Manual_de_TR DPP HIV 1-2 SSP-ASCOM
Contents
1. ed ED e EU Ra 16 8 Contatos do SAC 1 Considera es T cnicas Desde que a sindrome de imunodefici ncia adquirida AIDS foi descrita pela primeira vez em 1983 a infec o pelo virus da imunodefici ncia humana HIV tornou se uma epidemia global De acordo com o relat rio anual do Programa Conjunto das Na es Unidas sobre HIV AIDS ao final de 2007 existiam no mundo aproximadamente 33 milh es de pessoas vivendo com HIV AIDS Cerca de 2 7 milh es de pessoas adquiriram o HIV durante o ano de 2007 e mais de 2 milh es de bitos foram atribu dos a doen as relacionadas AIDS O HIV um v rus com genoma RNA pertencente ao g nero retrovirus Este g nero caracterizado pela presen a de uma enzima denominada transcriptase reversa que respons vel pela transcri o do RNA viral para uma c pia de DNA complementar CDNA No desenvolvimento do ciclo o cDNA pode ent o se integrar ao genoma da c lula hospedeira geralmente as c lulas do sistema fagoc tico mononuclear SMF O v rus do HIV esf rico circundado por um envelope lipoprot ico O RNA gen mico cont m 10 000 bases e caracterizado pela presen a de duas LTRs Long Terminal Repeats e nove regi es tr s delas codificadoras de prote nas gag pol e env As regi es do gag pol e env codificam as prote nas e glicoprote nas p 24 p17 gp 120 0041 e as enzimas transcriptase reversa proteases e integr2. Minist rio da Sa de Instituto de Tecnologia FIOCRUZ E RG Funda o Oswaldo Cruz Bio Manguinhos Manual de Treinamento para TR DPPO HIV 1 2 SSP Ensaio qualitativo para detec o de anticorpos espec ficos da infec o pelo HIV 1 2 em amostras de sangue total soro pun o digital plasma humano www bio fiocruz br Considera es T cnicas T CNICAS ara tantas dg a 3 2 Apresenta o e Componentes do ensaio 6 3 Procedimento para realiza o do TR DPPO HIV 1 2 Bio Manguinhos SSP a a a E O 4 Leitura e Interpreta o dos 65 18005 11 4 1 Interpreta o visual dos resultados 12 A Resultado nao reagenle 12 B Resultado reagente para HIV 12 O Resultado INValdO sagas pastos DEAD pda 13 4 2 Utiliza o da escala visual para interpreta o dos resultados 13 5 Conserva o e estocagem do material eee 15 6 CONSIJErA ES FINAIS iai 15 BIDIOGRATICAS ss
3. Isto n o invalida o teste Um teste reagente significa que anticorpos para HIV 1 e ou HIV 2 foram detectados Linha Teste Linha Controle a c Resultado inv lido Uma linha roxa rosa deve sempre aparecer na rea de CONTROLE C independente da presen a ou n o de linha na rea de TESTE T Caso uma linha roxa rosa n o seja vis vel na rea de CONTROLE C o teste deve ser considerado inv lido e este resultado n o pode ser interpretado Repetir o procedimento de teste com um novo suporte de teste rea Teste rea Controle Limita es do procedimento Resultados falso negativos podem ser obtidos caso o teste seja utilizado em amostras de pacientes conhecidamente soropositivos que estejam em vig ncia ou tenham sido submetidos terapia anti retroviral 4 1 Utiliza o da escala visual para interprata o dos resultados A finalidade deste procedimento fornecer orienta es para a leitura visual e avalia o dos resultados dos testes DPP utilizando se a escala de avalia o PROCEDIMENTO 1 Antes de ler os resultados certifique se que a Escala de Avalia o esteja localizada pr xima ao teste para compara o 2 Os resultados n o reagentes ser o lidos e registrados como negativo Neg 3 Os resultados positivos ser o lidos e registrados como positivo Pos ou positivo fraco Pf 4 Os resultados devem ser registrados de forma adequada em cadernos ou formul rios de acordo com os proced
4. a lanceta utilizados no teste em um recipiente para descarte de materiais de risco biol gico e perfuro cortante 4 Leitura e interpreta o dos resultados Os resultados podem ser interpretados visualmente Colocar o suporte sobre uma superf cie plana e em local bem iluminado O operador deve se posicionar de forma a manter uma dist ncia de 30 a 50cm entre o suporte de teste e seus olhos Observar a presen a de linhas e anotar no protocolo de trabalho 11 4 1 Interpreta o visual dos resultados a Resultado n o reagente Um resultado n o reagente indicado por uma linha roxa rosa na rea de CONTROLE C e nenhuma linha na rea de TESTE T Este resultado sugere a aus ncia de anticorpos para HIV 1 e HIV 2 na amostra e n o exclui a possibilidade de infec o pelo HIV Recomenda se proceder coleta de uma nova amostra 30 dias ap s a coleta da primeira amostra e repetir o conjunto de procedimentos sequenciados descritos no Fluxograma para Diagnostico Laboratorial da Infec o pelo HIV Aus ncia de Presen a de Linha linha teste Controle b Resultado reagente A detec o de duas linhas roxa rosa uma na rea de CONTROLE C e outra na rea de TESTE 1 indicam um resultado reagente A intensidade da linha na rea de TESTE T varia de claro a muito escuro conforme a concentra o de anticorpos espec ficos Assim a linha na rea de TESTE T pode ter apar ncia diferente da linha na rea de CONTROLE C
5. com a amostra OBS Em caso de coleta de sangue da ponta do dedo utilizar as lancetas inclusas no kit de acordo com as instru es de uso que as acompanham Inserir a al a coletora de 10 uL com a amostra no frasco de elui o identificado de modo que toque no fundo do frasco Dobre a haste da al a coletora no ponto de quebra a fim de que a extremidade com a amostra permane a dentro do frasco de elui o 1600100871 o 005800 no frasco de eluicao certificando de que tanto o dosador quanto a tampa azul est o bem fechados e agite levemente por 10 segundos Retirar somente a tampa azul do dosador e girar o frasco de elui o mantendo na posi o vertical sem inclinar sobre o po o 1 Adicionar duas gotas da solu o lentamente ao po o 1 Aguardar cinco minutos Ap s esse tempo a linha azul TESTE e verde CONTROLE da janela devem ter desaparecido Em caso contr rio descartar o suporte de teste e repetir o procedimento desde o in cio usando um novo suporte 10 mVerter o frasco de tamp o de corrida e mant lo na posi o vertical sem inclinar sobre o po o 2 Adicionar quatro gotas de tamp o lentamente ao po o 2 Deixar o teste correr por 10 minutos ap s a adi o do tamp o ao po o 2 a temperatura entre 15 a 25 Caso n o haja migra o ap s 3 minutos da adi o do tamp o no po o 2 descartar o teste ATEN O Ap s a leitura descartar o suporte a al a e
6. 2 35 2001 8 Essex M Kanki P J Marlink R et al Antigenic characterization of the human immunodefi ciency viruses J AM Acad Dermatol 22 1206 1210 1990 9 Manual de Instru es de Uso do Kit TR DPP HIV 1 2 Bio Manguinhos Fevereiro 2011 10 Portaria SVS MS N 151 de 14 de outubro de 2009 6 Em caso de solicita es ou notifica es Entre em contato com o SAC de Bio Manguinhos Avenida Brasil 4365 Manguinhos Cep 21040 900 RJ RJ Tel 21 3882 7101 Fax 21 3882 7176 SAC 08000 210 310 ou sac bio fiocruz Dr 17
7. ases At hoje foram descritos dois tipos de HIV denominados HIV 1 e HIV 2 Tamb m t m sido descritas variantes gen micas subtipos para os isolados do HIV 1 o que confere a classifica o dos v rus em dois grupos principais M major e O outlier com variabilidade gen tica de at 30 entre eles No grupo M identificam se nove subtipos A B C D E F G H e I e no grupo O apenas um Em rela o ao HIV 2 descrevem se cinco subtipos A B C D e E A homologia gen tica observada nos genomas provirais do HIV 1 e HIV 2 de aproximadamente 40 45 o que determina a codifica o e s ntese de diversos produtos g nicos semelhantes Este fato justifica certa taxa de sororreatividade cruzada entre ambos observada nos testes sorol gicos diagn sticos No indiv duo infectado o v rus causa uma redu o da subpopula o de c lulas T chamadas de c lulas T helper que torna esses pacientes suscet veis a infec es oportunistas e certas malignidades As principais vias de transmiss o s o rela o sexual desprotegida contamina o por sangue ou hemoderivados e a transmiss o de m e para filho durante o parto O envelope do HIV o principal alvo da resposta imune A presen a do v rus faz com que o sistema imune dos pacientes produza anticorpos anti HIV A detec o destes anticorpos pode ser usada como um instrumento de diagn stico Ensaios imunoenzim ticos testes r pidos imunofluoresc ncia Weste
8. imentos do laborat rio rm g e a o o Hold 2 0 E lt em o E f O QU q Q aa 8 0 82 p e et 5 Conserva o e estocagem do material O kt TR DPP HIV 1 2 Bio Manguinhos SSP deve ser armazenados entre 2 e 30 C Recomenda se a conserva o do kit em geladeira somente em locais onde a temperatura ambiente ultrapasse 30 C Os suportes de teste devem permanecer lacrados at o momento de sua utiliza o O tamp o de corrida deve ser mantido em seu recipiente original 6 Considera es finais O kit TR DPPO HIV 1 2 Bio Manguinhos SSP deve ser utilizados segundo as instru es contidas neste manual e ou manual que acompanha o kit visando obten o de resultados adequados Somente abra o envelope laminado contendo o suporte de teste no momento de sua utiliza o N o utilize kits ou componentes com a data de validade vencida Um resultado reagente sugere a presen a de anticorpos para HIV 1 e ou HIV 2 na amostra testada n o diferenciando os tipos de v rus contidos na amostra Inicialmente pressup e se que um indiv duo que apresenta anticorpos para HIV 1 ou HIV 2 esteja infectado com HIV Exceto no caso dos volunt rios de estudos cl nicos com vacinas anti HIV que podem ter desenvolvido anticorpos vacinais estando ou n o infectados com
9. liga aos anticorpos espec ficos produzindo uma ou mais linhas na rea teste T determinando o surgimento de uma linha colorida rosa OU roxo Na aus ncia de anticorpo anti HIV 1 e ou anti HIV 2 n o h o aparecimento da linha teste sendo assim uma rea o n o regente A efici ncia do ensaio controlada para garantir a seguran a do teste Um reagente controle imobilizado na membrana do suporte determinar o surgimento de uma linha cuja presen a demonstrara que os reagentes est o funcionando corretamente rea controle C O TR DPP HIV 1 2 apresenta diversas vantagens O resultado liberado em menos de 30 minutos e sua execu o n o depende da utiliza o de equipamentos sofisticados Isto importante pois pode tornar o teste execut vel nos mais diversos ambientes laboratoriais 2 Apresenta o e componentes do ensaio Material Fornecido TR DPPO HIV 1 2 Bio Manguinhos SSP para 10 ou 20 determina es Suportes DPPO HIV com ant genos de HIV 1 2 embalados individualmente 10 ou 20 unidades Tamp o de corrida 01 frasco com 3 mL ou 6 mL Al as coletoras descart veis 10uL 10 ou 20 unidades Frasco para elui o 10 ou 20 frascos com 1 mL cada Lancetas est reis descart veis 10 ou 20 unidades Curativo Adesivo Est ril 10 ou 20 unidades Manual de Instru es de Uso Material Complementar n o fornecido Cron metro ou rel gio Luvas descart veis e jaleco para
10. o v rus Um resultado n o reagente n o exclui a possibilidade de exposi o ou infec o por HIV dado que uma resposta imunol gica exposi o recente pode levar algumas semanas para atingir n veis detect veis N o indicado o uso com amostras obtidas de crian as com idade inferior a 2 anos 7 Refer ncias bibliogr ficas 1 Centers for Disease Control and Prevention 1988 Universal precautions for revention of transmission of human immunodefi ciency virus hepatitis B virus and other loodborne pathogens in health care settings MMWR 37 24 377 388 2 Essex M Human immunodefi ciency viruses in the developing world Adv Virus Res 53 71 88 1999 3 Kanki P J Hopper J R and Essex M The origins of HIV 1and HTLV 4 HIV 2 Ann N Y Acad Sci 511 370 375 1987 4 Nicoll A Gill O N The global impact of HIV infection and disease Commum Dis Publ Health 2 85 95 1999 5 Valdiserri R O Holtgrave D R West G R Promoting early diagnosis and entry into care AIDS 13 2317 2330 1999 6 UNAIDS WHO Press Release HIV Infection rates decreasing in several countries but globally number of people living with HIV continue to rise Available at www unaids org epi 2005 doc docs PR EpiUpdateNovo 5en pdf 1 3 2005 7 Centers for Disease Control and Prevention Revised guidelines for HIV counseling testing and referral and revised recommendations for HIV screening of pregnant women MMMWR 50 19 3
11. prote o individual Algod o lcool 70 gua sanit ria ou solu o de hipoclorito de s dio a 2 5 Recipiente para descarte de material biol gico e perfuro coriante Figura 1 TR DPPOHIV 1 2 SSP 3 Procedimento para realiza o do TR DPPO HIV 1 2 Bio Manguinhos SSP Certifique se de que a amostra a ser testada esteja temperatura ambiente Caso a amostra tenha sido refrigerada ou congelada permitir que a mesma alcance a temperatura ambiente 15 a 25 C antes de ser utilizada Retirar o n mero necess rio de componentes do kit TR DPP HIV 1 2 Bio Manguinhos SSP necess rios execu o do ensaio e coloc los sobre uma superf cie plana Certifique se de que os componentes do kit estejam temperatura ambiente no momento do uso Retirar o suporte de teste do envelope laminado e identific lo com o n mero de registro do paciente ou n mero de identifica o da amostra al m do n mero do lote do kit de onde o teste foi retirado Po o 2 A Janelas de Teste com TAMP O Linhas Azuis e Verde Do Po o 1 AMOSTRA TAMP O Antes de coletar a amostra de sangue soro ou plasma identificar o frasco para elui o com o nome do indiv duo ou n mero de identifica o e desenrosque o dosador parte branca do frasco mantendo a tampa azul rosqueada no dosador Encostar a al a coletora de 10 uL na amostra a ser testada permitindo que a al a seja preenchida
12. rn Blot t cnicas de PCR e diversos outros m todos est o dispon veis para a detec o do HIV 1 e HIV 2 O TR DPP HIV 1 2 Bio Manguinhos SSP um teste r pido de uso nico visando a detec o de anticorpos espec ficos da infec o pelo HIV tipos 1 e 2 HIV 1 grupo M e O e HIV 2 subtipo A B C D e E em amostras de sangue total venoso pun o digital soro ou plasma humano Seu uso adequado em algoritmos utilizando testes r pidos para defini o do diagn stico da infec o pelo HIV conforme portaria 151 de 14 de outubro de 2009 Resultados reativos s o evid ncias de exposi o ao HIV 1 ou HIV 2 n o os diferenciando e podem ser usados como suporte ao diagn stico O TR DPP HIV 1 2 Bio Manguinhos emprega como reagente de captura uma combina o de ant genos virais HIV 1 e HIV 2 fixados a uma membrana de nitrocelulose suporte s lido anticorpos espec ficos e conjugado de proteina A com part culas de ouro coloidal O teste se baseia na tecnologia de imunocromatografia e utiliza plataforma de duplo percurso Para a execu o do ensaio a amostra a ser testada aplicada ao po o 1 no suporte e logo em seguida adicionado tamp o de corrida O tamp o propicia o fluxo e permite que os anticorpos anti HIV 1 e ou anti HIV 2 presentes na amostra liguem se aos ant genos formando um complexo Na etapa seguinte migra o da amostra adiciona se o tamp o de corrida ao po o 2 O conjugado se
Download Pdf Manuals
Related Search