INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO
Contents
1. 9 9 COLHEITA E CONSERVA O DA AMOSTRA ananassa 9 10 PROCEDIMENTO DE TESTE uan 9 TOA de Dal aC aO n ata 9 10 2 Protocolo GE EAS ao 10 Fe RESULTADO St OT 11 MA GalellleoSseisntielpr6lq0606 asas SIE e do 11 biz Conroe de Qualidade u u m o ao us 12 1 S Valores PEI OS ara uu uuu dd uwa ani anni Da utuku 12 12 DADOS DEDESEVPEN O u uuu luu a sda 13 2 Miles ldo lodo Me UA REO 13 Te 2 TEAC TAO cc italia 13 A O 13 De NO de DECO te ela 14 12 5 Limite Ge AI A tds 15 To O Limite de QUAINT IG AG AO deso nauk teas 15 12 7 Efeito de gancho de dose elevada High Dose Hook 15 12 8 Reactividade CrUZACA uuu u io 15 o A 15 IS GARANTIA a 16 14 INFORMA ES SOBRE PEDIDOS eee 16 IP DATA DE PUBLICA O os 16 16 Ul lg NOIA O see ee eee E 17 1 UTILIZA O PREVISTA O ensaio BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin um imunoensaio enzim tico EIA para a determina o quantitativa da holotranscobalamina HoloTC no soro humano A HoloTC vitamina B12 ligada transcobalamina utilizada como uma ajuda no diagn stico e no tratamento da defici ncia de vitamina B12 2 INTRODU O Tr s prote nas de liga o est o envolvidas no transporte da vitamina B12 por todo o corpo o factor intr nseco Fl a transcobalamina TC e a haptocorrina HC Estas prote nas de liga o2. primeira casa decimal 12 6 Limite de quantifica o As determina es do limite de quantifica o foram efectuadas utilizando cinco amostras de holotranscobalamina de concentra o baixa e dois lotes de reagentes 120 replicados por lote de reagente Verificou se que o limite de quantifica o do EIA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin era de 8 3 pmol l arredondado primeira casa decimal 12 7 Efeito de gancho de dose elevada High Dose Hook O efeito de gancho de dose elevada um fen meno em que amostras com n veis muito elevados podem ter leituras dentro do intervalo din mico do ensaio Com o EIA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin n o foi detectado efeito de gancho de dose elevada em duas amostras com uma concentra o de aproximadamente 419 e 2236 pmol 12 8 Reactividade cruzada O BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin foi concebido para assumir um desvio m ximo na concentra o de holotranscobalamina de lt 10 na presen a de apotranscobalamina ou haptocorrina Foi efectuado um estudo tendo por base as orienta es do documento EP7 A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI Tr s amostras com n veis de holotranscobalamina ao longo do intervalo de medi o do ensaio foram suplementadas com 500 pmol L de apotranscobalamina ou 5000 pmol L de haptocorrina O desvio m ximo na concentra o de holotranscobalamina situou se entre 5 e 1 12 9 Interfer ncia O BIOHIT Active B12 Ho
3. durante 3 dias no estado on the clot e durante quatro semanas no estado off the clot Para per odos de armazenamento superiores as amostras t m de ser conservadas em estado off the clot a 20 C por um per odo m ximo de 6 meses 7 Prepare cada amostra antes do ensaio adicionando um volume igual de pr tratamento amostra p ex 150 ML de amostra mais 150 uL de pr tratamento As amostras pr tratadas podem ser conservadas tapadas durante um m ximo de 24 horas a 2 8 C antes do ensaio 10 PROCEDIMENTO DE TESTE 10 1 Prepara o Prepara o para o ensaio Permita que todos os componentes do kit incluindo as tiras de microtitula o aque am at temperaturas de 18 25 C durante 30 60 minutos antes de utilizar Misture os reagentes por invers o cuidadosa Quando conservado a 2 8 C o tamp o de lavagem forma um precipitado podem ser vis veis cristais Antes de diluir em gua permita que o tamp o de lavagem aque a pode ser colocado num incubador a 37 C se necess rio a fim de acelerar o processo at que NENHUMA precipita o seja evidente a olho n Dilua o seguinte reagente e misture cuidadosamente Volume Adicionar Concentrado de tampao de lavagem x 8 1 frasco 175 mL de gua destilada desionizada Calcule o n mero de tiras de microtitula o necess rias para o presente ensaio e fixe as no suporte de tiras de microtitula o Volte a colocar as tiras excedentes no inv lucro de alum nio com s
4. adequado para a elimina o de materiais biol gicos Seque bem as tiras invertidas com toalhas de papel 8 Lave os po os cinco vezes com um m nimo de 250 uL de tamp o de lavagem dilu do Decante e seque ap s cada adi o de lavagem 9 Adicione a cada po o 100 uL de substrato 10 Proceda incuba o durante 30 5 minutos a 18 25 C N o decante 11 Adicione 100 uL de solu o de paragem a cada poco pela mesma ordem e velocidade da adi o de substrato Bata os po os suavemente para misturar 12 Efectue a leitura das tiras a 405 nm Efectue a leitura no prazo de 120 minutos a partir da adi o da solu o de paragem 10 11 RESULTADOS 11 1 C lculos e interpreta o Trace o valor m dio de absorv ncia de cada calibrador no eixo y em fun o da concentra o correspondente em pmol no eixo x AS CONCENTRA ES DOS CALIBRADORES S O APRESENTADAS NOS R TULOS DOS FRASCOS OS VALORES DE CONCENTRA O S O ATRIBU DOS A CADA LOTE DE CALIBRADORES E PODEM VARIAR ENTRE LOTES A concentra o pmol l de cada amostra pode ser calculada localizando o ponto na curva correspondente ao valor de absorv ncia m dia da amostra e fazendo a leitura da concentra o correspondente em pmol l no eixo das abcissas x Este procedimento pode ser efectuado manualmente usando um gr fico em papel ou utilizando um leitor de placas com software que incorpora procedimentos de ajuste de curvas Se for utilizado um leitor de placas com s
5. asseguram a capta o eficiente das quantidades muito pequenas de vitamina B12 disponibilizadas pela alimenta o Quando a TC e a HC se ligam vitamina B12 os complexos resultantes s o conhecidos como holotranscobalamina HoloTC e holohaptocorrina HoloHC para as distinguir das prote nas que n o transportam vitamina A frac o principal na circula o a HoloHC representa 70 90 da vitamina B12 no sangue mas biologicamente inerte A HoloTC representa apenas 10 30 da vitamina B12 que circula no sangue mas a nica forma de vitamina B12 que pode ser captada pelas c lulas no corpo A prote na TC por si s transporta vitamina B12 do seu local de absor o no leo para os tecidos e as c lulas Em seguida a vitamina incorporada na forma do complexo HoloTC vitamina B12 ligada transcobalamina atrav s de uma capta o espec fica mediada por receptores Este processo fornece vitamina B12 s c lulas do corpo e proporciona a vitamina na forma de uma co enzima para as fun es celulares essenciais tais como a s ntese do ADN Uma vez que a HoloTC possui uma semi vida de circula o mais curta comparativamente com a HoloHC prov vel que a primeira altera o a ocorrer ao entrar em balan o negativo de vitamina B12 seja uma diminui o na concentra o s rica da HoloTC A medi o da B12 s rica total sofre de algumas limita es em particular a maioria da cobalamina medida est ligada a HC biologicamente ine
6. BIOHIT ACTIVE B12 HOLOTRANSCOBALAMIN INSTRU ES DE UTILIZA O REF 602 290 C E INSTRU ES DE UTILIZA O Portugu s BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin N Cat 602290 te UTILIZA O PREVISTA sa E EI as 4 A INTRODUCIR 4 3 PRINCIPIO DO TESI E uu u uuu clinic 4 4 ADVERT NCIAS E PRECAU ES cccccccccsssscsssssessssscsessssecstssssessnsscsesansecsesansecstsatsecansassecatsnsaven 5 E CONTENDO OEI IS ua umanuan o stilo 6 slo U ers awe eo Eo A A A O rene reat 6 PA es A ki us Duka qasi qa 6 6 5 OOIU O CE Dal GS 015 u un uuu A t a as 7 5 4 Concentrado de tamp o de lavagem 7 S IVI DIGO 2 AAA PP E o e cease daueesiedaces 7 BO SOI CAO Cm DRANCO sprite a A tae A T eae 7 AAA u da E a A 7 A E E utaya a su 7 5 9 SOlUGAO de Pre Matame ina 7 5 10 INSTUCOSS de UMIZACIO 2 it ad 7 6 MATERIAIS EQUIPAMENTO NECESS RIOS MAS N O FORNECIDOS nirre 8 NORMALIZACAO pet annassa EE 8 8 CONSERVA O E ESTABILIDADE a ar canar arrancaron cano 8 8 1 Estabilidade do kit aberto em utiliza o 8 8 2 Estabilidade do Kil N O ADAMO uuu faia fada A a S 8 8 3 Notas sobre manuseamento e procedimentos 8 8 4 Indicadores de deteriora o
7. DAS OU FORA SUAS ESPECIFICA ES CONTR RIAS S INSTRU ES DETERMINADAS NO MANUAL DE INSTRU ES O per odo dessa garantia definido no manual de instru es dos Produtos e come ar a partir da data em que o Produto relevante for enviado pela Biohit Esse kit de diagn stico Biohit foi fabricado de acordo com os protocolos de gest o de qualidade ISO 9001 ISO 13485 Em caso de lit gio de interpreta oo texto em Ingl s aplica 14 INFORMA ES SOBRE PEDIDOS BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin Cat No 602 290 15 DATA DE PUBLICA O BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin Version 01 October 2014 16 16 REFER NCIAS 1 10 da 12 Nexo E Hvas A M Bleie Y et al Holo transcobalamin is an early marker of changes in cobalamin homeostasis A randomized placebo controlled study Clin Chem 2002 48 10 1768 71 Valente E Scott JM Ueland PM et al Diagnostic accuracy of holotranscobalamin methylmalonic acid serum cobalamin and other indicators of tissue vitamin B12 status in the elderly Clin Chem 2011 57 6 856 863 Nexo E Hoffmann Lucke E Holotranscobalamin a marker of vitamin B12 status analytical aspects and clinical utility Am J Clin Nutr 2011 94 1 359S 3655 Obeid R Jouma M Hermann W Cobalamin status holotranscobalamin methylmalonic acid and folate as determinants of homocysteine concentration Clin Chem 2002 48 11 2064 5 Herrmann W Schorr H Obeid R et al Vitamin B12 status particularly hol
8. animal sejam considerados potencialmente infecciosos e sejam manuseados de acordo com a norma OSHA para Pat genos de Transmiss o Sangu nea de Biosseguran a N vel 2 ou que sejam usadas outras pr ticas de biosseguran a adequadas para materiais que contenham ou se suspeite conterem agentes infecciosos CORROSIVO NOCIVO Soluc o de paragem Substrato Concentr ado de tamp o de lavagem 8X R34 S26 S36 37 39 S45 R20 21 22 R38 R43 S23 S24 S28 S29 35 S36 37 39 S46 R22 R32 R52 53 S29 35 S36 37 39 S46 5 CONTEUDO DO KIT 5 1 Solu o de conjugado Um frasco de 15 mL de anticorpo monoclonal murino marcado com fosfatase alcalina para a transcobalamina Provoca queimaduras Em caso de contacto com os olhos lavar imediata e abundantemente com gua e procurar assist ncia m dica Usar vestu rio de protec o luvas e equipamento protector para os olhos face adequados Em caso de acidente ou de indisposi o procurar assist ncia m dica imediatamente se poss vel mostrar o r tulo Nocivo por inala o em contacto com a pele e por ingest o Irritante para a pele Pode causar sensibiliza o em contacto com a pele N o respirar os fumos Evitar o contacto com a pele Ap s contacto com a pele lavar imediatamente e abundantemente com gua N o deitar os res duos no esgoto eliminar este produto e respectivo recipiente de forma segura Usar vestu rio de prot
9. curva de dose resposta baseada nos calibradores 4 ADVERT NCIAS E PRECAU ES Apenas para utiliza o em diagn stico in vitro Precau es de seguran a 1 foi ae cer I Siga rigorosamente as instru es nesta brochura em particular as relativas a condi es de manuseamento e conserva o N o fa a pipetagem com a boca N o fume coma beba nem aplique cosm ticos em reas onde os kits e as amostras s o manuseados Quaisquer problemas de pele cortes abras es e outras les es cut neas devem ser devidamente protegidos Os calibradores os controlos o conjugado o pr tratamento e o concentrado de tamp o de lavagem cont m azida de s dio a qual pode reagir com a canaliza o de chumbo e cobre formando azidas met licas altamente explosivas Ao eliminar os res duos escoe com grandes quantidades de gua para prevenir a acumula o de azidas A solu o de paragem cont m hidr xido de s dio Evitar o contacto com a pele os olhos e as membranas mucosas O derramamento pode ser limpo com quantidades abundantes de gua Em caso de contacto com a pele ou os olhos lavar com gua e procurar assist ncia m dica imediatamente Est o dispon veis fichas de dados de seguran a dos materiais para todos os componentes inclu dos neste kit mediante solicita o Biohit Oyj Este produto envolve o manuseamento de esp cimes e materiais de origem humana e animal Recomenda se que todos os materiais de origem humana e
10. de Advert ncias e Precau es e as Notas sobre manuseamento e procedimentos Os utilizadores devem demonstrar que conseguem obter especifica es de desempenho de precis o e intervalos de resultados de testes document veis compar veis com os estabelecidos pelo fabricante antes de documentar resultados de testes em doentes Os controlos alto e baixo prontos a utilizar do kit devem ser testados em duplicado em todos os ensaios para monitorizar a qualidade do procedimento de teste Assumindo que as especifica es de precis o descritas pelo fabricante s o cumpridas caso qualquer controlo n o cumpra as especifica es abaixo indicadas o ensaio deve ser considerado inv lido e os resultados do doente n o dever o ser documentados O operador pode repetir o ensaio ap s revis o do procedimento ou contactar o fabricante Se repetir o ensaio prepare uma dilui o nova para cada amostra Os laborat rios podem optar por incluir controlos internos para cada teste de ensaio Conserve este tipo de material de controlo a temperatura igual ou inferior a 20 C e evite ciclos repetidos de congelac o descongelac o Os conservantes como azida de s dio a lt 0 1 p v n o afectam os resultados da amostra Os intervalos de refer ncia e os valores de corte adequados devem ser calculados para as popula es espec ficas avaliadas pelos utilizadores Tabela 1 Especifica es para o controlo baixo e controlo alto Especifica es do controlo Con
11. e lote Conjugado 96 testes k Substrato Cuidado Solu o de paragem Consultar as instru es de utiliza o Pr tratamento Proteger da luz Concentrado de tamp o de lavagem 8x Prazo de validade Solu o em branco Conservar a 2 8 S Calibradores 1 a 5 Corrosivo N o reutilizar Nocivo Sede Principal Headquarters BIOHIT OYJ Laippatie 1 00880 Helsinki Finland Tel 358 9 773 861 Fax 358 9 773 86200 E mail info biohit fi www biohithealthcare com 400920 01 18
12. e microtitula o excedentes n o utilizadas no inv lucro de alum nio com o dessecante Certifique se de que o selo est intacto e volte a colocar a 2 8 C at que sejam novamente necess rias 8 N o exponha os calibradores os controlos e o substrato luz durante a conserva o 9 Evite a contamina o dos reagentes Utilize uma ponta de pipeta descart vel nova para cada reagente ou cada manipula o da amostra 8 4 Indicadores de deteriora o O substrato deve ser incolor ou apresentar uma colora o amarelo p lido Uma colora o de amarelo mais escuro indica contamina o e o reagente deve ser eliminado Turva o ou precipita o de qualquer componente indicadora de deteriora o devendo o componente ser eliminado 9 COLHEITA E CONSERVA O DA AMOSTRA 1 Este ensaio recomendado para soro humano incluindo tubos separadores de soro N o utilize amostras claramente hemolisadas ou turvas Misture cuidadosamente amostras descongeladas antes do ensaio e evite repetir o processo de congelamento descongelamento 4 As amostras podem ser submetidas a 3 ciclos de congelamento descongelamento As amostras descongeladas devem ser centrifugadas a 210 000 g durante 5 minutos antes do ensaio 5 N o exponha as amostras on the clot e off the clot a temperaturas superiores temperatura ambiente por um per odo superior a uma noite lt 16 horas 6 As amostras podem ser conservadas a temperaturas entre 2 e 8 C
13. ec o luvas e equipamento protector para os olhos face adequados Em caso de ingest o procurar assist ncia m dica imediatamente e mostrar a embalagem Nocivo por ingest o Em contacto com cidos liberta gases muito t xicos Nocivo para os organismos aqu ticos podendo causar efeitos nefastos a longo prazo no ambiente aqu tico N o deitar os res duos no esgoto eliminar este produto e respectivo recipiente de forma segura Usar vestu rio de protec o luvas e equipamento protector para os olhos face adequados Em caso de ingest o procurar assist ncia m dica imediatamente e mostrar a embalagem ou o r tulo humana em tamp o Tris com estabilizador de prote nas Conservante azida de s dio a lt 0 1 p v Pronto a utilizar 5 2 Solu o de substrato su MOS Um frasco de 15 mL de p nitrofenil fosfato pNPP solu o tamp o Pronto a utilizar N o expor luz durante a conserva o OBS NOCIVO 5 3 Solu o de paragem Eron Eg Um frasco de 15 mL de hidr xido de s dio 1M pH gt 10 Pronto a utilizar OBS CORROSIVO 5 4 Concentrado de tamp o de lavagem x Dois frascos de 25 mL de tamp o fosfato Conservante azida de s dio a 0 72 p v Diluir antes de utilizar OBS NOCIVO 5 5 Microplaca Tiras de microtitulagao Separaveis com 12 x 8 po os revestidos com anticorpo monoclonal murino anti holotranscobalamina num inv lucro de alum nio com dissecante e selo reutiliz
14. elo reutiliz vel com o dissecante e conserve a 2 8 C at serem novamente necess rias Certifique se de que todas as tiras est o firmemente fixas ao suporte de tiras de microtitula o Os utilizadores poder o optar por numerar cada tira ao longo da margem superior para facilitar a respectiva identifica o Guarde o suporte de tiras de microtitula o para utiliza o futura Prepare cada amostra antes do ensaio adicionando um volume igual de pr tratamento amostra p ex 150 uL de amostra mais 150 uL de pr tratamento As amostras pr tratadas podem ser conservadas tapadas durante um m ximo de 24 horas a 2 8 C antes do ensaio 10 2 Protocolo de ensaio 1 Marque os po os para fins de identifica o 2 Pipete 100 uL de calibradores em duplicado controlos do kit em duplicado e amostras pr tratadas 50 50 do doente em duplicado nos po os apropriados N o esque a de mudar as pontas das pipetas entre pipetagens Este passo n o deve exceder 15 minutos Proceda incuba o durante 60 10 minutos a 18 25 C Decante os conte dos das tiras por invers o r pida para um lavat rio adequado para a elimina o de materiais biol gicos tendo em conta o potencial risco infeccioso das amostras Seque bem as tiras invertidas com toalhas de papel N o lavar Adicione a cada po o 100 uL de conjugado Proceda incuba o durante 35 5 minutos a 18 25 C Decante os conte dos das tiras por invers o r pida para um lavat rio
15. es dados 12 2 Exactidao Um estudo de correla o foi realizado com amostras de soro de adultos aparentemente saud veis Todas as amostras foram analisadas com o EIA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin e um ensaio dispon vel no mercado para holotranscobalamina de acordo com o documento EP9 A2 do CLSI As concentra es das amostras situaram se entre 13 8 a 112 8 pmol l no ensaio A Tabela 2 apresenta os valores estat sticos obtidos Tabela 2 EIA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin comparado com um ensaio dispon vel no mercado EIA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin comparado com um ensaio dispon vel no mercado N mero de amostras 111 Declive da linha de regress o regress o de Passing Bablok IC 0 95 0 89 a 1 01 de 95 Intercep o sobre Y regress o de Passing Bablok IC de 95 8 39 5 73 a 11 77 Coeficiente de correlac o r Pearson IC de 95 0 93 0 90 a 0 95 12 3 Precis o Sete 7 amostras de soro humano foram analisadas usando 3 lotes de reagentes As amostras foram analisadas por 2 operadores em 8 replicados uma vez por dia durante 5 dias n 80 Os dados deste estudo est o resumidos na Tabela 3 13 Tabela 3 Dados sobre a precis o Lote Operador M dia pmol L de CV intra ensaio de CV total 17 8 11 0 7 N N O O 0 01 J 19 1 J N I OO Oo cO 5 N 00 J J J NO N O N oo On 10 3 NO oo cO 10 2 NO o
16. lotranscobalamin foi concebido para assumir um desvio m ximo na concentra o de holotranscobalamina de lt 10 na presen a de compostos potencialmente interferentes Foi efectuado um estudo tendo por base as orienta es do documento EP7 A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI Amostras com n veis de holotranscobalamina ao longo do intervalo de ensaio foram suplementadas com os compostos potencialmente interferentes listados na Tabela 4 abaixo O desvio m ximo na concentra o de holotranscobalamina situou se entre 10 e 8 15 Tabela 4 Lista de compostos interferentes testados Subst ncia potencialmente Interfer ncia n o encontrada at interferente concentrac o seguinte Hemoglobina 500 mg dL Triglic rido soluc o intra lip dica 3000 mg dL Factor reumat ide 7500 Ul dL Prote na total 9000 mg dL 13 GARANTIA O Biohit deve solucionar todos os defeitos detectados em qualquer Produto o Produto com defeito que resultarem de materiais inadequados ou de fabrica o negligente e que impe am o funcionamento mec nico ou a utiliza o prevista dos Produtos incluindo sem limita o as fun es descritas nas especifica es Biohit para os Produtos NO ENTANTO QUALQUER GARANTIA SER CONSIDERADA NULA SE A FALHA FOR CAUSADA POR TRATAMENTO INADEQUADO UTILIZA O INADEQUADA DANOS ACIDENTAIS ARMAZENAMENTO INCORRETO OU USO DOS PRODUTOS PARA OPERA ES FORA DE SUAS LIMITA ES ESPECIFICA
17. o N NO 00 00 1 N J J J J 3 O 0 bh RIO OD O1 O N N J J J 01 N O al 00 4 4 4 4 J J J O1 O1 N I 9 O 5 5 9 6 0 Ko 3 5 0 9 i 6 7 6 4 9 2 6 3 2 8 2 Ko e o 5 oO 9 ot NIO Q OO N AN SES co oo 4 4 4 79 1 J J J J J J N O gt O 115 9 121 1 123 2 124 0 127 0 129 5 9 5 3 5 5 3 3 3 NO Q N 10 9 11 5 Controlo N N OO O G O Co 10 0 6 6 N O oO 20 1 O N x x 50 8 al 00 00 J J J J 3 J J J J J J J J Controlo 01 al o O NO Go Ol NO N 12 4 Limite de branco Num estudo representativo foram efectuadas determina es do limite de branco utilizando duas amostras de holotranscobalamina de concentra o baixa e dois lotes de reagentes 120 replicados por lote de reagente Verificou se que o limite de branco do EIA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin era de 4 9 pmol l arredondado primeira casa decimal 14 12 5 Limite de detec o Num estudo representativo foram efectuadas determina es do limite de detec o utilizando cinco amostras de holotranscobalamina de concentra o baixa e dois lotes de reagentes 120 replicados por lote de reagente Verificou se que o limite de detec o do EIA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin era de 8 1 pmol arredondado por excesso
18. oftware interno deve ser utilizado um algoritmo de ajuste de curvas de regress o linear Abaixo est representado um gr fico de calibra o t pico Figura 1 apenas para efeitos ilustrativos e que n o deve ser usado para interpreta o de resultados Amostras com concentra es superiores a 128 pmol est o fora dos limites do ensaio devendo ser registadas como gt 128 pmol l e os resultados n o podem ser extrapolados Podem ser obtidos replicados de amostras individuais com desvio inferior a 20 para indicar aceitabilidade do ensaio Curva de calibra o t pica c Ln O q Q G gt O N 2 lt 40 60 80 100 120 140 Concentra o do calibrador pmol L Figura 1 Curva de calibra o t pica do ensaio BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin Unidade de medida A unidade de medida para o ensaio BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin a pmol l Intervalo de medi o limites report veis O intervalo de medi o do ensaio situa se entre 10 pmol l e 128 pmol l 11 11 2 Controlo de qualidade Certifique se de que s o efectuadas manuten o e calibra o adequadas do leitor de placas de acordo com as instru es do fabricante e que s o empregues o comprimento de onda 405 nm e o algoritmo de ajuste de curva regress o linear correctos Os utilizadores devem certificar se de que est o completamente familiarizados com as instru es do ensaio particularmente com a sec o
19. otranscobalamin Il and methylmalonic acid concentrations and hyperhomocysteinemia in vegetarians Am J Clin Nutr 2003 78 131 6 Lloyd Wright Z Hvas A M Moller J et al Holotranscobalamin as an indicator of dietary vitamin B12 deficiency Clin Chem 2003 49 12 2076 8 Refsum H Yajnik CS Gadkari M et al Hyperhomocysteinemia and elevated methylmalonic acid indicate a high prevalence of cobalamin deficiency in Asian Indians Am J Clin Nutr 2001 74 233 41 Refsum H Smith AD Low Vitamin B12 status in confirmed Alzheimer s disease as revealed by serum holotranscobalamin J Neurol Neurosurg Psychiatry 2003 74 959 61 Chen X Remacha AF Sarda MP et al Influence of cobalamin deficiency compared with that of cobalamin absorption on serum holo transcobalamin Il Am J Clin Nutr 2005 81 110 14 The National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures A Statistical Approach Approved Guideline NCCLS document EP6 A Wayne PA NCCLS 2003 The National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples Approved Guideline Second Edition NCCLS Document EP9 A2 Wayne PA NCCLS 2002 Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI Interference Testing in Clinical Symbols 17 Para utiliza o em diagn stico in CONTROL LOW Controlo baixo vitro N mero de cat logo CONTROL HIGH Controlo alto C digo d
20. res BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin s o rastre veis de acordo com padr es de refer ncia internos que foram submetidos a um processo de atribui o de valor nico 8 CONSERVA O E ESTABILIDADE 8 1 Estabilidade do kit aberto em utiliza o Um kit foi aberto e reutilizado em tr s ocasi es durante um per odo de tr s meses sem quaisquer efeitos adversos no desempenho do kit Ap s a utiliza o os componentes t m de ser novamente conservados a 2 8 C 8 2 Estabilidade do kit n o aberto Os componentes n o abertos mant m se est veis a temperaturas entre 2 C e 8 C at data indicada nas etiquetas 8 3 Notas sobre manuseamento e procedimentos 1 Conserve os componentes do kit a 2 8 C e utilize antes do prazo de validade indicado nos r tulos N o utilize reagentes cujo prazo de validade tenha expirado 2 Cada lote de reagentes e calibradores foi padronizado para produzir a reac o correcta N o troque reagentes nem calibradores entre lotes As concentra es dos calibradores s o apresentadas nos r tulos dos frascos e podem variar entre lotes N o congele os kits Concentrado de tamp o de lavagem deve ser dilu do antes da sua utiliza o Todos os outros reagentes est o prontos a utilizar 6 Tamp o de lavagem dilu do permanece est vel durante pelo menos 3 meses se for evitada uma contamina o microbiana Voltar a conservar a 2 8 C depois de cada utiliza o 7 Volte a colocar as tiras d
21. rte Foram publicados v rios estudos que concluem que a HoloTC seria um melhor indicador do estado da vitamina B12 do que a B12 s rica total Conforme previsto os n veis de HoloTC s o baixos em doentes com sinais bioqu micos de defici ncia de vitamina B12 Foram observados valores baixos em vegetarianos veganos e em popula es com uma ingest o baixa de vitamina B12 de salientar que foram observados n veis baixos de HoloTC mas n o de B12 s rica total em doentes com doen a de Alzheimer comparativamente com os n veis num grupo de controlo saud vel Os n veis de HoloTC reflectem o estado da vitamina B12 independentemente da absor o recente da vitamina 3 PRINC PIO DO TESTE Os po os de microtitula o s o revestidos com um anticorpo monoclonal altamente espec fico para BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin Durante a primeira incuba o a holotranscobalamina s rica liga se especificamente superf cie revestida com anticorpo Na segunda incuba o o conjugado liga se a toda a holotranscobalamina capturada Os po os s o depois lavados para remover componentes n o ligados A holotranscobalamina ligada detectada pela incuba o com o substrato A reac o termina por adi o da solu o de paragem resultando num produto final colorido A concentra o de holotranscobalamina em pmol L est directamente relacionada com a cor gerada e pode ser calculada por interpola o a partir de uma
22. trolo baixo Controlo alto M dia do duplicado 15 a 35 pmol L 36 a 84 pmol L 11 3 Valores previstos 135 amostras de soro de dadores assintom ticos e aparentemente saud veis com idades compreendidas entre 18 e 75 anos compreendendo aproximadamente n meros iguais de homens n 65 e mulheres n 70 foram testadas no EIA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin A m dia geral da concentra o de BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin para esta popula o foi de 72 pmol L intervalo de 15 a 147 pmol L Com base nos dados desta popula o de refer ncia o intervalo de refer ncia 95 centrais dos resultados Intervalo de refer ncia 21 123 pmol L Este intervalo de refer ncia sugerido apenas como uma orienta o e cada laborat rio deve estabelecer um intervalo de refer ncia pr prio que pode ser nico para a popula o abrangida de acordo com factores geogr ficos diet ticos ambientais relacionados com o doente ou com a pr tica cl nica 12 12 DADOS DE DESEMPENHO Dados ilustrativos os resultados em laborat rios individuais podem ser diferentes 12 1 Linearidade da dilui o Com base na orienta o do documento EP6 A do CLSI o BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin demonstrou linearidade em todo o intervalo de medi o do ensaio conforme demonstrado num estudo entre 5 3 e 156 0 pmol l arredondado primeira casa decimal os resultados de laborat rios individuais podem ser diferentes dest
23. vel 5 6 Solu o em branco BLANK Um frasco de 1 mL de tamp o fosfato com estabilizador bovino de prote nas Er Cinco frascos de 1 mL de tamp o fosfato com estabilizador bovino de prote nas contendo Holo TC Conservante azida de s dio a lt 0 1 p v Pronto a utilizar N o expor luz durante a conserva o PARA CONCENTRA ES VER R TULOS DOS FRASCOS 5 8 Controlos CONTROL CONTROL HIGH O Um frasco de controlo baixo e um frasco de controlo alto 1 mL de tamp o fosfato com estabilizador bovino de prote nas contendo HoloTC Conservante azida de s dio a lt 0 1 p v Pronto a utilizar N o expor luz durante a conserva o 5 9 Solu o de pr tratamento LERE Um frasco de 25 mL de tamp o citrato Conservante azida de s dio a lt 0 1 p v Pronto a utilizar 5 10 Instru es de utiliza o 6 MATERIAIS EQUIPAMENTO NECESS RIOS MAS N O FORNECIDOS 1 Leitor de tira placa de 96 po os com filtro de 405 nm N Pipeta s de precis o para distribuir 100 uL Um distribuidor de 8 canais ou semelhante para distribuir aproximadamente 250 300 uL para a lavagem manual Cilindro de medi o de vidro pl stico 1x200 mL gua destilada desionizada Toalhas de papel Oy Ob P pa Temporizador para intervalos de 30 35 e 60 minutos 7 NORMALIZA O N o existe actualmente um m todo ou material de refer ncia para normaliza o que seja internacionalmente aceite Os calibrado
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