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Ensaio APTIMA COMBO 2

1. Estado de infec o do NAAT 1 NAAT 2 sree Maas o paciente UM EM UM UM EM Sint Assint Infectado N A 2 0 Infectado 10 4 Infectado N A N A 4 6 Infectado N A 2 0 Infectado N A 21 1 Infectado 3 3 Infectado 4 3 Infectado N A 1 0 Infectado N A 8 2 Infectado 12 4 Infectado 1 0 Infectado 1 3 Infectado N A 1 0 Infectado 1 1 Infectado 131 53 Nao infectado N A 0 2 N o infectado N A 13 8 N o infectado 461 303 N o infectado 10 5 N o infectado 3 4 N o infectado 5 0 Total 694 402 UM Urina masculina EM Esfrega o uretral masculino N A representa esp cime n o obtido ou dispon vel para teste Ensaio APTIMA COMBO 2 57 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabelas de desempenho para Neisseria gonorrhoeae Sensibilidade e especificidade para N gonorrhoeae Tabela 9a Esp cimes analisados com o ensaio APTIMA COMBO 2 vs estado de infec o do paciente Esp cime Sintomas N PV FP NV FN jp E Sint 724 304 5412 3 99 0 97 2 99 8 98 8 97 2 99 6 Esfregaco Assint 378 15 12 351 0 100 78 2 100 96 7 94 3 98 3 Todos 1 103 319 17 764 3 99 1 97 3 99 8 97 8 96 5 98 7 Masculino Sint 750 31 1 433 5 9
2. 1 0 Infectado 7 3 Infectado N A 1 0 Infectado N A 1 0 Infectado 1 0 Infectado 7 1 Infectado 2 1 Infectado 1 0 Infectado 3 3 Infectado N A 6 2 Infectado N A 1 0 Infectado 7 3 Infectado N A 1 0 Infectado 2 2 Infectado 1 0 Infectado 1 1 Infectado N A 1 0 Infectado 88 44 Nao infectado N A 1 1 Nao infectado N A 2 1 Nao infectado 648 497 Nao infectado 18 4 Nao infectado 4 3 Nao infectado 4 2 Total 822 570 a a UF Urina feminina EF Esfrega o endocervical feminino N A representa esp cimes que n o foram obtidos ou n o estavam dispon veis para teste Ensaio APTIMA COMBO 2 54 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 7b Esp cimes de Esfregaco Vaginal Colhido pela Paciente e de Esfrega o Vaginal Colhido pelo M dico Estado de NAAT 1 NAAT 2 APTIMA Ensaio APTIMA Estado infec o do COMBO 2 COMBO 2 sintom tico Total paciente EF UF EF UF PVS cvs Sint Assint Infectado 79 43 122 Infectado 0 1 Infectado 1 0 1 Infectado N A 1 0 1 Infectado 8 5
3. Enterobacter cloacae Neisseria cinerea 4 Trichomonas vaginalis Entercoccus avium Neisseria dentrificans Ureaplasma urealyticum Entercoccus faecalis Neisseria elongata 3 Vibrio parahaemolyticus Entercoccus faecium Neisseria flava Yersinia enterocolitica Erwinia herbicola Neisseria flavescens 2 Erysipelothrix rhusiopathiae Neisseria lactamica 9 n representa o numero de estirpes testadas Todos os organismos testados produziram um resultado negativo no ensaio APTIMA COMBO 2 com base no tipo de perfil cin tico e RLU Subst ncias Interferentes Foram introduzidas em esfrega os e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt as seguintes subst ncias interferentes 10 sangue geleia contraceptiva espermicida hidratante anest sico hemorroidal leo de corpo p creme antif ngico lubrificantes vaginais spray feminino e leuc citos 1 0 x 10 c lulas mL Foram introduzidas em esp cimes de urina as seguintes subst ncias interferentes 30 de sangue analitos de urina prote nas glucose cetonas bilirrubina nitrato urobilinog nio pH 4 cido pH 9 alcalino leuc citos 1 0 x 10 c lulas mL restos celulares vitaminas minerais paracetamol cido acetilsalic lico e ibuprofeno Todos foram testados para interfer ncia de Ensaio APTIMA COMBO 2 502183PT Rev C Desempenho analitico nos Sistemas DTS ensaio potencial na aus ncia e na
4. TECAN e FREEDOM EVO s o marcas comerciais da Tecan Group AG Qualquer outra marca que apare a neste documento pertence a seu respectivo propriet rio 2001 2013 Gen Probe Incorporated 502183PT Rev C 2013 04 Ensaio APTIMA COMBO 2 87 502183PT Rev C
5. de resultados positivos n de esp cimes testados a 11 14 b 3 5 c 14 19 d 4 8 e 0 4 f 4 12 g 18 22 h 4 6 i 22 28 j 2 8 k 1 5 3 13 m 29 36 n 7 11 o 36 47 p 6 16 q 1 9 e r 7 25 Ensaio APTIMA COMBO 2 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 5b Esfregacos vaginais analisados com o ensaio APTIMA COMBO 2 vs estado de infec o do paciente Esp cim Estado Sensibilidade Especificidade p sintom tico N PV F NV FN IC de 95 IC de 95 Colhido Estredaco pela ga Assint 628 60 18 549 1 98 4 91 2 100 96 8 95 0 98 1 a Vaginal Paciente Sint 809 4111 25 669 4 96 5 91 3 99 0 96 4 94 7 97 7 Colhido Esfrega o acai 636 59 16 559 2 96 7 88 7 99 6 97 2 95 5 98 4 pelo M dico Vaginal Tudo 1 445 170 41 1 228 6 96 6 92 7 98 7 96 8 95 6 97 7 PV Positivo verdadeiro FP Falso positivo NV Negativo verdadeiro FN Falso negativo 1Os resultados de amplifica o alternada por TMA relativos a CT representam o n de resultados positivos n de esp cimes testados a 15 18 b 17 25 c 15 16 e d 32 41 Tabela 5c Esp cimes em PreserCyt analisados com o ensaio APTIMA COMBO 2 vs estado de infec o do paciente Symptom AC2 CT PreservCyt Sensibilidade Especificidade Estado Result i s IC de 95 95 IC Positivo 58 1 0 6 Assint Negativo 2 1 12 1 208 96 7 88 5 99 6
6. o SysCheck 301078 Lix via solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 M a 1 0M Recipientes padr o para colheita de urina sem conservantes Recipiente pl stico com tampa grande Tampas penetr veis APTIMA 105668 Tampas n o penetr veis de substitui o 103036A Materiais Opcionais Ref Cat Kit de colheita de esp cimes PACE para esp cimes uretrais 103275 masculinos ou provenientes da conjuntiva Kit de colheita de esp cimes PACE para esp cimes endocervicais 103300 Kit adaptador APTIMA 301087 Refor o de lix via GEN PROBE 302101 para a limpeza de rotina de superf cies e equipamento Kit de controlos APTIMA 301110 Fluidos do ensaio APTIMA 302002C solu o de lavagem APTIMA tamp o para o fluido de desactiva o APTIMA e reagente a leo APTIMA Painel de compet ncia de DST 102325 Pontas 1 000 uL condutoras com sensores de l quido 10612513 Tecan TECAN Freedom EVO 100 4 contendo 900932 Sistemas DTS 800 APTIMA COMBO 2 Placa do tabuleiro 105200 Reservat rio de reagentes quarto de m dulo de 40 mL 104765 Reservat rio de reagentes dividido 104763 quarto de m dulo de 19 mL x 2 Ensaio APTIMA COMBO 2 12 502183PT Rev C Sistemas DTS Procedimento de Teste dos Sistemas DTS A Prepara o do Equipamento 1 Ajuste um banho de agua em 62 C 1 C para captura de alvo e hibrida o dos iniciadores um segundo banho de gua em 42 C 1 C para amplifica o e um terceiro
7. 96 0 99 7 80 0 100 2 196 31 2 163 O 15 8 100 88 8 100 98 8 95 7 99 9 939 100 3 13 3 0 109 1 3 5 75 0 19 4 99 4 100 96 7 100 100 99 1 Colhido Estregaco 4 262 5 2 25 0 1 9 100 47 8 100 99 2 97 2 99 9 71 4 100 pelo Vaginal 5 198 2 O 196 O 1 0 100 15 8 100 100 98 1 100 100 100 M dico 6 29 18 4 272 2 6 8 90 0 68 3 98 8 98 6 96 3 99 6 81 8 99 3 7 102 0 0 102 0 0 0 N A 100 96 4 100 N A 100 8 5 1 0 4 O 2 0 100 2 5 100 100 92 7 100 100 100 TODOS 1 444 72 11 1 358 3 52 96 0 88 8 99 2 99 2 98 6 99 6 86 7 99 8 PV Positivo verdadeiro FP Falso positivo NV Negativo verdadeiro FN Falso negativo Ensaio APTIMA COMBO 2 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 10c Esp cimes em PreserCyt analisados com o ensaio APTIMA COMBO 2 vs estado de infec o do paciente Resultado de Local AC2 GC Prev Sensibilidade Especificidade PPV NPV PreservCyt sie af E f IC de 95 IC de 95 Positivo 5 0 0 0 1 Negativo 0 0 0 95 5 0 100 47 8 100 100 96 2 100 100 100 Total 5 0 0 95 Positivo 1 0 0 0 2 Negativo 0 0 0 123 0 8 100 2 5 100 100 97 0 100 100 100 Total 1 0 0 123 Positivo 4 0 0 0 3 Negativo 1 0 0 470 1 1 80 0 28 4 99 5 100 99 2 100 100 99 8 Total 5 0 0 470 Positivo 1 0 0 0 4 Negativo 0 0 3 283 0 3 100 2 5 100 100 98 7 100 100 100 Total 1 0 3 283 Positiv
8. 1 630 1 634 Em indiv duos sintom ticos e assintom ticos a especificidade foi de 100 352 352 e 99 7 1 278 1 282 respectivamente A Tabela 10c mostra a sensibilidade e a especificidade para GC do ensaio APTIMA COMBO 2 em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt por institui o clnica e no geral Para GC a sensibilidade teve varia o de 80 0 a 100 A especificidade teve varia o de 99 0 a 100 A distribui o dos dispositivos de amostragem cervical utilizados neste estudo cl nico de acordo com a institui o cl nica resumida na Tabela 4 Tabela 4 Resumo de Dispositivos de Amostragem Cervical Utilizados no Estudo de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Dispositivo de amostragem Local de Colheita Cl nica Total cervical 1 2 3 5 6 Esp tula Cytobrush 0 124 475 287 57 364 1 307 Dispositivo tipo Escova 100 0 0 240 0 340 Tabelas de desempenho para Chlamydia trachomatis Sensibilidade e especificidade para C trachomatis Tabela 5a Esp cimes analisados com o ensaio APTIMA COMBO 2 vs estado de infec o do paciente Esb ime Sintomas Sensibilidade Especificidade p Estado N PV FP NV FN IC de 95 IC de 95 Sint 676 190 15 464 7 96 4 92 8 98 6 96 9 94 9 98 2 Esfrega o Assint 388 70 5 309 4 94 6 86 7 98 5 98 4 96 3 99 5 Tudo 1 065 260 20 774 11 95 9 92 9 98 0 97 5 96 1 98
9. 91 2 100 96 8 95 0 98 1 76 9 99 8 1 227 34 9 182 2 159 94 4 81 3 99 3 95 3 91 2 97 8 79 1 98 9 2 196 50 5 139 2 265 96 2 86 8 99 5 96 5 92 1 98 9 90 9 98 6 3 13 9 3 11 O 80 100 66 4 100 97 1 91 8 99 4 75 0 100 Colhido E strega o 4 262 19 1 231 1 7 6 95 0 75 1 99 9 95 5 92 0 97 7 633 99 6 pelo Vaginal 5 199 13 2 184 O 6 5 100 75 3 100 98 9 96 2 99 9 86 7 100 M dico 6 296 33 9 254 0 11 1 100 89 4 100 96 6 93 6 98 4 78 6 100 7 102 9 1 9g 1 9 8 90 0 55 5 99 7 98 9 94 1 100 90 0 98 9 8 50 3 1 46 0 6 0 100 29 2 100 97 9 88 7 99 9 75 0 100 TODOS 1 445 170 41 1 228 6 122 96 6 92 7 98 7 96 8 95 6 97 7 80 6 99 5 PV Positivo verdadeiro FP Falso positivo NV Negativo verdadeiro FN Falso negativo Tabela 6c Esp cimes em PreserCyt analisados com o ensaio APTIMA COMBO 2 vs estado de infec o do paciente Local AC2 CT ie EA f J Prev Sensibilidade Especificidade PPV NPV PreservCyt Result IC de 95 95 IC Positivo 14 0 0 2 1 Negativo 0 0 1 83 14 0 100 76 8 100 97 7 91 9 99 7 87 5 100 Total 14 0 1 85 Positivo 4 0 0 0 2 Negativo 0 0 2 118 3 2 100 39 8 100 100 97 0 100 100 100 Total 4 0 2 118 Positivo 29 0 0 2 3 Negativo 2 0 2 440 6 5 93 5 78 6 99 2 99 5 98 4 99 9 93 5 99 5 Total 31 0 2 442 Positivo 1 0 4 4 Negativo 2 1 271 2 8 100 63 1 100 98 2 95 9 99 4 61 5 100
10. A primeira gera o de NAATs para CT e GC tem problemas tecnol gicos que limitaram o seu desempenho Estes problemas incluem um processamento de esp cimes inc modo e a inibi o de esp cimes que podem originar resultados negativos falsos 6 10 13 19 25 31 32 33 O ensaio APTIMA COMBO 2 um NAAT de segunda gera o que utiliza tecnologias de captura de alvo amplifica o mediada por transcri o Transcription Mediated Amplification TMA e ensaio cin tico Dual Dual Kinetic Assay DKA para aperfei oar o processamento do esp cime ampliar rRNA alvo e detectar produtos da amplifica o respectivamente Estudos que compararam o desempenho e inibi o de esp cimes de v rios sistemas de amplifica o demonstraram os benef cios das tecnologias de captura de alvo TMA e DKA 8 12 O ensaio APTIMA COMBO 2 detecta qualitativamente CT e ou GC rRNA em esfrega os endocervicais vaginais e uretrais masculinos colhidos pelo m dico esfrega os vaginais colhidos pela paciente esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt e em esp cimes masculinos e femininos de urina de indiv duos sintom ticos e assintom ticos Princ pios do procedimento O ensaio APTIMA COMBO 2 combina as tecnologias de captura de alvo TMA e DKA Os esp cimes s o colhidos e transferidos em seus respectivos tubos de transporte de esp cimes As solu es de transporte nesses tubos liberam os rRNA alvos e os protegem da degrada o durante o armazena
11. Alvo ou contacte o Suporte T cnico Ensaio APTIMA COMBO 2 16 502183PT Rev C Sistemas DTS 23 Coloque o suporte na base magn tica TCS durante 5 a 10 minutos 24 Aspire todo o liquido como nos Passos 19 e 20 25 Ap s a aspira o final retire o suporte da base magn tica TCS e inspeccione visualmente os tubos para se assegurar de que todo o l quido foi aspirado e todos os tubos cont m gr nulos de part culas magn ticas Se for vis vel qualquer l quido coloque o suporte de novo na base magn tica TCS durante 2 minutos e repita a aspira o para esta TTU utilizando as mesmas pontas usadas anteriormente para cada esp cime Nota Se for vis vel qualquer gr nulo de part cula magn tica ap s ter terminado a aspira o o tubo pode ser aceite Se n o for vis vel qualquer gr nulo o esp cime deve ser testado novamente Se o mesmo esp cime n o contiver um gr nulo de part cula magn tica neste passo num teste posterior isto poder ser indica o de que existe um problema espec fico do esp cime Nesta situa o recomenda se uma nova colheita de esp cimes D Amplifica o Caso utilize o banho de calor seco v rtex SB100 consulte a SB100 Application Sheet Ficha de aplica o SB100 1 Utilizando a pipeta de repeti o adicione 75 uL do reagente de amplifica o reconstitu do a cada tubo de reac o Todas as misturas de reac o no suporte dever o estar de cor vermelha 2 Utilizando a pipeta de
12. Caso as amostras testadas precisem ser congeladas ou despachadas remova a tampa perfur vel e coloque novas tampas n o perfur veis nos tubos de transporte de esp cimes Caso os esp cimes precisem ser despachados para teste em outro local as temperaturas recomendadas dever o ser mantidas Antes de destampar amostras anteriormente testadas e novamente tampadas os tubos de transporte de esp cimes devem ser centrifugados por 5 minutos em 420 de For a Centr fuga Relativa RCF para levar todo o l quido ao fundo do tubo Evite salpicos e contamina o cruzada Nota Os esp cimes t m de ser transportados de acordo com os regulamentos de transporte nacionais e internacionais em vigor Ensaio APTIMA COMBO 2 9 502183PT Rev C Sistemas DTS Sistemas DTS Os reagentes do ensaio APTIMA COMBO 2 para CT e GC sao indicados abaixo para os Sistemas DTS Os S mbolos para Identifica o dos Reagentes tamb m s o listados junto ao nome do reagente DTS ssa E Reagentes e materiais fornecidos Kit de ensaio APTIMA COMBO 2 100 testes 2 caixas Ref Cat 301032 Caixa refrigerada APTIMA COMBO 2 Caixa 1 de 2 armazenar entre 2 Ce 8 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade A Reagente de Amplifica o APTIMA COMBO 2 1 frasco cidos nucleicos n o infecciosos secos em solu o tamponada contendo lt 5 de agente de volume E Reagente Enzim tico APTIMA COMBO 2 1 frasco Transcriptase reversa e RNA polimerase s
13. cimes de urina masculina e feminina de 1 363 pacientes masculinos e 1 569 pacientes femininos registados em sete locais geograficamente diversos O segundo estudo cl nico multic ntrico avaliou esp cimes de esfrega o vaginal colhidos pelo m dico e colhidos pela paciente em 1 464 pacientes femininas registadas em oito locais geograficamente diversos O terceiro estudo cl nico multic ntrico avaliou esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt de 1 647 indiv duos registados em seis locais cl nicos Nos c lculos de desempenho baseados no status dos sintomas os pacientes foram classificados como sintom ticos caso sintomas como secre es dis ria e dor p lvica tenham sido relatados pelo paciente Os pacientes foram classificados como assintom ticos se n o relataram sintomas Estudos Cl nicos de Esfrega o Endocervical Esfrega o da Uretra Masculina e Esp cime de Urina Nos estudos cl nicos multic ntricos de esfrega o endocervical esfrega o da uretra e de esp cime de urina 2 932 pacientes masculinos e femininos sintom ticos e assintom tico que frequentavam cl nicas de DST OB GIN e planeamento familiar foram registados no estudo At tr s esfrega os de uretra e um esp cime de urina foram colhidos de pacientes masculinos e quatro esfrega os endocervicais e um esp cime de urina foram colhidos de pacientes femininos Para pacientes masculinos que forneceram um esfrega o da uretra o teste inclui apenas a cultura GC P
14. fg rRNAfreac o equivalente em rRNA de 2 5 x 10 CFU mL As an lises foram realizadas utilizando 5 testes em cada um dos tr s Sistemas PANTHER num total de 2 936 amostras negativas A taxa de transmiss o global foi de 0 com um intervalo de confian a de 95 de 0 0 1 Quatro amostras negativas foram declaradas inv lidas e exclu das dos c lculos Bibliografia 1 Beem M O and E M Saxon 1977 Respiratory tract colonization and a distinctive pneumonia syndrome in infants infected with Chlamydia trachomatis NEJM 296 306 310 2 Buimer M G J J Van Doornum S Ching P G H Peerbooms P K Plier D Ram and H H Lee 1996 Detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae by Ligase chain reaction based assays with clinical specimens from various sites implications for diagnostic testing and screening J Clin Microbiol 34 2395 2400 3 Cates Jr W and J N Wasserheit 1991 Genital chlamydia infections epidemiology and reproductive sequelae Am J Obstet Gynecol 164 1771 1781 4 Centers for Disease Control and Prevention 2002 Screening Tests to Detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infections United States Morbid and Mortal Weekly Rep 51 RR 15 5 Centers for Disease Control and Prevention 2011 Sexually Transmitted Disease Surveillance 2010 Atlanta GA U S Department of Health and Human Services November 6 Chernesky M A D Jang J Sellors K Luinstra S C
15. o Notas ao procedimento Descontamina o 4 Como em qualquer sistema de reagente o excesso de p em algumas luvas pode causar a contamina o de tubos abertos recomendada a utiliza o de luvas sem p J Protocolo de Monitoriza o de Contamina o Laboratorial para Sistemas DTS Existem muitos factores espec ficos do laborat rio que podem contribuir para a contamina o incluindo volume de testes fluxo de trabalho predom nio de doen as e v rias outras actividades laboratoriais Esses factores devem ser considerados ao estabelecer se a frequ ncia da monitoriza o de contamina o Os intervalos para a monitoriza o de contamina o devem ser estabelecidos com base nas pr ticas e procedimentos de cada laborat rio Para monitorizar a contamina o laboratorial o seguinte procedimento deve ser executado usando o Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina 1 Etiquete os tubos de transporte dos esfrega os com n meros correspondentes s reas a serem testadas 2 Remova o esfrega o de colheita de esp cimes esfrega o com haste azul e impress o verde de sua embalagem humede a o no meio para transporte de esfrega o e esfregue a rea designada com um movimento circular 3 Insira imediatamente o esfrega o no tubo de transporte 4 Quebre com cuidado a haste da zaragatoa na linha marcada tendo o cuidado de evitar que o con
16. quida PreservCyt Citologia em base liquida PreservCyt Local Preval ncia n positivos n testados CT GC CT GC CT GC 1 3 0 3 100 13 0 13 100 2 0 2 100 2 0 0 124 3 2 4 124 0 8 1 124 3 0 4 2 475 6 1 29 475 0 4 2 475 4 0 4 1 287 4 2 12 287 0 0 287 5 0 0 297 5 1 15 297 1 0 3 297 6 0 0 364 5 5 20 364 0 6 2 364 TODOS 0 4 6 1 647 5 6 93 1 647 0 6 10 1 647 As preval ncias de CT e GC foram calculadas usando os resultados do ensaio APTIMA COMBO 2 de Esp cime citol gico em base l quida PreservCyt Valores Preditivos Positivos e Negativos para Taxas de Preval ncia Hipot ticas na Am rica do Norte Os valores preditivos positivos e negativos estimados PPV e NPV para diferentes taxas de preval ncia com a utiliza o do ensaio APTIMA COMBO 2 s o apresentados na Tabelas 2 e 3 para CT e GC Esses c lculos s o baseados em uma preval ncia hipot tica e a sensibilidade e especificidade gerais calculadas a partir do estado de infec o do paciente para dois estudos cl nicos multic ntricos A sensibilidade e a especificidade globais para CT foram de 96 1 e 98 0 respectivamente Tabela 2 A sensibilidade e a especificidade globais para GC foram de 97 8 e 99 2 respectivamente Tabela 3 Os valores reais de PPV e NPV calculados utilizando os dados dos ensaios cl nicos s o apresentados nas Tabelas 6a e 10a esfrega os e esp cimes de urina nas Tabelas 6b e
17. s recep o S mbolo Componente Quantidade AR Solu o de Reconstitui o de Amplifica o APTIMA COMBO 2 1x27 7 mL Solu o aquosa contendo conservantes ER Solu o de Reconstitui o Enzim tica APTIMA COMBO 2 1x11 1 mL Solu o tamp o HEPES contendo um surfactante e glicerol PR Solu o de Reconstitui o de Sonda APTIMA COMBO 2 1 x 35 4 mL Solu o tamponada de succinato contendo lt 5 de detergente S Reagente de selec o APTIMA COMBO 2 1 x 108 mL Solu o tamponada com borato a 600 mM contendo surfactante TCR Reagente de Captura de Alvo APTIMA COMBO 2 1x54 mL Solu o tamponada salina contendo fase s lida e olig meros de captura Colarinho de Reconstitui o 3 Folha de c digo de barras do lote principal 1 folha Ensaio APTIMA COMBO 2 23 502183PT Rev C Sistema TIGRIS DTS Kit de controlos APTIMA armazenar entre 2 C e 8 C ap s recep o Simbolo Componente Quantidade PCT NGC Controlo Positivo APTIMA CT Controlo Negativo GC 5x1 7 mL cido nucleico de CT n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 1 unidade formadora de inclus es inclusion forming unit IFU de CT 5 fg ensaio PGC NCT Controlo Positivo APTIMA GC Controlo Negativo CT 5x1 7 mL cido nucleico de GC n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rR
18. 10b esfrega os vaginais e nas Tabelas 6c e 10c esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Tabela 2 PPV e NPV Hipot ticos para CT Tabela 3 PPV e NPV hipot ticos para GC Taxa de me aai yalor Valor Taxa de nr Roe valor valor Preval ncia Sensibilidade Especificidade Positivo Negativo Preval ncia Sensibilidade Especificidade Positivo Negativo Preditivo Preditivo Preditivo Preditivo 96 1 98 0 33 1 100 0 1 97 8 99 2 55 3 100 0 2 96 1 98 0 50 0 99 9 2 97 8 99 2 71 4 100 0 5 96 1 98 0 72 0 99 8 5 97 8 99 2 86 6 99 9 10 96 1 98 0 84 5 99 6 10 97 8 99 2 93 2 99 7 15 96 1 98 0 89 6 99 3 15 97 8 99 2 95 6 99 6 20 96 1 98 0 92 4 99 0 20 97 8 99 2 96 8 99 4 25 96 1 98 0 94 2 98 7 25 97 8 99 2 97 6 99 2 30 96 1 98 0 95 4 98 3 30 97 8 99 2 98 1 99 0 Ensaio APTIMA COMBO 2 45 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Desempenho clinico nos Sistemas DTS Consulte a Concord ncia de esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS ap s a sec o Desempenho anal tico nos Sistemas DTS para obter o desempenho cl nico espec fico do Sistema TIGRIS DTS Resultados de Estudos Cl nicos O desempenho do ensaio APTIMA COMBO 2 em Sistemas DTS foi estabelecido em tr s estudos cl nicos multic ntricos realizados na Am rica do Norte O primeiro estudo cl nico multic ntrico avaliou esfrega os endocervicais e da uretra masculina colhidos pelo m dico e esp
19. 12 0 127 O 86 100 73 5 100 100 97 1 100 100 100 6 336 94 10 231 1 283 989 94 3 100 95 9 92 5 98 0 904 99 6 7 55 53 0 1 1 98 2 98 1 90 1 100 100 2 5 100 100 50 0 TODOS 1 103 319 17 764 3 292 99 1 97 3 99 8 97 8 96 5 98 7 94 9 99 6 1 161 57 O 103 1 36 0 98 3 90 8 100 100 96 5 100 100 99 0 2 104 19 0 85 O 183 100 824 100 100 95 8 100 100 100 3 26 71 2 192 0 268 100 94 9 100 99 0 96 3 99 9 97 3 100 4 53 20 0 33 O 37 7 100 83 2 100 100 89 4 100 100 100 5 160 14 O 146 O 88 100 76 8 100 100 97 5 100 100 100 6 335 89 1 241 4 278 957 894 988 99 6 97 7 100 989 984 7 56 54 0 2 0 964 1 00 934 100 100 15 8 100 100 100 TODOS 1 134 324 3 802 5 290 98 5 96 5 99 5 99 6 98 9 99 9 99 1 994 1 196 30 2 164 O 15 3 100 88 4 100 98 8 95 7 99 9 938 100 2 83 9 1 72 1 120 90 0 55 5 99 7 98 6 92 6 100 90 0 98 6 3 191 31 2 158 O 162 100 88 8 100 98 8 95 6 99 8 939 100 4 215 7 O 208 O 33 100 590 100 100 98 2 100 100 100 5 382 8 1 373 0 21 100 63 1 100 99 7 98 5 100 889 100 6 278 36 8 234 O 129 100 90 3 100 96 7 93 6 98 6 81 8 100 7 134 5 3 126 O 37 100 47 8 100 97 7 93 4 99 5 625 100 TODOS 1 479 126 17 1 335 1 8 6 99 2 95 7 100 98 7 98 0 99 3 881 99 9 1 196 24 2 164 6 153 80 0 61 4 92 3 98 8 95 7 99 9 923 96 5 2 83 9 1 72 1 120 90 0 55 5 99 7 98 6 92 6 100 90 0 98 6 3 191 30 2 158 1 162 968 83 3 99 9 98 8 95 6 99 8 938 994 4 215 5 2
20. 268 100 72 85 5 7 15 3 1 2 0 0 39 58 3 1 84 3 6 6 0 12 5 96 1 081 100 1844 1 7 2859 2 6 0 0 26 68 2 5 43 2 4 STM 0 125 96 1 266 100 29 81 2 4 0 0 886 0 7 27 58 22 41 6 3 3 0 1 250 96 1 309 100 2941 2 2 0 0 9 83 0 8 31 83 24 444 34 2 5 125 96 2 456 100 86 58 3 5 0 0 0 0 52 99 2 2 101 5 4 1 2 5 2 500 96 2 509 100 73 13 2 9 0 0 198 08 46 77 1 9 89 3 5 1 000 2 500 96 2 496 100 31 72 1 3 6 14 0 2 0 O 193 66 7 8 196 3 7 9 1 000 125 96 2471 100 83 63 3 4 9 36 0 4 0 0 52 35 2 1 99 1 4 0 0 94 6 100 0 2 3 2 0 66 108 0 36 5 9 1 16 3 1 3 21 2 0 25 0 95 863 100 70 73 82 165 65 19 2 47 97 5 6 132 27 15 3 228 6 26 5 2 5 0 95 1 129 100 56 02 5 89 56 7 9 8 56 0 8 74 19 66 1294 11 5 Urina 25 0 96 1 246 100 60 45 49 13 97 1 1 13 36 1 1 43 03 35 76 7 6 2 0 12 5 96 1 016 100 18 83 19 31 81 3 1 7 88 0 8 49 53 49 623 6 1 0 125 96 1 209 100 49 32 4 1 23 5 1 9 1 68 0 1 40 28 33 67 9 56 0 1 250 96 1 252 100 5301 42 4034 3 2 7 72 0 6 40 23 32 782 6 2 2 5 125 95 2 290 100 73 922 3 2 40 88 1 8 1043 0 5 56 12 2 5 101 9 4 4 0 0 96 7 100 0 0 0 8 11 7 0 0 1 54 22 4 1 7 24 7 0 25 0 96 1 113 100 92 29 83 30 08 2 7 0 0 63 57 5 7 116 10 4 2 5 0 96 1 194 100 62 54 52 2483 2 1 0 0 47 01 39 82 1 6 9 PreservCyt 25 0 95 1 222 100 65 14 53 2636 2 2 14 67 1 2 3497 29 79 8 6 5 0 12 5 93 994 100 33 28 3 3 36 92 3 7 15 97 1 6 26 15 26 584 5 9 0 125 95 1 189 100 40 1 3 4 4 45 04 10 87 09 21 44 1 8 47 4 0 1 250 95 1 239 100 37 69 3 7 47 0 6 13 61 1 1 1804 1 5 446 3 6 2 5 125 95 2 333 100 99 68 43 352
21. 413 2 7 CT Esfrega o 54 1 001 69 831 7 0 77 701 7 8 159 774 16 0 Meio Fsfrega o gy 2 241 152 377 6 8 58 353 26 139 983 6 2 Duplo Esfrega o GC 54 1 249 35 142 2 8 60 638 4 9 46 364 3 7 CT Esfrega o 54 1 013 61 795 6 1 90 906 9 0 131 207 13 0 Esfrega o ag 2 085 286 034 13 7 161 764 7 8 58 837 2 8 Baixa Duplo Urina Dupla 54 2 201 95 705 43 118 760 54 106 802 4 9 Esfrega o GC 54 1 177 42 478 3 6 69 821 5 9 29 836 2 5 Esfrega o 54 7 1 301 18 3 2 311 32 5 1 901 26 8 Negativo Urina 54 7 861 12 0 2 299 32 1 1 994 27 9 Membros positivos duplos do painel continham CT e GC rRNA Tabela 14b Solu o PreservCyt Concentra o M dia Intrateste Entre Testes Entre Locais nae fg ensaio Operadores My earners hao DP CV DP Cv DP Cv DP Cv cT GG ee x1 000 x1 000 x1 000 x1 000 0 0 162 97 5 9 7 31 6 N A 3 4 N A 6 4 N A 4 7 N A 0 5 000 54 96 3 1 296 146 11 3 54 8 4 2 0 0 0 0 0 0 0 0 2 000 0 54 100 1 140 54 1 47 79 8 7 0 101 8 9 2 4 0 2 2 000 5 000 54 100 2 345 79 6 3 4 78 0 3 3 94 7 4 0 37 9 1 6 0 250 54 100 953 114 12 0 0 0 0 0 161 16 9 90 7 9 5 5 0 54 100 971 58 3 6 0 71 7 7 4 22 8 2 4 85 0 8 8 1 000 2 500 54 100 2 294 114 5 0 88 9 3 9 153 6 7 0 0 0 0 100 250 54 98 1 1 911 139 7 3 130 6 8 348 18 2 39 7 2 1 5 5 000 54 100 2 136 113 5 3 130 6 1 98 8 4 6 166 7 8 2 000 250 54 96 3 2 044 138 6 7 169 8 3 360 17 6 26 9 1 3 RLU Unidades relativas de luz Re
22. 5 Masculino Sint 694 199 8 484 3 98 5 95 7 99 7 98 4 96 8 99 3 Urina Assint 400 77 4 316 3 96 3 89 4 99 2 98 8 96 8 99 7 Tudo 1 095 276 12 801 6 97 9 95 4 99 2 98 5 97 4 99 2 Sint 819 133 22 653 11 92 4 86 7 96 1 96 7 95 1 97 9 Esfrega o Assint 569 61 6 501 1 98 4 91 3 100 98 8 97 4 99 6 Tudo 1 389 195 28 1 154 12 94 2 90 1 97 0 97 6 96 6 98 4 Feminino Sint 821 136 8 668 9 93 8 88 5 97 1 98 8 97 7 99 5 Urina Assint 569 60 5 502 2 96 8 88 8 99 6 99 0 97 7 99 7 Todos 1 391 197 13 1 170 11 94 7 90 7 97 3 98 9 98 1 99 4 Sint 1 495 323 37 1 117 18 94 7 91 8 96 8 96 8 95 6 97 7 Esfregaco Assint 957 131 11 810 5 96 3 91 6 98 8 98 7 97 6 99 3 Tudo 2 454 455 48 1 928 23 95 2 92 9 96 9 97 6 96 8 98 2 Total Sint 1 515 335 16 1 152 12 96 5 94 0 98 2 98 6 97 8 99 2 Urina Assint 969 137 9 818 5 96 5 92 0 98 8 98 9 97 9 99 5 Tudo 2 486 473 25 1 971 17 96 5 94 5 98 0 98 7 98 2 99 2 EE EE E EO SE a o PV Positivo verdadeiro FP Falso positivo NV Negativo verdadeiro FN Falso negativo Inclui um indiv duo do sexo masculino para o qual os sintomas n o foram relatados Inclui um indiv duo do sexo feminino para o qual os sintomas n o foram relatados Inclui um indiv duo do sexo masculino e um do sexo feminino para o qual os sintomas n o foram relatados Os resultados de TMA alternada relativos a CT representam o n
23. 8 x 10 c lulas de cultura de c lulas infectadas ensaio Apenas amostras CT e GC produziram resultados positivos no ensaio APTIMA COMBO 2 A lista dos microorganismos testados indicada na Tabela 15 Ensaio APTIMA COMBO 2 68 502183PT Rev C Desempenho analitico nos Sistemas DTS Tabela 15 Especificidade Analitica Organismo Organismo Organismo Achromobacter xerosis Escherichia coli Neisseria mucosa 3 Acinetobacter calcoaceticus Flavobacterium meningosepticum Neisseria sicca 3 Acinetobacter Iwoffi Fusobacterium nucleatum Neisseria subflava 14 Actinomyces israelii Gardnerella vaginalis Neisseria perflava Actinomyces pyogenes Gemella haemolysans Neisseria polysaccharea Aerococcus viridans Haemophilus ducreyi Paracoccus denitrificans Aeromonas hydrophila Haemophilus influenzae Peptostreptococcus anaerobius Agrobacterium radiobacter Herpes simplex virus Peptostreptococcus productus Alcaligenes faecalis Herpes simplex virus II Plesiomonas shigelloides Bacillus subtilis Human papilloma virus 16 Propionibacterium acnes Bacteriodes fragilis Kingella dentrificans Proteus mirabilis Bacteriodes ureolyticus Kingella kingae Proteus vulgaris Bifidobacterium adolescentis Klebsiella oxytoca Providencia stuartii Bifidobacterium brevi Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa Branhamella catarrhalis Lact
24. 94 7 85 4 98 9 97 7 93 3 99 5 94 7 97 7 Uiha 4 196 24 2 167 3 13 8 88 9 70 8 97 6 98 8 95 8 99 9 92 3 98 2 5 369 28 2 338 1 7 9 96 6 82 2 99 9 99 4 97 9 99 9 93 3 99 7 6 276 35 1 238 2 13 4 94 6 81 8 99 3 99 6 97 7 100 97 2 99 2 7 134 10 0 124 0 7 5 100 69 2 100 100 97 1 100 100 100 TODOS 1 391 197 13 1 170 11 15 0 94 7 90 7 97 3 98 9 98 1 99 4 93 8 99 1 PV Positivo verdadeiro FP Falso positivo NV Negativo verdadeiro FN Falso negativo Preval ncia sobrestimada devido colheita inicial ter sido limitada ao rastreio de pacientes sintom ticos Ensaio APTIMA COMBO 2 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 6b Esfrega os vaginais analisados com o ensaio APTIMA COMBO 2 vs estado de infec o do paciente Esp cime Local N PV FP NV FN pe ease Cacaso fe a 1 70 14 3 53 0 20 0 100 768 100 94 6 85 1 98 9 824 100 2 45 13 3 29 0 289 100 75 3 100 90 6 75 0 98 0 81 3 100 3 45 A 2 39 0 89 100 39 8 100 95 1 83 5 99 4 66 7 100 Colhido E stregaco 4 152 6 3 1442 1 46 85 7 42 1 99 6 99 7 94 1 99 6 66 7 99 3 pela Vaginal 5 130 7 3 120 O 5 4 100 59 0 100 97 6 93 0 99 5 70 0 100 Paciente 6 75 8 2 6 0 10 7 100 63 1 100 97 0 89 6 99 6 80 0 100 7 68 5 1 62 o 7 4 100 47 8 100 98 4 91 5 100 833 100 8 43 3 1 39 0 7 0 100 29 2 100 97 5 86 8 99 9 75 0 100 TODOS 628 60 18 549 1 9 7 98 4
25. AMPLICOR Chlamydia trachomatis assay J Clin Microbiol 34 3072 3074 33 Vincelette J J Schirm M Bogard A Bourgault D Luijt A Bianchi P C Van Voorst Vader A Butcher and M Rosenstraus 1999 Multicenter evaluation of the fully automated COBAS AMPLICOR PCR test for detection of Chlamydia trachomatis in urogenital specimens J Clin Microbiol 3 74 80 34 Yuan Y Y X Zhang N G Watkins and H D Caldwell 1989 Nucleotide and deduced amino acid sequences for the four variable domains of the major outer membrane proteins of the 15 Chlamydia trachomatis serovars Infect Immun 57 1040 1049 Ensaio APTIMA COMBO 2 86 502183PT Rev C Bibliografia Ahal C 0843 Gen Probe Incorporated San Diego CA 92121 EUA EMERGO EUROPE Informa es para contacto nos EUA e a n vel internacional Molenstraat 15 Assist ncia ao cliente 1 858 410 8002 2513 BH Haia customerservice gen probe com Pa ses Baixos Assist ncia t cnica 1 858 410 8511 technicalsupport gen probe com N mero de telefone gratuito nos EUA e Canad Assist ncia ao cliente 1 800 523 5001 Assist ncia t cnica 1 888 484 4747 www gen probe com GEN PROBE GEN PROBE e desenho APTIMA APTIMA e desenho APTIMA COMBO 2 DTS LEADER PACE PANTHER SB100 e TIGRIS s o marcas comerciais da Gen Probe Incorporated eppendorf estilizado e REPEATER s o marcas comerciais da Eppendorf AG PRESERVCYT e THINPREP s o marcas comerciais da Hologic Inc
26. APTIMA para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt 4 Inspeccione os tubos de esp cimes antes de os carregar no suporte a Caso um tubo de esp cime contenha bolhas no espa o entre o l quido e a tampa centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para eliminar as bolhas b Caso um tubo de esp cime apresente um volume menor do que o habitualmente observado quando se seguem as instru es de colheita centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para garantir que o l quido n o fique retido na tampa c Seo n vel de l quido num tubo de esp cimes de urina n o estiver entre as duas linhas pretas indicadoras do r tulo o esp cime tem de ser rejeitado Caso um tubo de transporte de urina apresente um volume menor do que o habitualmente observado centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para garantir que o l quido n o fique retido na tampa N o perfure um tubo demasiado cheio d Se um tubo de esp cimes de urina contiver precipitado aque a o esp cime a 37 C durante at 5 minutos Se o precipitado n o voltar a entrar em solu o certifique se visualmente de que o precipitado n o impede a distribui o do esp cime Nota Caso os Passos 4a c n o sejam seguidos pode haver descarga de l quido da tampa do tubo de esp cimes Nota Podem ser testadas at 3 al quotas distintas de cada tubo de esp cimes A tentativa de pipetar mais de 3 al quotas do tubo de esp cimes pode provocar erros de processamen
27. N Ap s adicionar a urina ao tubo de transporte de urina o n vel de l quido tem de situar se entre as duas linhas pretas indicadoras no r tulo do tubo Caso contr rio o esp cime deve ser rejeitado O Mantenha condi es de armazenamento adequadas durante o envio do esp cime para garantir a integridade do mesmo A estabilidade do esp cime sob condi es de envio diferentes das recomendadas n o foi avaliada P Os esp cimes podem ser infecciosos Utilize Precau es Universais ao executar este ensaio M todos apropriados para manuseamento e descarte devem ser estabelecidos pelo director do laborat rio Apenas membros de equipa devidamente treinados no manuseamento de materiais infecciosos devem ter permiss o para realizar este procedimento diagn stico Ensaio APTIMA COMBO 2 5 502183PT Rev C Informa es gerais Q Evite a contamina o cruzada durante os passos de manuseamento dos esp cimes Os esp cimes podem conter n veis extremamente altos de organismos Certifique se de que os recipientes de esp cime n o entram em contacto uns com os outros e elimine materiais usados sem os passar por cima de recipientes abertos Troque de luvas se elas entrarem em contacto com o esp cime R Caso o laborat rio receba um tubo de transporte de esfrega os que n o contenha o esfrega o contenha dois esfrega os um esfrega o de limpeza ou um esfrega o que n o tenha sido fornecido pela Gen Probe o esp cime dever ser r
28. Sistema PANTHER Todas as amostras contendo acidos nucleicos alvo foram positivas quando testadas a uma concentra o de sangue de 10 v v em esfrega os ou em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt ou de 30 v v em esp cimes de urina Todas as amostras que n o continham alvo foram identificadas correctamente como negativas tanto para CT quanto para GC Estes resultados s o id nticos aos demonstrados para o Sistema TIGRIS DTS quando misturados com quantidades de sangue semelhantes O sangue adicionado a esfrega os PreservCyt e esp cimes de urina a concentra es muito superiores s que ser o de esperar numa colheita normal de esp cimes n o interferiu com os resultados no Sistema PANTHER Estudos de transmiss o com o Sistema PANTHER Para estabelecer que o Sistema PANTHER minimiza o risco de resultados positivos falsos causados por contamina o por transmiss o foi feito um estudo anal tico de m ltiplos testes utilizando pain is misturados em tr s Sistemas PANTHER A transmiss o foi avaliada utilizando aproximadamente 20 de amostras de GC de t tulo elevado dispersas entre amostras negativas Os testes inclu ram agregados de amostras fortemente positivas com agregados de amostras negativas assim como positivos fortes nicos dispersos segundo um padr o espec fico pelo teste As amostras de t tulo elevado foram preparadas utilizando rRNA de GC misturado em STM de forma a obter uma concentra o final de 5 x 10
29. Total 3 1 275 Positivo 13 0 0 2 5 Negativo 1 1 4 276 4 7 92 9 66 1 99 8 99 3 97 5 99 9 86 7 99 6 Total 14 1 4 278 Positivo 19 0 0 1 6 Negativo 0 1 6 337 5 2 100 82 4 100 99 7 98 4 100 95 0 100 Total 19 1 6 338 Positivo 87 1 0 11 Tudo Negativo 3 4 16 1 525 5 5 96 7 90 6 99 3 99 2 98 7 99 6 87 9 99 8 Total 90 5 16 1 536 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio ACT Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio ACT Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio ACT Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio ACT Ensaio APTIMA COMBO 2 53 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS An lises de Chlamydia trachomatis por estado de infec o em pacientes do sexo feminino Tabela 7a Esfregaco Endocervical e Esp cime de Urina Estado de infec o NAAT NAATA MEBO AS Penn do paciente UF EF UF EF UF EF Sint Assint Infectado N A N A 1 0 Infectado N A N A 1 0 Infectado N A 0 1 Infectado N A 1 0 Infectado 4 0 Infectado 6 1 Infectado
30. Vaginal Colhido pelo M dico continua Estado de NAAT 1 NAAT 2 APTIMA Ensaio APTIMA Estado infec o do COMBO 2 COMBO 2 sintomatico Total paciente EF UF EF UF PVS cvs Sint Assint N o infectado 1 1 2 N o infectado N A 0 1 1 N o infectado N A 5 4 9 N o infectado 1 0 1 N o infectado 1 0 1 Total 811 640 1 451 EF Esfrega o endocervical feminino UF Urina feminina PVS Esfrega o vaginal colhido por paciente assintomatica CVS Esfrega o vaginal colhido pelo m dico N A representa esp cimes que n o foram obtidos ou n o estavam dispon veis para teste O s mbolo de igual representa teste d bio ou repetido Tabela 7c Resultados do estado de infec o de pacientes ap s estudo cl nico de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt para C trachomatis Resultado de Esfregaco Estado de infec o Endocervical Estado sintom tico do paciente AC2 ACT Sint Assint Infectado 30 60 N o infectado 4 12 N o infectado 3 2 N o infectado 322 1 214 Total 359 1 288 Ensaio APTIMA COMBO 2 56 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS An lises de C trachomatis por estado de infec o em pacientes do sexo masculino Tabela 8 An lises de C trachomatis em esfrega os uretrais e esp cimes de urina por estado de infec o em pacientes do sexo masculino
31. Vau Y qu Y au Y N x1 000 Concd x1 000 x1 000 x1 000 x1 000 x1 000 Neg Neg 647 4 100 1 25 26 2 0 66 13 9 0 05 1 0 0 08 1 7 0 30 6 4 Neg High 215 1 216 100 28 5 2 3 61 2 5 0 10 0 0 8 0 0 17 1 1 4 High Neg 216 1 266 100 38 8 3 0 0 0 93 1 7 3 40 8 3 2 40 4 3 1 High High 210 2 445 100 54 2 2 2 40 0 1 6 110 3 4 5 28 4 1 1 52 3 2 1 Neg Baixa 217 1 132 100 30 3 2 6 61 0 5 3 0 0 0 20 7 1 8 18 5 1 6 Baixa Neg 214 1 053 100 72 8 6 9 1 5 0 1 73 8 7 0 28 5 2 7 26 9 2 5 Meio Meio 214 2 429 100 48 8 2 0 40 0 1 6 101 1 4 1 0 0 52 9 2 1 Baixa Baixa 216 2 112 99 5 112 3 5 3 84 1 3 9 33 2 1 5 34 2 1 6 52 9 2 5 Baixa High 216 2 282 100 77 3 3 3 97 8 4 2 59 3 2 6 0 0 41 7 1 8 High Baixa 215 2 318 100 61 1 2 6 50 7 2 1 86 2 3 7 4 6 0 2 42 4 1 8 E O O a a en eens DP desvio padr o CV coeficiente de varia o em percentagem Concd concord ncia percentual Conc concentra o Nota A variabilidade de alguns factores pode ser numericamente negativa o que pode ocorrer se a variabilidade devida a esses factores for muito pequena Quando isso ocorre a variabilidade conforme medida com o desvio padr o e CV definida como 0 Consulte as Orienta es EP5 A aprovadas pelo NCCLS 22 Os membros do painel de concentra o mais baixa foram misturados s sensibilidades anal ticas indicadas para o ensaio 5 fg CT rRNA ensaio 250 fg GC rRNA ensaio ou ambas para membros do painel duplamente positivos Para CT o nivel de alvo te
32. alternativos para CT e GC que s o testes de amplifica o de cido nucleico NAAT que t m como alvo sequ ncias de rRNA de CT ou GC diferentes das analisadas no ensaio APTIMA COMBO 2 Foi tamb m realizada uma repeti o do ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistemas DTS para os esp cimes com resultados discordantes entre o Sistema TIGRIS DTS e os Sistemas DTS As Tabelas 16 e 17 mostram as concord ncias globais em percentagem para todos os resultados de testes emparelhados obtidos no Sistema TIGRIS DTS e nos Sistemas DTS em esfrega os e esp cimes de urina respectivamente As concord ncias gerais foram de 98 3 para esp cimes de esfrega o e 99 2 para esp cimes de urina Consulte as Tabelas 5a e Ya para obter as estimativas de desempenho do ensaio APTIMA COMBO 2 relativamente a esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos e esp cimes de urina de ambos os sexos testados nos Sistemas DTS Estimativas de desempenho cl nico para o Sistema TIGRIS DTS com esp cimes de esfrega o endocervical esfrega o de uretra masculina e de urina feminina e masculina dever o ser similares dadas as descobertas de concord ncia Estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Pacientes femininas frequentando cl nicas de DST sa de p blica e OB GIN contribu ram com esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Os esp cimes de esfrega o vaginal foram trans
33. alvo Target Capture System TCS 104555 GEN PROBE Incubadoras e v rtex Duas misturadoras em vortex multi tubo 102160 3 Banhos de gua com circula o 104586 62 C 1 42 C 1T 62 C 1T 3 Espacadores para banhos de agua 104627 OU 2 Banhos de calor seco V rtexes SB100 105524 Podem ser necess rios mais banhos SB100 se o volume de testes aumentar Kit de auto detec o APTIMA 301048 2 pipetas Eppendorf Repeater Plus 105725 2 pipetas 1 000 uL RAININ PR1000 901715 Pipeta eppendorf 20 uL a 200 uL 105726 Pontas para pipeta de repeti o 2 5 mL 21 381 329 Pontas para pipeta de repeti o 5 0 mL 21 381 330 Pontas para pipeta de repeti o 25 0 mL 21 381 115 Ensaio APTIMA COMBO 2 11 502183PT Rev C Sistemas DTS Ref Cat Pontas P1000 Style 105049 ponta de di metro especial apenas dispon vel na Gen Probe Pontas de pipeta 20 uL a 200 uL 705512 Fisher Unidades de dez tubos Ten Tube Units TTU TU0022 Cassetes de dez pontas Ten Tip Cassettes TTC 104578 Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para 301041 Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina Kit APTIMA de colheita de esp cimes de urina para esp cimes de 301040 urina masculinos e femininos Tubos de transporte APTIMA para esp cimes de urina para 105575 esp cimes de urina masculinos e femininos Kit APTIMA de colheita de esfrega os vaginais 301162 Kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA 301154C Padr o de calibra
34. apreens o Assegure se de que o man metro de v cuo cumpre as especifica es do teste de fuga Poder demorar 15 segundos a obter esta leitura Reconecte o distribuidor de aspira o e assegure se de que o man metro de v cuo cumpre as especifica es do n vel de v cuo Deixe a bomba de v cuo ligada at que os passos de captura do alvo estejam conclu dos e a tubagem de aspira o esteja seca 19 Aplique firmemente o distribuidor de aspira o ao primeiro conjunto de pontas Aspire todo o l quido baixando as pontas na primeira TTU at as pontas entrarem brevemente em contacto com as partes inferiores dos tubos N o mantenha as pontas em contacto com as partes inferiores dos tubos 20 Ap s ter terminado a aspira o ejecte as pontas na TTC original Repita os passos da aspira o para as TTU restantes usando uma ponta dedicada para cada esp cime 21 Coloque o distribuidor sobre cada TTU e usando a bomba da esta o de fornecimento forne a 1 0 mL de Solu o de Lavagem APTIMA a cada tubo da TTU 22 Cubra os tubos com um cart o de selagem e retire o suporte da base magn tica TCS Coloque uma vez no misturador v rtex de multitubos Consulte a sec o Notas ao procedimento Utiliza o do v rtex para mais informa es 1 Consulte a Ficha de Especifica es de V cuo do Sistema de Captura de Alvo localizada na parte posterior do Target Capture System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema de Captura de
35. apresentada na Tabela 13 Tabela 13 Distribui o de RLU Total dos Controlos do Ensaio APTIMA COMBO 2 Total de RLU x1 000 Estudos Cl nicos de Estudo Cl nico de Controlo Estat stica Esfrega o Endocervical Estudo Cl nico de Esp cime Esfrega o da Uretra Esp cimes de PERE PA A citol gico em base Masculina e Esp cime Esfrega o Vaginal liquida PreservCyt de Urina Maxima 1 572 1 996 1 747 Percentil 75 1 160 1 279 1 264 Controlo Positivo CT Controlo Negativo GC Mediana 1 063 1 135 1 165 Percentil 25 996 933 1 024 Minima 274 174 494 Maxima 1 359 1 420 1 438 Percentil 75 1 202 1 255 1 288 Controlo Positivo GC Controlo Negativo CT Mediana 1 093 1 169 1 201 Percentil 25 989 1 084 1 099 M nima 167 249 166 Estudo de Precis o Testes de precis o foram feitos em tr s locais para obter medidas de repetibilidade e reprodutividade Estudos de precis o foram conduzidos como parte do Estudo cl nico de esfrega os Endocervicais Esfrega os uretrais masculinos e esp cimes de urina assim como no Estudo Cl nico de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Para o primeiro estudo cada local tinha tr s pain is id nticos de 13 amostras contendo de 0 a 500 fg de CT rRNA de 0 a 25 000 fg de GC rRNA ou combina es de CT e GC rRNA Os testes foram feitos em tr s dias usando um lote diferente de kit de ensaio por dia As RLU totais e os dados estat sticos descriti
36. de sensibilidade analitica A sensibilidade analitica do ensaio APTIMA COMBO 2 foi testada utilizando tr s matrizes de amostras representativas Estas foram urina processada com meio de transporte para urina Urine Transport Medium UTM esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt dilu da com meio de transporte para esfrega os Swab Transport Medium STM e STM Os rRNA de CT e GC foram misturados em conjuntos destas tr s matrizes nas seguintes concentra es a concentra es equivalentes em RNA de 0 5 fg ensaio 5 fg ensaio e 50 fg ensaio equivalentes em rRNA de 0 25 IFU mL 2 5 IFU mL ou 25 IFU mL para CT ou 25 fg ensaio 250 fg ensaio ou 2500 fg ensaio para GC equivalentes em rRNA de 12 5 CFU mL 125 CFU mL ou 1 250 CFU mL Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Estes pain is foram testados em tr s Sistemas PANTHER utilizando tr s lotes de reagentes em replicados de 96 A concordncia com os resultados esperados foi calculada A concord ncia com os resultados esperados foi de 100 IC de 95 96 1 100 para todos os pain is de urina 100 IC de 95 96 0 100 para todos os pain is de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt e de 100 Ic de 95 96 1 100 para todos os pain is de STM A sensibilidade anal tica do ensaio de 2 5 IFU mL para CT e 125 CFU mL para GC Estudo de reprodutibilidade A precis o do ensaio APTIM
37. do Operador do Sistema de Captura de Alvo Caso utilize o banho de calor seco v rtex SB100 consulte a SB100 Application Sheet Ficha de aplica o SB100 11 Cubra as TTU com cart es de selagem e agite o suporte manualmente com suavidade N o coloque os esp cimes no vortex Incube o suporte a 62 C 1 C num banho de gua por 30 5 minutos 12 Remova o suporte do banho de gua e seque a parte inferior dos tubos com material absorvente 13 Assegure se de que os cart es de selagem est o bem colocados Caso necess rio substitua os com novos cart es de selagem e sele bem as TTU 14 Leve o suporte ao v rtex por 60 segundos no misturador v rtex multitubos Consulte a sec o Notas ao procedimento Utiliza o do v rtex para mais informa es Inicie o procedimento de v rtex num per odo de 2 minutos ap s a remo o do suporte do banho de gua 15 Sem remover os cart es de selagem incube o suporte temperatura ambiente durante 30 5 minutos 16 Coloque o suporte na base magn tica TCS durante 5 a 10 minutos 17 Prepare a linha da bomba da esta o de fornecimento bombeando a Solu o de Lavagem APTIMA atrav s do distribuidor Bombeie l quido bastante pelo sistema para que n o haja bolhas de ar na linha e que todos os dez bocais forne am um fluxo constante de l quido 18 Ligue a bomba de v cuo e desconecte o distribuidor de aspira o do primeiro conector entre o distribuidor de aspira o e o frasco de
38. e Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina Kit APTIMA de Colheita de Esp cimes de Urina para Esp cimes de Urina Masculina e Feminina e Kit APTIMA de colheita de esfrega os vaginais e Kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA para utiliza o com amostras ginecol gicas colhidas em solu o PreservCyt Espec ficos dos sistemas DTS Kit PACE de Colheita de Esp cimes para Esp cimes da Uretra Masculina ou da Conjuntiva em conjunto com o Kit Adaptador APTIMA e Kit PACE de Colheita de Esp cimes para Esp cimes Endocervicais em conjunto com o Kit Adaptador APTIMA A Instru es para colheita Consulte o folheto da embalagem do respectivo kit de colheita de esp cimes para instru es de colheita B Transporte e armazenamento de esp cimes antes do teste 1 Esp cimes de esfrega o a Ap s a colheita transporte e armazene o esfrega o no tubo de transporte de esp cimes de esfrega o entre 2 C a 30 C at que seja testado Os esp cimes t m de ser analisados com o ensaio APTIMA COMBO 2 no espa o de 60 dias ap s a colheita Caso seja necess rio um armazenamento mais prolongado congele a uma temperatura entre 20 C e 70 C durante at 12 meses ap s a colheita ver Estudos de Estabilidade de Esp cime 2 Esp cimes de urina a As amostras de urina que permanecem no recipiente de colheita principal devem ser transp
39. finais O controlo positivo CT controlo negativo GC deve ocupar a primeira posi o e a pen ltima posi o de uma lista de trabalho A etiqueta deste controlo cor de rosa O texto da etiqueta CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC O controlo positivo GC controlo negativo CT deve ocupar a segunda posi o e a ltima posi o de uma lista de trabalho A etiqueta deste controlo azul esverdeada O texto da etiqueta CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT 2 Cada tubo de controlo APTIMA pode ser testado uma vez A tentativa de pipetar mais de uma vez do tubo de esp cimes pode provocar erros por volume insuficiente B Temperatura Considera se que a temperatura ambiente a compreendida entre 15 C e 30 C C P das Luvas Como em qualquer sistema de reagente o excesso de p em algumas luvas pode causar a contamina o de tubos abertos E recomendada a utiliza o de luvas sem p D Protocolo de Monitoriza o de Contamina o Laboratorial para o Sistema TIGRIS DTS Existem muitos factores espec ficos do laborat rio que podem contribuir para a contamina o incluindo volume de testes fluxo de trabalho predom nio de doen as e v rias outras actividades laboratoriais Esses factores devem ser considerados ao estabelecer se a frequ ncia da monitoriza o de contamina o Os intervalos para a monitoriza o de contamina o devem ser estabelecidos com base nas pr ticas e procedimentos de cada
40. infectado 352 1 276 Total 359 1 288 An lise de N gonorrhoeae por estado de infec o em pacientes do sexo masculino Tabela 12 Esfregaco da Uretra e Esp cime de Urina Estado de infec o NAATA Cultura ROBOR Sie do paciente UM EM EM UM EM Sint Assint Infectado N A 1 0 Infectado N A N A 0 1 Infectado N A 1 0 Infectado 1 0 Infectado 4 1 Infectado N A N A 0 1 Infectado N A N A 8 0 Infectado N A 1 0 Infectado N A 50 1 Infectado 4 1 Infectado N A 0 Infectado 11 1 Infectado 1 0 Infectado 3 0 Infectado N A 1 0 Infectado 229 9 Nao infectado N A 0 1 Nao infectado N A 0 1 Nao infectado N A 17 9 Nao infectado 411 349 Nao infectado 5 10 Nao infectado 1 1 Nao infectado 0 1 Total 750 387 UM Urina masculina EM Esfrega o uretral masculino N A Esp cime n o obtido ou dispon vel para teste Ensaio APTIMA COMBO 2 65 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Distribui o RLU de Controlos APTIMA A distribui o de RLU para o controlo positivo APTIMA GC controlo negativo CT e o controlo positivo APTIMA CT controlo negativo GC de todos os testes do ensaio APTIMA COMBO 2 executados durante os estudos cl nicos dos esp cimes
41. kit G Aviso irritantes e corrosivos Evite o contacto do Auto Detect 1 e do Auto Detect 2 com a pele olhos e membranas mucosas Lave com gua se estes fluidos entrarem em contacto com a pele ou os olhos Se ocorrer o derrame destes fluidos dilua com gua e seque com um pano H As superf cies de trabalho pipetas e outros equipamentos t m de ser regularmente descontaminados com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Ensaio APTIMA COMBO 2 4 502183PT Rev C Informa es gerais Espec ficos dos sistemas DTS altamente recomendada a presen a de uma rea separada para DKA para minimizar a contamina o de produtos de amplifica o no ensaio Esta rea dedicada deve ser distante da rea de prepara o de reagentes captura de alvo e rea de amplifica o J Para impedir que as areas do laborat rio fiquem contaminadas com o produto de amplifica o a rea do laborat rio deve ser disposta de modo a que o fluxo de trabalho seja unidireccional da prepara o dos reagentes para DKA Esp cimes equipamentos e reagentes n o devem ser devolvidos rea onde um passo anterior tenha sido executado Al m disso a equipa n o deve voltar a reas de trabalho anteriores sem as devidas medidas de protec o contra contamina o Relacionado com os esp cimes K Este ensaio foi testado utilizando apenas esp cimes endocervicais e uretrais masculinos esp cimes citol gicos em base l quid
42. laborat rio Para monitorizar a contamina o laboratorial o seguinte procedimento deve ser executado usando o Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina 1 Etiquete os tubos de transporte dos esfrega os com n meros correspondentes s reas a serem testadas 2 Remova o esfrega o de colheita de esp cimes esfrega o com haste azul e impress o verde de sua embalagem humede a o no meio para transporte de esfrega o e esfregue a rea designada com um movimento circular 3 Insira imediatamente o esfrega o no tubo de transporte Ensaio APTIMA COMBO 2 28 502183PT Rev C Sistema TIGRIS DTS 4 Quebre com cuidado a haste da zaragatoa na linha marcada tendo o cuidado de evitar que o conte do salpique 5 Tape novamente o tubo de transporte de esfrega os bem apertado 6 Repita os Passos 2 a 5 em cada rea a amostrar com a zaragatoa Caso os resultados de CT ou GC sejam positivos ou inconclusivos consulte Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual de instru es do Sistema TIGRIS DTS para obter mais informa es sobre monitoriza o de contamina es espec ficas do Sistema TIGRIS DTS Ensaio APTIMA COMBO 2 29 502183PT Rev C Sistema PANTHER Sistema PANTHER l THH mn mM mta Hiv m mma E Os reagentes do ensaio APT
43. listas de trabalho por lote de kit de ensaio APTIMA COMBO 2 em cada um de dois Sistemas TIGRIS DTS completando um total de 12 listas de trabalho cada Assim um total de 36 listas de trabalho foi conclu do de forma geral Cada lista de trabalho foi composta de seis pain is de precis o id nticos com 12 membros contendo entre O e 2 000 fg ensaio de rRNA CT e ou entre 0 e 2 433 fg ensaio de rRNA GC Cada lista de trabalho foi composta de seis pain is de precis o id nticos com 12 membros contendo entre O e 2 000 fg ensaio de rRNA CT e ou entre 0 e 5 000 fg ensaio de rRNA GC Os membros do painel contendo CT ou GC foram divididos em categorias de concentra o de CT baixa 5 ou 100 fg ensaio interm dia 1 000 fg ensaio ou elevada gt 2 000 fg ensaio e em categorias de concentra o de GC baixa lt 250 fg ensaio interm dia aprox 2 400 fg ensaio ou elevada 5 000 fg ensaio A reprodutibilidade foi estabelecida ao misturar o meio de transporte do esfrega o com o rRNA A reprodutibilidade ao testar os esp cimes de esfrega os contendo o organismo alvo n o foi determinada A precis o foi calculada de acordo com as Orienta es EP5 A do NCCLS 22 Ensaio APTIMA COMBO 2 77 502183PT Rev C Concordancia de esp cimes clinicos no Sistema TIGRIS DTS Tabela 23 Dados de Precisao do Sistema TIGRIS DTS Conc M dia Intrateste Entre Locais Entre Lotes Entre Operadores Entre Testes cr ec Ru qu Vu
44. lote na Ficha de C digo de Barras do Lote Principal para garantir que os reagentes adequados no kit estejam emparelhados Abra o frasco de TCR e deposite a tampa sobre uma superf cie de trabalho limpa e coberta Abra o frasco de TCR B e verta o conte do por inteiro no frasco de TCR Espere que uma pequena quantidade de l quido permane a no frasco de TCR B Tape o frasco de TCR e agite suavemente a solu o para misturar o conte do Evite formar espuma durante este passo Registe as iniciais do operador e a data actual na etiqueta Elimine o frasco e a tampa de TCR B Ensaio APTIMA COMBO 2 26 502183PT Rev C Sistema TIGRIS DTS 3 Prepare o reagente de selec o a Verifique o n mero do lote no frasco de reagente para se certificar de que corresponde ao n mero de lote na folha de c digo de barras do lote principal b Registe as iniciais do operador e a data actual na etiqueta Nota Misture bem invertendo todos os reagentes antes de os carregar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes C Prepara o de reagentes para reagentes previamente reconstitu dos 1 Os reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda previamente reconstitu dos t m de atingir a temperatura ambiente 15 C a 30 C antes do in cio do ensaio 2 Se o reagente de sonda reconstitu do contiver um precipitado que n o volte a solubilizar se a temperatura ambiente aque a o frasco tapado a uma temperatura n o superi
45. n o foi avaliado em mulheres gr vidas U O desempenho dos esp cimes de esfrega os endocervicais vaginais uretrais masculinos e dos esp cimes de urina feminina e masculina assim como dos esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt n o foi avaliado em adolescentes com menos de 16 anos de idade V O desempenho do Sistema TIGRIS DTS n o foi determinado a altitudes acima dos 2 240 m 7 355 p s Realizar se o verifica es volum tricas adicionais e estudos espec ficos para os ensaios antes ou como parte do processo de instala o e aceita o em laborat rios acima dos 2 240 m 7 355 p s de altitude W O desempenho do Sistema PANTHER n o foi determinado a altitudes acima dos 2 000 m 6 561 p s X N o h evid ncias de degrada o de cidos nucl icos em Solu o PreservCyt Se os esp cimes citol gicos l quidos em solu o PreservCyt tiverem pequena quantidade de material celular CT e GC pode ocorrer distribui o desigual deste material celular Al m disso quando comparado com amostras directas de Meio de Transporte de Esfrega os APTIMA o volume adicional de solu o PreservCyt resulta em maior dilui o do material de amostra Esses factores podem afectar a habilidade de detectar pequena quantidade de organismos no material colhido Se resultados negativos dos esp cimes n o se encaixarem na impress o cl nica um novo esp cime pode ser necess rio Y Clientes devem validar um processo de trans
46. novamente Total de RLU x1 000 para alcan ar Resultado CT Tipo Cin tico Negativo Equ voco Positivo Apenas CT 1a lt 25 25a lt 100 100 a lt 4 500 CT eGC ta lt 85 85 a lt 250 250 a lt 4 500 CT indeterminado 1a lt 85 85 a lt 4 500 N A Total de RLU x1 000 para alcan ar Resultado GC Tipo Cin tico Negativo Equ voco Positivo Apenas GC 1a lt 60 60 a lt 150 150 a lt 4 500 GC e CT ta lt 85 85 a lt 250 250 a lt 4 500 GC indeterminado 1a lt 85 85 a lt 4 500 N A B Resultados de Controlo de Qualidade e Aceitabilidade O controlo positivo CT controlo negativo GC e o controlo positivo GC controlo negativo CT agem como controlos para os passos de captura de alvo amplifica o e detec o do ensaio De acordo com directrizes ou exig ncias de regulamentos locais estaduais e ou federais ou organiza es de acredita o controlos adicionais para lise celular e estabiliza o de RNA podem ser inclu dos O controlo positivo CT controlo negativo GC serve como o controlo negativo para os resultados de teste GC O controlo positivo GC controlo negativo CT serve como o controlo negativo para os resultados de teste CT Se desejado um controlo negativo duplo fornecido pelo usu rio pode ser adicionado para monitorizar o sinal de fundo do ensaio A prepara o correcta dos esp cimes confirmada visualmente pela presen a de uma nica zaragatoa de colheita APTIMA num tubo de
47. para CT e GC em todos os tempos e temperaturas B Esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Os dados que justificam as condi es recomendadas para transporte e armazenamento dos esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram gerados a partir de um conjunto de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt negativos Quatro amostras em conjunto foram misturados com CT e GC em concentra es finais de 10 IFU e 100 CFU por reac o respectivamente As amostras de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram submetidas a 30 C por 7 dias e ap s isso 1 0 mL da amostra foi adicionada a um Tubo APTIMA de Transfer ncia As amostras misturadas foram mantidas a 4 C 10 C e 30 C As amostras armazenadas a 4 C e 10 C foram testados em duplicata nos dias 0 6 13 26 30 e 36 As amostras armazenadas a 30 C foram testadas em duplicata nos dias 0 5 8 14 e 17 Quatro conjuntos de amostras citol gicas em base l quida PreservCyt misturadas foram adicionados a tubos de transfer ncia APTIMA e colocados a 30 C durante 14 dias antes de ser armazenados a 20 C ou a 70 C As amostras a 20 C e a 70 C foram testadas em duplicata ap s 0 30 60 90 e 106 dias de armazenamento Todas as condi es de teste foram positivas para CT e GC em todos os tempos e temperaturas C Esp cimes de Esfrega o Vaginal Os dados que justificam as condi es recomendadas para transporte e armazenamento das a
48. repeti o adicione 200 uL do reagente a leo a cada tubo de reac o Cubra os tubos com um cart o de selagem e leve ao misturador v rtex multitubos Incube o suporte num banho de gua a 62 C 1 C por 10 5 minutos Incube o suporte num banho de gua a 42 C 1 C por 5 2 minutos Com o suporte no banho de gua remova cuidadosamente o cart o de selagem e utilizando a pipeta de repeti o adicione 25 uL do reagente enzim tico reconstituido a cada tubo de reac o Todas as reac es dever o agora ter a cor laranja 7 Cubra imediatamente os tubos com um cart o de selagem novo retire o suporte do banho de gua e misture os tubos de reac o agitando suavemente o suporte manualmente 8 Incube o suporte num banho de gua a 42 C 1 C por 60 15 minutos ad ee E Dual Kinetic Assay DKA Caso utilize o banho de calor seco v rtex SB100 consulte a SB100 Application Sheet Ficha de aplica o SB100 A pipeta de repeti o usada nos passos de hibridiza o e selec o deve ser dedicada para utiliza o somente nestes passos Consulte a sec o Avisos e precau es 1 Hibrida o a Remova o suporte do banho de gua e transfira para a rea de DKA Utilizando a pipeta de repeti o adicione 100 uL do reagente de sonda reconstitu do a cada tubo de reac o Todas as reac es dever o agora ter a cor amarela b Cubra os tubos com um cart o de selagem e leve ao misturador v rtex multi
49. resultado CT GC O esp cime tamb m apresentou resultado GC no ensaio de amplifica o alternativo TMA 21 1 foi CT GC quando submetido a novo teste nos Sistemas DTS e foi CT no ensaio de amplifica o TMA alternativo 311 12 foram novamente testados 11 11 foram CT GC quando se voltaram a testar com o ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistemas DTS 9 11 foram CT quando submetidos a testes no ensaio de amplifica o alternativo TMA e 2 11 foram CT 2 2 foram CT GC quando se voltaram a testar com o ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistemas DTS e foram GC no ensaio de amplifica o TMA alternativo 52 2 foram CT GC quando se voltaram a testar com o ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistemas DTS e foram CT no ensaio de amplifica o TMA alternativo Tabela 17 Estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos resultados para esp cimes de urina feminina e masculina Sistemas DTS Sistema TIGRIS DTS Total CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC 32 0 0 0 32 CT GC 0 100 0 43 101 CT GC 0 0 52 0 52 CT GC 0 8 1 776 785 Total 32 108 53 777 970 Concord ncia percentual 100 89 1 100 92 6 85 9 96 7 98 1 89 9 100 99 9 99 3 100 N A IC de 95 Concord ncia percentual global IC de 95 99 2 98 1 99 5 denota Positivo denota Negativo N A n o aplic vel 17 8 foram CT GC quando se voltaram a testar com o ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistemas DTS e foram CT no ensaio de amplifica o TMA al
50. 100 100 99 1 6 353 74 6 268 5 224 93 7 85 8 97 9 97 8 95 3 99 2 92 5 98 2 7 25 20 0 3 2 88 0 90 9 70 8 98 9 100 29 2 100 100 60 0 TODOS 1 065 260 20 774 11 25 4 95 9 92 9 98 0 97 5 96 1 98 5 92 9 98 6 Masculino 1 157 35 6 115 1 22 9 97 2 85 5 99 9 95 0 89 5 98 2 85 4 99 1 2 96 22 1 73 0 22 9 100 84 6 100 98 6 92 7 100 95 7 100 3 249 78 2 169 0 31 3 100 95 4 100 100 95 8 99 9 97 5 100 Urina 4 51 12 0 39 0 23 5 100 73 5 100 98 8 91 0 100 100 100 5 162 31 2 129 0 19 1 100 88 8 100 98 5 94 6 99 8 93 9 100 6 353 74 1 273 5 224 93 7 85 8 97 9 99 6 98 0 100 98 7 98 2 7 27 24 0 3 0 88 9 100 85 8 100 100 29 2 100 100 100 TODOS 1 095 276 12 801 6 25 8 97 9 95 4 99 2 98 5 97 4 99 2 95 8 99 3 1 150 34 4 110 2 24 0 94 4 81 3 99 3 96 5 91 3 99 0 89 5 98 2 2 81 11 1 68 1 14 8 91 7 61 5 99 8 98 6 92 2 100 91 7 98 6 3 184 51 13 114 6 31 0 89 5 78 5 96 0 89 8 83 1 94 4 79 7 95 0 4 196 27 2 167 0 13 8 100 87 2 100 98 8 95 8 99 9 93 1 100 Esfregaco 5 370 27 1 341 1 7 6 96 4 81 7 99 9 99 7 98 4 100 96 4 99 7 6 274 35 7 230 2 13 5 94 6 81 8 99 3 97 0 94 0 98 8 83 3 99 1 7 134 10 0 124 0 7 5 100 69 2 100 100 97 1 100 100 100 TODOS 1 389 195 28 1 154 12 14 9 94 2 90 1 97 0 97 6 96 6 98 4 87 4 99 0 Feminino 1 150 34 4 110 2 24 0 94 4 81 3 99 3 96 5 91 3 99 0 89 5 98 2 2 81 12 1 68 0 14 8 100 73 5 100 98 6 92 2 100 92 3 100 3 185 54 3 125 3 30 8
51. 13 Infectado 1 0 1 Infectado N A 1 0 1 Infectado 1 0 1 Infectado 8 3 11 Infectado 1 0 1 Infectado 1 2 3 Infectado N A 1 0 1 Infectado 5 3 8 Infectado 5 0 5 Infectado 2 0 2 Infectado 0 1 1 Infectado 1 4 5 Infectado 1 0 1 Infectado 0 1 1 Nao infectado 0 4 4 Nao infectado 2 1 3 Nao infectado 2 1 3 N o infectado 6 4 10 N o infectado N A 1 0 1 N o infectado N A 1 0 1 N o infectado 4 2 6 N o infectado 1 0 1 N o infectado 0 2 2 N o infectado 1 1 2 N o infectado 1 2 3 N o infectado 3 2 5 N o infectado 2 7 9 N o infectado 12 3 15 N o infectado 623 516 1 139 N o infectado N A 0 2 2 N o infectado 0 1 N o infectado N A 0 1 1 N o infectado N A 11 8 19 N o infectado N A N A 1 0 1 N o infectado N A 0 1 1 N o infectado 0 1 1 Nao infectado N A 2 2 4 Nao infectado N A N A 0 1 1 Nao infectado 12 9 21 Nao infectado N A 0 1 1 Ensaio APTIMA COMBO 2 55 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 7b Esp cimes de Esfregaco Vaginal Colhido pela Paciente e de Esfrega o
52. 15 h 2 2 i 15 17 j 4 7 k 0 2 I 4 9 m 18 20 n 14 14 0 32 34 p 4 8 q 2 4 e r 6 12 Tabela 9b Esfrega os vaginais analisados com o ensaio APTIMA COMBO 2 vs estado de infec o do paciente Esp cime Symptom Sensibilidade Especificidade p Estado PV F NV FN IC de 95 IC de 95 Colne pele Estrega o Assint 629 21 3 605 0 100 83 9 100 99 5 98 6 99 9 Paciente Vaginal Sint 807 51 7 747 2 96 2 87 0 99 5 99 1 98 1 99 6 Colhido Esfrega o Assint 637 21 4 611 1 95 5 77 2 99 9 99 3 98 3 99 8 pelo M dico Vaginal Tudo 1444 72 11 1 358 3 96 0 88 8 99 2 99 2 98 6 99 6 PV Positivo verdadeiro FP Falso positivo NV Negativo verdadeiro FN Falso negativo Os resultados de amplifica o alternada por TMA relativos a GC representam o n de resultados positivos n de esp cimes testados a 3 3 b 6 7 c 3 4 e d 9 11 Ensaio APTIMA COMBO 2 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 9c Esp cimes em PreserCyt analisados com o ensaio APTIMA COMBO 2 vs estado de infec o do paciente Symptom Resultado de AC2 Sensibilidade Especificidade Estado GC PreservCyt ria IC de 95 IC de 95 Positivo 5 0 1 3 Assint Negativo 1 0 5 1 273 83 3 35 9 99 6 99 7 99 2 99 9 Total 6 0 6 1 276 Positivo 7 0 0 0 Sint Negativo 0 0 0 352 100 59 0 100 100 99 0 100 Total 7 0 0 352 Positivo 12 0 1 3 Tudo N
53. 206 2 33 71 4 29 0 96 3 99 0 96 6 99 9 714 99 0 5 388 8 O 375 O 21 100 63 1 100 100 99 0100 100 100 6 282 35 2 244 1 128 97 2 85 5 99 9 99 2 97 1 99 9 94 6 99 6 7 134 5 1 128 0 37 100 47 8 100 99 2 95 8 100 833 100 TODOS 1 484 116 10 1 347 11 8 6 91 3 85 0 95 6 99 3 98 6 99 6 92 1 99 2 E e e a a T e A a a a ET TT PV Positivo verdadeiro FP Falso positivo NV Negativo verdadeiro FN Falso negativo Preval ncia sobrestimada devido colheita inicial ter sido limitada ao rastreio de pacientes sintom ticos Ensaio APTIMA COMBO 2 60 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 10b Esp cimes de Esfregaco Vaginal do ensaio APTIMA COMBO 2 vs Estado de infec o do paciente Esp cime Local N PV FP NV FN Prev pne e an ot 1 70 5 1 6 0 7 1 100 47 8 100 98 5 91 7 100 833 100 2 46 7 O 39 O 152 100 59 0 100 100 91 0 100 100 100 3 45 2 0 43 0 44 100 15 8 100 100 91 8 100 100 100 Colhido E strega o 4 152 1 0 151 0 0 7 100 2 5 100 100 97 6 100 100 100 pela Vacinat 5 130 1 0 129 0 0 8 100 2 5 100 100 97 2 100 100 100 Paciente 6 75 5 2 68 0 6 7 100 47 8 100 97 1 90 1 99 7 71 4 100 7 6 0 0 68 0 0 0 N A 100 94 7 100 N A 100 8 43 0 0 43 0 0 0 N A 100 91 8 100 N A 100 TODOS 629 21 3 605 O 3 3 100 83 9 100 99 5 98 6 99 9 87 5 100 1 227 12 3 292 0 5 3 100 73 5 100 98 6
54. 3 567 1 8 10 567 6 6 3 43 678 12 8 87 678 16 2 110 678 5 9 40 681 10 9 74 681 13 5 92 681 7 4 4 11 252 8 7 22 252 21 8 55 252 4 1 12 295 9 2 27 295 18 0 53 295 Tudo 6 2 173 2 773 13 2 367 2 773 11 9 331 2 773 5 7 167 2 918 12 6 367 2 918 10 6 308 2 918 Tabela 1b Esp cimes de Esfrega o Vaginal Colhido pela Paciente e de Esfrega o Vaginal Colhido pelo M dico Esfrega o Vaginal Colhido pela Paciente Esfrega o Vaginal Colhido pelo M dico Local Preval ncia n positivos n testados Preval ncia n positivos n testados CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC 1 1 8 4 220 16 4 36 220 4 1 9 220 3 7 230 15 7 36 230 3 5 8 230 2 9 6 19 198 18 7 37 198 6 6 13 198 9 5 19 199 18 1 36 199 7 14 199 3 0 9 1 111 9 10 111 2 7 3 111 0 9 1 113 9 7 11 113 1 8 2 113 4 0 4 1 266 9 24 266 1 9 5 266 0 4 1 267 11 2 30 267 2 2 6 267 5 0 5 1 199 7 5 15 199 0 5 1 199 0 5 1 199 7 14 199 0 5 1 199 6 2 8 8 290 10 29 290 5 5 16 290 2 6 296 12 2 36 296 5 4 16 296 7 0 0 102 11 8 12 102 0 0 102 0 0 102 9 8 10 102 0 0 102 8 0 0 48 8 3 4 48 2 1 1 48 0 0 51 7 8 4 51 2 1 51 Tudo 24 34 1 434 11 6 167 1 434 3 3 48 1 434 24 35 1 457 12 1 177 1 457 3 3 48 1 457 Ensaio APTIMA COMBO 2 44 502183PT Rev C Valores esperados dos Sistemas DTS Tabela 1c Esp cimes citol gicos em base l
55. 5 Estudo de concord ncia do painel cl nico misturado Concord ncia com os resultados esperados para CT e GC Concentra o Concentra o Membro do IFU ou CFU mL fg ensaio R pli cT Ge Painel er A ae EE epee TIGRIS PANTHER TIGRIS PANTHER Concd Concd Concd Concd Pain is CT GC Baixa Baixa 2 5 125 5 250 90 100 100 100 100 Med Med 25 1 250 50 2 500 90 100 100 100 100 Baixa Alta 25 2 500 000 5 5 00 000 90 100 100 100 100 Alta Baixa 25 000 125 50 000 250 90 100 100 100 100 Pain is GC Neg Demasiado 0 12 5 0 25 117 100 100 100 100 Baixa Neg Baixa 0 125 0 250 120 100 100 100 100 Neg M dia 0 1 250 0 2 500 120 100 99 2 100 100 Pain is CT alten Baixa 025 0 0 5 0 120 100 100 100 100 Baixa Neg 2 5 0 5 0 120 100 100 100 100 M dia Neg 25 0 50 0 120 100 100 100 100 Pain is negativos Neg Neg 0 0 0 0 360 100 100 99 7 99 7 Um membro do painel foi incorrectamente preparado tendo sido exclu do da an lise Concordancia percentual geral de positivos para CT entre Sistema TIGRIS DTS e Sistema PANTHER IC de 95 100 99 5 100 2Concord ncia percentual geral de positivos para GC entre Sistema TIGRIS DTS e Sistema PANTHER IC de 95 100 99 5 100 Concord ncia percentual geral de negativos entre Sistema TIGRIS DTS e Sistema PANTHER IC de 95 99 9 99 5 100 Ensaio APTIMA COMBO 2 82 502183PT Rev C Desempenho analitico no Sistema PANTHER Estudo
56. 5 2 Infectado 2 9 2 Infectado N A 1 0 Infectado 3 1 Infectado N A 0 1 Infectado E 11 2 Infectado g 2 1 Infectado 62 21 N o infectado N A 2 3 N o infectado 768 559 N o infectado 12 2 N o infectado 4 3 N o infectado 3 0 Total 883 599 UF Urina feminina EF Esfrega o endocervical feminino N A representa esp cimes que n o foram obtidos ou n o estavam dispon veis para teste Ensaio APTIMA COMBO 2 63 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 11b An lise de Esp cimes de Esfrega o Vaginal Colhido pela Paciente e de Esfrega o Vaginal Colhido pelo M dico Ensaio APTIMA E Md NAAT MAAT 2 COMBO 2 Padari Total paciente EF UF EF UF PVS CVS Sint Assint Infectado 44 15 59 Infectado 1 0 1 Infectado N A 0 1 1 Infectado 2 2 4 Infectado N A 1 0 1 Infectado 1 1 2 Infectado 1 1 2 Infectado 1 0 1 Infectado 1 1 2 Infectado 1 0 1 Infectado 1 0 1 Infectado 0 1 1 Infectado 0 1 1 Infectado 1 0 1 Nao infectado 5 1 6 Nao infectado 1 0 1 Nao infectado 1 0 1 Nao infectado 5 2 7 Nao in
57. 7 1 5 12 61 05 48 86 21 117 2 5 Nota A variabilidade de alguns factores pode ser numericamente negativa o que pode ocorrer se a variabilidade devida a esses factores for muito pequena Quando isto ocorre DP 0 e CV 0 N mero total de replicados para cada painel 96 Em testes seleccionados n o se voltou a testar replicados inv lidos individuais Especificidade Anal tica A especificidade anal tica n o foi testada no Sistema PANTHER Consulte a sec o Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS para obter o Estudo de Equival ncia de Especificidade Anal tica Estudos de Equival ncia de Subst ncias Interferentes Sangue comummente encontrado em esp cimes urogenitais pode interferir em alguns ensaios de amplifica o Foi utilizando sangue total para estabelecer o grau de interfer ncia do sangue no Sistema PANTHER relativamente a este potencial interferente Adicionou se sangue fresco a conjuntos cl nicos de esfrega os vaginais esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt p s processados ou esp cimes de urina que depois foram testados para detectar uma potencial interfer ncia com o ensaio na presen a e na aus ncia de alvos de CT e GC Foram utilizados como concentra es alvo os equivalentes em rRNA de 1 CT IFU ensaio 5 fg ensaio e 50 GC c lulas ensaio 250 fg ensaio pois estes representam a Ensaio APTIMA COMBO 2 502183PT Rev C sensibilidade analitica do ensaio Os esp cimes foram testados no
58. 75 esp cimes de urina masculinos e femininos Lix via solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 M a 1 0M gua para o Sistema TIGRIS DTS consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual de Instru es do Sistema TIGRIS DTS para obter as especifica es Ensaio APTIMA COMBO 2 24 502183PT Rev C Sistema TIGRIS DTS Ref Cat Luvas descartaveis Padr o de calibra o SysCheck 301078 Tampas penetr veis APTIMA 105668 Tampas n o penetr veis de substitui o 103036A Tampas suplentes para os kits de 250 testes Solu es de reconstitui o de amplifica o e de sonda CL0041 100 tampas Solu o de reconstitui o enzim tica 501616 100 tampas TCR e reagente de selec o CL0040 100 tampas Materiais Opcionais Ref Cat Kit de controlos APTIMA 301110 Refor o de lix via GEN PROBE 302101 para a limpeza de rotina de superf cies e equipamento Procedimento de Teste do Sistema TIGRIS DTS Nota Consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual de Instru es do Sistema TIGRIS DTS para para mais informa es sobre procedimentos do Sistema TIGRIS DTS A Prepara o da rea de trabalho 1 Limpe as superf cies de trabalho onde os reagentes e amostras ser o preparados Limpe as superf cies de trabalho com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Deixe a solu o de hipoclorito de s dio em contacto com as superf cies durante pelo menos 1 minuto enxag
59. 8 4 96 3 99 5 99 8 98 7 100 Urina Assint 383 13 2 368 0 100 75 3 100 99 5 98 1 99 9 Todos 1 134 324 3 802 5 98 5 96 5 99 5 99 6 98 9 99 9 Sint 881 94 15 772 0 100 96 2 100 98 1 96 9 98 9 Esfregaco Assint 596 31 2 562 1 96 9 83 8 99 9 99 6 98 7 100 Todos 1 479 126 17 1335 1 99 2 95 7 100 98 7 98 0 99 3 Feminino Sint 883 87 7 782 7 92 6 85 3 97 0 99 1 98 2 99 6 Urina Assint 599 28 3 564 4 87 5 71 0 96 5 99 5 98 5 99 9 Todos 1 484 116 10 1 347 11 91 3 85 0 95 6 99 3 98 6 99 6 Sint 1 605 398 20 1 184 3 99 3 97 8 99 8 98 3 97 4 99 0 Esfrega o Assint 974 46 14 913 97 9 88 7 99 9 98 5 97 5 99 2 Todos 2 582 445 34 2099 4 99 1 97 7 99 8 98 4 97 8 98 9 oS Sint 1 633 398 8 1 215 12 97 1 94 9 98 5 99 3 98 7 99 7 Urina Assint 982 41 5a 932 4 91 1 78 8 97 5 99 5 98 8 99 8 Todos 2 618 440 13 2 149 16 96 5 94 4 98 0 99 4 99 0 99 7 EE E a a ee a a a a A PV Positivo verdadeiro FP Falso positivo NV Negativo verdadeiro FN Falso negativo Inclui um indiv duo do sexo masculino para o qual os sintomas n o foram relatados Inclui uma mulher para a qual os sintomas n o foram relatados Inclui um homem e uma mulher para quem os sintomas n o foram relatados Os resultados de TMA alternativo relativos a GC representam o n de resultados positivos n de esp cimes testados a 5 5 b 12 12 c 17 17 d 0 1 e 2 2 f 2 3 g 13
60. 97 8 88 2 99 9 96 0 79 6 99 9 98 6 92 7 100 N A IC de 95 Concord ncia percentual global IC de 95 98 2 94 9 99 6 denota Positivo denota Negativo N A n o aplic vel Ensaio APTIMA COMBO 2 15 502183PT Rev C Concordancia de esp cimes clinicos no Sistema TIGRIS DTS Tabela 20 Estudo de Concord ncia de Painel Cl nico CT GC A Concord ncia com Resultados Esperados de CT e GC para Pain is de Esfrega o Endocervical Esfrega o da Uretra Masculina e de Urina Feminina e Masculina Concentra o do membro sess CT GC Membro do Painel do painel ae CT GC CT GC apie TIGRIS DTS TIGRIS DTS IFU mL CFU mL Concd Concd Concd Concd Baixa Baixa 2 5 125 20 100 100 100 100 Baixa Alta 2 5 125 000 20 100 95 100 100 Alta Baixa 2 500 125 20 100 100 100 100 Alta Alta 2 500 125 000 20 100 100 100 100 ras Baa 0 25 0 20 85 100 100 100 Baixa Neg 2 5 0 20 100 100 100 100 M dia Neg 25 0 20 100 100 100 100 Alta Neg 2 500 0 20 100 100 100 100 Neg Demasiado 0 12 5 20 100 100 100 100 Baixa Neg Baixa 0 125 20 100 100 100 100 Neg M dia 0 1 250 19 100 100 100 100 Neg Alta 0 125 000 20 100 100 100 100 Neg Neg 0 0 20 100 100 100 100 Concordancia percentual global entre TIGRIS e DTS IC de 95 99 3 98 3 99 8 IFU unidades formadoras de inclus es CFU unidades formadoras de col nias TIGRIS Concd concord ncia entre Sistema TIGRIS DTS e os resultados es
61. 99 4 98 8 99 8 Total 60 2 12 1 214 Positivo 29 0 0 5 Sint Negativo 1 3 4 317 96 7 82 8 99 9 98 5 96 5 99 5 Total 30 3 4 322 Positivo 87 1 0 11 Tudo Negativo 3 4 16 1 525 96 7 90 6 99 3 99 2 98 7 99 6 Total 90 5 16 1 536 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio ACT Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio ACT Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio ACT Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio ACT Ensaio APTIMA COMBO 2 51 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Desempenho por institui o cl nica para C trachomatis Tabela 6a Esp cimes do ensaio APTIMA COMBO 2 vs Estado de infec o do paciente Esp cime Local N PV FP NV FN po gohan CR Ro ply 1 157 35 6 115 1 22 9 97 2 85 5 99 9 95 0 89 5 98 2 85 4 99 1 2 93 19 2 72 0 20 4 100 82 4 100 97 3 90 6 99 7 90 5 100 3 248 76 5 165 2 31 5 97 4 91 0 99 7 97 1 93 3 99 0 93 8 98 8 4 51 12 1 38 0 23 5 100 73 5 100 97 4 86 5 99 9 92 3 100 Esfregaco 5 138 24 0 113 1 18 1 96 0 79 6 99 9 100 96 8
62. A COMBO 2 foi avaliada entre tr s Sistemas PANTHER e tr s lotes de kits de ensaio APTIMA COMBO 2 durante um per odo de 24 dias Os pain is foram efectuados misturando rRNA de CT e ou GC em STM nas concentra es indicadas na Tabela 26 Os operadores realizaram dois testes por dia analisando cada membro do painel em duplicado por teste Foi calculada a concord ncia com o resultado esperado e a precis o foi estimada de acordo com as Orienta es EP5 A2 do NCCLS 24 O n mero de replicados de cada painel foi de 96 A Tabela 26 apresenta os dados de precis o de RLU em termos de m dia desvio padr o coeficiente de varia o CV concord ncia percentual com os resultados esperados e c lculos de variabilidade entre instrumentos entre lotes entre testes e intrateste assim como a variabilidade total Ensaio APTIMA COMBO 2 83 502183PT Rev C Desempenho analitico no Sistema PANTHER Tabela 26 Precis o do Sistema PANTHER para o ensaio APTIMA COMBO 2 CT Gc M dia 9 s Entre Entre Lotes Entre Testes Intrateste Total Matriz N deRLU o instrumentos IFU mL CFU mL x1 000 Concd DP CV DP Cv DP Cv DP Cv DP Cv x1 000 x1 000 x1 000 x1 000 x1 000 0 0 96 6 100 0 06 1 0 88 13 5 0 0 1 02 15 7 1 3 20 1 0 25 0 95 1 226 100 70 03 5 7 20 03 1 6 843 07 47 05 38 871 7 1 2 5 0 96 1 249 100 77 97 6 2 6 11 0 5 0 0 32 87 2 6 848 6 8 25 0 95 1
63. As concord ncias negativas de esfrega o e urina foram de 100 e 98 0 respectivamente para CT e ambas de 100 para GC Tr s de cinco replicados do painel de urina feminina que estavam uma ordem de grandeza abaixo da sensibilidade anal tica indicada para o ensaio APTIMA COMBO 2 que de 1 IFU ensaio para CT foram Ensaio APTIMA COMBO 2 73 502183PT Rev C Concordancia de esp cimes clinicos no Sistema TIGRIS DTS CT no Sistema TIGRIS DTS Um de cinco replicados do painel de urina feminina de um painel distinto foi CT nos Sistemas DTS Tabela 16 Estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos resultados para esfrega os endocervicais e uretrais masculinos Sistemas DTS Sistema TIGRIS DTS Total CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC 30 0 0 0 30 CT GC 0 108 0 2 110 CT GC 4 0 67 0 68 CT GC 0 12 2 796 810 Total 31 120 69 798 1 018 Concord ncia percentual 96 8 83 3 99 9 90 0 83 2 94 7 97 1 89 9 99 6 99 7 99 1 100 N A IC de 95 Concord ncia percentual global IC de 95 98 3 97 3 99 0 denota Positivo denota Negativo n a n o aplic vel Dados n o mostrados dois esp cimes deram resultados equ vocos para CT GC em ambos os Sistema TIGRIS DTS e Sistemas DTS Um esp cime deu resultados CT GC no Sistema TIGRIS DTS mas resultados CT GC equ vocos nos Sistemas DTS Quando se voltou a testar com o ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistemas DTS este esp cime deu um
64. CT por sexo tipo de esp cime e estado sintom tico s o apresentadas na Tabela 5b A Tabela 6b mostra os valores de sensibilidade especificidade e preditivos do ensaio APTIMA COMBO 2 para CT em compara o com o estado de infec o do paciente para cada institui o cl nica e no geral A sensibilidade e a especificade para GC por sexo tipo de esp cime e estado sintom tico s o apresentadas na Tabela 9b A Tabela 9b mostra os valores de sensibilidade especificidade e preditivos do ensaio APTIMA COMBO 2 para GC em compara o com o estado de infec o do paciente para cada institui o cl nica e no geral As amostras de ensaio APTIMA COMBO 2 que tiveram resultado positivo e pacientes infectados com status negativo ou seja falsos positivos aparentes foram testados em ensaios TMA alternados para CT e GC estes ensaios TMA alternados t m como alvo sequ ncias que s o nicas em rela o aos que t m como alvo o ensaio APTIMA COMBO 2 Os resultados dos ensaios TMA alternativos n o foram utilizados para alterar as categoriza es originais dos pacientes Tabelas 5b e 9b Dos 1 464 pacientes registados havia 13 com estado de infec o do paciente por CT desconhecido e 14 pacientes com estado de infec o do paciente por GC desconhecido Os pacientes foram designados com um estado de infec o do paciente desconhecido se havia falta de resultados que evitassem determina es conclusivas de status de infec o Os resultados desses pacie
65. IMA COMBO 2 A sensibilidade anal tica de Neisseria gonorrhoeae foi determinada por compara o directa entre dilui es de 57 isolados cl nicos diferentes em cultura e o ensaio APTIMA COMBO 2 com esfrega os e esp cimes de urina e 20 isolados cl nicos com esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt A proposta de sensibilidade anal tica para o ensaio 50 c lulas ensaio 362 c lulas esfrega o 250 c lulas mL urina 488 c lulas mL de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Contudo todas as estirpes foram positivas com menos de 50 c lulas ensaio Especificidade Anal tica Um total de 154 culturas isoladas foram avaliadas utilizando o ensaio APTIMA COMBO 2 Estas culturas isoladas inclu ram 86 organismos que podem ser isolados do tracto urogenital e 68 organismos adicionais que representam uma sec o transversal filogen tica de organismos Os organismos testados inclu ram bact rias fungos leveduras parasitas e v rus Todos os organismos excepto C psittaci C pneumoniae e v rus foram testados a 1 0 x 10 c lulas ensaio em esfrega os e em meio de transporte de urina Os organismos Chlamydia e Neisseria foram testados no meio solu o PreservCyt C psittaci e C pneumoniae foram testados a 1 0 x 10 IFU ensaio Os virus foram testados da seguinte forma a v rus herpes simplex e Il 2 5 x 10 TCIDso ensaio b papilomav rus humano 16 2 9 x 10 c pias de DNA ensaio e c citomegalov rus 4
66. IMA COMBO 2 para CT e aun oe GC s o indicados abaixo para o Sistema PANTHER Os S mbolos para Identifica o dos Reagentes tamb m s o listados junto ao nome do reagente Reagentes e materiais fornecidos Kit de ensaio APTIMA COMBO 2 100 testes 2 caixas e um kit de controlos Ref Cat 302923 250 testes 2 caixas e um kit de controlos Ref Cat 303094 Caixa refrigerada APTIMA COMBO 2 Caixa 1 de 2 armazenar entre 2 Ce 8 C ap s recep o Quantidade Quantidade S mbolo Componente kit de 250 kit de 100 testes testes A Reagente de Amplifica o APTIMA COMBO 2 1 frasco 1 frasco cidos nucleicos n o infecciosos secos em solu o tamponada contendo lt 5 de agente de volume E Reagente Enzim tico APTIMA COMBO 2 1 frasco 1 frasco Transcriptase reversa e RNA polimerase secos em solu o tamponada HEPES contendo lt 10 de reagente de volume P Reagente de Sonda APTIMA COMBO 2 1 frasco 1 frasco Sondas de DNA quimioluminescentes n o infecciosas secas em solu o tamponada com succinato contendo lt 5 de detergente TCR B Reagente B de Captura de Alvo APTIMA COMBO 2 1x0 61mL 1x0 30mL cidos nucleicos n o infecciosos numa solu o tamp o contendo lt 5 de detergente Caixa APTIMA COMBO 2 de temperatura ambiente Caixa 2 de 2 armazenar entre 15 C e 30 C ap s recep o Quantidade Quantidade S mbolo Componente kit de 250 kit de 100 testes testes AR Solu o de Reconstitui o de Amplifica o 1x27 7mL 1x11 9
67. L2 e L3 que podem provocar doen as em seres humanos 34 Os serovares D a K s o a principal causa de infec es genitais por clam dia em homens e mulheres 26 A C trachomatis pode causar uretrite n o gonoc cica epididimite proctite cervicite salpingite aguda e doen a inflamat ria p lvica PID 3 15 28 29 As infec es por C trachomatis s o frequentemente assintom ticas tanto em homens como em mulheres As crian as que nascem de m es infectadas correm um risco significativamente superior de conjuntivite de inclus o e pneumonia associada a clam dia 1 11 27 Historicamente v rios m todos de detec o de CT foram utilizados em laborat rio cl nico incluindo cultura de c lulas teste fluorescente directo de anticorpos e ensaio imunoenzimatico Metodologias mais recentes de detec o de CT incluem ensaios directos de sondas de DNA e ensaios de sondas de DNA por teste de amplifica o do cido nucleico NAAT A cultura de c lulas j foi considerada como o m todo de ouro para detec o de CT A cultura bastante espec fica mas foi demonstrado em publica es cient ficas que as tecnologias de an lise de DNA por testes de amplifica o de cidos nucleicos nucleic acid amplification test NAAT t m uma sensibilidade cl nica maior que a da cultura 2 9 17 30 Devido a sua sensibilidade cl nica mais baixa e desempenho vari vel entre laborat rios a cultura foi substitu da em muitos laborat ri
68. NA que se estima ser equivalente a 50 c lulas de CT 250 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Materiais necess rios mas dispon veis separadamente Nota Excepto indica o em contr rio as refer ncias de cat logo dos materiais disponibilizados pela Gen Probe s o mencionadas Ref Cat Sistema TIGRIS DTS 105118 Kit de fluidos do ensaio APTIMA 302382 solu o de lavagem APTIMA tamp o para o fluido de desactiva o APTIMA e reagente a leo APTIMA Kit de auto detec o APTIMA 301048 Kit de conservantes dos fluidos do ensaio APTIMA 302380 Pontas 1 000 uL condutoras com sensores de l quido 10612513 Tecan Kit de execu o do Sistema TIGRIS DTS contendo 301191 Unidades multitubos Multi tube Units MTU 104772 02 Kit de saco de pontas usadas de MTU 900907 Deflectores do recipiente de res duos de MTU 900931 Tampas do recipiente de res duos de MTU 105523 Kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA 301154C para utiliza o com esp cimes em solu o PreservCyt Kit APTIMA de colheita de esfrega os vaginais 301162 Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para 301041 Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina Kit APTIMA de colheita de esp cimes de urina para esp cimes de 301040 urina masculinos e femininos Tubos de transporte APTIMA para esp cimes de urina para 1055
69. RCF para eliminar as bolhas b Caso um tubo de esp cime apresente um volume menor do que o habitualmente observado quando se seguem as instru es de colheita centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para garantir que o l quido n o fique retido na tampa c Seo n vel de l quido num tubo de esp cimes de urina n o estiver entre as duas linhas pretas indicadoras do r tulo o esp cime tem de ser rejeitado N o perfure um tubo demasiado cheio Ensaio APTIMA COMBO 2 27 502183PT Rev C Sistema TIGRIS DTS d Se um tubo de esp cimes de urina contiver precipitado aque a o esp cime a 37 C durante at 5 minutos Se o precipitado n o voltar a entrar em solu o certifique se visualmente de que o precipitado n o impede a distribui o do esp cime Nota Caso os Passos 4a c n o sejam seguidos pode haver descarga de l quido da tampa do tubo de esp cimes Nota Podem ser testadas at 3 al quotas distintas de cada tubo de esp cimes A tentativa de pipetar mais de 3 al quotas do tubo de esp cimes pode provocar erros por volume insuficiente E Prepara o do sistema Defina o sistema e a lista de trabalho de acordo com as instru es do TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual de Instru es do Sistema TIGRIS DTS e das Notas ao procedimento Notas ao procedimento A Controlos 1 Para trabalhar adequadamente com o software de ensaio APTIMA para o Sistema TIGRIS DTS s o necess rios controlos frontais e
70. S TIGRIS DTS TIGRIS DTS TIGRIS DTS Concd Concd Concd Concd Concd Concd Concd Concd Baixa Baixa 5 250 10 100 100 100 100 100 100 100 100 Baixa Alta 5 250 000 10 100 100 100 100 100 100 100 100 Alta Baixa 5 000 250 10 100 100 100 100 100 100 100 100 Alta Alta 5 000 250 000 10 100 100 100 100 100 100 100 100 Demasiados gg 0 10 100 889 100 100 100 100 100 100 Baixa Neg Baixa Neg 5 0 10 100 100 100 100 100 100 100 100 M dia Neg 50 0 10 100 100 100 100 100 100 100 100 Alta Neg 5 000 0 10 100 100 100 100 100 100 100 100 Neg Demasiado 0 25 10 100 100 100 100 100 100 100 100 Baixa Neg Baixa 0 250 10 100 100 100 100 100 100 100 100 Neg M dia 0 2 500 10 100 100 100 100 100 100 100 100 Neg Alta 0 250 000 10 100 100 100 100 100 100 100 100 Neg Neg 0 0 12 100 100 100 100 100 100 100 100 Concordancia percentual global entre Concordancia percentual global entre TIGRIS e DTS IC de 95 TIGRIS e DTS IC de 95 99 2 95 8 100 100 97 2 100 DTS Concd concord ncia entre Sistemas DTS e resultados esperados TIGRIS Concd concord ncia entre Sistema TIGRIS DTS e os resultados esperados 1 1 10 replicados apresentou resultados equ vocos para CT nos Sistemas DTS e foi exclu do desta an lise 8 9 apresentaram concord ncia com os resultados esperados 1 9 apresentou resultado CT nos Sistemas DTS A concentra o CT deste membro do painel uma ordem de grandeza inferior a 5 fg rRNA ensaio Ensaio APTIMA COMBO 2 80 502183PT Rev C De
71. T e 95 das amostras foram positivas para GC ao dia 35 Estas mesmas amostras foram testadas ap s 116 dias de armazenamento a 20 C e 70 C Todas as amostras foram positivas para CT e GC sob ambas as condi es de armazenamento E Estudo Adicional de Estabilidade de Esp cimes Congelado a 20 C Os dados que sustentam as condi es recomendadas de armazenamento a 20 C para esfrega os endocervicais esfrega os uretrais esfrega os vaginais urina feminina urina masculina e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram gerados utilizando 90 esp cimes para cada tipo com resultados negativos em que 30 esp cimes foram misturados com CT e GC a 1 0 IFU e 50 CFU por reac o respectivamente 30 esp cimes foram misturados com CT e GC a 0 1 IFU e 5 CFU por reac o respectivamente e 30 esp cimes n o foram misturados Os esp cimes foram armazenados a 20 C e testados aos dias 0 200 e 400 Todos os esp cimes misturados atingiram o crit rio de aceita o de 95 de concord ncia com os resultados esperados Ensaio APTIMA COMBO 2 71 502183PT Rev C Concordancia de esp cimes clinicos no Sistema TIGRIS DTS Concord ncia de esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS Concord ncia do Sistema TIGRIS DTS A concord ncia entre os resultados do ensaio APTIMA COMBO 2 gerados no Sistema TIGRIS DTS totalmente automatizado e nos Sistemas DTS semi automatizados foi avaliada testando esp cimes endocervicais esfrega o
72. TIMA COMBO 2 76 502183PT Rev C Concord ncia de esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS Tabela 22 Estudo de concord ncia do painel cl nico de CT GC Resultados de GC para esfrega os endocervicais esfregacos uretrais masculinos e pain is de urina de ambos os sexos 21r Dies Ot DTS Concord ncia Concord ncia Esp cime N TIGRIS TIGRIS TIGRIS TIGRIS positiva IC de 95 negativa IC de 95 N N N N Esfrega o 129 79 0 0 50 100 95 4 100 100 92 9 100 Urina 130 80 0 0 50 100 95 5 100 100 92 9 100 denota Positivo denota Negativo IC Intervalo de confian a TIGRIS Sistema TIGRIS DTS Estudo de Precis o A precis o do Sistema TIGRIS DTS ou seja sua reprodutibilidade foi avaliada num local cl nico externo e na Gen Probe A precis o do ensaio APTIMA COMBO 2 foi avaliada entre tr s Sistemas TIGRIS DTS dois locais de estudo dois lotes de kits de ensaio APTIMA COMBO 2 e quatro operadores A Tabela 23 apresenta os dados de precis o de RLU em termos de m dia desvio padr o coeficiente de varia o CV e concord ncia percentual com os resultados esperados para c lculos de variabilidade entre locais entre operadores entre lotes entre testes e intrateste No local externo dois operadores executaram tr s listas de trabalho ou seja testes por lote de kit de ensaio APTIMA COMBO 2 num Sistema TIGRIS DTS completando um total de 6 listas de trabalho cada Na Gen Probe dois operadores executaram tr s
73. a o APTIMA COMBO 2 Reagente Enzim tico APTIMA COMBO 2 Reagente de Sonda APTIMA COMBO 2 Reagente B de Captura de Alvo APTIMA COMBO 2 Controlo Positivo APTIMA CT Controlo Negativo GC Controlo Positivo APTIMA GC Controlo Negativo CT B Os seguintes reagentes s o est veis quando armazenados entre 2 C e 30 C Solu o de Reconstitui o de Amplifica o APTIMA COMBO 2 Solu o de Reconstitui o Enzim tica APTIMA COMBO 2 Solu o de Reconstitui o de Sonda APTIMA COMBO 2 Reagente de selec o APTIMA COMBO 2 C Os seguintes reagentes s o est veis quando armazenados entre 15 C e 30 C temperatura ambiente Reagente de captura do alvo Solu o de Lavagem APTIMA Tamp o para o fluido de desactiva o APTIMA Reagente a leo APTIMA D O reagente de captura do alvo de trabalho Working Target Capture Reagent wTCR est vel durante 30 dias quando armazenado entre 15 C e 30 C Nao refrigere E Ap s a reconstitui o o Reagente Enzim tico o Reagente de Amplifica o e o Reagente de Sonda s o est veis por 30 dias quando armazenados entre 2 C a 8 C F Elimine os reagentes reconstitu dos e wTCR n o utilizados ap s 30 dias ou depois de a data de validade do lote principal passar o que acontecer primeiro G Os controlos s o est veis at data indicada nos frascos H Os reagentes armazenados no Sistema TIGRIS DTS t m uma estabilidade de 48 horas no instrumento l Os reagentes armazena
74. a o para 301041 Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina Kit APTIMA de colheita de esp cimes de urina para esp cimes de 301040 urina masculinos e femininos Tubos de transporte APTIMA para esp cimes de urina para 105575 esp cimes de urina masculinos e femininos Lix via solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 M a 1 0M Luvas descart veis Padr o de calibra o SysCheck 301078 Tampas penetr veis APTIMA 105668 Tampas n o penetr veis de substitui o 103036A Tampas suplentes para os kits de 250 testes Solu es de reconstitui o de amplifica o e de sonda CL0041 100 tampas Solu o de reconstitui o enzim tica 501616 100 tampas TCR e reagente de selec o CL0040 100 tampas Tampas suplentes para os kits de 100 testes Solu es de reconstitui o dos reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda CL0041 100 tampas TCR e reagente de selec o 501604 100 tampas Materiais Opcionais Ref 2 Cat Kit de controlos APTIMA 301110 Refor o de lix via GEN PROBE 302101 para a limpeza de rotina de superf cies e equipamento Ensaio APTIMA COMBO 2 32 502183PT Rev C Sistema PANTHER Procedimento de teste do Sistema PANTHER Nota Consulte o PANTHER System Operator s Manual Manual de Instru es do Sistema PANTHER para mais informa es sobre procedimentos do Sistema PANTHER A Prepara o da rea de trabalho 1 Limpe as superf cies de trabal
75. a 2 500 Unidades de Forma o de Inclus o IFU mL de CT e ou entre 0 a 125 000 Unidades Formadoras de Col nias CFU mL de GC Os pain is cl nicos de CT GC foram criados a partir de esfrega os e esp cimes de urina colhidos de 222 indiv duos do sexo masculino e 117 do sexo feminino a quem se determinou n o estarem infectados com base em resultados negativos de esfrega os e esp cimes de urina analisados pelo ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistemas DTS Cada um dos 13 pain is CT GC consistia de 5 replicados de cada tipo de esp cime esfrega o endocervical esfrega o da uretra masculina urina feminina e urina masculina para um total de 20 replicados por painel A Tabela 20 mostra as concord ncias percentuais com os resultados de CT e GC esperados para o Sistema TIGRIS DTS e para os Sistemas DTS relativamente a cada um dos 13 pain is de CT GC As concentra es variaram entre 10 vezes abaixo e 1 000 vezes acima dos limites anal ticos indicados para o ensaio APTIMA COMBO 2 que s o de 1 IFU ensaio para CT e 50 CFU ensaio para GC A Tabela 20 indica tamb m a concord ncia percentual global 99 3 entre os resultados do painel CT GC no Sistema TIGRIS DTS e nos Sistemas DTS As concord ncias positiva e negativa s o indicadas nas Tabelas 21 e 22 para os resultados do painel de CT e GC respectivamente Para os pain is de esfrega o e urina as concord ncias positivas foram de 100 e 96 2 respectivamente para CT e ambas de 100 para GC
76. a PreservCyt esfrega os vaginais e esp cimes de urina feminina e masculina O desempenho com outros esp cimes que n o os especificados em Colheita e armazenamento de esp cimes n o foi avaliado Os laborat rios podem validar outros dispositivos de colheita 21 23 Nos Sistemas DTS foram validados os kits de colheita PACE para utiliza o somente com o kit adaptador APTIMA A utiliza o do kit de colheita PACE e do kit adaptador APTIMA n o est actualmente qualificada para o Sistema TIGRIS DTS ou para o Sistema PANTHER As amostras ginecol gicas colhidas para a prepara o com a utiliza o do Sistema ThinPrep 2000 devem ser colhidas usando dispositivos de colheita tipo escova ou esp tulas endocervicais de combina o escova pl stico L As datas de validade listadas nos kits de colheita referem se ao local de colheita e n o instala o de testes As amostras colhidas em qualquer momento antes da data de validade do kit de colheita e transportadas e armazenadas de acordo com o folheto da embalagem s o v lidas para testes mesmo que a data de validade no tubo de colheita tenha passado M A solu o PreservCyt foi validada como meio alternativo para o teste com o ensaio APTIMA COMBO 2 Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt processados com o ThinPrep 3000 Processor ou outros instrumentos n o foram avaliados para teste da Chlamydia trachomatis e Neisseria gonorrhoeae utilizando o ensaio APTIMA COMBO 2
77. ara pacientes masculinos que forneceram tr s esfrega os o teste incluiu a cultura GC o ensaio APTIMA COMBO 2 e um NAAT comercialmente dispon vel para CT e GC O teste em esfrega os endocervicais incluiu o ensaio APTIMA COMBO 2 dois NAAT comercialmente dispon veis para CT um NAAT comercialmente dispon vel para GC e cultura GC O esfrega o de cultura GC foi colhido primeiro e a ordem de colheita para os esfrega os restantes foi alternada para minimizar a influ ncia da colheita A urina foi testada pelo ensaio APTIMA COMBO 2 dois NAAT comercialmente dispon veis para CT e um ensaio amplificado comercialmente dispon vel para GC Os ensaios de amplifica o comercialmente dispon veis foram usados como ensaios de refer ncia neste estudo cl nico do ensaio APTIMA COMBO 2 Todos os c lculos de desempenho foram baseados no n mero total de esp cimes de esfrega o endocervical e de uretra masculina e esp cimes de urina masculina e feminina do ensaio APTIMA COMBO 2 comparados com o algoritmo de estado de infec o do paciente de cada sexo Em cada algoritmo espec fico do sexo a designa o de um paciente como tendo sido infectado n o infectado ou inconclusivo foi baseada nos resultados combinados dos NAAT endocervicais e de uretra masculina e de urina Para o estado de infec o com CT quaisquer dois resultados positivos no NAAT de refer ncia por qualquer combina o de esfrega o e urina designaram o paciente como infectado Se os r
78. banho de agua em 62 C 1 C para DKA Seo banho de calor seco v rtex SB100 estiver a ser utilizado consulte a SB100 Dry Heat Bath Vortexer Application Sheet Ficha de aplica o do Banho de calor seco v rtex SB100 SB100 Application Sheet Ficha de aplica o do SB100 2 Antes do in cio do ensaio limpe as superf cies de trabalho e pipetas com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Deixe a solu o de hipoclorito de s dio em contacto com as superf cies e pipetas durante pelo menos 1 minuto enxaguando as depois com gua N o deixe secar a solu o de hipoclorito de s dio Cubra a superf cie da bancada em que ser executado o teste com capas absorventes para bancadas de laborat rios com forro pl stico 3 Coloque um n mero suficiente de Dez Cassetes de Pontas no Sistema de Captura de Alvo TCS Assegure se de que o frasco de lavagem do TCS esteja cheio com a Solu o de Lavagem APTIMA e que o distribuidor de aspirado esteja conectado bomba de v cuo Consulte o Target Capture System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema de Captura de Alvo B Reconstitui o de Reagentes Nota A Reconstitui o de Reagentes deve ser executada antes de iniciar a transfer ncia de esp cimes 1 Para reconstituir os Reagentes de Amplifica o Enzim tico e de Sonda combine os frascos do reagente liofilizado com a solu o de reconstitui o Se estiverem refrigeradas deixe as solu es
79. cados para cada membro do painel Os replicados de cada um dos 13 membros do painel com diferentes niveis misturados de rRNA foram combinados para criar um painel clinico para cada tipo de esp cime Cada painel continha um total de 132 replicados Um replicado de esfrega o vaginal do membro do painel de concentra o demasiado baixa de CT 0 05 fg rRNA ensaio apresentou um resultado d bio de CT nos Sistemas DTS A Tabela 24 mostra as concord ncias percentuais para cada n vel de rRNA nos esfrega os vaginais e nos esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt respectivamente com os resultados de CT e GC esperados para o Sistema TIGRIS DTS e para os Sistemas DTS As concentra es abrangiam de 1 registo abaixo at 3 registos acima de 5 fg rRNA ensaio para CT e 250 fg rRNA ensaio para GC A Tabela 24 indica tamb m a concord ncia percentual global 99 2 para o painel de esfrega os vaginais e 100 para o painel de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Tabela 24 Estudo de Concord ncia de Painel Cl nico de CT GC misturado com rRNA Concord ncia com os Resultados Esperados de CT e GC para o Painel de Esfrega o Vaginal e Painel de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Concentra o Painel de Esfrega o Vaginal Painel de esp cimes citol gicos em Membro do fg rRNA base liquida PreservCyt Painel ensaio R plicas CT GC CT GC CT GC a ac TIGRIS DT
80. controlo positivo GC controlo negativo CT for positivo ou equ voco para CT consulte Notas ao procedimento Contamina o do Ensaio para mais informa es Ensaio APTIMA COMBO 2 22 502183PT Rev C Sistema TIGRIS DTS a TIGRIS Os reagentes do ensaio APTIMA COMBO 2 para CT e GC s o indicados Ee abaixo para o Sistema TIGRIS DTS Os S mbolos para Identifica o dos Reagentes tamb m s o listados junto ao nome do reagente Reagentes e materiais fornecidos Kit de ensaio APTIMA COMBO 2 250 testes 2 caixas e 1 kit de controlos Ref Cat 301130 e 301130B Caixa refrigerada APTIMA COMBO 2 Embalagem 1 de 2 armazenar entre 2 Ce 8 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade A Reagente de Amplifica o APTIMA COMBO 2 1 frasco cidos nucleicos n o infecciosos secos em solu o tamponada contendo lt 5 de agente de volume E Reagente Enzim tico APTIMA COMBO 2 1 frasco Transcriptase reversa e RNA polimerase secos em solu o tamponada HEPES contendo lt 10 de reagente de volume P Reagente de Sonda APTIMA COMBO 2 1 frasco Sondas de DNA quimioluminescentes n o infecciosas secas em solu o tamponada com succinato contendo lt 5 de detergente TCR B Reagente B de Captura de Alvo APTIMA COMBO 2 1x 0 61 mL cidos nucleicos n o infecciosos em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Caixa APTIMA COMBO 2 de temperatura ambiente Embalagem 2 de 2 armazenar entre 15 Ce 30 C ap
81. da posi o da primeira TTU A etiqueta deste controlo azul esverdeada O texto da etiqueta CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT A coloca o na posi o Ensaio APTIMA COMBO 2 18 502183PT Rev C Sistemas DTS errada causar a falha do teste Quaisquer controlos adicionais dever o ser digitados como esp cimes de pacientes e monitorados pelo operador para aceitabilidade B Pipeta o de Controlos e Esp cimes O volume de controlo ou esp cime adicionado ao tubo de reac o deve ser de 400 uL 100 uL Recomenda se a inspec o visual do volume pipetado para o tubo de reac o para assegurar uma transfer ncia adequada do volume necess rio um volume adequado de esp cime ou controlo para fornecer resultados precisos Se n o tiver sido pipetado o volume adequado volte a pipetar o wTCR e o controlo ou esp cime para num novo tubo de reac o C Reagentes A Solu o de Reconstitui o de Sonda pode precipitar durante o armazenamento Caso isto ocorra aque a a Solu o de Reconstitui o de Sonda a 62 C durante 1 a 2 minutos Ap s este passo de aquecimento o Reagente de Reconstitui o de Sonda pode ser usado mesmo se ainda houver precipitado residual Ap s a nova suspens o misture o frasco invertendo suavemente com cuidado para n o induzir a forma o de espuma D Temperatura 1 Os passos de captura de alvo amplifica o hibridiza o e selec o dependem da temperatura Assim torna
82. de esp cime apresente um volume menor do que o habitualmente observado quando se seguem as instru es de colheita centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para garantir que o l quido n o fique retido na tampa c Seo n vel de l quido num tubo de esp cimes de urina n o estiver entre as duas linhas pretas indicadoras do r tulo o esp cime tem de ser rejeitado N o perfure um tubo demasiado cheio d Se um tubo de esp cimes de urina contiver precipitado aque a o esp cime a 37 C durante at 5 minutos Se o precipitado n o voltar a entrar em solu o certifique se visualmente de que o precipitado n o impede a distribui o do esp cime Nota Caso os Passos 4a c n o sejam seguidos pode haver descarga de l quido da tampa do tubo de esp cimes 5 Caso esp cimes com tampa padr o n o perfur vel devam ser testados eles dever o ser centrifugados por 5 minutos com 420 de RCF For a Centr fuga Relativa para que todo o l quido fique no fundo do tubo antes de destapar Evite salpicos e contamina o cruzada 6 Nos suportes TTU coloque TTU suficientes para acomodar os calibradores controlos e esp cimes 7 Caso uma lista de trabalho seja desejada crie a neste ponto Para instru es sobre a cria o de uma lista de trabalho consulte o APTIMA Assay Software Operator s Manual Manual do Operador do Software de Ensaio APTIMA 8 Misture bem o wTCR Utilizando a pipeta de repeti o adicione 100 uL a cada tub
83. de reconstitui o alcan ar a temperatura ambiente antes de serem utilizadas a Emparelhe a solu o de reconstitui o adequada com o reagente liofilizado As etiquetas s o codificadas por cores para serem correctamente emparelhadas b Abra o frasco de reagente liofilizado e insira com firmeza a extremidade ranhurada do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 1 Passo 1 c Abra o frasco da solu o de reconstitui o correspondente e deposite a tampa sobre uma superf cie de trabalho limpa e coberta d Enquanto segura o frasco da solu o de reconstitui o na bancada insira firmemente a outra extremidade do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 1 Passo 2 e Inverta lentamente o conjunto do frasco do reagente e do frasco de solu o Permita que a solu o escoe do frasco de solu o para o frasco de reagente Figura 1 Passo 3 f Agite suavemente a solu o no frasco Evite a cria o de espuma ao agitar o frasco Figura 1 Passo 4 g Aguarde que o reagente liofilizado entre em solu o e depois inverta novamente o conjunto de frascos inclinando o a um ngulo de 45 para minimizar a forma o de espuma Figura 1 Passo 5 Permita que todo o l quido escoe para o frasco h Retire o colarinho de reconstitui o do frasco Figura 1 Passo 6 i Volte a colocar a tampa no frasco Anote as iniciais do operador e a data de reconstitui o na etiqueta Figura 1 Pa
84. de sangue vitaminas consumidas comummente minerais e analg sicos vendidos sem receita m dica Foi tamb m avaliada a interfer ncia do sangue no Sistema TIGRIS DTS e no Sistema PANTHER Os dados n o indicaram nenhuma interfer ncia destas subst ncias no ensaio C Os efeitos das vari veis de utiliza o de tamp o da irriga o e da colheita de esp cimes n o foram avaliados quanto a seu impacto sobre a detec o de CT ou GC D A presen a de muco nos esp cimes endocervicais n o interfere na detec o de CT ou de GC pelo ensaio APTIMA COMBO 2 No entanto para garantir a colheita de c lulas infectadas com CT devem ser amostradas as c lulas epiteliais que revestem o endoc rvix Se o muco excessivo n o for removido a amostragem destas c lulas n o ser garantida E Este ensaio foi testado utilizando apenas os seguintes esp cimes e Esp cimes de esfrega o endocervicais vaginais e da uretra masculina recolhidos por m dico e Esp cimes citol gicos l quidos em solu o PreservCyt recolhidos por m dico e Esp cimes de esfrega o vaginal recolhidos pela paciente Esp cimes de urina feminina e masculina recolhidos pelo paciente N o foi avaliado o desempenho com outros esp cimes que n o os colhidos com os seguintes kits de colheita e Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina e Kit APTIMA de Colheita de Esp cimes de Urina para E
85. diferentes para esp cimes com sangue quando comparados com esp cimes sem sangue Podem encontrar se dados adicionais sobre o teste de sangue em Subst ncias Interferentes O desempenho do ensaio com esfrega o endocervical e esp cimes de urina de mulheres gr vidas foi avaliado no estudo cl nico Para CT sensibilidade em esfrega o endocervical e esp cimes de urina foi 100 8 8 e 100 8 8 respectivamente A especificidade para esfrega o endocervical e esp cimes de urina foi 95 8 23 24 e 100 24 24 respectivamente Para GC sensibilidade em esfrega o endocervical e esp cimes de urina foi 100 8 8 e 100 8 8 respectivamente A especificidade para esfrega o endocervical e esp cimes de urina foi 100 26 26 e 100 26 26 respectivamente Dos 11 406 resultados do teste ensaio APTIMA COMBO 2 deste estudo cl nico multic ntrico tr s resultados CT e nove resultados GC foram d bios nos testes de repeti o e foram exclu dos da an lise Um esp cime foi invalidado tanto para resultados CT quanto para GC e foi exclu do do estudo Estudo Cl nico de Esp cimes de Esfregaco Vaginal No estudo cl nico multic ntrico de esfrega o vaginal 1 464 pacientes mulheres sintom ticas e assintom ticas que frequentam cl nicas de DST OB GIN adolescente e planeamento familiar foram registadas no estudo cl nico Das 646 pacientes assintom ticas registadas no estudo duas tinham menos de 16 anos de idade 158 tinham entre 16 e 20 an
86. dos no Sistema PANTHER t m uma estabilidade de 72 horas no instrumento J O Reagente de Sonda e o Reagente de Sonda Reconstitu do s o fotossens veis Armazene os reagentes ao abrigo da luz A estabilidade reconstitu da especificada baseada na exposi o de 12 horas do Reagente de Sonda Reconstitu do l mpadas fluorescentes de Ensaio APTIMA COMBO 2 7 502183PT Rev C Informa es gerais 60 W a uma dist ncia de 43 cm e temperatura abaixo de 30 C A exposi o de luz do Reagente de Sonda Reconstitu do deve ser adequadamente limitada K Com o aquecimento temperatura ambiente alguns tubos de controlo podem parecer nublados ou apresentar precipita es A n voa ou precipita o associada aos controlos n o afecta o desempenho do controlo Os controlos podem ser usados mesmo que estejam nublados ou precipitados Caso controlos limpos sejam desejados a solubiliza o pode ser agilizada incubando os no extremo superior do intervalo de temperatura ambiente 15 C a 30 C L N o congele os reagentes Colheita e armazenamento de esp cimes O ensaio APTIMA COMBO 2 foi concebido para detectar a presen a de CT e GC nos seguintes esp cimes esfrega os endocervicais e uretrais masculinos esfrega os vaginais esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt e esp cimes de urina femininos e masculinos N o foi avaliado o desempenho com outros esp cimes que n o os colhidos com os seguintes kits de colheita
87. e detec o quimioluminescente para o sinal CT apresenta cin tica demasiado r pida e seu tipo cin tico de luz intermitente A reac o de detec o quimioluminescente para o sinal GC relativamente mais lenta e seu tipo cin tico de sinal brilhante Os resultados do ensaio s o determinados por um recorte baseado na RLU total e no tipo de curva cin tica Avisos e precau es A Para fins de diagn stico in vitro B Para mais avisos precau es e procedimentos para controlo de contamina o para o Sistema TIGRIS DTS consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual de instru es do Sistema TIGRIS DTS C Para mais avisos precau es e procedimentos de controlo da contamina o para o Sistema PANTHER consulte o PANTHER System Operator s Manual Manual de instru es do Sistema PANTHER Relacionado com o Laborat rio D O ensaio n o foi avaliado em popula es de pacientes com baixa preval ncia de doen a provocada por CT por conseguinte o desempenho em situa es de baixa preval ncia n o foi determinado E Utilize apenas artigos de laborat rio descart veis fornecidos ou especificados F Adopte precau es de laborat rio de rotina N o coma beba ou fume em areas de trabalho designadas Utilize luvas sem p descart veis culos de protec o e batas de laborat rio quando manusear esp cimes e reagentes do kit Lave bem as m os ap s manusear os esp cimes e os reagentes do
88. e os encaixes de desconex o r pida unidade TCS Elimine cuidadosamente ambas as luvas Ensaio APTIMA COMBO 2 20 502183PT Rev C Sistemas DTS 4 Unidade TCS Limpe as superficies da unidade TCR do distribuidor de aspiragao e das pontas do ejector do tamp o de lavagem com toalhetes de papel humedecidos em solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Ap s o passo de limpeza com hipoclorito de s dio enxague com gua e em seguida seque totalmente as superf cies com toalhetes de papel 5 Suportes Mergulhe os suportes em solu o de hipoclorito de s dio 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M assegurando que ficam cobertos pela solu o de hipoclorito de s dio Mantenha os suportes mergulhados por 10 minutos Uma exposi o mais prolongada danificar os suportes Lave bem os suportes com gua coloque os sobre uma superf cie absorvente limpa e permita que os suportes sequem ao ar completamente Para prolongar a vida til dos suportes permita que eles sequem em posi o erecta e n o de cabe a para baixo I Contamina o do Ensaio 1 A introdu o de materiais contaminantes pode ocorrer se n o for tido o cuidado suficiente durante o protocolo de ensaio 2 As TTU t m de ser descontaminadas com fluido de desactiva o conforme descrito em Detec o N o volte a utilizar as TTU 3 Realize regularmente uma descontamina o do equipamento e das superf cies de trabalho conforme descrito na sec
89. e um esfrega o endocervical Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram processados de acordo com o ThinPrep 2000 Processor Operator s Manual Manual do operador do ThinPrep 2000 Processor e de acordo com o folheto informativo do kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA Ap s processar o esp cime citol gico em base l quida PreservCyt com o Processador ThinPrep 2000 o esp cime ter sido transferido ao Kit APTIMA de Transfer ncia de Esp cimes para testes no ensaio APTIMA COMBO 2 O esp cime citol gico em base l quida PreservCyt e o esfrega o endocervical foram testados no ensaio APTIMA COMBO 2 A sensibilidade e especificidade para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram calculadas por meio de uma compara o dos resultados com o algoritmo de estado do paciente infectado No algoritmo a designa o de um indiv duo como infectado ou n o infectado com CT ou GC teve como base os resultados dos esfrega os endocervical obtidos com dois NAAT dispon veis no mercado Tabelas 7c e 11c Para CT os NAATs de refer ncia inclu ram o ensaio APTIMA COMBO 2 e o ensaio APTIMA CT Para GC os NAATs de refer ncia inclu ram o ensaio APTIMA COMBO 2 e o ensaio APTIMA GC Foram exigidos resultados positivos para os dois NAATs de refer ncia para determinar um paciente como infectado Um paciente foi determinado como n o infectado quando os resultados dos dois NAAT de refer ncia divergiram ou foram negativos A se
90. eS 4 GEN PROBE APT MA Ensaio APTIMA COMBO 2 Para fins de diagn stico in vitro Exclusivamente para exporta o dos EUA Informa es gerais 00 eee eee eee eee 2 Utiliza o pretendida 0 0 02 eee 2 Resumo e explica o do teste 0 000 ee 2 Princ pios do procedimento 000 ccc eee e eee eae 3 Avisos e precau es 0 0 cee 4 Requisitos de armazenamento e manuseamento dos reagentes 7 Colheita e armazenamento de esp cimes 2200 00055 8 Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente 38 LimitaGOeS soiin etaii tein atti sd ved des da da ae 41 Valores esperados dos Sistemas DTS 44 Desempenho cl nico nos Sistemas DTS 46 Desempenho anal tico nos Sistemas DTS 68 Concord ncia de esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS 72 Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS 79 Desempenho anal tico no Sistema PANTHER 82 Bibliografia 0 ccc eee eee 85 DTS lza TIGRIS Sistemas DTS cscesessseseessesseseeseeseesenseeeeeseesneees 10 Sistema TIGRIS DTS l earar nananana 23 Reagentes e materiais fornecidos ccccceeeeeees 10 Reagentes e materiais fornecidos i 23 Materiais necess rios mas dispon veis separadamente 11 Materiais necess rios mas dispon veis separadamente 24 Mater
91. ecos em solu o tamponada HEPES contendo lt 10 de reagente de volume P Reagente de Sonda APTIMA COMBO 2 1 frasco Sondas de DNA quimioluminescentes n o infecciosas secas em solu o tamponada com succinato contendo lt 5 de detergente TCR B Reagente B de Captura de Alvo APTIMA COMBO 2 1x 0 35 mL cidos nucleicos n o infecciosos em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente PCT INGC Controlo Positivo APTIMA CT Controlo Negativo GC 3x1 7 mL cido nucleico de CT n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 1 unidade formadora de inclus es inclusion forming unit IFU de CT 5 fg ensaio PGC NCT Controlo Positivo APTIMA GC Controlo Negativo CT 3x1 7 mL cido nucleico de GC n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 50 c lulas de CT 250 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo A caixa refrigerada cont m tamb m os seguintes artigos tabuleiro de armazenamento armazenar entre 2 C e 30 C ap s recep o Simbolo Componente Quantidade AR Solu o de Reconstitui o de Amplifica o APTIMA COMBO 2 1x9 3 mL Solu o aquosa contendo conservantes ER Solu o de Reconstitui o Enzi
92. egativo 1 0 5 1 625 92 3 64 0 99 8 99 8 99 4 99 9 Total 13 0 6 1 628 SE SS EE ee ae 1 Um esp cime teve um resultado discordante Resultado d bio de esp cime de esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado positivo de esp cime de esfrega o endocervical no ensaio APTIMA GC Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio AGC Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio AGC Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio AGC Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio AGC Ensaio APTIMA COMBO 2 59 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Desempenho por institui o cl nica para Neisseria gonorrhoeae Tabela 10a Esp cimes analisados com o ensaio APTIMA COMBO 2 vs estado de infec o do paciente Esp cime Local N PV FP NV FN Prev pga E Ro o 1 159 56 1 101 1 358 982 90 6 100 99 0 94 7 100 982 99 0 2 97 13 0 84 O 134 1 00 75 3 100 100 95 7 100 100 100 3 264 71 6 187 O 269 100 94 9 100 96 9 93 4 98 9 922 100 4 53 20 0 33 0 377 1 00 832 100 100 89 4 100 100 100 5 139
93. ejeitado Antes de rejeitar um tubo de transporte de esfrega os sem o esfrega o verifique se n o um Tubo APTIMA de Transfer ncia de Esp cimes pois este n o deve conter qualquer esfrega o S Para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt fa a a colheita de acordo com as instru es do fabricante Al quotas posteriormente removidas do frasco de PreservCyt para teste com o ensaio APTIMA COMBO 2 devem ser processadas usando apenas o Kit APTIMA de Transfer ncia de Esp cimes T Ap s a perfura o o l quido pode vazar das tampas dos tubos de transporte APTIMA sob certas condi es Siga as instru es do Procedimento de teste adequado para impedir que isto aconte a Relacionados com o ensaio U O desempenho dos esfrega os vaginais n o foi avaliado em gr vidas V O desempenho dos esp cimes de esfrega os endocervicais vaginais uretrais masculinos e dos esp cimes de urina feminina e masculina assim como dos esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt n o foi avaliado em adolescentes com menos de 16 anos de idade W N o utilize este kit ap s a data de validade X N o troque misture ou combine reagentes de ensaio provenientes de kits com n meros de lote diferentes Os controlos e fluidos do ensaio APTIMA podem apresentar n meros de lote diferentes Espec ficos dos sistemas DTS Y Pontas com encaixes hidrof bicos devem ser usadas No m nimo necess rio dedicar duas pipetas de repet
94. esultados de todos os ensaios de refer ncia foram negativos o paciente foi designado como n o infectado Caso houvesse apenas um resultado positivo o paciente era designado como inconclusivo Para o estado de infec o com GC uma cultura positiva ou resultados positivos de esfrega o e de urina pelo ensaio ampliado de refer ncia designaram o paciente como infectado Uma Ensaio APTIMA COMBO 2 46 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS cultura negativa e um Unico resultado positivo pelo ensaio amplificado de refer ncia resultaram num estadoinconclusivo Se os resultados de todos os ensaios de refer ncia foram negativos o paciente foi designado como n o infectado As Tabelas 7a 7b 7c 8 11a 11b 11c e 12 indicam a frequ ncia de resultados dos testes para dois NAAT de refer ncia e para o o ensaio APTIMA COMBO 2 em participantes em estudos cl nicos Os resultados do ensaio APTIMA COMBO 2 para os esfrega os endocervicais e da uretra masculina colhidos pelo m dico e os esp cimes de urina masculina e feminina foram comparados ao algoritmo de estado de infec o do paciente para a determina o da sensibilidade especificidade e do valor preditivo Um total de 15 661 resultados de testes de CT e 14 144 resultados de testes GC foram usados na an lise dos dados A sensibilidade e a especificidade para CT por sexo tipo de esp cime e estado sintom tico s o apresentadas na Tabela 5a A Tabela 6a mostra os valores de sen
95. fectado 0 1 1 Nao infectado 2 1 3 Nao infectado 2 0 2 Nao infectado 1 1 2 Nao infectado 2 2 4 Nao infectado 698 577 1 275 Nao infectado N A 0 2 2 Nao infectado 2 0 2 Nao infectado N A 15 9 24 Nao infectado N A N A 1 0 Nao infectado N A 2 2 4 Nao infectado N A N A 0 1 Nao infectado 11 10 21 Nao infectado N A 0 1 1 Nao infectado 1 1 2 Nao infectado N A 0 1 1 Nao infectado N A 5 4 9 Nao infectado 1 1 2 Total 810 640 1 450 O E RR ra EF Esfrega o endocervical feminino UF Urina feminina PVS Esfrega o vaginal colhido por paciente assintom tica CVS Esfrega o vaginal colhido pelo m dico N A representa esp cime n o obtido ou dispon vel para teste O s mbolo de igual representa teste d bio ou repetido Ensaio APTIMA COMBO 2 64 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS An lise de N gonorrhoeae por estado de infec o em pacientes do sexo feminino Tabela 11c Resultados do estado de infec o de pacientes ap s estudo cl nico de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt para N gonorrhoeae Estado de Resultado de EStrega o Estado sintom tico infec o do Endocervical paciente AC2 AGC Sint Assint Infectado 7 6 N o infectado 0 1 N o infectado 0 5 N o
96. fer ncia LIS independentemente Ensaio APTIMA COMBO 2 43 502183PT Rev C Valores esperados dos Sistemas DTS Valores esperados dos Sistemas DTS Preval ncia A preval ncia das doen as CT e ou GC em popula es de pacientes dependem de factores de risco como idade sexo presen a de sintomas o tipo de cl nica e o m todo de teste As Tabelas 1a 1b e 1c apresentam um resumo da preval ncia de tr s resultados de doen as provocadas por CT e GC segundo o ensaio APTIMA COMBO 2 provenientes de tr s estudos cl nicos multic ntricos os dados s o apresentados por institui o cl nica e no total Preval ncia das Doen as C trachomatis e ou N gonorrhoeae conforme Determinado pelos Resultados do Ensaio APTIMA COMBO 2 por Local Cl nico Tabela 1a Esp cimes de Esfrega os Endocervicais e da Uretra Masculina e de Urina Esfrega os Endocervicais e da Uretra Masculina Urina Local Preval ncia n positivos n testados Preval ncia n positivos n testados CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC 1 10 0 39 392 12 8 50 392 14 5 57 392 8 4 33 395 12 9 51 395 13 9 55 395 2 7 0 13 186 12 9 24 186 6 5 12 186 5 3 13 245 13 9 34 245 8 6 21 245 3 10 4 48 462 22 9 106 462 14 3 66 462 10 3 48 465 20 9 97 465 12 7 59 465 4 3 3 9 270 12 2 33 270 7 0 19 270 3 3 9 270 11 5 31 270 6 7 18 270 5 1 9 10 533 8 4 45 533 2 3 12 533 2 1 12 567 9 4 5
97. feridos diretamente Gen Probe para testes enquanto os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram processados em dois laborat rios de citopatologia antes de serem transferidos Na Gen Probe os esfrega os vaginais e os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt foram primeiro rastreados primeiro com o ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistemas DTS Os esp cimes com resultados finais inv lidos ou d bios nos Sistemas Ensaio APTIMA COMBO 2 72 502183PT Rev C Concord ncia de esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS DTS n o foram seleccionados para mais testes no Sistema TIGRIS DTS Os esp cimes positivos no ensaio APTIMA COMBO 2 e um subconjunto de esp cimes negativos com o mesmo ensaio foram seleccionados para um teste de compara o no Sistema TIGRIS DTS Cento e setenta 170 esp cimes de esfrega o vaginal e 170 esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt de 181 pacientes femininas foram testados em ambos os sistemas A maioria de esp cimes 110 esp cimes de esfrega o vaginal e 107 esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt seleccionados para teste de compara o foram de mulheres sintom ticas Foram iniciadas dezassete 17 listas de trabalho 13 76 5 foram v lidas e 4 23 5 foram invalidadas por o instrumento ter detectado um sinal de fundo elevado no lumin metro O instrumento possu a encaixes de Detec o 1 e 2 frouxos que podem ter permitido a entrada do ar nas linhas ou quantidade
98. ho onde os reagentes e amostras ser o preparados Limpe as superf cies de trabalho com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Deixe a solu o de hipoclorito de s dio em contacto com as superf cies durante pelo menos 1 minuto enxaguando as depois com gua N o deixe secar a solu o de hipoclorito de s dio Cubra a superf cie da bancada onde os reagentes e as amostras ser o preparados com capas absorventes para bancadas de laborat rios com forro pl stico B Reconstitui o dos reagentes Prepara o de um novo kit Nota A reconstitui o do reagente deve ser realizada antes de come ar qualquer trabalho no Sistema PANTHER 1 Para reconstituir os reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda combine os frascos de reagente liofilizado com a solu o de reconstitui o Se estiverem refrigeradas deixe que as solu es de reconstitui o atinjam a temperatura ambiente antes de utiliz las a Emparelhe cada solu o de reconstitui o com seu reagente liofilizado Certifique se de que a solu o de reconstitui o e o reagente t m cores de etiqueta correspondentes antes de aplicar o colarinho de reconstitui o b Verifique os n meros do lote na Ficha de C digo de Barras do Lote Principal para garantir que os reagentes adequados sejam emparelhados c Abra o frasco de reagente liofilizado e insira com firmeza a extremidade ranhurada do colarinho de reconstitui o na abertura do f
99. hong S Castriciano and J B Mahony 1996 Urinary inhibitors of polymerase chain reaction and Ligase chain reaction and testing of multiple specimens may contribute to lower assay sensitivities for diagnosing Chlamydia trachomatis infected women Mol Cell Probes 11 243 249 7 Ching S H Lee E W Hook Ill M R Jacobs and J Zenilman 1995 Ligase chain reaction for detection of Neisseria gonorrhoeae in urogenital swabs J Clin Microbiol 33 3111 3114 8 Chong S D Jang X Song J Mahony A Petrich P Barriga and M Chernesky 2003 Specimen processing and concentration of Chlamydia trachomatis added can influence false negative rates in the LCx assay but not in the APTIMA COMBO 2 Assay when testing for inhibitors J Clin Microbiol 41 778 782 9 Crotchfelt K A B Pare C Gaydos and T C Quinn 1998 Detection of Chlamydia trachomatis by the Gen Probe AMPLIFIED Chlamydia Trachomatis assay AMP CT in urine specimens from men and women and endocervical specimens from women J Clin Microbiol 36 391 394 10 Farrel D J 1999 Evaluation of AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae PCR using cppB nested PCR and 16S rRNA PCR J Clin Microbiol 37 386 390 11 Frommell G T R Rothenberg S Wang and K Mcintosh 1979 Chlamydial infection of mothers and their infants Journal of Pediatrics 95 28 32 12 Gaydos C A T C Quinn D Willis A Weissfeld E W Hook D H Martin D V Ferraro and J Schachter 2003 Pe
100. i o ao uso com este ensaio uma para utilizar nos passos de captura do alvo e amplifica o e outra para utilizar nos passos de DKA necess rio dedicar duas micropipetas ao uso com este ensaio uma para utilizar na transfer ncia de esp cimes e outra para utilizar na prepara o de reagentes Todas as pipetas t m de ser limpas regularmente da forma descrita em Procedimento de Teste dos Sistemas DTS Notas ao procedimento Z Ao utilizar pipetas de repeti o para adi o de reagentes n o toque o tubo com a ponta da pipeta para evitar a passagem de um tubo para outro AA A mistura adequada necess ria para alcan ar resultados acurados nos ensaios Para obter todos os dados consulte o Procedimento de Teste dos Sistemas DTS Notas ao procedimento AB Banhos de gua separados devem ser dedicados para os passos de captura de alvo amplifica o e DKA no ensaio Ensaio APTIMA COMBO 2 6 502183PT Rev C Informa es gerais AC Os cart es de selagem devem ser eliminados em recipientes para res duos imediatamente ap s remov los dos tubos de reac o Devem sempre utilizar se cart es de selagem novos estes nunca dever o ser reutilizados de passos anteriores Os cart es de selagem devem ser fixados firmemente ao topo de todos os tubos de reac o Requisitos de armazenamento e manuseamento dos reagentes A Os seguintes reagentes s o est veis quando armazenados entre 2 C e 8 C refrigerados Reagente de Amplific
101. iais Opcionais sirene 12 Materiais Opcionais 25 Procedimento de Teste dos Sistemas DTS 13 Procedimento de Teste do Sistema TIGRIS DTS 25 Notas ao procedimento era 18 Notas ao procedimento 28 AEE PANTHER Sistema PANTHER s cseccssesseeeseeesseeeseeenseeseneeeeee 30 Reagentes e materiais fornecidos 30 Materiais necess rios mas dispon veis separadamente 31 Materiais Opcionais ra 32 Procedimento de teste do Sistema PANTHER 33 Notas ao procedimento 36 1 502183PT Rev C Informacoes gerais Utiliza o pretendida O ensaio APTIMA COMBO 2 um teste de sonda de cido nucleico alvo amplificado que utiliza a captura do alvo para a detec o qualitativa in vitro e a diferencia o de RNA riboss mico rRNA de Chlamydia trachomatis CT e ou Neisseria gonorrhoeae GC para ajudar a diagnosticar doen as urogenitais provocadas por clam dias ou gonococos utilizando o Sistema TIGRIS DTS o Sistema PANTHER ou a instrumenta o semiautom tica dos Sistemas DTS conforme especificado O ensaio pode ser utilizado para testar os seguintes esp cimes de indiv duos sintom ticos esfrega os colhidos pelo m dico de origem endocervical vaginal e uretral masculina assim como esp cimes de urina de ambos os sexos O ensaio pode ser utilizado para testar os seguintes esp cimes de indiv duos as
102. lative Light Units DP Desvio padr o CV coeficiente de varia o N A representa os esp cimes n o aplic veis para membros de pain is negativos Amostras com resultados discordantes e d bios foram inclu das na an lise de variabilidade de sinal Para valores CV e SD iguais a 0 0 a variabilidade devida a esta fonte demasiado pequena em rela o a outras fontes de varia o Ensaio APTIMA COMBO 2 67 502183PT Rev C Desempenho analitico nos Sistemas DTS Desempenho analitico nos Sistemas DTS Consulte Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS ap s a sec o Concord ncia de esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS para obter o desempenho anal tico espec fico do Sistema TIGRIS DTS Consulte Desempenho anal tico no Sistema PANTHER para obter o desempenho anal tico espec fico do Sistema PANTHER Sensibilidade Anal tica A sensibilidade anal tica para Chlamydia trachomatis limites de detec o foi determinada por compara o directa entre dilui es de organismos CT em cultura celular e o ensaio A proposta de sensibilidade anal tica para o ensaio uma Unidade de Forma o de Inclus o IFU por ensaio 7 5 IFU esfrega o 5 0 IFU mL de urina 9 75 IFU mL de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt para todos os 15 serovares CT A B Ba C D E F G H I J K L1 L2 e L3 Contudo dilui es menores do que 1 0 IFU ensaio de todos os serovares apresentaram resultados positivos no ensaio APT
103. leiro de metal de apoio no fundo do banho de gua at superf cie da gua Assim ficar assegurada uma transfer ncia de calor adequada 2 Para evitar contamina o cruzada os banhos de gua devem ser dedicados para um passo espec fico do ensaio Ensaio APTIMA COMBO 2 19 502183PT Rev C Sistemas DTS H Descontamina o 1 Superf cies e pipetas As superf cies das bancadas do laborat rio e as pipetas t m de ser regularmente descontaminadas com solu o de hipoclorito de s dio de 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M Deixe a solu o de hipoclorito de s dio em contacto com as superf cies durante pelo menos 1 minuto enxaguando as depois com gua N o deixe secar a solu o de hipoclorito de s dio As solu es com cloretos podem provocar corros o nos equipamentos e metais Enxag e bem o equipamento com gua para evitar a corros o 2 Distribuidor de Aspira o TCS a Coloque um TTC novo no suporte de TTC Active a bomba de v cuo Aplique o distribuidor de aspira o s pontas no TTC Aspire toda a Solu o de Lavagem restante na malga de prepara o da esta o de distribui o de Solu o de Lavagem Tire o distribuidor do caminho b Coloque pelo menos 100 mL de solu o de hipoclorito s dio entre 0 5 a 0 7 0 07 Ma 0 1 M ou se preferir 2 5 a 3 5 0 35 M a 0 5 M na malga de prepara o Aspire toda a solu o com o distribuidor de aspira o c Coloque pelo menos 100 mL de gua desioni
104. m tica APTIMA COMBO 2 1x3 3 mL Solu o tamp o HEPES contendo um surfactante e glicerol PR Solu o de Reconstitui o de Sonda APTIMA COMBO 2 1x 12 4 mL Solu o tamponada de succinato contendo lt 5 de detergente Ensaio APTIMA COMBO 2 10 502183PT Rev C Sistemas DTS A caixa refrigerada cont m tamb m os seguintes artigos tabuleiro de armazenamento armazenar entre 2 Ce 30 C ap s recep o Simbolo Componente Quantidade S Reagente de selec o APTIMA COMBO 2 1x31 mL Solu o tamponada com borato a 600 mM contendo surfactante Colarinho de Reconstitui o 3 Cart o de Selagem 1 embalagem Caixa APTIMA COMBO 2 de temperatura ambiente Caixa 2 de 2 armazenar entre 15 C e 30 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade TCR Reagente de Captura de Alvo APTIMA COMBO 2 1x22mL Solu o salina tamponada contendo fase s lida e olig meros de captura Ww Solu o de Lavagem APTIMA 1 x 402 mL Solu o tamponada com HEPES a 10 mM contendo lt 2 de detergente DF Tamp o para o fluido de desactiva o APTIMA 1x 402 mL 800 mM solu o tamponada de bicarbonato O Reagente a leo APTIMA 1x 24 6 mL Oleo de Silicone Materiais necessarios mas disponiveis separadamente Nota Excepto indica o em contr rio as refer ncias de cat logo dos materiais disponibilizados pela Gen Probe s o mencionadas Ref Cat Lumin metro LEADER HC 104747 01 Sistema de captura do
105. m movimento circular 3 Insira imediatamente o esfrega o no tubo de transporte 4 Quebre com cuidado a haste da zaragatoa na linha marcada tendo o cuidado de evitar que o conte do salpique 5 Tape novamente o tubo de transporte de esfrega os bem apertado 6 Repita os Passos 2 a 5 em cada rea a amostrar com a zaragatoa Ensaio APTIMA COMBO 2 36 502183PT Rev C Sistema PANTHER Caso os resultados de CT ou GC sejam positivos ou inconclusivos consulte Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Para mais informa es sobre a monitoriza o de contamina es espec ficas do Sistema PANTHER contacte a assist ncia t cnica da Gen Probe Ensaio APTIMA COMBO 2 37 502183PT Rev C Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente A Interpreta o do Teste Os resultados de teste do ensaio s o interpretados automaticamente pelo software de ensaio APTIMA utilizando o protocolo APTIMA COMBO 2 e apresentados como resultados de testes individuais para CT e GC Um resultado de teste pode ser negativo d bio positivo ou inv lido conforme determinado pelo tipo cin tico e a RLU no passo de detec o vide abaixo Um resultado de teste pode ser inv lido devido a um par metro que esteja fora dos intervalos normais esperados Os resultados de testes iniciais d bios e inv lidos devem ser testados
106. mL APTIMA COMBO 2 Solu o aquosa contendo conservantes ER Solu o de Reconstitui o Enzim tica APTIMA 1x 11 1 mL 1x 6 3 mL COMBO 2 Solu o tamp o HEPES contendo um surfactante e glicerol Ensaio APTIMA COMBO 2 30 502183PT Rev C Caixa APTIMA COMBO 2 de temperatura ambiente Caixa 2 de 2 armazenar entre 15 C e 30 C ap s recep o Sistema PANTHER Quantidade Quantidade S mbolo Componente kit de 250 kit de 100 testes testes PR Solu o de Reconstitui o de Sonda APTIMA 1x354mL 1x15 2mL COMBO 2 Solu o tamponada de succinato contendo lt 5 de detergente S Reagente de selec o APTIMA COMBO 2 1x 108 mL 1 x 43 0 mL Solu o tamponada com borato a 600 mM contendo surfactante TCR Reagente de Captura de Alvo APTIMA COMBO 2 1x 54 mL 1 x 26 0 mL Solu o tamponada salina contendo fase s lida e olig meros de captura Colarinho de Reconstitui o 3 3 Folha de c digo de barras do lote principal 1 folha 1 folha Kit de controlos APTIMA armazenar entre 2 Ce 8 C ap s recep o S mbolo Componente Quantidade PCT Controlo Positivo APTIMA CT Controlo Negativo GC 5x 1 7 mL NGC Acido nucleico de CT n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 1 unidade formadora de inclus es inclusion forming unit IFU de CT 5 fg ensaio PGC Controlo Positivo APTIMA GC Controlo Negati
107. mento Quando o ensaio APTIMA COMBO 2 realizado em laborat rio as mol culas de rRNA alvo s o isoladas dos esp cimes utilizando olig meros de captura atrav s de uma captura de alvos que utiliza micropart culas magn ticas Os olig meros de captura cont m sequ ncias complementares a regi es espec ficas das mol culas alvo bem como uma cadeia de res duos de desoxiadenosina Um olig mero de captura separado usado para cada alvo Durante o passo de hibridiza o as regi es espec ficas para a sequ ncia dos olig meros de captura s o ligadas a regi es espec ficas das mol culas alvo O olig mero de captura o complexo alvo ent o capturado da solu o ao reduzir a temperatura da sala de reac o para temperatura ambiente Esta redu o de temperatura permite que a hibridiza o ocorra entre a regi o de desoxiadenosina no olig mero de captura e as mol culas de poli desoxitimidina que s o ligadas de forma covalente s part culas magn ticas As micropart culas incluindo as mol culas alvo capturadas ligadas a elas s o arrastadas para o lado do recipiente de reac o com a utiliza o de im s e o sobrenadante aspirado As part culas s o lavadas para remover matrizes de esp cimes residuais que podem conter inibidores da reac o de amplifica o Ap s a conclus o dos passos da captura de alvo os esp cimes est o prontos para a amplifica o Ensaio APTIMA COMBO 2 3 502183PT Rev C Informa es gerai
108. mostra deve ser testada novamente Pos para GC Positivo para GC rRNA Neg para GC Presumidamente negativo para GC rRNA Equiv para GC A amostra deve ser testada novamente Inv lido A amostra deve ser testada novamente b Resultados do Novo Teste Pos para CT Positivo para CT rRNA Neg para CT Presumidamente negativo para CT rRNA Equiv para CT Indeterminado um novo esp cime deve ser recolhido Pos para GC Positivo para GC rRNA Neg para GC Presumidamente negativo para GC rRNA Equiv para GC Indeterminado um novo esp cime deve ser recolhido Inv lido Indeterminado um novo esp cime deve ser recolhido Notas Recomenda se que sejam cuidadosamente ponderados os dados de desempenho aquando da interpreta o dos resultados do ensaio APTIMA COMBO 2 em indiv duos assintom ticos ou em quaisquer indiv duos de popula es de preval ncia baixa O primeiro resultado v lido para cada analito o que deve ser relatado Um resultado negativo n o impede a presen a de uma infec o CT ou GC visto que os resultados dependem da colheita adequada de esp cimes aus ncia de inibidores e rRNA suficiente para serem detectados Os resultados do teste podem ser afectados pela colheita inadequada de esp cimes armazenamento inadequado de esp cimes erro t cnico ou mistura do esp cime Como v lido para todos os m todos de n o cultura um esp cime positivo obtido a pa
109. mostras de esfrega os vaginais foram gerados a partir do conjunto de amostras negativas de esfrega os Quinze conjuntos de esfrega os vaginais foram misturados com CT e GC em concentra es finais de 1 0 IFU e 50 CFU por reac o respectivamente As amostras misturadas foram mantidas a 70 C 20 C 4 C e 30 C As amostras foram testadas em duplicata usando uma al quota nos dias 0 20 36 73 e 114 Todas as condi es de teste foram positivas para CT e GC em todos os tempos e temperaturas Ensaio APTIMA COMBO 2 70 502183PT Rev C Desempenho analitico nos Sistemas DTS D Esp cimes de urina Os dados que justificam as condi es recomendadas para transporte e armazenamento das amostras de urina foram gerados com dez amostras negativas de urina feminina e dez amostras de urina feminina As amostras de urina foram misturadas com CT e GC em concentra es finais de 10 IFU e 100 CFU por reac o respectivamente Dois conjuntos das amostras de urina misturadas foram mantidos a 4 C e 30 C por 24 horas antes de serem adicionadas ao Meio de transporte de urina UTM Os dois conjuntos de amostras UTM foram ent o mantidos a 4 C e 30 C e testados em triplicado nos dias 0 1 5 20 e 35 Todas as amostras foram positivas para CT e GC quando as amostras de urina foram mantidas a 4 C antes de adicionar o UTM Quando as amostras de urina foram mantidas a 30 C antes da adi o de UTM todas as amostras foram positivas para C
110. nsibilidade e especificidade relativas a CT em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt testados com o ensaio APTIMA COMBO 2 por estado sintom tico e a n vel global s o apresentadas na Tabela 5c Para CT a sensibilidade geral foi de 96 7 87 90 Em indiv duos sintom ticos e assintom ticos a sensibilidade foi de 96 7 29 30 e 96 7 58 60 respectivamente A especificidade geral para os esp cime citol gico em base l quida PreservCyt CT foi de 99 2 1 545 1 557 Em indiv duos sintom ticos e assintom ticos a especificidade foi de 98 5 324 329 e 99 4 1 221 1 228 respectivamente A Tabela 6c mostra a sensibilidade e a especificidade para CT do ensaio APTIMA COMBO 2 em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt por institui o cl nica e no geral Para CT a sensibilidade teve varia o de 92 9 a 100 A especificidade teve varia o de 97 7 a 100 A sensibilidade e especificidade relativas a GC em esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt testados com o ensaio APTIMA COMBO 2 por estado sintom tico e a n vel global s o apresentadas na Tabela 9c Para GC a sensibilidade geral foi de 92 3 12 13 Em indiv duos sintom ticos e assintom ticos a sensibilidade foi de 100 7 7 e 83 3 5 6 respectivamente A especificidade geral para os esp cimes citol gicos em base l quida Ensaio APTIMA COMBO 2 49 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS PreservCyt GC foi de 99 8
111. ntes n o foram inclu dos em qualquer c lculo de desempenho Dos Ensaio APTIMA COMBO 2 48 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS 5 782 resultados de esfrega o ensaio APTIMA COMBO 2 do estudo cl nico multic ntrico houve uma pequena percentagem 28 0 5 de esp cimes de esfrega o vaginal que tiveram resultado inicialmente inv lido ou d bio para CT ou GC Ap s a repeti o do teste apenas tr s resultados CT e dois resultados GC foram d bios e foram exclu dos da an lise Nenhum esp cime teve resultado inv lido ap s a repeti o do teste Estudo Cl nico de Esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Um estudo cl nico multic ntrico prospectivo foi conduzido para avaliar a utiliza o da Solu o PreservCyt um componente do sistema ThinPrep 2000 como meio alternativo para esp cimes ginecol gicas para a detec o de CT e GC Mil seiscentos e quarenta e sete 1 647 pacientes mulheres sintom ticas e assintom ticas que frequentam cl nicas de OB GIN planeamento familiar sa de p blica da mulher e de DST foram avaliadas no estudo cl nico Dos 1 647 pacientes dispon veis 1 288 eram pacientes assintom ticos e 359 eram pacientes sintom ticos Os pacientes foram registados atrav s de locais com preval ncia de CT que varia de 3 2 a 14 0 e preval ncia de GC que varia de 0 a 5 0 Foram colhidos dois esp cimes por cada indiv duo eleg vel um esp cime citol gico em base l quida PreservCyt
112. o de reac o 9 Para trabalhar adequadamente com o software de teste APTIMA o controlo positivo CT controlo negativo GC devem estar na primeira posi o da primeira TTU a Segure o tubo de controlo positivo CT controlo negativo GC numa m o ou mantenha o num suporte Esta etiqueta cor de rosa O texto da etiqueta CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC Com a utiliza o de uma micropipeta perfure a tampa tomando cuidado para n o chegar com a ponta ao fundo do tubo Adicione 400 uL de controlo positivo CT controlo negativo GC ao primeiro tubo de reac o b Da mesma forma e utilizando uma nova ponta de pipeta adicione 400 uL de controlo positivo GC controlo negativo CT ao segundo tubo de reac o A etiqueta do segundo controlo azul esverdeada O texto da etiqueta CONTROL GC PGC CONTROL CT NCT Ensaio APTIMA COMBO 2 15 502183PT Rev C Sistemas DTS 10 Continue o procedimento de prepara o do suporte adicionando 400 uL de cada esp cime aos tubos de reac o restantes Utilize uma nova ponta de pipeta para cada esp cime e controlo O volume de esp cime ou controlo aceit vel para adi o a um tubo de reac o de 400 uL 100 uL Consulte as sec es Notas ao procedimento e Pipeta o de Controlos e Esp cimes para mais informa es Captura de Alvo A utiliza o do Sistema de Captura de Alvo GEN PROBE descrito no Target Capture System Operator s Manual Manual
113. o 0 0 0 3 5 Negativo 0 0 0 294 0 0 N A 99 0 97 1 99 8 0 0 100 Total 0 0 0 297 Positivo 1 0 1 0 6 Negativo 0 0 2 360 0 3 100 2 5 100 99 7 98 5 100 50 0 100 Total 1 0 3 360 Positivo 12 0 1 3 Tudo Negativo 1 0 5 1 625 0 8 92 3 64 0 99 8 99 8 99 4 99 9 75 0 99 9 Total 13 0 6 1 628 SS SE A E 1 Um esp cime teve um resultado discordante Resultado d bio de esp cime de esfrega o endocervical no ensaio APTIMA COMBO 2 Resultado positivo de esp cime de esfrega o endocervical no ensaio APTIMA GC Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio AGC Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio AGC Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado positivo em esfrega o endocervical no ensaio AGC Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio AC2 Resultado negativo em esfrega o endocervical no ensaio AGC Ensaio APTIMA COMBO 2 62 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS An lises de Neisseria gonorrhoeae por estado de infec o em pacientes do sexo feminino Tabela 11a Esfrega o Endocervical e Esp cime de Urina eos NAAT Cutura COMBO sintom tico paciente UF EF EF UF EF Sint Assint Infectado N A 1 1 Infectado 0 1 Infectado a
114. o do esp cime o treinamento de m dicos em t cnicas adequadas de colheita de esp cimes necess rio Consulte o folheto informativo do kit de colheita de esp cimes da GEN PROBE adequado O fracasso ou o sucesso terap utico n o podem ser determinados com o ensaio APTIMA COMBO 2 pois os cidos nucleicos podem persistir ap s uma terap utica antimicrobiana adequada J Os resultados do ensaio APTIMA COMBO 2 devem ser interpretados em conjunto com outros dados laboratoriais e cl nicos de que o m dico disponha K Um resultado negativo n o impede a poss vel infec o porque os resultados dependem da colheita adequada de esp cimes Os resultados de teste podem ser afectados por colheita inadequada de esp cimes erro t cnico mistura de esp cimes ou n veis do alvo abaixo do limite de detec o do ensaio L O ensaio APTIMA COMBO 2 fornece resultados qualitativos Portanto n o se pode fazer uma correla o entre a magnitude de um sinal positivo de ensaio e o n mero de organismos em um esp cime M No caso de estudos cl nicos de esp cimes de esfrega os vaginais esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos e esp cimes de urina o desempenho da detec o de CT e GC deriva de popula es de preval ncia elevada Os resultados positivos em popula es de baixa preval ncia devem ser interpretados com cautela tendo a no o de que a probabilidade de o positivo ser falso pode ser mais elevada do que a de o p
115. o paciente Um total de 2 073 resultados de testes de esfrega o vaginal CT e 2 073 resultados de testes de esfrega o vaginal GC foram usados na an lise de dados No algoritmo a designa o de um paciente como infectado ou n o infectado com CT ou GC foi baseada em resultados de esfrega o vaginal e esp cime de urina do ensaio APTIMA COMBO 2 dispon vel no mercado e do outro NAAT dispon vel no mercado Os pacientes foram considerados infectados com CT ou GC se dois dos quatro esfrega os endocervicais e esp cimes de urina apresentaram resultado positivo no ensaio APTIMA COMBO 2 e no outro NAAT de refer ncia um esp cime positivo em cada NAAT Os pacientes foram considerados n o infectados se menos de dois resultados NAAT de refer ncia tiveram resultado positivo As Tabelas 7b e 11b resumem o n mero de resultados de indiv duos sintom ticos e assintom ticos designados como infectados ou n o infectados com CT ou GC respectivamente de acordo com o algoritmo de estado de infec o do paciente Para este estudo cl nico dois NAATs dispon veis no mercado foram utilizados para determinar o estado de infec o por GC A cultura n o foi utilizada como teste de refer ncia pois o ensaio APTIMA COMBO 2 j tinha sido avaliado frente a culturas de outros tipos de esp cimes consulte o Estudos Cl nicos de Esfrega o Endocervical Esfrega o da Uretra Masculina e Esp cime de Urina para mais pormenores A sensibilidade e a especificidade para
116. obacillus acidophilus Pseudomonas fluorescens Brevibacterium linens Lactobacillus brevis Pseudomonas putida Campylobacter jejuni Lactobacillus jensonii Rahnella aquatilis Candida albicans Lactobacillus lactis Rhodospirillum rubrum Candida glabrata Legionella pneumophila 2 Saccharomyces cerevisiae Candida parapsilosis Leuconostoc paramensenteroides Salmonella minnesota Candida tropicalis Listeria monocytogenes Salmonella typhimurium Chlamydia pneumoniae Micrococcus luteus Serratia marcescens Chlamydia psittaci 2 Moraxella lacunata Staphylococcus saprophyticus Chromobacterium violaceum Moraxella osloensis Staphylococcus aureus Citrobacter freundii Morganella morganii Staphylococcus epidermidis Clostridium perfringens Mycobacterium smegmatis Streptococcus agalactiae Corynebacterium genitalium Mycoplasma genitalium Streptococcus bovis Corynebacterium xerosis Mycoplasma hominis Streptococcus mitis Cryptococcus neoformans meningitidis Serogroup A Streptococcus mutans Cytomegalovirus meningitidis Serogroup B Streptococcus pneumoniae Deinococcus radiodurans meningitidis Serogroup C 4 Streptococcus pyogenes Derxia gummosa meningitidis Serogroup D Streptococcus salivarius Eikenella corrodens meningitidis Serogroup Y Streptococcus sanguis Enterobacter aerogenes z z Z Z Z Z meningitidis Serogroup W135 Streptomyces griseinus
117. obiol 4 288 295 19 Mahony J S Chong D Jang K Luinstra M Faught D Dalby J Sellors and M Chernesky 1998 Urine specimens from pregnant and nonpregnant women inhibitory to amplification of Chlamydia trachomatis nucleic acid by PCR Ligase chain reaction and transcription mediated amplification identification of urinary substances associated with inhibition and removal of inhibitory activity J Clin Microbiol 36 3122 3126 20 Masi A T and B I Eisenstein 1981 Disseminated Gonococcal Infections DGI and Gonococcal Arthritis GCA II Clinical Manifestations Diagnosis Complications Treatment and Prevention Semin Arthritis Rheum 10 173 21 McCurdy Brenda W 1997 Cumitech Guide on Verification and Validation of Procedures in the Microbiology Laboratory February 1997 American Society for Microbiology ASM Press 22 National Committee for Clinical Laboratory Standards 1999 NCCLS EP5 A Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices Approved Guideline Vol 19 No 2 23 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2002 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance Approved Guideline for additional Guidance on Appropriate Internal Quality Control Testing Practices 24 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2004 NCCLS EP5 A2 Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods Approved Guideline 2nd edition Vol 24 No 25 25 Pe
118. ocesso de reconstitui o nos sistemas TIGRIS DTS ou PANTHER 2 Prepare o reagente de captura do alvo de trabalho Working Target Capture Reagent wTCR a Emparelhe os frascos adequados de TCR e TCR B b Verifique os n meros do lote na Ficha de C digo de Barras do Lote Principal para garantir que os reagentes adequados no kit estejam emparelhados c Abrao frasco de TCR e deposite a tampa sobre uma superf cie de trabalho limpa e coberta d Abra o frasco de TCR B e verta o conte do por inteiro no frasco de TCR Espere que uma pequena quantidade de l quido permane a no frasco de TCR B e Tape o frasco de TCR e agite suavemente a solu o para misturar o conte do Evite formar espuma durante este passo f Registe as iniciais do operador e a data actual na etiqueta g Elimine o frasco e a tampa de TCR B 3 Prepare o reagente de selec o a Verifique o n mero do lote no frasco de reagente para se certificar de que corresponde ao n mero de lote na folha de c digo de barras do lote principal b Registe as iniciais do operador e a data actual na etiqueta Nota Misture bem todos os reagentes invertendo os suavemente antes de os colocar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes C Prepara o de reagentes para reagentes previamente reconstitu dos 1 Os reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda previamente reconstitu dos t m de atingir a temperatura ambiente 15 C a 30 C an
119. or a 62 C durante 1 a 2 minutos Ap s este passo de aquecimento o Reagente de Sonda pode ser usado mesmo se ainda houver precipitado residual Misture o Reagente de Sonda por invers o tomando o cuidado de n o induzir espuma antes de carreg lo no sistema 3 Misture bem todos os reagentes invertendo os suavemente antes de os carregar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes 4 N o encha demasiado os frascos de reagentes O Sistema TIGRIS DTS reconhece e rejeita frascos que estejam demasiadamente cheios D Manuseamento de esp cimes 1 Deixe que os esp cimes e controlos alcancem a temperatura ambiente antes do processamento 2 N o agite os esp cimes no v rtex 3 Confirme visualmente se todos os tubos de esp cimes cumprem um dos seguintes crit rios a Presen a de uma nica zaragatoa de colheita azul APTIMA num tubo de transporte de esfrega os unissexo b Presen a de uma nica zaragatoa de colheita cor de rosa APTIMA num tubo de transporte de esfrega os vaginais c Volume final de urina entre as linhas de enchimento pretas dos tubos de transporte de esp cimes de urina d Aus ncia de zaragatoa no tubo de transporte de esp cimes APTIMA para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt 4 Inspeccione os tubos de esp cimes antes de os carregar no suporte a Caso um tubo de esp cime contenha bolhas no espa o entre o l quido e a tampa centrifugue o tubo por 5 minutos com 420
120. ormas De maneira geral demonstrou se que a sensibilidade era compar vel a um n vel de detec o de um IFU por ensaio entre o Sistema TIGRIS DTS e os Sistemas DTS Um painel de sensibilidade num conjunto de esp cime vaginal e um painel de sensibilidade em conjunto de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt p s processada foram preparados em CT 5 fg rRNA e testaram 60 replicados no Sistema TIGRIS DTS A percentagem de positividade IC de 95 no Sistema TIGRIS DTS para esfrega os vaginais foi de 100 95 1 100 e a de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt p s processados foi de 100 95 1 100 Foram testadas dilui es de tr s isolados cl nicos de GC em tr s instrumentos de Sistemas TIGRIS DTS e em paralelo nos Sistemas DTS Os isolados GC foram dilu dos em meios de transporte de esfrega os e um conjunto de esp cime de urina processada As concentra es variam de 150 c lulas por ensaio a 5 c lulas por ensaio que uma ordem de grandeza abaixo da proposta de sensibilidade anal tica para o ensaio de 50 c lulas ensaio 362 c lulas esfrega o 250 c lulas mL de urina A positividade percentual entre o Sistema TIGRIS DTS e os Sistemas DTS foi equivalente a uma confian a de 95 para todos os tr s isolados at ao limite de detec o anal tica indicado Dilui es abaixo do n vel tamb m tiveram resultado positivo em ambas as plataformas De maneira geral demonstrou se que a sensibilidade era compar
121. ortadas ao laborat rio entre 2 C a 30 C Transfira a amostra de urina ao tubo de transporte de esp cimes de urina APTIMA em at 24 horas ap s a colheita Armazene entre 2 C a 30 C e teste em at 30 dias ap s a colheita Ensaio APTIMA COMBO 2 8 502183PT Rev C Informa es gerais b Ap s a colheita transporte os esp cimes de urina processada no tubo de transporte APTIMA de esp cimes de urina a uma temperatura entre 2 C e 30 C e armazene a 2 C e 30 C at an lise Os esp cimes de urina processados devem ser analisados com o ensaio APTIMA COMBO 2 no espa o de 30 dias ap s a colheita Caso seja necess rio um armazenamento mais prolongado congele a uma temperatura entre 20 C e 70 C durante at 12 meses ap s a colheita ver Estudos de Estabilidade de Esp cime 3 Esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt a Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt destinados a an lise de CT e ou GC t m de ser processados para citologia e ou transferidos para um tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA no espa o de 30 dias ap s a colheita quando armazenados entre 2 C e 30 C ver Estudos de Estabilidade de Esp cime b Caso se utilize o procedimento de remo o de al quotas de ThinPrep consulte o ThinPrep 2000 ou ThinPrep 3000 Processor Operator s Manual Addendum Adenda do Manual do operador do ThinPrep 2000 Processor ou do ThinPrep 3000 Processor Transfira 1 mL da al quota
122. os 231 tinham entre 21 e 25 anos e 255 tinham mais de 25 anos de idade Das 818 pacientes Ensaio APTIMA COMBO 2 47 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS sintom ticas registadas no estudo 160 tinham entre 16 e 20 anos 324 tinham entre 21 e 25 anos e 334 tinham mais de 25 anos de idade Foram colhidos cinco esp cimes de cada indiv duo eleg vel um esp cime de urina um esfrega o vaginal colhido pela paciente um esfrega o vaginal colhido pelo m dico e dois esfrega os endocervicais aleat rios Os resultados do ensaio APTIMA COMBO 2 foram gerados a partir dos dois esfrega os vaginais um dos esfrega os endocervicais e uma al quota do esp cime de urina O segundo esfrega o endocervical e uma segunda al quota do esp cime de urina foram testados utilizando outro NAAT dispon vel no mercado para CT e outro NAAT dispon vel no mercado para GC Esfrega o endocervical e esp cimes de urina testados no ensaio APTIMA COMBO 2 e os outros NAAT dispon veis no mercado foram usados como NAATs de refer ncia para determinar o estado de infec o do paciente no estudo cl nico de esp cimes de esfrega o vaginal O teste de esp cimes foi conduzido ou no local do registo do paciente ou em um local de teste externo Todos os c lculos realizados foram baseados no n mero total de resultados dos esfrega os vaginais recolhidos pela paciente e pelo m dico ensaio APTIMA COMBO 2 comparado com um algoritmo de estado de infec o d
123. os pelo teste directo de sondas de DNA e NAATs Ensaio APTIMA COMBO 2 2 502183PT Rev C Informa es gerais A N gonorrhoeae o agente causador da gonorreia As N gonorrhoeae s o diplococos n o m veis e gram negativos A maioria das infec es gonorreicas s o infec es descomplicadas do tracto genital inferior e devem ser assintom ticas Entretanto se n o tratadas em mulheres as infec es podem se agravar e causar PID PID pode se manifestar como endometrite salpingite peritonite p lvica abcessos tubo ovarianos Uma percentagem menor de pessoas com infec es gonoc cicas pode adquirir infec o gonoc cica disseminada IGD 14 20 O diagn stico convencional das infec es por GC exige que o organismo seja isolado em meio selectivo ou a observa o de diplococos em esfrega os ap s colora o de Gram 16 M todos de culturas podem ter boa sensibilidade cl nica mas s o altamente dependentes do manuseamento adequado dos esp cimes O armazenamento e o transporte impr prios de esp cimes podem resultar na perda de viabilidade do organismo e gerar resultados negativos incorrectos Al m disso o uso de m s t cnicas de amostragem materiais de amostragem t xicos e a inibi o do crescimento por componentes das secre es corporais podem tamb m acarretar resultados negativos falsos 7 18 M todos de n o cultura comummente utilizados para a detec o de GC incluem testes directos de sondas de DNA e NAATs
124. ositivo ser verdadeiro N Para os ensaios cl nicos de esp cimes citol gicos em base l quida PreserCyt o desempenho do ensaio APTIMA COMBO 2 na detec o de CT e GC obtido sobretudo de popula es de baixa prevalencia N o obstante resultados positivos em popula es de baixa preval ncia devem ser interpretados cuidadosamente levando em considera o que a probabilidade de um falso positivo podem ser mais alta do que um positivo verdadeiro O O desempenho do kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA n o foi avaliado quanto an lise do mesmo esp cime citol gico l quido em solu o PreservCyt antes e ap s o processamento citol gico ThinPrep P Os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt processados em outros instrumentos al m do ThinPrep 2000 Processor n o foram avaliados quanto utiliza o com ensaios APTIMA Q Os esp cimes de esfrega os vaginais recolhidos pela paciente s o uma op o para efectuar o rastreio de mulheres quando um exame p lvico n o for indicado de outro modo R A aplica o dos esp cimes de esfrega os vaginais recolhidos pela paciente est limitada a cl nicas nas quais suporte aconselhamento est dispon vel para explicar procedimentos e precau es Ensaio APTIMA COMBO 2 42 502183PT Rev C S O ensaio APTIMA COMBO 2 n o foi validado para utiliza o em esfrega os vaginais colhidos em casa pelas pacientes T O desempenho dos esp cimes de esfrega o vaginal
125. p cimes e controlos utilize os seguintes dados para calcular os volumes de TCR e TCR B Volume de TCR mL n mero de reac es 5 reac es extra x 0 1 mL Volume de TCR B mL Volume de TCR mL 100 C Captura de Alvo Target Capture A pipeta de repeti o usada na captura de alvo e amplifica o deve ser dedicada para utiliza o somente nestes passos Consulte a sec o Avisos e precau es para mais informa es Prepara o dos Suportes 1 Deixe que os esp cimes e controlos alcancem a temperatura ambiente antes do processamento 2 N o agite os esp cimes no v rtex Ensaio APTIMA COMBO 2 14 502183PT Rev C Sistemas DTS 3 Confirme visualmente se todos os tubos de esp cimes cumprem um dos seguintes crit rios a Presenga de uma unica zaragatoa de colheita azul APTIMA num tubo de transporte de esfrega os unissexo b Presen a de uma nica zaragatoa de colheita cor de rosa APTIMA num tubo de transporte de esfrega os vaginais c Volume final de urina entre as linhas de enchimento pretas dos tubos de transporte de esp cimes de urina d Aus ncia de zaragatoa no tubo de transporte de esp cimes APTIMA para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt 4 Inspeccione os tubos de esp cimes antes de os perfurar a Caso um tubo de esp cime contenha bolhas no espa o entre o l quido e a tampa centrifugue o tubo por 5 minutos com 420 RCF para eliminar as bolhas b Caso um tubo
126. perados DTS Concd concord ncia entre Sistemas DTS e resultados esperados Um tubo de colheita cont m aproximadamente 2 9 mL de meio de transporte para esfrega os e 4 0 mL de mistura meio de transporte urina para esp cimes de urina ZA concentra o de CT neste membro do painel cl nico CT GC est uma ordem de grandeza abaixo da sensibilidade anal tica indicada para o ensaio APTIMA COMBO 2 que de 1 IFU ensaio 7 25 IFU esfrega o 5 IFU mL de urina Um de cinco replicados do painel de urina feminina foi CT nos Sistemas DTS Tr s de 5 replicados do painel de urina feminina foram CT no Sistema TIGRIS DTS Tabela 21 Estudo de concord ncia do painel cl nico de CT GC Resultados de CT para esfrega os endocervicais esfregacos uretrais masculinos e pain is de urina de ambos os sexos Es pros DESA Die prs Concord ncia Concord ncia Esp cime N TIGRIS TIGRIS TIGRIS TIGRIS positiva IC de 95 negativa IC de 95 N N N N Esfrega o 129 80 0 0 49 100 95 5 100 100 92 7 100 Urina 130 76 3 1 50 96 2 89 3 99 2 98 0 89 6 100 denota Positivo denota Negativo IC intervalo de confianga Tr s de cinco replicados do painel de urina feminina que estavam uma ordem de grandeza abaixo da sensibilidade anal tica indicada para o ensaio APTIMA COMBO 2 que de 1 IFU ensaio para CT foram CT no Sistema TIGRIS DTS Um de cinco replicados do painel de urina feminina foi CT nos Sistemas DTS Ensaio AP
127. presen a de CT e GT no estimado rRNA equivalente a 1 0 CT IFU ensaio 5 fg ensaio e 50 GC c lulas ensaio 250 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Nenhuma interfer ncia foi observada com nenhuma das subst ncias testadas N o foram observados inibidores de amplifica o no ensaio APTIMA COMBO 2 Recupera o Adicionou se Escherichia coli e Gardnerella vaginalis 2 4 x 10 c lulas ensaio e Lactobacillus acidophilus Gardnerella vaginalis Bacteroides ureolyticus e Staphylococcus epidermidis 1 0 x 10 c lulas ensaio s amostras contendo o rRNA equivalente a aproximadamente 1 0 CT IFU 5 fg e 50 c lulas GC 250 fg Essas adi es n o interferem com a amplifica o e detec o de rRNA CT ou GC com a utiliza o do ensaio APTIMA COMBO 2 Estudos de Estabilidade de Esp cime A Esp cimes de Esfrega o Endocervical Os dados que justificam as condi es recomendadas para transporte e armazenamento das amostras de esfrega o endocervical foram gerados a partir do conjunto de amostras negativas de esfrega os Cinco amostras em conjunto foram misturados com CT e GC em concentra es finais de 10 IFU e 100 CFU por reac o respectivamente As amostras misturadas foram mantidas a 70 C 20 C 4 C e 30 C As amostras foram testadas em duplicata nos dias 0 20 35 60 e 90 Todas as condi es de teste foram positivas
128. rado Esp cimes de urina negativos individuais foram misturados com o serovar G de CT GC ou com uma combina o de CT e GC para criar um painel de 120 positivos para CT 120 positivos para GC e 120 membros do painel positivos duplos Os membros do painel positivos para CT foram misturados com organismos a 0 25 IFU mL 2 5 IFU mL ou 25 IFU mL 0 5 fg ensaio 5 fg ensaio ou 50 fg ensaio Os membros do painel positivos para GC foram misturados com organismos a 12 5 CFU mL 125 CFU mL ou 1 250 CFU mL 25 fg ensaio 250 fg ensaio ou 2 500 fg ensaio Os positivos duplos foram misturados com organismos CT a 2 5 IFU mL 5 fg ensaio e organismos GC a 2 500 000 CFU mL 5 000 000 fg ensaio ou CT a 25 IFU mL 50 fg ensaio e GC a 1 250 CFU mL 2 500 fg ensaio ou CT a 25 000 IFU mL 50 000 fg ensaio e GC a 125 CFU mL 250 fg ensaio ou CT a 2 5 IFU mL 5 fg ensaio e GC a 125 CFU mL 250 fg ensaio Al m disso foram colhidos 120 esp cimes de urina negativos para CT e GC Os pain is positivos e negativos foram testados em tr s Sistemas PANTHER e em tr s Sistemas TIGRIS DTS A concord ncia percentual positiva entre o Sistema PANTHER e o Sistema TIGRIS DTS foi de 100 com um intervalo de confian a inferior a 95 de 99 5 para CT e GC A concord ncia percentual negativa entre o Sistema PANTHER e o Sistema TIGRIS DTS foi de 99 9 com um intervalo de confian a inferior a 95 de 99 5 Os resultados do estudo s o apresentados na Tabela 25 Tabela 2
129. rasco Figura 3 Passo 1 d Abra o frasco da solu o de reconstitui o correspondente e coloque a tampa numa superf cie de trabalho limpa e coberta e Segurando o frasco da solu o de reconstitui o na bancada insira com firmeza a outra extremidade do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 3 Passo 2 f Inverta lentamente os frascos montados Permita que a solu o escoe do frasco de solu o para o frasco de vidro Figura 3 Passo 3 g Agite suavemente a solu o no frasco para a misturar Evite a cria o de espuma durante a agita o do frasco Figura 3 Passo 4 h Aguarde que o reagente liofilizado entre em solu o e depois inverta novamente os frascos montados inclinando o a um ngulo de 45 para minimizar a forma o de espuma Figura 3 Passo 5 Deixe todo o l quido escoar de volta para o frasco de pl stico i Retire o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 3 Passo 6 j Volte a colocar a tampa no frasco de pl stico Anote as iniciais do operador e a data de reconstitui o na etiqueta Figura 3 Passo 7 k Deite fora o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 3 Passo 8 Ensaio APTIMA COMBO 2 33 502183PT Rev C Sistema PANTHER Aviso Evite formar espuma ao reconstituir os reagentes A espuma compromete o sensor de nivel no Sistema PANTHER 1 EV i io A W 5 6 mm o q Figura 3 Pr
130. retirada para um tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA de acordo com as instru es do folheto informativo do kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA c Caso analise o esp cime ap s o processamento no ThinPrep 2000 Processor processe o esp cime citol gico em base l quida PreservCyt de acordo com o ThinPrep 2000 Processor Operator s Manual Manual do operador do ThinPrep 2000 Processor e o folheto informativo do kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA Transfira 1 mL do fluido restante no frasco de solu o PreservCyt para um tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA de acordo com as instru es do folheto informativo do kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA d Depois de o esp cime citol gico em base l quida PreservCyt ser transferido para o tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA o esp cime tem de ser analisado com o ensaio APTIMA COMBO 2 no espa o de 30 dias quando armazenado entre 2 C e 8 C ou de 14 dias quando armazenado entre 15 C e 30 C Caso seja necess rio um armazenamento mais prolongado congele a uma temperatura entre 20 C e 70 C durante at 12 meses ap s a transfer ncia ver Estudos de Estabilidade de Esp cime C Armazenamento de esp cimes ap s o teste 1 Os esp cimes que foram testados devem ser armazenados em posi o vertical num suporte 2 Os tubos de transporte de esp cimes devem ser cobertos com uma pel cula pl stica nova e limpa ou com folha de alum nio 3
131. rformance of the APTIMA COMBO 2 Assay for detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae in female urine and endocervical swab specimens J Clin Microbiol 41 304 309 Ensaio APTIMA COMBO 2 85 502183PT Rev C Bibliografia 13 Goessens W H F J W Mouton W I Van Der Meijden S Deelen T H Van Rijsoort Vos N L Toom H Verbrugh and R P Verkooyen 1997 Comparison of three commercially available amplification assays AMP CT LCx and COBAS AMPLICOR for detection of Chlamydia trachomatis in first void urine J Clin Microbiol 35 2628 2633 14 Holmes K K G W Counts and H N Beatz 1971 Disseminated Gonococcal infection Ann of Intern Med 74 979 993 15 Holmes K K H H Handsfield S P Wang B B Wentworth M Turck J B Anderson and E R Alexander 1975 Etiology of nongonococcal urethritis NEJM 292 1199 1205 16 Hook E W Ill and H H Handsfield 1999 Gonococcal infections in the adult p 458 In K Holmes et al eds Sexually Transmitted Diseases McGraw Hill New York NY 17 Jaschek G C A Gaydos L E Welsh and T C Quinn 1993 Direct detection of Chlamydia trachomatis in urine specimens from symptomatic and asymptomatic men by using a rapid polymerase chain reaction assay J Clin Microbiol 31 1209 1212 18 Krauss S J R C Geller G H Perkins and D L Rhoden 1976 Interference of Neisseria gonorrhoeae growth by other bacterial species J Clin Micr
132. rmemente a outra extremidade do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 2 Passo 1 Ensaio APTIMA COMBO 2 25 502183PT Rev C Sistema TIGRIS DTS k Inverta lentamente os frascos montados Permita que a solu o escoe do frasco de solu o para o frasco de vidro Figura 2 Passo 3 Agite suavemente a solu o no frasco para misturar Evite a cria o de espuma enquanto agita o frasco Figura 2 Passo 4 Aguarde que o reagente liofilizado entre em solu o e depois inverta novamente os frascos montados inclinando o a um ngulo de 45 para minimizar a forma o de espuma Figura 2 Passo 5 Deixe todo o l quido escoar de volta para o frasco de pl stico Retirar o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 2 Passo 6 Volte a colocar a tampa no frasco de pl stico Registe as iniciais do operador e a data de reconstitui o no r tulo Figura 2 Passo 7 Deite fora o colarinho de reconstitui o e o frasco de vidro Figura 2 Passo 8 Aviso Evite formar espuma ao reconstituir os reagentes A espuma compromete o sensor de n vel no Sistema TIGRIS DTS TA 1 DA 3 A l BIN 5 6 y eee Figura 2 Processo de reconstitui o nos sistemas TIGRIS DTS ou PANTHER 2 Prepare o reagente de captura do alvo de trabalho Working Target Capture Reagent wTCR a b Emparelhe os frascos adequados de TCR e TCR B Verifique os n meros do
133. rtir de um paciente ap s tratamento terap utico n o pode ser interpretado como se estivesse indicando a presen a de CT ou GC vi vel Como v lido para todos os m todos de testes de urina um resultado negativo de urina para uma paciente feminina sobre a qual h suspeitas cl nicas de haver infec es por chlamydia ou gonoc cicas n o descartam a presen a de CT ou GC no tracto urogenital Nestes casos recomenda se o teste de um esp cime endocervical Al m disso um resultado de urina negativo para GC de uma paciente feminina tem menor valor preditivo negativo do que um resultado de esfrega o endocervical Recomendam se os testes de esp cimes endocervicais para pacientes femininas sobre as quais h suspeitas cl nicas de haver infec es por clam dia ou gonoc cicas Se forem recolhidos esfrega os citol gicos e endocervicais o esp cime citol gico l quido em solu o PreservCyt tem de ser recolhido antes do esp cime do esfrega o endocervical Ensaio APTIMA COMBO 2 40 502183PT Rev C Limitacoes A A utilizagao deste ensaio se limita ao pessoal que foi treinado no procedimento Nao seguir as instru es dadas no folheto desta embalagem pode levar a resultados errados B Os esfrega os foram avaliados com o ensaio APTIMA COMBO 2 em Sistemas DTS para verificar a eventual interfer ncia de sangue lubrificantes ginecol gicos e espermicidas Os esp cimes de urina foram avaliados para verificar a interfer ncia
134. s Os ensaios de amplifica o de alvo s o baseados na capacidade que os iniciadores oligonucle tidos complementares t m de efectuar hibrida o espec fica e permitem a amplifica o enzim tica das cadeias do cido nucleico alvo O ensaio APTIMA COMBO 2 replica uma regi o espec fica do rRNA da subunidade 23S da CT e uma regi o espec fica do rRNA da subunidade 16S da GC atrav s de intermedi rios de DNA Um conjunto exclusivo de iniciadores usado para cada mol cula alvo A detec o das sequ ncias de produto da amplifica o de rRNA amplicon alcan ada com a utiliza o da hibridiza o do cido nucleico Sondas de DNA de cadeia nica quimioluminescente que s o complementares a uma regi o de cada amplicon alvo s o marcadas com diferentes mol culas de ster de acrid nio As sondas de DNA marcadas s o combinadas com o amplicon para formar h bridos est veis de RNA DNA O Reagente de selec o diferencia a sonda hibridizada da n o hibridizada eliminando a gera o de sinal da sonda n o hibridizada Durante o passo de detec o a luz emitida dos h bridos rotulados como RNA DNA medida como sinais de fot es num lumin metro e s o relatadas Unidades de Luz Relativa RLU Na DKA diferen as dos perfis cin ticos das sondas marcadas de CT e GC permitem a distin o dos sinais os perfis cin ticos s o obtidos a partir das medi es do d bito de fot es durante o tempo de leitura de detec o A reac o d
135. s incorrectas de reagentes de detec o a serem injectados Essas listas de trabalho foram v lidas quando testadas novamente Dos 340 esp cimes testados nenhum apresentava resultados de testes iniciais inv lidos ou d bios no Sistema TIGRIS DTS As Tabelas 18 e 19 mostram as concord ncias globais em percentagem para de detec o de CT e GC para todos os resultados de testes emparelhados obtidos no Sistema TIGRIS DTS e nos Sistemas DTS em esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt respectivamente As concord ncias gerais foram de 98 2 para esp cimes de esfrega o vaginal e de 98 2 para esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Consulte as Tabelas 5b 5c 9b e 9c para obter as estimativas de desempenho do ensaio APTIMA COMBO 2 relativamente a esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt testados nos Sistemas DTS Estimativas de desempenho cl nico para o Sistema TIGRIS DTS com esp cimes de esfrega o vaginal e de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt dever o ser similares dadas as descobertas de concord ncia Estudo de concord ncia do painel cl nico de CT GC esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos e esp cimes de urina de ambos os sexos O estudo de concord ncia de painel cl nico CT GC avaliou a equival ncia entre os dois sistemas com a utiliza o de 13 pain is cl nicos CT GC preparados pela Gen Probe e contendo entre 0
136. s passos de captura de alvo amplifica o e detec o em cada execu o do ensaio Caso desejado os controlos para a lise celular e a estabiliza o de RNA em meios de transporte apropriados Solu o PreservCyt STM podem ser testados de acordo com as exig ncias das ag ncias de acredita o adequadas ou procedimentos de laborat rios individuais Esp cimes positivos conhecidos podem servir como controlos sendo preparados e testados em conjunto com esp cimes desconhecidos Os esp cimes usados como controlos de prepara o devem ser armazenados manipulados e testados de acordo com o folheto da embalagem Os controlos de prepara o de esp cimes devem ser interpretados da mesma forma descrita para esp cimes de testes de pacientes Consulte a sec o Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente Resultados de Testes de Pacientes D Resultados de Testes de Pacientes 1 Se os controlos em qualquer execu o n o gerarem os resultados esperados os resultados de testes em esp cimes de pacientes na mesma execu o n o devem ser reportados Ensaio APTIMA COMBO 2 39 502183PT Rev C Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente 2 Resultados de esfrega os esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt e de urina ver Notas abaixo a Resultados iniciais Pos para CT Positivo para CT rRNA Neg para CT Presumidamente negativo para CT rRNA Equiv para CT A a
137. s uretrais masculinos urina feminina e masculina esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Todos os esp cimes cl nicos foram testados individualmente com o ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistema TIGRIS DTS e nos Sistemas DTS na Gen Probe Estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos esfrega os endocervicais esfrega os uretrais masculinos e esp cimes de urina de ambos os sexos Pacientes masculinos e femininos que frequentavam cl nicas de DST atendimento de urg ncia sa de p blica e planeamento familiar foram registados em sete locais cl nicos geograficamente diversos com preval ncia de baixa a alta para CT e GC O estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos avaliou a concord ncia entre os dois sistemas usando esp cimes de esfrega o e de urina de 485 pacientes masculinos e 576 pacientes femininos Dos 1 991 esp cimes testados uma pequena percentagem apresentou inicialmente resultados inv lidos ou equ vocos para CT ou GC no Sistema TIGRIS DTS 20 1 0 e nos Sistemas DTS 14 0 7 Ap s repetir o teste dois 2 esp cimes cl nicos apresentaram resultados d bios para GC no Sistema TIGRIS DTS e n o foram inclu dos nos c lculos de equival ncia A percentagem de concord ncia geral e as percentagens de concord ncias positivas e negativas foram calculadas Os esp cimes com resultados discordantes entre os Sistemas DTS e o Sistema TIGRIS DTS foram testados em ensaios de amplifica o TMA
138. se imperativo que os banhos de gua sejam mantidos nos intervalos de temperatura especificados 2 A temperatura ambiente est definida entre 15 C a 30 C 3 Os passos de detec o no ensaio devem ser executados entre 18 C a 28 C E Tempo Os passos de captura de alvo amplifica o hibridiza o e selec o dependem do tempo Cumpra os tempos especificados no Procedimento de Teste dos Sistemas DTS F Utiliza o do v rtex Um procedimento de v rtex adequado importante para um desempenho bem sucedido do ensaio APTIMA COMBO 2 Quando se atinge um movimento de v rtex adequado a suspens o gira a uma velocidade que eleva a solu o para a parte superior do tubo Esta manipula o v rtex mantida por per odos de tempo espec ficos Para fazer o v rtex de reac es defina a velocidade de misturador do v rtex multitubos para a posi o mais baixa fixe o suporte e ligue a corrente el ctrica Aumente a velocidade lentamente at que o l quido suba at metade do tubo Sujeite ao v rtex durante 10 segundos durante o tempo indicado ou at a cor ficar uniforme Rode a velocidade para a defini o mais baixa antes de desligar o misturador v rtex multi tubos e remover o suporte As misturas de reac o n o devem nunca tocar os cart es de selagem G Banhos de gua 1 O n vel da gua nos banhos de gua deve ser mantido a uma profundidade de 3 8 a 5 cm 1 5 a 2 0 polegadas conforme medido a partir do tabu
139. sempenho analitico no Sistema TIGRIS DTS Estudo de Equival ncia de Especificidade Analitica Para um ensaio de amplifica o do cido nucleico a especificidade anal tica a respeito dos organismos individuais grandemente determinada mais pela qu mica do ensaio ex sequ ncias oligonucletideas do que pela plataforma Dado que os reagentes para o ensaio APTIMA COMBO 2 s o id nticos entre o Sistema TIGRIS DTS e os Sistemas DTS foram concebidas experi ncias de especificidade anal tica no Sistema TIGRIS DTS dedicadas aos isolados de culturas mais complicados Estes organismos inclu ram aqueles conhecidos por efectuarem reac o cruzada em outros ensaios de amplifica o Foram seleccionados 24 isolados de culturas do painel de organismos da Tabela 15 incluindo 3 organismos mais intimamente relacionados com CT e 17 organismos que apresentam uma rela o mais pr xima com GC Todos os organismos testados produziram resultados negativos no Sistema TIGRIS DTS Estudos de Equival ncia de Subst ncias Interferentes Sangue comummente encontrado em esp cimes urogenitais pode interferir em alguns ensaios de amplifica o Sangue total foi usado para estabelecer o n vel de interfer ncia do sangue no Sistema TIGRIS DTS e a equival ncia entre o Sistema TIGRIS DTS e os Sistemas DTS a respeito deste interferente potencial Sangue fresco foi adicionado ao esfrega o cl nico esfrega o vaginal esp cimes citol gicos em base l quida PreservCy
140. sibilidade especificidade e preditivos do ensaio APTIMA COMBO 2 para CT em compara o com o estado de infec o do paciente para cada institui o cl nica e no geral A sensibilidade e a especificidade para GC por sexo tipo de esp cime e estado sintom tico s o apresentadas na Tabela 9a A Tabela 10a mostra os valores de sensibilidade especificidade e preditivos do ensaio APTIMA COMBO 2 para GC em compara o com o estado de infec o do paciente para cada institui o cl nica e no geral As amostras que foram positivas para o ensaio APTIMA COMBO 2 e apresentaram status de paciente infectado negativo ou seja aparentes falsos positivos foram testados nos ensaios de amplifica o alternativos da GEN PROBE para CT e GC Esses ensaios amplificam as sequ ncias CT e GC que s o diferentes daquelas amplificadas pelo ensaio APTIMA COMBO 2 Os testes foram realizados esp cime a esp cime ou seja n o necessariamente em pares de esfrega os e esp cimes de urina e os resultados dos ensaios de amplifica es alternativos n o foram usados para alterar as categoriza es originais do paciente Tabelas 5a e 9a Esp cimes de esfrega o endocervical foram avaliados para o impacto de sangue em desempenho de ensaio CT e GC Das 2 454 esp cimes avaliadas para desempenho CT 234 9 5 apresentaram sangue Das 2 829 esp cimes avaliadas para desempenho GC 247 8 7 apresentaram sangue Os desempenhos de ensaio CT e GC n o foram estatisticamente
141. sintom ticos esfrega os colhidos pelo m dico de origem endocervical vaginal e uretral masculina esfrega os vaginais colhidos pela paciente e esp cimes de urina de ambos os sexos Este ensaio destina se tamb m a ser utilizado na an lise de esp cimes ginecol gicos de pacientes sintom ticas e assintom ticas Estes esp cimes cervicais colhidos nos frascos de solu o PreservCyt podem ser testados antes ou depois do processamento citol gico O teste de esp cimes j submetidos a processamento citol gico est limitado a esp cimes processados apenas com o ThinPrep 2000 System Os esp cimes de esfrega os vaginais recolhidos pela paciente s o uma op o para efectuar o rastreio de mulheres quando um exame p lvico n o for indicado de outro modo O kit de colheita de esp cimes de esfrega o vaginal n o para utiliza o domiciliar Resumo e explica o do teste As infec es por Chlamydia trachomatis CT e Neisseria gonorrhoeae GC s o duas das infec es sexualmente transmiss veis mais comuns em todo o mundo S nos Estados Unidos em 2010 estima se que tenham sido notificadas aos Centers for Disease Control 1 307 893 426 0 por 100 000 habitantes novos casos de CT e 309 341 100 8 por 100 000 habitantes novos casos de infe es de GC 5 Chlamydia uma bact ria intracelular n o m vel gram negativa e obrigat ria A esp cie CT constitu da por quinze serovares A B Ba C D E F G H J K L1
142. sos causados por contamina o da transmiss o foi feito um estudo anal tico de m ltiplos dias utilizando pain is misturados em tr s Sistemas TIGRIS DTS O estudo utilizou 20 de amostras GC de alvo alto contendo 1 0 x 10 c lulas reac o que foram aleatoriamente espa adas entre 80 de amostras negativas contendo meio de transporte de esfrega o Durante o estudo 1 372 amostras de alvo alto e 5 516 amostras negativas foram testadas nos tr s Sistemas TIGRIS DTS A m dia geral de transmiss o incluindo tanto positivos falsos como resultados d bios foi de 0 3 18 5 491 Um total de 25 amostras negativas foi verificado como inv lido e exclu do do c lculo Uma an lise separada foi executada numa divis o da popula o do estudo composta das amostras negativas que imediatamente seguiram um alvo alto positivo A m dia de transmiss o para esta divis o da popula o incluindo tanto falsos negativos como resultados d bios foi de 1 1 12 1 097 Para falsos positivos nesta divis o a m dia de transmiss o variou de 0 a 1 1 nos tr s Sistemas TIGRIS DTS Para d bios nesta divis o a m dia de transmiss o variou de 0 a 0 9 nos tr s Sistemas TIGRIS DTS Estes resultados demonstram que a contamina o de transmiss es minimizada no Sistema TIGRIS DTS Ensaio APTIMA COMBO 2 81 502183PT Rev C Desempenho analitico no Sistema PANTHER Desempenho analitico no Sistema PANTHER Estudo de concordancia do painel clinico mistu
143. sp cimes de Urina Masculina e Feminina Kit APTIMA de colheita de esfrega os vaginais e Kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA para utiliza o com amostras ginecol gicas colhidas em solu o PreservCyt Espec ficos dos sistemas DTS Kit PACE de Colheita de Esp cimes para Esp cimes da Uretra Masculina ou da Conjuntiva em conjunto com o Kit Adaptador APTIMA Kit PACE de Colheita de Esp cimes para Esp cimes Endocervicais em conjunto com o Kit Adaptador APTIMA F A amostragem de esp cimes de urina esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt n o foi concebida para substituir os exames ao colo do tero e a colheita de esp cimes endocervicais para o diagn stico de infec es urogenitais femininas Os pacientes podem ter cervicite uretrite infec es do tracto urin rio ou infec es vaginais devido a outras causas ou infec es simult neas com outros agentes G O ensaio APTIMA COMBO 2 n o tem por finalidade a avalia o de suspeita de abuso sexual ou para outras indica es m dico legais Para os pacientes que possam vir a Ensaio APTIMA COMBO 2 41 502183PT Rev C sofrer um impacto psicossocial adverso por causa de um resultado falso positivo os CDC recomendam a realiza o de novos testes 4 H Resultados fi veis dependem da colheita adequada de esp cimes Como o sistema de transporte utilizado para este ensaio n o permite a avalia o microsc pica de adequa
144. sso 7 Ensaio APTIMA COMBO 2 13 502183PT Rev C Sistemas DTS j Deite fora o colarinho de reconstitui o e o frasco Figura 1 Passo 8 180 ED 3 E q BED 5 6 7 T 2 4 l GWA ty ty Na A JS Figura 1 Processo de reconstitui o nos sistemas DTS 2 Os reagentes de amplifica o enzim tico e de sonda previamente reconstitu dos t m de alcan ar a temperatura ambiente 15 C a 30 C antes do in cio do ensaio Caso o Reagente de Sonda contenha precipitado que n o retorne solu o em temperatura ambiente aque a o a 62 C por 1 a 2 minutos Ap s este passo de aquecimento o Reagente de Sonda pode ser usado mesmo se ainda houver precipitado residual Ap s a nova suspens o misture invertendo suavemente com cuidado para n o induzir a forma o de espuma Nota Este passo de invers o deve ser executada a qualquer momento em que o precipitado seja levado solu o seja aquecendo o a 62 TC ou temperatura ambiente 3 Prepare o reagente de captura do alvo de trabalho Working Target Capture Reagent wTCR a Transfira 20 mL de TCR a um recipiente de tamanho apropriado dedicado limpo e seco b Utilizando uma micropipeta adicione 200 uL de TCR B ao TCR Misture completamente a solu o com movimentos circulares Etiquete o recipiente Registe as iniciais do operador data de prepara o e ambos n meros de lote Nota Para um n mero menor de reac es es
145. stado o equivalente a aproximadamente 36 fg esfrega o e 25 fg mL urina Relativamente a GC o n vel alvo testado o equivalente a aproximadamente 1 800 fg esfrega o e 1 250 fg mL urina Com base no tamanho do genoma e na raz o DNA RNA c lula estimada para cada organismo 5 fg equivalem a 1 IFU de CT e 250 fg equivalem a 50 c lulas de GC Ensaio APTIMA COMBO 2 78 502183PT Rev C Desempenho analitico no Sistema TIGRIS DTS Desempenho analitico no Sistema TIGRIS DTS Consulte Desempenho anal tico no Sistema PANTHER para obter o desempenho anal tico espec fico do Sistema PANTHER Estudo de Equival ncia de Sensibilidade Anal tica Foram testadas dilui es de tr s serovares de CT E F G associados a doen as urogenitais em tr s instrumentos de Sistemas TIGRIS DTS e em paralelo nos Sistemas DTS Os serovares CT foram dilu dos em meios de transporte de esfrega os e um conjunto de esp cime de urina processada As concentra es variam de 3 Unidades de Forma o de Inclus o IFU por ensaio a 0 1 IFU por ensaio que uma ordem de grandeza abaixo da sensibilidade anal tica proposta para o ensaio do IFU por ensaio 7 25 IFU esfrega o 5 IFU mL de urina A positividade percentual entre o Sistema TIGRIS DTS e os Sistemas DTS foi equivalente a uma confian a de 95 para todos os tr s serovares at ao limite de detec o anal tica indicado Dilui es abaixo do n vel tamb m tiveram resultado positivo em ambas as plataf
146. stado uma vez A tentativa de pipetar mais de uma vez do tubo pode provocar erros de processamento B Temperatura Considera se que a temperatura ambiente a compreendida entre 15 C e 30 C C P das Luvas Como em qualquer sistema de reagente o excesso de p em algumas luvas pode causar a contamina o de tubos abertos E recomendada a utiliza o de luvas sem p D Protocolo de monitoriza o de contamina o laboratorial para o Sistema PANTHER Existem muitos factores espec ficos do laborat rio que podem contribuir para a contamina o incluindo volume de testes fluxo de trabalho predom nio de doen as e v rias outras actividades laboratoriais Esses factores devem ser considerados ao estabelecer se a frequ ncia da monitoriza o de contamina o Os intervalos para a monitoriza o de contamina o devem ser estabelecidos com base nas pr ticas e procedimentos de cada laborat rio Para monitorizar a contamina o laboratorial o seguinte procedimento deve ser executado usando o Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfrega o para Esp cimes de Esfrega o Endocervical e da Uretra Masculina 1 Etiquete os tubos de transporte dos esfrega os com n meros correspondentes s reas a serem testadas 2 Remova o esfrega o de colheita de esp cimes esfrega o com haste azul e impress o verde de sua embalagem humede a o no meio para transporte de esfrega o e esfregue a rea designada com u
147. ste escolha o protocolo do ensaio APTIMA COMBO 2 e introduza o n mero de tubos controlos e esp cimes Clique em Next Seguinte para iniciar a execu o Nota O teste deve ser terminado num per odo de 2 horas a partir do final da incuba o do passo de selec o g Prepare o fluido de desactiva o misturando volumes iguais de solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 M a 1 0 M e tamp o para fluido de desactiva o APTIMA num recipiente de pl stico com tampa grande Coloque a etiqueta e escreva a data de validade no recipiente de pl stico O Fluido de Desactiva o fica est vel durante 4 semanas temperatura ambiente Elimine o Fluido de Desactiva o ap s 4 semanas ou ap s 100 amostras processadas terem sido desactivadas o que vier primeiro h Ap s remover as TTU usadas do lumin metro coloque as no recipiente de Fluido de Desactiva o Deixe que as TTU estabilizem no recipiente durante pelo menos 15 minutos antes de serem eliminadas M todos apropriados para manuseamento e descarte devem ser estabelecidos pelo director do laborat rio Notas ao procedimento A Controlos Para trabalhar adequadamente com o Software de ensaio APTIMA o controlo positivo CT controlo negativo GC devem estar na primeira posi o da primeira TTU A etiqueta deste controlo cor de rosa O texto da etiqueta CONTROL CT PCT CONTROL GC NGC O controlo positivo GC controlo negativo CT deve estar na segun
148. t p s processados e conjuntos de esp cimes de urina e ent o testado para interfer ncia potencial no ensaio na aus ncia e na presen a de alvo CT e GC O rRNA equivalente estimado de um CT IFU ensaio 5 fg ensaio e 50 GC c lulas ensaio 250 fg ensaio foi usado pois estes representam a sensibilidade anal tica do ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Os esp cimes foram testados em dois Sistemas TIGRIS DTS Todas as amostras contendo cido nucleico alvo resultaram positivas quando testadas a um n vel de 10 vol vol de sangue em esp cimes de esfrega o esp cimes de esfrega o vaginal esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt p s processada e 30 vol vol de sangue em esp cimes de urina Todas as amostras que n o continham alvo foram identificadas correctamente como negativas tanto para CT quanto para GC Estes resultados foram id nticos aqueles demonstrados para os Sistemas DTS quando misturados com as mesmas quantidades de sangue O sangue adicionado ao esfrega o esfrega o vaginal esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt e esp cimes de urina a n veis demasiado maiores do que os esperados com colheita normal de esp cimes n o interferiu com resultados no Sistema TIGRIS DTS Estudos de transmiss o com o Sistema TIGRIS DTS Para estabelecer que o Sistema TIGRIS DTS minimiza o risco de resultados positivos fal
149. te do salpique 5 Tape novamente o tubo de transporte de esfrega os bem apertado 6 Repita os Passos 2 a 5 em cada rea a amostrar com a zaragatoa 7 Teste o esfrega o utilizando o ensaio APTIMA COMBO 2 de acordo com o Procedimento de Teste dos Sistemas DTS Se os resultados forem positivos ou equ vocos para CT ou GC consulte Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente a superf cie pode estar Ensaio APTIMA COMBO 2 21 502183PT Rev C Sistemas DTS contaminada e deve ser descontaminada tratando a com solu o de hipoclorito de s dio tal como recomendado no Procedimento de Teste dos Sistemas DTS Prepara o do Equipamento Nota Em caso de suspeita de contamina o do banho de gua ele poder ser testado usando o procedimento de teste de esp cime de urina adicionando 2 0 mL da gua a um tubo de transporte de esp cimes de urina K Resolu o de Problemas 1 Valores de controlo positivo baixos podem ser causados por temperaturas incorrectas durante v rios passos no ensaio ou ao permitir que o tempo de selec o no passo de selec o dure mais do que o recomendado 2 Antecedentes altos podem ocorrer se o tempo de selec o no passo de selec o for abreviado a temperatura de selec o n o estiver correcta ou ocorrer mistura insuficiente ap s adicionar o Reagente de selec o 3 Seo controlo positivo CT controlo negativo GC for positivo ou equ voco para GC ou se o
150. ternativo 1 8 foi CT GC quando se voltaram a testar com o ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistemas DTS e foi CT no ensaio de amplifica o TMA alternativo 2 1 1 foi CT GC quando se voltaram a testar com o ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistemas DTS e foi GC no ensaio de amplifica o TMA alternativo 3 1 1 foi CT GC quando se voltaram a testar com o ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistemas DTS e foi CT no ensaio de amplifica o TMA alternativo Ensaio APTIMA COMBO 2 74 502183PT Rev C Concord ncia de esp cimes cl nicos no Sistema TIGRIS DTS Tabela 18 Estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos resultados de esfrega os vaginais Sistemas DTS Sistema TIGRIS DTS Total CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC 26 0 0 0 26 CT GC 0 44 0 2 46 CT GC 0 0 24 0 24 CT GC 0 0 1 73 74 Total 26 44 25 75 170 Concordancia percentual 100 86 8 100 100 92 0 100 96 0 79 6 99 9 97 3 90 7 99 7 N A IC de 95 Concord ncia percentual global IC de 95 98 2 94 9 99 6 denota Positivo denota Negativo N A n o aplic vel Tabela 19 Estudo de concord ncia de esp cimes cl nicos resultados de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt Sistemas DTS Sistema TIGRIS DTS Total CT GC CT GC CT GC CT GC CT GC 26 0 0 0 26 CT GC 0 44 0 1 45 CT GC 0 0 24 0 24 CT GC 0 1 1 73 75 Total 26 45 25 74 170 Concord ncia percentual 100 86 8 100
151. terson E M V Darrow J Blanding S Aarnaes and L M de La Maza 1997 Reproducibility problems with the AMPLICOR PCR Chlamydia trachomatis test J Clin Microbiol 35 957 959 26 Schachter J 1985 Chlamydiae Psittacosis Lymphogranuloma Venereum Trachoma group p 856 862 In E H Lennette et al ed Manual of Clinical Microbiology 4 ed American Society for Microbiology Washington D C 27 Schachter J and M Grossman 1981 Chlamydial infections Ann Rev Med 32 45 61 28 Schachter J 1978 Medical progress chlamydial infections third of three parts NEJM 298 540 549 29 Schachter J E C Hill E B King V R Coleman P Jones and K F Meyer 1975 Chlamydial infection in women with cervical dysplasia Am J Obstet Gynecol 123 753 757 30 Stary A E Schuh M Kerschbaumer B Gotz and H Lee 1998 Performance of transcription mediated amplification and Ligase chain reaction assays for detection of chlamydial infection in urogenital samples obtained by invasive and noninvasive methods J Clin Microbiol 36 2666 2670 31 Toye B W Woods M Bobrowska and K Ramotar 1998 Inhibition of PCR in genital and urine specimens submitted for Chlamydia trachomatis testing J Clin Microbiol 36 2356 2358 32 Verkooyen R P A Luijendijk W M Huisman W H F Goessens J A J W Kluytmans J H Rijsoort Vos and H A Verbrugh 1996 Detection of PCR inhibitors in cervical specimens by using the
152. tes do in cio do ensaio 2 Se o reagente de sonda reconstitu do contiver um precipitado que n o volte a solubilizar se temperatura ambiente aque a o frasco tapado a uma temperatura n o superior a 62 C durante 1 a 2 minutos Ap s este passo de aquecimento o Reagente de Sonda pode ser usado mesmo se ainda houver precipitado residual Misture o Reagente de Sonda por invers o tomando o cuidado de n o induzir espuma antes de carreg lo no sistema 3 Misture bem todos os reagentes invertendo os suavemente antes de os carregar no sistema Evite formar espuma durante a invers o dos reagentes Ensaio APTIMA COMBO 2 34 502183PT Rev C Sistema PANTHER 4 N o encha demasiado os frascos de reagentes O Sistema PANTHER reconhece e rejeita frascos que estejam demasiadamente cheios D Manuseamento de esp cimes 1 Deixe que os esp cimes e controlos alcancem a temperatura ambiente antes do processamento 2 N o agite os esp cimes no vortex 3 Confirme visualmente se todos os tubos de esp cimes cumprem um dos seguintes crit rios a Presen a de uma nica zaragatoa de colheita azul APTIMA num tubo de transporte de esfrega os unissexo b Presen a de uma nica zaragatoa de colheita cor de rosa APTIMA num tubo de transporte de esfrega os vaginais c Volume final de urina entre as linhas de enchimento pretas dos tubos de transporte de esp cimes de urina d Aus ncia de zaragatoa no tubo de transporte de esp cimes
153. to E Prepara o do sistema 1 Defina o sistema de acordo com as instru es do PANTHER System Operator s Manual Manual de Instru es do Sistema PANTHER e das Notas ao procedimento Certifique se de que s o utilizados suportes de reagente e adaptadores de TCR de dimens o adequada 2 Carregue as amostras Ensaio APTIMA COMBO 2 35 502183PT Rev C Sistema PANTHER Notas ao procedimento A Controlos 1 Para funcionar correctamente com o software do ensaio APTIMA no Sistema PANTHER necess rio um par de controlos Os tubos de controlo positivo CT controlo negativo GC e de controlo positivo GC controlo negativo CT podem ser carregados em qualquer posi o do suporte ou em qualquer calha da zona de amostras do Sistema PANTHER A pipetagem de esp cimes do paciente come a quando se cumpre uma das duas condi es seguintes a Est a ser actualmente processado pelo sistema um par de controlos b S o registados no sistema resultados v lidos para os controlos 2 Depois de os tubos de controlo terem sido pipetados e estarem a ser processados para um kit de reagente espec fico os esp cimes dos pacientes podem ser testados com o kit associado durante at 24 horas excepto se a Os resultados dos controlos forem inv lidos b O kit de reagente do ensaio associado for retirado do sistema c O kit de reagente do ensaio associado tiver excedido os limites de estabilidade 3 Cada tubo de controlo APTIMA pode ser te
154. transporte de esfrega os um volume final de urina situado entre as linhas pretas de enchimento num tubo de transporte de esp cimes de urina ou a aus ncia de qualquer zaragatoa num tubo de transfer ncia de esp cimes APTIMA para esp cimes citol gicos l quidos Os Controlos Positivos devem produzir os seguintes resultados de testes Controlo Total de RLU x1 000 Resultado da CT Resultado da GC Controlo positivo CT A Controlo negativo GC 2 100 e lt 3 000 Positivo Negativo Controlo positvento gt 150 e lt 3 000 Negativo Positivo Controlo negativo CT 1 O Software de ensaio APTIMA avalia os controlos de acordo com os crit rios acima e relatar o Status de Execu o como APROVADO PASS se os crit rios do controlo de execu o forem atendidos e REPROVADO FAIL se os crit rios do controlo de execu o n o forem atendidos 2 Seo Status de Execu o for REPROVADO FAIL todos os resultados de testes da mesma execu o ser o inv lidos e n o dever o ser relatados Ensaio APTIMA COMBO 2 38 502183PT Rev C Interpreta o do teste controlo de qualidade resultados do paciente 3 Cada laborat rio deve implementar procedimentos de controlo adequados para atender aos requisitos dos regulamentos CLIA sec o 493 1256 Nota Consulte a sec o Resolu o de Problemas ou contacte a assist ncia t cnica da Gen Probe para aux lio com controlos fora dos intervalos nos Sistemas DTS 4 Um par me
155. tro do Sistema TIGRIS DTS permite que cada local especifique uma frequ ncia de suporte de controlo pela qual conjuntos adicionais de controlos podem ser colocados em intervalos definidos dentro da lista de trabalho Caso este par metro seja especificado o Sistema TIGRIS DTS exigir que um conjunto de controlos seja aplicado ap s o n mero definido de esp cimes no suporte de controlo O Sistema TIGRIS DTS avalia automaticamente cada controlo na lista de trabalho de acordo com os crit rios acima e invalidar todos os esp cimes no s suporte s de controlo s afectados caso os crit rios de controlos n o seja atendido Consulte o TIGRIS DTS System Operator s Manual Manual do Operador do Sistema TIGRIS DTS para obter mais detalhes 5 Controlos negativos podem n o ser efectivos na monitoriza o de transmiss o aleat ria Consulte as Desempenho anal tico no Sistema TIGRIS DTS para obter os resultados de um estudo de transmiss o anal tica de alto alvo que se realizou para demonstrar o controlo da transmiss o no Sistema TIGRIS DTS Consulte as Desempenho anal tico no Sistema PANTHER para obter os resultados de um estudo de transmiss o anal tica de alto alvo que se realizou para demonstrar o controlo da transmiss o no Sistema PANTHER C Controlo de Prepara o de Esp cime Opcional O controlo positivo CT controlo negativo GC e o controlo positivo GC controlo negativo CT fornecidos no kit agem como controlos para o
156. tubos Incube o suporte num banho de gua a 62 C 1 C por 20 5 minutos Remova o suporte do banho de gua e incube a temperatura ambiente por 5 1 minutos Ensaio APTIMA COMBO 2 17 502183PT Rev C Sistemas DTS 2 Selec o a Utilizando a pipeta de repeti o adicione 250 uL do reagente de selec o a cada tubo de reac o Todas as reac es dever o agora ter a cor vermelha b Cubra os tubos com um cart o de selagem leve o suporte ao v rtex durante 10 segundos ou at a cor ficar uniforme e fa a a incuba o do suporte num banho de agua a 62 C 1 C durante 10 1 minutos c Retire o suporte do banho de gua 3 Detec o A detec o deve ser executada entre 18 C a 28 C a Incube o suporte entre 18 C a 28 C por 15 3 minutos Nota Este intervalo de temperatura cr tico para o desempenho do ensaio b Para utiliza o do LEADER HC Lumin metro e o software de ensaio APTIMA consulte o LEADER HC Luminometer Operator s Manual Manual do Operador LEADER HC Lumin metro e o APTIMA Assay Software Operator s Manual Manual do Operador do Software de Ensaio APTIMA c Assegure se de que existem volumes suficientes de Auto Detect 1 e 2 para completar os testes d Prepare o LEADER HC Lumin metro colocando uma TTU vazia na posi o 1 da cassete e execute o protocolo Wash lavagem e Carregue as TTU no lumin metro f Inicie a sess o no computador Clique em New Run Novo te
157. uando as depois com gua N o deixe secar a solu o de hipoclorito de s dio Cubra a superf cie da bancada onde os reagentes e as amostras ser o preparados com capas absorventes para bancadas de laborat rios com forro pl stico B Reconstitui o dos reagentes Prepara o de um novo kit Nota A reconstitui o dos reagentes deve ser realizada antes de come ar qualquer trabalho no Sistema TIGRIS DTS 1 Para reconstituir os Reagentes de Amplifica o Enzim tico e de Sonda combine os frascos do reagente liofilizado com a solu o de reconstitui o Se estiverem refrigeradas deixe que as solu es de reconstitui o atinjam a temperatura ambiente antes de utiliz las a Emparelhe cada solu o de reconstitui o com seu reagente liofilizado Certifique se de que a solu o de reconstitui o e o reagente liofilizado tenham cores de etiqueta correspondentes antes de aplicar o colarinho de reconstitui o b Verifique os n meros do lote na Ficha de C digo de Barras do Lote Principal para garantir que os reagentes adequados sejam emparelhados c Abra o frasco de reagente liofilizado e insira com firmeza a extremidade ranhurada do colarinho de reconstitui o na abertura do frasco Figura 2 Passo 1 d Abra o frasco da solu o de reconstitui o correspondente e deposite a tampa sobre uma superf cie de trabalho limpa e coberta e Enquanto segura o frasco da solu o de reconstitui o na bancada insira fi
158. vel a um n vel de detec o de 50 c lulas por ensaio entre o Sistema TIGRIS DTS e os Sistemas DTS Um painel de sensibilidade num conjunto de esp cime vaginal e um painel de sensibilidade em conjunto de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt p s processada foram preparados em GC 250 fg rRNA e testaram 60 replicados no Sistema TIGRIS DTS A percentagem de positividade IC de 95 no Sistema TIGRIS DTS para esfrega os vaginais foi de 100 95 1 100 e a de esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt p s processados foi de 100 95 1 100 Estudo de painel cl nico de CT GC misturado com rRNA esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt O estudo cl nico do painel de CT GC misturado com rRNAavaliou a concord ncia entre os dois sistemas com a utiliza o de dois pain is cl nicos misturados de CT GC preparados pela Gen Probe com 0 a 5 000 fg rRNA ensaio de CT e ou 0 a 250 000 fg rRNA ensaio de GC Os pain is cl nicos de CT GC foram criados a partir de esfrega os vaginais e esp cimes citol gicos em base l quida PreservCyt colhidos de 309 mulheres cujos Ensaio APTIMA COMBO 2 79 502183PT Rev C Desempenho analitico no Sistema TIGRIS DTS esp cimes apresentavam resultados negativos no ensaio APTIMA COMBO 2 nos Sistemas DTS quando testados na Gen Probe Os esp cimes negativos foram agrupados por tipo de esp cime misturados ou nao com rRNA CT e ou GC e aliquotados como repli
159. vo CT 5x1 7 mL NCT cido nucleico de GC n o infeccioso em solu o tamponada contendo lt 5 de detergente Cada amostra de 400 uL cont m rRNA que se estima ser equivalente a 50 c lulas de GC 250 fg ensaio Os equivalentes rRNA foram calculados com base no tamanho do genoma e a taxa estimada m dia c lula DNA RNA de cada organismo Materiais necess rios mas dispon veis separadamente Nota Excepto indica o em contr rio as refer ncias de cat logo dos materiais disponibilizados pela Gen Probe s o mencionadas Ref Cat 303095 303014 1 000 testes Sistema PANTHER Kit de fluidos do ensaio APTIMA solu o de lavagem APTIMA tamp o para o fluido de desactiva o APTIMA e reagente a leo APTIMA Kit de auto detec o APTIMA Unidades multitubos Multi tube units MTU Kit de sacos de res duos PANTHER 303013 1 000 testes 104772 02 902731 Ensaio APTIMA COMBO 2 31 502183PT Rev C Sistema PANTHER Tampa do recipiente de residuos do PANTHER 902714 Ou kit de teste PANTHER 303096 5 000 testes cont m MTU sacos de residuos tampas de recipientes de residuos fluidos do ensaio e l quidos Auto Detect Pontas 1 000 uL condutoras com sensores de l quido 10612513 Tecan Kit de transfer ncia de esp cimes APTIMA 301154C para utiliza o com esp cimes em solu o PreservCyt Kit APTIMA de colheita de esfrega os vaginais 301162 Kit Unissexo APTIMA de Colheita de Esp cimes de Esfreg
160. vos intrateste entre testes e entre institui es s o indicados na Tabela 14a Para o ltimo estudo de precis o a reprodutibilidade foi estabelecida com um painel de 12 membros gerado pela mistura de PreservCyt Solution com de 0 a 2 000 fg ensaio de CT e de 0 a 5 000 fg ensaio de GC rRNA e aliquotando 1 0 mL no tubo de colheita do Kit APTIMA de Transfer ncia de Esp cimes Dois 2 operadores em cada um dos tr s locais fizeram uma execu o por dia em tr s dias totalizando tr s execu es v lidas por operador Os testes foram feitos utilizando um lote de kit de ensaio Os resultados deste estudo de precis o s o indicados na Tabela 14b Para ambos os estudos a reprodutibilidade foi estabelecida misturando o meio de transporte apropriado STM Solu o PreservCyt com rRNA A reprodutibilidade ao testar esfrega o urina ou espcimes citol gicos em base l quida PreservCyt contendo organismo alvo n o foi determinada Ensaio APTIMA COMBO 2 66 502183PT Rev C Desempenho clinico nos Sistemas DTS Tabela 14a Meio de Transporte de Esfrega o M dia de Intrateste Entre Testes Entre Locais Membro do Painel N RLU x1 000 SD RLU CV SD RLU CV SD RLU CV CT Esfrega o 54 1 055 76 588 7 3 83 711 7 9 150 332 14 2 Esfrega o 54 2 338 93 449 4 0 90 317 3 9 142 898 6 1 High Duplo Urina Dupla 54 2 281 91 487 4 0 106 715 47 152 747 67 Esfrega o GC 54 1 265 30 561 2 4 55 642 44 34
161. zada na malga de prepara o Aspire toda a gua com o distribuidor de aspira o d Ejecte as pontas no TTC original e Deixe a bomba de v cuo ligada at que o distribuidor esteja seco para evitar o refluxo f Descontamine as superf cies do distribuidor de aspira o da forma descrita na Unidade TCS 3 Recipiente de res duos TCS Quando o frasco de res duos estiver 25 cheio ou semanalmente remova o frasco de res duos do Sistema de Captura de Alvo a Desligue a bomba de v cuo e permita que a press o do v cuo seja equalizada b Libere os encaixes de desconex o r pida entre o frasco de res duos e o frasco de recolha de l quido e o frasco de res duos e o distribuidor de aspira o Remova o frasco de res duos do compartimento de apreens o de v cuo Retire a tampa e adicione cuidadosamente 400 mL de solu o de hipoclorito de s dio 5 a 7 0 7 M a 1 0 M ao frasco ou 1 L se estiver a utilizar um frasco de res duos de 10 L Nota Isto pode ser feito numa cobertura de vapores para evitar o escape de vapores no laborat rio e Tape o frasco de res duos e agite gentilmente o conte do at que se misturem completamente f Deixe o frasco de res duos repousar por 15 minutos e ent o elimine o conte do res duos g Enxag e o frasco de res duos com gua para remover qualquer res duo restante h Tape o frasco de res duos vazio e coloque o no compartimento de apreens o de v cuo Apliqu

Ensaio APTIMA COMBO 2

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