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Agilent 1260 Infinity Binary LC

1. travers l injecteur Cela r duit le volume de retard du syst me d environ 70 ul et permet aux variations de gradient d atteindre la colonne plus rapidement Enable overlapped injection bascule la vanne d injection de la voie princi pale vers la voie de d rivation apr s l injection et soit apr s que l chant illon ait t vacu de l injecteur soit plus tardivement pendant l analyse apr s un intervalle de temps d fini L injecteur aspire ensuite l chant illon suivant de fa on tre pr t pour l injection suivante r duisant ainsi la dur e totale de cycle et augmentant la capacit d analyse d chantillons e Injection Valve Cleaning Injector Cleaning permet de rincer le syst me d injection avec du solvant Injection Valve Cleaning permet de basculer la voie de la vanne des points donn s pendant l analyse afin de minimiser le transfert lorsque des compos s pouvant poser un probl me sont inject s CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 119 6 Annexe Configuration d une m thode l aide de la fonction Modifier l ensemble de la m thode Onglet chantillonneur automatique haute performance Programme d injection du HiP ALS Setup Method Q HIP ALS Injector Program 4 BinPump 2 icc y DAD x Instrument Curves Parameter Draw default default sp ing default offset l ppend Insert ii Delete ii Clear all Move up Cut Copy Paste Mo
2. Time 100 Quantitative result sorted by Signal M Portrait Sample info on each page Add fraction table and ticks O Landscape Add chromatogram output Add summed peaks table Add sample custom fields to sample info Add compound custom fields Response 40 E3 Multi page Landscape Report layout for uncalibrated peaks 7 Pages Separately With calibrated peaks O Do not report 7 7 r Signal options Destination File setting Printer File prefix Report Screen Eile Unique PDF file name Cancel l Help Figure 33 cran D finition du rapport Pour obtenir un rapport simple avec les pourcentages des aires avec le mode Rapport classique qui permet d envoyer le rapport limprimante et de cr er un fichier PDF entrez les param tres suivants dans les diff rentes sections de l cran D finition du rapport Dans l onglet Reporting settings e Report mode Utilisez le mode Rapport classique Style Report Style Court 136 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe Quantitative results sorted by Signal Add Chromatogram Output Coch _ Chromatogram Output Portrait Size Axe Time 100 de la page Axe Response 40 de la page Destination Printer Coch Screen D coch File Coch File Setting PDF Coch Uniq
3. 1 mL min d isopropanol pour toute pression gt 1 MPa 10 bar 147 psi Configuration faible volume de retard lt 5 amplitude typiquement lt 2 Pr d finie en fonction de la compressibilit de la phase mobile 1 0 12 5 les solvants de pH lt 2 3 ne doivent pas contenir d acide attaquant l acier inoxydable M lange binaire sous haute pression CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit 1 Tableau 2 Caract ristiques des performances de la pompe binaire Agilent 1260 Infinity 61312B Type Sp cification Commentaires Volume de retard Plage de composition Pr cision de la composition Exactitude de la composition Commande Contr le local Sortie analogique Communications S curit et maintenance Configuration volume de retard standard 600 800 uL comprend 400 uL de m langeur en fonction de la contrepression Configuration faible volume de retard 120 uL plage r glable 0 100 plage recommand e 1 99 ou 5 uL min par voie la valeur la plus grande lt 0 15 cart type relatif ou 0 04 min cart type la valeur la plus grande 0 35 absolu 2 mL min 10 MPa 100 bar Logiciel de contr le des donn es Agilent par exemple ChemStation EZChrom OL MassHunter Agilent Instant Pilot Pour surveiller la pression 1 33 mV bar une sortie Bus CAN RS 232C
4. 100 Amau D auto y adjust offset 10 H Method Settings F Use method settings Apply to Method OK Cancel Help draw zero line Fraction Collector action collection ticks CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 87 5 88 Guide de d marrage rapide 3 Dans la liste Available Signals s lectionnez les signaux n cessaires puis cli quez sur Add pour les d placer vers la liste Selected Signals 4 Pour r gler les param tres individuels pour chaque signal s lectionnez le signal dans la liste Selected Signal et r glez les valeurs souhait es dans la partie inf rieure de la fen tre En plus des signaux provenant des d tecteurs vous pouvez afficher les trac s de param tres tels que la temp rature et la pression l aide du bouton Apply to Method vous pouvez enregistrer les param tres de cette fen tre dans la m thode La fen tre Online Plot se comporte comme du papier graphique lectronique et enregistre en continu la sortie du ou des d tecteurs ainsi que d autres param tres de sortie Les signaux sont trac s droite de la fen tre et se d placent ensuite vers la gauche Les derni res 90 min des donn es sont accessibles Il s agit d un outil pratique pour surveiller la ligne de base et observer les injec tions ant rieures Les chelles des axes des abscisses et des ordonn es peu vent tre ajust es directement l
5. Clapet de sortie Clapet de sortie Clapet d entr e Chambre Clapet d entr e gt de m lange de la bouteill de la bouteille de solvant A Joints Joints de solvant B Pistons Pistons T te de pompe A T te de pompe B Figure 1 Circuit hydraulique de la pompe binaire avec amortisseur et m langeur 12 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit 1 Composants d L amortisseur et le m langeur peuvent tre d connect s pour obtenir le volume de retard le plus faible de la pompe binaire Cette configuration est recommand e pour des applications faible d bit caract ris es par de forts gradients Figure 2 page 13 repr sente le circuit en mode faible volume de retard Pour des instructions sur la commutation d une configuration l autre consultez le mode d emploi de la G pompe binaire 1312B Le contournement du m langeur alors que l amortisseur reste connect n est pas une configuration prise en charge et risque d entra ner un comportement incorrect de la pompe binaire M langeur mm AMOrtiSSeUr Vanne de purge Sortie de la pompe 4 Capteur de pression vers r cup ration Clapet de sortie Clapet de sortie Clapet derie Clapet d entr e hambre de la b ji il s de m lange s Fe DQULEINE Joints Joints de la bouteille de solvant A p de solvant B Piston
6. Des d bits mod r s doivent tre utilis s mais des exp riences r centes ont montr que des d bits lev s peuvent aussi tre avantageux pour une meilleure s paration Pour les colonnes d un diam tre interne de 4 6 mm contenant des particules sub 2 microniques un d bit de 2 mL min est recommand comme valeur de d part Pour les colonnes sub 2 microniques d un diam tre interne de 2 1 mm 0 4 mL min est un bon point de d part Des gradients mod r s doivent tre utilis s par exemple une modification du gradient de 2 5 par minute La temp rature de la colonne est un param tre suppl mentaire pour l opti misation La temp rature peut influencer une s paration et ne doit pas tre n glig e CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 61 3 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity Comment am liorer la sensibilit La sensibilit d une m thode de s paration est li e au choix des phases sta tionnaires et mobiles car une bonne s paration avec des pics troits et une base stable avec un bruit minimum sont souhaitables Le choix de configura tion de l instrument a un effet et la configuration du d tecteur a un impact majeur 62 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 Configuration optimale de l instrument pour une sensibilit lev e Aspects g n raux e Pour obtenir le bruit de ligne de base le plus faible la confi
7. M lange T Capteur Capteur de pression de pression Volume de retard std 600 800 ul z Amortisseur M langeur 400 pl Clapet de purge Figure 15 Configuration de volume de retard standard pour colonnes d i de 3 et 4 6 mm avec sensibilit UV la plus lev e CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 45 3 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity La configuration de volume de retard standard est galement la configuration qui fournit une transf rabilit de m thode directe du syst me CPL Agilent s rie 1100 et 1200 au Binary LC 1260 Infinity ou inversement La figure Figure 16 page 46 montre deux chromatogrammes superpos s d une m thode d analyse du parac tamol et des impuret s associ es La m thode a t trans f r e d un syst me LC Agilent s rie 1200 un Binary LC Agilent 1260 Infinity avec des conditions chromatographiques colonne phase mobile param tres de pompe volume d injection temp rature de colonne param tres du d tect eur inchang es Comme on le voit un transfert de m thode fluide est possi ble mAU 1 Paracetamol 100 RT shift lt 1 4 80 60 Imp K Imp H 40 Imp J Agilent 1200 Series Impl 204 Agilent 1260 Infinit R g y N O a a a a a a a a a a L L O a L N E E OT TT TT E 0 5 10 15 20 25 30 35 min Figure 16 Comparaison du syst me CPL Agilent 1260 Infinity et Agilent s rie 1200 dans une configuration 46 CPL binaire 1260
8. ch Agilent Technologies Avertissements Agilent Technologies Inc 2006 2008 2011 2013 Conform ment aux lois nationales et inter nationales relatives la propri t intellec tuelle toute reproduction totale ou partielle de ce manuel sous quelque forme que ce soit par quelque moyen que ce soit voie lectronique ou traduction est interdite sans le consentement crit pr alable de la soci t Agilent Technologies Inc R f rence du manuel 61312 93303 Edition 02 2013 Imprim en Allemagne Agilent Technologies Hewlett Packard Strasse 8 76337 Waldbronn Ce produit peut tre utilis en tant que composant d un dispositif de diagnos tic in vitro si ce dernier est enregistr aupr s des autorit s comp tentes et est conforme aux directives corres pondantes Faute de quoi il est exclu sivement r serv un usage g n ral en laboratoire Version du logiciel Ce guide s applique la version A 01 04 d OpenLAB Agilent CDS Windows est une marque d pos e aux tats Unis de Microsoft Corporation Garantie Les informations contenues dans ce document sont fournies en l tat et pourront faire l objet de modifica tions sans pr avis dans les ditions ult rieures Dans les limites de la l g islation en vigueur Agilent exclut en outre toute garantie expresse ou implicite quant ce manuel et aux informations contenues dans ce dernier notamment mais sans s y restreindre tou
9. des l sions graves En pr sence d une men tion AVERTISSEMENT vous devez continuer votre op ration uniquement si vous avez totale ment assimil et respect les conditions mentionn es CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Contenu de ce manuel Contenu de ce manuel Ce manuel d crit le CPL binaire Agilent 1260 Infinity 1 Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit Ce chapitre pr sente les caract ristiques du Binary LC 1260 Infinity 2 Introduction Ce chapitre pr sente le Binary LC Agilent 1260 Infinity et ses principes de fonctionnement 3 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity Ce chapitre traite de l application des notions th oriques et de l utilisation des caract ristiques du syst me CPL pour d velopper des s parations optimis es 4 Configuration et installation du syst me Ce chapitre d crit l installation du logiciel l installation des modules et la pr paration du syst me avant fonctionnement 5 Guide de d marrage rapide Ce chapitre traite de l acquisition de donn es et du traitement des donn es avec le Binary LC 1260 Infinity 6 Annexe Ce chapitre apporte des informations compl mentaires concernant la s curi t les aspects juridiques l Internet et la configuration d une m thode CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 3 Sommaire Sommaire Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit 7 Cara
10. la position 1 il s agit de la position avant des 10 x 2 ml positions de flacons sur le c t droit du plateau flacons S lectionnez Run Control gt Sample Info et saisissez les param tres d chant illon requis Par exemple Subdirectory en option Name Pattern Vial Location Sample name Comment CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Guide de d marrage rapide 5 5 Sile syst me a d j atteint l quilibre et que la ligne de base est stable cli quez sur Run Method dans la fen tre Sample Info pour d marrer l injection Sinon cliquez sur OK et quand tout est pr t s lectionnez Run Control gt Run Method L l ment est ajout la Run Queue puis d marre automatiquement partir de l 6 L injection est r alis e et le chromatogramme appara t dans la fen tre Online Plot L acquisition de donn es se termine lorsque le Stop Time est atteint Le chromatogramme doit ressembler celui ci DAD1 Sig 254 4 Ref 550 100 DEMO 005 0105 D maU 100 1 023 80 eo 40 min CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 97 5 Guide de d marrage rapide Traitement des donn es Origine de la m thode Table de navigation T che d int gration T che de spectre Panneau de navigation 98 Dans le logiciel ChemStation une m thode contient tous les param tres n cessaires l acquisition des donn es gestion du syst me et
11. quilibrez le syst me pendant 10 minutes environ avant de lancer une analyse Tableau 8 Choix des solvants d amor age selon les utilisations Activit Solvant Commentaires Apr s une installation Isopropanol Meilleur solvant pour purger l air du syst me En cas de passage de la phase Isopropanol Miscible avec presque tous les invers e la phase normale les deux fois Apr s une installation Nettoyage du syst me en cas d utilisation de solutions tampons Apr s avoir chang de solvant aqueux Apr s l installation de joints de phase normal Joints en PE pqt de 2 0905 1420 thanol ou m thanol Eau de qualit HPLC Eau de qualit HPLC hexane 5 isopropanol solvants Alternative l isopropanol second choix en cas d indisponibilit d isopropanol Meilleur solvant pour redissoudre les cristaux de tampon Meilleur solvant pour redissoudre les cristaux de tampon Bonnes propri t s de mouillage CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 5 Guide de d marrage rapide propos du guide de d marrage rapide 84 Pr paration du syst me 85 Mise sous tension du syst me 85 Chargement de la m thode par d faut 86 Configuration du trac en ligne 87 Purge de la pompe 89 Acquisition de donn es dans la vue Contr le de m thode et d analyse 90 Param tres de la m thode de contr le du syst me avec l chant
12. travers les tuyaux du d gazeur Le solvant la sortie du d gazeur n est par cons quent pas compl tement d gaz Pompez pendant 10 minutes environ au d bit souhait avant de lancer une analyse Cela permet au d gazeur vide de d gazer correctement le solvant pr sent dans ses tuyaux CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Configuration et installation du syst me 4 Ouvrez la vanne de purge de la pompe R glez le d bit sur 5 mL min S lectionnez la voie Al R tablissez le d bit 0 A N a Observez si le solvant dans le tuyau de la voie A1 coule vers la pompe Si ce n est pas le cas d branchez le tuyau de la vanne de s lection de solvant fixez une seringue un adaptateur pour seringue et aspirez le liquide via le d gazeur Replacez le tuyau sur la vanne de s lection de solvant 6 Pompez 30 mL d isopropanol pour supprimer les bulles d air r siduelles 7 Passez l autre voie de solvant et r p tez les tapes 5 et 6 jusqu ce que toutes les voies aient t purg es 8 Arr tez le d bit et fermez la vanne de purge CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 79 4 Configuration et installation du syst me Amor age r gulier Quand Si le syst me de pompage est rest hors tension pendant un certain temps par exemple une nuit de l air se rediffuse dans la voie de solvant entre le d gazeur vide et la pompe Si des solvants comprenant des composants volatils so
13. Volume de retard et volume extra colonne Le volume de retard est d fini comme le volume du syst me entre le point de m lange dans la pompe et au sommet de la colonne Le volume suppl mentaire de la colonne est d fini comme le volume entre le point d injection et le point de d tection l exclusion du volume dans la colonne Volume de retard Dans les s parations du gradient ce volume entra ne un retard entre le chan gement de m lange dans la pompe et ce changement atteignant la colonne Le retard varie en fonction du d bit et du volume de retard du syst me En effet cela signifie que dans chaque syst me CPL il y a un segment isocratique sup pl mentaire dans le profil du gradient au d marrage de chaque analyse En g n ral le profil du gradient est rapport en termes de r glages du m lange au niveau de la pompe et le volume de retard n est pas rapport m me s il a un effet sur la chromatographie Cet effet devient plus significatif faibles d bits et faibles volumes de colonne et il peut exercer un impact important sur la transf rabilit des m thodes de gradient Il est par cons quent important pour les s parations rapides du gradient d avoir de faibles volumes de retard plus particuli rement avec des colonnes de petits diam tres par ex 2 1 mm de diam tre interne car elles sont souvent utilis es avec la d tection spectro m trique de masse Par exemple dans les m thodes CPL utilisant
14. des rapports sont enregistr s pour les prochaines utilisations de la m t hode la prochaine utilisation de la m thode ces v nements d int gration et ces param tres de rapport serviront tablir le rapport Cette section vient compl ter le bref description des fonctionnalit s d Analyse des donn es du logiciel ChemStation Vous pouvez consulter les manuels du logiciel ChemStation ainsi que le syst me d aide en ligne pour plus de rensei gnements concernant les fonctionnalit s performantes du logiciel ChemSta tion 102 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 6 Annexe Informations relatives la s curit 104 Informations sur les solvants 107 Informations sur les mat riaux 107 Agilent Technologies sur Internet 112 Configuration d une m thode l aide de la fonction Modifier l ensemble de la m thode 113 Informations sur la m thode 115 Instrument Acquisition 116 Traitement des donn es 132 Liste de contr le de l ex cution 139 Ce chapitre apporte des informations compl mentaires concernant la s curit les aspects juridiques l Internet et la configuration d une m thode Dre Agilent Technologies 103 6 Annexe Informations relatives la s curit Informations g n rales de s curit AVERTISSEMENT Les consignes g n rales de s curit suivantes doivent tre respect es lors de toutes les phases de fonctionnement d en
15. l isopropanol est souvent un bon solvant interm diaire consultez le tableau de miscibilit des solvants Pour des informations d taill es concernant la proc dure de purge consultez la section Amor age r gulier page 80 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 89 5 Guide de d marrage rapide Acquisition de donn es dans la vue Contr le de m thode et d analyse 90 Param tres de la m thode de contr le du syst me avec l chantillon test isocratique Pour le contr le du Binary LC 1260 Infinity un test avec un m lange test iso cratique Echantillon de v rification isocratique Agilent 01080 68704 est effectu sur la colonne command e et fournie avec votre syst me chantillon de v rification isocratique Agilent 01080 68704 contient les composants suivants dissous dans du m thanol phtalate de dim thyle phtalate de di thyle e _ biph nyle o terph nyle Les param tres de m thode pour la s paration de ce m lange test sont r su m s dans Tableau 9 page 91 pour la configuration de volume de retard stan dard et dans Tableau 10 page 92 pour la configuration de volume de retard faible CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Guide de d marrage rapide 5 Tableau 9 Param tres de m thode pour une premi re s paration test configuration de vol ume de retard standard Module Param tre Valeur Pompe Solvant Eau Solvant B Ac tonitrile D b
16. le traitement des donn es traitement des donn es pour obtenir des r sultats quantitatifs et qualitatifs Cette section d crit bri vement l int gration et les rapports de traitement des donn es pour que les s parations effectu es plus haut dans ce chapitre puissent tre int gr es et les rapports imprim s Pour des informations suppl mentaires concernant le traitement des donn es y compris l utilisation de l talonnage pour la quantification consultez le manuel du logiciel ChemStation baj gE mi ml gt ml mi TANG Ban tas pan mt eeta rata aae E momenat T CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Guide de d marrage rapide 5 Vue Traitement des donn es Pour ouvrir un chromatogramme dans la vue Data Analysis 1 Lancez une session de ChemStation hors connexion 2 Cliquez sur Data Analysis dans le coin inf rieur gauche de l cran 3 Dans le panneau de navigation recherchez le r pertoire de donn es conte nant les fichiers de donn es Toutes les donn es d injections uniques sont regroup s dans un sous groupe nomm Single Runs Double cliquez sur Single Runs pour charger ces fichiers de donn es dans le tableau de naviga tion 4 S lectionnez un fichier dans le tableau de navigation et double cliquez sur le fichier pour afficher le chromatogramme dans la visionneuse CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 99 5 Guide de d marrage rapide Int grat
17. 5 um de mat riau d emballage des d bits de 1 ml min sont g n ralement utilis s dans une colonne avec un diam int 4 6 mm et environ 0 2 ml min dans une colonne avec un diam int 2 1 mm m me v locit lin aire dans la colonne Sur un syst me avec un volume de retard typique de 1000 ul utilisant une colonne de 2 1 mm il y aurait un segment isocratique masqu initial de 5 min alors que sur un sys t me avec un volume de retard de 600 ul le retard serait de 3 min Ces volu mes de retard seraient trop lev s pour des analyses d une dur e d une deux minutes Avec des emballages sub 2 microniques le d bit optimal d apr s la courbe de Van Deemter est l g rement sup rieur et une chromatographie rapide peut donc utiliser trois cinq fois ces d bits entra nant ainsi des volu CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 mes de retard d environ une minute Toutefois le volume de retard doit ensuite tre r duit pour parvenir des retards d une fraction de la dur e d analyse pr vue Ceci est possible avec le Binary LC Agilent 1260 Infinity gr ce au faible volume de retard du circuit de la pompe et au faible volume du cir cuit travers l chantillonneur automatique Volume extra colonne Le volume extra colonne est une source de dispersion de pic qui r duira la r s olution de la s paration il doit donc tre r duit au maximum Les
18. 65 sensibilit du d tecteur 64 s paration chromatographique 31 utilisation de la colonne 64 P particules sub 2 microniques 34 plage de composition 25 plage de d bit r glable 24 plage de d bit 11 op rationnel 24 r glable 24 plage de fr quences 23 plage de tension 23 plateaux th oriques 32 poids 23 pompe vide 14 pompe binaire 11 pr cision de d bit 24 pr cision de la composition 25 pr cision du d bit 24 Pr sentation du d gazeur 14 pression plage de fonctionnement 24 pulsation 24 principe de fonctionnement 14 puissance consomm e 23 purge 89 rapport d finition 101 r duction automatique du volume de retard 50 r solution augmentation 55 optimisation 55 S s curit informations g n rales 104 symboles 106 sensibilit configuration de l instrument 63 optimisation 62 solutions tampons 11 solvants changement 81 sortie de signal analogique 25 syst me hydraulique 24 syst me mise sous tension 85 T tableau d v nements d int gration 100 temp rature ambiante de fonctionnement 23 temp rature ambiante hors fonctionnement 23 temp rature de fonctionnement 23 temp rature hors fonctionnement 23 tension secteur 23 trac en ligne CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me configuration 87 transfert 51 53 V vanne de s lection de solvant 11 volume d injection parvenir des volumes plus lev s 47 volume de retard commutation automati
19. A chaudes Un AVERTISSEMENT vous met en garde contre des situations qui pourraient causer des blessures corporelles ou entra ner la mort gt N allez pas au del d un avertissement tant que vous n avez pas parfaitement compris et rempli les conditions indiqu es Le message ATTENTION vous pr vient lors de situations risquant d entra ner la perte de donn es ou d endommager l quipement gt N allez pas au del d une mise en garde Attention tant que vous n avez pas parfaitement compris et rempli les conditions indiqu es 106 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 Informations sur les solvants Observez les recommandations suivantes lors de l utilisation de solvants e Observez les recommandations afin d viter le d veloppement d algues voir les manuels de la pompe e Les petites particules peuvent obstruer les capillaires et les vannes de mani re irr versible Il faut donc toujours filtrer les solvants avec des filtres de 0 4 um e L utilisation de solvants qui pourrait avoir un effet corrosif sur les pi ces du circuit est viter ou minimiser Consultez les sp cifications relatives la plage de pH fournies pour les diff rentes pi ces comme les cuves circula tion les mat riaux des vannes etc ainsi que les recommandations fournies dans les prochains chapitres Informations sur les mat riaux Les mat riaux dans le circuit sont s lectionn s avec soin
20. Amorcage du syst me Quand Pi ces n cessaires Pr parations AVERTISSEMENT Amor age initial Avant de pouvoir utiliser un d gazeur ou un tuyau de solvant il est n cessaire d amorcer le syst me L isopropanol est recommand comme solvant d amor age en raison de sa miscibilit avec presque tous les solvants HPLC et de ses excellentes propri t s de mouillage Quantit Description 1 Isopropanol Connectez tous les tuyaux des modules conform ment aux instructions fournies dans leurs manuels respectifs Remplissez chaque bouteille de solvant avec 100 mL d isopropanol Mettez le syst me sous tension Lors de l ouverture des raccords de capillaire ou de tuyau du solvant peut s couler La manipulation de solvants et de r actifs toxiques et dangereux peut comporter des risques pour la sant gt Respectez les r gles de s curit lunettes gants et v tements de protection telles qu elles figurent dans la fiche de s curit fournie par le fournisseur du solvant particuli rement s il s agit de produits toxiques ou dangereux 78 L outil de purge de Lab Advisor peut tre utilis pour purger la pompe automatiquement Si la pompe ne parvient pas aspirer le solvant contenu dans les bouteilles vous pouvez utiliser une seringue pour l aspirer manuellement travers les tuyaux et le d gazeur Lorsque vous amorcez le d gazeur vide l aide d une seringue le solvant est aspir tr s rapidement
21. Ed oeFc s Method and Run Control a han Automation Controls MA NEC A1 DS M La m thode par d faut DEF_LC M comprend un ensemble de param tres par d faut qui peuvent tre modifi s pour cr er une nouvelle m thode Par exem ple le d bit est r gl sur z ro et les Method Information et l Method History sont vierges Il est noter qu il est impossible d craser cette m thode lorsque les param tres sont modifi s Ainsi lorsque vous cliquez sur Save vous serez redirig vers la fonction Save As pour saisir un nouveau nom de m thode CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Guide de d marrage rapide 5 Pr paration du syst me Configuration du trac en ligne 1 Si la fen tre Online Plot n est pas visible Cliquez sur View gt Online Signals gt Signal Window 1 pour afficher la fen tre 0ntinePlot DAD1A DAD Signal A 2 Pour configurer le ou les signaux souhait s dans la fen tre Online Plot cli quez sur Change La fen tre de configuration Edit Signal Plot s affiche Edit Signal Plot Available Signals Selected Signals PMP1B BinPump Pressure PMP1C BinPump Flow PMP1D BinPump Solvent Ratio A E PMP1E BinPump Solvent Ratio B HM1A TCC Left Temperature HMB TEC Right Temperature PEER 3 D Signal B _ lt Remove DAD1C DAD Signal C me r Window x axis 3 4 min DAD14 DAD Signal Type acquired y axis range
22. Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 Comment augmenter le volume d injection La configuration standard de l chantillonneur automatique Agilent 1260 Infi nity peut injecter un volume maximum de 100 uL avec le capillaire boucle standard Pour augmenter le volume d injection le Mise niveau pour multi pr l vement G1313 68711 peut tre install Avec le kit vous pouvez ajouter un maximum de 400 uL ou de 1400 uL au volume d injection de votre injecteur Le volume total est alors de 500 uL ou de 1500 uL pour l chantillon neur automatique 1260 Infinity avec la t te analytique 100 uL Notez que le volume de retard de votre chantillonneur automatique est prolong lorsque vous utilisez les capillaires de si ge tendus du kit de multi pr l vement Lors que vous calculez le volume de retard de l chantillonneur automatique vous devez doubler le volume des capillaires prolong s Le volume de retard du sys t me d l chantillonneur automatique augmentera en proportion D s qu une m thode est r duite depuis une colonne plus haute vers une colonne plus petite il est important que la translation de m thode autorise une r duction du volume d injection proportionnellement au volume de la colonne afin de conserver la performance de la m thode Ceci pour conserver le volume d injection au m me pourcentage de volume par rapport la colonne Ceci est particuli rement impor
23. LC Agilent 1260 Infinity Description du produit Caract ristiques du Binary LC Agilent 1260 Infinity 8 Composants du syst me 10 Pompe binaire 1260 Infinity G1312B 11 D gazeur haute performance 1260 Infinity G4225A 14 chantillonneur automatique haute performance 1260 Infinity G1367E 15 Compartiment colonnes thermostat 1290 Infinity G1316C 17 D tecteur barrette de diodes 1260 Infinity G4212B 19 Vannes remplacement rapide 1200 Infinity 21 Caract ristiques 22 Ce chapitre pr sente les caract ristiques du Binary LC 1260 Infinity he Agilent Technologies 1 Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit Caract ristiques du Binary LC Agilent 1260 Infinity La conception du Binary LC 1260 Infinity est de fournir un chromatographe en phase liquide offrant une capacit de s paration haute r solution tout en conservant toutes les fonctionnalit s des applications HPLC standard Il offre donc une r trocompatibilit compl te pour vos m thodes HPLC et UHPLC ta blies L utilisation de particules sub 2 microniques STM signifie que pour les d bits importants ou les longues colonnes une pression suppl mentaire est n cessaire pour entra ner la phase mobile travers la colonne Le d bit du Binary LC 1260 Infinity est optimis pour produire une contrepression mini male et les colonnes ZORBAX RRHT ont une distribution de tailles de parti cule labor e qui produit beaucoup moins de c
24. ZDV Enlevez la colonne et remplacez la par un raccord ZDV Pr parez les bouteilles avec les solvants interm diaires appropri s voir Tableau 8 page 82 Si la voie ne contient pas de tampon passez l tape 4 Placez le filtre d aspiration de solvant dans une bouteille d eau Purgez la voie un d bit adapt aux tuyaux install s en g n ral 3 5 mL min pendant 10 minutes 4 Modifiez le circuit de votre syst me en fonction de votre application Le sel pr sent dans les tampons aqueux peut pr cipiter dans l isopropanol r siduel La pr cipitation de sels peut boucher les capillaires et le filtre gt Purgez d abord les voies de solvant contenant des concentrations lev es de sels avec de l eau avant d introduire des solvants organiques gt N ex cutez pas les tapes 5 7 pour des voies utilisant un tampon aqueux comme solvant 5 Remplacez la bouteille de solvant par une bouteille d isopropanol 6 Purgez la voie un d bit adapt aux tuyaux install s en g n ral 3 5 mL min pendant 5 minutes 7 Remplacez la bouteille d isopropanol par une bouteille de solvant destin e votre application 8 R p tez les tapes 1 7 pour les autres voies de la pompe binaire CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 81 4 82 Configuration et installation du syst me 9 Mettez la colonne souhait e en place r glez la composition et le d bit requis pour votre application puis
25. aide des boutons haut bas sur chaque axe Le bouton Adjust dans la fen tre Online Plot d place le point actuel du signal s lectionn sur la ligne z ro Le signal s lectionn est indiqu par la couleur des tiquettes de l axe des ordonn es Un signal en particulier peut tre s lect ionn en cliquant sur le signal ou en cliquant la description de signal appro pri e en haut du trac Le bouton Balance permet de r initialiser tous les d tecteurs Les modifications apport es la fen tre Online Plot n ont aucune influence sur les donn es stock es dans les fichiers de donn es individuels CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Guide de d marrage rapide 5 Purge de la pompe Il faut purger la pompe e Apr s que la pompe a t amorc e pour la premi re fois e Lorsque la pompe doit tre purg e avec du solvant frais avant d utiliser le syst me ou lorsque le solvant doit tre remplac par un autre solvant e Si la pompe n a pas t utilis e depuis plusieurs heures de l air peut avoir diffus le long des tuyaux de solvant et la purge est recommand e e En cas de remplissage des r servoirs solvant la pompe doit tre purg e pour distribuer le solvant frais dans le syst me Si un solvant diff rent va tre utilis assurez vous que le nouveau solvant est miscible avec le solvant pr c dent Si ce n est pas le cas effectuez une tape interm diaire avec un solvant co miscible
26. commande distance APG signaux pr t d marrage arr t et arr t syst me LAN en option Une assistance compl te pour le d pannage et la maintenance est fournie par Instant Pilot Agilent Lab Advisor et le syst me de donn es chromatographiques Les fonctions de s curit sont la d tection des fuites le traitement des fuites le signal de sortie des fuites pour fermeture du syst me de pompage et les basses tensions dans les zones de maintenance principales CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me mesur avec de l eau 1 mL min traceur de caf ine eau 0 2 et 1 mL min bas e sur le temps de r tention temp rature ambiante constante traceur de caf ine eau Version B 02 00 ou sup rieure 25 1 26 Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit Tableau 2 Caract ristiques des performances de la pompe binaire Agilent 1260 Infinity G1312B Type Sp cification Commentaires Fonctionnalit s BPL Retour d informations EMF pour le suivi en continu de l instrument pour ce qui est de l usure des joints du volume de phase mobile pomp les limites tant pr d finies et r glables par l utilisateur et des messages en retour Enregistrement lectronique des travaux de maintenance et des erreurs Bo tier Tous les mat riaux sont recyclables Un d gazeur vide est requis pour une utilisation des d bits inf rieurs 500 ul min ou pour une utilis
27. concert pour des colonnes longues jusqu 300 mm ou des temp ratures distinctes pour des colonnes courtes de 100 mm ou moins Le module est fourni avec un changeur de chaleur faible dispersion de 1 6 ul Chaque kit de vannes comprend des changeurs de temp rature faible dispersion suppl mentaire pour chaque colonne Un maximum de quatre changeurs de temp rature faible dispersion peuvent tre install s de fa on flexible l int rieur du TCC Pour un fonctionnement HPLC conventionnel des changeurs de temp rature int gr s de 3 ul et de 6 ul sont galement dis ponibles Chaque CCT peut accueillir une commande de vanne interne pour faciliter les op rations de permutation entre diff rents types d applications permutation entre deux colonnes r g n ration de colonne alternative pr paration d chantillons ou r trolavage de colonne Chaque t te de vanne est fournie sous la forme d un kit complet contenant tous les capillaires n cessaires des changeurs de temp rature faible dispersion suppl mentaires et d autres pi ces Les vannes d inversion sont d une facilit d utilisation exceptionnelle et offrent une grande flexibilit pour les raccordements sur simple pression l unit de commande de la vanne remplacement rapide se coulisse vers l avant permet tant un acc s facile voir Figure 4 page 18 gauche Les diff rentes t tes de vanne peuvent tre chang es par l utilisateur et posit
28. configuration volume de retard standard Tableau 5 Volumes de retard des configurations du Binary LC 1260 Infinity Configuration du syst me Volume de retard pl Configuration du volume de retard faible Pompe 120 chantillonneur automatique Configuration du volume de retard moyen Pompe 320 Configuration volume de retard standard Pompe 600 800 La commutation entre les configurations est possible de deux mani res e manuellement en d connectant et en reconnectant les capillaires e automatiquement avec une vanne 2PS 6PT 600 bar en option CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 Configuration optimale de l instrument pour les colonnes de d i 2 1 mm Configuration faible volume de retard pour le d lai de gradient le plus court pour les s parations ultra rapides du gradient Dans la configuration faible volume de retard de la pompe binaire Agilent 1260 l amortisseur et le m langeur sont contourn s pour r duire le volume de retard de la pompe environ 120 uL Figure 13 page 43montre les raccorde ments du circuit pour cette configuration Ceci fournit le retard de gradient le plus court pour des s parations ultra rapides du gradient Afin de profiter pleinement de la commande d amortissement lectronique qui remplace l amortissement de volume physique il est important de s lectionner la fonc tion de Enhanced Solvent Compressi
29. d analyse du d tecteur n a aucun effet sur celui de la pompe et le fait qu il soit plus court ne raccourcit pas l analyse comme cela serait le cas avec les temps d analyse des autre modu les Le plus facile est donc de r gler tous les temps d analyse sur As Pump Injector Le Timetable fonctionne de la m me mani re que les autres modules ajoutez une ligne s lectionnez la fonction modifier et entrez les nouvelles valeurs de cette fonction Toute variation des param tres du d tecteur s applique imm diatement au temps d fini Les param tres suivants peuvent varier au cours d une analyse Balance Change Signal Change Threshold Change Peak detector Peakwidth Change Spectra Acquisition Mode CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 Change Contacts Advanced Spectrum Les spectres peuvent tre enregistr s durant l analyse de mani re continue ou en fonction des pics cela est vrai pour le logiciel ChemStation certains autres logiciels p ex EZChrom ne prennent en charge que l acquisition continue de tous les spectres et les options d enregistrement en fonction des pics n apparaissent pas L acquisition des spectres et l acquisition des signaux sont des op rations ind pendantes ex cut es par le micrologiciel du d tecteur elles ne d pendent pas de l extraction des donn es de la matrice des donn es 3D par le logiciel de l ordinateur La vitesse d acquisi tion des spectres est d ter
30. dans le menu contextuel Vous pouvez configurer chaque module de cette mani re Effectuez un clic droit sur la zone de la pompe puis s lectionnez Method dans le menu contextuel a Dans la fen tre Method pour la 1260 Infinity Binary Pump entrez les para m tres suivants D bit 4 0 ml min Solvant A S lectionnez Water dans la liste d roulante Compressibili t Solvant B Cochez la case pour activer le solvant B R glez le pourcentage de B sur 60 Temps d arr t 1 min Temps de postanalyse 1 min b Les autres param tres peuvent conserver leurs r glages par d faut Cli quez sur OK pour quitter la fen tre Les modifications sont transmises au module de la pompe Effectuez un clic droit sur la zone de l chantillonneur automatique puis s lectionnez Method dans le menu contextuel a Dans la fen tre Method pour 11260 Infinity Autosampler entrez les param t res suivants Volume d injection 1 0 ul Injection avec lavage de l aiguille Mode Voie de lavage Dur e 6 s b Les autres param tres peuvent conserver leurs r glages par d faut Cli quez sur OK pour quitter la fen tre CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Guide de d marrage rapide 5 Les modifications sont transmises au module de l chantillonneur auto matique 4 Effectuez un clic droit sur la zone du compartiment colonne thermostat TCC puis s lectionnez Method dans le menu contextuel a D
31. ex l acide sulfurique l acide ac tique glacial le dim thylsulfoxyde et le t trahydrofurane Il est galement d grad par les substances nucl ophiles telles que l ammoniaque par ex sels d ammonium en conditions basiques ou les ac ctates Poly thyl ne PE Agilent utilise des m langes d UHMVW poids mul culaire ultra lev PE PTFE pour les joints de piston et de rin age jaunes utilis s dans les pompes 1290 Infinity et pour les applications en phase normale dans les pompes 1260 Infi nity Le poly thyl ne a une bonne stabilit avec la plupart des solvants inorgani ques courants y compris les acides et les bases dans une plage de pH de 1 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 12 5 Il est compatible avec de nombreux solvants organiques utilis s dans les syst mes chromatographiques comme le m thanol l ac tonitrile et l isopropa nol Il a une stabilit limit e avec les hydrocarbures aliphatiques aromatiques et halog n s le t trahydrofurane le ph nol et ses d riv s les acides et bases concentr s Pour les applications en phase normale la pression maximale doit tre limit e 200 bar Tantale Ta Le tantale est inerte avec la plupart des solvants CPL courants et presque tous les acides l exception de l acide fluorique et des acides avec du trioxyde de soufre libre Il peut tre coorod par les bases fortes par ex solutions d hydroxyde gt 10 di thyla
32. frais par une pompe p ristaltique install e dans le bo tier de l chantillonneur automatique Le port de rin age a un volume d environ 680 uL et la pompe fournit 6 mL min Le r glage du temps de rin age sur 10 s signifie que le volume du port de rin age est rempli plusieurs fois de solvant frais ce qui suffit dans la plupart des cas pour nettoyer l ext rieur de l aiguille CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 Comment am liorer la r solution Une r solution accrue dans une s paration am liore le traitement de donn es qualitatives et quantitatives permet de s parer plus de pics ou offre une meilleur port e pour acc l rer la s paration Cette section indique comment augmenter la r solution en examinant les points suivants e Optimiser la s lectivit e Plus petit emballage de taille des particules e Colonnes plus longues e Gradients plus faibles flux plus rapide e Volume extra colonne minimal e Optimisation du solvant et du volume d injection e Collecte de donn es assez rapide La r solution entre deux pics est d crite par l quation de r solution 1 a 1 k 1 Rs 4 N 2 4 a k R r solution e N nombre de plaques mesure d efficacit de la colonne e a s lectivit entre deux pics k facteur de r tention du second pic anciennement nomm facteur de capacit Le terme qui a l effet le plus impor
33. lectionnez la commande Switch module name on dans le menu contextuel Sinon vous pouvez choisir d allumer tous les modules du syst me simulta n ment en cliquant sur le bouton System On Offen bas droite du sch ma du syst me L tat du syst me passe de Non pr t indiqu en jaune Pr t indiqu en vert apr s un court d lai n cessaire pour atteindre les points de consigne CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 85 5 Guide de d marrage rapide Chargement de la m thode par d faut Le logiciel ChemStation dispose d une m thode par d faut appel DEF_LC M qui est charg e lors de la premi re mise en route ou lorsqu un nouveau mod le de m thode vierge est requis Celle ci comprend les param tres par d faut pour tous les modules Cette proc dure vous indique comment charger la m thode DEF_LC M Vous pouvez l utiliser pour r gler tous les param tres sur les valeurs par d faut ou pour obtenir un mod le de m thode vierge pour la mise en place d une nou velle m thode 1 Acc dez la vue Method and Run Control de ChemStation 2 Dans la barre de menus s lectionnez Method gt New Method et s lectionnez DEF_LC M dans le menu contextuel Sinon vous pouvez utiliser l ic ne Load Method 5 dans la barre de menus ou double cliquer sur le nom de m thode DEF_LC M dans l onglet Methods du panneau de navigation Fie RunControl Instrument Method Sequence View Abort Help v Sequences LR
34. lev e n cessaire pour la s paration d chantillons complexes La pression requise pour faire avancer le solvant travers une colonne conte nant des particules STM sub 2 microniques s accro t rapidement lorsque le d bit est augment dans le but d acc l rer une s paration et tr s rapidement lorsque la longueur de la colonne est augment e dans le but d am liorer la r solution Ainsi le d veloppement de syst mes UHPLC a accompagn la com mercialisation des colonnes STM Ces syst mes ultra HPLC permettent d appliquer des pressions sup rieures 400 bar valeur qui repr sentait un seuil non franchi depuis les d buts de la technique HPLC Aujourd hui Agilent propose le CPL 1290 Infinity pour les exigences UHPLC les plus lev es avec des pressions jusqu 1200 bar 28 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Introduction 2 La th orie L efficacit de s paration en HPLC peut tre d crite par l quation de van Deemter Figure 6 page 29 Cette quation d coule du mod le de hauteur de plateau utilis pour mesurer la dispersion des analytes lors de leur progres sion l int rieur de la colonne H est la hauteur quivalente un plateau th o rique appel e parfois HETP dy est la taille des particules de remplissage de la colonne u est la vitesse lin aire de la phase mobile et A B et C sont des constantes associ es aux diff rentes forces de dispersion La constante A cor respond
35. macros ou des programmes diff rents points pendant la proc dure op rationnelle Dans la plupart des cas les cases Data Acquisition et Standard Data Analysis sont coch es Si aucune analyse des donn es n est n c essaire par exemple lors d une s rie d analyses pour le d veloppement d une m thode la case Standard Data Analysis peut tre d coch e afin de ne pas cr er de rapport les donn es pourront tre valu es par la suite dans la vue Data Analysis Pour lier un macro un des points d acc s il faut cocher la case appropri e et saisir le nom du macro dans la zone de texte droite Le logiciel cherche le macro dans le r pertoire C Chem32 Core il faut donc inclure le chemin d acc s s il est localis dans un autre r pertoire CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 139 140 Annexe Les points d acc s dans la proc dure op rationnelle de la m thode sont Pre Run Command Macro e Customized Data Analysis Macro Post Run Command Macro Save Method with Data permet d enregistrer une copie de la m thode dans le fichier de donn es sous le nom RUN M Avec la configuration habituelle du logiciel ChemStation il n est pas n cessaire d utiliser cette option car ce der nier enregistre syst matiquement la m thode dans le fichier de donn es tou tes les versions sup rieures B 02 01 Cette option n est utile que si le logiciel ChemStation a t configur pour que l option Unique Seq
36. mi hauteur du pic d int r t le plus troit Cela aide l int grateur distinguer entre le bruit et des pics tr s petits Area Reject Height Reject valeurs seuil d terminant l aire et la hauteur minimales n cessaire pour inclure un pic dans les r sultats Integration OFF ON annule l int gration entre des limites d finies Fonc tion presque toujours utilis e pour emp cher l int gration de la r gion entre l injection et le front de solvant ou le pic du marqueur non retenu Les lignes comme Integration OFF ON sont ajout es au tableau l aide des ic n es en haut de la fen tre Cliquez sur OK pour quitter et ouvrir l cran suivant du processus Modifier l ensemble de la m thode CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 135 6 Annexe D finition du rapport Vous pouvez acc der directement l cran Specify Report par l interm diaire de la vue Method and Run Control en effectuant un clic droit sur l ic ne v nements d int gration de l interface utilisateur puis en cliquant sur Specify Report dans le menu contextuel Vous pouvez galement acc der cet cran dans la vue Data Analysis par l interm diaire du menu Report gt Specify Report ou l ic ne de la t che D finition du rapport Specify Report Instrument 1 Reporting settings Quantitation settings Report mode O Use Intelligent Reporting Use Classic Reporting Style Chromatogram output Report style v of pages
37. n hors de la colonne Cela accro t le risque d obstruer ces fritt s avec des particules contenues dans les chantillons et ou la phase mobile et provenant de l instrument lui m me Pour prot ger la colonne de petits filtres suppl mentaires Figure 20 page 68 peuvent tre utilis s devant la colonne Il est galement recommand de filtrer et ou centrifuger soigneuse ment l chantillon et d viter tout type de particules dans les phases mobiles Respectez les recommandations d utilisation simples suivantes afin d optimi ser vos r sultats 1 Installez et utilisez la colonne seulement dans le sens d coulement indiqu sur la colonne Utilisez uniquement des solvants d un niveau de qualit lev e pour chro matographie Filtrez tous les tampons aqueux et tous les chantillons l aide d un 0 2 umfiltre appropri avant de les utiliser Remplacez les bouteilles de phase mobile tamponn e toutes les 24 48 h n ajoutez pas de phase mobile la bouteille utilisez toujours une nouvelle bouteille N utilisez pas de phase mobile tamponn e forte concentration en sel gt 50 mM avec des concentrations lev es d ac tonitrile en raison du risque de pr cipitation Un filtre en ligne pour pi ger les particules et rallonger la dur e de vie de la colonne Utilisez le filtre en ligne 1260 Infinity adapt votre colonne Fil tre en ligne CPL 1260 filtre pores de 2 1 mm 0 2 um max 600 bar capil laire d
38. orique de la hauteur de pic de 4 7 times en raison de la baisse de dilution dans la colonne Pour un d tecteur de spectrom tre de masse les d bits inf rieurs des colonnes troites peuvent donner de mei lleu res efficacit s d ionisation et donc une sensibilit plus lev es Param tres du d tecteur Le d tecteur est dot d un certain nombre de param tres que l on peut utiliser pour optimiser ses performances Les sections suivantes d crivent la mani re dont les param tres du d tecteur affectent les caract ristiques de performance e La cuve circulation affecte la sensibilit La longueur d onde et la bande passante affectent la sensibilit la s lectiv it et la lin arit e La largeur de fente affecte la sensibilit la r solution spectrale et la lin arit e La largeur de pic affecte la sensibilit et la r solution 64 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 Choix d une cuve circulation Diff rentes versions de la cuve circulation de type cartouche Max Light sont disponibles voir Tableau 7 page 65 Tableau 7 Caract ristiques des cuves circulation de type cartouche Max Light Cuves de type cartouche Cuve de type cartouche Max Light 10 mm V s 1 0 uL G4212 60008 Cuve de type cartouche Max Light Bio inert 10 mm V s 1 0 uL G5615 60018 Cuve de type cartouche Max Light 60 mm V s 4 0 uL
39. tre d au moins 10 s CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 53 3 54 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity e Si possible r duisez la vitesse de pr l vement 10 uL min e Utilisez des flacons de 2 mL avec capuchons Agilent Flacon avec bouchon vis 2 mL 5182 0556 e Si le si ge est contamin utilisez une proc dure de rin age du si ge appro pri e e Utilisez des solvants de rin age pouvant dissoudre les compos s de l chantillon e Utilisez des phases mobiles acides pour les compos s basiques Rin age et nettoyage de l chantillonneur automatique pour obtenir un transfert proche de z ro Au cours de la proc dure d injection la boucle d chantillon l int rieur de l aiguille le capillaire du si ge et la voie principale du clapet d injection sont dans le circuit et y restent tout au long de l analyse Cela signifie que ces pi ces sont rinc es en continu par la phase mobile tout au long de l analyse Ce n est que lors de l aspiration de l chantillon que le clapet d injection est commut hors du circuit Dans cette position l effluent de la pompe est dirig directe ment vers la colonne Avant l injection les surfaces ext rieures de l aiguille sont lav es avec du solvant frais l aide du port de rin age de l chantillonn eur automatique ce qui vite la contamination du si ge de l aiguille Le port de rin age de l chantillonneur automatique est rempli de solvant
40. un d lai de temporisation pour le d tect eur aval pour que le logiciel puisse aligner les pics des diff rents d tecteurs 132 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 Configuration d une m thode l aide de la fonction Modifier l ensemble de la m thode Signal Details Instrument 2 Available Signals DAD1 A Sig 250 100 Ref off Insert Row Append Row Delete Row Signal Description Figure 31 D tails des signaux CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 133 134 Annexe Modification des v nements d int gration Vous pouvez acc der directement l cran Edit Integration Events par l interm d iaire de la vue Method and Run Control en effectuant un clic droit sur l ic ne v nements d int gration de l interface utilisateur puis en cliquant sur Edit Integration Events dans le menu contextuel Vous pouvez galement acc der cet cran dans la vue Data Analysis par l interm diaire du menu Integration gt Integration Events ou l ic ne de la t che Edit Integration Events Single Runs PHENONES cb Calibration ul Signal Mi Pr u LS T4 Report Short ES ds DADI A Sig 242 ONE MI 008 0 el h SEn ES Em E Ee Method Manual Events M Initial Events For AII Signals Integration Events Value Tangent Skim Mode Standard Tail Peak Skim Height Ratio 0 00 Front Peak Skim Height Ratio 0 00 Skim Valley Ratio 20 00 B
41. utilisation de ces caract ristiques pour d velopper des s parations optimis es CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 37 2 Introduction chauffement par frottement 38 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 3 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity Configuration d un volume de retard optimal 40 Volume de retard et volume extra colonne 40 Volumes de retard dans le Binary LC Agilent 1260 Infinity 42 Configuration optimale de l instrument pour les colonnes de d i 2 1 mm 43 Configuration optimale de l instrument pour les colonnes de d i 3 et 46mm 45 Comment augmenter le volume d injection 47 Comment obtenir des dur es de cycle plus courtes 49 Comment am liorer la capacit d analyse 52 Comment obtenir le transfert le plus bas 53 Comment am liorer la r solution 55 Configuration optimale de l instrument pour une haute r solution 58 Comment am liorer la sensibilit 62 Configuration optimale de l instrument pour une sensibilit lev e 63 Choix d une cuve circulation 65 Comment emp cher les obstructions de colonne 67 Ce chapitre traite de l application des notions th oriques et de l utilisation des caract ristiques du syst me CPL pour d velopper des s parations optimis es ee Agilent Technologies 39 3 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity Configuration d un volume de retard optimal 40
42. 15 page 45 Pour les colonnes d un diam tre interne 2 1 mm la configuration faible retard doit tre utilis e pour la pompe et le kit dispersion faible doit tre install dans le compartiment colonnes Pour la sensibilit UV la plus le v e le m langeur court est galement recommand Voir la Figure 13 page 43 et la Figure 14 page 44 Le volume d injection est galement important en particulier si l chant illon est dissout dans un solvant organique Dans ce cas le gradient doit d marrer avec un faible pourcentage de phase organique afin de concentrer les compos s au sommet de la colonne Ceci vite la dispersion du pic due l injection La cuve de type cartouche Max Light de 10 mm pr sente un faible volume de dispersion volume o de 1 0 uL et aucune optimisation de volume sup pl mentaire n est n cessaire Pour des applications o la cuve Max Light haute sensibilit de 60 mm est utilis e pour obtenir une sensibilit plus lev e le volume de la cuve est optimis pour une utilisation avec des colonnes de diam tre interne de 3 mm et 4 6 mm CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 59 3 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity Fr quence d acquisition Le param tre de fr quence d acquisition pour le d tecteur UV doit tre correc tement s lectionn Le choix d une fr quence d acquisition trop faible entra ne une largeur de pic accrue et une r solution plus basse v
43. 3600 1000 nm PR E a Signal E vi 260 0 40 V 3600 1000 nm den di Signal F 273 0 4 0 360 0 100 0 nm Analog Output Signal G 80 0 4 0 60 0 gt 100 0 nm Output 1 Signal H 250 0 40 60 0 100 0 nm Zero Offset D x Peakwidth Attenuation 1000 v m U gt 0 10 min 2 0 time 2 5 H s4 A Os eea a Margin for negative Absorbance Stoptime Posttime 100 mu As Pump njector of Autobalance Lamps on required for acquisition Le 1 00 min 1 00 lt min V Prerun vI UV Lamp Postrun Timetable empty I Show timetable graph Figure 29 cran de configuration de m thode onglet D tecteur barrette de diodes e Signals Jusqu huit signaux distincts chromatogrammes peuvent tre enregistr s Pour indiquer qu un signal doit tre enregistr cochez la case Use Signal correspondant au signal et d finissez la longueur d onde et la bande passante Le cas ch ant un signal de r f rence doit tre d fini et sa case coch e Wavelength indique la longueur d onde centrale nm du signal _ Bandwidth indique la largeur nm du signal CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 127 128 Annexe Reference Wavelength indique la longueur d onde centrale nm de la bande de r f rence qui est soustraite du signal analytique Reference Bandwidth indique la largeur nm de la bande de r f rence Peakwidth indique la vitesse d acquisition des donn es
44. 60 Infinity Mode d emploi du syst me 21 1 Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit Caract ristiques 22 La conception modulaire du Binary LC 1260 Infinity vous permet de configu rer un syst me qui r pond exactement aux besoins de votre application per sonnelle Cette configuration individuelle peut tre diff rente de la configuration standard d crite dans ce mode d emploi du syst me Les caract ristiques physiques et performances de la pompe binaire 1260 Infi nity figurent ci dessous Des informations relatives aux sp cifications des autres modules de votre syst me se trouvent dans les modes d emploi des modules respectifs CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit 1 Caract ristiques physiques de la pompe binaire 1260 Infinity G1312B Tableau 1 Caract ristiques physiques Type Sp cification Commentaires Poids 15 5 kg Dimensions 180 x 345 x 435 mm hauteur x largeur x profondeur Tension secteur Fr quence secteur Puissance consomm e Temp rature ambiante de fonctionnement Temp rature ambiante hors fonctionnement Humidit Altitude de fonctionnement Altitude hors fonctionnement Normes de s curit CEI CSA UL 100 240 VAC 10 50 ou 60 Hz 5 220 VA 74 W 253 BTU 4 55 C 40 70 C lt 95 40 C Jusqu 2000 m Jusqu 4600 m Cat gorie d installation Il
45. CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Glossaire d IU Repeat R p tition Report Rapport Report mode Mode de cr ation de rapport Report Style Style de rapport Reporting settings Param tres des rapports Response R ponse Run Control Contr le d analyse Run Method Ex cuter la m thode Run Queue File d attente d analyses Run Sequence Ex cuter une s quence Run Time Checklist Liste de contr le de l ex cution Run Time Checklist Liste de contr le de l ex cution S Sample flush out factor Facteur de rin age de l chantillon Sample Info Informations sur l chantillon Sample name Nom de l chantillon Save Enregistrer Save As Enregistrer sous Save As Enregistrer sous 143 Glossaire d IU Save Method As Enregistrer la m thode sous Save Method As Enregistrer la m thode sous Save Method with Data Enregistrer la m thode avec les don n es Screen Moniteur Select Run Method Task S lectionner la t che d ex cution de m thode Selected Signal Signaux s lectionn s Selected Signals Signaux s lectionn s Set Integration Events Table Param trer le tableau d v nements d int gration Setup Instrument Method Configuration de la m thode de l ins trument Setup Method Configuration de la m thode Show timetable graph Afficher le trac du gradient Signal Description Description du signal Signal Details D tails des signaux Signal Window 1 Fe
46. CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 95 5 96 Guide de d marrage rapide Ex cution de la m thode pour une injection unique Cette section explique comment ex cuter l analyse d une injection unique d chantillon test isocratique l aide des conditions saisies dans la section pr c dente Deux modes d ex cution d analyses existent avec ChemStation Run Method pour des injections uniques par exemple lors du d veloppem ent interactif de m thodes l aide des r glages des param tres actifs un moment donn Run Sequence pour des s ries d injections automatis es partir de plu sieurs flacons ventuellement avec plusieurs m thodes Pour plus de d tails reportez vous aux manuels du logiciel ChemStation Cliquez sur l ic ne Select Run Method Task a Si les conditions de m thode souhait es ne sont pas charg es actuellement s lectionnez Method gt Load Method ou l ic ne Ei de la barre de menus pour les charger Si des modifications ont t apport es une m thode charg e mais non encore enregistr e un ast risque jaune est affich sur l ic ne d tat de la m thode L injection peut tre r alis e sans enregistrer au pr alable les modifications des param tres Le logiciel ChemStation enregistre toujours une copie des param tres d acquisition dans le fichier de donn es ACQ TXT pour conserver les param tres de la m thode d origine Placez le flacon d chantillon
47. E CHEM32 1 DATA REPROVIAL30 30000023 D mDO 80 70 60 Configuration de faible volume de retard ADVR 50 Ei SIEN G E or Configuration de faible 40 volume de retard 30 A i Configuration 20 standard ADVR 10 Configuration 4 standard 0 1 2 3 4 5 6 7 Min Figure 17 R duction du volume de retard CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 Plus le d bit est faible plus important est l impact n gatif que l on peut atten dre du volume de retard Dans Figure 17 page 50 une colonne d un diam tre interne de 2 1 mm a t utilis e un d bit de 0 6 mL min Le volume de retard est r duit palier par palier de la trace la plus basse la trace sup rieure L influence sur la dur e d analyse totale ainsi que l impact en particulier sur la largeur de pic et les hauteurs des premiers pics sont vidents L inconv nient de l injection chevauchante et de la r duction automatique du volume de retard est que l chantillonneur automatique n est pas dans le cir cuit pendant toute la dur e d analyse Pour les compos s tr s collants cela peut provoquer un transfert sup rieur et ou une discrimination des compos s Le transfert est le pourcentage de compos qui reste dans les parties de l ins trument en contact avec l chantillon et qui n est pas rinc dans la colonne pour l analyse Cela signifie aussi que ce pourcentage est perdu pour la
48. G4212 60007 Cuve de type cartouche Max Light Bio inert 60 mm V s 4 0 uL G5615 60017 Cuve plage dynamique lev e de type cartouche Max Light 3 7 mm V s 0 4 uL G4212 60032 Cuve dispersion ultra faible de type cartouche Max Light 10 mm V s 0 6 uL G4212 60038 Cuve de test de type cartouche Max Light G4212 60011 Pression 70 bar 1015 psi de pression de fonctionnement maximale MOP maximum 150 bar 2175 psi de pression d incident maximale MIP gamme de pH 1 0 12 5 en fonction du solvant 1 Pression de fonctionnement maximale MOP la pression maximale laquelle le syst me peut fonctionner en continu dans des conditions normales un bref moment Pression d incident maximale MIP la pression maximale que le syst me peut conna tre pendant Applications normales Le Cuve de type cartouche Max Light 10 mm V s 1 0 uL G4212 60008 cou vre une vaste gamme d applications e tout le diam tre de la colonne r duit jusqu au moins 2 1 mm ID ou m me moins e les applications avec dispersion du pic largeur du pic x d bit r duisent jusqu 2 uL exemple lp 0 04 min pour un d bit gal 0 1 mL min donne une dispersion de pic de 0 04 min x 0 1 mL min 0 004 mL 4 uL CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 65 3 66 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity Sensibilit lev e Si vous souhaitez obtenir une meilleure sensibilit vou
49. La section Run Time Checklist comprend les parties de la m thode ex cuter Dans la fonction Edit Entire Method le fait de cliquer sur OK ferme l cran en cours et ouvre l cran suivant II s agit d un processus sens unique Si vous cliquez accidentellement sur OK avant d avoir effectu toutes les modifications cliquez sur Cancel et recommencez Edit Entire Method depuis le d but Sinon continuez effectuer vos modifications et revenez l cran non termin la fin du processus Lorsque vous cliquez sur Cancel un bouton Skip appara t et permet de sauter les crans restants CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 Configuration d une m thode l aide de la fonction Modifier l ensemble de la m thode Informations sur la m thode Vous pouvez galement acc der l cran Method Information en utilisant le menu Method gt Method Information ou en effectuant un clic droit sur l interface utilisateur Cette fen tre permet de saisir des informations concernant la m thode Ces informations seront affich es au dessus du sch ma du syst me sur l cran Method and Run Control lorsque cette m thode est charg e et r side dans la m moire Method Intormation Instrument 2 Method Comments This method runs the test sample to demonstrate how to run an analysis Figure 24 Informations sur la m thode CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 115 116 Annexe In
50. Show timetable graph OK amp pply Cancel Help Figure 30 cran de configuration de m thode Onglet Courbes de l instrument L onglet Courbes de l instrument permet de suivre les flux de donn es autres que les signaux du d tecteur Leur enregistrement avec les donn es est activ en cochant les cases appropri es Ces courbes servent essentiellement des fins de diagnostic Les courbes possibles sont e Pompe Pression D bit Composition A B peut se r v ler utile pour superposer le profil du gra dient sur un chromatogramme e Compartiment colonne thermostat Temp rature gauche droite e D tecteur Temp rature de la carte Temp rature de l unit optique Tension de l anode de la lampe UV 6 Annexe Traitement des donn es D tails des signaux Vous pouvez galement acc der directement l cran Signal Details par l inter m diaire de la vue Method and Run Control effectuez un clic droit sur l ic ne Calibration de l interface utilisateur puis s lectionnez Signal Details dans le menu contextuel Dans la vue Analyse des donn es vous pouvez acc der cet cran par l interm diaire du menu Calibration gt Signal Details L cran Signal Details est l tape suivante de la fonction Edit Entire Method et il permet d identifier les signaux acquis qui doivent tre trait s par l Analyse des donn es La liste d roulante num re les signaux disponibles y compris les signau
51. aible volume 200 uL 5067 1565 peut tre install pour r duire tout bruit de m lange r siduel Ce petit m langeur donne le bruit de base UV le plus faible m me dans des conditions de gradient extr mes Voir Figure 14 page 44 Volume de retard moyen de 320 yl pour une sensibilit UV ultra rapide et sup rieu avec les colonnes de DI 2 1 mm M langeur 200 ul Capteur 44 de pression re Amortisseur 600 bars M lange T Capteur de pression M langeur 200 pl Clapet de purge Figure 14 Configuration de volume de retard moyen pour colonnes d i de 2 1 mm avec sensibilit UV la plus lev e CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 Configuration optimale de l instrument pour les colonnes de d i 3 et 4 6 mm Configuration de volume de retard standard pour la sensibilit UV la plus lev e et une transf rabilit de m thode directe Les volumes de colonnes relatifs pour les colonnes d un diam tre interne de 3 mm et 4 6 mm sont environ deux cinq fois sup rieurs respectivement que pour les colonnes de m me longueur avec un diam tre interne de 2 1 mm et les d bits utilis s sont galement proportionnellement plus lev s C est pourquoi le volume de retard standard de la pompe binaire n entra nera pas de retard de gradient beaucoup plus lev D connecter uniquement ici Circuit M langeur A 400 pl F m
52. aleur par d faut de 2 nm est un bon choix pour la plupart des applications CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 129 6 Annexe Threshold d finit la valeur seuil de hauteur de pic mDO au dessus de laquelle les spectres sont enregistr s _ Advanced Analog Output Le DAD 1260 Infinity dispose d un connecteur de sortie de signal analogi que pour utilisation avec des syst mes de donn es qui n acceptent pas une entr e num rique Les options sont Zero Offset d finit le niveau z ro sur un pourcentage fixe du signal de sortie Cela permet une certaine marge pour la d rive n gative Attenuation r gle l chelle de la sortie sur l absorbance d finie _ Advanced Margin for Negative Absorbance La valeur par d faut est de 100 mAU ce qui signifie que la plage dynamique du d tecteur est suffisante au vu du niveau sur lequel a t r gl le z ro pour mesurer jusqu cette limite inf rieure Pour mesurer des pics n gatifs plus importants ou pour suivre une ligne de base pr sentant une forte d ri ve n gative cette valeur doit tre ajust e vers le bas pour viter l obtention d un signal plat sur la limite inf rieure de la plage Toutefois cette valeur ne doit pas tre modifi e sans bonne raison car sa diminution augmente le bruit de la ligne de base et r duit la plage disponible pour la mesure des pics positifs Advanced Autobalance r gle le niveau d absorbance sur z ro pour
53. aleur est de z ro mais pour toute autre valeur une situa tion d erreur sera g n r e par la pompe si la pression de fonctionnement descend en dessous de ce seuil Ce param tre correspond une mesure pr ventive lorsque la colonne ne se trouve pas l int rieur d un module quip d un capteur de fuites ou dans le cas o le syst me serait ass ch Habituel lement cette valeur est r gl e entre 10 et 20 bar pour la limite de pression minimum CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 Configuration d une m thode l aide de la fonction Modifier l ensemble de la m thode Onglet du compartiment colonne thermostat TCC Setup Method Q HiP ALS Q HIP ALS Injector Program H BinPump 8 TCC DAD Instrument Curves Temperature Timetable Left Right Advanced Not Controlled Not Controlled Enable Analysis 400 W when front door open As Detector Cell As Detector Cell Left Right With any temperature With any temperature When temperature is within When temperature is within Column Switching Valve a AA T Poit 1 gt 2 Stoptime Posttime As Pump njector of a Figure 28 cran de configuration de m thode cran onglet Compartiment colonne thermostat Temperature permet de d finir la temp rature des supports de colonne des c t s gauche et droit Les temp ratures peuvent tre r gul es de mani
54. an de configuration de m thode onglet Pompe binaire __ Flow permet de r gler un d bit de jusqu 5 mL min Pour l exemple de s p aration un d bit de 4 mL min est utilis Si la contrepression atteint bri vement le param tre de pression maximum le d bit est r duit pendant quelques secondes pour diminuer la pression Si la pression continue d tre limit e de cette mani re une situation d erreur est g n r e et le d bit est arr t CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 121 122 Annexe Solvents indique les phases mobiles disponibles et la composition en pour centage du m lange pomp dans les deux voies A et B Pour chaque voie un menu d roulant permet de s lectionner un solvant dans la liste pour opti miser les param tres de compressibilit utilis s par la commande de pompe Cela permet d optimiser la circulation des liquides comme d crit dans la section Configuration optimale de l instrument pour les colonnes de d i 2 1 mm page 43 Une deuxi me zone de texte permet de saisir une description de la phase mobile Si une vanne de s lection de solvant est ins tall e sur la pompe il existe deux possibilit s de solvant pour chaque voie l option appropri e pour la m thode est s lectionn e l aide du bouton radio gauche de la description du solvant La pompe g n re des m langes binaires partir des voies A et B s lectionn es par exemple A2 et B1 il n est p
55. ance aux effets dus des variations de la tem p rature ambiante Bien que le volume hydraulique de la cuve de type cartou che Max Light soit tr s petit la longueur du trajet est standard soit 10 mm Toutefois pour des sensibilit s encore sup rieures la cuve Agilent Max Light haute sensibilit est disponible avec une longueur du trajet de 60 mm Les cuves peuvent tre remplac es ais ment en les faisant coulisser dans le porte cuve elles sont align es automatiquement au niveau du banc optique La source de lumi re du DAD est une lampe deut rium la plage de longueurs CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 19 1 20 Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit d onde de fonctionnement est comprise entre 190 et 640 nm La d tection s effectue au moyen d une barrette 1024 diodes L entr e du spectrographe est une fente optique fixe de 4 nm Les signaux chromatographiques sont extraits des donn es de la barrette de diodes par le micrologiciel du module Vous pouvez param trer jusqu huit signaux individuels Chacun d entre eux comprend une longueur d ondes de signal une bande passante de paquet de diodes et s il y a lieu une longueur d ondes et une bande passante de r f rence Les signaux peuvent tre mis 80 Hz 80 points de donn es seconde pour un enregistrement pr cis des pics chromatographiques les plus rapides troits En m me temps le module peut aussi envoyer le s
56. ans la fen tre Method pour le 1290 Infinity TCC entrez les param tres sui vants Temp rature gauche 40 C Temp rature droite Combin e b Les autres param tres peuvent conserver leurs r glages par d faut Cli quez sur OK pour quitter la fen tre Les modifications sont transmises au module du TCC 5 Effectuez un clic droit sur la zone du d tecteur barrette de diodes puis s lectionnez Method dans le menu contextuel a Dans la fen tre Method pour le 1260 Infinity DAD entrez les param tres sui vants Use Signal d sactivez tous les signaux sauf le Signal en d cochant les cases appropri es Signal A 254 nm bande passante 4 nm r f 550 nm bande passante 100 nm Largeur de pic 0 02 b Dans la section Advanced r glez Spectrum Store sur All c Les autres param tres peuvent conserver leurs r glages par d faut Cli quez sur OK pour quitter la fen tre Les modifications sont transmises au module du DAD 6 Tous les param tres de module n cessaires ont maintenant t saisis S lec tionnez Method gt Save Method As et entrez ISO 1 M pour sauvegarder la m thode sous un nouveau nom Pour ne pas modifier le mod le de m thode par d faut le logiciel ChemSta tion ne vous laissera pas enregistrer la m thode avec le nom DEF_LC M 7 Laissez le syst me s quilibrer pendant au moins 10 min et v rifiez que la ligne de base dans le Online Plot est stable avant de d marrer l analyse
57. as possible de m langer A1 et A2 ou B1 et B2 Les valeurs indiqu es pour les pourcentages de A et de B d finissent la composition d une m t hode isocratique ou les conditions de d part d une m thode gradient et les conditions d quilibrage entre deux analyses gradient Seule la valeur de B est saisie la valeur de A est actualis e pour afficher 100 moins B d s que le curseur est d plac Pour l exemple de s paration r glez A sur Eau et B sur ac tonitrile 60 A sera de 40 Timetable d crit les variations de la composition de A et de B en pourcen tage dans la phase mobile au cours de l analyse et le cas ch ant les varia tions du d bit et la pression maximum autoris e Le tableau des v nements permet de faire varier de mani re lin aire les param tres entre des points de consigne d termin s Les valeurs des param tres d finies ailleurs sur cet cran sont utilis es comme conditions de d part et sont modifi es par la suite seulement si des valeurs sont entr es dans le tableau des v nements Par exemple si le d bit doit rester constant durant une analyse alors il n est pas n cessaire de entrer des valeurs de d bit dans le tableau des v nements Pour entrer des valeurs dans le tableau des v ne ments cliquez sur le bouton Add pour ajouter une ligne au tableau entrez le temps du point de consigne s lectionnez le type d entr e dans la liste d roulante composition d bit pression et cli
58. aseline Correction Classical Specific Events For Signal DAD Default Time Integration Events Value Initial Slope Sensitivity 5 Initial Peak width 0 05 Initial Area Reject 5 Initial Height Reject 1 Initial Shoulders OFF Figure 32 cran Modification des v nements d int gration L int gration l talonnage et la cr ation de rapports constituent la partie d analyse des donn es de la m thode Les param tres d int gration et le tableau d talonnage sont plus faciles configurer une fois que les donn es ont t acquises et peuvent tre examin es dans la vue Analyse des donn es Les v nements d int gration peuvent tre optimis s ce moment l et les r glages par d faut sont souvent utilis s pour les premi res acquisitions CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 L cran Edit Integration Events comprend deux tableaux e le tableau Initial Events For All Signals contient les v nements param tres d int gration qui s appliquent tous les signaux acquis avec la m thode le tableau Specific Events For Signal contient les v nements qui s appliquent un type de d tecteur ou des signaux diff rents d un m me d tecteur Les param tres principaux de ce tableau sont Slope Sensitivity indique la pente et la courbure de la ligne de base qui d finissent le d but et la fin d un pic Peak Width il faut saisir la largeur
59. ation sans amortisseur ni m langeur Toutes les mesures contenues dans les sp cifications ont t r alis es avec des solvants d gaz s CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 0 6e 72 Introduction e e e e J Th orie de l utilisation de particules plus fines pour la chromatographie en phase liquide 28 Avantages des colonnes petites particules 34 chauffement par frottement 37 Ce chapitre pr sente le Binary LC Agilent 1260 Infinity et ses principes de fonc tionnement che Agilent Technologies 21 2 Introduction Th orie de l utilisation de particules plus fines pour la chromatographie en phase liquide Introduction En 2003 Agilent a commercialis ses premi res colonnes en silice totalement poreuse avec des particules de 1 8 um En combinaison avec le Binary LC Agilent 1260 Infinity les deux colonnes particules d une taille sub 2 micronique 1 8 um peuvent tre utilis es pour atteindre deux objectifs principaux 1 Une chromatographie plus rapide Des colonnes courtes contenant des particules sub 2 microniques permet tent de r duire de mani re dramatique la dur e de l analyse en augmentant le d bit sans toutefois perdre au niveau de la performance 2 Une r solution plus lev e Des colonnes longues contenant des particules sub 2 microniques offrent une meilleure efficacit et donc la r solution plus
60. aunch online Lancer en ligne Load Method Chargement de m thode Location Emplacement M ethod M thode ethod and Run Control Contr le de m thode et d analyse ethod History Historique de la m thode ethod Information Informations sur la m thode ethod Menu M thode CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Method M thode Methods M thodes Name Pattern Mod le de nom Needle Wash Lavage de l aiguille New Method Nouvelle m thode No Limit Aucune limite No Limit Off Aucune limite D sactiv None Aucun 0 Of D sactiv Online Plot Trac en ligne Online Signals Signaux en ligne OpenLAB Control Panel Panneau de configuration OpenLAB P Parameter Param tre Parameter Mismatch M sappariement de param tres Paste Coller PDF PDF Peak Width Largeur de pic Peakwidth Largeur de pic Post Time Temps post analyse Postrun Postanalyse Post Run Command Macro Commande ou macro de post analyse Posttime Temps postanalyse Prerun Pr analyse Pre Run Command Macro Commande ou macro de pr analyse Pressure Limits Limites de pression Printer Imprimante Pump Pompe Q Quantitation settings Param tres de quantification Quantitative results sorted by R sultats quantitatifs tri s par Range Plage Reference Bandwidth Bande passante de r f rence Reference Wavelength Longueur d onde de r f rence Remove Supprimer
61. bility sur l cran auxiliaire du menu de la pompe Pour minimiser la dispersion du pic le kit dispersion faible Kit dispersion ultra faible G1316 68744 doit tre install Ce kit comporte des capillaires courts avec un diam tre interne de 0 12 mm et des changeurs de chaleur dispersion faible 1 6 uL et 1 5 uL pour le compartiment colonne thermosta t Pour maintenir la r solution dans le d tecteur UV il faut utiliser une cuve circulation de faible volume Voir Choix d une cuve circulation page 65 pour les recommandations relatives la cuve circulation Circuit D connecter uniquement ici M lange T Capteur de pression Capteur de pression Faible volume de retard Retard 120 pl Clapet de purge Figure 13 Configuration faible retard pour les colonnes diam tre interne de 2 1 mm CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 43 3 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity Il est important de r gler le param tre correct sur l cran auxiliaire de la pompe Ceci garantit que les bonnes valeurs de compressibilit sont toujours appliqu es pour les phases mobiles utilis es Des courbes d talonnage sont disponibles pour la majorit des solvants couramment employ s Configuration de volume de retard moyen pour obtenir la sensibilit UV la plus lev e Pour les applications UV haute sensibilit un m langeur 200 uL suppl ment aire M langeur f
62. colonnes d un plus petit diam tre n cessitent des volumes extra colonne proportionnel lement plus petits afin de conserver la dispersion du pic un minimum Dans un chromatographe en phase liquide le volume extra colonne d pendra des tuyaux de raccordement entre l chantillonneur la colonne et le d tecteur ainsi que du volume de la cuve circulation dans le d tecteur Le volume extra colonne est r duit au maximum avec le Binary LC Agilent Infinity s rie 1260 gr ce au tuyau de faible diam tre 0 12 mm de diam tre interne aux changeurs de chaleur faible volume dans le compartiment de colonne et la cuve de type cartouche Max Light dans le d tecteur CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 41 3 42 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity Volumes de retard dans le Binary LC Agilent 1260 Infinity Les Tableau 4 page 42 et Tableau 5 page 42 montrent les volumes de compo sants qui contribuent au volume de retard dans le syst me CPL binaire Agilent 1260 Infinity Tableau 4 Volumes de retard des modules Binary LC 1260 Infinity Composants Volume de retard pl Pompe binaire 120 Pompe binaire 600 800 M langeur faible volume 200 M langeur 400 chantillonneur automatique 270 changeur de chaleur faible dispersion 1 6 changeur de chaleur int gr 3 et6 1 en configuration de faible volume de retard avec un amortisseur et un m langeur contourn s 2 en
63. cquisition Acquisition de donn es Data Analysis Traitement des donn es Delete Row Supprimer Rang e Draw position Position d aspiration Draw speed Vitesse d aspiration E Edit Entire Method Modifier l ensemble de la m thode Edit Integration Events Modification des v nements d int g ration Edit Signal Plot Modifier le trac des signaux 142 Eject speed Vitesse d jection Enable overlapped injection Permettre le chevauchement des injec tions Enhanced Solvent Compressibility Compressibilit du solvant am lior e Equilibration time Dur e d quilibrage Every 2nd Spectrum Un spectre sur deux F File Fichier File Setting Param tres de fichier Flow D bit Flush Port Voie de lavage Height Reject R jection de hauteur HiP ALS Injector Program Programme d injection du HiP ALS niti al Events For All Signals v nements initiaux pour tous les signaux njection Mode Mode d injection njection Valve Cleaning Nettoyage de la vanne d injection njection volume Volume d injection njection with needle wash Injection avec lavage de l aiguille njector Cleaning Nettoyage de l injecteur nstrument Curves Courbes de l instrument Integrate Int grer ntegration Int gration ntegration Events v nements d int gration ntegration Events v nements d int gration ntegration OFF ON Int gration MARCHE ARR T ntensity Test Test d intensit L L
64. ct ristiques du Binary LC Agilent 1260 Infinity 8 Composants du syst me 10 Caract ristiques 22 Introduction 27 Th orie de l utilisation de particules plus fines pour la chromatographie en phase liquide 28 Avantages des colonnes petites particules 34 chauffement par frottement 37 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 39 Configuration d un volume de retard optimal 40 Comment augmenter le volume d injection 47 Comment obtenir des dur es de cycle plus courtes 49 Comment obtenir le transfert le plus bas 53 Comment am liorer la r solution 55 Comment am liorer la sensibilit 62 Comment emp cher les obstructions de colonne 67 Configuration et installation du syst me 69 Installation du logiciel 70 Installation des modules 72 Guide de d marrage rapide 83 propos du guide de d marrage rapide 84 Pr paration du syst me 85 Acquisition de donn es dans la vue Contr le de m thode et d analyse 90 Traitement des donn es 98 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Sommaire 6 Annexe 103 Informations relatives la s curit 104 Informations sur les solvants 107 Agilent Technologies sur Internet 112 Configuration d une m thode l aide de la fonction Modifier l ensemble de la m thode 113 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Sommaire 6 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Le Binary
65. culi rement utile pour les m thodes temp rature lev e ou basse CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit 1 D tecteur barrette de diodes 1260 Infinity G4212B Le syst me optique du d tecteur barrette de diodes 1260 Infinity DAD est de conception innovante avec une cuve de type cartouche incorporant la tech nologie de guide d ondes optofluidique Il offre une sensibilit lev e avec une faible dispersion une plage lin aire tendue et une ligne de base tr s stable pour les applications CPL standard ou ultra rapides La cuve de type cartou che Agilent Max Light augmente de mani re importante la transmission de la lumi re selon le principe de r flexion interne totale le long d un capillaire en verre de silice non recouvert Un nouveau niveau de sensibilit est ainsi atteint sans perdre en r solution en raison d effets de dispersion de la cuve Ce for mat r duit au minimum les variations de la ligne de base provoqu es par l indice de r fraction ou des effets thermiques et permet une int gration plus fiable de l aire des pics Miroir R seau Guides d ondes optofluidique Lampe deut rium Cuve de type cartouche Max Light Fente Barrette de diodes 1024 l ments Figure 5 Le faisceau lumineux travers le DAD Ce module comprend aussi une r gulation de la temp rature lectronique pour am liorer encore la r sist
66. d apr s les exp rien ces d Agilent dans le d veloppement d instruments de la meilleur qualit pour l analyse CPL depuis plusieurs d cennies Ces mat riaux pr sentent une excel lente solidit dans des conditions de CPL typiques Pour toute condition sp ciale veuillez consulter la section Informations sur les mat riaux ou contacter Agilent Avis de non responsabilit Les donn es suivantes ont t rassembl es aupr s de sources externes et ser vent de r f rence Agilent ne peut pas garantir leur exactitude ni leur int gra lit Les donn es sont bas es sur des biblioth ques de compatibilit qui ne sont pas sp cifiques l estimation long terme dans des conditions sp cifi ques mais tr s variables des syst mes CPL des solvants m langes de solvants et chantillons Ces informations ne peuvent pas non plus tre g n ralis es en raison des effets catalytiques des impuret s telles que les ions m talliques les agents complexants l oxyg ne etc En dehors de la corrosion chimique pure d autres effets tels que la corrosion lectrique les charges lectrostatiques surtout pour les solvants organiques non conducteurs le gonflement des CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 107 108 Annexe pi ces en polym re etc doivent tre pris en compte La plupart des donn es disponibles sont relatives la temp rature ambiante g n ralement 20 25 C 68 77 F Si une corrosion est
67. de substitutions de pi ces ou des modifications non autoris es Il se peut que les condensateurs situ s l int rieur de l instrument soient encore charg s bien que l instrument ait t d branch de sa source d alimen tation Des tensions dangereuses sont pr sentes dans cet instrument capables de causer des blessures graves Vous devez proc der avec extr me pr caution lorsque vous manipulez testez et ajustez cet instrument Lorsque vous manipulez des solvants respectez les r gles de s curit lunet tes gants et v tements de protection telles qu elles figurent dans la fiche de s curit fournie par le fournisseur du solvant particuli rement s il s agit de produits toxiques ou dangereux CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 105 6 Annexe Symboles de s curit Tableau 11 Symboles de s curit Symbole Description L appareil est marqu de ce symbole quand l utilisateur doit consulter le manuel d instructions afin d viter les risques de blessure de l op rateur et de prot ger l appareil contre les dommages Indique des tensions dangereuses D Indique une borne de terre prot g e 2 7 Indique qu il est dangereux pour les yeux de regarder directement la lumi re produite par la lampe au deut rium utilis e dans ce produit L appareil comporte ce symbole pour indiquer qu il pr sente des surfaces chaudes et que l utilisateur ne doit pas les toucher lorsqu elles sont
68. degr de pollution 2 Plage de tensions tendue Maximum Sans condensation Pour l entreposage du module Utilisation int rieure uniquement CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 23 1 24 Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit Caract ristiques de performance Tableau 2 Caract ristiques des performances de la pompe binaire Agilent 1260 Infinity G1312B Type Sp cification Commentaires Syst me hydraulique Plage de d bit r glable Plage de d bit Pr cision du d bit Pr cision de d bit Pression plage de fonctionnement Pulsation de pression Compensation de la compressibilit Gamme de pH recommand e Formation du gradient Deux pistons doubles dans des pompes en s rie avec un entra nement des pistons variable asservi transmission de puissance par des engrenages et vis billes pistons flottants Points de consigne de 0 001 5 mL min en incr ments de 0 001 mL min 0 05 5 0 mL min lt 0 07 cart type relatif ou lt 0 02 min cart type la valeur la plus grande bas e sur le temps de r tention temp rature ambiante constante 1 ou 10 pL min la valeur la plus grande pompage de H 0 d gaz e 10 MPa 100 bar Plage de fonctionnement 0 60 MPa 0 600 bar 0 8700 psi jusqu 5 mL min lt 2 amplitude classiquement lt 1 3 ou lt 0 3 MPa 3 bar la valeur la plus grande
69. depuis le flacon et vers le port de rin age Ces manipulations peuvent tre ex cut es pendant l analyse de la s paration pr c dente C est ce que l on appelle le chevauchement d injections qui peut tre facilement activ depuis l cran des r glages de l chantillonneur automatique dans le logiciel de commande On peut ordonner l chantillonneur automatique de diriger le circuit vers l chantillonneur automatique d vier apr s que l injection ait t effectu e puis apr s par exemple 3 minutes dans une analyse de 4 minutes de d marrer le processus d aspiration de l chantillon suivant et de pr parat ion pour l injection Ceci peut g n ralement permettre de gagner de 0 5 1 minute par injection CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 Comment obtenir le transfert le plus bas Le transfert est mesur quand des pics r siduels d une injection active pr c dente apparaissent dans une injection de solvant blanc cons cutive Il y a des transferts entre les injections actives pouvant donner des r sultats erron s Le niveau de transfert est indiqu comme la zone du pic dans la solution blanche exprim e comme un pourcentage de la zone dans l injection active pr c dente L chantillonneur automatique Agilent 1260 Infinity est optimis pour le transfert le plus bas travers une conception minutieuse du circuit et l utilisa t
70. e certains probl mes courants de l instrument CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 71 4 Configuration et installation du syst me Installation des modules Installation des modules du syst me Pour des informations d taill es relatives aux proc dures d installation des modules reportez vous aux manuels sp cifiques chaque module Ces manuels comprennent aussi des informations concernant les caract ristiques des modules leur maintenance et les pi ces Int gration au r seau Pour des informations concernant l int gration de votre syst me au r seau reportez vous aux manuels d utilisation des diff rents modules chapitre Configuration r seau 72 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Configuration et installation du syst me 4 Connexions des capillaires et tubes dans le circuit En fonction de la configuration du syst me des capillaires de diff rents dia m tres et longueurs sont utilis s Ils sont d crits ci dessous Consultez les manuels des mod les pour les connexions de capillaires et tubes internes aux modules CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 73 4 Configuration et installation du syst me Installation des modules Connexions pour la configuration de volume de retard standard Figure 21 page 74 montre les connexions des capillaires et tubes dans le cir cuit pour la configuration de volume de retard standard du 1260 Infinity Binary LC Com
71. e d injection est termin quand la vanne d injection passe en position de voie principale Si un lavage d aiguille est requis il est effectu entre les tapes 7 et 8 S quence d injection Avant le d but de la s quence d injection et pendant une analyse la vanne d injection est en position de voie principale Dans cette position la phase mobile circule travers le dispositif doseur la boucle d chantillonnage et l aiguille de l chantillonneur automatique ce qui garantit que toutes les pi ces en contact avec l chantillon sont rinc es au cours de l analyse afin de r duire au minimum le transfert Lorsque la s quence d chantillonnage commence la vanne bascule en posi tion de d rivation Le solvant provenant de la pompe entre dans la vanne au niveau du port 1 et s coule directement vers la colonne par le port 6 L tape finale de l chantillonnage est l tape d injection et d analyse La vanne six voies est commut e en position de voie principale et redirige le flux tra vers la boucle d chantillonnage qui contient pr sent une certaine quantit d chantillon Le flux de solvant transporte l chantillon sur la colonne et la s paration commence C est le d but d une analyse dans l analyse ce stade tout le mat riel ayant une influence sur la performance est rinc en interne par le flux de solvant Aucune proc dure de rin age suppl mentaire n est requise pour les applications standard Rinc
72. e install s La temp rature est r glable de 10 C sous la temp rature ambiante 100 C 8 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit 1 e La nouvelle conception de commande de la vanne d extraction et les vannes remplacement rapide par l utilisateur du compartiment colonnes ther mostat 1290 Infinity am liorent la convivialit et ouvrent la voie des solutions de d veloppement m thodes multiples et m thode automatis e avec d bit ultra haut e Un kit de tubes faible dispersion et des cuves circulation de faible volume minimisent la dispersion du pic pour les colonnes faible diam tre e Solidit de la ligne de base et acquisition spectrale rapide des fr quences d acquisition jusqu 80 Hz gr ce la nouvelle conception optique du d tec teur barrette de diodes 1260 Infinity e Diff rentes cuves avec d bit d tecteur UV utiliser avec des colonnes d un diam tre interne de 2 1 3 0 et 4 6 mm sont disponibles y compris la nou velle cuve circulation de type cartouche Max Light Agilent r volutionnaire avec une longueur optique de 60 mm bruit type lt 0 6 uAU cm pour une d tection ultrasensible Une mise niveau progressive de la s rie 1100 ou 1200 vers le CPL binaire Agilent 1260 Infinity est possible par exemple un d tecteur s rie 1100 ou un compartiment colonne s rie 1200 peut encore tre utilis
73. e pic All Programs Tous les programmes Apex Baselines Apex Lignes de base Apex Slopes Baselines Apex Pentes Lignes de base Apply Appliquer Apply to Method Appliquer la m thode Area Reject R jection d aire Area Reject Height Reject R jection d aire R jection de hauteur As Detector Cell Identique la cuve du d tecteur As Pump Injector En tant que pompe injecteur Attenuation Att nuation Automatic delay volume reduction R duction du volume de retard auto matique Available Signals Signaux disponibles CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Glossaire d IU Balance Stabilisation Bandwidth Bande passante Based on Bas s sur Baseline Correction Correction de la ligne de base BinPump PompeBin C Calculate Calculs Calculation mode Module de calcul Calibration talonnage Cancel Annuler Change Contacts Contacts Change Peak detector Peakwidth Largeur de pic du d tecteur Change Signal Signal Change Spectra Acquisition Mode Mode d acquisition des spectres Change Threshold Seuil Change Modifier 141 Glossaire d IU Check Method Sections to Edit Cocher les sections de m thode modifier Chromatogram Output Sortie de chromatogramme Clear all Tout effacer Column Switching Valve Vanne d inversion entre colonnes Combined Combin es Comment Remarque Customized Data Analysis Macro Macro d analyse de donn es person nalis e Cut Couper D Data A
74. e raccordement 70 x 0 12 mm SS 5067 1551 pour les colonnes d un d i de 2 1 Filtre en ligne CPL 1260 filtre pores de 4 6 mm 0 2 um max 600 bar capillaire de raccordement 90 x 0 17 mm SS 5067 1553 pour les colonnes d un d i de 4 6 mm ou 3 0 mm Changez le filtre quand la pression augmente de 10 Purgez les pompes et les raccords jusqu la colonne de toute phase mobile tamponn e et faites passer 5 mL de solvant avant d installer la colonne dans l instrument CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 67 3 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity Comment emp cher les obstructions de colonne 8 Purgez la colonne avec une phase mobile compatible en commen ant un d bit de 0 1 mL min pour une colonne de diam tre interne de 2 1 mm de 0 2 mL min pour un diam tre interne de 3 0 mm et de 0 4 mL min pour un diam tre interne de 4 6 mm Augmentez le d bit jusqu atteindre le d bit souhait sur une p riode de 5 minutes 9 Une fois que la pression s est stabilis e connectez la colonne au d tecteur 10 quilibrez la colonne et le d tecteur avec 10 volumes de colonne de phase mobile avant utilisation 1 5 mL en fonction de la taille de la colonne 11 vitez toute surpression Contr lez la plage de pression de votre gradient qui peut tre de 100 130 bar ou plus avant de lancer toute analyse Pour fritt s 2 1 mm utiliser des embouts petit c ne Pour fritt s 4 6 mm utiliser des
75. embouts grand c ne Figure 20 Protection pour colonnes d un d i de 4 6 et 2 1 mm contenant des particules de 1 8 um fritt d entr e avec une taille de pore de 0 2 ym 68 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me a CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me LA e o e 0 e 1 ve Configuration et installation du syst me e e Installation du logiciel 70 72 Installation des modules Installation des modules du syst me 72 Int gration au r seau 72 Connexions des capillaires et tubes dans le circuit 73 Amor age du syst me 78 Ce chapitre d crit l installation du logiciel l installation des modules et la pr p aration du syst me avant fonctionnement Fe Agilent Technologies 69 4 Configuration et installation du syst me Installation du logiciel Installation du logiciel de commande et du syst me de donn es Pour des informations d taill es relatives aux proc dures d installation du logiciel consultez le manuel du d tecteur et les manuels du logiciel 70 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Configuration et installation du syst me 4 Installation du logiciel Agilent Lab Advisor Pour des informations d taill es relatives aux proc dures d installation du logiciel Agilent Lab Advisor consultez la documentation du logiciel sur le DVD Lab Advisor Le logiciel Agilent Lab Advisor remplace et am liore les fonctions de diagnos tic jusqu a
76. ement au moyen de la Flush Port soit par immersion dans un Wash Vial d termi n Time dur e en secondes de pompage du solvant de lavage par la pompe p ristaltique reli e la voie de lavage La pompe fonctionne pendant 15 s suppl mentaires pour rincer la voie de lavage CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 117 118 Location indique quel flacon ou puits de plaque est utilis dans le cas o l option Wash Vial est s lectionn e Les flacons ne doivent pas comporter de membrane ils doivent tre ouverts afin d viter toute transmission de mat riel par transfert sur la membrane Repeat indique si l option Flacon de lavage est s lectionn e comment de fois l aiguille est immerg e dans le flacon par d faut 3 fois maximum 5 Stop Time Post Time sont r gl s sur No Limit Off Ces param tres sont d fi nis dans l onglet de la pompe Advanced Auxiliary Draw speed indique la vitesse d aspiration de l chantillon travers l aiguille La valeur par d faut est 100 ul min La vitesse doit tre dimi nu e pour des chantillons visqueux ou pour une plus grande pr cision avec des petits volumes d chantillon lt 2 uL Eject speed indique la vitesse de sortie de l aiguille Draw position indique le d calage vertical par rapport la position d injection nominale de 10 mm au dessus du fond d un flacon Pour un flacon de 2 ml cela correspond environ la moiti de la hauteur d
77. ement 23 altitude hors fonctionnement 23 amor age avec une pompe 80 analyse donn es 98 C calculateur co ts 34 capteur de pression 14 caract ristiques communications 25 performance 24 sortie de signal analogique 25 caract ristiques de performance 24 caract ristiques physiques 23 caract ristiques contr le et valuation des donn es 25 physiques 23 changement des solvants 81 chargement par d faut 86 classe de s curit 104 colonne temp rature 37 thermostatisation 37 colonnes particules sub 2 microniques 34 Compartiment colonne thermostat description 17 compensation de la compressibilit 24 compensation compressibilit 24 composants du syst me compartiment colonne thermostat 17 d tecteur barrette de diodes 19 conception 11 configuration de la m thode de l instrument 116 configuration du volume de retard faible 43 configuration du volume de retard moyen 44 configuration et installation du syst me int gration au r seau 72 configuration optimis e colonnes d i 2 1 mm 43 colonnes di 3et4mm 45 configuration volume de retard standard 45 configuration trac en ligne 87 volume de retard faible 43 volume de retard moyen 44 volume de retard standard 45 contr le et valuation des donn es 25 cuve circulation 65 D DEFICM 113 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Index d gazeur vide 26 d tecteur barrette de diodes descripti
78. emploi du syst me Guide de d marrage rapide 5 Pr paration du contr le 1 Remplissez la bouteille de solvant A d eau de qualit HPLC Remplissez la bouteille de solvant B d ac tonitrile de qualit HPLC S il est install purgez chaque voie du d gazeur en ligne l aide de la serin gue fournie Ouvrez le clapet de purge de la pompe et purgez chaque voie 5 mL min Ceci doit tre suffisant pour liminer l air du syst me 4 Installez la colonne fournie dans le compartiment colonnes Rincez la cuve circulation avec de l eau de qualit HPLC pendant 5 min Effectuez un test d talonnage de la longueur d onde et d intensit le cas ch ant Laissez le syst me s quilibrer aux conditions de contr le r pertori es dans Tableau 9 page 91 et Tableau 10 page 92 pendant 10 min Pr parez un flacon d chantillon test isocratique CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 93 5 Guide de d marrage rapide Pr requis 94 Mise en place de la m thode Cette section montre comment d finir rapidement les conditions de m thode d une analyse La m thode par d faut DEF_LC M a t charg e pour la pr paration de la nouvelle m tho de Maintenant vous pouvez modifier les param tres cl s pour cr er la nouvelle m thode 1 Pour acc der rapidement la fen tre Method pour chaque module effectuez un clic droit sur le module dans le sch ma du syst me et s lectionnez Method
79. en optimisant la taille de particule et la pression CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 35 2 36 Introduction Une r solution plus lev e L utilisation de colonnes longues remplies de particules plus fines aboutit une efficacit et une r solution plus lev es Cela est essentiel pour l analyse des chantillons complexes provenant d tudes m tabolomiques ou prot omi ques De m me des applications comme la d termination du profil des impu ret s b n ficient d un pouvoir de s paration plus lev Une capacit de pics plus lev e est avantageuse m me pour l analyse CPL MS de m dicaments dans les liquides biologiques en raison d interf rences r duites dues la sup pression ionique D une mani re g n rale un pouvoir de s paration accru apporte une plus grande confiance dans les r sultats analytiques amp Lea Capacit de pic 694 N L a CPL avec une r solution de CPG Absorbance mDO S l WASAN V il ja Il V OA Y IRITE Li WA LA eh l MAUR uk An A o N 5 10 15 20 25 30 35 40 Temps min Figure 12 Une capacit de pics de plus de 700 peut tre atteinte avec une colonne ZOR BAX RRHT SB C18 2 1 x 150 mm 1 8 um pour l analyse de BSA dig r e par la trypsine CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Introduction 2 chauffement par frottement Faire progress
80. en combinaison avec une pompe binaire 1260 Infinity CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 9 1 Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit Composants du syst me De nombreuses configurations du syst me Binary LC 1260 Infinity sont possi bles adapt es aux besoins de votre application personnelle Quelques configu rations sont d crites plus en d tails dans ce manuel voir Configuration et installation du syst me page 69 Les modules d crits dans les sections sui vantes sont les composants typiques d un Binary LC 1260 Infinity En plus de ces composants de base des solutions individuelles sont disponibles pour des applications sp cifiques dont certaines sont d crites dans le chapitre Opti misation 10 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit 1 Pompe binaire 1260 Infinity G1312B La pompe binaire comprend deux pompes identiques int gr es dans le m me bo tier Les gradients binaires sont cr s gr ce un m lange sous haute pres sion L amortisseur d impulsions et le m langeur peuvent tre d connect s pour des applications faible d bit ou chaque fois qu un volume transitoire minimal est souhait Les applications habituelles sont des m thodes haut d bit d analyses avec des gradients rapides sur des colonnes haute r solution de 2 1 mm La pompe peut fournir un d bit de 0 1 5 mL min p
81. er une phase mobile travers une colonne des pressions et d bits plus lev s g n re de la chaleur Les gradients de temp rature ainsi cr s radial et longitudinal peuvent influencer l efficacit de la colonne Power F p o F est le d bit et p est la pression Des dispositifs de thermostatisation puissants par exemple l immersion de la colonne dans un bain marie g n rent un fort gradient de temp rature radial ce qui conduit une baisse signicative de l efficacit de la colonne La ther mostatisation de la colonne l air non ventil r duit le gradient de temp rat ure radial et donc la baisse d efficacit mais la temp rature de sortie de la colonne s en trouve augment e Cette l vation de temp rature peut avoir un effet sur la s lectivit contrepression inf rieure les pertes en performance dues l chauffement par frottement sont minimis es de fa on ce que l effi cacit des colonnes sub 2 microniques de diam tre interne de 4 6 ou 3 mm reste toujours sup rieure celle des colonnes correspondantes de diam tre interne de 2 1 mm En r sum l utilisation d un mat riau de remplissage sub 2 micronique per met d am liorer l efficacit et la r solution et d acc l rer les s parations Les caract ristiques du Binary LC Agilent 1260 Infinity sont d crites au chapi tre Description du produit Le chapitre Optimisation traite de la mise en application des donn es th oriques et de l
82. es il n est pas n cessaire de modifier tous les param tres disponibles Cependant par souci d exhaustivit ils sont tous d crits dans les sections suivantes CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 Onglet chantillonneur automatique Method of G1367E PPAAN0OO005 10 x G Injection Mode Advanced a Injection volume Daai uL Auriliary Standard injection Draw speed 100 0 p min Injection with needle wash Eject speed 1000 pL min Draw position 00 mm EEE Equilibration time 20 sec Sample flush out factor 50 times injection volume V Vial Well bottom sensing Location High throughput Repeat time Automatic delay volume reduction S mem Enable overlapped injection Afh e ashed Out As Pump No Limit of After Period Of Time min min mi X ons Injection Cleaning n Ok Cancel Figure 25 cran de configuration de m thode onglet chantillonneur automatique haute performance e Injection Mode Injection volume r gle le volume injecter par exemple 1 ul Standard injection indique qu aucun lavage de l ext rieur de l aiguille n est effectu Injection with needle wash permet de r duire les transferts ventuels Il s agit du mode de fonctionnement recommand il est configur dans la zone en dessous Needle Wash si l option est s lectionn e au dessus Mode indique comment l ext rieur de l aiguille est rinc soit activ
83. est peut tre le diam tre de la colonne car cela exercera un impact important sur la dispersion du pic La hauteur du pic peut tre plus lev e sur une colonne troite qu avec une plus grande injection sur une colonne plus large parce qu il y a moins de dispersion du pic Avec des colonnes d un dia m tre interne de 2 1 mm les volumes d injection typiques peuvent aller jusqu 5 10 ul mais cela d pendra fortement de la chimie de l analyte et de la phase mobile comme discut ci dessus Dans une s paration de gradient des volumes d injection d environ 5 du volume de la colonne pourraient tre atteints tout en conservant une bonne r solution et une bonne dispersion du pic 48 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 Comment obtenir des dur es de cycle plus courtes Des dur es de cycle plus courtes peuvent tre obtenues en choisissant une colonne courte avec une bonne s lectivit Les dimensions de la colonne sont galement d termin es par le syst me de d tection utilis Pour la d tection UV les colonnes d un diam tre interne de 3 0 mm sont id ales car elles attei gnent les vitesses lin aires les plus lev es possibles Avec les colonnes d un diam tre interne de 4 6 mm il est galement possible d atteindre des vitesses lin aires lev es mais le d bit maximum est limit 5 mL min La pompe doit tre utilis e dans sa configu
84. est suppos pour cet exemple que le syst me a t install mis sous tension et amorc voir Amor age initial page 78 La lampe UV doit tre allum e au moins 30 minutes avant de d marrer toute analyse quantitative CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Guide de d marrage rapide 5 Pr paration du syst me Mise sous tension du syst me Si l ensemble du syst me n est pas encore sous tension et que le logiciel n indi que pas l tat Pr t suivez les tapes suivantes 1 Mettez l ordinateur sous tension et attendez l affichage du bureau Windows 2 Mettez sous tension les modules CPL l aide du bouton en bas gauche de chaque module Un voyant vert signalant que le module est aliment s allume au centre de chaque bouton 3 Lancez le logiciel de commande de l ordinateur en cliquant sur l ic ne appropri e le cas ch ant Sinon s lectionnez Start gt All Programs gt Agilent Technologies gt OpenLAB gt OpenLAB Control Panel S lectionnez l instrument appropri sous Instruments dans le panneau de navigation puis cliquez sur Launch online Le logiciel ChemStation s ouvre dans la vue Method and Run Control Au d marrage les modules se trouvent en mode Veille l tat Non pr t l exception de l chantillonneur automatique qui s initialise d embl e et atteint l tat Pr t 4 Pour allumer chaque module individuellement effectuez un clic droit sur l ic ne appropri e et s
85. et le filtrage du signal Les Stoptime Posttime sont d finis sur As Pump Injector et Off et ces valeurs sont g n ralement g r es dans l onglet Pump Cependant un temps d ana lyse du d tecteur diff rent du temps d analyse de la pompe peut tre confi gur s il est n cessaire d arr ter le traitement des donn es avant la fin de l analyse d finie dans la pompe Cela peut tre le cas lorsqu une rampe d quilibrage du gradient a t d finie la fin du gradient Par exemple si le pourcentage de B est de 95 10 min et qu il est attendu que tous les pics aient t lu s de la colonne alors l analyse peut globalement tre consid r e comme tant finie mais un segment de gradient suppl mentaire peut tre ajout pour redescendre le pourcentage de B sa valeur initiale sur une p riode de deux minutes et r quilibrer en douceur la colonne Comme aucune donn e utile n est attendue pendant cette descente le temps d ana lyse du d tecteur peut tre r gl sur 10 min pour que l acquisition des don n es s arr te alors que le temps d analyse de la pompe est de 12 min pour permettre la r alisation de la descente Il s agit d une pr f rence de l utilisa teur certaines personnes reconnaissent que les derni res minutes du chro matogramme ne contiennent pas de donn es utiles mais les enregistrent quand m me pour viter l inconv nient de devoir d finir un temps d ana lyse diff rent pour le d tecteur Le temps
86. eut tre corrod par les cyanures complexants et les acides concentr s comme l eau r gale Oxyde de zirconium Zr0 L oxyde de zirconium est inerte la plupart des acides bases et solvants cou rants Il n existe aucune incompatibilit document e pour les applications CPL Platine iridium Le platine l iridium est inerte la plupart des acides bases et solvants cou rants Il n existe aucune incompatibilit document e pour les applications CPL CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 Polym res fluor s PTFE PFA FEP FFKM Les polym res fluor s comme le PTFE polyt trafluoro thyl ne PFA per fluoroalkoxy et FEP thyl ne propyl ne fluor sont inertes la plupart des acides bases et solvants courants Le FFKM est du caoutchouc perfluor qui r siste aussi la plupart des produits chimiques En tant qu lastom re il peut gonfler dans certains solvants organiques tels que les hydrocarbures halog n s Les tubes en copolym re TFE PDD utilis s dans tous les d gazeurs Agilent l exception du G1322A ne sont pas compatibles avec les solvants fluor s tels que Freon Fluorinert ou Vertrel Ils ont une dur e de vie limit e en pr sence d hexafluoroisopropanol HFIP Afin de garantir la plus longue dur e de vie possible avec le HFIP il est pr f rable de d dier une chambre sp ciale ce sol vant de ne pas m langer les solvants et de ne pas laisser la chambre s c
87. euvent tre utilis es dans la fourchette haute de la plage La temp rature est r gul e une pr cision de 0 15 C jusqu 10 C en dessous de la temp rature ambiante bien qu il soit noter que tr s peu d applications fonctionnent en dessous de 12 15 C vitez d utili ser le TCC une temp rature tellement basse que l humidit de l air se condense car cela pourrait d clencher le capteur de fuites Column Switching Valve cette option n est active que si une vanne est instal l e entre les supports de colonne Trois types de vanne sont disponibles 2 positions 6 voies pour permuter entre deux colonnes 2 positions 10 voies pour alterner avec la r g n ration des colonnes 8 positions 9 voies utilis e pour la s lection de colonnes multiples avec MDS CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 Configuration d une m thode l aide de la fonction Modifier l ensemble de la m thode Onglet D tecteur barrette de diodes Setup Method x H Binary Pump Sampler Sampler Injector Program a Column Comp DAD x Instrument Curves ecg de i Signals Advanced Use Wave Band Reference Reference Spectrum Signal length width Wavelength Bandwidth Store None z Signal v 2540 40 V 360 0 1000 nm Signal B vi 210 0 40 v 3600 100 0 nm Range from 19 lt 400 0 nm Signal C a 2140 40 V 3600 1000 nm den Se Signal D y 2300 40 V
88. ez l aiguille Avant l injection et pour r duire le transfert pour les analyses tr s sensibles l ext rieur de l aiguille peut tre lav dans un port de rin age derri re le port de l injecteur sur l unit d chantillonnage D s que l aiguille est sur le port de rin age une pompe p ristaltique fournit du solvant pendant un temps d fini pour nettoyer l ext rieur de l aiguille la fin de ce processus l aiguille retourne au port d injection CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit 1 Compartiment colonnes thermostat 1290 Infinity G1316C Le compartiment colonnes thermostat Agilent Infinity 1290 CCT main tient une temp rature comprise entre 10 C en dessous de la temp rature ambiante et jusqu 100 C un d bit de 2 5 ml min et 80 C un d bit allant jusqu 5 ml min respectivement La stabilit de la temp rature est de 0 05 C et la pr cision de la temp rature est de 0 5 C avec talonnage La thermostatisation est atteinte par l action combin e de la conduction par contact avec les ai lettes du thermostat de la temp rature de l air non ventil du compartiment et surtout du pr chauffage ou refroidissement de la phase mobile lors de son passage travers un changeur de chaleur avant de p n trer dans la colonne Il existe deux zones de temp rature ind pendantes dans chaque TCC qui peuvent fonctionner de
89. f rence et celui des autres modules est g n ralement r gl sur cette valeur e Post Time d finit la dur e d un compte rebours la fin de l analyse pen dant laquelle l injection suivante ne peut tre effectu e Cela permet au sys t me de se r quilibrer apr s une analyse gradient Pour une m thode isocratique ce param tre peut tre r gl sur Off Pour des m thodes gra dient cette valeur peut tre d termin e exp rimentalement en observant le comportement de la ligne de base G n ralement il correspond au temps n cessaire pour rincer le syst me avec le volume de retard du syst me plus au moins trois cinq volumes de colonne Pressure Limits permettent de contr ler le comportement de la pompe en fonction de la pression La pression maximale de la pompe binaire 1260 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 123 124 Annexe Infinity est de 600 bar mais certaines colonnes ne r sistent pas ce niveau de pression et il est n cessaire de les prot ger en fixant une limite de pres sion La pompe g n re une situation d erreur si cette pression est d pass e Toute analyse en cours est arr t e et la pompe passe en mode veille sans d bit Les informations relatives la pression maximum support e par cha que colonne sont fournies avec la colonne Les colonnes Agilent ZORBAX RRHT peuvent tre utilis es 600 bar La limite de pression inf rieure est D sactiv e si sa v
90. guration du volume de retard standard est recommand e pour la pompe binaire 1260 Infinity e Ici aussi le volume d injection et le solvant de dissolution de l chantillon sont importants Il faut s assurer que les compos s soient concentr s dans le haut de la colonne afin d viter une dispersion du pic due l injection ce qui pourrait r duire la hauteur du pic Pour ce faire l chantillon doit tre dissous dans une composition de solvant d une force d lution plus faible que la phase mobile La temp rature de la colonne ne doit pas tre trop basse afin d viter une longue r tention des pics sur la colonne Ceci cr e galement une disper sion du pic et une hauteur de pic plus faible e La fr quence d acquisition du d tecteur UV doit tre s lectionn e en fonc tion de la largeur de pic r el Les fr quences d acquisition plus lev es que n cessaire doivent tre vit es en raison des niveaux de bruit plus lev s e Les d tecteurs UV disponibles sont le d tecteur barrette de diodes Agilent 1260 Infinity G4212B et le d tecteur longueur d onde variable Agilent 1260 Infinity G1314F avec des fr quences d acquisition de 80 Hz ainsi que des niveaux de bruit et de d rive beaucoup plus bas Choix d une cuve circulation page 65 donne un aper u des cuves cir culation disponibles avec le G4212B DAD Pour des informations sur les cuves circulation utilis es avec le G1314F VWD veui
91. her Pour optimiser la dur e de vie du capteur de pression ne laissez pas le HFIP dans la chambre quand l unit est teinte Saphir rubis et c ramiques Al0 Le saphir le rubis et les c ramiques base d oxyde d aluminum ALLO sont inertes presque tous les acides bases et solvants courants Il n existe aucune incompatibilit document e pour les applications CPL CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 111 6 Annexe Agilent Technologies sur Internet Pour les toutes derni res informations sur les produits et les services Agilent Technologies visitez notre site Internet l adresse suivante http www agilent com 112 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 Configuration d une m thode l aide de la fonction Modifier l ensemble de la m thode Dans le logiciel ChemStation une m thode contient tous les param tres n ces saires l acquisition des donn es gestion du syst me et le traitement des donn es traitement des donn es pour obtenir des r sultats quantitatifs et qualitatifs Les param tres sont accessibles au moyen d une s rie d crans qui traitent chacun d un module ou d une fonction Vous pouvez acc der ces crans en cliquant sur une ic ne de l interface utilisateur ou sur la barre de menus et ses menus d roulants Une nouvelle m thode est cr e en chargeant et modifiant une m thode existante ou en chargeant et modifiant le mod le de m th
92. illon test isocratique 90 Mise en place de la m thode 94 Ex cution de la m thode pour une injection unique 96 Traitement des donn es 98 Vue Traitement des donn es 99 Int gration d un signal 100 D finition du rapport 101 Ce chapitre traite de l acquisition de donn es et du traitement des donn es avec le Binary LC 1260 Infinity ire Agilent Technologies 83 5 Guide de d marrage rapide propos du guide de d marrage rapide 84 Ce chapitre apporte des informations relatives au fonctionnement du Binary LC Agilent 1260 Infinity Vous pouvez vous en servir comme guide pour lancer rapidement une premi re analyse apr s l installation l utilisant la fois comme exemple et pour v rifier le fonctionnement global du syst me Il com prend galement des informations plus d taill es sur les param tres des m thodes Cet exemple explique comment mettre en place et effectuer une analyse avec les colonnes et l chantillon test fournis avec le Binary LC Agilent 1260 Infi nity L exemple fait r f rence aux menus et aux commandes du logiciel Open LAB CDS ChemStation Edition mais les m mes fonctions sont disponibles en utilisant les autres possibilit s de commande de l instrument savoir Open LAB CDS EZChrom Edition et le logiciel MassHunter Ci apr s les termes ChemStation et EZChrom d signent toujours respective ment Agilent OpenLAB CDS ChemStation Edition et Agilent OpenLAB CDS EZChrom Edition Il
93. ion d un signal 1 S lectionnez l outil T che d int gration voir la figure ci dessous Les ic nes Integrate et Set Integration Events Table sont entour es dans la figure illus tr e ci dessous Eil a Calibration ul Signal DU Purity l Spectrum Lu SELS Report snor BETTER DAD1 A Sig MOW05 0105 D SES OMON Ra fu Tr 2N ALIN je DAD1 A Sig 254 4 Ref 550 100 DEMO 00S 0105 D E mU Method Manual Events I 100 iil Initial Events For All Signals amp 80 Integration Events Value al Tangent Skim Mode Standard 1 Tail Peak Skim Height Ratio 0 00 eo Front Peak Skim Height Ratio 0 00 Skim Valley Ratio 20 00 1 Baseline Correction Advanced 40 Peak to Valley Ratio 500 00 1 J S g g 20 8 w Specific Events For Signal 0 17 DAD Default x pe a r r 7 1 2 3 4 5 e minj r Time Integration Events Value Time Area Height Width Area Symmetry Initial Slope Sensitivity 5 1 0 747 301 105 9 0 0452 29 738 0 718 Initial Peak Width 0 02 2 1 023 275 9 76 8 0 0539 27 257 0 64 Initial Area Reject 5 3 2 571 178 2 26 9 0 1013 17 604 0 634 Initial Height Reject 1 4 5 856 257 1 16 9 0 2255 25 401 0 67 Initial Shoulders OFF 2 Cliquez sur l ic ne L Set Integration Events Table pour ouvrir le tableau comme illustr ci dess
94. ion de mat riaux dans lesquels l absorption d chantillon est minimis e Un chiffre de transfert de 0 002 doit pouvoir tre obtenu m me quand un spec trom tre de masse triple quadrip le est le d tecteur Les param tres de fonc tionnement de l chantillonneur automatique permettent l utilisateur de d finir des param tres appropri s pour minimiser le transfert dans toute application impliquant des compos s susceptibles de rester coinc s dans le syst me Les fonctions suivantes de l chantillonneur automatique peuvent tre utili s es pour minimiser le transfert e Lavage d aiguille interne e Lavage d aiguille externe e R trobalayage du si ge d aiguille e Nettoyage de la vanne d injection Le circuit y compris l int rieur de l aiguille est rinc en continu en fonction nement normal fournissant une bonne limination du transfert dans la plu part des situations La r duction automatique du volume de retard ADVR r duit le volume de retard mais galement le rin age de l chantillonneur auto matique et ne doit pas tre utilis e avec des analytes si le transfert peut tre un probl me Pour assurer le transfert le plus bas prenez note des recommandations sui vantes e Utilisez toujours l chantillonneur automatique avec le clapet d injection en position de voie principale e Rincez l ext rieur de l aiguille avec un solvant appropri l aide du port de rin age Le temps de rin age doit
95. ionn es sur le m canis me de commande en fonction du type d application souhait voir Figure 4 page 18 droite Une tiquette RFID identifie chaque t te de vanne 1 Ces sp cifications ont t valid es avec de l eau distill e une temp rature ambiante de 25 C un point de consigne de 40 C et une plage de d bit de 0 2 5 mL min CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 17 1 18 Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit Composants du s ysteme Figure 4 Vanne remplacement rapide sur le TCC Jusqu trois TCC peuvent tre regroup s pour permettre des op rations com plexes telles que la permutation entre huit colonnes pour le d veloppement de m thodes automatis ou lorsqu il est souhaitable que des colonnes suppl mentaires soient disponibles pour diff rentes applications De cette fa on la colonne utiliser devient un param tre de m thode simple Cette configura tion requiert deux t tes de vanne 8 positions 9 voies une dans deux des TCC Pour faciliter leur utilisation les TCC regroup s sont repr sent s dans le logiciel sous la forme d une unit unique avec une seule interface Par rapport des mod les plus anciens d autres am liorations sont le renfor cement de l isolation thermique des guides capillaire mieux adapt s et un capteur d ouverture de la porte pour que les m thodes puissent int grer le param tre porte ferm e parti
96. ionnelle et l UHPLC CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 33 2 Avantages des colonnes petites particules 34 Une chromatographie plus rapide Le fait d avoir des dur es d analyse plus courtes pr sente plusieurs avantages La capacit d analyse des laboratoires utilisant des syst mes haut d bit s en trouve am lior e et plus d chantillons peuvent tre analys s dans un temps moins long Plus d chantillons en moins de temps signifie aussi des co ts moins lev s Par exemple en diminuant le temps d analyse de 20 min par chantillon 5 min le co t pour 700 chantillons est r duit de 79 Tableau 3 page 34 Tableau 3 conomies de temps et de co t sur plus de 700 analyses Dur e de cycle Dur e de cycle de 20 min Dur e de cycle de 5 min Analyses 700 700 Co t approx par analyse 1 10 58 2 24 Co t approx pour 700 analyses 7400 1570 conomies de co ts 5830 Temps 10 jours 2 5 jours 1 solvants 27 1 limination des d chets 2 1 main d uvre 30 h 2 24 heures jour Le calculateur d conomies Agilent repr sente un outil d utilisation facile pour calculer les conomies g n r es par le passage d un syst me HPLC convention nel un syst me UHPLC quip de colonnes contenant des particules de 1 8 um Le calculateur ainsi qu un calculateur de transfert de m thode est accessible sur le site Internet d Agilent Technologies www chem agilen
97. ispersion et donne une meilleure r solution Ceci est d j optimis dans le Binary LC 1260 Infinity avec des capillaires de petit diam tre d i 0 12 mm v rifiez que la longueur la plus courte est utilis e entre la colonne et le d tecteur et la cuve circula tion de la cartouche Max Light Enfin tout gain de r solution doit tre pr serv avec une collecte de donn es assez rapide pour d terminer avec pr cision les pics troits En r sum les tapes suivantes doivent tre prises en compte pour augmenter la r solution La premi re tape pour am liorer la r solution est toujours de tester diff r entes phases stationnaires et de s lectionner la colonne ayant la meilleure s paration C est le param tre le plus important pour la r solution e La deuxi me tape est d utiliser des colonnes longues ou m me des colon nes coupl es pour augmenter le nombre de plateaux Une troisi me tape est de d caler les pics pour des facteurs de r tention plus lev s Pour les valeurs k de 5 10 l impact est important Avec des valeurs k sup rieures l effet est tr s faible En pratique cela signifie que des colonnes plus longues avec une s lectivit appropri e donnent une meilleure r solution CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 57 3 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity Configuration optimale de l instrument pour une haute r solution Compartiment colonnes Le c
98. it 4 0 mL min Composition du solvant Temps d arr t chantillonneur Injection automatique Compartiment Colonne colonnes Temp rature D tecteur Signal A 40 60 B 1 min temps de postanalyse 1 min Tul Colonne Eclipse Plus C18 4 6 x 100 mm 3 5 um 959961 902 __ Colonne Poroshell 120 EC C18 3 0 x 50 mm 2 7 pm 699975 302 __ Colonne Poroshell 120 EC C18 4 6 x 50 mm 2 7 pm 699975 902 40 C Longueur d onde 250 nm bande passante 4 nm Longueur d onde de r f rence 360 nm bande passante de r f rence 100 nm CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 91 5 Guide de d marrage rapide Tableau 10 Param tres de m thode pour une premi re s paration test configuration de volume de retard faible Module Param tre Valeur Pompe Solvant A Eau Solvant B Ac tonitrile D bit 0 75 mL min Composition du 40 60 B solvant Temps d arr t 1 2 min temps de postanalyse 1 min chantillonneur Injection 1 uL automatique Compartiment Colonne Colonne SB C18 4 6 x 50 mm 1 8 um 600 bar colonnes 827975 902 Temp rature 40 C D tecteur Signal Longueur d onde 250 nm bande passante 4 nm Longueur d onde de r f rence 360 nm bande passante de r f rence 100 nm Sp cifications de contr le e quatre pics sont visibles sur le chromatogramme intensity Test r ussi e Wavelength Calibrationt1 nm 92 CPL binaire 1260 Infinity Mode d
99. la diffusion turbulente ou les multiples trajets d coulement tra vers la colonne B correspond la diffusion mol culaire longitudinale le long de l axe de la colonne C correspond au transfert de masse de l analyte entre les phases mobile et stationnaire La s paration est la plus efficace lors que H atteint sa valeur minimale Les effets de chacune des variables et de l quation combin e sont illustr s dans la Figure 6 page 29 o la hauteur du plateau est fonction du d bit lin aire travers la colonne Ce type de graphi que est connu sous le nom de Courbe de van Deemter et est utilis pour d ter miner le d bit optimal au point le plus bas de la courbe permettant d obtenir la meilleure efficacit de s paration d une colonne anne grande particule petite particule Hauteur de plateau th orique H R sistance au transfert de masse z uw Diffusion longitudinale Ecoulement lin aire u Figure 6 Courbe de van Deemter hypoth tique CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 29 2 30 Introduction Les courbes de van Deemter de la Figure 7 page 30 montrent comment la r duction de la taille des particules am liore l efficacit Le fait de passer d une taille de particules habituelle telle que 3 5 um ou 5 0 um des particules de 1 8 um permet d am liorer les performances de fa on significative Les valeurs de hauteur du plateau sont deux trois fois plus petites avec des parti cu
100. la taille de particule et pro portionnellement la longueur de la colonne La r solution augmente avec la racine carr e de N ainsi le fait de doubler la longueur de la colonne augmente la r solution d un facteur de 1 4 Ce qui est possible d pend de la viscosit de la phase mobile car ceci est li directement la pression Les m langes de m thanol g n rent plus de contrepression que les m langes d ac tonitrile L ac tonitrile est souvent pr f r car les formes de pic sont meilleures et plus troites en plus de la viscosit plus faible mais le m thanol donne g n rale ment une meilleure s lectivit certainement pour les petites mol cules de moins de 500 Da environ La viscosit peut tre r duite en augmentant la temp rature mais il ne faut pas oublier que ceci peut modifier la s lectivit de la s paration Des exp riences montreront si ceci augmente ou diminue la s l ectivit Quand le d bit et la pression augmentent il faut noter que le chauf fage par friction augmente l int rieur de la colonne Ceci peut entra ner une dispersion l g rement accrue et ventuellement un petit changement de s l ectivit les deux tant visibles comme une baisse de r solution Ce dernier cas peut tre retard en r duisant la temp rature du thermostat de quelques degr s et encore une fois des exp riences donneront la r ponse La courbe van Deemter montre que le d bit optimal travers une colonne STM est s
101. layout for uncalibrated peaks 1 Pages Separately With calibrated peaks Do not report Destination File setting O Printer F File prefix Report M Por M Eile Unique PDF file name M Screen Cancel l Help CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 101 5 Guide de d marrage rapide Traitement des donn es Specify Report Instrument 1 Reporting settings Quantitation settings Calculation mode Calculate Percent vij Based on ISTD correction V Use multiplier and dilution factor with ISTDs Calculation factors Use sample data From Data File Compound ISTD Amount Amount Multiplier Dilution Cancel Help 2 A l aide des exemples de param tres montr s dans les figures ci dessus vous pouvez faire afficher un rapport en pourcentage d aire l cran 3 Dans la section Destination s lectionnez Printer pour imprimer une version papier ou File puis PDF pour obtenir un fichier de rapport en format PDF enregistr dans le fichier de donn es Le fichier de donn es avec le suffixe D est en r alit un r pertoire Le fichier de rapport peut tre visionn directement dans ChemStation Il est galement accessible dans le r pertoi re en utilisant l explorateur de fichiers normal de Windows 4 Sauvegardez nouveau la m thode pour vous assurer que les param tres
102. les de 1 8 um et ce avec une efficacit proportionnellement plus lev e Cela permet l utilisation d une colonne plus courte sans perdre en r solution ainsi la dur e de l analyse est galement divis e par un facteur deux trois L aug mentation de l efficacit est en grande partie due au nombre r duit de trajets d coulement diff rents en raison de la taille r duite des particules la valeur de la constante A est plus petite diffusion turbulente De surcro t une taille de particules plus petite signifie que les dur es de transfert de masse sont plus courtes diminuant ainsi la valeur de la constante C L effet global est une r d uction importante de la perte de l efficacit lorsque le d bit augmente la pente de la courbe est moins forte Cela signifie que l utilisation de particules plus fines permet d acc l rer encore la s paration en augmentant le d bit sans toutefois perdre significativement en efficacit 0 0045 0 0040 0 0035 0 0030 0 0025 5 0 um 0 0020 HETP cm plateau 0 0015 3 5 um 0 0010 0 0005 1 8 um 0 0000 4 2 ml min 5 0 ml min 0 0005 T 0 0 0 2 0 4 0 6 0 8 1 0 1 2 1 4 1 6 Vitesse lin aire interstitielle Hg cm s Figure 7 Courbe de van Deemter pour des tailles de particules diff rentes CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Introduction 2 La s paration chromatographique peut tre optimis e sur la base des caract r istiques
103. llez consulter le mode d emploi du d tecteur longueur d onde variable Agilent 1260 Infi nity Conditions chromatographiques Pour un rapport signal bruit optimal il est pr f rable que les pics s luent rapidement e Des d bits lev s doivent tre utilis s pour luer les pics des valeurs k basses e Des gradients plus rapides peuvent aussi tre appliqu s pour luer les pics des valeurs k basses CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 63 3 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity Colonnes La sensibilit est sp cifi e comme un rapport signal bruit S B et donc le besoin de maximiser la hauteur de pic et de minimiser le bruit de base Toute r duction de la dispersion du pic aide maintenir la hauteur de pic le volume extra colonne doit donc tre minimis par l utilisation d un diam tre interne court et troit des capillaires de raccordement et des raccords correctement install s L utilisation de colonnes de diam tre int rieur plus petit peut entra ner une hauteur de pic sup rieure et est donc id ale pour les applications avec des quantit s d chantillons limit es Si la m me quantit d chantillon peut tre inject e dans une colonne avec un diam tre int rieur plus petit la dilu tion due au diam tre de la colonne est inf rieure et la sensibilit augmente Par exemple l augmentation du diam tre int rieur de la colonne de 4 6 mm 2 1 mm provoque un gain th
104. lors propos es par le logiciel ChemStation Le logiciel Agilent Lab Advisor est une application fonctionnant sous Windows qui contr le les instruments de laboratoire en temps r el et permet donc d accro tre la productivit du syst me au moyen de notifications automatiques pour les t ches de maintenance et d entretien bas es sur des compteurs sophistiqu s Cela permet de r soudre les probl mes ventuels avant qu ils n affectent les r sultats Le logiciel comprend un ensemble complet d informa tions et de documentation pour l utilisateur un jeu de calculateurs et d outils pour faciliter la configuration l talonnage et la maintenance de votre instru ment ainsi que des tests et des proc dures de diagnostic pour v rifier son bon fonctionnement Le logiciel Agilent Lab Advisor propose galement des infor mations et des solutions pour les ventuelles erreurs d instrument qui pour raient survenir Le logiciel fonctionne avec ou sans les syst mes de donn es Agilent Le logiciel surveille e l tat du module CPL e la maintenance pr dictive pour indiquer la n cessit d une mise niveau ou du remplacement d une pi ce De surcro t le logiciel e automatise diff rents tests utiles e tente d identifier les instruments du r seau local qui sont sous tension et connect s votre PC ou au r seau de votre laboratoire e sugg re automatiquement le remplacement des pi ces et les t ches de d pannage pour r soudr
105. mesure quantitative il est discrimin Le transfert peut tre mesur en injectant du solvant pur apr s l analyse de l chantillon La discrimination et le transfert peuvent devenir encore plus importants si les compos s de l analyte sont apo laires et que le d marrage du gradient contient un pourcentage d eau lev Dans le pire des cas le compos apolaire pr cipite la surface de contact De petits bouchons par exemple de dim thylsulfoxyde avant et apr s le bouchon d chantillon peuvent aider minimiser ce probl me Pour l injection chevauchante ou la r duction automatique du volume de retard le temps avant la commutation du clapet d injection en mode d riva tion doit tre augment avec le facteur de rin age 20 Ceci prolonge le temps pendant lequel le volume de retard de l chantillonneur automatique est rinc avec la phase mobile CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 51 3 52 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity Comment am liorer la capacit d analyse L injection peut tre optimis e pour la vitesse en n oubliant pas qu une aspi ration trop rapide du solvant peut r duire la reproductibilit On peut faire ici des gains marginaux car les volumes d chantillon utilis s tendent de toutes fa ons se diriger vers la plus petite extr mit de la plage Une partie signifi cative du temps d injection est le temps pris par les mouvements de l aiguille vers et
106. min e par le param tre Peakwidth et huit spectres sont acquis pendant la dur e indiqu e sous Peakwidth Le micrologiciel effectue une d tection de pics sur le signal A uniquement afin de d termin er quels spectres de pic doivent tre enregistr s Pour des signaux multi ples il peut tre n cessaire de r gler le signal A comme d tecteur large bande pour s assurer que des spectres de pic sont disponibles pour tous les signaux de longueurs d onde diff rentes Store permet de choisir le mode d acquisition des spectres Les options sont None aucun spectre n est enregistr Apex Baselines trois spectres sont enregistr s au d but au sommet et la fin du pic Apex Slopes Baselines cinq spectres sont enregistr s au d but dans la pente ascendante au sommet dans la pente descendante et la fin du pic All in Peak tous les spectres disponibles l int rieur d un pic sont enre gistr s All tous les spectres sont enregistr s tout au long de l analyse Every 2nd Spectrum enregistre seulement un spectre sur deux tout au long de l analyse Range les spectres peuvent tre enregistr s sur l ensemble de la plage du d tecteur de 190 nm 640 nm ou sur une plage r duite d finie par l uti lisateur Cela r duit aussi le volume de donn es enregistrer Step permet de d finir l intervalle nm des donn es enregistr es dans un spectre et d termine donc la r solution du spectre observ La v
107. mine Il est d conseill de l utiliser avec de l acide fluorique et des fluorides Acier inoxydable inox L acier inoxydable ne r agit pas avec de nombreux solvants communs Il est stable en pr sence d acides et de bases dans une plage de pH de 1 12 5 Tou tefois il peut tre corrod par des acides dont le pH est en dessous de 2 3 Il peut galement se corroder dans les solvants suivants e des solutions d halog nures alcalins leurs acides respectifs par exemple l iodure de lithium le chlorure de potassium etc et des solutions aqueuses d halog nes e Des concentrations lev es d acides inorganiques tels que l acide sulfurique ou nitrique et des solvants organiques en particulier aux temp ratures lev es si votre m thode chromatographique le permet remplacez ces aci des par de l acide phosphorique ou un tampon phosphate moins corrosifs pour l acier inoxydable e Des solvants ou m langes halog n s qui forment des radicaux et ou des aci des comme 2 CHCl O 2 COCL 2 HCI Cette r action dans laquelle l acier inoxydable joue sans doute le r le de catalyseur se produit rapidement avec le chloroforme sec si le processus de s chage limine l alcool stabilisant e Les thers de qualit chromatographique qui peuvent contenir des peroxy des par exemple THF dioxane ther diisopropylique De tels thers doi vent tre filtr s avec de l oxyde d aluminium sec qui adsorbe les pero
108. n tre de signal 1 Signals Signaux Single Runs Analyses uniques Size Taille Skip Ignorer 144 Slope Sensitivity Sensibilit de pente Solvents Solvants Specific Events For Signal v nements sp cifiques pour un signal Specify Report D finition du rapport Spectrum Store Enregistrement des spectres Standard Data Analysis Analyse de donn es standard Standard injection Injection standard Start D marrer Step Pas Stop Time Temps d arr t Stop Time Post Time Temps d arr t Temps post analyse Stoptime Temps d analyse Store Enregistrer Subdirectory Sous r pertoire Switch module name on Allumer le nom du module System On Off Syst me Marche arr t T Temperature Temp rature Threshold Seuil Time Dur e Timetable Tableau des v nements U Unique PDF file name Nom fichier PDF unique Unique Sequence Folder Creation S quence unique de cr ation de dos sier Use Signal Utiliser le signal V Vial Location Flacon emplacement Vial Well bottom sensing D tection du fond de flacon puits View Vue W Wash Vial Flacon de lavage Water Eau Wavelength Longueur d onde Wavelength Calibration talonnage de la longueur d onde Z Zero Offset D calage z ro CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Index A accessoire de rin age actif des joints 11 ADVR 50 Agilent sur Internet 112 alterner la r g n ration des colonnes 49 altitude de fonctionn
109. n centre solide 1 7 um de diam tre entour d une couche de silice poreuse 0 5 um d paisseur La vitesse et la r solution des colonnes PoroShell est comparable aux colonnes sub 2 microniques avec jusqu 50 de contrepression en moins Les colonnes PoroShell b n ficient d une r surgence r cente de particules de plus petite taille que les anciennes colonnes particu les pelliculaires L int r t actuel pour cette technologie est favoris par sa r utilisation dans les particules de plus petites tailles comme les tailles sub 3 microniques pour les s parations de petites mol cules en phase inverse typiques De nombreux laboratoires r alisent un processus de s lection approfondi pour d finir la meilleure combinaison de phase stationnaire de phase mobile et la temp rature optimale pour leurs s parations chromatographiques La solu tion de d veloppement m thodes multiples Agilent 1200 Infinity facilite l automatisation de l int gralit de ce processus de s lection tr s long ce qui rend plus simple et plus fiable le d veloppement et le transfert de m thodes Les colonnes ZORBAX RRHT de 1 8 um ont les m mes propri t s chimiques que les colonnes ZORBAX avec des particules de 3 5 et 5 um En cons quence pour toute phase ZORBAX donn e la s lectivit des particules de 5 0 3 5 et 1 8 um est identique permettant ainsi un transfert de m thodes bidirectionnel ais rapide et s curis entre la CPL convent
110. nt laiss s dans le d gazeur vide sans tre soumis un d bit pendant une p riode de temps prolong e une l g re parte des composants volatils sera constat e Pr parations Mettez le syst me sous tension L outil de purge de Lab Advisor peut tre utilis pour purger la pompe automatiquement 1 Ouvrez la vanne de purge de la pompe en la tournant dans le sens inverse des aiguilles d une montre et r glez le d bit sur 5 mL min 2 Rincez le d gazeur sous vide et tous les tuyaux avec au moins 10mL de sol vant R p tez les tapes 1 et 2 pour les autres voies de la pompe binaire 4 R glez le d bit et la composition pour l application en question et fermez la vanne de purge 5 Pompez pendant environ 10 minutes avant de lancer l application 80 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Quand Pi ces n cessaires Pr parations ATTENTION Configuration et installation du syst me 4 Changement des solvants Si le solvant d une voie doit tre remplac par un autre solvant non compatible les solvants ne sont pas miscibles ou un solvant contient un tampon il est n cessaire de suivre la proc dure ci dessous pour emp cher l encrassement de la pompe d la pr cipitation de sel ou la pr sence de gouttelettes de liquides r siduelles dans certaines parties du syst me Quantit R f rence Description 1 Solvant s de purge voir Tableau 8 page 82 1 5022 2184 Raccord union sans volume mort
111. nt voir l ensemble du tableau des v nements et entrent les valeurs pour le temps 0 00 min Cela ne pose pas de probl me mais il est noter que si les conditions initiales sont modi fi es par la suite les nouvelles valeurs doivent tre entr es dans le tableau des v nements et les points de consigne modifi s dans la zone Solvents de l cran _ Show timetable graph affiche une version graphique de la variation des para m tres dans le temps si la case est coch e Stop Time indique la dur e totale pour la s paration ou l analyse Appel parfois Dur e d analyse par certains utilisateurs Il s agit de la dur e mesur e en minutes partir de l injection de l analyse Lorsque cette dur e est coul e l acquisition de donn es s arr te et le d bit la composi tion et les autres param tres du syst me reviennent leurs valeurs initiales pour la m thode Le syst me devient de nouveau disponible pour l injection suivante Le temps d arr t doit toujours tre au moins aussi long que la der ni re entr e du tableau des v nements car si ce n est pas le cas l analyse s arr te et le syst me revient aux conditions initiales avant que l ensemble des v nements aient pu tre effectu Le Stop Time peut tre r gl sur No Limit dans ce cas l utilisateur doit terminer manuellement l analyse M me si des Stop Time peuvent tre configur s pour tous les modules du syst me le Stop Time de la pompe sert de r
112. ode vierge DEF_LC M Pour modifier quelques param tres seulement vous pouvez acc der directe ment aux fen tres de configuration appropri es correspondant ces param t res Cependant les utilisateurs moins exp riment s peuvent trouver qu il est plus facile d utiliser la fonction Edit Entire Method car celle ci vous am ne auto matiquement de fen tre en fen tre Pour utiliser cette fonction cliquez sur le menu Method gt Edit Entire Method La bo te de dialogue Check Method Sections to Edit s affiche Edit Method Instrument Z Check Method Sections to E d Method Information E instument causition F Data Analysis FF Aun Time Checklist Cancel Figure 23 Choix des sections de m thode modifier Cette bo te de dialogue r sume les sections qui seront parcourues et permet de sauter certaines sections en les d cochant CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 113 114 Annexe En fonction des sections s lectionn es plusieurs crans seront affich s suc cessivement La section Method Information comprend un texte de description de la m t hode La section Instrument Acquisition comprend les param tres d injection les param tres de la pompe les param tres du four les param tres du d tecteur et les courbes de l instrument La section Data Analysis comprend les d tails de signal les param tres d int gration et les param tres de cr ation des rapports
113. oir Figure 19 page 60 IP 0 30 sec l Ao i al 80 Hz meva J w JA J lt rt agree IP 0 33 sec jia A ui IP 0 42 sec A Il te IN PN A S A J X N JA Aie IP 0 67 sec 10 Hz AA KAR D IP 1 24 sec 0 0 1 Figure 19 Largeur de pic par rapport la fr quence d acquisition UV Tableau 6 page 61 montre que la largeur de pic la r solution et la capacit de pic d pendent de la fr quence d acquisition Des fr quences d acquisition le v es sont n cessaires pour le CPL rapide et ultra rapide sinon la s paration obtenue sur la colonne est d truite dans le d tecteur 60 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 Tableau 6 Rapport entre la fr quence d acquisition et la performance chromatographique Fr quence d acquisition Largeur de pic R solution Capacit de pic 80 Hz 0 300 2 25 60 40 Hz 0 329 2 05 55 20 Hz 0 416 1 71 45 10 Hz 0 666 1 17 29 5 Hz 1 236 0 67 16 80 Hz de fr quence d acquisition par rapport 20 Hz de fr quence d acquisi tion entra ne des am liorations dans Largeur de pic 80 R solution 30 Capacit de pic 40 Efficacit de colonne apparente 70 Conditions chromatographiques Comme d j indiqu les conditions chromatographiques d pendent des com pos s analyser Mais ici aussi il existe des r gles empiriques
114. ompartiment colonnes peut tre utilis dans sa version standard pour les colonnes d un diam tre interne de 4 6 mm des d bits sup rieurs 2 mL min et des temp ratures sup rieures 60 C l effluent de la colonne doit tre refroidi la temp rature du d tecteur l aide du refroidisseur chauf fage 1 5 uL dans le compartiment colonnes Ceci garantit le niveau de bruit le plus bas avec les d tecteurs UV m me 5 mL min et 80 C voir Figure 18 page 58 Avec refroidissement post colonne Bruit cr te cr te 0 8289 mDO N S B pour cr te 4 482 Sans refroidissement post colonne Bruit cr te cr te 1 5905 mDO S B pour cr te 4 392 Refroidissement requis gt 2 ml min 0 2 0 4 0 6 0 8 1 min Figure 18 Influence du refroidissement post colonne PCC sur le bruit de ligne de base Si des colonnes d un diam tre int rieur de 2 1 mm sont utilis es des d bits faibles le petit chauffage doit tre utilis pour le plus faible volume extra colonne 58 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 Volume extra colonne Pour maintenir la haute r solution obtenue sur la colonne le volume extra colonne en particulier apr s la colonne doit tre aussi faible que possi ble Pour les colonnes d un diam tre interne de 4 6 mm la configuration de retard standard doit tre utilis e pour la pompe voir Figure
115. on 19 d tecteur parvenir une meilleure sensibilit 64 deux pistons en s rie 11 dimensions 23 donn es analyse 98 dur e de cycle configuration de l instrument 49 E chauffement par frottement 37 E ensemble de contr le 14 r E quation de van Deemter 29 valuation des donn es et contr le 25 E exactitude de la composition 25 F facteur de r tention 32 formation du gradient 24 fr quence secteur 23 G gamme de pH recommand e 24 145 Index gamme de pH 24 guide de d marrage rapide introduction 84 H humidit 23 Informations sur la m thode 114 115 injections chevauchantes 50 installation Lab Advisor 71 logiciel de commande 70 syst me de donn es 70 Instrument Acquisition 114 int gration au r seau 72 int gration 100 Internet 112 L le traitement des donn es 114 Liste de contr le de l ex cution 114 M m lange sous haute pression 11 m langeur 11 m thode injection unique 96 mise en place 94 modifier l ensemble de la m thode 113 par d faut 113 N Normes de s curit 23 146 0 obstructions de colonne emp cher 67 optimisation de la r solution compartiment colonnes 58 conditions chromatographiques 61 fr quence d acquisition 60 volume extra colonne 59 optimisation parvenir de plus hautes r solutions 55 parvenir de plus hautes sensibilit s 62 volumes d injection 47 optimisation conditions de HPLC 31 cuve circulation
116. ontrepression que les autres colonnes STM Les caract ristiques et avantages du Binary LC Agilent 1260 Infinity sont e Le volume de retard configurable jusqu 120 uL dans la pompe binaire 1260 Infinity associ une plage de d bit de 0 05 5 mL min des pres sions atteignant 600 bar fournit une application universelle des colonnes faible diam tre d i 2 1 mm jusqu un diam tre standard d i 4 6 mm r pondant aux besoins des CPL et CPL MS La configuration du volume de retard standard de la pompe binaire 1260 Infinity vous permet non seulement d ex cuter les m thodes UHPLC mais aussi les m thodes HPLC conventionnelles sans modifier les mod les chro matographiques e La conception de circulation de nouvelle g n ration de l chantillonneur automatique haute performance 1260 Infinity atteint la meilleure pr cision pour une large plage de volumes d injection de 0 1 100 uL sans modifier les boucles d chantillon Elle est con ue pour un d bit d chantillon lev un faible transfert et des cycles d injection rapides Une temp rature lev e jusqu 100 C sur certaines colonnes permet plus de s lectivit de flexibilit et r duit la viscosit du solvant afin de permet tre une s paration encore plus rapide Dans le compartiment colonne thermostat 1290 Infinity diff rents l ments de chauffage 1 6 uL et de refroidissement 1 5 uL pour un faible volume extra colonne peuvent tr
117. our une pres sion allant jusqu 600 bar Une vanne de s lection de solvant en option per met de r aliser des m langes binaires isocratiques ou gradients d un des deux solvants par voie L accessoire de rin age actif des joints en option est disponible pour une utilisation avec des solutions tampons concentr es Principe de fonctionnement La pompe binaire est une pompe deux voies deux pistons en s rie com portant toutes les fonctions essentielles d un syst me de distribution de sol vant Le dosage du solvant et son transfert du c t haute pression sont assur s par deux pompes qui peuvent g n rer une pression pouvant atteindre 600 bar Chaque voie comporte une pompe comprenant une commande de pompe une t te de pompe un clapet actif d entr e avec cartouche de remplacement et un clapet de sortie Les deux voies sont introduites dans une chambre de m lange de petit volume qui est reli e par un serpentin r ducteur capillaire un amor tisseur et un m langeur Un capteur de pression surveille la pression de la pompe Une vanne de purge avec fritt en PTFE int gr plac e la sortie de la pompe permet un amor age ais du syst me de pompage CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 11 1 Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit Composants du syst me Amortisseur Vanne de purge M langeur Sortie de la pompe 4 Capteur de pression vers nl
118. partiment solvants D gazeur Pompe Echantillonneur automatique Thermostat 2 Compartiment 3 colonne thermostat 4 D tecteur DAD 5 Figure 21 Connexions des capillaires et tubes dans le circuit configuration du volume de retard standard 74 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Composant 1 R f rence G1312 87303 G1312 87304 G1367 87304 01090 87306 G1316 87300 G1315 87311 5062 2462 5062 8535 Configuration et installation du syst me Description Capillaire ST 0 17 mm x 400 mm S S Pompe vers l chantillonneur automatique Capillaire ST 0 17 mm x 700 mm S S Pompe vers l chantillonneur automatique refroidi Capillaire ST 0 17 mm x 250 mm S S chantillonneur automatique au CCT Capillaire ST 0 17 mm x 380 nm S S chantillonneur automatique refroidi au CCT Capillaire ST 0 17 x 90 mm S S CCT la colonne Capillaire ST 0 17 mm x 380 mm S S Colonne au DAD Tube PTFE 0 8 mm x 2 m commande ult rieure 5 m DAD l vacuation Kit d accessoires pour l vacuation VWD l vacuation CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 4 75 4 Configuration et installation du syst me Installation des modules Connexions pour configuration de volume de retard moyen et faible Figure 22 page 76 montre les connexions des capillaires et tubes dans le cir cuit pour la configuration de volume de retard moyen et faible d
119. pectre complet au syst me de donn es la m me vitesse soit 80 Hz Il est important que les param tres des m thodes puissent tre enregistr s pour les laboratoires r glement s Le DAD 1260 Infinity enregistre non seule ment les points de consigne de l instrument mais est galement dot d tiquet tes RFID tiquettes d identification par radiofr quence int gr es la lampe et la cartouche de la cuve circulation pour que l identit et les caract risti ques de ces composants importants soient galement enregistr es par le syst me CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit 1 Vannes remplacement rapide 1200 Infinity Les vannes remplacement rapide Agilent 1200 Infinity prennent en charge diff rentes applications de vannes difficiles Chaque t te de vanne est fournie sous la forme d un kit complet contenant tous les capillaires n cessaires des changeurs de temp rature faible dispersion suppl mentaires et d autres pi ces Voici quelques applications typiques de vannes remplacement rapide S lection de deux colonnes Enrichissement de l chantillon e Rin age de l chantillon Alterner la r g n ration des colonnes Applications sp ciales comme le d veloppement de m thode ou 2D LC Pour des descriptions d taill es de ces applications veuillez consulter le mode d emploi des solutions de vanne CPL binaire 12
120. pen dant l analyse de la deuxi me colonne Ceci r duit consid rablement la dur e du cycle CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 49 3 50 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity L utilisation de deux colonnes deux pompes et une vanne 2 positions 10 voies permet de commuter entre ces colonnes pour les dur es de cycle les plus cour tes d une injection l autre G n ralement les colonnes de chimie et de lot identiques fournissent une pr cision du temps de r tention qui permet de trai ter les donn es avec le m me tableau d talonnage Veuillez consulter le mode d emploi des solutions de vanne pour une descrip tion plus d taill e de l alternance de la r g n ration des colonnes R duction automatique du volume de retard ADVR L chantillonneur automatique haute performance Agilent 1260 Infinity per met de r aliser des injections chevauchantes OI et ou une r duction automa tique du volume de retard ADVR Cela signifie que le clapet d injection est commut hors du circuit quand l chantillon a atteint le sommet de la colonne Ceci r duit consid rablement le volume de retard voir Figure 17 page 50 DADI A Sig 245 10 Ref 360 80 E CHEM32 1 DATA NODAMPNOMIX100X21 30000009 D DADI A Sig 245 10 Ref 360 80 E CHEM32 1 DATA NODAMPNOMIX100X21 30000005 D DADI A Sig 245 10 Ref 360 80 E CHEM32 1 DATA WMIXANDDAM PADVRX21 ADVR30000005 D DADI A Sig 245 10 Ref 360 80
121. physiques de la colonne HPLC telles que la taille des particules le dia m tre des pores la morphologie des particules la longueur et le diam tre de la colonne la vitesse du solvant et la temp rature De surcro t la thermodynami que d une s paration chromatographique peut tre prise en compte afin de modifier les propri t s du solut et des phases mobile et stationnaire pour centage de solvant organique force ionique pH pour obtenir le temps de r tention le plus court possible et la s lectivit la plus lev e Adsorption ou d sorption lente Isothermes non lin aires Equilibre chimique pH Pression Taille des particules porosit Propri t s des phases mobile et dimensions de la colonne d bit stationnaire propri t s du solut temp rature temp rature Figure 8 S lection des conditions de HPLC optimales CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 31 2 32 Introduction La r solution peut tre d crite d pendant de trois param tres e l efficacit ou les plateaux th oriques N de la colonne e la s lectivit a e le facteur de r tention k D apr s l quation de la r solution Figure 9 page 32 la s lectivit est le para m tre ayant l influence la plus forte sur la r solution Figure 10 page 32 Cela signifie qu il est indispensable de choisir des propri t s de phase mobile et de phase stationnaire ainsi qu une temp rature ad quates pour r ussir la
122. possible elle est g n ralement plus rapide des temp ratures plus lev es En cas de doute veuillez consulter la documentation technique sur la compatibilit chimique des mat riaux PEEK Le PEEK poly ther ther k tone associe d excellentes propri t s relatives la r sistance chimique la stabilit m canique et thermique Il est stable dans une plage de pH de 1 12 5 et inerte dans de nombreux solvants courants Il existe plusieurs incompatibilit s connues avec les produits chimiques tels que le chloroforme le chlorure de m thyl ne le t trahydrofurane le dim thylsul foxyde gt 1 les acides forts acide nitrique gt 10 acide sulfurique gt 10 acide trichloroac tique acides sulfoniques les halog nes ou solutions halog nes aqueuses le ph nol et ses d riv s cr sols acide salicylique etc Lorsqu il est utilis au dessus de la temp rature ambiante le PEEK est sensi ble aux bases et divers solvants organiques ce qui peut le faire gonfler Polyimide Agilent utilise un polyimide semi cristallin pour les joints de rotor dans les clapets et les si ges d aiguilles dans les chantillonneurs automatiques L un des fournisseurs de polyimide est DuPont dont la marque de polyimide est Vespel galement utilis par Agilent Le polyimide est stable dans une plage de pH entre 1 et 10 et dans la plupart des solvants organiques Il est incompatible avec les acides min raux concen tr s par
123. protection cr e un risque d lectro cution pouvant entra ner des blessures graves Si l int grit de cette protection devient suspecte l instrument doit tre mis hors service et son utilisation doit tre interdite Assurez vous que les fusibles sont remplac s uniquement par des fusibles courant nominal sp cifi et de type sp cifi fusion normale temporis s etc N utilisez pas de fusibles r par s et ne court circuitez pas les porte fusibles Certains des r glages d crits dans le manuel sont effectu s sur un instrument sous tension dont les capots de protection ont t retir s Les potentiels pr sents en de nombreux points peuvent en cas de contact causer des blessures Il convient d viter dans la mesure du possible d effectuer des op rations de r glage de maintenance et de r paration sur un instrument ouvert sous ten sion Si c est in vitable ces op rations doivent tre effectu es par une per sonne qualifi e et consciente du danger Ne tentez pas d effectuer une op ration de maintenance interne ou un r glage sans la pr sence d une autre personne capable de donner les premiers secours et d assurer une r anima tion Ne remplacez pas les composants lorsque le c ble d alimentation est branch N utilisez pas l instrument en pr sence de gaz ou fum es inflammables Dans un tel environnement le fonctionnement de tout instrument lectrique repr sente un danger certain N effectuez pas
124. que 42 description 40 exemple 40 volume de retard 25 40 volume extra colonne description 41 volume suppl mentaire de la colonne 40 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Index 147 www agilent com Contenu de ce manuel Ce manuel contient des informations propos du syst me CPL binaire Agilent Infinity 1260 Il aborde les points suivants description du produit introduction sp cifications optimisation du syst me configuration et installation du syst me guide de d marrage rapide Agilent Technologies 2006 2008 2011 2013 Printed in Germany 02 2013 G1312 93303 a Agilent Technologies
125. quez sur la zone Parameter pour afficher le champ de saisie de la valeur Si les entr es du tableau ne sont pas saisies par ordre chronologique elles sont tri es automatiquement en fonction du temps Les lignes du tableau des v nements peuvent tre modifi es directement et les boutons Cut Paste et Remove peuvent tre utili s s pour ajouter et supprimer des lignes Plusieurs lignes peuvent tre ajou t es pour cr er une s rie de segments de gradient lin aires et d finir le profil de gradient souhait Pour configurer un gradient simple effacez d abord tout le contenu du tableau l aide du bouton Clear all si celui ci contient des entr es puis ajoutez une ligne et entrez le temps et la composi CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 tion du solvant requis Si vous souhaitez utiliser un gradient par paliers effectuez deux entr es avec les param tres avant palier et apr s palier s par s par 0 01 min Ce type de gradient est souvent utilis pour luer rapidement des pics r tention longue de la colonne vers la fin de l analyse en augmentant le solvant plus fort et ou le d bit l aide d un palier Par exemple le de B peut tre augment de 75 95 Il n est pas n cessaire d entrer les valeurs des param tres pour le temps 0 00 min dans le tableau des v nements ces valeurs sont r cup r es des autres points de consigne de l cran Toutefois certains utilisateurs aime
126. ration de volume de retard stan dard voir Figure 13 page 43 pour les colonnes d un diam tre interne de 4 6 mm et de 3 0 mm Pour les colonnes d un diam tre interne de 2 1 mm la configuration de volume de retard faible doit tre utilis e De plus avec des colonnes d un diam tre interne de 2 1 mm le kit dispersion faible doit tre install afin de fournir le plus faible volume extra colonne Pour la sensibilit UV la plus lev e il est galement recommand d utiliser le m langeur court M langeur faible volume 200 uL 5067 1565 Les conditions chromatographiques d pendent fortement des compos s ana lyser mais certaines r gles empiriques peuvent tre utilis es pour des dur es d analyse courtes e Les d bits doivent tre aussi lev s que possible en fonction de la r solut ion requise de la contrepression et du syst me de d tection utilis e De forts gradients doivent tre utilis s e Des temp ratures de colonne lev es sont recommand es afin de pouvoir utiliser des d bits lev s et de r duire encore davantage le temps d analyse Les colonnes Zorbax SB peuvent tre utilis es jusqu 90 C un pH faible Alterner la r g n ration des colonnes Des dur es de cycle encore plus courtes sont possibles en utilisant une vanne de r g n ration des colonnes avec une pompe de r g n ration Avec cette configuration la r g n ration de la colonne utilis e pr c demment a lieu
127. re ind pendante ou associ es en activant le bouton radio Combined Lorsque combin es les valeurs entr es pour le c t gauche s appliquent aux deux c t s cela est n cessairement le cas si la longueur de la colonne d passe 15 cm et que celle ci doit tre fix e des deux c t s du compartiment Les deux c t s peuvent fonctionner ind pendamment lorsque deux colonnes sont utilis es des temp ratures diff rentes ceci peut tre mise en uvre lorsqu une vanne de d inversion entre colonnes a t install e pour basculer le flux d une colonne l autre Un autre cas de figure o les zones de tem p rature s par es sont utiles se pr sente lorsque d un c t la colonne est utilis e une temp rature lev e p ex au dessus de 60 C et de l autre c t l changeur de chaleur est utilis pour refroidir l luant avant que celui ci p n tre dans le d tecteur r duisant ainsi le bruit de fond d des CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 125 126 Annexe effets thermiques dans la cuve circulation La s lection de l option As Detector Cell permet de r gler automatiquement la valeur de la temp rature sur celle d finie pour la cuve du d tecteur La temp rature de chaque zone peut tre r gl e sur une valeur comprise entre 5 C et 100 C l utilisateur doit v rifier que la colonne convient une utilisation cette temp rature Les phases solides Agilent ZORBAX RRHT StableBond p
128. re 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit 1 chantillonneur automatique haute performance 1260 Infinity G1367E Caract ristiques L chantillonneur automatique haute performance 1260 Infinity poss de une plus grande plage de pression jusqu 600 bar permettant l utilisation de la technologie de colonne actuelle colonnes de petit diam tre sub 2 microni ques avec le Binary LC Agilent 1260 Infinity Une meilleure solidit est obte nue avec de nouvelles pi ces optimis es une haute vitesse avec le plus bas primage par le flux gr ce la conception une plus grande vitesse d injection d chantillon pour un haut d bit d chantillon une meilleure productivit l aide du mode d injection chevauchant et une manipulation pratique de l chantillon avec diff rents types de conteneurs d chantillons tels que des flacons et des plaques puits L utilisation de plaques 384 puits vous permet de traiter jusqu 768 chantillons sans surveillance Principe de l chantillonneur automatique Au cours de la s quence d chantillonnage les mouvements des composants de l chantillonneur automatique sont suivis en permanence par le processeur de l chantillonneur automatique Pour chaque d placement le processeur d finit des laps de temps et des plages m caniques sp cifiques Si une tape de la s quence d chantillonnage ne s effectue pas de mani re satisfai
129. s par ation ETT Figure 9 quation de r solution R f ct 4 3 f N 2 f k 1 20000 40000 60000 80000 N 1 05 1 10 1 15 1 20 Q 5 10 15 20 k Figure 10 Effet du nombre de plateaux du facteur de s paration et du facteur de r tention sur R CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Introduction 2 Que la m thode de s paration UHPLC soit nouvelle ou simplement transf r e partir d un protocole conventionnel existant il est clair qu il est n cessaire de disposer d une gamme tendue de phases stationnaires aux propri t s dif f rentes avec de nombreux formats de colonne Agilent propose plus de 140 colonnes ZORBAX 1 8 um r solution rapide et haut d bit RRHT 14 niveaux de s lectivit longueur de 15 150 mm et dia m tres internes de 2 1 3 0 et 4 6 mm En plus des colonnes ZORBAX des colonnes PoroShell avec neuf niveaux de s lectivit sont disponibles pour une utilisation avec le Binary LC Agilent 1260 Infinity Cela permet de s lectionner la phase stationnaire optimale pour atteindre une s lectivit maximale La r solution le d bit et la dur e d analyse peuvent tre optimis s en choisissant une longueur et un diam tre de colonne appropri s rendant l utilisation des colonnes STM encore plus facile qu avant Les colonnes PoroShell sont des colonnes particules superficiellement poreuses SPP Contrairement aux colonnes en silice totalement poreuse ces colonnes SPP ont u
130. s HE Pistons T te de pompe A T te de pompe B Figure 2 Circuit hydraulique de la pompe binaire SL avec amortisseur et m langeur d connect s CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 13 1 14 Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit D gazeur haute performance 1260 Infinity G4225A Le d gazeur haute performance Agilent 1260 Infinity mod le G4225A est compos de quatre chambres vide s par es avec des tuyaux semi perm a bles une pompe vide et un ensemble de contr le Quand le d gazeur vide est allum l ensemble de contr le active la pompe vide qui g n re une basse pression dans les chambres vide La pression est mesur e par un capteur de pression Le d gazeur vide maintient la basse pression l aide d une fuite contr l e dans le filtre d entr e d air et une r gulation de la pompe vide l aide du capteur de pression La pompe CPL pr l ve les solvants de leurs bouteilles travers les tuyaux semi perm ables des chambres vide Quand les solvants passent travers les chambres vide tout gaz dissout dans les solvants p n tre travers les tuyaux dans les chambres vide Les solvants sont d gaz s lorsqu ils quittent les sorties du d gazeur vide Circuit Capteur de contr le 4 chambres vide s par es Solvant R cipient vide Figure Vue d ensemble seule une des quatre voies de solvant est montr e CPL binai
131. s pouvez utiliser la Cuve de type cartouche Max Light 60 mm V s 4 0 uL G4212 60007 Cette cuve am liore le d tecteur en abai issant la limite de d tection LOD par un facteur d environ 3 en fonction de l application Dispersion ultra faible La cuve dispersion ultra faible de type cartouche Max Light peut tre utilis e avec le DAD G4212A et le GDAD 4212B Cette cuve est n cessaire la solution du kit de dispersion ultra faible qui existe actuellement comme Kit 1290 Infi nity dispersion ultra faible 5067 5189 Elle doit faire partie de la solution de dispersion ultra faible Plage dynamique lev e La cuve de type cartouche Max Light plage dynamique lev e peut tre utili s e avec le DAD G4212A et le GDAD 4212B Cette cuve est n cessaire la solu tion de plage dynamique lev e HDR qui sera lanc e en mars avril 2013 Pour prot ger la cuve circulation contre la surpression p ex dans les syst mes avec CPL MS installez Kit de soupapes de surpression en ligne G4212 68001 voir le manuel D tecteurs barrette de diodes Agilent Infinity s rie 1200 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 Comment emp cher les obstructions de colonne Les colonnes remplies de particules sub 2 microniques n cessitent en plus des fritt s avec des pores de faible diam tre pour emp cher le mat riau de rem plissage d tre entra
132. sante un message d erreur le signale Pendant la s quence d chantillonnage la vanne d injection court circuite l chantillonneur automatique L aiguille se place dans la position d chantillon souhait e et descend dans le liquide de l chant illon pour permettre au dispositif doseur d aspirer le volume souhait en recu lant le piston d une certaine distance L aiguille est ensuite relev e et d plac e dans le si ge pour fermer la boucle d chantillonnage L chantillon est inject dans la colonne quand la vanne d injection revient en position de voie princi pale la fin de la s quence d chantillonnage La s quence d chantillonnage standard s effectue comme suit 1 La vanne d injection se met en position de d rivation 2 Le piston du dispositif doseur se met en position d initialisation 3 Le blocage de l aiguille monte 4 L aiguille se d place dans la position de flacon d chantillon ou plaque puits souhait e CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 15 1 16 Le Binary LC Agilent 1260 Infinity Description du produit L aiguille descend dans le flacon d chantillon ou la plaque puits Le dispositif doseur pr l ve le volume d chantillon d fini L aiguille remonte hors du flacon d chantillon ou la plaque puits oOo M oO a L aiguille est ensuite d plac e dans le si ge pour fermer la boucle d chan tillonnage 9 Le blocage de l aiguille descend 10 Le cycl
133. strument Acquisition Configuration de la m thode de l instrument Vous pouvez acc der directement l cran Setup Method en utilisant le menu Instrument gt Setup Instrument Method ou en effectuant un clic droit sur toute ic ne de module de l interface utilisateur et en s lectionnant Method dans le menu contextuel La prochaine tape de la fonction Edit Entire Method est l cran Setup Method qui comprend six onglets pour les diff rents modules et fonctions Les onglets sont chantillonneur automatique haute performance HiP ALS HiP ALS Injector Program _ Pompe binaire BinPump Compartiment colonne thermostat TCC _ D tecteur barrette de diodes DAD _ Instrument Curves Pour changer d onglet cliquez sur le nom de l onglet en haut de l cran Lors que vous changez des param tres vous pouvez transmettre chaque modifica tion l instrument imm diatement en cliquant sur Apply Sinon si vous pouvez cliquer sur 0K une fois que vous avez termin de modifier tous les onglets pour transmettre tous les param tres modifi s aux modules fermer l cran et pas ser l tape suivante Les onglets de saisie des param tres sont d aspect similaire dans tous les logi ciels de commande ChemStation EZChrom MassHunter etc gr ce l utili sation par Agilent de pilotes RC Net communs pour les modules de l instrument Pour ex cuter l exemple de s paration comme pour la plupart des m thod
134. t com Les r sultats sont pr sent s sous forme de graphique et de tableau Des dur es d analyse plus courtes permettent galement d obtenir des plus r ponses plus rapides Ceci est important lors du contr le du processus et des analyses de lib ration rapide Au lieux d attendre des heures pour lib rer un lot unique de m dicament toutes les analyses concernant l ad quation du sys CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Introduction 2 t me l talonnage et l chantillon peuvent tre effectu es en moins d une heure Des r ponses rapides sont importantes galement pour les chercheurs en chimie de synth se utilisant des syst mes CPL MS en libre acc s pour vali der l identit de leurs compos s et contr ler leurs r actions Des dur es d ana lyse plus courtes permettent aussi d acc l rer de fa on significative le processus de d veloppement des m thodes Longueur Efficacit Efficacit Efficacit R duction de la colonne de la colonne dela colonne de la colonne de la dur e mm N 5 um 3 5 um N 1 8 um de l analyse 150 12 500 21 000 35 000 100 8 500 14 000 23 250 Efficacit N Dur e 33 d analyse 75 6000 10 500 17 500 50 Pression 50 4 200 7 000 12 000 Volume 67 de pic 0 S 0 200 6 500 Utilisation 80 de solvant Figure 11 Relation entre la taille des particules l efficacit et la dur e d analyse Le temps d analyse peut tre r duit sans sacrifier l efficacit de la colonne
135. tant si le solvant d injection est plus fort plus luotrope que la phase mobile de d marrage et toute augmentation affectera la s paration en particulier pour les pics des premi res analyses faible facteur de r tention Dans certains cas c est la cause de distorsion du pic et la r gle g n rale consiste conserver le solvant d injection similaire ou plus faible que la composition du gradient de d marrage Ceci a une cons quence pour savoir si ou de combien on peut augmenter le volume d injection et l utilisateur devra contr ler la pr sence de signes d augmentation de la dis persion des pics plus larges ou plus d form s et une r duction de la r solut ion du pic en essayant d augmenter le volume d injection Si une injection est r alis e dans un solvant faible on pourra alors probablement augmenter le volume parce que l effet sera de concentrer l analyte au sommet de la colonne au d marrage du gradient Inversement si l injection est r alis e dans un sol vant plus fort que celui de la phase mobile de d marrage l augmentation du volume d injection s tendra alors sur la bande de l analyte dans le bas de la colonne et l cart du gradient r sultant en une dispersion du pic et une perte de r solution CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 47 3 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity Le principal l ment prendre en compte pour la d termination du volume d injection
136. tant sur la r solution est la s lectivit a et en pratique le fait de varier ce terme implique de changer le type de phase sta tionnaire C18 C8 ph nyle nitrile etc la phase mobile et la temp rature pour maximiser les diff rences de s lectivit entre les solut s s parer Ceci est un travail long qu il est pr f rable d effectuer avec un syst me de d velop pement de m thode automatique permettant d valuer une large gamme de conditions sur diff rentes colonnes et phases mobiles dans un protocole de recherche ordonn Cette section indique comment obtenir une meilleure r s olution avec toutes les phases stationnaires et mobiles choisies Si un syst me CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 55 3 56 Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity de d veloppement de m thode automatique a t utilis pour d terminer les phases il est probable que des colonnes courtes aient t utilis es pour une analyse rapide de chaque tape de la recherche L quation de r solution montre que le prochain terme le plus important est le nombre de plaques ou l efficacit N et ceci peut tre optimis de nombreuses mani res N est inversement proportionnel la taille de particule et directe ment proportionnel la longueur d une colonne ainsi une taille de particule plus petite et une colonne plus longue donneront un num ro de plaque plus lev La pression augmente l inverse du carr de
137. te garantie march ande et aptitude un but particulier En aucun cas Agilent ne peut tre tenu responsable des ventuelles erreurs contenues dans ce document ni des dommages directs ou indirects pouvant d couler des informations contenues dans ce document de la fourniture de l usage ou de la qualit de ce document Si Agilent et l utilisa teur ont souscrit un contrat crit dis tinct dont les conditions de garantie relatives au produit couvert par ce document entrent en conflit avec les pr sentes conditions les conditions de garantie du contrat distinct se sub stituent aux conditions stipul es dans le pr sent document Licences technologiques Le mat riel et le logiciel d crits dans ce document sont prot g s par un accord de licence et leur utilisation ou reproduction sont soumises aux termes et conditions de ladite licence Mentions de s curit ATTENTION Une mention ATTENTION signale un danger Si la proc dure le pro c d ou les consignes ne sont pas ex cut s correctement le produit risque d tre endommag ou les donn es d tre perdues En pr sence d une mention ATTENTION vous devez conti nuer votre op ration uniquement si vous avez totalement assimil et respect les conditions men tionn es AVERTISSEMENT Une mention AVERTISSEMENT signale un danger Si la proc dure le proc d ou les consi gnes ne sont pas ex cut s correctement les personnes ris quent de s exposer
138. toutes les longueurs d onde c d tous les points du spectre sont stabilis s sur z ro le signal de la ligne de base est donc galement r gl sur z ro L option Prerun est s lectionn e pour stabiliser avant le d but de l analyse il s agit du choix habituel dans des situations normales Parfois l option Postrun peut tre s lectionn e pour quilibrer la fin de l analyse apr s coulement du Temps postanalyse Par exemple si le signal pr sente toujours une d r ive n gative et que l utilisateur souhaite finir l analyse avec une absorbance sur z ro cette option permet de ramener l absorbance sur le niveau z ro pour l analyse suivante Cela ne modifie pas r trospectivement l analyse la fin de laquelle la stabilisation est ex cut e _ Advanced Lamps on required for acquisition le DAD 1260 Infinity dispose d une lampe UV qui doit tre allum e pour l analyse cette case doit donc tre coch e 130 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Onglet Instrument Curves setup Method K HiP ALS L HiP ALS Injector Program BinPump g TCC 47 DAD 2X Instrument Curves BinPump v Pressure bar Flow ml min lt s Solvent Ratio A Solvent Ratio B lt TCC Left Temperature C _ Right Temperature C DAD Board Temperature C C Optical Unit Temperature C C UV Lamp Anode Voltage V C
139. tretien et de r paration de cet ins trument Le non respect de ces consignes ou des avertissements sp cifiques nonc s ailleurs dans ce manuel est en violation des normes de s curit appli cables la conception la fabrication et l usage pr vu de l instrument Agi lent Technologies ne peut tre tenu responsable du non respect de ces exigences par le client V rifiez la bonne utilisation des quipements La protection fournie par l quipement peut tre alt r e gt Il est recommand l op rateur de cet instrument de l utiliser conform ment aux indications du pr sent manuel Normes de s curit Cet instrument est un instrument de classe de s curit I comportant une borne de mise la terre et a t fabriqu et contr l conform ment aux nor mes de s curit internationales Fonctionnement 104 Avant de brancher l alimentation lectrique effectuez chaque tape de la pro c dure d installation Par ailleurs vous devez respecter les consignes suivan tes Ne retirez pas les capots de l instrument pendant son fonctionnement Avant la mise sous tension de l instrument toutes les bornes de mise la terre ral longes lectriques transformateurs et dispositifs qui y sont raccord s doivent tre reli s une terre de protection par le biais d une prise de masse Toute CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 interruption de la connexion la terre de
140. u flacon donc un d calage n gatif permet de pr lever l chantillon plus pr s du fond du flacon Par exemple un d calage de 7 mm positionne l extr mit de l aiguille 3 mm au dessus du fond du flacon Equilibration time indique l intervalle de temps entre l aspiration de l chantillon et le d placement de l aiguille Sample flush out factor correspond au temps d attente de l chantillonn eur automatique apr s l injection et avant de permettre la valve de revenir la position de d rivation Cela garantit que l chantillon a t vacu de l aiguille du si ge et de la vanne d injection La valeur par d f aut est 5 Vial Well bottom sensing repr sente une alternative l utilisation du d calage de la position d aspiration L aiguille se d place lentement jusqu toucher le fond du flacon ou du puits puis remonte de 1 mm Il s agit d un moyen ing nieux de s assurer que l aiguille est proche du fond du flacon mais par cons quent l injection est l g rement plus longue Cette option ne doit pas tre utilis e s il existe des particules au fond du flacon qui pourraient obstruer l aiguille CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 _ Advanced High Throughput Automatic delay volume reduction ADVR bascule la vanne d injection de la voie principale vers la voie de d rivation apr s l injection et qu un volume d fini par le facteur de rin age de l chantillon ait t pomp
141. u Binary LC 1260 Infinity Compartiment solvants D gazeur Pompe chantillonneur automatique 2 Thermostat 3 Compartiment colonne thermostat 5 D tecteur DAD 6 Figure 22 Connexions des capillaires et tubes dans le circuit configuration du volume de retard moyen et faible 76 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Composant 1 R f rence G1312 87303 G1312 87304 G1313 87304 01090 87610 G1316 80002 G1316 80003 01090 87611 G1315 87312 5062 2462 Configuration et installation du syst me 4 Description Capillaire ST 0 17 mm x 400 mm S S Pompe vers l chantillonneur automatique Capillaire ST 0 17 mm x 700 mm S S Pompe vers l chantillonneur automatique refroidi Capillaire ST 0 12 mm x 180 mm S S chantillonneur automatique au CCT Capillaire ST 0 12 mm x 280 mm S S chantillonneur automatique refroidi au CCT ou l l ment 3 si install El ment de chauffage long dessus 0 12 mm de d i 1 6 uL de volume interne El ment de chauffage long dessous 0 12 mm de d i 1 6 uL de volume interne Capillaire ST 0 12 mm x 105 mm S S CCT colonne inutile si l l ment 3 est install Capillaire ST 0 12 mm x 150 mm S S Colonne au DAD Tube PTFE 0 8 mm x 2 m commande ult rieure 5 m DAD l vacuation CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 77 4 Configuration et installation du syst me
142. ue PDF file name Coch Dans l onglet Quantitation settings e Calculation mode Calculate Pourcentages Based on Aire Cliquez sur OK pour quitter et ouvrir l cran suivant du processus Modifier l ensemble de la m thode CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 6 137 138 Annexe Configuration d une m thode l aide de la fonction Modifier l ensemble de la m thode Courbes de l instrument Instrument Curves Instrument z Select curves to overlay Instrument Data Curves Figure 34 cran Courbes de l instrument Les cases cocher Instrument Curves permettent de superposer ces param tres enregistr s sous la forme d un graphique sur le chromatogramme CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 Liste de contr le de l ex cution Vous pouvez acc dez directement la Run Time Checklist par l interm diaire du menu Method gt Run Time Checklist ou en cliquant sur l ic ne Run Time Checklist en haut droite de l cran R n aime Checklist Instrument z Check Method Sections to Run mi Data Acquisition M Standard Data Analysis C Customized Data Analysis Macro C Save GLP Data C Post Bun Command Macro C Save Method with Data Figure 35 cran Liste de contr le de l ex cution La Run Time Checklist permet de choisir si la m thode doit effectuer la fois l acquisition de donn es et l analyse des donn es Elle permet galement d incorporer des
143. uence Folder Creation soit d sactiv e dans ce cas de figure les m thodes ne sont pas enregistr es syst matiquement dans le fichier de donn es Puisque cet cran est le dernier du processus en cliquant sur 0K vous quitte rez en m me temps la Run Time Checklist et le processus Edit Entire Method Vous devez maintenant enregistrer la m thode dans le r pertoire principal des m t hodes par d faut C Chem32 1 Methods l aide du menu File gt Save As gt Method ou du menu Method Menu gt Save Method As CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Glossaire d IU 1 1260 Infinity Autosampler chantillonneur automatique 1260 Infi nity 1260 Infinity Binary Pump Pompe binaire 1260 Infinity 1260 Infinity DAD DAD 1260 Infinity 1290 Infinity TCC TCC 1290 Infinity A Add Ajouter Add Chromatogram Output Ajouter sortie de chromatogramme Add to Method Ajouter la m thode Adjust Ajuster Advanced Avanc Advanced Analog Output Avanc Sortie analogique Advanced Autobalance Avanc Stabilisation automatique Advanced Auxiliary Avanc Param tres suppl mentaires Advanced High Throughput Avanc Haut d bit Advanced Lamps on required for acquisi tion Avanc Lampes allum es requise pour l acquisition Advanced Margin for Negative Absor bance Avanc Marge pour absorbance n gative Advanced Spectrum Avanc Spectre All Tous All in Peak Tout dans l
144. up rieur que pour les particules plus grandes et assez plate quand le d bit augmente G n ralement pr s de la valeur optimale les d bits des colonnes STM sont 2 ml min pour un diam tre int rieur de 4 6 mm et 0 4 ml min pour un diam tre int rieur de 2 1 mm Dans les s parations isocratiques l augmentation du facteur de r tention k donne une meilleure r solution car le solut est conserv plus longtemps Dans les s parations du gradient la r tention est d crite par k dans l quat ion suivante CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Optimisation du Binary LC Agilent 1260 Infinity 3 fe F 100 A B V S m ou k valeur k moyenne tg longueur de temps du gradient ou segment du gradient min F d bit mL min VnF volume de retard de colonne e A B changement de fraction du solvant B pendant le gradient e S constant env 4 5 pour les petites mol cules Ceci montre que k et donc la r solution peuvent tre augment s l aide d un gradient plus faible un changement de 2 5 min est une ligne directrice un d bit plus lev et une colonne de plus petit volume Cette quation montre aussi comment acc l rer un gradient existant si le flux est doubl mais le temps de gradient est divis par deux k reste constant et la s paration a l air semblable mais se produit dans la moiti du temps Toute diminution du volume extra colonne r duit la d
145. us 3 R glez la Baseline Correction sur Advanced pour les analyses gradient R glez la Slope Sensitivity sur 5 Une valeur sup rieure int gre les pics pente plus forte en ignorant les pics pente moins lev e 5 R glez la Peak Width sur la valeur du pic d int r t le plus troit soit environ 0 02 dans cet exemple 6 Les param tres Area Reject et Height Reject peuvent tre r gl s pour rejeter les pics plus petits 7 Cliquez sur l ic ne sl Integrate pour actualiser les r sultats en utilisant ces nouveaux param tres 8 Quittez le tableau d Integration Events l aide de l ic ne verte en forme de coche B 100 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Guide de d marrage rapide 5 Traitement des donn es D finition du rapport 1 Dans la barre de menus cliquez sur Report gt Specify Report pour afficher la fen tre illustr e dans la figure ci dessous Specify Report Instrument 1 Quantitation settings Report mode O Use Intelligent Reporting Use Classic Reporting Style Chromatogram output Report style Short PES n x Quantitative result sorted by Signal Portat of pages Time 100 C Sample info on each page 7 Add fraction table and ticks Add chromatogram output Add summed peaks table O Landscape Add sample custom fields to sample info Add compound custom fields Response o O Multi page Landscape Report
146. ve down Figure 26 cran de configuration de m thode onglet Programme d injection de l chantillonneur automatique HiP Cet onglet permet de cr er des programmes d injection sp cifiques compre nant la manipulation d aliquots partir de flacons multiples comme par exemple lors de la d rivatisation pr colonne Des r actifs chimiques sont alors m lang s automatiquement avec l chantillon pour am liorer sa d tect ion ou la sensibilit Un exemple courant est la d rivatisation d acides amin s avec les r actifs OPA et FMOC Pour de plus amples informations consultez le manuel de l chantillonneur automatique haute performance Agilent 1260 Infinity 120 CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me Annexe 6 Configuration d une m thode l aide de la fonction Modifier l ensemble de la m thode Onglet Pompe binaire jO Sampler LT Sampler Injector Program Ca Column Comp v DaD FX Instrument Curves Hi Flow Advanced Timetable empty 0 000 mL min function centric v Solvents r z Time min A Z B I Pa ninl ea ps K ooo LE X 000 100 00 0 000 400 00 B 1 0 H2 v Pressure Limits Min 0 00 bar Max 40000 bar Stoptime Posttime As Injector No Limit ot 1 00 min O 00 min Add Remove Cleaat ClearEmpty Cut Copy Paste ShitTimes min K E IT Show timetable graph Ok Apply Cancel Help Figure 27 cr
147. x analytiques d finis dans les param tres du d tecteur et des param t res enregistr s tels que la temp rature le d bit la composition la pression et les trac s diagnostiques S lectionnez un signal et cliquez sur Add to Method pour l envoyer vers le tableau Signal Details affich dans la partie inf rieure de l cran Vous pouvez s lectionner un plusieurs ou tous les signaux acquis par le d tecteur Si aucun signal n est s lectionn le tableau est vide dans ce cas de figure le logiciel ChemStation traite par d faut tous les signaux acquis par le d tecteur Parfois l utilisateur modifie une m thode existante pour cr er une nouvelle m thode et se trouve confront une erreur de Parameter Mismatch lorsqu il essaie de lancer la m thode L origine de cette erreur vient d un signal d fini dans Signal Details par exemple 250 nm avec une largeur de bande de 8 nm alors que dans la nouvelle m thode ces valeurs ont t r gl es sur 254 nm 12 nm par exemple Le tableau Signal Details contient toujours les informations initiales et le syst me cherche traiter un signal qui n est plus acquis Pour corriger cette erreur il suffit de s lectionner l ancien signal dans le tableau et de le supprimer l aide du bouton Delete Row Si plusieurs d tecteurs sont utilis s sur un m me syst me comme par exem ple un d tecteur barrette de diodes et un spectrom tre de masse les lignes Signal Description permettent d entrer
148. xydes CPL binaire 1260 Infinity Mode d emploi du syst me 109 110 Annexe e Des solutions d acides organiques acide ac tique acide formique etc dans des solvants organiques Par exemple une solution d acide ac tique 1 dans le m thanol peut attaquer l acier e Les solutions contenant des agents complexants forts par exemple l acide thyl nediaminot traac tique EDTA e Les m langes de t trachlorure de carbone avec l isopropanol ou le THF Carbone amorphe DLC Le carbone amorphe est inerte la plupart des acides bases et solvants cou rants Il n existe aucune incompatibilit document e pour les applications CPL Silice fondu et quartz SiO Le silice fondu est utilis dans les cuves circulation et capillaires 1290 Infi nity Le quartz est utilis pour les fen tres de cuves circulation classiques Il est inerte tous les solvants et acides courants l exception de l acide hydro fluorique et des solvants acides contenant des fluorides Il est corrod par des bases fortes et ne doit pas tre utilis un pH sup rieur 12 temp rature ambiante La corrosion des fen tres de cuve circulation peut avoir un effet n gatif sur les r sultats de mesure Pour un pH sup rieur 12 l utilisation de cuves circulation avec des fen tres en saphir est recommand e Or L or est inerte tous les solvants CPL courants les acides et les bases dans la plage de pH sp cifi e Il p

Agilent 1260 Infinity Binary LC

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