Química Geral 13 Piccolo
Contents
1. cido asc rbico 0 8 1 2 20 dim 11 Dopamina 19 dim 80 L dopa 5 dim 71 Epinefrina 1 dim 45 Glutationa 30 dim 13 Glicose GLU Oxalacetato 132 dim 11 Piruvato 0 3 0 9 44 dim 13 Bilirrubina total TBIL Dopamina 19 dim 55 L dopa 5 dim 17 cido rico cido asc rbico 0 8 1 2 20 dim 13 Epinefrina 1 dim 14 L dopa 5 dim 78 Metildopa 0 1 0 5 0 5 dim 12 Rifampicina 0 4 3 1 5 dim 14 Acido salicilico 15 30 25 dim 20 aum aumento dim diminui o Para mais informa es sobre subst ncias qu micas potencialmente interferentes consulte a Bibliografia P gina 12 de 23 11 Valores esperados Foram utilizadas amostras de um total de 193 adultos do sexo masculino e feminino analisadas no Analisador Qu mico de Sangue Piccolo para determinar os intervalos de refer ncia para a ALT albumina ALP amilase c lcio creatinina glicose bilirrubina total prote na total e BUN Foram utilizadas amostras de um total de 186 adultos do sexo masculino e feminino para determinar o intervalo de refer ncia para a AST e cido rico Foram utilizadas amostras de um total de 131 adultos do sexo masculino e feminino para determinar o intervalo de refer ncia para a GGT Estes intervalos s o fornecidos apenas como orienta o Recomenda se que o seu departamento ou a sua institui o estabele am os intervalos normais para a sua popula o de doentes espec fica Tabela 4 Inte2. Creatinina N vel 1 N vel 2 N vel 3 N 62 62 62 M dia 0 89 2 07 6 89 CV 11 0 5 0 1 6 Intervalo observado 0 7 1 2 1 8 2 3 6 5 7 2 Percentagem de resultados 93 6 100 100 dentro do intervalo 58 62 62 62 62 62 IC de 95 94 2 a 100 Gama glutamiltransferase GGT N vel 1 N vel 2 N vel 3 N 62 62 62 M dia 35 0 U L 86 2 U L 131 3 U L CV 2 8 1 5 1 5 Intervalo observado 33 38 83 90 123 135 Percentagem de resultados 100 100 100 dentro do intervalo 62 62 62 62 62 62 10 4 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 15 0 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 Glicose N vel 1 N vel 2 N vel 3 N 62 62 62 M dia 95 2 130 3 365 8 CV 1 1 1 0 0 8 Intervalo observado 93 98 125 133 351 373 Percentagem de resultados 100 100 100 dentro do intervalo 62 62 62 62 62 62 IC de 95 94 2 a 100 Foi considerado o intervalo de 65 mg dL 99 mg dL Bilirrubina total TBIL 15 0 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 P gina 19 de 23 N vel 1 N vel 2 N vel 3 N 62 62 62 M dia 0 86 mg dL 2 5 mg dL 5 7 mg dL CV 6 1 2 6 1 8 Intervalo observado 0 8 1 0 2 3 2 6 5 4 5 9 Percentagem de resultados 100 100 100 dentro do intervalo 62 62 62 62 62 62 IC de 95 94 2 a 100 Prote na total TP N vel
3. albumina o p rpura de bromocresol BCP muda de cor de amarelo para azul A absorv ncia m xima varia com a mudan a de cor Surfactantes BCP Albumina Complexo albumina BCP pH cido A albumina ligada proporcional concentra o de albumina na amostra Trata se de uma reac o de ponto final que medida como a diferen a de absorv ncia entre 600 nm e 550 nm Fosfatase alcalina ALP As t cnicas de medi o da fosfatase alcalina foram inicialmente desenvolvidas h mais de 60 anos V rios destes m todos espectrofotom tricos de ponto final ou de dois pontos gt s o actualmente considerados obsoletos ou pouco pr ticos A utiliza o de fosfato p nitrofenil p NPP aumentou a velocidade da reac o A fiabilidade desta t cnica foi significativamente melhorada com a utiliza o de um tamp o de i es met licos para manter a concentra o de i es de magn sio e zinco na reac o O m todo de refer ncia da Associa o Americana de Quimica Cl nica American Association for Clinical Chemistry AACC utiliza o p NPP como substrato e um tamp o de ides met licos O procedimento Piccolo consiste numa modifica o dos m todos da AACC e da IFCC A fosfatase alcalina hidrolisa o p NPP num tamp o de i es met licos e forma p nitrofenol e fosfato ALP Fosfato p nitrofenil gt p NITROFENOL Fosfato Zn Mg A quantidade de ALP na amostra proporc
4. ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 895 898 4 Wroblewski F LaDue JS Serum glutamic pyruvic transminase in cardiac and hepatic disease Proc Soc Exp Biol Med 1956 91 569 571 5 Bergmeyer HU Horder M IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 3 IFCC method for alanine aminotransferase J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 521 534 6 Howe PE The use of sodium sulfate as the globulin precipitant in the determination of proteins in blood J Biol Chem 1921 49 93 107 7 Howe PE The determination of proteins in blood a micro method J Biol Chem 1921 49 109 113 8 Wolfson WQ et al A rapid procedure for the estimation of total protein true albumin total globulin alpha globulin beta globulin and gamma globulin in 10 ml of serum Am J Clin Pathol 1948 18 723 730 9 Saifer A Gerstenfeld S Vacsler F Photometric microdetermination of total serum globulins by means of a tryptophan reaction Clin Chem 1961 7 626 636 10 Saifer A Marven T The photometric microdetermination of serum total globulins with a tryptophan reaction a modified procedure Clin Chem 1966 12 414 417 11 Gendler SM Albumin In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 1029 1033 12 Webster D Bignell AHC EC Attwood An assessment of the suitability of bromocresol green for th
5. 0 1 0 7 4 a cetoglutarato 5 Cetoprofeno 50 Meticilina 100 Metotrexato 0 1 0 5 Metildopa 0 1 0 5 0 5 Metronidazol 0 1 5 Nafcilina 1 Nitrofurantoina 0 2 20 Oxacilina 1 Oxalacetato 132 Fenitoina 1 2 3 Prolina 4 Piruvato 0 3 0 9 44 Rifampicina 0 4 3 1 5 cido salic lico 15 30 25 Sulfalazina 2 4 10 Sulfanilamida 10 15 50 Teofilina 1 2 20 P gina 11 de 23 e As seguintes subst ncias apresentaram uma interfer ncia superior a 10 A interfer ncia significativa define se como um desvio no resultado gt 10 para uma amostra de intervalo normal Os pools de soro humano foram suplementados com concentra es conhecidas dos f rmacos ou qu micos e posteriormente analisados Tabela 3 Subst ncias com interfer ncia significativa gt 10 Intervalo Concentra o com de interfer ncia fisiol gico interfer ncia gt 10 terap utico mg dL mg dL Alanina aminotransferase ALT cido asc rbico 0 8 1 2 20 aum 11 Oxalacetato 132 aum 843 Albumina ALB Acetoacetato 0 05 3 60 102 dim 18 Ampicilina 0 5 30 dim 12 Cafeina 0 3 1 5 10 dim 14 Cloreto de c lcio 20 dim 17 Cefalotina Keflin 10 400 aum 13 Ibuprofeno 0 5 4 2 50 aum 28 a cetoglutarato 5 dim 11 Nitrofurantoina 0 2 20 dim 13 Prolina 4 aum 12 Sulfalazina 2 4 10 dim 14 Sulfanilamida 10 15 50 dim 12 Teofilina 12 20 dim 11 Fosfatase alcalina ALP Teofilina 12 20 dim 42 Creatinina CRE
6. 2 1 Nivel de controlo 2 M dia 145 DP 1 83 CV I Calcio mg dL Nivel de controlo 1 M dia 8 6 DP 0 21 CV 2 4 N vel de controlo 2 M dia 11 8 DP 0 39 CV oe Creatinina mg dL Nivel de controlo 1 M dia 1 1 DP 0 14 CV 12 5 N vel de controlo 2 M dia 5 2 DP 0 23 CV at Gama glutamiltransferase U L Nivel de controlo 1 M dia 25 DP 0 59 CV 2 34 Nivel de controlo 2 M dia 106 DP 1 52 CV 1 43 Glicose mg dL Nivel de controlo 1 M dia 66 DP 0 76 CV 1 1 Nivel de controlo 2 M dia 278 DP 2 47 CV i Pagina 15 de 23 Total 49 0 92 1 9 147 1 70 1 2 8 6 0 25 2 9 11 8 0 40 3 4 1 1 0 14 13 1 52 0 27 52 25 0 74 2 94 106 2 29 2 15 66 1 03 1 6 278 3 84 1 4 Tabela 6 Precis o N 80 continua o Analito Intra ensaio Total Bilirrubina total mg dL N vel de controlo 1 M dia 0 8 0 8 DP 0 06 0 07 CV 8 0 9 3 Nivel de controlo 2 M dia 5 2 5 2 DP 0 09 0 15 CV 19 2 8 Proteina total g dL Nivel de controlo 1 M dia 6 8 6 8 DP 0 05 0 08 CV 0 8 1 2 Nivel de controlo 2 M dia 4 7 4 7 DP 0 09 0 09 CV 2 0 2 0 Azoto ureico no sangue mg dL Nivel de controlo 1 M dia 19 19 DP 0 35 0 40 MCV 1 9 2 1 Nivel de controlo 2 M dia 65 65 DP 1 06 1 18 CV 1 6 1 8 Acido rico mg dL Nivel de controlo 1 M dia 3 8 3 8 DP 0 15 0 18 CV 4 0 4 8 Nivel de controlo 2 M dia 7 5 7 5 DP 0 24 0 29 CV 3 2 3 9 Coe
7. 9 Beckman aa 0 993 0 926 0 0 0 15 260 0 4 14 7 Paramax Creatinina mg dL 0 987 0 866 0 1 0 16 107 0 4 7 5 Beckman icy ae Ee LO 0 98 0 4 3 29 135 5 312 Paramax ic ee 1 0 1 60 3 1 18 57 49 27 1848 Beckman U L A 0 987 1 009 2 8 3 89 251 72 422 Paramax Glicose mg dL 0 997 0 943 12 469 91 56 646 Beckman Bilirrubina total 0 974 0 901 0 0 0 07 250 0 2 3 7 Paramax mg dL 0 980 1 113 0 4 0 09 91 0 1 6 4 Beckman Prote na total 0 849 0 932 0 6 0 19 251 5 7 9 2 Paramax g dL 0 873 0 935 0 3 0 16 92 6 5 9 2 Beckman Azoto ureico no 0 964 0 923 0 5 1 08 251 6 52 Paramax sangue mg dL 0 983 0 946 0 0 0 66 92 6 38 Beckman cido rico 0 979 0 958 0 3 0 20 159 1 4 7 6 Paramax mg dL 0 975 0 908 0 6 0 31 44 2 1 12 1 DAX As amostras de soro de doentes hospitalizados forneceram um intervalo da amostra mais amplo e possivelmente mais til do que as amostras de sangue total venoso de doentes em ambulat rio As estat sticas de correla o para o teste de c lcio Piccolo resultam destas amostras s ricas Um local processou apenas soro no Analisador Piccolo para a correla o de gama glutamiltransferase Resultados do estudo com utilizadores sem forma o Foi realizado um estudo com utilizadores sem forma o no qual os participantes receberam apenas as instru es do teste e lhes foi solicitado que realizassem testes em 3 discos com amostras aleatorizadas e com oculta o As amostras consistiam em pools de soro preparados a
8. L gama glutamiltransferase 5 U L glicose 10 mg dL 0 56 mmol L bilirrubina total 0 1 mg dL 1 7 pmol L prote na total 2 g dL 20 g L azoto ureico 2 0 mg dL 0 7 mmol ureia L e cido rico 1 mg dL 0 1 mmol L Precis o Foram realizados estudos de precis o utilizando as directrizes NCCLS EP5 T2 Os resultados intra ensaio e de precis o total foram determinados testando dois n veis de material de controlo Os controlos foram analisados em duplicado duas vezes por dia durante 20 dias ao longo de um per odo de quatro semanas Os resultados dos estudos de precis o s o apresentados na Tabela 6 Tabela 6 Precis o N 80 Analito Intra ensaio Total Alanina aminotransferase U L N vel de controlo 1 M dia 21 21 DP 2 76 2 79 CV 13 4 13 5 Nivel de controlo 2 M dia 52 52 DP 2 70 3 25 CV 5 2 6 2 Albumina g dL Nivel de controlo 1 M dia 5 6 5 6 DP 0 09 0 11 CV 1 7 2 1 N vel de controlo 2 M dia 3 7 3 7 DP 0 07 0 11 CV 2 0 2 9 Fosfatase alcalina U L Nivel de controlo 1 M dia 39 39 DP 1 81 2 29 CV 4 6 5 8 Nivel de controlo 2 M dia 281 281 DP 4 08 8 75 CV 1 5 3 1 Amilase U L Nivel de controlo 1 M dia 46 46 DP 2 40 2 63 CV 5 2 5 7 N vel de controlo 2 M dia 300 300 DP 11 15 11 50 CV 3 7 ee P gina 14 de 23 Tabela 6 Precis o N 80 continua o Analito Intra ensaio Aspartato aminotransferase U L N vel de controlo 1 M dia 47 DP 0 98 CV
9. detectada utilizando apenas a creatinina no soro Assim o Programa Nacional de Educa o para a Doen a Renal EUA recomenda vivamente que os laborat rios comuniquem regularmente uma Taxa de Filtra o Glomerular estimada TFGe quando se medir a creatinina no soro em doentes com idades iguais ou superiores a 18 anos A comunica o regular da TFGe com todas as determina es de creatinina no soro permite que os laborat rios ajudem a identificar indiv duos com uma fun o renal reduzida e a facilitar a detec o de DRC Os valores de TFGe calculados lt 60 mL min s o geralmente associados a um aumento do risco de resultados adversos de DRC O c lculo da TFGe realizado pelo Piccolo utilizando a idade o sexo e a ra a do doente O m todo Piccolo para a creatinina rastre vel ao m todo de refer ncia de IDMS para creatinina pelo que poss vel utilizar a seguinte forma da equa o MDRD para calcular a TFGe TFG mL min 1 73 m 175 x Sc x Idade 2 x 0 742 para mulheres x 1 212 para afro americanos Gama glutamiltransferase GGT Os primeiros m todos quantitativos desenvolvidos para medir a gama glutamiltransferase GGT envolviam uma segunda reac o para formar um corante azo que era combinado com um crom foro A mudan a para L y glutamil p nitroanilida como substrato na reac o eliminou o passo de forma o de corante Devido fraca solubilidade e estabilidade da L y glutamil p nitroanilida este pr
10. glicose 6 fosfato G 6 P e difosfato de adenosina ADP A glicose 6 fosfato desidrogenase G 6 PDH catalisa a reac o de G 6 P em 6 fosfogliconato e a redu o de nicotinamida adenina dinucle tido NAD em NADH P gina 5 de 23 Hexoquinase Glicose ATP _ Glicose 6 fosfato ADP G 6 PDH G 6 P NAD _ 6 fosfogliconato NADH A absorvancia medida bicromaticamente a 340 nm e 850 nm A produ o de NADH directamente proporcional quantidade de glicose presente na amostra Bilirrubina total TBIL Os n veis de bilirrubina total t m sido normalmente medidos por testes que utilizam cido sulfan lico diazotado gt Foi desenvolvido um m todo mais recente e mais espec fico utilizando a enzima bilirrubina oxidase gt 7 Al m de utilizar o m todo de teste de bilirrubina total mais espec fico a fotodegrada o do analito minimizada nos Analisadores Piccolo uma vez que a amostra pode ser testada imediatamente ap s a colheita No procedimento enzim tico a bilirrubina oxidada pela bilirrubina oxidase em biliverdina Bilirrubina oxidase Bilirrubina O _ gt Biliverdina H O A bilirrubina quantificada como a diferen a de absorvancia entre 467 nm e 550 nm A absorv ncia inicial desta reac o de ponto final determinada pela cuvete de bilirrubina de branco e a absorv ncia final obtida a
11. tr s n veis para cada um dos treze analitos ALT albumina ALP AMY AST c lcio creatinina GGT glicose bilirrubina total prote na total BUN e UA Os participantes n o receberam qualquer forma o sobre a utiliza o P gina 17 de 23 do teste No total foram inscritos aproximadamente 60 participantes de 3 locais representando uma popula o demogr fica educa o idade sexo etc variada As tabelas abaixo apresentam o resumo do desempenho para cada analito Alanina aminotransferase ALT 15 0 IC de 95 91 3 a 100 IC de 95 94 2 a 100 Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 N 62 62 62 M dia 45 4 U L 98 9 U L 184 3 U L MCV 3 7 1 7 1 5 Intervalo observado 42 53 96 103 175 191 Percentagem de resultados 98 4 100 100 dentro do intervalo 61 62 62 62 62 62 IC de 95 94 2 a 100 s W a pu a Esta percentagem baseia se no pressuposto de que n o se consegue distinguir devidamente entre valores normais e anormais quando os erros s o superiores a um quarto do intervalo normal Foi considerado o intervalo de 10 U L 47 U L Albumina N vel 1 N vel 2 N vel 3 N 62 62 62 M dia 3 0 g dL 3 5 g dL 4 2 g dL CV 2 7 2 5 1 8 Intervalo observado 2 9 3 2 3 3 3 7 4 0 4 4 Percentagem de resultados 100 100 100 dentro do intervalo 62 62 62 62 62 62 12 5 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 Fosfatas
12. 000 U L 5 2000 U L C lcio 4 0 16 0 mg dL 1 0 4 0 mmol L Creatinina 0 2 20 mg dL 18 1768 pmol L Gama glutamiltransferase GGT 5 3000 U L 5 3000 U L Glicose 10 700 mg dL 0 56 38 9 mmol L Bilirrubina total TBIL 0 1 30 mg dL 1 7 513 pmol L Prote na total TP 2 14 g dL 20 140 g L Azoto ureico BUN 2 180 mg dL 0 7 64 3 mmol ureia L cido rico 1 15 mg dL 0 1 0 9 mmol L Se a concentra o de analitos se situar acima do intervalo de medi o intervalo din mico mas for inferior ao intervalo do sistema o cart o impresso ir indicar um sinal gt no limite superior e um asterisco depois do n mero por exemplo ALT gt 2000 U L Se for inferior ao intervalo din mico ser impresso um lt com um asterisco por exemplo ALT lt 5 U L Para valores que se situem largamente fora do intervalo de medi o intervalo do sistema ser impresso em vez de um resultado Sempre que for apresentado num cart o impresso recolha uma nova amostra e reprocesse o teste Se os resultados da segunda amostra forem novamente suprimidos contacte o Servi o de Apoio ao Cliente da Abaxis P gina 13 de 23 Sensibilidade limites de detec o O limite inferior de detec o do intervalo report vel din mico para cada analito de alanina aminotransferase 5 U L albumina 1 g dL 10 g L fosfatase alcalina 5 U L amilase 5 U L aspartato aminotransferase 5 U L c lcio 4 0 mg dL 1 0 mmol L creatinina 0 2 mg dL 18 pmol
13. 1 N vel 2 N vel 3 N 62 62 62 M dia 4 8 g dL 5 7 g dL 7 1 g dL CV 2 0 1 5 1 5 Intervalo observado 4 6 5 3 5 3 5 9 6 7 7 5 Percentagem de resultados 98 4 100 100 dentro do intervalo 61 62 62 62 62 62 5 9 IC de 95 91 3 a 100 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 Azoto ureico no sangue BUN N vel 1 N vel 2 N vel 3 N 62 62 62 M dia 15 1 41 0 712 2 CV 2 3 2 5 1 8 Intervalo observado 14 16 37 43 68 75 Percentagem de resultados 100 100 100 dentro do intervalo 62 62 62 62 62 62 15 0 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 15 0 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 cido rico N vel 1 N vel 2 N vel 3 N 62 62 62 M dia 2 96 4 92 11 10 CV 4 7 3 1 2 8 Intervalo observado 2 7 3 4 4 6 5 7 10 4 12 1 Percentagem de resultados 100 100 100 dentro do intervalo 62 62 62 62 62 62 IC de 95 94 2 a 100 13 Bibliografia 1 Tonhazy NE NG White WW Umbreit A rapid method for the estimation of the glutamic aspartic transaminase in tissues and its application to radiation sickness Arch Biochem 1950 28 36 42 2 Reitman S Frankel S A colorimetric method for the determination of serum glutamic oxalacetic and glutamic pyruvic transaminases Am J Clin Pathol 1957 28 56 63 3 Murray RL Alanine aminotransferase In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2
14. 2 Pagina 23 de 23
15. Qu mica Geral 13 Piccolo Servi o de Apoio ao Cliente e de Assist ncia T cnica 800 822 2947 Aplic vel apenas a clientes nos EUA Os clientes fora dos EUA dever o contactar o representante local Dispensa dos crit rios CLIA Utilizar da Abaxis para solicitar o servi o de apoio ao cliente apenas sangue total com heparina de l tio Complexidade moderada Utilizar sangue total com heparina de l tio plasma com heparina de l tio ou soro Fevereiro 2014 PN 400 7149 Rev N 2004 Abaxis Inc Union City CA 94587 1 Aplica o O disco de reagente de Qu mica Geral 13 Piccolo utilizado com o Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress destina se a ser utilizado para a determina o quantitativa in vitro de alanina aminotransferase ALT albumina fosfatase alcalina ALP amilase aspartato aminotransferase AST c lcio creatinina gama glutamiltransferase GGT glicose bilirrubina total prote na total azoto ureico no sangue BUN e cido rico em sangue total heparinizado plasma heparinizado ou soro em laborat rios cl nicos ou locais de presta o de cuidados Apenas para clientes nos EUA Os testes contidos neste painel est o dispensados ao abrigo dos regulamentos CLIA de 1988 Se um laborat rio modificar as instru es do sistema de testes estes ser o considerados de elevada complexidade e sujeitos a todos os requisitos CLIA Nos laborat rios com dispensa dos cri
16. amento de Trinder a peroxidase catalisa a reac o entre per xido de hidrog nio 2 4 6 tribromo 3 cido hidroxibenz ico TBHBA e 4 aminoantipirina 4 A A AP num corante quinoneimina vermelho S o adicionados ferricianeto de pot ssio e ascorbato oxidase mistura da reac o para minimizar a potencial interfer ncia da bilirrubina e do cido asc rbico respectivamente P gina 4 de 23 Creatinina amidohidrolase Creatinina HO Creatina Creatina amidinohidrolase Creatina H O __ __ Sarcosina Ureia Sarcosina oxidase Sarcosina HO 0 G licina Formaldeido H20 Peroxidase HO TBHBA 4 AAP _ Corante quinoneimina vermelho H O S o utilizadas duas cuvetes para determinar a concentra o de creatinina na amostra A creatina end gena medida na cuvete de branco que subtra da da creatina end gena combinada e da creatina formada a partir das reac es enzim ticas na cuvete de teste Quando a creatina end gena for eliminada dos c lculos a concentra o de creatinina ser proporcional intensidade da cor vermelha produzida A reac o de ponto final medida como a diferen a de absorv ncia entre 550 nm e 630 nm TFGe calculada A creatinina no soro regularmente medida como indicador da fun o renal Uma vez que a creatinina influenciada pela idade pelo sexo e pela ra a a doen a renal cr nica DRC pode n o ser
17. analito na amostra Os detalhes dos c lculos de reac o de ponto final e cin tica encontram se no Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress A interpreta o dos resultados descrita no Manual do Operador Os resultados s o impressos em cart es de resultados fornecidos pela Abaxis Os cart es de resultados t m um verso autocolante para facilitar a coloca o nos ficheiros dos doentes 10 Limita es do procedimento As limita es gerais do procedimento s o descritas no Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress e O nico anticoagulante recomendado para utiliza o com o Sistema Qu mico de Sangue Piccolo ou o Sistema Qu mico Piccolo xpress a heparina de l tio N o utilize heparina de s dio e A Abaxis realizou estudos que demonstram que o EDTA fluoreto oxalato e qualquer anticoagulante que contenha i es de am nio interferem com pelo menos um dos qu micos contidos no Disco de Reagente de Qu mica Geral 13 Piccolo e As amostras com hemat critos com um excesso de volume de concentrado de eritr citos de 62 65 uma frac o de volume de 0 62 0 65 podem apresentar resultados inexactos As amostras com um n vel elevado de hemat critos podem ser inclu das nos relat rios como hemolisadas Estas amostras podem ser centrifugadas de forma a obter plasma e reprocessadas num novo disco de reagente e Qua
18. azenamento Armazene os discos de reagente nas respectivas bolsas seladas a 2 8 C 36 46 F N o exponha os discos abertos ou fechados a luz solar directa ou a temperaturas superiores a 32 C 90 F Pode utilizar os discos de reagente at ao prazo de validade inclu do na embalagem O prazo de validade tamb m est codificado no c digo de barras impresso no anel de c digo de barras Ser apresentada uma mensagem de erro no visor do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress se os reagentes estiverem fora do prazo Indica es de instabilidade deteriora o do disco de reagente Uma bolsa rasgada ou que apresente qualquer tipo de danos pode permitir a entrada de humidade no rotor n o utilizado e afectar adversamente o desempenho do reagente N o utilize um rotor de uma bolsa danificada P gina 8 de 23 6 Instrumento Consulte no Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress informa es completas sobre como utilizar o analisador 7 Colheita e prepara o das amostras As t cnicas de colheita das amostras s o descritas na sec o Colheita de amostras do Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress e Ovolume m nimo da amostra necess rio 100 uL de sangue total heparinizado plasma heparinizado soro ou material de controlo A c mara da amostra do disco de reagente pod
19. ciona a temperaturas ambiente entre os 15 C e os 32 C 59 90 F O tempo de an lise de cada Disco de Reagente de Quimica Geral 13 Piccolo inferior a 14 minutos O analisador mant m o disco de reagente temperatura de 37 C 98 6 F durante o intervalo de medi o Procedimento de teste Os procedimentos completos de colheita da amostra e os procedimentos passo a passo relativos ao funcionamento s o descritos no Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress Calibra o O Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress encontra se calibrado pelo fabricante antes do envio O c digo de barras impresso no anel de c digo de barras indica ao analisador os dados de calibra o espec ficos do disco Consulte o Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress P gina 9 de 23 Controlo de qualidade Consulte a Sec o 2 4 do Manual do Operador do Analisador Piccolo ou a Sec o 6 Calibra o e controlo de qualidade do Manual do Operador do Analisador Piccolo xpress O desempenho do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress pode ser verificado atrav s do processamento de controlos Para obter uma lista dos materiais de controlo de qualidade aprovados com os intervalos de aceita o contacte a Assist ncia T cnica da Abaxis Outros controlos base de soro humano ou pla
20. dores Piccolo uma modifica o do procedimento recomendado pela IFCC Nesta reac o a ALT catalisa a transfer ncia de um grupo amino de L alanina para a cetoglutarato para formar L glutamato e piruvato A lactato desidrogenase catalisa a convers o de piruvato em lactato Concomitantemente o NADH oxidado em NAD conforme ilustrado no seguinte esquema de reac o ALT L alanina o cetoglutarato t _ L glutamato Piruvato LDH Piruvato NADH H Lactato NAD A taxa de varia o da diferen a de absorvancia entre 340 nm e 405 nm deve se convers o de NADH em NAD e directamente proporcional quantidade de ALT presente na amostra Albumina ALB Os m todos iniciais utilizados para medir a albumina incluem t cnicas de fraccionamento e o teor de triptofano das globulinas Estes m todos s o de realiza o insustent vel e n o possuem uma especificidade elevada Duas t cnicas imunoquimicas s o consideradas como m todos de refer ncia mas s o dispendiosas e morosas As t cnicas de liga o por corante s o os m todos mais frequentemente utilizados para medir a albumina O verde de bromocresol BCG o m todo de liga o por corante mais frequentemente utilizado mas pode sobrestimar a concentra o de albumina especialmente no limite inferior do intervalo normal O p rpura de bromocresol BCP o corante mais espec fico utilizado Quando ligado
21. e alcalina ALP N vel 1 N vel 2 N vel 3 N 62 62 62 M dia 94 5 U L 171 5 U L 337 5 U L CV 5 2 3 2 2 4 Intervalo observado 85 106 160 184 287 388 Percentagem de resultados 100 100 100 dentro do intervalo 62 62 62 62 62 62 15 0 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 Amilase AMY N vel 1 N vel 2 N vel 3 N 62 62 62 M dia 72 1 U L 126 9 U L 260 0 U L CV 2 4 2 1 1 9 Intervalo observado 67 75 120 133 248 273 Percentagem de resultados 100 100 100 dentro do intervalo 62 62 62 62 62 62 15 0 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 15 0 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 Aspartato aminotransferase AST N vel 1 N vel 2 N vel 3 N 62 62 62 M dia 56 0 120 4 276 3 CV 2 4 1 1 1 0 Intervalo observado 54 60 117 124 266 285 Percentagem de resultados 100 100 100 dentro do intervalo 62 62 62 62 62 62 IC de 95 94 2 a 100 P gina 18 de 23 C lcio N vel 1 N vel 2 N vel 3 N 62 62 62 M dia 8 0 10 5 13 1 CV 1 7 1 5 1 4 Intervalo observado 7 7 8 4 10 1 11 0 12 6 13 4 Percentagem de resultados 100 100 100 dentro do intervalo 62 62 62 62 62 62 15 0 IC de 95 84 3 a 98 2 IC de 95 94 2 a 100 6 3 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100 IC de 95 94 2 a 100
22. e conter at 120 uL de amostra e As amostras de sangue total obtidas por pun o venosa devem apresentar se homog neas antes de serem transferidas para o disco de reagente Inverta suavemente o tubo de colheita v rias vezes imediatamente antes de transferir a amostra N o agite o tubo de colheita a agita o pode provocar hem lise e As amostras de sangue total por pun o venosa devem ser processadas no prazo de 60 minutos ap s a colheita As concentra es de glicose s o afectadas pelo tempo decorrido desde a ltima refei o do doente e pelo tipo de amostra colhida Para determinar os resultados de glicose com precis o as amostras devem ser colhidas de um doente que tenha estado em jejum durante pelo menos 12 horas A concentra o de glicose diminui aproximadamente 5 12 mg dL no espa o de 1 hora em amostras n o centrifugadas armazenadas temperatura ambiente e A refrigera o de amostras de sangue total pode provocar altera es significativas nas concentra es de aspartato aminotransferase creatinina e glicose A amostra pode ser separada em plasma ou soro e armazenada em tubos de amostra com tampa a 2 8 C 36 46 F caso n o seja poss vel processar a amostra no prazo de 60 minutos e Os resultados de bilirrubina total podem ser adversamente afectados pela fotodegrada o As amostras de sangue total que n o sejam processadas imediatamente n o devem ser armazenadas no escuro durante um per odo super
23. e determination of serum albumin Clin Chim Acta 1974 53 101 108 Pagina 20 de 23 13 Bibliografia continua o 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 41 42 43 Louderback A Mealey EH NA Taylor A new dye binding technic using bromcresol purple for determination of albumin in serum Clin Chem 1968 14 793 794 Abstract Pinnell AE Northam BE New automated dye binding method for serum albumin determination with bromcresol purple Clin Chem 1978 24 80 86 King EJ Armstrong AR A convenient method for determining serum and bile phosphatase activity Can Med Assoc J 1934 31 376 381 Kind PRN King EJ Estimation of plasma phosphatase by determination of hydrolysed phenol with amino antipyrine J Clin Pathol 1954 7 322 326 Ohmori Y Uber die Phosphomonoesterase Enzymologia 1937 4 217 231 Fujita H Uber die Mikrobestimmung der Blutphosphatase J Biochem Japan 1939 30 69 87 Petitclerc C et al Mechanism of action of Mg and Zn on rat placental alkaline phosphatase I Studies on the soluble Zn and Mg alkaline phosphatase Can J Biochem 1975 53 1089 1100 Tietz NW et al A reference method for measurement of alkaline phosphatase activity in human serum Clin Chem 1983 29 751 761 Bowers GN Jr et al IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part I General c
24. e tungst nio em solu es alcalinas de cido rico Foi desenvolvido um teste de cido rico com maior especificidade utilizando a enzima uricase espec fica para o cido rico Desde ent o este m todo passou a ser a t cnica qu mica cl nica padr o para o cido rico O m todo de uricase acoplado atrav s de um acabamento de peroxidase de Trinder Neste m todo a uricase catalisa a oxida o de cido rico em alanto na e per xido de hidrog nio A peroxidase catalisa a reac o entre o per xido de hidrog nio H 0 4 aminoantipirina 4 A AP e o cido 3 5 dicloro 2 hidroxibenzenosulf nico DHBSA num corante quinoneimina vermelho S o adicionados ferricianeto de s dio e ascorbato oxidase mistura da reac o para minimizar a potencial interfer ncia da bilirrubina e do cido asc rbico Uricase Acido rico O HO _ Alantoina CO H202 Peroxidase H 0 4 AAP DHBSA Corante quinoneimina H O A quantidade de cido rico na amostra directamente proporcional absorvancia do corante quinoneimina A absorvancia final desta reac o de ponto final medida bicromaticamente a 500 nm e 600 nm 4 Princ pios do procedimento Consulte no Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress os princ pios e limita es do procedimento 5 Descri o dos reagentes Reagentes Cada disco de reag
25. eigler E Eine kolorimetrische Bestimmungsmethode des Eiweisses Z Anal Chem 1914 53 242 245 Weichselbaum TE An accurate and rapid method for the determination of proteins in small amounts of blood serum and plasma Am J Clin Path 1946 16 40 49 Doumas BT et al A candidate reference method for determination of total protein in serum I Development and validation Clin Chem 1981 27 1642 1650 Fales FW Urea in serum direct diacetyl monoxime method In Selected Methods of Clinical Chemistry vol 9 Faulkner WR Meites S eds Washington D C American Association for Clinical Chemistry 1982 365 373 Van Slyke DD Cullen GE A permanent preparation of urease and its use in the determination of urea J Biol Chem 1914 19 211 228 Fawcett JK Scott JE A rapid and precise method for the determination of urea J Clin Pathol 1960 13 156 159 Chaney AL Marbach EP Urea and ammonia determinations Clin Chem 1962 8 130 132 Talke H Schubert GE Enzymatische Harnstoffbest immung in Blut und Serum im optischen Test nach Warburg Klin Wochensch 1965 43 174 175 Hallett CJ Cook JGH Reduced nicotinamide adenine dinucleotide coupled reaction for emergency blood urea estimation Clin Chim Acta 1971 35 33 37 Patton CJ Crouch SR Spectrophotometric and kinetics investigation of the Berthelot reaction for the determination of ammonia Anal Chem 1977 49 464 469 Sampson EJ et al A coupled enzyme equilibrium method for measuring urea i
26. ente de Qu mica Geral 13 Piccolo cont m esferas de reagente secas espec ficas do teste descritas abaixo inclu do em cada disco um reagente de branco de amostra seca composto por tamp o surfactantes excipientes e conservantes para utiliza o no c lculo de concentra es de alanina aminotransferase ALT albumina ALB fosfatase alcalina ALP amilase AMY aspartato aminotransferase AST c lcio CA gama glutamiltransferase GGT glicose GLU azoto ureico BUN e cido rico UA S o inclu dos no disco para creatinina CRE bilirrubina total TBIL e prote na total TP brancos de amostra dedicados Cada disco de reagente cont m ainda um diluente composto por surfactantes excipientes e conservantes Tabela 1 Reagentes Componente Quantidade Disco Adenosina 5 difosfato 4 ug Adenosina 5 trifosfato 11 Hg L alanina 874 ug 4 aminoantipirina HCl 4 AAP 20 Hg Arsenazo III sal s dico 3 Hg Ascorbato oxidase Cucurbita spp 0 5 U Acido L aspartico 426 ug Bilirrubina oxidase 0 1 U Purpura de bromocresol 2 ug 2 cloro p nitrofenil a D maltotridsido NPG3 40 ug Creatina amidinohidrolase Actinobacillus spp 2U Creatinina amidohidrolase Pseudomonas spp 1U Sulfato c prico 134 ug Acido 3 5 dicloro 2 hidroxibenzenosulfonico DHBSA 37 ug Glicose 6 fosfato desidrogenase leveduras 0 05 U Acido L glut mico desidrogenase f gado bovino 0 01U cido L glut mico y 3 carboxi 4 nitroanilida sal amon aco 30 ug Glic
27. ficiente Foram colhidas amostras de sangue total heparinizado e de soro de doentes em dois locais As amostras de sangue total foram analisadas pelo Analisador Quimico de Sangue Piccolo nos locais de colheita e as amostras de soro foram analisadas por m todos comparativos Em dois casos foram utilizados os resultados dos testes de amostras de soro pelo Analisador Piccolo que foram apropriadamente indicados na tabela Em alguns casos foram utilizadas amostras com elevada e reduzida suplementa o para cobrir o intervalo din mico Todas as amostras foram processadas isoladamente no mesmo dia A Tabela 7 apresenta estat sticas de correla o representativas P gina 16 de 23 Tabela 7 Correla o do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo com m todos comparativos Coeficiente de Declive Inter EPE N Intervalo M todo a cep o da amostra comparativo correla o RE 0 981 0 905 1 3 3 21 86 10 174 Paramax 0 985 0 946 2 5 2 84 67 10 174 Technicon U L s 0 854 1 001 0 3 0 22 261 1 1 5 3 Paramax Albumina maL 0 896 0 877 0 1 0 21 100 1 5 5 0 Beckman Fosfatase alcalina 0 988 0 970 5 9 3 97 99 27 368 Paramax U L 0 929 1 136 17 6 4 79 80 26 150 Technicon p 0 979 0 692 4 7 3 11 99 11 92 Paramax Amilase U L 0 963 1065 41 347 80 19 118 Technicon oe 0 93 0 87 53 276 159 13 111 Paramax ARINO ANSTETASE 1 0 0 97 3 0 1 9 46 13 252 DAX U L Tae 0 991 0 990 0 4 0 17 25 5 2 11 9 Paramax C lcio mg dL 0 673 0 742 1 8 0 22 81 8 1 9
28. ilglicina 317 ug Hexoquinase leveduras 0 1 U Pagina 7 de 23 Tabela 1 Reagentes continua o Componente Quantidade Disco a cetoglutarato sal diss dico 28 ug cido a cetoglut rico 72 ug Lactato desidrogenase cora o de galinha 0 002 U Lactato desidrogenase LDH microbiana 0 03 U Lactato desidrogenase Staphylococcus epidermidis 0 1 U Acetato de magn sio 7 ug Cloreto de magn sio 3 ug Malato desidrogenase MDH cora o de porco 0 01 U Nicotinamida adenina dinucle tido NAD 20 ug Nicotinamida adenina dinucle tido NADH reduzido 18 ug Peroxidase r bano silvestre 0 8 U Fosfato p nitrofenil p NPP 56 ug Ferricianeto de pot ssio 0 4 ug Iodeto de pot ssio 56 ug Sarcosina oxidase microrganismo 0 6 U Ferricianeto de s dio 1 ug Tartarato de pot ssio e s dio 686 ug 2 4 6 tribromo 3 cido hidroxibenz ico 188 pg Urease ervilha sabre 0 05 U Uricase microbiana 0 04 U Sulfato de zinco 3 ug Tamp es surfactantes excipientes e conservantes Advert ncias e precau es e Para utiliza o em diagn stico in vitro e O recipiente de diluente no disco de reagente automaticamente aberto ao fechar a gaveta do analisador N o poss vel reutilizar um disco com um recipiente de diluente aberto Certifique se de que a amostra ou o controlo foi colocada o no disco antes de fechar a gaveta e Os discos de reagente usados cont m fluidos corporais humanos Siga as boas pr ticas de seguran a laboratorial
29. ional taxa de aumento da diferen a de absorv ncia entre 405 nm e 500 nm Amilase AMY Foram desenvolvidos cerca de 200 testes diferentes para medir a amilase A maioria dos procedimentos utiliza uma solu o de polissacar deos tamponada mas emprega t cnicas de detec o diferentes Os m todos viscosim tricos n o apresentam precis o e exactid o suficientes enquanto os m todos turbidim tricos e iodom tricos s o dif ceis de padronizar Os m todos frequentemente utilizados s o o sacarog nico e o cromol tico A t cnica cl ssica de medi o da amilase consiste num m todo P gina 3 de 23 sacarog nico mas dif cil e morosa Recentemente foram desenvolvidos m todos cromol ticos que utilizam is 5 27 x y pal p nitrofenilglicosideos como substratos Estes ensaios apresentam uma especificidade mais elevada para amilase pancre tica do que para amilase salivar e s o f ceis de monitorizar No m todo Piccolo o substrato 2 cloro p nitrofenil a D maltotridsido CNPG3 reage com a o amilase na amostra do doente libertando 2 cloro p nitrofenol CNP A liberta o de CNP cria uma altera o da cor ot amilase CNPG3 ___ _ _ CNP D maltotri sido A reac o medida bicromaticamente a 405 nm e 500 nm A altera o da absorvancia devido forma o de CNP directamente proporcional actividade da o amilase na amostra Aspartato aminotransferase AST O teste de a
30. ior a 60 minutos Se n o for poss vel analisar a amostra dentro desse per odo dever ser separada em plasma ou soro e armazenada num tubo de amostra com tampa no escuro a baixas temperaturas e Para as amostras de sangue total ou de plasma utilize apenas tubos de colheita de amostras evacuados com heparina de l tio tampa verde Para as amostras de soro utilize tubos de colheita de amostras evacuados sem aditivos tampa vermelha ou tubos para separa o de soro tampa vermelha ou vermelha preta e Inicie o teste no prazo de 10 minutos ap s a transfer ncia da amostra para o disco de reagente 8 Procedimento Materiais fornecidos e Um Disco de Reagente de Qu mica Geral 13 Piccolo PN 400 1029 uma caixa de discos PN 400 0029 Materiais necess rios mas n o fornecidos e Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou Analisador Qu mico Piccolo xpress e As pipetas de transfer ncia de amostras volume fixo de aproximadamente 100 uL e as pontas s o fornecidas com cada Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou com o Analisador Qu mico Piccolo xpress e podem ser encomendadas novamente junto da Abaxis e Reagentes de controlo dispon veis no mercado recomendados pela Abaxis contacte o Servi o de Assist ncia T cnica da Abaxis para obter mais informa es sobre os materiais de controlo e os valores esperados e Temporizador Par metros de teste O Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress fun
31. izada embora empregue reagentes perigosos Os m todos indirectos medem a am nia criada a partir da ureia a utiliza o da enzima urease aumentou a especificidade destes testes A am nia quantificada por uma variedade de m todos incluindo a nessleriza o titula o de cido a t cnica de Berthelot e reac es enzim ticas acopladas No entanto os procedimentos de Berthelot catalisados s o inconstantes para a medi o de am nia amp As reac es enzim ticas acopladas s o r pidas apresentam uma elevada especificidade para a am nia e s o frequentemente utilizadas Uma destas reac es foi proposta como candidato a m todo de refer ncia Na reac o enzim tica acoplada a urease hidrolisa a ureia em am nia e di xido de carbono Ao combinar am nia com 2 oxoglutarato e nicotinamida adenina dinucle tido NADH reduzido a enzima glutamato desidrogenase GLDH oxida NADH em NAD Urease Ureia HO _ NH CO GLDH NH 2 oxoglutarato NADH L glutamato H O NAD A taxa de varia o da diferen a de absorvancia entre 340 nm e 405 nm deve se convers o de NADH em NAD e directamente proporcional quantidade de ureia presente na amostra P gina 6 de 23 cido rico UA Os primeiros m todos quantitativos para determinar as concentra es de cido rico no sangue basearam se na redu o de cido fosfot ngstico em azul d
32. lisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress suprime quaisquer resultados que sejam afectados por gt 10 de interfer ncia resultante de hem lise lip mia ou icter cia A indica o HEM LIP ou ICT respectivamente impressa no cart o de resultado em vez do resultado Para obter mais informa es sobre os n veis m ximos de subst ncias end genas contacte a Assist ncia T cnica da Abaxis Efeitos de subst ncias ex genas e terap uticas Foram seleccionadas trinta e cinco subst ncias ex genas e terap uticas como potencialmente interferentes para os m todos de teste da Abaxis com base nas recomenda es de Young A interfer ncia significativa define se como um desvio no resultado gt 10 para uma amostra de intervalo normal Os pools de soro humano foram suplementados com concentra es conhecidas dos f rmacos ou qu micos e posteriormente analisados Tabela 2 Subst ncias ex genas e terap uticas avaliadas Intervalo fisiol gico ou Concentra o mais elevada terap utico testada mg dL mg dL Acetaminofeno 1 2 100 Acetoacetato 0 05 3 60 102 cido acetilsalic lico 2 10 50 Ampicilina 0 5 30 cido asc rbico 0 8 1 2 20 Cafe na 0 3 1 5 10 Cloreto de c lcio 20 Cefalotina Keflin 10 400 Cloranfenicol 1 2 5 100 Cimetidina 0 1 1 16 L dopa 5 Dopamina 19 Epinefrina 1 Eritromicina 0 2 2 0 10 Glutationa 30 Ibuprofeno 0 5 4 2 50 Isoniazida
33. lquer resultado de um determinado teste que exceda o intervalo de ensaio dever ser analisado atrav s de outro m todo de teste aprovado ou enviado para um laborat rio de refer ncia N o dilua a amostra e processe novamente no Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou no Analisador Qu mico Piccolo xpress Advert ncia Testes extensivos com o Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress demonstraram que em casos muito raros a amostra distribu da no disco de reagente pode n o fluir devidamente para a c mara da amostra Devido ao fluxo n o uniforme poss vel que seja analisada uma quantidade de amostra inadequada e v rios resultados poder o encontrar se fora dos intervalos de refer ncia A amostra pode ser reprocessada utilizando um novo disco de reagente P gina 10 de 23 Interfer ncia Foram testadas subst ncias como interferentes com os analitos Foram preparados pools de soro humano A concentra o a que cada subst ncia potencialmente interferente foi testada baseou se nos n veis de teste da directriz NCCLS EP7 P Ffeitos de subst ncias end genas As subst ncias interferentes fisiol gicas hem lise icter cia e lip mia provocam altera es nas concentra es apresentadas de alguns analitos Os ndices de amostra encontram se impressos na parte inferior de cada cart o de resultado para informar o operador dos n veis de subst ncias interferentes presentes em cada amostra O Ana
34. lte R Bilirubin In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 1009 1015 Henry RJ Cannon DC Winkelman JW Clinical Chemistry Principles and Technics 2 ed New York Harper and Row 1974 417 421 1058 1059 National Committee for Clinical Laboratory Standards Interference testing in clinical chemistry proposed guideline NCCLS Publication EP7 P Wayne PA NCCLS 1986 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 3rd ed Washington DC AACC Press 1990 Benet LZ Williams RL Design and optimization of dosage regimens pharmacokinetic data In Goodman and Gilman s The Pharmacological Basis of Therapeutics 8th ed Gilman AG et al eds New York McGraw Hill Inc 1990 1650 1735 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 1991 supplement to the third edition Washington DC AACC Press 1991 Moss DW Henderson AR Enzymes In Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2 ed Burtis CA Ashwood ER eds Philadelphia W B Saunders Company 1994 735 896 Painter PC Cope JY Smith JL Appendix In Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2 ed Burtis CA Ashwood ER eds Philadelphia W B Saunders Company 1994 2161 2217 National Committee for Clinical Laboratory Standards Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices tentative guideline second edition NCCLS Document EP5 T2 Wayne PA NCCLS 199
35. n serum optimization and evaluation of the AACC study group on urea candidate reference method Clin Chem 1980 26 816 826 Folin O Denis W A new colorimetric method for the determination of uric acid in blood J Biol Chem 1912 1913 13 469 475 Brown H The determination of uric acid in human blood J Biol Chem 1945 158 601 608 Feichtmeir TV Wrenn HT Direct determination of uric acid using uricase Am J Clin Pathol 1955 25 833 839 Fossati P Prencipe L Berti G Use of 3 5 dichloro 2 hydroxy benzenesulfonic acid 4 aminophenazone chromogenic system in direct enzymic assay of uric acid in serum and urine Clin Chem 1980 26 227 231 National Committee for Clinical Laboratory Standards Physician s office laboratory guidelines tentative guideline second edition NCCLS Document POL1 T2 Wayne PA NCCLS 1992 National Committee for Clinical Laboratory Standards Procedures for the handling and processing of blood specimens approved guideline second edition NCCLS document H18 A2 Wayne PA NCCLS 1999 Pagina 22 de 23 13 Bibliografia continua o 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 Overfield CV Savory J Heintges MG Glycolysis a re evaluation of the effect on blood glucose Clin Chim Acta 1972 39 35 40 Rehak NN Chiang BT Storage of whole blood effect of temperature on the measured concentration of analytes in serum Clin Chem 1988 34 2111 2114 Sherwin JE Oberno
36. ncentration of enzymes Part 4 IFCC method for y glutamyltransferase J Clin Chem Clin Biochem1983 21 633 646 Folin O Wu H A system of blood analysis J Biol Chem 1919 38 81 110 Somogyi M A reagent for the copper iodometric determination of very small amounts of sugar J Biol Chem 1937 117 771 776 Nelson N A photometric adaptation of the Somogyi method for the determination of glucose J Biol Chem 1944 153 375 380 Kaplan LA Glucose In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 850 856 Malloy HT Evelyn KA The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter J Biol Chem 1937 119 481 490 Meites S Bilirubin direct reacting and total modified Malloy Evelyn method In Selected Methods of Clinical Chemistry vol 9 Faulkner WR Meites S eds Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1982 119 124 58 Murao S Tanaka N A new enzyme bilirubin oxidase produced by Myrothecium verrucaria MT 1 Agric Biol Chem 1981 45 2383 2384 Osaki S Anderson S Enzymatic determination of bilirubin Clin Chem 1984 30 971 Abstract Perry B et al of total bilirubin by use of bilirubin oxidase Clin Chem 1986 32 329 332 Koller A Kaplan LA Total serum protein In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 1057 1060 R
37. ning serum creatinine Clin Chem 1975 21 1422 1426 Jaynes PK Feld RD Johnson GF An enzymic reaction rate assay for serum creatinine with a centrifugal analyzer Clin Chem 1982 28 114 117 Fossati P Prencipe L and Berti G Enzymic creatinine assay a new colorimetric method based on hydrogen peroxide measurement Clin Chem 1983 29 1494 1496 Whelton A Watson AJ Rock RC Nitrogen metabolites and renal function In Tietz Textbook of Clinical Chemistry xe ed Burtis CA Ashwood ER eds Philadelphia W B Saunders Company 1994 1513 1575 Pagina 21 de 23 13 Bibliografia continua o 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 Ball EG Revel JP Cooper O The quantitative measurement of y glutamyl transpeptidase activity J Biol Chem 1956 221 895 908 Goldbarg JA et al The colorimetric determination of y glutamyl transpeptidase with a synthetic substrate Arch Biochem Biophys 1960 91 61 70 Orlowski M Meister A y Glutamyl p nitroanilide a new convenient substrate for determination and study of L and D y glutamyltranspeptidase activities Biochim Biophys Acta 1963 73 679 681 Persijn JP van der Slik W A new method for the determination of y glutamyltransferase in serum J Clin Chem Clin Biochem 1976 14 421 427 Shaw LM et al IFCC methods for the measurement of catalytic co
38. ocedimento foi modificado de modo a utilizar o substrato Ly glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida A Federa o Internacional de Qu mica Cl nica IFCC recomendou que o m todo de GGT se baseie neste substrato sendo a glicilglicina o outro substrato A Abaxis modificou o m todo da IFCC para reagir a 37 C A adi o de uma amostra contendo gama glutamiltransferase aos substratos L y glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida e glicilglicina gli gli provoca a forma o de L y glutamil glicilglicina glu gli gli e 3 carboxi 4 nitroanilina GGT L y glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida Gli gli Glu gli gli 3 carboxi 4 nitroanilina A absorvancia desta reac o de cin tica medida a 405 nm A produ o de 3 carboxi 4 nitroanilina directamente proporcional actividade da GGT na amostra Glicose GLU As primeiras medi es da concentra o de glicose foram realizadas utilizando m todos de redu o de cobre como o de Folin Wu e Somogyi Nelson A falta de especificidade das t cnicas de redu o de cobre conduziu ao desenvolvimento de procedimentos quantitativos que utilizam as enzimas hexoquinase e glicose oxidase O teste de glicose incorporado no disco de reagente de Qu mica Geral 13 Piccolo consiste numa vers o modificada do m todo de hexoquinase que foi proposto como a base para o m todo de refer ncia de glicose A reac o da glicose com trifosfato de adenosina ATP catalisada por hexoquinase HK produz
39. onsiderations concerning the determination of the catalytic concentration of an enzyme in the blood serum or plasma of man Clin Chim Acta 1979 98 163F 174F McNeely MDD Amylase In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 906 909 Zinterhofer L et al Nephelometric determination of pancreatic enzymes I Amylase Clin Chim Acta 1973 43 5 12 Centers for Disease Control CDC Alpha amylase methodology survey I Atlanta US Public Health Service Nov 1975 Somogyi M Modifications of two methods for the assay of amylase Clin Chem 1960 6 23 35 Gillard BK Markman HC Feig SA Direct spectro photometric determination of a amylase activity in saliva with p nitrophenyl a maltoside as substrate Clin Chem 1977 23 2279 2282 Wallenfels K et al The enzymic synthesis by transglucosylation of a homologous series of glycosidically substituted malto oligosaccharides and their use as amylase substrates Carbohydrate Res 1978 61 359 368 Karmen A A note on the spectrophotometric assay of glutamic oxalacetic transaminase in human blood serum J Clin Invest 1955 34 131 133 Bergmeyer HU et al Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 IFCC method for aspartate aminotransferase Clin Chem 1977 23 887 899 Bergmeyer HU Herder M Moss DW Provisional recommendations on IFCC methods for
40. ores hep ticos prim rios e secund rios Glicose Dist rbios do metabolismo dos hidratos de carbono incluindo diabetes mellitus e hipoglicemia em jovens e adultos Bilirrubina total Dist rbios hep ticos incluindo hepatite e obstru o da ves cula biliar icter cia Prote na total Doen as hep ticas renais da medula ssea dist rbios metab licos e nutricionais Azoto ureico no sangue BUN Doen as renais e metab licas cido rico Dist rbios renais e metab licos incluindo insufici ncia renal e gota P gina 1 de 23 Tal como acontece com qualquer procedimento de teste de diagn stico todos os outros procedimentos de teste incluindo o estado cl nico do doente devem ser considerados antes do diagn stico final P gina 2 de 23 3 Princ pios dos testes Alanina aminotransferase ALT A alanina aminotransferase ALT tem sido medida segundo tr s m todos Dois destes m todos a t cnica colorim trica de acoplamento de dinitrofenilhidrazina e o ensaio enzim tico fluorescente raramente s o utilizados A t cnica mais comum para determinar as concentra es de ALT no soro consiste no m todo enzim tico baseado na obra de Wroblewski e LaDue Foi proposto um procedimento de Wr blewski e LaDue modificado como o procedimento recomendado pela Federa o Internacional de Quimica Cl nica International Federation of Clinical Chemistry IFCC O m todo desenvolvido para utiliza o nos Analisa
41. partir da cuvete de teste de bilirrubina A quantidade de bilirrubina na amostra proporcional diferen a entre as medi es de absorv ncia inicial e final Prote na total TP O m todo de prote na total uma modifica o da reac o do biureto conhecida pela sua precis o exactid o e especificidade Originalmente desenvolvida por Riegler e modificada por Weichselbaum Doumas et al propuseram uma reac o do biureto como candidato a m todo de refer ncia para a prote na total Na reac o do biureto a solu o proteica tratada com i es c pricos Cu I num meio alcalino forte S o adicionados tartarato de pot ssio e s dio e iodeto de pot ssio para evitar a precipita o de hidr xido de cobre e a auto redu o de cobre respectivamente Os i es Cu II reagem com as liga es pept dicas entre os tomos de oxig nio no carbonilo e de nitrog nio no amido para formar um complexo Cu proteina colorido OH Prote na total Cu II gt gt gt Complexo Cu proteina A quantidade de prote na total presente na amostra directamente proporcional a absorv ncia do complexo Cu proteina O teste de prote na total uma reac o de ponto final e a absorv ncia medida como a diferen a de absorv ncia entre 550 nm e 850 nm Azoto ureico no sangue BUN A ureia pode ser medida directa e indirectamente A reac o da diacetilmonoxima o nico m todo directo para medir a ureia frequentemente util
42. quando manusear e eliminar discos usados Consulte no Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress as instru es de limpeza de derrames biologicamente perigosos e Os discos de reagente s o de pl stico e podem rachar ou partir se se ca rem Nunca utilize um disco que tenha ca do uma vez que pode espalhar materiais biologicamente perigosos no interior do analisador e As esferas de reagente podem conter cidos ou subst ncias c usticas O operador n o entra em contacto com as esferas de reagente se os procedimentos recomendados forem seguidos Na eventualidade de manuseamento das esferas por exemplo durante a limpeza depois de um disco cair e se partir evite a ingest o o contacto com a pele ou a inala o das esferas de reagente Instru es para o manuseamento de reagentes poss vel utilizar os discos de reagente directamente a partir do frigor fico sem aquecer N o permita que os discos permane am temperatura ambiente durante mais de 48 horas antes da utiliza o Abra a bolsa de alum nio selada e retire o disco tendo o cuidado de n o tocar no anel de c digo de barras localizado na parte superior do disco Utilize de acordo com as instru es fornecidas no Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress Um disco que n o seja utilizado dentro de 20 minutos ap s a abertura da bolsa dever ser eliminado Arm
43. rvalos de refer ncia do Analisador Piccolo Analito Unidades comuns Unidades SI Alanina aminotransferase ALT 10 47 U L 10 47 U L Albumina ALB 3 3 5 5 g dL 33 55 g L Fosfatase alcalina ALP Mulher 42 141 U L 42 141 U L Homem 53 128 U L 53 128 U L Amilase AMY 14 97 U L 14 97 U L Aspartato aminotransferase AST 11 38 U L 11 38 U L Calcio CA 8 0 10 3 mg dL 2 00 2 58 mmol L Creatinina CRE 0 6 1 2 mg dL 53 106 pmol L Gama glutamiltransferase GGT 5 65 U L 5 65 U L Glicose GLU 73 118 mg dL 4 05 6 55 mmol L Bilirrubina total TBIL 0 2 1 6 mg dL 3 4 27 4 umol L Proteina total TP 6 4 8 1 g dL 64 81 g L Azoto ureico no sangue BUN 7 22 mg dL 2 5 7 9 mmol ureia L cido rico UA Mulher 2 2 6 6 mg dL 0 13 0 39 mmol L Homem 3 6 8 0 mg dL 0 21 0 47 mmol L 12 Caracter sticas de desempenho Linearidade A qu mica de cada analito linear no intervalo din mico abaixo indicado quando o Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress utilizado de acordo com o procedimento recomendado consulte o Manual do Operador do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress Tabela 5 Intervalos din micos do Analisador Piccolo Analito Unidades comuns Unidades SI Alanina aminotransferase ALT 5 2000 U L 5 2000 U L Albumina ALB 1 6 5 g dL 10 65 g L Fosfatase alcalina ALP 5 2400 U L 5 2400 U L Amilase AMY 5 4000 U L 5 4000 U L Aspartato aminotransferase AST 5 2
44. sma podem n o ser compat veis Os materiais de controlo de qualidade devem ser armazenados de acordo com o folheto informativo inclu do nos controlos Se os resultados de controlo estiverem fora do intervalo repita o controlo uma vez Se continuarem fora do intervalo contacte a Assist ncia T cnica N o inclua os resultados no relat rio se os controlos estiverem fora dos limites rotulados Consulte no Manual do Operador do Analisador Piccolo ou Piccolo xpress uma descri o detalhada sobre o processamento registo interpreta o e representa o gr fica dos resultados de controlo Laborat rios abrangidos pela dispensa A Abaxis recomenda a realiza o de testes de controlo conforme os seguintes par metros e pelo menos a cada 30 dias e sempre que as condi es laboratoriais tiverem sofrido altera es significativas por exemplo se o Analisador Piccolo tiver sido deslocado para uma nova localiza o ou em caso de altera es no controlo da temperatura e nos casos em que seja indicada a forma o ou renova o da forma o de pessoal e com cada novo lote testes com dispensa dos crit rios CLIA em laborat rios com o estado de dispensa Laborat rios n o abrangidos pela dispensa A Abaxis recomenda que os testes de controlo sigam as directrizes federais estatais e locais 9 Resultados O Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress calcula e imprime automaticamente as concentra es do
45. spartato aminotransferase AST baseia se no m todo da taxa de Karmen conforme modificado por Bergmeyer O actual m todo de refer ncia da Federa o Internacional de Quimica Cl nica IFCC utiliza a t cnica de Karmen Bergmeyer de acoplamento da malato desidrogenase MDH e dinucle tido de nicotinamida NADH reduzido na detec o de AST no soro A lactato desidrogenase LDH adicionada reac o para reduzir a interfer ncia provocada pelo piruvato end geno A AST catalisa a reac o do L aspartato e do o cetoglutarato em oxaloacetato e L glutamato O oxaloacetato convertido em malato e o NADH oxidado em NAD pelo catalisador MDH AST L aspartato a cetoglutarato gt Oxaloacetato L glutamato MDH Oxaloacetato NADH t Malato NAD A taxa de varia o da absorv ncia a 340 nm 405 nm provocada pela convers o de NADH em NAD directamente proporcional a quantidade de AST presente na amostra C lcio CA Os primeiros m todos utilizados para analisar o c lcio envolveram a precipita o do c lcio com um excesso de ani es m todos de precipita o s o trabalhosos e frequentemente imprecisos O m todo de refer ncia para o c lcio a espectroscopia por absor o at mica contudo este m todo n o adequado utiliza o de rotina Os m todos espectrofotom tricos que utilizam complexona de o cresolftaleina ou arsenazo III como indicadores metalocr micos s o utili
46. t rios CLIA apenas pode ser testado sangue total com heparina de l tio Em laborat rios de complexidade moderada poss vel utilizar sangue total heparinizado com l tio plasma heparinizado com l tio ou soro necess rio um Certificado de Dispensa dos Crit rios CLIA para realizar testes com dispensa dos crit rios CLIA poss vel obter um Certificado de Dispensa junto dos Centros de Servi os Medicare e Medicaid CMS Contacte a Comiss o para Acredita o de Laborat rios Commission on Laboratory Accreditation COLA atrav s do n mero 1 800 981 9883 para saber como obter um Certificado 2 Resumo e explica o dos testes O Disco de Reagente de Qu mica Geral 13 Piccolo e o Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress cont m um sistema de diagn stico in vitro que ajuda o m dico no diagn stico das seguintes patologias Alanina aminotransferase ALT Doen as hep ticas incluindo hepatite viral e cirrose Albumina Doen as hep ticas e renais Fosfatase alcalina ALP Doen as hep ticas sseas da paratir ide e intestinais Amilase Pancreatite Aspartato aminotransferase AST Doen as hep ticas incluindo hepatite e icter cia viral choque C lcio Doen as da paratir ide doen as sseas e doen as renais cr nicas tetania Creatinina Doen a renal e monitoriza o de di lise renal Gama glutamiltransferase GGT Doen as hep ticas incluindo cirrose alco lica e tum
47. the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 Revised IFCC method for aspartate aminotransferase Clin Chem 1978 24 720 721 Kramer B Tisdall FF A simple technique for the determination of calcium and magnesium in small amounts of serum J Biol Chem 1921 47 475 481 Clark EP Collips JB A study of the Tisdall method for the determination of blood serum calcium with suggested modification J Biol Chem 1925 63 461 464 Katzman E Jacobi M The determination of serum calcium by titration with ceric sulfate J Biol Chem 1937 118 539 544 Cali JP et al A reference method for the determination of total calcium in serum In GR Cooper ed Selected Methods of Clinical Chemistry vol 8 Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1997 3 8 Kessler G M Wolfman An automated procedure for the simultaneous determination of calcium and phosphorus Clin Chem 1964 10 686 703 Michaylova V Ilkova P Photometric determination of micro amounts of calcium with arsenazo III Anal Chim Acta 1971 53 194 198 Scarpa A et al Metallochromic indicators of ionized calcium Ann NY Acad Sci 1978 307 86 112 Knoll VE Stamm D Spezifische kreatininbest immung im serum Z Klin Chem Klin Biochem 1970 8 582 587 Haeckel R Simplified determinations of the true creatinine concentration in serum and urine J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 385 394 Moss GA Bondar RJL Buzzelli DM Kinetic enzymatic method for determi
48. zados com maior frequ ncia O arsenazo III tem uma grande afinidade relativamente ao c lcio e n o depende da temperatura como a CPC 31 32 33 Os O c lcio na amostra do doente liga se ao arsenazo III para formar um complexo de c lcio corante Ca Arsenazo III Complexo de Ca Arsenazo III A reac o de ponto final monitorizada a 405 nm 467 nm e 600 nm A quantidade de c lcio total na amostra proporcional absorv ncia Creatinina CRE O m todo de Jaffe introduzido pela primeira vez em 1886 continua a ser um m todo frequentemente utilizado na determina o dos n veis de creatinina no sangue O m todo de refer ncia actual combina a utiliza o de terra de Fuller floridina com a t cnica de Jaffe para aumentar a especificidade da reaccao Foram desenvolvidos m todos enzim ticos mais espec ficos para creatinina do que as v rias modifica es da t cnica de Jaffe Os m todos que utilizam a enzima creatinina amidohidrolase eliminam o problema da interfer ncia de i es de am nio detectada nas t cnicas que utilizam a creatinina iminohidrolase Nas reac es enzim ticas acopladas a creatinina amidohidrolase hidrolisa a creatinina em creatina Uma segunda enzima a creatina amidinohidrolase catalisa a forma o de sarcosina a partir da creatina A oxidase de sarcosina provoca a oxida o de sarcosina em glicina formalde do e per xido de hidrog nio H202 Num acab
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