advice to read through all the steps of the vitrification warm ing procedure before starting the procedure Preliminary steps In a 4 well dish fill the first well with 300 pl of Pre incubation medium the second with VitriFreeze 1 and the third with VitriFreeze 2 solution Next open as many packs of HSV devices as will be required for the vitrification step taking into account that 1 HSV device can hold up to 2 embryos Conveniently place the separate parts of the HSV device on the workbench for easy access later in the procedure Freezing preparation Transfer the embryos from the blastocyst cell culture medium in to each of the VitriFreeze solutions using the following scheme Pre Vitri Vitri Stage incub Freeze 1 Freeze 2 Temperature Early Blastocyst Room Morulae 2 Fa 30 temperature Blastocyst expan ded Blastocyst a y 30 37 C Blastocyst expan ded Blastocyst Room artifi
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