Detección de grasa extraña en grasa láctea por cromatografía
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1. of trilaurin C concentration mg mL of the standard TAG i The correction factors were determined when 1 uL of the standard mixture of TAG was injected seven times A simple regression analysis was made taking as dependent variable the GUTI RREZ TOLENTINO et al 735 AGROCIENCIA 1 de octubre 15 de noviembre 2007 factores de correcci n se determinaron inyectando siete veces 1 uL de la mezcla est ndar de TAG Se realiz un an lisis de regresi n simple tomando como variable dependiente el tiempo de retenci n de cada pico de TAG y como variable independiente el n mero de carbonos correspondiente La ecuaci n de la recta encontrada se us para determinar los tiempos de retenci n del resto de TAG El inter valo de los factores de correcci n fue 0 96 a 1 15 el cual es aceptado para la correcci n de los valores de TAG Pinto et al 1987 Facto res de correcci n mayores a 1 15 son insatisfactorios y se aumenta el flujo del gas de arrastre para obtener factores aceptables Descripci n de datos y variables Se definieron las variables independientes x como porcentaje de TAG con n mero de carbono j Se formaron dos grupos de da tos 1 grasas l cteas 14 variables desde el TAG de C28 al C54 2 grasas no l cteas 4 a 6 variables desde el TAG de C36 a C56 seg n el tipo de grasa estudiada Para el an lisis de regresi n lineal m ltiple RLM se defini Y como grado de pureza que contiene una grasa l ctea y2. 15 0 11 9 13 2 10 0 14 0 13 7 15 7 C40 5 7 19 4 9 1 10 4 9 0 13 0 9 7 10 9 8 6 10 8 10 9 13 7 C42 2 9 14 8 5 8 6 8 6 0 7 0 6 1 7 6 5 1 8 6 6 7 8 4 C44 2 5 8 8 5 1 6 7 5 0 7 5 5 5 7 4 4 2 8 9 5 2 6 7 C46 3 5 10 0 6 1 8 1 5 0 7 0 6 5 8 1 5 2 9 7 5 4 7 1 C48 5 2 13 2 8 2 10 3 7 0 11 0 8 4 9 4 7 9 10 6 6 2 8 5 C50 5 7 18 8 11 1 12 5 8 0 12 0 9 9 12 5 8 2 13 4 8 6 12 3 C52 5 4 27 1 9 5 13 5 7 0 11 0 7 9 12 7 5 1 15 5 8 3 13 2 C54 2 8 18 6 4 1 8 4 1 0 5 0 3 2 7 5 1114 2 3 7 4 a Fontecha et al 2006 leche cruda b Jensen 2002 leche cruda c Van Renterghem 1997 mantequilla d Precht 1991 mantequilla e Pinto et al 1987 leche cruda Cuadro 3 Niveles medios de triacilgliceroles p p en grasas no l cteas Table 3 Mean levels of triacylglycerols p p in non milk fats Muestra C36 C44 C46 C48 C50 C52 C54 C56 Aceites Pescado n 2 n d n d 2 63 11 38 20 98 25 59 24 02 15 39 Canola n 2 1 99 n d n d n d n d 15 09 77 06 5 86 Girasol n 2 1 83 n d n d n d 2 11 20 46 75 60 n d Manteca n 2 n d n d n d 2 39 18 04 61 88 17 69 n d Sebo n 2 n d n d 2 69 11 88 24 80 36 25 24 38 n d n d lt 0 01 p p y C54 representaron 85 43 Los aceites vegetales 3 Lard tuvieron la mayor proporci n en la suma de C52 y C54 el valor m nimo fue para el aceite de girasol 92 15 y el m ximo para canola 97 61 Estos resultad
3. de grasa l ctea aut ntica b gr fica del comportamiento bimodal Figure 1 a Chromatogram of triacylglycerols of authentic milk fat b graph of the bimodal behaviour GUTI RREZ TOLENTINO et al 737 AGROCIENCIA 1 de octubre 15 de noviembre 2007 los Estados de M xico e Hidalgo hay comportamiento diferente en los TAG que forman el valle de la bimo dal Figura 1 La dispersi n de los datos con respecto a las medias se calcul con la desviaci n est ndar alcanzando hasta tres veces lo informado por Timms 1980 Pinto et al 1987 y Fontecha et al 2006 para grasas l cteas australianas chilenas y espa olas Los intervalos de la composici n global de TAG p p de grasa de leches producidas en las tres reas de muestreo y otros reportados en la literatura se describen en el Cuadro 2 De acuerdo con las estad sticas obtenidas para cada rea se consider que estos valores son predictores de la composici n triglic rica de la grasa de leche producida en el Al tiplano Mexicano La variabilidad en los resultados del presente trabajo fue mayor que en la de resul tados publicados por investigadores de otros pa ses Cuadro 2 En el Cuadro 3 se presentan los valores medios de TAG p p de las GNL estudiadas El aceite de pescado present una mezcla compleja con TAG entre C46 y C56 con una proporci n de 70 59 para el conjunto de C50 C52 y C54 y presenta AG con longitud de cadena C14 a C22 y con diferentes grados
4. de instauraci n As como la grasa de leche ofrece una gran cantidad de especies moleculares Pinto ef al 1987 Romero et al 2000 La manteca se carac teriz por que el conjunto de C50 C52 y C54 alcanz 97 61 mientras que en el sebo los TAG C50 C52 Cuadro 1 Niveles medios de triacilgliceroles p p en leche cruda de tres reas de muestreo del Altiplano Mexi cano Table 1 Mean levels of triacylglycerols p p in raw milk of three areas of sampling of the Mexican Highland D F Estado de M xico n 49 n 107 Hidalgo TAG n 60 Media D E Media D E Media D E C28 0 53a 0 18 0 39b 0 19 0 44b 0 21 C30 0 57a 0 35 0 53a 0 21 0 65a 0 25 C32 1 48a 0 69 1 33a 0 48 1 53a 0 40 C34 3 43a 1 09 3 40a 1 03 3 404 0 80 C36 7 12a 1 65 7 15a 1 66 7 07a 1 41 C38 11 40a 2 02 10 76a 2 12 11 62a 1 80 C40 11 38a 2 90 9 49b 3 02 11 16a 3 79 C42 7 92a 3 07 6 01b 2 87 7 86a 3 85 C44 5 62a 1 63 4 70b 1 53 5 50a 1 85 C46 7 03a 1 62 6 16b 1 24 6 57ab 1 27 C48 9 67a 2 01 9 42a 1 23 8 94a 1 34 C50 12 91b 3 38 14 53a 2 80 12 86b 3 62 C52 13 02b 4 42 16 68a 5 24 14 23b 5 29 C54 7 9la 3 69 9 75a 3 93 8 18a 2 94 Letras diferentes en una fila indican diferencia significativa p lt 0 05 D E desviaci n est ndar 738 VOLUMEN 41 N MERO 7 the valley of the bimodal Figure 1 The dispersal of the data with respect to the means was calculated with the standard deviation reaching as much as three times
5. fat with non milk fat of vegetable origin canola and sunflower oils and of animal origin fish oil lard and tallow the profiles of triacylglycerols were found to be modified Based on the above through an analysis of multiple linear regression and using potential variables of prediction of adulteration C42 C44 C46 C52 and C54 fish Cuadro 4 Niveles de adulteraci n con grasas no l cteas y porcentajes de clasificaci n correcta seg n ecuaciones de regresi n lineal m ltiple Table 4 Levels of adulteration with non milk fats and percentages of correct classification according to equations of multiple linear regression Aceites de Manteca Sebo Pescado Canola Girasol Porcentajes de clasificaci n correcta Grasa l ctea pura n 216 94 5 95 3 96 6 97 3 95 9 5 adulteraci n 390 73 2 97 6 79 4 9 1 10 adulteraci n 53 2 98 5 100 0 100 0 32 3 15 adulteraci n 56 5 100 0 100 0 100 0 53 5 20 adulteraci n 64 3 100 0 100 0 100 0 63 4 740 VOLUMEN 41 N MERO 7 DETECCION DE GRASA EXTRANA EN GRASA LACTEA POR CROMATOGRAFIA DE GASES Y ESTADISTICA MULTIVARIABLE 4 est n los porcentajes de clasificaci n correcta en la adulteraci n de la GL Tomando en cuenta los intervalos de confianza para GL puras a un nivel de 95 se clasific correc tamente 100 de las muestras adulteradas con 10 15 y 20 con aceites de canola girasol y manteca es decir todos los valores YMEZ quedaron fuera de los intervalos definidos par
6. por tanto se trata de una variable categ rica As se asign un valor de 100 para definir la grasa l ctea pura debido a que se encuentra 100 pura 0 adulterada As al probar la ecuaci n de regresi n encontrada en las grasas l cteas adulteradas de 5 10 15 y 20 la respuesta Y fuera 95 90 85 y 80 El valor de 100 es arbitrario y elegido por que es f cil interpretar la respuesta cuando se trata de grasas l cteas adulteradas Poblaci n de datos Para definir los grupos utilizados en el an lisis de RLM se consideraron diferentes niveles de adulteraci n empleando como adulterante cada una de las GNL como sigue Grupo 1 muestras de grasa l ctea pura 0 de adulteraci n Grupo 2 muestras adulteradas en 5 95 GL y 5 GNL Grupo 3 muestras adulteradas en 10 90 GL y 10 GNL Grupo 4 muestras adulteradas en 15 85 GL y 15 GNL Grupo 5 muestras adulteradas en 20 80 GL y 20 GNL Preparaci n de muestras adulteradas El procedimiento para las muestras de grasa l ctea pura adul teradas en diferentes niveles con las grasas no l cteas se bas en la siguiente f rmula de simulaci n Timms 1980 Pinto et al 2002 CM xO 4 11 Co donde x fracci n de grasa no l ctea C porcentaje de TAG con n mero de carbono i MEZ GNL GLP mezcla grasa no l ctea y grasa l ctea pura El procedimiento de aplicaci n de la f rmula puede explicarse m s f cilmente a trav s de un ejemplo supon
7. 6 se pesaron 50 mg de grasa en frascos de 5 mL con tapa herm tica y se disolvieron en 2 5 mL de hexano Se inyect 1 uL de la soluci n en el croma t grafo de gases Los l pidos de la leche contienen 97 a 98 de triacilgliceroles Jensen 2002 An lisis cromatogr fico El an lisis de TAG por cromatograf a de gases CG se realiz en un cromat grafo de gases Perkin Elmer Autosystem 9000 con detector de ionizaci n de flama e integrador de reas PE Nelson modelo 1022 Las condiciones de operaci n fueron columna de fenil metil silic n a 5 con polaridad intermedia HP5 y longitud 2 mx0 25 D I x0 25 grosor de capa temperatura del inyector 340 C temperatura del detector 350 C flujo del gas de arrastre He 1 mL min programa de temperaturas del horno 1 200 C 0 min con incrementos de 5 C min hasta 325 C 2 325 C 6 min tiempo total de corrida 31 min modo de inyecci n splitless tiempo de purga 0 75 min volumen de inyecci n 1 uL Los resultados se corrigieron usando una mezcla est ndar de cinco TAG 20 cada uno con pureza mayor a 99 Sigma 178 11 de concentraci n de 20 mg mL en hexano de tricaprilina C24 tricaprina C30 trilaurina C36 trimiristina C42 tripalmiti na C48 Para identificar y cuantificar los TAG se compararon los cromatogramas tiempos de retenci n y reas de los picos obteni dos de grasa de leche con el cromatograma de la mezcla est ndar Los porcentajes de TAG lo
8. DETECCION DE GRASA EXTRANA EN GRASA LACTEA POR CROMATOGRAFIA DE GASES Y ESTADISTICA MULTIVARIABLE DETECTION OF FOREIGN FAT IN MILK FAT BY GAS CHROMATOGRAPHY AND MULTIVARIABLE STATISTIC Rey Guti rrez Tolentino Salvador Vega y Le n Gilberto D az Gonz lez H ctor J Delgadillo Guti rrez Georgina Urb n Carrillo Acacia Ram rez Ayala Clementina Gonz lez Cabrera e Ignacio M ndez Ram rez 2 3 Departamento de Producci n Agricola y Animal Departamento de los Sistemas Biol gicos Uni versidad Aut noma Metropolitana Unidad Xochimilco 04960 Calzada del Hueso 1100 Co yoac n Distrito Federal M xico reygut correo xoc uam mx Instituto de Investigaciones en Matem ticas Aplicadas y Sistemas Universidad Nacional Aut noma de M xico 04560 Circuito interior s n Ciudad Universitaria Coyoac n Distrito Federal M xico RESUMEN La adici n de grasa no l ctea GNL a la leche y sus derivados se considera una adulteraci n del producto El objetivo del presente estudio fue desarrollar una metodolog a estad stica que permita detectar GNL en mezclas de GNL con grasa l c tea GL Se realiz un muestreo de leche cruda del Altiplano Mexicano cada 15 d durante un a o total 216 muestras Las muestras de GNL fueron dos para cada aceite pescado gira sol y canola as como dos de manteca y sebo Los porcentajes p p de contenido de triacilgliceroles TAG en cada ma teria grasa se obtuvieron por cromatogra
9. OCALEC 2004 Sistema pro ducto leche Determinaci n de fitosteroles en leche f rmula l ctea producto l cteo combinado queso crema y mantequi lla por cromatograf a de gases M todo de prueba M xico 14 p Norma Mexicana NMX F 718 COFOCALEC 2006 Sistema pro ducto leche Alimentos L cteos Gu a para el muestreo de leche y productos l cteos M xico 32 p Perotti M C S R Rebechi and S M Bernal 2005 Detection of adulterations in milk fat by multiple regression analysis of total fatty acids profile Grasas y Aceites 56 67 74 Pinto M C P Fern ndez de la Reguera y B S Villanueva 1987 Detecci n y cuantificaci n de adulteraciones en grasa l ctea An lisis de regresi n m ltiple Agro Sur 15 32 38 Pinto M C M O Contreras E R Carrasco C C Brito L H C Molina K A Shun KA y S L Vega 2002 Determina ci n de la autenticidad de grasas l cteas An lisis discriminante lineal de triacilglic ridos Agro Sur 30 59 67 Precht D 1991 Control of milk fat purity by gas chromatographic triglyceride analysis Kieler Milchwirtschaftliche Forschungsberichte 43 219 242 Precht D 1992 Detection of foreign fat in milk fat Lebensm Unters Forsch 194 107 114 Romero N P P C Robert L S Masson y R L Pineda 2000 Composici n en cidos grasos y proximal de siete especies de pescado de Isla de Pascua Arch Latin Nutr 50 304 308 GUTI RREZ TOLENTINO et al 741 AGROCIENCIA 1 d
10. a grasas puras Con el aceite de pescado y sebo como adulterantes no se lograron niveles aceptables de clasificaci n correcta Para las muestras adulteradas en 5 se clasific correctamen te 75 3 del total Cuando los adulterantes fueron manteca y aceites de canola y girasol los niveles de clasificaci n correcta fueron cercanos a los obtenidos por Timms 1980 y Pinto et al 1987 quienes utili zaron el an lisis de regresi n m ltiple para identificar adulteraciones de la GL con grasas extra as CONCLUSIONES El an lisis por cromatograf a de gases de la grasa de leche de vaca producida en el Altiplano Mexicano revel la presencia de triacilgliceroles de C28 has ta C54 Cuando se estudiaron mezclas 100 0 95 5 90 10 85 15 y 80 20 de grasa l ctea con grasa no l ctea de origen vegetal aceites de canola y girasol y de origen animal aceite de pescado manteca y sebo de vacuno se encontraron modificados los perfiles de triacilgliceroles Con base en ello a trav s de un an lisis de regresi n lineal m ltiple y usando variables potenciales de predicci n de adulteraci n C42 C44 C46 C52 y C54 aceite de pescado C40 C42 C44 C50 C52 y C54 aceites de canola y girasol y sebo y C34 C36 C38 C40 C48 C50 C52 y C54 man teca se desarrollaron ecuaciones que detectaron 75 3 y 98 11 de los casos estudiados para adulteraciones de 5 y 10 LITERATURA CITADA Boghra V R and V N Borkhatriya 2004 Detec
11. analysis different levels of adulteration were considered using as adulterant each one of the NMF as follows Group 1 samples of pure milk fat 0 adulteration Group 2 adulterated samples by 5 95 MF andy 5 NMF Group 3 adulterated samples by 10 90 MF and 10 NMEF Group 4 adulterated samples by 15 85 MF and 15 NMEF Group 5 adulterated samples by 20 80 MF and 20 NMF Preparing adultered samples The procedure for the samples of pure milk fat adulterated in different levels of non milk fats was based on the following simulation formula Timms 1980 Pinto et al 2002 CME xc 40 x CPM where x non milk fat fraction C percentage of TAG with carbon number i MIX NMF PMF mixture non milk fat and pure milk fat The application procedure of the formula can be more easily explained through an example assuming that the PMF for sample i was adulterated in 10 with NMF and that the TAG with carbon number 40 C40 is present in the PMF in 11 25 and in the NMF in 0 75 then the of the C40 in the mixture is DETECCION DE GRASA EXTRANA EN GRASA LACTEA POR CROMATOGRAFIA DE GASES Y ESTADISTICA MULTIVARIABLE con carbono n mero 40 C40 est presente en la GLP en 11 25 y en la GNL en 0 75 entonces el del C40 en la mezcla es c40 FZ 0 1 0 75 0 1 11 25 10 22 T cnicas estadisticas utilizadas Exploraci n de datos estad stica descriptiva an lisis de va rianza segui
12. and unsaturated FA with 16 and 18 carbons Kallio et al 2001 Destaillast et al 2006 Detection of non milk fat in milk fat multiple regression and its application in the detection of adulterations in milk fat For the optimum use of the MLR analysis a step by step selection was made of the potentially predictive variables The equations found for the criterion Y 100 arbitrary value assigned to authentic MF as well as the standard errors and the determination coefficients were as follows 1 Fish oil Y 1 71C42 11 76C44 1 93C46 3 13C52 0 25C54 standard error 4 30 R 0 99 2 Canola and sunflower oils tallow Y 4 24C38 2 18C40 2 33C42 2 19C44 0 03C48 2 86C50 0 69C52 2 20C54 standard error 1 06 R 0 99 DETECCION DE GRASA EXTRANA EN GRASA LACTEA POR CROMATOGRAFIA DE GASES Y ESTADISTICA MULTIVARIABLE Cuadro 2 Intervalos de concentraciones de triacilgliceroles p p presentes en grasas l cteas de varios pa ses Table 2 Intervals of concentrations of triacylglycerols p p present in milk fat of various countries TAG M xico Espa a EE UU B lgica Alemania Chile C28 0 0 1 2 0 5 0 7 0 3 13 0 5 0 8 0 4 0 8 0 3 1 4 C30 0 1 2 4 0 9 1 2 0 7 15 0 9 1 6 0 8 1 6 0 6 2 1 C32 0 1 4 8 1 9 2 7 1 8 4 0 2 0 3 3 1 6 3 8 1 7 3 5 C34 1 5 7 2 4 7 6 1 4 0 8 0 4 8 6 5 3 9 7 9 4 6 6 9 C36 2 3 13 6 9 1 10 7 9 0 14 0 9 3 11 5 8 2 13 8 9 0 13 1 C38 6 7 19 0 11 6 12 6 10 0
13. do de la prueba de Tukey regresi n lineal simple y m ltiple Se us el paquete estad stico SPSS 1997 RESULTADOS Y DISCUSI N Triacilgliceroles presentes en grasa l ctea Las condiciones cromatogr ficas permitieron obte ner en grasa de leche cruda picos bien desarrollados desde los TAG de peso molecular PM bajo C28 a C32 hasta los de PM alto C34 a C54 Los perfiles presentaron un comportamiento bimodal la primera moda se present en C38 y la segunda en C52 C44 fue el l mite entre ambas zonas modales Figura 1 Estos resultados son semejantes a los publicados por Precht 1992 Destaillast ef al 2006 y Fontecha ef al 2006 Los valores medios y las desviaciones est ndar de las variables C28 a C54 para las tres reas de mues treo se presentan en el Cuadro 1 Hubo significancia estad stica para los TAG C28 C40 C42 C44 C46 C50 y C52 de las grasas l cteas del D F y el Estado de M xico Para el Estado de Hidalgo se encontr diferencia significativa p lt 0 05 en C28 con respecto al D F y en el conjunto de C40 C42 C44 C50 y C52 con relaci n al Estado de M xico Por tanto para 01 3 R 0 Leche cruda 0 0 a 0 Re V al 3 1S m i 3 0 0 07 00 A 07 os Waa 0 5 0 10 0 15 0 20 0 25 0 30 0 Tiempo de retenci n min o c40 0 D0 0 7I F 4 10 011 259 10 22 Statistical methods employed Exploration of data descr
14. e octubre 15 de noviembre 2007 SPSS 1997 Gu a del Usuario del Sistema Base de SPSS 7 5 para Windows Irlanda 462 p Timms R E 1980 Detection and quantification of non milk fat in mixtures of milk and non milk fats J Dairy Res 47 295 303 Ulberth F and M Buchgraber 2000 Aunthenticity of fat and oils Eur J Lipid Sci Technol 102 687 694 742 VOLUMEN 41 N MERO 7 Van Renterghem R 1997 The triglyceride composition of belgiam butter in view of EU controls on milk fat Milchwissenschaft 52 79 82 Vega S N P rez M Pinto G D az Gonz lez R Guti rrez G Urb n M M Gonz lez G Prado y A Ram rez 1999 Com posici n en cidos grasos y triglic ridos de leche pasteurizada comercializada en la Ciudad de M xico Rev Salud Anim 21 1 4
15. f a de gases con de tector de ionizaci n de flama los TAG identificados oscilaron entre 28 y 56 tomos de carbono Se mezcl GL con las GNL 95 5 90 10 85 15 y 80 20 Se hizo un an lisis de regresi n lineal m ltiple y se obtuvieron tres ecuaciones para las GNL 1 Y 1 71C42 11 76C44 1 93C46 3 13C52 0 25C54 acei te de pescado 2 Y 4 24C38 2 18C40 2 33C42 2 19C44 0 03C48 2 86C50 0 69C52 2 20C54 aceites de canola y girasol sebo 3 Y 2 41C34 1 37C36 0 30C38 2 67C40 3 63C48 0 69C50 1 70C52 0 71C54 manteca Con esas ecuaciones se detectaron 75 3 y 98 11 de los casos cuando las adulteraciones con GNL fueron 5 y 10 Palabras clave Adulteraci n grasa l ctea grasa no l ctea regre si n lineal m ltiple INTRODUCCI N n varios pa ses es ilegal incorporar grasa no l ctea GNL a la leche y productos l cteos Ulberth y Buchgraber 2000 Boghra y Bor khatriya 2004 Perotti et al 2005 En M xico la Norma Oficial Mexicana NOM 155 SCFI 2003 Leche f rmula l ctea y producto l cteo combina do Denominaciones especificaciones fisicoqu micas Recibido Octubre 2006 Aprobado Julio 2007 Publicado como ART CULO en Agrociencia 41 733 742 2007 733 ABSTRACT The addition of non milk fat NMF to milk and its derivates is considered to be an adulteration of the product The objective of our study was to develop a statistical methodology that will make it possible to detect NMF in mixt
16. fidence intervals of the prediction p lt 0 05 Table 4 To test the sensitivity of the regression equations 1 to 3 the values YMEZ were calculated that is the response given by the equations 1 to 3 when an adulterated mixture at different levels is introduced Next the number of samples was determined within the confidence intervals 1 to 3 defined for the pure MF with respect to the adulterant The percentages of correct classification in the adulteration of the MF are shown in Table 4 Taking into account the confidence intervals for pure MF at a level of 95 100 of the samples adulterated with 10 15 and 20 of canola and sunflower oils and lard were correctly classified that in all of the values YMEZ were outside of the intervals defined for pure fats With fish oil and tallow as adulterants acceptable levels of correct classification were not obtained For the samples adulterated at 5 75 3 of the total was correctly classified When the adulterants were lard and canola and sunflower oils the levels of correct classification were close to those obtained by Timms 1980 and Pinto ef al 1987 who used multiple regression analysis to identify adulterations of MF with foreign fats CONCLUSIONS The analysis by gas chromatography of the bovine milk fat produced in the Mexican Highland revealed the presence of triacylglycerols of C28 to C54 When studies were made of mixtures 100 0 95 5 90 10 85 15 and 80 20 of milk
17. g Authenticity of milk fat J Dairy Sci 89 882 887 Frank C E H Smith H E Brauwn A Holdrinet and J W Mc Wade 1975 Organochlorine insecticides and industrial pollutants in the milk supply of the Southerm Region of Ontario Canada J Milk Food Technol 38 65 72 Guti rrez R G G D az S Vega y Le n I M ndez G H J Delgadillo F N P rez y C M Pinto 2004 Determinaci n de los niveles de triacilgliceroles p p presentes en grasas de origen animal y vegetal Agro Sur 32 68 75 Jensen R J 2002 The composition of bovine milk lipids january 1995 to december 2000 J Dairy Sci 85 295 350 Ju rez M 1991 Criterios anal ticos para establecer la genuinidad de la grasa de leche Rev Espa ola de Lecher a 30 34 Kallio H K J Yli J P Kurvinen O Sj vall and R Tahvonen 2001 Regioisomerism of triacylglycerols in lard tallow chicken skin palm oil palm olein palm estearin and a transesterified blend of palm stearin and coconut oil analyzed by tandem mass spectrometry J Agric Food Chem 49 3363 3369 Kumar A L Darshan S Raman and S Rajan 2002 Recent trends in detection of adulteration in milk fat a rewiev Ind J Dairy Sci 55 319 330 Norma Oficial Mexicana NOM 155 SCFI 2003 Leche f rmula l ctea y producto l cteo combinado Denominaciones especifi caciones fisicoqu micas informaci n comercial y m todos de prueba M xico 46 p Norma Mexicana NMX F 707 COF
18. ga et al 1999 D az et al 2002 Guti rrez et al 2004 Pero en la literatura revisada no se encontr informaci n para grasa de leche cruda la combinaci n del perfil de triacilgliceroles y modelos estad sticos lineales en la aplicaci n de detecci n de GNL en leche y pro ductos l cteos Por tanto el objetivo de este trabajo fue desarrollar un modelo estad stico de regresi n l neal m ltiple basado en el an lisis de TAG por cro matograf a de gases que caracterice a la grasa l ctea pura La sensibilidad de las ecuaciones de regresi n se prob en muestras de grasa l ctea adulteradas con grasas no l cteas vegetal y animal 5 10 15 y 20 MATERIALES Y M TODOS Toma de muestra Grasa de leche cruda Se recolectaron 216 muestras de 1 L cada 15 d durante 12 meses de dos unidades de producci n del Distrito Federal D F n 49 se obtuvo una muestra adicional cuatro del Estado de M xico n 107 se obtuvo 11 muestras adicionales y tres del Es tado de Hidalgo n 60 en ocasiones no se complet el muestreo en las tres unidades de producci n La toma de muestras se realiz seg n la metodolog a de la FIL IDF 1995 y de la Norma Mexi cana NMX F 718 COFOCALEC 2006 La materia grasa se extrajo 734 VOLUMEN 41 N MERO 7 However in some milk products it is possible to add NMF of vegetable origin when it is specified in the information on the label otherwise it is considered adulteration To verify the authen
19. grados se normalizaron de acuerdo con los factores de correcci n determinados para los est ndares C24 C30 C36 C42 y C48 considerando que el C36 trilaurina es re cuperado completamente de la columna Los factores de correcci n para cada uno de los restantes TAG se calcularon con la ecuaci n Pinto et al 1987 fi Cy 10 x 4 Asi donde fi factor de correcci n del TAG i A rea de trilaurina A trilaurina C concentraci n mg mL del TAG est ndar i Los sj rea del TAG est ndar i C concentraci n mg mL de Samples of non milk fat a Oils Two samples were obtained of 250 mL of each of the following oils fish canola and sunflower acquired in oil industries in the Federal District b Lard and beef fat Two samples were obtained of lard and two of tallow 100 g each in popular markets of the Federal District The fatty material was extracted and purified in a way similar to that proposed for butter by the International Dairy Federation FIL IDF 1995 Preparation of triacylglycerols According to the technique of Firestone 1986 50 mg of fat were weighed in 5 mL jars with hermetic cover and were dissolved in 2 5 mL of hexane One uL of the solution was injected into the gas chromatograph The milk lipids contain 97 to 98 of triacylglycerols Jensen 2002 Chromatographic analysis The analysis of TAG by gas chromatography GC was carried out in a Perkin Elmer Autosystem 9000 ga
20. iendo que la GLP para la muestra fue adulterada en 10 con GNL y que el TAG 736 VOLUMEN 41 N MERO 7 retention time of each peak of TAG and as independent variable the corresponding number of carbons The equation of the straight line found was used to determine the retention times of the rest of TAG The interval of the correction factors was 0 96 to 1 15 which is accepted for the correction of the values of TAG Pinto et al 1987 Correction factors higher than 1 15 are unsatisfactory and the carrier gas flow is increased to obtain acceptable factors Description of data and variables The independent variables x were defined as percentage of TAG with number of carbon j Two groups of data were formed 1 milk fats 14 variables from TAG of C28 to C54 2 non milk fats 4 to 6 variables from TAG of C36 to C56 depending on the type of fat studied For the analysis of multiple linear regression MLR Y was defined as degree of purity contained by a milk fat and therefore is a categorical variable Thus a value of 100 was assigned to define pure milk fat due to the fact that it is 100 pure 0 adulterated Thus when testing the regression equation found in the adulterated milk fats of 5 10 15 and 20 the Y response was 95 90 85 and 80 The value 100 is arbitrary and chosen because it is easy to interpretate the response when adulterated milk fats are involved Population of data To define groups used in the MLR
21. imal 5 10 15 and 20 MATERIALS AND METHODS Taking samples Raw milk fat A collection was made of 216 samples of 1 L every 15 d during 12 months from two production units of the Federal District n 49 an additional sample was obtained four from the State of M xico n 107 11 additional samples were obtained and three from the State of Hidalgo n 60 at times the sampling was not completed in the three production units The taking of samples was carried out according to the methodology proposed by the FIL IDF 1995 and by Norma Mexicana NMX F 718 COFOCALEC 2006 The fatty material was extracted using a detergent Frank et al 1975 and was kept at 20 C until its analysis DETECCION DE GRASA EXTRANA EN GRASA LACTEA POR CROMATOGRAFIA DE GASES Y ESTADISTICA MULTIVARIABLE usando un detergente Frank et al 1975 y se conserv a 20 C hasta su an lisis Muestras de grasa no l ctea a Aceites Se obtuvo dos muestras de 250 mL de cada uno de los siguientes aceites pescado canola y girasol adquiridos en industrias aceiteras en el Distrito Federal M xico b Manteca y sebo Se obtuvo dos muestras de manteca y dos de sebo 100 g cada una en mercados populares del D F La ma teria grasa se extrajo y purific de forma similar al tratamiento propuesto para mantequilla por la Federaci n Internacional de Lecher a FIL IDF 1995 Preparaci n de triacilgliceroles De acuerdo con la t cnica de Firestone 198
22. iptive statistics variance analysis followed by the Tukey test simple and multiple linear regression were the statistical methods employed The statistical package used was SPSS 1997 RESULTS AND DISCUSSION Triacylglycerols present in milk fat The chromatographic conditions made it possible to obtain well developed peaks in raw milk fat from the TAG of low C28 to C32 molecular weight MW to those of high C34 to C54 MW The profiles presented a bimodal behaviour the first mode appeared in C38 and the second in C52 C44 was the limit between the two modal zones Figure 1 These results are similar to those published by Precht 1992 Destaillast et al 2006 and Fontecha ef al 2006 The mean values and the standard deviation of the variables C28 to C54 for the three sampling areas are shown in Table 1 There was statistical significance for TAG C28 C40 C42 C44 C46 C50 and C52 of the milk fats of the Federal District and the State of Mexico For the State of Hidalgo significant difference was found p lt 0 05 in C28 with respect to the Federal District and in the group of C40 C42 C44 C50 and C52 with respect to the State of M xico Therefore for the States of M xico and Hidalgo there is different behaviour in the TAG which form 18 16 14 12 10 p p 8 6 4 i om E ASSase ees is FRA O U U U YD O O Triacilglicerol Figura 1 a Cromatograma de triacilgliceroles
23. le milk for human consumption should contain only milk fat and comply with the specifications of its denomination AGROCIENCIA 1 de octubre 15 de noviembre 2007 informaci n comercial y m todos de prueba esta blece que la leche entera para consumo humano debe contener s lo grasa propia de la leche y cumplir con las especificaciones de su denominaci n Sin embar go en algunos productos l cteos es posible adicionar GNL de origen vegetal si se especifica en la infor maci n de la etiqueta de lo contrario se considera adulteraci n Para comprobar la autenticidad de la grasa de le che se emplean t cnicas cromatogr ficas para determi nar la composici n de cidos grasos AG triacilgli ceroles TAG y algunas fracciones del insaponificable Juarez 1991 Destaillats et al 2006 Fontecha et al 2006 La presencia de GNL de origen vegetal se detecta f cilmente por an lisis de los fitosteroles f sitosterol campesterol stigmasterol brassicasterol hasta 1 de concentraci n con un nivel de confianza mayor a 95 FIL IDF 1970 NMX F 707 COFO CALEC 2004 Sin embargo la adici n de hasta 10 de GNL de origen animal como aceite de pescado sebo y manteca es dif cil de detectar con un nivel de confianza aceptable Pinto et al 1987 Kumar et al 2002 Perotti et al 2005 En M xico se ha estudiado la caracterizaci n li pidica de leches en polvo y pasteurizada particular mente la composici n de AG y TAG Ve
24. os se deben a que el contenido de AG de cadena larga en la mol cula del TAG es alto princi palmente AG saturados e insaturados con 16 y 18 car bonos Kallio ef al 2001 Destaillast ef al 2006 Detecci n de grasa no l ctea en grasa l ctea regresi n m ltiple y su aplicaci n en la detecci n de adulteraciones en grasa l ctea Para la utilizaci n ptima del an lisis de RLM se seleccionaron paso a paso las variables potencialmente predictoras Las ecuaciones encontradas para el crite rio Y 100 valor arbitrario asignado a GL aut ntica as como los errores est ndar y los coeficientes de determinaci n fueron 1 Aceite de pescado Y 1 71C42 11 76C44 1 93C46 3 13C52 0 2 5C54 error estandar 4 30 R 0 99 Y 2 41C34 1 37C36 0 30C38 2 67C40 3 63C48 0 69C50 1 70C52 0 71C54 standard error 0 81 R 0 99 According to the analysis of MLR the errors present an approximately normal distribution Thus the confidence intervals of the prediction for the averages of the pure milk fats with respect to the type of adulterating fat were formed using the following formula 100 1 1 0 975 Se where 100 constant for pure milk fat value of the statistic S standard error of the regression The confidence intervals with 95 probability were 1 Fish oil 91 49 108 51 2 Canola and sunflower oils tallow 97 9 102 1 3 Lard 98 4 101 6 GUTI RREZ TOLENTINO et al 739 AGROCIENCIA 1 de octubre 15 de n
25. oviembre 2007 2 Aceites de canola girasol sebo Y 4 24C38 2 18C40 2 33C42 2 19C44 0 03 C48 2 86C50 0 69C52 2 20C54 error est n dar 1 06 R 0 99 Manteca Y 2 41C34 1 37C36 0 30C38 2 67C40 3 63 C48 0 69C50 1 70C52 0 71C54 error est n dar 0 81 R 0 99 3 De acuerdo con el an lisis de RLM los errores presentan distribuci n aproximadamente normal De esta manera los intervalos de confianza de la predic ci n para los promedios de las GL puras con relaci n al tipo de grasa adulterante se formaron usando la siguiente f rmula 100 n p 0 975 Se donde 100 constante para grasa l ctea pura t valor del estad stico f S error est ndar de la re gresi n Los intervalos de confianza con 95 de probabili dad fueron 1 Aceite de pescado 91 49 108 51 2 Aceites de canola girasol sebo 97 9 102 1 3 Manteca 98 4 101 6 De los 216 casos de GL pura 93 4 a 97 4 es tuvieron dentro de los intervalos de confianza de la predicci n p lt 0 05 Cuadro 4 Para probar la sensibilidad de las ecuaciones de regresi n 1 a 3 se calcularon los valores YMEZ es decir la respuesta dada por las ecuaciones 1 a 3 al introducirles una mezcla adulterada en diferentes nive les Luego se determin el n mero de muestras dentro de los intervalos de confianza 1 a 3 definidos para las GL puras con relaci n al adulterante En el Cuadro Of the 216 cases of pure MF 93 4 to 97 4 were within the con
26. s chromatograph with flame ionization detector and PE Nelson model 1022 area integrator The operating conditions were as follows phenyl methyl silicon column at 5 with intermediate polarity HP5 and length of 2 mx0 25 D I x0 25 layer thickness injector temperature 340 C detector temperature 350 C carrier gas flow He 1 mL min oven temperature program 1 200 C 0 min with increases of 5 C min to 325 C 1 325 C 6 min total run time 31 min injection mode splitless purge time 0 75 min injection volume 1 uL The results were corrected by using a standard mixture of five TAG 20 each one with purity of over 99 Sigma 178 11 concentration of 20 mg mL in hexane of tricaprylin C24 tricaprin C30 trilaurin C36 trimyristin C42 tripalmitin C48 To identify and quantify the TAG a comparison was made of the chromatograms retention times and peak areas obtained from the milk fat with the chromatogram of the standard mixture The percentages of TAG obtained were normalized according to the correction factors determined by the standards C24 C30 C36 C42 and C48 considering that the C36 trilaurin is completely recovered from the column The correction factors for each of the remaining TAG were calculated from the following equation Pinto et al 1987 fi C C x A Asi where fi correction factor of the TAG i A area of trilaurin A area of the standard TAG 7 C concentration mg mL
27. ticity of milk fat chromatographic techniques are used to determine the composition of fatty acids FA triacylglycerols TAG and some unsaponifiable fractions of the milk fat Juarez 1991 Destaillats et al 2006 Fontecha et al 2006 The presence of NMF of vegetable origin is easily detected through analysis of the phytosterols 6 sitosterol campesterol stigmasterol brassicasterol up to a concentration of 1 with a confidence level of over 95 FIL IDF 1970 NMX F 707 COFO CALEC 2004 However the addition of up to 10 of NMF of animal origin such as fish oil tallow and lard is difficult to detect with an acceptable confidence level Pinto et al 1987 Kumar et al 2002 Perotti et al 2005 In M xico studies have been made of the lipidic characterization of powder and pasteurized milk especially the composition of FA and TAG Vega et al 1989 Diaz et al 2002 Guti rrez et al 2004 However no information was found in the literature reviewed for raw milk fat the combination of the triacylglycerols profile and linear statistical models in the application of the detection of NMF in milk and milk products Therefore the objective of the present study was to develop a multiple linear regression model based on the analysis of TAG by gas chromatography to characterize pure milk fat The sensitivity of the regression equations obtained was tested in samples of milk fat adulterated with non milk fat vegetable and an
28. tion of vegetable oils in milk and milk fat by a rapid method J Food Sci Technol Mysore 41 461 464 Destaillats F M de Wispelaere F Joffre P A Golay B Hug F Giuffrida L Fauconnot and F Dionisi 2006 Authenticity of milk fat by fast analysis of triacylglicerols application to the detection of partially hydrogenated vegetable oils J Chromatogr A 1131 227 234 Diaz G R Guti rrez N P rez S Vega y Leon M Gonzalez G Prado G Urban A Ram rez y M Pinto 2002 Detecci n de adulteraciones en la grasa de leche pasteurizada mexicana Rev Salud Anim 24 54 59 FIL IDF International Dairy Federation 1970 Detection of vegetables fat in milk fat by gas liquid chromatography of sterols Bull 54 Brussels Belgium 6 p FIL IDF International Dairy Federation 1995 Milk and milk products Guidance sampling FIL IDF Standard 50C Brussels Belgium 19 p oil C40 C42 C44 C50 C52 and C54 canola and sunflower oils and tallow and C34 C36 C38 C40 C48 C50 C52 and C54 lard equations were developed that detected 75 3 and 98 11 of the cases studied for adulterations of 5 and 10 End of the English version Firestone P 1986 Triglycerides in fats and oils gas chromatography method IUPAC AOAC method J Assoc Anal Chem 69 346 365 Fontecha J G T Mayo and M Ju rez 2006 Triacylglicerol composition of protected designation of origin cheeses during ripenin
29. ures of NMF with milk fat MF A sampling was made of raw milk from the Mexican Highlands every 15 d during one year total 216 samples The samples of NMF included two for each oil fish sunflower and canola as well as two of lard and tallow The percentages p p of triacylglycerols TAG in each fatty material were obtained by gas chromatography with flame ionization detector the identified TAG varied between 28 and 56 carbon atoms MF was mixed with the NMF 95 5 90 10 85 15 and 80 20 A linear multiple regression analysis was made and three equations were obtained for the NMF 1 Y 1 71C42 11 76C44 1 93C46 3 13C52 0 25C54 fish oil 2 Y 4 24C38 2 18C40 2 33C42 2 19C44 0 03C48 2 86 C50 0 69C52 2 20C54 canola and sunflower oils tallow 3 Y 2 41C34 1 37C36 0 30C38 2 67C40 3 63C48 0 6 9C50 1 70C52 0 71C54 lard With these equations 75 3 and 98 11 of the cases were detected when the adulterations with NMF were 5 and 10 Key words Adulteration milk fat non milk fat multiple linear regression INTRODUCTION t is illegal in several countries to incorporate non milk fat NMF to milk and dairy products Ulberth and Buchgraber 2000 Boghra and Borkhatriya 2004 Perotti ef al 2005 In M xico the Norma Oficial Mexicana NOM 155 SCFI 2003 Milk milk formula and combined milk product Denominations physiochemical specifications commercial information and testing methods establishes that who
30. what was reported by Timms 1980 Pinto ef al 1987 and Fontecha et al 2006 for Australian Chilean and Spanish milk fats The intervals of the global composition of TAG p p of fat in milk produced in the three sampling areas and others reported in the literature are described in Table 2 According to the statistics obtained for each area it was considered that these values are predictors of the triglyceric composition of the fat in milk produced in the Mexican Highlands The variability of the results of our study was higher than in that of the results published by investigators of other countries Table 2 The mean values of TAG p p of the NMF studied are shown in Table 3 Fish oil presented a complex mixture with TAG between C46 and C56 with a proportion of 70 59 for the group of C50 C52 and C54 and presents FA with chain length C14 to C22 and with different degrees of instauration Thus like milk fat it offers a large amount of molecular species Pinto ef al 1987 Romero ef al 2000 The lard was characterized by the fact that the group of C50 C52 and C54 reached 97 61 while in tallow the TAG C50 C52 and C54 represented 85 43 The vegetable oils had the highest proportion in the sum of C52 and C54 the minimum value was for sunflower oil 92 15 and the maximum for canola oil 97 61 These results are due to the fact that the content of long chain FA in the molecule of the TAG is high principally saturated
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