Disco de Reagente do Painel Bioquímico Plus
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1. o O Analisador Qu mico Piccolo xpress calibrado pelo fabricante antes do seu envio O c digo de barras impresso no anel de c digo de barras indica ao analisador os dados de calibra o espec ficos do disco Consulte o Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress Controlo de qualidade Consulte no Manual do Operador do Analisador Piccolo xpress uma descri o detalhada sobre o processamento registo interpreta o e representa o gr fica dos resultados de controlo 9 Resultados O Analisador Qu mico Piccolo xpress calcula e imprime automaticamente as concentra es de analito na amostra Os detalhes dos c lculos de reac o de ponto final e cin tica encontram se no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress A interpreta o dos resultados descrita no Manual do Operador Os resultados s o impressos em fitas de resultados fornecidas pela Abaxis As fitas de resultados t m um verso autocolante para facilitar a coloca o nos ficheiros dos doentes P gina 8 de 20 10 Limita es do procedimento As limita es gerais sobre o procedimento s o descritas no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress e O nico anticoagulante recomendado para utiliza o com o Sistema de Analisador Qu mico Piccolo xpress a heparina de l tio N o utilize heparina de s dio A Abaxis realizou estudos que demonstram que o EDTA fluoreto oxalato e qualquer anticoagulante que contenha i es de a2. o medida bicromaticamente a 405 nm e 500 nm A altera o da absorv ncia devido forma o de CNP directamente proporcional actividade da o amilase na amostra P gina 2 de 20 Aspartato aminotransferase AST O teste de aspartato aminotransferase AST baseia se no m todo da taxa de Karmen conforme modificado por Bergmeyer O actual m todo de refer ncia da Federa o Internacional de Qu mica Clinica IFCC utiliza a t cnica de Karmen Bergmeyer de acoplamento da malato desidrogenase MDH e dinucle tido de nicotinamida NADH reduzido na detec o de AST no soro A lactato desidrogenase LDH adicionada reac o para reduzir a interfer ncia provocada pelo piruvato end geno A AST catalisa a reac o do L aspartato e do a cetoglutarato em oxaloacetato e L glutamato O oxaloacetato convertido em malato e o NADH oxidado em NAD pelo catalisador MDH AST L aspartato a cetoglutarato Oxaloacetato L glutamato MDH Oxaloacetato NADH HX Malato NAD A taxa de varia o da absorvancia a 340 nm 405 nm provocada pela convers o de NADH em NAD directamente proporcional quantidade de AST presente na amostra Prote na C reactiva CRP Os ensaios originais para a quantifica o de CRP destinavam se principalmente investiga o e baseavam se na metodologia ELISA Mais recentemente foram utilizados m todos imunonefelom tricos melhorados c
3. o de ponto final medida bicromaticamente a 500 nm e 600 nm 4 Princ pio de funcionamento Consulte no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress os princ pios e limita es do procedimento 5 Descri o dos reagentes Reagentes Cada Disco de Reagente do Painel Bioquimico Plus Piccolo cont m esferas de reagente secas espec ficas do teste descritas abaixo inclu do em cada disco um reagente de branco de amostra seca composto por tamp o surfactantes excipientes e conservantes para utiliza o no c lculo de concentra es de alanina aminotransferase ALT albumina ALB fosfatase alcalina ALP amilase AMY aspartato aminotransferase AST prote na c reactiva CRP c lcio CA gama glutamiltransferase GGT glicose GLU prote na total TP azoto ureico no sangue BUN e cido rico UA inclu do no disco para c lculo das concentra es de creatinina CRE um branco de amostra dedicado Cada disco cont m ainda um diluente composto por surfactantes e conservantes Tabela 1 Reagentes Componente Quantidade Disco Adenosina 5 trifosfato 12 ug L alanina 874 ug 4 aminoantipirina 27 ug Cloridrato de 4 aminoantipirina 6 ug CRP anti humana cabra 0 3 ug Latex revestido de CRP anti humana ratinho 67 ug Arsenazo III sal s dico 3 ug Ascorbato oxidase Cucurbita spp 0 4 U cido L asp rtico 426 ug P rpura de bromocresol 2 ug 2 cloro 4 nitrofenil a D maltotri sido CNPG3 36 ug Creatin
4. respectivamente impressa na fita de resultado em vez do resultado e Para o m todo de CRP os n veis de subst ncias end genas que activam as supress es HEM LIP ou ICT s o de 750 mg dL para hemoglobina 750 mg dL para lip mia e 35 mg dL para bilirrubina e Para obter mais informa es sobre os n veis m ximos de subst ncias end genas contacte a Assist ncia T cnica da Abaxis Efeitos de subst ncias ex genas e terap uticas Foram seleccionadas subst ncias ex genas e terap uticas como potencialmente interferentes para os m todos de teste da Abaxis com base em recomenda es de Young A interfer ncia significativa define se como um desvio no resultado superior a 10 para uma amostra de intervalo normal Os pools de soro humano foram suplementados com concentra es conhecidas dos f rmacos ou qu micos e posteriormente analisados Consulte a Tabela 2 para obter uma lista de subst ncias ex genas e terap uticas avaliadas Consulte a TABELA 3 para obter uma lista de analitos nos quais foi observada interfer ncia P gina 9 de 20 Tabela 2 Subst ncias ex genas e terap uticas avaliadas Subst ncia potencialmente interferente Concentra o mais elevada testada mg dL a menos que especificado de outro modo Acetaminofeno 100 Acetoacetato 102 cido acetilsalic lico 50 Ampicilina 30 cido asc rbico excepto CRP 20 cido asc rbico CRP apenas 3 Cafe na 10 Cloreto de c lcio excepto CRP 20 C
5. aminotransferase AST Doen as hep ticas incluindo hepatite e icter cia viral choque Prote na C reactiva CRP Infec o les es em tecidos e dist rbios inflamat rios C lcio Doen as da paratir ide doen as sseas e doen as renais cr nicas tetania Creatinina Doen a renal e monitoriza o de di lise renal Gama glutamiltransferase GGT Doen as hep ticas incluindo cirrose alco lica e tumores hep ticos prim rios e secund rios Glicose Dist rbios do metabolismo dos hidratos de carbono incluindo diabetes mellitus e hipoglicemia em jovens e adultos Prote na total Doen as hep ticas renais da medula ssea dist rbios metab licos e nutricionais Azoto ureico no sangue BUN Doen as renais e metab licas cido rico Dist rbios renais e metab licos incluindo insufici ncia renal e gota Tal como acontece com qualquer procedimento de teste de diagn stico todos os outros procedimentos de teste incluindo o estado cl nico do doente devem ser considerados antes do diagn stico final 3 Princ pio do procedimento Alanina aminotransferase ALT A alanina aminotransferase ALT tem sido medida segundo tr s m todos Dois destes m todos a t cnica colorim trica de acoplamento de dinitrofenilhidrazina e o ensaio enzim tico fluorescente raramente s o utilizados A t cnica mais comum para determinar as concentra es de ALT no soro consiste no m todo enzim tico baseado na obra d
6. amostra e As amostras de sangue total obtidas por pun o venosa devem apresentar se homog neas antes de serem transferidas para o disco de reagente Inverta suavemente o tubo de colheita v rias vezes imediatamente antes de transferir a amostra N o agite o tubo de colheita a agita o pode provocar hem lise e As amostras de sangue total devem ser obtidas apenas por pun o venosa e n o a partir de sangue capilar e As amostras de sangue total por pun o venosa devem ser processadas no prazo de 60 minutos ap s a colheita As concentra es de glicose s o afectadas pelo tempo decorrido desde a ltima refei o do doente e pelo tipo de amostra colhida Para determinar os resultados de glicose com precis o as amostras devem ser colhidas de um doente que tenha estado em jejum durante pelo menos 12 horas A concentra o de glicose diminui aproximadamente 5 12 mg dL no espa o de 1 hora em amostras n o centrifugadas armazenadas temperatura ambiente e Para as amostras de sangue total ou de plasma utilize apenas tubos de colheita de amostras evacuados com heparina de l tio tampa verde Para as amostras de soro utilize tubos de colheita de amostras evacuados sem aditivos tampa vermelha ou tubos para separa o de soro tampa vermelha preta e A refrigera o de amostras de sangue total pode provocar altera es significativas nas concentra es de aspartato aminotransferase creatinina e glicose A amostra pode se
7. e de soro de doentes em dois locais As amostras de sangue total foram analisadas pelo Analisador Qu mico de Sangue Piccolo nos locais de colheita e as amostras de soro foram analisadas por m todos comparativos Em dois casos foram utilizados os resultados dos testes de amostras de soro pelo Analisador Piccolo que foram apropriadamente indicados na tabela Em alguns casos foram utilizadas amostras com elevada e reduzida suplementa o para cobrir o intervalo din mico Para CRP foram colhidas amostras de sangue de doentes num local As amostras de plasma heparinizado com l tio foram testadas no Analisador Qu mico Piccolo xpress e por um m todo comparativo As amostras foram seleccionadas de modo a cumprir os valores de distribui o da directriz CLSI EP9 A2 As amostras foram processadas isoladamente pela Abaxis e por m todos comparativos no mesmo dia A Tabela 7 apresenta estat sticas de correla o representativas Tabela 7 Correla o do Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou do Analisador Qu mico Piccolo xpress para CRP com m todo s comparativo s Coeficiente Intervalo p de da M todo J Declive Intercep o EPE N comparativo correla o amostra Alanina 0 981 0 905 1 3 3 21 86 10 174 Paramax Aminotransferase U L 0 985 0 946 2 5 2 84 67 10 174 Technicon 26 0 854 1 001 0 3 0 22 1 1 1 5 3 Paramax Albumina e a 0 896 0 877 0 1 021 10 15 50 Beckman 0 Fosfatase 0 988 0 970 5 9 3 97 99 27 368 Paramax alcalina U
8. glicose 6 fosfato desidrogenase G 6 PDH catalisa a reac o de G 6 P em 6 fosfogliconato e a redu o de nicotinamida adenina dinucle tido NAD em NADH P gina 4 de 20 HK Glicose ATP gt _ G 6 P ADP G 6 PDH G 6 P NAD __ 6 fosfogliconato NADH H A absorvancia medida bicromaticamente a 340 nm e 850 nm A produ o de NADH directamente proporcional quantidade de glicose presente na amostra Prote na total TP O m todo de prote na total uma modifica o da reac o do biureto conhecida pela sua precis o exactid o e especificidade Originalmente desenvolvida por Riegler e modificada por Weichselbaum Doumas et al propuseram uma reac o do biureto como candidato a m todo de refer ncia para a prote na total Na reac o do biureto a solu o proteica tratada com i es c pricos Cu II num meio alcalino forte S o adicionados tartarato de pot ssio e s dio e iodeto de pot ssio para evitar a precipita o de hidr xido de cobre e a auto redu o de cobre respectivamente Os i es Cu II reagem com as liga es pept dicas entre os tomos de oxig nio no carbonilo e de nitrog nio no amido para formar um complexo Cu proteina colorido OH Proteina total Cu II _ Complexo Cu proteina A quantidade de prote na total presente na amostra directamente proporcional a absorvanc
9. grande afinidade relativamente ao c lcio e n o depende da temperatura como a CPC 34 35 36 O c lcio na amostra do doente liga se ao arsenazo III para formar um complexo de c lcio corante Ca Arsenazo III Complexo de Ca Arsenazo III A reac o de ponto final monitorizada a 405 nm 467 nm e 600 nm A quantidade de c lcio total na amostra proporcional absorv ncia Creatinina CRE O m todo de Jaffe introduzido pela primeira vez em 1886 continua a ser um m todo frequentemente utilizado na determina o dos n veis de creatinina no sangue O m todo de refer ncia actual combina a utiliza o de terra de Fuller floridina com a t cnica de Jaffe para aumentar a especificidade da reac o Foram desenvolvidos m todos enzim ticos mais espec ficos para creatinina do que as v rias modifica es da t cnica de Jaffe Os m todos que utilizam a enzima creatinina amidohidrolase eliminam o problema da interfer ncia de i es de am nio detectada nas t cnicas que utilizam a creatinina iminohidrolase Nas reac es enzim ticas acopladas a creatinina amidohidrolase hidrolisa a creatinina em creatina Uma segunda enzima a creatina amidinohidrolase catalisa a forma o de sarcosina a partir da creatina A oxidase de sarcosina provoca a oxida o de sarcosina em glicina formalde do e per xido de hidrog nio H202 Num acabamento de Trinder a peroxidase catalisa a reac o entre pe
10. vez de um resultado Sempre que for apresentado numa fita impressa recolha uma nova amostra e reprocesse o teste Se os resultados da segunda amostra forem novamente suprimidos contacte o Servi o de Apoio ao Cliente da Abaxis Sensibilidade limites de detec o O limite inferior de detec o do intervalo report vel din mico para cada analito de alanina aminotransferase 5 U L albumina 1 g dL 10 g L fosfatase alcalina 5 U L amilase 5 U L aspartato aminotransferase 5 U L prote na c reactiva 5 0 mg L c lcio 4 0 mg dL 1 0 mmol L creatinina 0 2 mg dL 18 pmol L gama glutamiltransferase 5 U L glicose 10 mg dL 0 6 mmol L prote na total 2 g dL 20 g L azoto ureico no sangue 2 0 mg dL 0 7 mmol L e cido rico 1 mg dL 100 umol L Precis o Foram realizados estudos de precis o utilizando as directrizes CLSI EP5 T2 excepto CRP e EP5 A com modifica es baseadas na directriz CLSI EP18 A para dispositivos de utiliza o unit ria Os resultados de precis o intra ensaio e total foram determinados utilizando dois n veis de materiais de controlo comercialmente dispon veis Os estudos utilizaram v rios instrumentos Os testes de ALT AST albumina ALP amilase c lcio creatinina GGT glicose prote na total BUN e cido rico foram realizados em dois locais com dois lotes de discos de reagente durante 20 dias Os testes de prote na c reactiva foram realizados com um lote de discos de reagente dura
11. 214 476 pmol L A qu mica de cada analito linear no intervalo din mico abaixo indicado quando o Analisador Qu mico Piccolo xpress utilizado de acordo com o procedimento recomendado consulte o Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress P gina 12 de 20 Tabela 5 Intervalos din micos do Analisador Piccolo Analito Unidades Unidades SI comuns Alanina aminotransferase ALT 5 2000 U L 5 2000 U L Albumina ALB 1 6 5 g dL 10 65 g L Fosfatase alcalina ALP 5 2400 U L 5 2400 U L Amilase AMY 5 4000 U L 5 4000 U L Aspartato aminotransferase AST 5 2000 U L 5 2000 U L Prote na c reactiva 5 0 200 0 mg L 5 0 200 0 mg L C lcio 4 0 16 0 mg dL 1 0 4 0 mmol L Creatinina 0 2 20 mg dL 18 1768 pmol L Gama glutamiltransferase GGT 5 3000 U L 5 3000 U L Glicose 10 700 mg dL 0 6 38 9 mmol L Prote na total TP 2 14 g dL 20 140 g L Azoto ureico no sangue BUN 2 180 mg dL 0 7 64 3 mmol L cido rico 1 15 mg dL 100 900 pmol L Se a concentra o de analitos se situar acima do intervalo de medi o intervalo din mico mas for inferior ao intervalo do sistema a fita impressa ir indicar um sinal gt no limite superior e um asterisco depois do n mero por exemplo ALT gt 2000 U L Se for inferior ao intervalo din mico ser impresso um lt com um asterisco por exemplo ALT lt 5 U L Para valores que se situem largamente fora do intervalo de medi o intervalo do sistema ser impresso em
12. 3 101 108 Louderback A Mealey EH Taylor NA A new dye binding technic using bromcresol purple for determination of albumin in serum Clin Chem 1968 14 793 794 Abstract Pinnell AE Northam BE New automated dye binding method for serum albumin determination with bromcresol purple Clin Chem 1978 24 80 86 King EJ Armstrong AR A convenient method for determining serum and bile phosphatase activity Can Med Assoc J 1934 31 376 381 Kind PRN King EJ Estimation of plasma phosphatase by determination of hydrolysed phenol with amino antipyrine J Clin Pathol 1954 7 322 326 Ohmori Y Uber die Phosphomonoesterase Enzymologia 1937 4 217 231 Petitclerc C et al Mechanism of action of Mg and Zn on rat placental alkaline phosphatase I Studies on the soluble Zn and Mg alkaline phosphatase Can J Biochem 1975 53 1089 1100 Tietz NW et al A reference method for measurement of alkaline phosphatase activity in human serum Clin Chem 1983 29 751 761 Bowers GN Jr et al IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part I General considerations concerning the determination of the catalytic concentration of an enzyme in the blood serum or plasma of man Clin Chim Acta 1979 98 163F 174F McNeely MDD Amylase In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 906 909 Zinterhofer L et al Nephelometric d
13. 39 74 75 76 77 Rehak NN Chiang BT Storage of whole blood effect of temperature on the measured concentration of analytes in serum 79 80 81 82 83 84 85 86 Bibliografia continua o Sampson EJ et al A coupled enzyme equilibrium method for the measuring urea in serum optimization and evaluation of the AACC study group on Urea Candidate reference method Clin Chem 1980 26 816 826 Folin O Denis W A new colorimetric method for the determination of uric acid in blood J Biol Chem 1912 1913 13 469 475 Brown H The determination of uric acid in human blood J Biol Chem 1945 158 601 608 Fossati P Prencipe L Berti G Use of 3 5 dichloro 2 hydroxy benzenesulfonic acid 4 aminophenazone chromogenic system in direct enzymic assay of uric acid in serum and urine Clin Chem 1980 26 227 231 Clinical and Laboratory Standards Institute Physician s office laboratory guidelines tentative guideline 2nd ed CLSI Document POL1 T2 Wayne PA CLSI 1992 Clinical and Laboratory Standards Institute Procedures for the handling and processing of blood specimens tentative standard CLSI Document H18 A2 Wayne PA CLSI 1999 Overfield CV et al Glycolysis a re evaluation of the effect on blood glucose Clin Chim Acta 1972 39 35 40 Clin Chem 1988 34 2111 4 Clinical and Laboratory Standards Institute Interference testing in clinical chemistry proposed guideline CLSI Document EP7 A Wayne PA CL
14. 405 nm deve se convers o de NADH em NAD e directamente proporcional quantidade de ureia presente na amostra cido rico UA Os primeiros m todos quantitativos para determinar as concentra es de cido rico no sangue basearam se na redu o de cido fosfot ngstico em azul de tungst nio em solu es alcalinas de cido trico Foi desenvolvido um teste de cido rico com maior especificidade utilizando a enzima uricase espec fica para o cido rico Desde ent o este m todo passou a ser a t cnica qu mica cl nica padr o para o cido rico O m todo de uricase acoplado atrav s de um acabamento de peroxidase de Trinder Neste m todo a uricase catalisa a oxida o de cido rico em alantoina e per xido de hidrog nio A peroxidase catalisa a reac o entre o per xido de hidrog nio H 0 4 aminoantipirina 4 A AP e o cido 3 5 dicloro 2 hidroxibenzenosulf nico DHBSA num corante quinoneimina vermelho S o adicionados ferricianeto de s dio e ascorbato oxidase mistura da reac o para minimizar a potencial interfer ncia da bilirrubina e do cido asc rbico P gina 5 de 20 Uricase Acido rico O H 0 Alanto na CO H O Peroxidase H0 4 AAP DHBSA _ Corante quinoneimina H O A quantidade de cido rico na amostra directamente proporcional absorvancia do corante quinoneimina A absorvancia final desta reac
15. Disco de Reagente do Painel Bioqu mico Plus Piccolo Ce Apenas para utiliza o em diagn stico in vitro e profissional Servi o de Apoio ao Cliente e de Assist ncia T cnica 800 822 2947 Julho de 2011 PN 400 7182 Rev C 2010 Abaxis Inc Union City CA 94587 1 Aplica o O Disco de Reagente do Painel Bioqu mico Plus Piccolo utilizado com o Analisador Qu mico de Sangue Piccolo ou o Analisador Qu mico Piccolo xpress destina se a ser utilizado para a determina o quantitativa in vitro de alanina aminotransferase ALT albumina fosfatase alcalina ALP amilase aspartato aminotransferase AST proteina c reactiva CRP creatinina gama glutamiltransferase GGT glicose proteina total azoto ureico no sangue BUN e cido rico em sangue total heparinizado plasma heparinizado ou soro em laborat rios cl nicos ou locais de presta o de cuidados O m todo CRP da Abaxis n o se destina medi o de CRP de elevada sensibilidade 2 Resumo e explica o dos testes O Disco de Reagente do Painel Bioqu mico Plus Piccolo e o Analisador Qu mico Piccolo xpress incluem um sistema de diagn stico in vitro que ajuda o m dico no diagn stico das seguintes patologias Alanina aminotransferase ALT Doen as hep ticas incluindo hepatite viral e cirrose Albumina Doen as hep ticas e renais Fosfatase alcalina ALP Doen as hep ticas sseas da paratir ide e intestinais Amilase Pancreatite Aspartato
16. L 0 929 1 136 17 6 4 79 80 26 150 Technicon Amilase U L 0 979 0 692 4 7 3 11 99 11 92 Paramax 0 963 1 065 4 1 347 80 19 118 Technicon Aspartato 0 93 0 87 53 2 76 A 13 111 Paramax aminotransferase U L 1 0 0 97 3 0 1 90 46 13 252 DAX Proteina c reactiva mg L 0 998 0 990 0 4 4 60 1 5 4 198 6 Beckman Pagina 16 de 20 Tabela 7 Correla o continua o Coeficiente Intervalo 3 de da M todo x Declive Intercep o EPE N comparativo correla o amostra C lcio mg dL 0 991 0 990 0 4 0 17 25 5 2 11 9 Paramax 0 673 0 742 1 8 0 22 81 8 1 9 9 Beckman Creatinina mg dL 0 993 0 926 0 0 0 15 260 0 4 14 7 Paramax 8 0 987 0 866 0 1 0 16 107 047 5 Beckman Gama glutamiltransferase 1 0 0 98 0 4 3 29 135 5 312 Paramax U L 1 0 1 60 3 1 18 57 49 27 1848 Beckman Glicose mg dL 0 987 1 009 2 8 3 89 251 72 422 Paramax 8 0 997 0 943 1 2 4 69 91 56 646 Beckman i 0 849 0 932 0 6 0 19 251 5 7 9 2 Paramax Protema total e at 0 873 0 935 0 3 0 16 92 65 92 Beckman Azoto ureico no sangue 0 964 0 923 0 5 1 08 251 6 52 Paramax mg dL 0 983 0 946 0 0 0 66 92 6 38 Beckman Be aie ote 0 979 0 958 0 3 0 20 159 1 4 7 6 Paramax Redor Cnet 0 975 0 908 0 6 0 31 44 2 1 12 1 DAX As amostras de soro de doentes hospitalizados forneceram um intervalo da amostra mais amplo e possivelmente mais til do que as amostras de sangue total venoso de doentes em ambulat rio As estat sticas de correla o para o teste de c lcio Piccolo resultam destas amos
17. SI 2002 Clinical and Laboratory Standards Institute Interference testing in clinical chemistry proposed guideline CLSI Publication EP7 P Wayne PA CLSI 1986 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 3rd ed Washington DC AACC Press 1990 Clinical and Laboratory Standards Institute How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory approved guidelines 2nd ed CLSI Document C28 A3 Wayne PA CLSI 2008 Clinical and Laboratory Standards Institute Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices tentative guideline second edition CLSI Document EP5 T2 Wayne PA CLSI 1992 Clinical and Laboratory Standards Institute Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices approved guideline CLSI Document EP5 A Wayne PA CLSI 1999 Clinical and Laboratory Standards Institute Quality management for unit use testing proposed guideline CLSI Document EP18 A Wayne PA CLSI 2002 Clinical and Laboratory Standards Institute Method comparison and bias estimation using patient samples approved guideline CLSI Document EP9 A2 Wayne PA CLSI 2002 Pagina 20 de 20
18. a amidinohidrolase Actinobacillus spp 3 U Creatinina amidohidrolase Pseudomonas spp 1U Sulfato c prico 210 ug cido 3 5 dicloro 2 hidroxibenzenosulf nico DHBSA 37 ug Glicose 6 fosfato desidrogenase leveduras 0 05 U Glutamato desidrogenase figado bovino 0 01 U Acido L glut mico y 3 carboxi 4 nitroanilida sal amon aco 32 ug Glicilglicina 317 ug Hexoquinase leveduras 0 1 U a cetoglutarato sal dissddico 37 ug Acido a cetoglut rico 72 ug Lactato desidrogenase cora o de galinha 0 002 U Lactato desidrogenase Staphylococcus epidermidis 0 1 U Acetato de magn sio 7 ug Cloreto de magn sio 5 ug Malato desidrogenase MDH cora o de porco 0 01 U B nicotinamida adenina dinucle tido NAD 20 ug Pagina 6 de 20 Componente Quantidade Disco B nicotinamida adenina dinucle tido NADH reduzido 19 ug Fosfato p nitrofenil p NPP 67 ug Peroxidase r bano silvestre 0 9 U Iodeto de pot ssio 28 ug Sarcosina oxidase microrganismo 0 7 U Ferricianeto de s dio 1 ug Tartarato de pot ssio e s dio 343 ug 2 4 6 tribromo 3 cido hidroxibenz ico TBHBA 188 ug Urease ervilha sabre 0 05 U Uricase microbiana 0 04 U Sulfato de zinco 3 ug Tamp es surfactantes excipientes e conservantes Advert ncias e precau es e Para utiliza o em diagn stico in vitro e O recipiente de diluente no disco de reagente automaticamente aberto ao fechar a gaveta do analisador N o poss vel reutilizar um disco com um recipie
19. ca o dos m todos da AACC e da IFCC A fosfatase alcalina hidrolisa o p NPP num tamp o de i es met licos e forma p nitrofenol e fosfato ALP Fosfato p nitrofenil p NITROFENOL Fosfato Zn Mg A quantidade de ALP na amostra proporcional taxa de aumento da diferen a de absorv ncia entre 405 nm e 500 nm Amilase AMY Foram desenvolvidos cerca de 200 testes diferentes para medir a amilase A maioria dos procedimentos utiliza uma solu o de polissacar deos tamponada mas emprega t cnicas de detec o diferentes Os m todos viscosim tricos n o apresentam precis o e exactid o suficientes enquanto os m todos turbidim tricos e iodom tricos s o dif ceis de padronizar Os m todos frequentemente utilizados s o o sacarog nico e o cromol tico A t cnica cl ssica de medi o da amilase consiste num m todo sacarog nico mas dif cil e morosa Recentemente foram desenvolvidos m todos cromol ticos que utilizam p nitrofenilglicos deos como substratos Estes ensaios apresentam uma especificidade mais elevada para amilase pancre tica do que para amilase salivar e s o f ceis de monitorizar No m todo Piccolo o substrato 2 cloro p nitrofenil a D maltotri sido CNPG3 reage com a a amilase na amostra do doente libertando 2 cloro p nitrofenol CNP A liberta o de CNP cria uma altera o da cor a amilase CNPG3 W _ CNP D maltotridsido A reac
20. de Educa o para a Doen a Renal EUA recomenda vivamente que os laborat rios comuniquem regularmente uma Taxa de Filtra o Glomerular estimada TFGe quando se medir a creatinina no soro em doentes com idades iguais ou superiores a 18 anos A comunica o regular da TFGe com todas as determina es de creatinina no soro permite que os laborat rios ajudem a identificar indiv duos com uma fun o renal reduzida e a facilitar a detec o de DRC Valores de TFGe calculados lt 60 mL min s o geralmente associados a um aumento do risco de resultados adversos de DRC O c lculo da TFGe realizado pelo Piccolo utilizando a idade o sexo e a ra a do doente O m todo Piccolo para a creatinina rastre vel ao m todo de refer ncia de IDMS para creatinina pelo que poss vel utilizar a seguinte forma da equa o MDRD para calcular a TFGe TFG mL min 1 73 m 175 x Sa x Idade 2 x 0 742 para mulheres x 1 212 para afro americanos Gama glutamiltransferase GGT Os primeiros m todos quantitativos desenvolvidos para medir a gama glutamiltransferase GGT envolviam uma segunda reac o para formar um corante azo que era combinado com um crom foro A mudan a para L y glutamil p nitroanilida como substrato na reac o eliminou o passo de forma o de corante Devido fraca solubilidade e estabilidade da L y glutamil p nitroanilida este procedimento foi modificado de modo a utilizar o substrato L y glutami
21. e Wroblewski e LaDue Foi proposto um procedimento de Wr blewski e LaDue modificado como o procedimento recomendado pela Federa o Internacional de Quimica Cl nica International Federation of Clinical Chemistry IFCC O m todo desenvolvido para utiliza o nos Analisadores Piccolo uma modifica o do procedimento recomendado pela IFCC Nesta reac o a ALT catalisa a transfer ncia de um grupo amino de L alanina para o cetoglutarato para formar L glutamato e piruvato A lactato desidrogenase catalisa a convers o de piruvato em lactato Concomitantemente o NADH oxidado em NAD conforme ilustrado no seguinte esquema de reac o P gina 1 de 20 ALT L alanina o cetoglutarato t _ L glutamato Piruvato LDH Piruvato NADH H Tactato NAD A taxa de varia o da diferen a de absorv ncia entre 340 nm e 405 nm deve se convers o de NADH em NAD c directamente proporcional quantidade de ALT presente na amostra Albumina ALB Os m todos iniciais utilizados para medir a albumina incluem t cnicas de fraccionamento e o teor de triptofano das globulinas gt Estes m todos s o de realiza o insustent vel e n o possuem uma especificidade elevada Duas t cnicas imunoquimicas s o consideradas como m todos de refer ncia mas s o dispendiosas e morosas As t cnicas de liga o por corante s o os m todos mais frequentemente utilizados para medir a album
22. er PM Clinical efficacy of an automated high sensitivity C reactive protein assay Clin Chem 1999 45 2136 2141 Roberts WL Moulton L Law TC Farrow G Cooper Anderson M Savory J Rifai N Evaluation of nine automated high sensitivity C reactive protein methods implications for clinical and epidemiological applications Part 2 Clin Chem 2001 47 418 425 Kramer B et al A simple technique for the determination of calcium and magnesium in small amounts of serum J Biol Chem 1921 47 475 481 Clark EP et al A study of the Tisdall method for the determination of blood serum calcium with suggested modification J Biol Chem 1925 63 461 464 Katzman E et al The determination of serum calcium by titration with ceric sulfate J Biol Chem 1937 118 539 544 Cali JP et al A reference method for the determination of total calcium in serum In Selected Methods of Clinical Chemistry Vol 8 Cooper GR ed Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1997 3 8 Pagina 18 de 20 13 38 39 40 Knoll VE et al Spezifische kreatininbetimmung im serum Z Klin Chem Klin Biochem 1970 8 582 587 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 Bibliografia continua o Kessler G M Wolfman An automated procedure for the simultaneous determination of calcium and phosphorus Clin Chem 1964 10 686 703 Michaylova V et al Photometric determina
23. etermination of pancreatic enzymes I Amylase Clin Chim Acta 1973 43 5 12 Centers for Disease Control CDC Alpha amylase methodology survey I Atlanta US Public Health Service Nov 1975 Somogyi M Modifications of two methods for the assay of amylase Clin Chem 1960 6 23 35 Gillard BK Markman HC Feig SA Direct spectro photometric determination of a amylase activity in saliva with p nitrophenyl a maltoside as substrate Clin Chem 1977 23 2279 2282 Wallenfels K et al The enzymic synthesis by transglucosylation of a homologous series of glycosidically substituted malto oligosaccharides and their use as amylase substrates Carbohydrate Res 1978 61 359 368 Karmen A A note on the spectrophotometric assay of glutamic oxalacetic transaminase in human blood serum J Clin Invest 1955 34 131 133 Bergmeyer HU et al Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 IFCC method for aspartate aminotransferase Clin Chem 1977 23 887 899 Bergmeyer HU et al Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 Revised IFCC method for aspartate aminotransferase Clin Chem 1978 24 720 721 Macy E Hayes T Tracy R Variability in the measurement of c reactive protein in healthy subjects implications for reference interval and epidemiological applications Clin Chem 1997 43 52 58 Rifai N Tracy RP Ridk
24. ia do complexo Cu proteina O teste de proteina total uma reac o de ponto final e a absorv ncia medida como a diferen a de absorv ncia entre 550 nm e 850 nm Azoto ureico no sangue BUN A ureia pode ser medida directa e indirectamente A reac o da diacetilmonoxima o nico m todo directo para medir a ureia frequentemente utilizada embora empregue reagentes perigosos Os m todos indirectos medem a am nia criada a partir da ureia a utiliza o da enzima urease aumentou a especificidade destes testes A A am nia quantificada por uma variedade de m todos incluindo a nessleriza o titula o de cido a t cnica de Berthelot 6566 amp reac es enzim ticas acopladas No entanto os procedimentos de Berthelot catalisados s o inconstantes para a medi o de am nia As reac es enzim ticas acopladas s o r pidas apresentam uma elevada especificidade para a am nia e s o frequentemente utilizadas Uma destas reac es foi proposta como candidato a m todo de refer ncia Na reac o enzim tica acoplada a urease hidrolisa a ureia em am nia e di xido de carbono Ao combinar am nia com a cetoglutarato e nicotinamida adenina dinucle tido NADH reduzido a enzima glutamato desidrogenase GLDH oxida NADH em NAD Urease Ureia H O 2NH CO GLDH NH a cetoglutarato NADH L glutamato H O NAD A taxa de varia o da diferen a de absorvancia entre 340 nm e
25. ina O verde de bromocresol BCG o m todo de liga o por corante mais frequentemente utilizado mas pode sobrestimar a concentra o de albumina especialmente no limite inferior do intervalo normal O p rpura de bromocresol BCP o corante mais espec fico utilizado Quando ligado albumina o p rpura de bromocresol BCP muda de cor de amarelo para azul A absorv ncia m xima varia com a mudan a de cor Surfactantes BCP Albumina _ Complexo albumina BCP pH cido A albumina ligada proporcional concentra o de albumina na amostra Trata se de uma reac o de ponto final que medida como absorv ncia a 600 nm Fosfatase alcalina ALP As t cnicas de medi o da fosfatase alcalina foram inicialmente desenvolvidas h mais de 60 anos V rios destes m todos espectrofotom tricos de ponto final ou de dois pontos gt s o actualmente considerados obsoletos ou pouco pr ticos A utiliza o de fosfato p nitrofenil p NPP aumentou a velocidade da reaccao A fiabilidade desta t cnica foi significativamente melhorada com a utiliza o de um tamp o de i es met licos para manter a concentra o de i es de magn sio e zinco na reac o O m todo de refer ncia da Associa o Americana de Qu mica Cl nica American Association for Clinical Chemistry AACC utiliza o p NPP como substrato e um tamp o de ides met licos O procedimento Piccolo consiste numa modifi
26. inua o Analito Tamanho da amostra Intra ensaio Plasma 2 N 40 M dia 105 5 DP 2 06 CV 1 9 Controlo 1 N 80 M dia 33 0 DP 1 21 CV 3 7 Controlo 2 N 80 M dia 108 0 DP 1 88 CV 1 7 C lcio mg dL Controlo 1 N 80 M dia 8 6 DP 0 21 CV 2 4 Controlo 2 N 80 M dia 11 8 DP 0 39 CV 3 3 Creatinina mg dL Controlo 1 N 80 M dia 1 1 DP 0 14 CV 12 5 Controlo 2 N 80 M dia 5 2 DP 0 23 CV 4 4 Gama glutamiltransferase U L Controlo 1 N 80 M dia 25 DP 0 59 CV 2 3 Controlo 2 N 80 M dia 106 DP 1 52 CV 1 4 Glicose mg dL Controlo 1 N 80 M dia 66 DP 0 76 CV 1 1 Controlo 2 N 80 M dia 278 DP 2 47 CV 0 9 Prote na total g dL Controlo 1 N 80 M dia 6 8 DP 0 05 CV 0 8 P gina 15 de 20 Total 105 5 2 30 2 2 33 0 2 12 6 4 108 0 3 14 2 9 8 6 0 25 2 9 11 8 0 40 3 4 1 1 0 14 13 1 5 2 0 27 5 2 25 0 74 2 9 106 2 29 2 2 66 1 03 1 6 278 3 84 1 4 6 8 0 08 1 2 Tabela 6 Precis o continua o Analito Tamanho da amostra Intra ensaio Total Controlo 2 N 80 M dia 4 7 4 7 DP 0 09 0 09 CV 2 0 2 0 Azoto ureico no sangue mg dL Controlo 1 N 80 M dia 19 19 DP 0 35 0 40 CV 1 9 2 1 Controlo 2 N 80 M dia 65 65 DP 1 06 1 18 CV 1 6 1 8 cido rico mg dL Controlo 1 N 80 M dia 3 8 3 8 DP 0 15 0 18 CV 4 0 4 8 Controlo 2 N 80 M dia 1D 7 5 DP 0 24 0 29 CV 3 2 3 9 Correla o Foram colhidas amostras de sangue total heparinizado com l tio
27. l 3 carboxi 4 nitroanilida A Federa o Internacional de Qu mica Cl nica IFCC recomendou que o m todo de GGT se baseie neste substrato sendo a glicilglicina o outro substrato A Abaxis modificou o m todo da IFCC para reagir a 37 C A adi o de uma amostra contendo gama glutamiltransferase aos substratos L y glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida e glicilglicina gli gli provoca a forma o de L y glutamil glicilglicina glu gli gli e 3 carboxi 4 nitroanilina GGT L y glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida Gli gli _ Glu gli gli 3 carboxi 4 nitroanilina A absorvancia desta reac o de cin tica medida a 405 nm A produ o de 3 carboxi 4 nitroanilina directamente proporcional actividade da GGT na amostra Glicose GLU As primeiras medi es da concentra o de glicose foram realizadas utilizando m todos de redu o de cobre como o de Folin Wu e Somogyi Nelson A falta de especificidade das t cnicas de redu o de cobre conduziu ao desenvolvimento de procedimentos quantitativos que utilizam as enzimas hexoquinase e glicose oxidase O teste de glicose incorporado no Disco de Reagente do Painel Bioqu mico Plus Piccolo consiste numa vers o modificada do m todo de hexoquinase que foi proposto como a base para o m todo de refer ncia de glicose A reac o da glicose com trifosfato de adenosina ATP catalisada por hexoquinase HK produz glicose 6 fosfato G 6 P e difosfato de adenosina ADP A
28. lizado dentro de 20 minutos ap s a abertura da bolsa dever ser eliminado Armazenamento Armazene os discos de reagente nas respectivas bolsas seladas a 2 8 C 36 46 F N o exponha os discos abertos ou fechados a luz solar directa ou a temperaturas superiores a 32 C 90 F Pode utilizar os discos de reagente at ao prazo de validade inclu do na embalagem O prazo de validade tamb m est codificado no c digo de barras impresso no anel de c digo de barras Ser apresentada uma mensagem de erro no visor do Analisador Qu mico Piccolo xpress se os reagentes estiverem fora do prazo Indica es de instabilidade deteriora o do disco de reagente Uma bolsa rasgada ou que apresente qualquer tipo de danos pode permitir a entrada de humidade no disco n o utilizado e afectar adversamente o desempenho do reagente N o utilize um disco de uma bolsa danificada 6 Instrumento Consulte no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress informa es completas sobre a utiliza o do analisador P gina 7 de 20 7 Colheita e prepara o das amostras As t cnicas de colheita das amostras s o descritas na sec o Colheita de amostras do Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress e Ovolume m nimo da amostra necess rio 100 uL de sangue total heparinizado com l tio plasma heparinizado com l tio soro ou material de controlo A c mara da amostra do disco de reagente pode conter at 120 uL de
29. loreto de c lcio CRP apenas NR Cefalotina Keflin 400 Cloranfenicol 100 Cimetidina 16 L dopa 5 Dopamina excepto CRP 19 Dopamina CRP apenas 13 Epinefrina 1 Eritromicina 10 Glutationa 30 Hidroclorotiazida 7 5 Ibuprofeno 50 Isoniazida 4 a cetoglutarato excepto CRP 5 a cetoglutarato CRP apenas NR Cetoprofeno 50 Lidocaina 1 Lactato excepto CRP 230 Lactato de litio CRP apenas 84 Meticilina 100 Metotrexato 0 5 Metildopa AST GLU TP e UA apenas 0 5 Metildopa todos os restantes NR Metronidazol 5 Nafcilina 1 Nitrofurantoina 20 Oxacilina 1 Oxaloacetato 132 Penicilina G 100 Fenitoina 5 5 difenilhidantoina 3 Prolina 4 Piruvato excepto CRP 44 Piruvato CRP apenas NR Rifampicina AST GLU TP e UA apenas 1 5 Rifampicina todos os restantes 0 5 Acido salicilico excepto CRP 25 cido salic lico CRP apenas 50 Sulfasalazina excepto CRP 10 Sulfasalazina CRP apenas NR Sulfadiazina excepto CRP NR Sulfadiazina CRP apenas 150 Sulfanilamida 50 Teofilina 20 ANR n o realizado P gina 10 de 20 Tabela 3 As subst ncias seguintes apresentaram um desvio no resultado superior a gt 10 para uma amostra de intervalo normal Concentra o que de interfer ncia produz interfer ncia observada gt 10 Alanina aminotransferase ALT cido asc rbico 20 aum 11 Oxaloacetato 132 aum 843 Albumina ALB Acetoacetato 102 dim 18 Ampicilina 30 dim 12 Cafeina 10 dim 14 Cloreto de calcio 20 di
30. m 17 Cefalotina Keflin 400 aum 13 Ibuprofeno 50 aum 28 a cetoglutarato 5 dim 11 Nitrofurantoina 20 dim 13 Prolina 4 aum 12 Sulfasalazina 10 dim 14 Sulfanilamida 50 dim 12 Teofilina 20 dim 11 Fosfatase alcalina ALP Teofilina 20 dim 42 Proteina c reactiva Glutationa 30 dim 13 Isoniazida 4 dim 16 L dopa 5 dim 28 Oxaloacetato 132 dim 57 Creatinina CRE Acido asc rbico 20 dim 11 Dopamina 19 dim 80 L dopa 5 dim 71 Epinefrina 1 dim 45 Glutationa 30 dim 13 Glicose GLU Oxaloacetato 132 dim 11 Piruvato 44 dim 13 Acido rico Acido asc rbico 20 dim 13 Epinefrina 1 dim 14 L dopa 5 dim 78 Metildopa 0 5 dim 12 Rifampicina 1 5 dim 14 Acido salicilico 25 dim 20 dim diminui o na concentra o do analito especificado aum aumento na concentra o do analito especificado P gina 11 de 20 11 Valores esperados Foram utilizadas amostras de um total de 193 adultos do sexo masculino e feminino analisadas no Analisador Qu mico Piccolo xpress para determinar os intervalos de refer ncia para a ALT albumina ALP amilase c lcio creatinina glicose proteina total e BUN Foram utilizadas amostras de um total de 186 adultos do sexo masculino e feminino para determinar o intervalo de refer ncia para a AST e cido rico Foram utilizadas amostras de um total de 131 adultos do sexo masculino e feminino para determinar o intervalo de refer ncia para a GGT Os intervalos abaix
31. m nio interferem com pelo menos um dos qu micos contidos no Disco de Reagente do Painel Bioqu mico Plus Piccolo e As amostras com hemat critos com um excesso de volume de concentrado de eritr citos de 62 65 uma frac o de volume de 0 62 0 65 podem apresentar resultados inexactos As amostras com um n vel elevado de hemat critos podem ser inclu das nos relat rios como hemolisadas Estas amostras podem ser centrifugadas de forma a obter plasma e reprocessadas num novo disco de reagente e A CRP uma prote na de fase aguda e aumenta de forma n o espec fica em resposta inflama o A varia o intra individual da prote na c reactiva significativa 30 a 60 e dever ser tida em considera o durante a interpreta o dos valores Podem ser necess rias medi es em s rie para estimar a m dia real da prote na c reactiva em qualquer indiv duo espec fico e Os HAMA anticorpos humanos anti rato at 115 ng mL n o interferem As amostras de doentes que tenham recebido preparados de anticorpos monoclonais de ratinho para diagn stico ou terap utica podem conter HAMA e O factor reumat ide at uma concentra o de 644 U mL n o interfere e N o se observou qualquer efeito de prozona de dose elevada neste ensaio com concentra es de CRP at 1 000 mg L e Qualquer resultado de um determinado teste que exceda o intervalo de ensaio dever ser analisado atrav s de outro m todo de teste aprovado ou enviado
32. nte cinco dias soro 1 controlo 1 e controlo 2 foram realizados em dois locais soro 2 soro 3 plasma 1 e plasma 2 foram realizados num local Os resultados dos estudos de precis o s o apresentados na Tabela 6 Tabela 6 Precis o Analito Tamanho da amostra Intra ensaio Total Alanina aminotransferase U L Controlo 1 N 80 M dia 21 21 DP 2 76 2 79 MCV 13 4 13 5 Controlo 2 N 80 M dia 52 52 DP 2 70 3 25 CV 5 2 6 2 P gina 13 de 20 Tabela 6 Precis o continua o Analito Tamanho da amostra Intra ensaio Albumina g dL Controlo 1 N 80 M dia 5 6 DP 0 09 CV 1 7 Controlo 2 N 80 M dia 3 7 DP 0 07 CV 2 0 Fosfatase alcalina U L Controlo 1 N 80 M dia 39 DP 1 81 CV 4 6 Controlo 2 N 80 M dia 281 DP 4 08 CV 1 5 Amilase U L Controlo 1 N 80 M dia 46 DP 2 40 CV 5 2 Controlo 2 N 80 M dia 300 DP 11 15 MCV 3 7 Aspartato aminotransferase U L Controlo 1 N 80 M dia 47 DP 0 98 CV 2 1 Controlo 2 N 80 M dia 145 DP 1 83 MCV 1 3 Proteina c reactiva mg L Soro 1 N 80 M dia 8 3 DP 0 70 CV 8 4 Soro 2 N 40 M dia 8 1 DP 0 49 CV 6 1 Soro 3 N 40 M dia 8 8 DP 0 54 MCV 6 2 Plasma 1 N 40 M dia 34 5 DP 1 04 CV 3 0 Pagina 14 de 20 Total 5 6 0 11 2 1 3 7 0 11 2 9 39 2 29 5 8 281 8 75 3 1 46 2 63 5 7 300 11 50 3 8 47 1 84 3 9 145 4 62 3 2 8 3 0 81 9 8 8 1 0 51 6 3 8 8 0 54 6 2 34 5 1 09 3 2 Tabela 6 Precis o cont
33. nte de diluente aberto Certifique se de que a amostra ou o controlo foi colocada o no disco antes de fechar a gaveta e Os discos de reagente usados cont m fluidos corporais humanos Siga as boas pr ticas de seguran a laboratorial quando manusear e eliminar discos usados Consulte no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress as instru es de limpeza de derrames biologicamente perigosos e Os discos de reagente s o de pl stico e podem rachar ou partir se se ca rem Nunca utilize um disco que tenha ca do uma vez que pode espalhar materiais biologicamente perigosos no interior do analisador e As esferas de reagente podem conter cidos ou subst ncias c usticas O operador n o entra em contacto com as esferas de reagente se os procedimentos recomendados forem seguidos Na eventualidade de manuseamento das esferas por exemplo durante a limpeza depois de um disco cair e se partir evite a ingest o o contacto com a pele ou a inala o das esferas de reagente Instru es para o manuseamento de reagentes poss vel utilizar os discos de reagente directamente a partir do frigor fico sem aquecer N o permita que os discos selados em bolsas de alum nio permane am temperatura ambiente durante mais de 48 horas antes da utiliza o Abra a bolsa de alum nio selada retire o disco e utilize de acordo com as instru es fornecidas no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress Um disco que n o seja uti
34. o para estes analitos foram calculados com base no intervalo de refer ncia de 95 estimado a partir dos valores combinados globais obtidos dos indiv duos de refer ncia Foram analisadas amostras de um total de 69 adultos do sexo masculino e feminino no Analisador Qu mico Piccolo xpress para a CRP O intervalo de CRP baseou se na transferibilidade comprovada dos intervalos de refer ncia do instrumento Beckman Estes intervalos s o fornecidos apenas como orienta o Recomenda se que o seu departamento ou a sua institui o estabele am os intervalos normais para sua popula o de doentes espec fica Tabela 4 Intervalos de refer ncia do Analisador Piccolo Analito Alanina aminotransferase ALT Albumina ALB Fosfatase alcalina ALP Mulher Homem Amilase AMY Aspartato aminotransferase AST Prote na c reactiva C lcio CA Creatinina Gama glutamiltransferase GGT Glicose Prote na total TP Azoto ureico no sangue BUN cido rico UA Mulher Homem 12 Caracter sticas de desempenho Linearidade Unidades comuns 10 47 UL 3 3 5 5 g dL 42 141 U L 53 128 U L 14 97 U L 11 38 U L lt 7 5 mg L 8 0 10 3 mg dL 0 6 1 2 mg dL 5 65 U L 73 118 mg dL 6 4 8 1 g dL 7 22 mg dL 2 2 6 6 mg dL 3 6 8 0 mg dL Unidades SI 10 47 U L 33 55 g L 42 141 U L 53 128 U L 14 97 U L 11 38 U L lt 7 5 mg L 2 00 2 58 mmol L 53 106 pmol L 5 65 U L 4 1 6 6 mmol L 64 81 g L 2 5 7 9 mmol L 131 393 pmol L
35. om l tex Contudo este procedimento requer um nefel metro para medir a dispers o de luz Actualmente foram desenvolvidos v rios ensaios imunoturbidim tricos e imunoluminom tricos automatizados que podem ser processados em analisadores de qu mica cl nica convencionais O m todo utilizado pela Abaxis um ensaio turbidim trico de aglutina o por l tex melhorado A amostra misturada com uma suspens o de anticorpo monoclonal de CRP anti humano de ratinho que ligada ao l tex A CRP na amostra liga se s part culas de l tex anticorpo e aglutina se criando turva o A dispers o da luz da turva o utilizada como medida de CRP A turva o medida como uma altera o na absorv ncia a 630 nm Esta altera o de absorv ncia directamente proporcional CRP na amostra Part culas de l tex anti CRP CRP gt Part culas de l tex anti CRP CRP aglutinadas C lcio CA Os primeiros m todos utilizados para analisar o c lcio envolveram a precipita o do c lcio com um excesso de ani es Os m todos de precipita o s o trabalhosos e frequentemente imprecisos O m todo de refer ncia para o c lcio a espectroscopia por absor o at mica contudo este m todo n o adequado utiliza o de rotina Os m todos espectrofotom tricos que utilizam complexona de o cresolftaleina ou arsenazo III como indicadores metalocr micos s o utilizados com maior frequ ncia O arsenazo III tem uma
36. para um laborat rio de refer ncia N o dilua a amostra e processe novamente no Analisador Qu mico Piccolo xpress Advert ncia Testes extensivos com o Analisador Qu mico Piccolo xpress demonstraram que em casos muito raros a amostra distribu da no disco de reagente pode n o fluir devidamente para a c mara da amostra Devido ao fluxo n o uniforme poss vel que seja analisada uma quantidade de amostra inadequada e v rios resultados poder o encontrar se fora dos intervalos de refer ncia A amostra pode ser reprocessada utilizando um novo disco de reagente Interfer ncia Foram testadas subst ncias como interferentes com os analitos Foram preparados pools de soro humano A concentra o a que cada subst ncia potencialmente interferente foi testada baseou se nos n veis de teste da directriz CLSI anterior NCCLS EP7 P excepto CRP e CLSI EP7 A CRP Ffeitos de subst ncias end genas e As subst ncias interferentes fisiol gicas hem lise icter cia e lip mia provocam altera es nas concentra es apresentadas de alguns analitos Os ndices da amostra encontram se impressos na parte inferior de cada fita de resultado para informar o operador dos n veis de subst ncias interferentes presentes em cada amostra e O Analisador Qu mico Piccolo xpress suprime quaisquer resultados que sejam afectados por gt 10 de interfer ncia resultante de hem lise lip mia ou icter cia A indica o HEM LIP ou ICT
37. r xido de hidrog nio 2 4 6 tribromo 3 cido hidroxibenz ico TBHBA e 4 aminoantipirina 4 AA AP num corante quinoneimina vermelho S o adicionados ferricianeto de s dio e ascorbato oxidase mistura da reac o para minimizar a potencial interfer ncia da bilirrubina e do cido asc rbico respectivamente P gina 3 de 20 Creatinina amidohidrolase Creatinina HO Creatina Creatina amidinohidrolase Creatina HO ___ _ gt Sarcosina Ureia Sarcosina oxidase Sarcosina HO O Glicina Formaldeido H203 Peroxidase H 0 TBHBA 4 AAP _ Corante quinoneimina vermelho H O S o utilizadas duas cuvetes para determinar a concentra o de creatinina na amostra A creatina end gena medida na cuvete de branco que subtra da da creatina end gena combinada e da creatina formada a partir das reac es enzim ticas na cuvete de teste Quando a creatina end gena for eliminada dos c lculos a concentra o de creatinina ser proporcional intensidade da cor vermelha produzida A reac o de ponto final medida como a diferen a de absorv ncia entre 550 nm e 600 nm TFGe calculada A creatinina no soro regularmente medida como indicador da fun o renal Uma vez que a creatinina influenciada pela idade pelo sexo e pela ra a a doen a renal cr nica DRC pode n o ser detectada utilizando apenas a creatinina no soro Assim o Programa Nacional
38. r separada em plasma ou soro e armazenada em tubos de amostra com tampa a 2 8 C 36 46 F caso n o seja poss vel processar a amostra no prazo de 60 minutos e Inicie o teste no prazo de 10 minutos ap s a transfer ncia da amostra para o disco de reagente 8 Procedimento Materiais fornecidos e Um Disco de Reagente do Painel Bioqu mico Plus Piccolo PN 400 1035 uma caixa de discos PN 400 0035 Materiais necess rios mas n o fornecidos e Analisador Qu mico Piccolo xpress e As pipetas de transfer ncia de amostras volume fixo de aproximadamente 100 uL e as pontas s o fornecidas com cada Analisador Qu mico Piccolo xpress e podem ser encomendadas novamente junto da Abaxis e Reagentes de controlo dispon veis no mercado recomendados pela Abaxis contacte a Assist ncia T cnica da Abaxis para obter mais informa es sobre os materiais de controlo e os valores esperados e Temporizador Par metros de teste O Analisador Qu mico Piccolo xpress funciona a temperaturas ambiente entre os 15 C e os 32 C 59 90 F O tempo de an lise de cada Disco de Reagente do Painel Bioquimico Plus Piccolo inferior a 14 minutos O analisador mant m o disco de reagente temperatura de 37 C 98 6 F durante o intervalo de medi o Procedimento de teste Os procedimentos completos de colheita de amostras e funcionamento passo a passo s o descritos em pormenor no Manual do Operador do Analisador Qu mico Piccolo xpress Calibra
39. surement of y glutamyl transpeptidase activity J Biol Chem 1956 221 895 908 Goldbarg JA et al The colorimetric determination of y glutamyl transpeptidase with a synthetic substrate Arch Biochem Biophys 1960 91 61 70 Orlowski M Meister A y Glutamyl p nitroanilide a new convenient substrate for determination and study of L and D y glutamyltranspeptidase activities Biochim Biophys Acta 1963 73 679 681 Persijn JP van der Slik W A new method for the determination of y glutamyltransferase in serum J Clin Chem Clin Biochem 1976 14 421 427 Shaw LM et al IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 4 IFCC method for y glutamyltransferase J Clin Chem Clin Biochem 1983 21 633 646 Folin O et al A system of blood analysis J Biol Chem 1919 38 81 110 Somogyi M A reagent for the copper iodometric determination of very small amounts of sugar J Biol Chem 1937 117 771 776 Nelson N et al A photometric adaption of the Somogyi method for the determination of glucose J Biol 1944 153 375 380 Kaplan LA Glucose In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2nd ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 850 856 Koller A Kaplan LA Total serum protein In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 1057 1060 Reigler E Eine kolorimetrische Bestimmungsmethode des Ei
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41. tras s ricas Um local processou apenas soro no Analisador Piccolo para a correla o de gama glutamiltransferase Tabela 8 Correla o do tipo de amostra para CRP Para o m todo de teste de CRP a an lise de regress o de Deming para o tipo de amostra forneceu os seguintes resultados para n 21 Eixo Y Eixo X R Declive Intercep o Plasma heparinizado com Sangue total heparinizado com 1 000 0 995 0 2 l tio l tio Soro Sangue total heparinizado com 0 999 1 005 0 5 l tio Soro Plasma heparinizado com l tio 0 999 1 010 0 3 N o se observaram diferen as significativas entre os resultados de sangue total heparinizado com l tio plasma heparinizado com l tio e soro para CRP 13 Bibliografia 1 Tonhazy NE White NG Umbreit WW A rapid method for the estimation of the glutamic aspartic transaminase in tissues and its application to radiation sickness Arch Biochem 1950 28 36 42 2 Reitman S Frankel S A colorimetric method for the determination of serum glutamic oxalacetic and glutamic pyruvic transaminases Am J Clin Pathol 1957 28 56 63 3 Murray RL Alanine aminotransferase In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 895 898 4 Wr blewski F LaDue JS Serum glutamic pyruvic transminase in cardiac and hepatic disease Proc Soc Exp Biol Med 1956 91 569 571 5 Bergmeyer HU Horder M IFCC methods for the measurement of catal
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