N Látex Cystatin C - Diagnóstica São Paulo
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1. Os valores indicados para as caracter sticas de performance da determina o representam resultados t picos e n o devem ser considerados como especifica o para o kit N L tex Cystatin C Bibliografia V Folheto Informativo em ingl s BN uma marca da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA BN ProSpec uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA na Alemanha e noutros pa ses Diagn stica S o Paulo Produtos e Equipamentos para Laborat rios Ltda Av Indian polis 3213 1 andar Telefax 5581 0157 Site www diagnosticasp com br Email diagnosticasp Osti com br2. Material de consumo e equipamento descrito no manual de utiliza o dos sistemas BN Material de an lise Para a medi o dever o ser utilizadas amostras de soro humano ou de plasma heparinizado t o frescas quanto poss vel conservadas sete dias no m ximo entre 2 e 8 C ou amostras de soro humano ou de plasma heparinizado conservadas congeladas Se as amostras forem congeladas num per odo de tempo de 24 horas ap s a colheita podem ser conservadas durante tr s meses a uma temperatura inferior a 20 C sese evitar que as mesmas sejam descongeladas e congeladas novamente As amostras de soro devem estar completamente coaguladas e n o apresentar part culas ou vest gios de fibrina ap s a centrifuga o As amostras lip micas ou as amostras congeladas que se apresentem turvas ap s a descongela o dever o ser clarificadas atrav s de centrifuga o 10 min a aprox 15 000 x g antes de a determina o ser feita Procedimento Notas 1 Os pormenores para a manipula o dos sistemas BN dever o ser retirados do respectivo manual de utiliza o 2 necess rio respeitar o tempo indicado para a reconstitui o dos reagentes liofilizados 30 minutos no m nimo ap s adi o de gua destilada 3 Antes da medi o no sistema BN 100 os reagentes e as amostras dever o ter atingido a temperatura ambiente 15 a 25 C Os reagentes e amostras armazenadas entre 2 e 8 C podem ser utilizados diretamente no sistema BN
3. Dade Behring Diagn stica S o Paulo N L tex Cystatin C Campo de aplica o N L tex Cystatin C um kit de diagn stico in vitro contendo reagentes para a determina o quantitativa da cistatina C no soro humano e no plasma heparinizado atrav s da imunonefelometria de part culas refor adas nos sistemas BN para a avalia o do funcionamento dos rins Significado diagn stico Cystatin C um inibidor da proteinase de cistatina com um peso molecular relativo de 13 250 que formado por todas as c lulas nucleadas investigadas1 2 A taxa de forma o constante e a circunst ncia de ser filtrada livremente pelos rins saud veis fazem desta prote na um bom marcador do funcionamento renal A concentra o s rica da cistatina C dependente praticamente exclusivamente da capacidade de filtra o glomerular dos rins3 4 Uma redu o da taxa de filtra o glomerular GFR provoca um aumento da concentra o de cistatina C Esta apresenta vantagens consider veis quando comparada com a concentra o de creatinina no soro que tamb m est sujeita a outras influ ncias por ex a massa muscular e a nutri o Al m disso o aumento de creatinina s se torna evidente com uma redu o da GFR de aprox 50 Princ pio metodol gico As part culas de poliestireno carregadas com anticorpos espec ficos contra a cistatina C humana ao serem misturadas com amostras contendo cistatina C formam aglutinados que dispersam a luz irradiada A i
4. II e BN ProSpecQ para determina o 4 No sistema BN 100 a medi o das amostras dever ser efetuada mesma temperatura ambiental desvio m ximo de 3 1C a que foi registrada a curva de refer ncia Protocolo de ensaio nos sistemas BN O protocolo de ensaio para o soro e o plasma est contido no manual de utiliza o para o sistema BN e no Software do aparelho respectivo Todos os passos s o executados automaticamente pelo sistema Estabelecimento da curva de refer ncia As curvas de refer ncia s o obtidas por uma calibra o de pontos m ltiplos Para o estabelecimento da curva de refer ncia s o efetuadas automaticamente s ries de dilui o do N Protein Standard UY com o N Diluente As dilui es padr o t m de ser utilizadas dentro de quatro horas A curva de refer ncia permanece v lida durante duas semanas Pode ser utilizada para al m desse per odo de tempo desde que os controles com valores dependentes do processo tais como o controlo N Cystatin C Level 1 e Level 2 se encontrem compreendidos dentro do intervalo de confian a Se utilizar outro lote de reagente necess rio estabelecer uma nova curva O intervalo de medi o exata depende da concentra o de prote na de cada lote de N Protein Standard UY Os intervalos de medi o t picos est o indicados no manual de utiliza o dos respectivos sistemas BN Medi o das amostras de pacientes As amostras s o dilu das automaticamente na rela o de 1 100 c
5. a o da prote na no N Protein Standard UY A sensibilidade anal tica calculada a partir do valor m dio de uma determina o de 20 vezes do N Diluente mais o dobro do desvio do padr o standard era de 0 005 mg l Especificidade N o se conhecem rea es cruzadas dos anticorpos utilizados Precis o Com o teste N Latex Cystatin C foram apuradas no sistema BN determina es duplas do controlo N Cystatin C Level 1 e Level 2 e tr s pools de soro e de plasma no intervalo de 0 8 a 7 1 mg l de cistatina C durante 20 dias e sempre em duas s ries Caracter sticas de precis o de Cistatina C Valor m dio Na s rie De s rie em s rie Total mg l SD CV SD CV SD CV Controlo N Cystatin C 0 9 2 5 2 0 2 8 Level 1 Controlo N Cystatin C 1 8 2 3 22 2 9 Level 2 Pool de soro 1 0 8 259 1 5 2 4 Pool de soro 2 2 3 2 6 3 5 4 3 Pool de soro 3 7 1 1 7 2 4 2 9 Pool de plasma 1 0 8 3 1 1 9 3 1 Pool de plasma 2 2 6 1 5 2 9 3 4 Pool de plasma 3 6 5 2 5 1 8 2 7 Compara o de m todos A concentra o de cistatina C foi medida em 698 amostras concentra o de cistatina C at 7 58 mg l no sistema BN II y e determinada comparativamente com a creatinina x An lise regressiva dos resultados da compara o de m todos Aumento Segmento axial T Sxy Intervalo de n 95 do intervalo 95 do intervalo cistatina C de confian a de confian a mg 1 Ponto de co
6. e 0 5 ml de reagente complementar B N Cystatin Controlo N Cystatin C Level 1 e Level 2 O conte do liofilizado de um frasco dissolvido em 1 0 ml de gua destilada Mistura se a solu o agitando cuidadosamente O controlo N Cystatin C Level 1 ou Level 2 pode ser usado 30 minutos ap s a reconstitui o Estabilidade e condi es de conserva o Conserva o entre 2 e 8 C A data de expira o est indicada no r tulo Estabilidade ap s abertura ou reconstitui o duas semanas reagente N Cystatin C bem como a mistura dos reagentes complementares N Cystatin C e quatro semanas controlo N Cystatin C Level 1 e Level 2 reconstitu do desde que imediatamente ap s o uso sejam novamente conservados hermeticamente fechados entre 2 e 8 C Os reagentes n o podem ser congelados Estabilidade nos sistemas BN Cinco dias no m nimo com oito horas por dia ou per odo de tempo equivalente Nota A estabilidade on board depende do sistema BN utilizado e das condi es laboratoriais O manual de utiliza o dos sistemas BN cont m indica es mais amplas A estabilidade on board do controlo N Cystatin C Level 1 e Level 2 no sistema BN ProSpecQ est indicada no manual de utiliza o do sistema Outros materiais necess rios Sistema BN N Protein Standard UY ref OQLV Cleaner SCS ref OQUB para o sistema BN II e BN ProSpec N Diluente ref OUMT BN II Evaporation Stoppers opcionais ref OVLE
7. ntensidade da luz dispersa depende da concentra o da respectiva prote na na amostra Avalia o efectuada por compara o com um padr o de uma concentra o conhecida Reagentes Conte do da embalagem comercial Kit N L tex Cystatin C ref OQNM Reagente N Cystatin C tr s frascos com 2 ml cada Reagente complementar A de N Cystatin C tr s frascos com 0 5 ml cada Reagente complementar B de N Cystatin C um frasco com 1 6 ml Controlo N Cystatin C Level 1 tr s frascos para 1 ml cada Controlo N Cystatin Ce Level 2 tr s frascos para 1 ml cada Composi o e estandardiza o O reagente N Cystatin C composto por uma suspens o de part culas de poliestireno carregadas com aprox 0 03 g l de anti cistatina humana C do coelho O reagente complementar A de N Cystatin C cont m imunoglobulina de coelho 14 g 1 numa solu o tamponada O reagente complementar B de N Cystatin C composto por uma solu o aquosa de monolaureato de sorbitano de polietilenoglicol 85 g 1 e ter de polietilenoglicol 27 g 1 O controlo N Cystatin C Level 1 e o controlo N Cystatin C Level 2 s o liofilizados de poligelinas com prote nas de urina de proveni ncia humana A concentra o de cistatina C foi calibrada tomando se como refer ncia a cistatina C purificada Ap s a reconstitui o dos controles a concentra o de cistatina C est indicada no respectivo r tulo Conservantes Reagente N Cystatin C Gentamicina 6 25 mg l Anf
8. ntrolo A 0 52 0 03 1 11 0 12 0 891 0 89 0 57 7 58 100 0 46 0 58 0 87 1 35 Ponto de controlo B 0 70 0 02 0 39 0 04 0 833 0 41 0 46 4 83 499 0 66 0 74 0 31 0 47 Ponto de controlo C 0 79 0 05 0 30 0 15 0 843 0 86 0 54 6 34 99 0 69 0 89 0 01 0 59 Sensibilidade cl nica e especificidade Neste estudo foram inclu dos 500 Pacientes cujo GFR foi determinado com um procedimento de homologa o Iothalamat Destes 363 73 tinham um GFR anormal de acordo com a homologa o Iothalamat As amostras destes pacientes foram medidas num sistema BN II com N L tex Cystatin C e examinadas comparativamente com a creatinina N L tex Cystatin C e a determina o de creatinina apresentavam uma especificidade de diagn stico equivalente 82 vs 88 p 0 170 A sensibilidade de diagn stico de N L tex Cystatin C era significativamente superior da determina o de creatinina 94 vs 81 p lt 0 001 Sensibilidade cl nica e especificidade Resultado 95 de intervalo de confian a Cistatina C Sensibilidade de diagn stico 94 91 96 Especificidade de diagn stico 82 76 89 Valor positivo prognosticado 93 91 96 Valor negativo prognosticado 83 77 89 Creatinina Sensibilidade de diagn stico 81 77 85 Especificidade de diagn stico 88 83 94 Valor positivo prognosticado 95 92 97 Valor negativo prognosticado 64 57 71 Nota
9. om N Diluente T m de ser medidas dentro de quatro horas Para os valores medidos que se situem fora do intervalo de medi o a medi o pode ser repetida a partir de uma dilui o de amostra superior ou inferior As repeti es de medi o feitas a partir de outras dilui es de amostras est o descritas no manual de utiliza o dos sistemas BN Controlo de qualidade interno O Controlo N Cystatin C Level 1 e Level 2 dever ser utilizado ap s a prepara o de cada curva de refer ncia ap s a primeira utiliza o de um frasco de reagente ou em cada s rie de amostras Na prepara o e na avalia o do teste o controlo tratado como as amostras do paciente O valor nominal est indicado no respectivo r tulo No sistema BN ProSpecQ pode ser lido no CD com as indica es de lote ref OVLP Como intervalo de confian a aplica se o valor nominal de 20 O valor nominal indicado serve para o controlo de qualidade no laborat rio para a avalia o da precis o e desvio anal tico Se for utilizado como controlo de precis o o valor e os limites de controlo dever o ser determinados pelo utilizador num per odo pr vio Se o resultado das medi es de controlo se situar fora do intervalo de confian a a determina o do controlo dever ser repetida Se o desvio for confirmado pela repeti o da medi o dever ser estabelecida uma curva de refer ncia nova Os resultados dos pacientes s dever o ser divulgados se a causa do de
10. otericina 0 625 mg l Reagente complementar A e B de N Cystatin C Azida de s dio lt 1 g l Controlo N Cystatin C Level 1 e Level 2 ap s reconstitui o Azida de s dio lt 1 g l Advert ncias e medidas de precau o 1 S para uso diagn stico in vitro 2 Precau es a observar ao lidar com reagentes para diagn stico in vitro que cont m azidas de s dio Evitar a ingest o ou contacto com a pele ou mucosas Se forem eliminados no esgoto lavar com muita gua A azida de s dio em contacto com metais pesados como o cobre ou o chumbo pode formar azidas explosivas 3 Cada d diva individual utilizada no fabrico do reagente N Cystatin C e do controlo N Cystatin C Level 1 e Level 2 foram testados para detectar a presen a de HBsAg Anti HCV Anti HIV1 e Anti HIV2 No fabrico apenas foram utilizadas d divas com resultado negativo Independentemente disso todos os materiais obtidos a partir de tecido humano ou humores corporais devem ser manuseados com as precau es devidas seguindo as medidas de seguran a recomendadas em caso de risco biol gico devido a n o poder excluir se totalmente o risco provocado pelos micr bios patog nicos Prepara o dos reagentes Reagente N Cystatin C O reagente est pronto para uso e pode ser utilizado sem qualquer tratamento pr vio Antes usar a primeira vez dever ser agitado cuidadosamente Reagente complementar N Cystatin C Num frasco com reagente complementar A N Cystatin C adiciona se e mistura s
11. rina ou liquor tiver sido medido no dia anterior necess rio utilizar em todos os casos um jogo separado de cuvetes Os resultados deste teste devem ser sempre interpretados em conex o com os antecedentes do paciente o quadro cl nico e os outros resultados de an lise Devido aos efeitos matriciais as amostras de controlo ou amostras de investiga o interlaboratorial podem apresentar resultados diversos em fun o dos m todos de determina o utilizados Por isso poder ser necess rio proceder avalia o destes resultados com base em valores alvo espec ficos do m todo pr fixados Intervalo de refer ncia A determina o do intervalo de refer ncia foi feita com base numa popula o de 413 pessoas aparentemente saud veis que n o apresentavam quaisquer doen as renais popula o essa que abrangia 194 indiv duos do sexo masculino e 219 indiv duos do sexo feminino com a idade entre 1 e 78 anos O intervalo de refer ncia n o foi calculado com base em par metros e de 0 53 0 95 mg l Ele representa a faixa central de 95 da popula o investigada Al m disso cada laborat rio dever determinar os seus intervalos de refer ncia pr prios j que estes est o sujeitos a influ ncias m ltiplas que podem ser diferentes para cada popula o analisada Caracter sticas do teste Sensibilidade A sensibilidade da determina o definida pela curva inferior da curva de refer ncia e depende assim da concentr
12. svio tiver sido identificada e eliminada Resultados A avalia o efetuada automaticamente em mg l ou numa unidade de massa derivada a selecionar pelo utilizador do sistema BN Limita es do procedimento As interfer ncias provocadas pelos fatores reumat ides s o suprimidas com a utiliza o do reagente complementar N Cystatin C As turva es e as part culas nas amostras podem perturbar a determina o Por isso as amostras que cont m part culas dever o ser centrifugadas antes da determina o As amostras lip micas ou que cont m part culas que n o se conseguem clarificar com a centrifuga o 10 min A aprox 15 000 x g dever o ser exclu das da determina o N o foi poss vel constatar qualquer interfer ncia provocada por medicamentos imunosupressores Ciclosporina Tacrolimus Sirolimus Micofenolato ou Azatioprina A eventual interfer ncia provocada pelos anticorpos monoclonais ou policlonais utilizados no tratamento de pacientes com transplanta es n o foi investigada OQNM G13 C0540 1849 CS 8 Para garantir resultados seguros no sistema BN 100 as determina es de cistatina C dever o ser processadas na manh que antecede a rotina depois de as cuvetes de rea o N cheias com solu o de lavagem terem repousado aprox 16 horas Alternativamente pode ser utilizado um jogo de cuvetes de rea o N reservado exclusivamente para a determina o de cistatina C Se o total de prote na na u
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