HL-2-1436P_2007-06(5) [Titan III acetate].qxp
Contents
1. helena Biosciences Europe Partners in Good Science TITAN III Serum Protein Electrophoresis Instructions For Use REF 3023 lectrophor se des prot ines s riques TITAN III Fiche technique TITAN III Serum Protein Elektrophorese Anleitung Elettroforesi delle proteine sieriche TITAN III Istruzioni per l uso Electroforesis de proteinas s ricas de TITAN m Instrucciones de uso Contents English I Frangais 7 Deutsch 13 Italiano 19 Espafiol 25 TITAN Ill SERUM PROTEIN ELECTROPHORESIS INTENDED PURPOSE The Helena Serum Protein Electrophoresis procedure is intended for the separation and quantitation of serum proteins by elsctrophoresis on cellulose acetate Serum contains over one hundred individual proteins each with a specific set of functions and subject to specific variation in concentration under different pathologic conditions Since the introduction of moving boundary electrophoresis by Tiselius and the subsequent use of zone electrophoresis serum proteins have been fractionated on the basis of their electrical charge into five classical fractions albumin alpha alpha beta and gamma proteins Each of these classical electrophoretic zones with the exception of albumin normally contains two or more components Approximately fifteen serum proteins have been studied extensively because they may be measured easily Proteins are large molecules composed of covalently linked amino acids Depending on el2. 220 V R f 5205 Manuel d lectrophor se R f 5211 Fiches de r sultats de prot ines s riques R f 5000 Marqueur Helena R f 5109 Graphique de contr le qualit R f 5015 Etiquettes d identification Titan R f 5002 Baton de colle METHODOLOGIE Identifier correctement le nombre n cessaire de plaques Titan Ill en crivant sur le c t dur et brillant Mylar avec un marqueur Helena BioSciences Il est recommand de placer la marque d identification dans un coin de sorte qu elle soit toujours align e avec l chantillon n Tremper les plaques dans le tampon HR reconstitu pendant 20 minutes Elles doivent tre tremp es dans le bac tampon Bufferizer en suivant les instructions fournies Sinon il est possible d imbiber les plaques en plongeant lentement et uniform ment un support de plaques dans le tampon de sorte qu il ne reste pas d air REMARQUE Le m me tampon de trempage peut tre utilis pour imbiber 12 plaques et il se conserve environ une semaine dans un r cipient herm tiquement ferm S il est utilis pendant une p riode plus longue il risque de se produire une accumulation de solvants r siduels provenant des plaques ou une vaporation ce qui modifierait la concentration du tampon Verser environ 100ml de tampon HR dilu dans chaque compartiment ext rieur de la chambre Humidifier deux ponts papier jetables dans le tampon et en d poser un sur chaque pont du support en veillant ce qu ils soient bi
3. Dissoudre un sachet de tampon sec dans 750 ml d eau distill e Le tampon est pr t l emploi lorsque la dissolution est compl te et qu il est bien m lang 3 R actif d claircissement r f 5005 Contient du poly thyl ne glycol Pour pr parer la solution d claircissement m langer 30 volumes d acide ac tique glacial 70 volumes de m thanol absolu et 4 volumes de r actif d claircissement Remuer jusqu qu elle soit bien m lang e 4 Plaque d acetate de cellulose Titan III r f 3023 ou 3024 Contient une plaque d ac tate de cellulose La fiche technique indique la proc dure de pr paration 5 Autres composants du kit Chaque kit contient une fiche technique 7 Francais STOCKAGE ET CONSERVATION I Colorant Ponceau S r f 5526 Le colorant peut tre conserv dans son emballage d origine ou dans un bac de coloration herm tiquement ferm entre 15 30 C Le colorant non utilis est stable jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette Une vaporation excessive ou l apparition de grandes quantit s de pr cipit s indique une d t rioration du produit 2 Tampon Electra HR r f 5805 Le tampon non reconstitu est stable jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette Apr s reconstitution le tampon est stable 2 mois entre 15 30 C s il est conserv herm tiquement S il pr sente des signes d humidit ou de d coloration ou s il devient trouble cela indique une d t riorat
4. N Cat 1030 para asegurar la linealidad del instrumento y debe usarse un est ndar de densit metro de densidad neutra para validar el ajuste a cero y la sensibilidad del instrumento INTERPRETACI N DE RESULTADOS La banda de movimiento m s r pido y normalmente la m s prominente es la banda de alb mina que se encuentra m s pr xima al borde an dico de la placa La banda tenue siguiente a sta es la alfal globulina seguida por la alfa2 globulina y las globulinas beta y gamma 28 ELECTROFORESIS DE PROTE NAS S RICAS DE TITAN IIIe C lculo de los desconocidos El densit metro CliniScan de Helena BiosSciences y otros densit metros de Helena BioSciencies con accesorios de ordenador imprimir n autom ticamente el porcentaje relativo y los valores absolutos para cada banda Otra alternativa es calcular manualmente el porcentaje relativo de cada banda a partir de la escala del integrador en el estudio Consultar el manual del operador suministrado con el densit metro El porcentaje relativo de cada banda se calcula mediante la siguiente f rmula N de unidades de integraci n de la banda x 100 Porcentaje relativo de la banda Unidades totales de integraci n Porcentaje relativo de la banda x prote na s rica total Valor absoluto de prote na en cada banda CONTROL DE CALIDAD Se dispone de dos tipos diferentes de materiales de control de calidad del intervalo normal para usar con los kits de electroforesis en las prote
5. cido ac tico cristalizado con 950 ml de agua destilada Metanol absoluto grado reactivo N Cat 3024 Placas de acetato de celulosa Titan Ill 94 x 76 mm N Cat 3023 Placas de acetato de celulosa Titan III 60 x 76 mm N Cat 4084 Aplicador Super Z N Cat 4090 Aplicador Super Z 12 N Cat 4085 Placa del pozo de muestra Super Z 12 2 N Cat 4096 Placa del pozo de muestra Super Z 12 2 N Cat 4094 Base de alineamiento Super CPK N Cat 4086 Base de alineamiento Super Z N Cat 5114 Equipo de tinci n 700 26 ELECTROFORESIS DE PROTE NAS S RICAS DE TITAN IIIe N Cat 5122 Equipo de tinci n 1000 N Cat 5526 Ponceau S N Cat 5093 Tamponizador N Cat 5005 Ayuda de limpieza N Cat 5090 Prep Zip Zone N Cat 1283 C mara Zip Zone N Cat 5081 Mechas de Camara Zip Zone N Cat 5037 L minas secantes 102 x 108 mm N Cat 5034 Laminas secantes 76 x 102mm N Cat 5805 Tamp n HR Electra N Cat 5053 Sobres de pl stico Titan 102 x 120 mm N Cat 5052 Sobres de pl stico Titan 63 x 120 mm N Cat 6008 Microdispensador y tubos N Cat 8008 Micro Caperuza 220 V N Cat 5205 Manual de electroforesis N Cat 5211 Impresos de informes de prote nas s ricas N Cat 5000 Marcador Helena N Cat 5109 Gr fica de Control de calidad N Cat 5015 Etiquetas de identificaci n Titan N Cat 5002 Palo de pegamento PROCEDIMIENTO PASO A PASO Codificar adecuadamente el n mero necesario de
6. 5005 Clear Aid Cat Cat Cat Cat Cat Cat Cat Cat Cat Cat Cat Cat Cat Cat Cat Cat TITAN Ill SERUM PROTEIN ELECTROPHORESIS No 5090 Zip Zone Prep No 1283 Zip Zone Chamber No 5081 Zip Zone Chamber Wicks No 5037 Blotter Pads 102 x 108 mm No 5034 Blotter Pads 76 x 102mm No 5805 Electra HR Buffer No 5053 Titan Plastic Envelopes 102 x 120 mm No 5052 Titan Plastic Envelopes 63 x 120mm No 6008 Microdispenser and Tubes No 8008 Micro Hood 220V No 5205 Electrophoresis Manual No 5211 Serum Protein Report Forms No 5000 Helena Marker No 5109 Quality Control Chart No 5015 Titan Identification Labels No 5002 Glue Stick STEP BY STEP PROCEDURE w Properly code the required number of Titan III Plates by marking on the glossy hard Mylar side with a Helena BioSciences marker It is suggested that the identification mark be placed in one corner so that it is always aligned with sample No Soak the plates for 20 minutes in diluted HR buffer The plates should be soaked in the Bufferizer according to the instructions for use included with the Bufferizer Alternatively the plates may be wetted by slowly and uniformly lowering a rack of plates into the buffer such that air is not trapped in the plates NOTE The same soaking buffer may be used for soaking up to 12 plates or for approximately one week if stored tightly closed If used for a more prolonged period residual solvents fro
7. Techniques 437 Harper and Row Hagerstown 1974 7 Killingsworth L M Plasma Protein Patterns in Health and Disease CRC Crit Rev in Clin Lab Sci 1 30 August 1979 24 ELECTROFORESIS DE PROTE NAS S RICAS DE TITAN IIIe USO PREVISTO El procedimiento de electroforesis de prote nas s ricas de Helena tiene como objeto la separaci n y cuantificaci n de las prote nas s ricas mediante electroforesis en acetato de celulosa El suero contiene m s de cien prote nas individuales cada una de ellas con una serie de funciones espec ficas que est n sujetas a variaciones en su concentraci n bajo diferentes condiciones patol gicas Desde que Tiselius introdujera la electroforesis de l mites m viles y el uso posterior de la electroforesis por zonas se han separado las prote nas s ricas de acuerdo con su carga el ctrica en cinco fracciones cl sicas alb mina prote nas gamma alfal alfa2 y beta Cada una de las zonas electrofor ticas cl sicas con la excepci n de la alb mina contiene normalmente 2 o m s componentes Se han estudiado aproximadamente quince prote nas s ricas porque se pueden medir con facilidad Las prote nas son mol culas grandes compuestas de amino cidos unidos de forma covalente Dependiendo de las distribuciones de los electrones que se producen de enlaces covalentes o i nicos de subgrupos estructurales las prote nas tienen diferentes cargas el ctricas a un pH dado En el procedimiento de prote n
8. colocado en la c mara 12 Despu s de la electroforesis retirar la placa de la c mara y colocar en 40 50 ml de colorante Ponceau S durante 6 minutos Cuando se ti en 2 o m s placas realizar el protocolo verticalmente en un soporte NOTA El colorante puede reutilizarse hasta que el fondo de la placa contenga precipitado de colorante 13 Decolorar en 3 lavados de 2 minutos de cido ac tico al 596 o hasta que el fondo de la placa est blanco En este punto la s placa s se pueden secar y guardar como registro permanente Si se desea lograr un fondo transparente es decir para una densitometr a pasar al siguiente paso 14 Deshidratar enjuagando la placa en 2 lavados de metanol absoluto de 2 minutos cada lavado Dejar que la placa se drene durante 5 10 segundos antes de colocar en la soluci n siguiente 15 Colocar la placa en la soluci n de limpieza durante 5 10 minutos 16 Drenar el exceso de soluci n luego colocar la placa con el lado de acetato hacia arriba en un secante y en un horno de secado a 50 60 C durante 15 minutos o hasta que est seco Evaluaci n de las bandas de prote nas Estudiar las placas en un densit metro usando un filtro de 525 nm y la hendidura estrecha Estabilidad del producto final La placa de prote na s rica terminada seca es estable durante un per odo de tiempo indefinido y puede conservarse en sobres de pl stico Titan Calibraci n Debe usarse la Tableta de Pasos de Densidad ptica
9. di blotter 76 x 102 mm Cod N 5805 Tampone Electra HR Cod N 5053 Buste in plastica Titan 102 x 120 mm Cod N 5052 Buste in plastica Titan 63 x 120 mm Cod N 6008 Microdispenser e provette Cod N 8008 Micro Hood 220V Cod N 5205 Manuale di elettroforesi Cod N 5211 Moduli di report sulle proteine sieriche Cod N 5000 Marcatore Helena Cod N 5109 Diagramma di controllo qualit Cod N 5015 Etichette di identificazione Titan Cod N 5002 Colla in stick PROCEDURA Codificare adeguatamente il numero richiesto di piastre Titan Ill contrassegnandole sul lato rigido lucido Mylar amp con un marcatore Helena BioSciences Si consiglia di effettuare il segno di identificazione su un solo angolo in modo tale che risulti sempre allineato con il campione n Immergere le piastre nel tampone HR diluito per 20 minuti Le piastre devono essere immerse nel bufferizer contenitore di immersione in tampone conformemente alle istruzioni per l uso ad esso accluse In alternativa le piastre possono essere inumidite introducendo in modo lento ed uniforme un rack di piastre nel tampone cosicch l aria non rimanga intrappolata nelle piastre NOTA Lo stesso tampone di immersione pu essere utilizzato per immergere fino a 12 piastre conservato per circa una settimana in un contenitore ermeticamente chiuso In caso di impiego per periodi pi prolungati i solventi residui provenienti dalla piastra possono accumularsi nel tampone oppur
10. durch Behandlung mit einer Clearing L sung durchsichtig gemacht WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN Alle Reagenzien sind nur zur in vitro Diagnostik bestimmt Nicht einnehmen oder mit dem Mund pipettieren Beim Umgang mit den Kit Komponenten ist das Tragen von Handschuhen erforderlich Siehe Sicherheitsdatenblatt mit den Gefahrenhinweisen und Sicherheitsvorschl gen sowie Informationen zur Entsorgung INHALT I Ponceau S Farbstoff Kat Nr 5526 Der Farbstoff wird als Pulver geliefert und besteht aus Ponceau S und Sulfosalizyls ure Den Inhalt der Flasche in liter deionisiertem Wasser aufl sen und 30 min bzw bis der Farbstoff vollst ndig gel st ist mischen 2 Electra HR Puffer Kat Nr 5805 Enth lt einen Tris Natriumbarbital Barbital Puffer pH 8 6 9 0 Eine Packung Trocken Puffer in 750 ml destilliertem Wasser aufl sen Der Puffer ist gebrauchsfertig wenn die Substanz aufgel st und vollst ndig gemischt ist 3 Clear Aid Kat Nr 5005 Enth lt Polyethylenglycol Zur Herstellung der Clearing L sung 30 Teile Eisessig 70 Teile reines Methanol und 4 Teile Clear Aid mischen So lange r hren bis er gut gemischt ist 4 Titan 1110 Zellulose Acetat Platte Kat Nr 3023 oder 3024 Enth lt eine Zellulose Acetat Platte Zur Vorbereitung siehe die Gebrauchsanweisung 5 Weitere Kit Komponenten Jedes Kit enth lt eine Gebrauchsanweisung 13 Deutsch LAGERUNG UND STABILITAT I Ponceau S Farbstoff Kat Nr 5526 Der F
11. einen Trockenschrank geben Auswertung der Protein Banden Die Platten in einem Densitometer mit Filter 525nm und engem Schlitz scannen Stabilit t des Endprodukts Die fertigen getrockneten Serum Protein Platten k nnen unbegrenzt in den Titan Plastik Umschlagen aufbewahrt werden Kalibration Zur Gew hrleistung der Linearit t des Ger ts die Eichkarte Kat Nr 1030 und zur Validierung seiner Nulleinstellung und Empfindlichkeit einen Neutral Density Densitometer Standard Wei standard verwenden AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE Die Bande die am schnellsten wandert und normalerweise am st rksten hervor tritt ist die Albumin Bande die sich der Anoden Seite der Platte am n chsten befindet Die schwache Bande daneben ist das Alpha 1 Globulin gefolgt von den Alpha 2 Beta und Gammaglobulinen l6 TITAN III SERUM PROTEIN ELEKTROPHORESE Errechnung der Unbekannten Das Helena BioSciences CliniScan Densitometer und andere Helena BioSciences Densitometer mit Computerzubeh r druckt automatisch f r jede Bande die relativen Prozentzahlen und absoluten Werte Der relative Prozentsatz kann auch von Hand aus der Anzeige auf dem Scan errechnet werden Siehe mitgelieferte Bedienungsanweisung des Densitometers Der relative Prozentsatz der einzelnen Banden wird nach der folgenden Formel berechnet Anzahl Integration Units der Bande x 100 Relativer Prozentsatz der Bande Integration Units gesamt Relativer Prozentsatz der Bande x G
12. indicada en la etiqueta La aparici n de contaminaci n macrosc pica o cambio de coloraci n puede ser un indicio de deterioro Desechar si las placas aparecen turbias despu s del procedimiento de limpieza 4 Placa de acetato de celulosa Titan III N Cat 3023 6 3024 La placa de acetato de celulosa debe almacenarse a una temperatura entre 15 30 C y permanece estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta RECOGIDA Y PREPARACI N DE MUESTRAS La muestra de elecci n es suero Debe evitarse el uso de plasma porque el fibrin geno aparecer como una banda estrecha diferenciada entre las fracciones beta y gamma El l quido cefalorraqu deo puede usarse si se concentra aproximadamente 00 veces puede usarse la orina si se concentra hasta 300 veces dependiendo de la concentraci n de prote nas original Factores que interfieren La hem lisis puede causar una falsa elevaci n de las fracciones alfa 2 y beta 2 Se pueden obtener resultados imprecisos en muestras que se hayan dejado sin cubrir debido a la evaporaci n Conservaci n y estabilidad Se ha de elegir como muestra suero o plasma reci n recogidos Si fuera necesario guardar las muestras pueden almacenarse cubiertas a 2 6 C durante 48 horas Las muestras de l quido cefalorraqu deo y de orina pueden usarse despu s de una concentraci n adecuada con un concentrador ART CULOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS cido ac tico al 596 Mezclar 50 ml de
13. la betaglobulina aumenta a partir de los 40 a os de edad 29 Espa ol Los resultados en individuos normales cubrir n las variaciones relacionadas con la edad y el sexo y las variaciones biol gicas d a a d a Entre las enfermedades en las que se observan patrones anormales est n la respuesta inflamatoria la enfermedad reum tica las enfermedades hep ticas los trastornos por p rdida de prote nas las discrasias de c lulas plasm ticas y las deficiencias gen ticas Se han observado patrones variantes durante el embarazo Otras pruebas adicionales necesarias Deben evaluarse el electroferograma o el trazado densitom trico para ver si hay anormalidades Si se observan anormalidades deben iniciarse estudios de seguimiento adecuados Entre estos pueden estar la inmunoelectroforesis la inmunofijaci n la cuantificaci n de las inmunoglobulinas componentes individuales el estudio de la m dula sea y otras pruebas adecuadas CARACTER STICAS DE RENDIMIENTO Se estudi un suero normal 26 veces consecutivas usando el m todo descrito antes Se obtuvieron los siguientes datos Fracci n de prote na Media 96 relativo DE CV 96 Alb mina 55 7 1 4 2 5 Alfa 3 1 0 4 12 5 Alfa 2 11 3 0 4 3 8 Beta 11 6 0 5 4 0 Gamma 18 1 0 6 3 5 BIBLIOGRAF A Alper C A Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid N Eng J Med 291 287 290 1974 2 Tiselius A A New Approach for Electrophoretic An
14. lectriques diff rentes un pH donn Dans la m thode Helena Prot ines s riques les prot ines sont s par es en fonction de leurs charges lectriques respectives un pH de 8 8 sur une plaque d ac tate de cellulose en utilisant les forces lectrophor tiques et les forces lectro endosmotiques pr sentes dans le syst me Une fois les prot ines s par es la plaque est plac e dans une solution d acide sulfosalicylique et d acide trichloroac tique pour immobiliser les prot ines puis de colorant Ponceau S pour colorer les bandes de prot ines L intensit de la coloration est proportionnelle la concentration en prot ines Apr s la d shydratation au m thanol le fond de plaque devient transparent gr ce un traitement avec une solution d claircissement PR CAUTIONS Tous les r actifs sont usage diagnostic in vitro uniquement Ne pas ing rer ou pipeter la bouche aucun composant Porter des gants pour la manipulation de tous les composants Se reporter aux fiches de s curit des composants du kit pour la manipulation et l limination COMPOSITION I Colorant Ponceau S r f 5526 Le colorant fourni sous forme de poudre est une m lange de Ponceau S et d acide sulfosalicylique Dissoudre le contenu de flacon dans litre d eau d sionis e et m langer pendant 30 minutes ou jusqu la dissolution compl te 2 Tampon Electra HR r f 5805 Contient un tampon tris barbital barbital sodique pH 8 6 9 0
15. nas s ricas Utilizar al menos uno de estos sueros control en cada desarrollo N Cat 5112 Control de suero de electroforesis N Cat 7024 Control de suero normal Kemtrol VALORES DE REFERENCIA Los valores esperados para la electroforesis de prote nas s ricas en acetato de celulosa te ido con Ponceau S se determinaron a partir de un estudio de 51 sujetos normales Estos valores son s lo para fines ilustrativos Cada laboratorio debe establecer su propio intervalo Fracci n de prote nas Intervalo gd l Alb mina 3 63 4 91 Alfal 0 11 0 35 Alfa2 0 65 1 17 Beta 0 74 1 26 Gamma 0 58 1 74 Variaciones de los valores esperados Hay estudios que muestran que los valores son los mismos para varones y mujeres no embarazadas Se han detectado algunas diferencias en mujeres al t rmino de su embarazo y en mujeres que utilizan anticonceptivos orales La edad tiene alg n efecto sobre los niveles normales La sangre del cord n umbilical presenta un descenso en los niveles de prote nas totales alb mina y fracciones alfa2 y beta un ligero aumento de la fracci n alfal y un aumento o nivel normal de la fracci n gamma en gran medida de origen materno Las gamma se reducen r pidamente cerca de los 3 meses de edad mientras que otras fracciones ya han alcanzado niveles adultos en ese momento Los niveles adultos de las gammaglobulinas no son alcanzados hasta los 10 16 a os de edad La alb mina decrece y
16. nicht abgedeckt ber l ngere Zeit stehen k nnen durch Verdunstungseffekt falsche Ergebnisse liefern Lagerung und Stabilit t Frisches Serum oder Plasma ist das Untersuchungsmaterial der Wahl Sollte eine Lagerung notwenig sein k nnen die Proben abgedeckt bei 2 6 C 48 Stunden gelagert werden Liquor und Urin Proben k nnen nach entsprechender Konzentration mit einem Konzentrator eingesetzt werden NICHT MITGELIEFERTES ABER BEN TIGTES MATERIAL 5 Essigs ure 50ml Eisessig zu 950ml destilliertem Wasser geben Reines Methanol Reagent Grade Kat Nr 3024 Titan Ill Zellulose Acetat Platten 94 x 76 mm Kat Nr 3023 Titan Ill Zellulose Acetat Platten 60 x 76mm Kat Nr 4084 Super Z Applikator Kat Nr 4090 Super Z 12 Applikator Kat Nr 4085 Super Z 12 Probenplatten 2 Kat Nr 4096 Super Z 12 Probenplatten 2 Kat Nr 4094 Super CPK Ausrichtungsschiene Kat Nr 4086 Super Z Ausrichtungsschiene Kat Nr 5114 700 Farbe Set Kat Nr 5122 1000 Farbe Set Kat Nr 5526 Ponceau S TITAN III SERUM PROTEIN ELEKTROPHORESE Nr 5093 Pufferbad Nr 5005 Clear Aid Nr 5090 Zip Zone Prep Nr 1283 Zip Zone Kammer Nr 5081 Zip Zone Kammer Elektrodenstreifen Nr 5037 Blotter Pads 102 x 108 mm Nr 5034 Blotter Pads 76 x 102mm Nr 5805 Electra HR Puffer Nr 5053 Titan Plastik Umschlage 102 x 120 mm Nr 5052 Titan Plastik Umschlage 63 x 120 mm Nr 6008 Mikrodispenser und R hrchen
17. plasma fraichement pr lev est fortement recommand e ll est possible de conserver les chantillons couverts pendant 48 heures entre 2 6 C si n cessaire Il est possible d utiliser des chantillons de liquide c phalo rachidien ou d urine apr s concentration avec un concentrateur MAT RIELS N CESSAIRES NON FOURNIS Acide ac tique 5 M langer 50ml d acide ac tique glacial avec 950ml d eau distill e M thanol absolu de qualit r actif R f 3024 Plaques d acetate de cellulose Titan Ill 94 x 76mm R f 3023 Plaques d acetate de cellulose Titan Ill 60 x 76mm R f 4084 Applicateur Super Z R f 4090 Applicateur Super Z 12 R f 4085 Masque chantillon Super Z 12 2 R f 4096 Masque chantillon Super Z 12 2 LECTROPHORESE DES PROT INES S RIQUES TITAN IO R f 4094 Embase d alignement Super CPK R f 4086 Embase d alignement Super Z R f 5114 Kit de coloration 700 R f 5122 Kit de coloration 1000 R f 5526 Colorant Ponceau S R f 5093 Bac tampon Bufferizer R f 5005 R actif d claircissement R f 5090 Zip Zone Prep R f 1283 Chambre Zip Zone amp R f 5081 Ponts papier pour chambre Zip Zone R f 5037 Blocs buvards 102 x 108 mm R f 5034 Blocs buvards 76 x 102 mm R f 5805 Tampon Electra amp HR R f 5053 Enveloppes plastiques Titan 102 x 120 mm R f 5052 Enveloppes plastiques Titan 63 x 120 mm R f 6008 Micropipette et capillaires R f 8008 Micro hotte
18. proteica Ragegdi Albumina 3 63 431 Alfal 0 11 0 35 Alfa2 0 65 1 17 Beta 0 74 1 26 Gamma OB A Variazioni dei valori previsti Alcuni studi dimostrano che i valori rimangono invariati negli uomini e nelle donne non in gravidanza Alcune differenze si possono verificare nelle gestanti a termine e in donne che utilizzano contraccettivi orali L et produce alcuni effetti sui valori normali Il sangue cordale presenta minori frazioni di proteine totali albumina alfa2 e beta e un lieve aumento dell alfal mentre rimangono normali oppure aumentano le frazioni gamma in gran parte di origine materna Le gamma globuline si riducono rapidamente fino ai 3 mesi di et circa mentre altre frazioni hanno raggiunto i livelli dell et adulta gi in questa fase Le gamma globuline non raggiungono i livelli dell et adulta fino ai 10 16 anni Oltrei 40 anni l albumina diminuisce e le beta globuline aumentano 23 Italiano risultati relativi ad individui normali comprendono le variazioni legate all et e al sesso e le variazioni biologiche quotidiane Tra gli stati patologici in cui si osservano pattern anomali rientrano la risposta infiammatoria le patologie reumatiche le malattie del fegato i disordini con perdite proteiche le discrasie plasmacellulari e le carenze genetiche Pattern alterati sono stati osservati anche in gravidanza Ulteriori esami necessari Per rilevare le anomalie opportuno ricorrere alla valut
19. 82 5 Killingsworth L M et al Protein Analysis Diag Med Jan Feb 47 58 1980 6 Henry R J Cannon D C and Winkelman J W ed Clinical Chemistry Principals and Techniques 437 Harper and Row Hagerstown 1974 7 Killingsworth L M Plasma Protein Patterns in Health and Disease CRC Crit Rev in Clin Lab Sci 1 30 August 1979 LECTROPHORESE DES PROT INES S RIQUES TITAN III UTILISATION La m thode d lectrophor se des prot ines s riques Helena est utilis e pour la s paration et la quantification des prot ines s riques par lectrophor se sur ac tate de cellulose Le s rum contient plus de cent prot ines qui ont chacune une fonction sp cifique et qui peuvent subir des variations quantitatives en raison de diverses conditions pathologiques Depuis l introduction par Tiselius de la mobilit lectrophor tique les prot ines s riques sont fractionn es en fonction de leur charge lectrique en cinq bandes classiques albumine alpha alpha 2 b ta et gamma Chaque zone lectrophor tique l exception de celle de l albumine contient normalement au moins deux composants Quinze prot ines s riques ont t largement tudi es du fait de la facilit de leur dosage Les prot ines sont de grosses mol cules compos es d acides amin s li s par covalence Suivant la r partition des lectrons r sultant des liaisons ioniques ou covalentes des sous groupes structurels les prot ines ont des charges
20. 974 2 Tiselius A A New Approach for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures Trans Faraday Soc 33 524 531 1937 3 Ritzmann S E and Daniels J C Diagnostic Proteinology Separation and Characterization of Proteins Qualitative and Quantitative Assays in Laboratory Medicine Harper and Row Inc Hagerstown 1979 4 Ritzmann S E and Daniels J C Serum Protein Abnormalities Diagnostic and Clinical Aspects Little Alan R Liss Inc 1982 5 Killingsworth L M et al Protein Analysis Diag Med Jan Feb 47 58 1980 6 Henry R J Cannon D C and Winkelman J W ed Clinical Chemistry Principals and Techniques 437 Harper and Row Hagerstown 1974 7 Killingsworth L M Plasma Protein Patterns in Health and Disease CRC Crit Rev in Clin Lab Sci 1 30 August 1979 ELETTROFORESI DELLE PROTEINE SIERICHE TITAN 1110 PRINCIPIO La procedura di elettroforesi delle proteine sieriche Helena stata formulata per la separazione e la quantificazione delle proteine sieriche mediante elettroforesi su acetato di cellulosa Il siero contiene oltre 100 singole proteine ciascuna con specifiche funzioni le quali variano la loro concentrazione a seconda delle differenti condizioni patologiche in corso Dall invenzione dell elettroforesi a fronte mobile ad opera di Tiselius e dal successivo utilizzo dell elettroforesi di zona le proteine sieriche sono state suddivise in 5 frazioni classiche in base alla loro carica elettri
21. Nr 8008 Micro Hood 220V Nr 5205 Elektrophorese Anleitung Nr 5211 Serum Protein Befundblatter Nr 5000 Helena Marker Nr 5109 Tabelle f r die Qualit tskontrolle Nr 5015 Titan Etiketten zur Beschriftung Nr 5002 Klebestift SCHRITT F R SCHRITT METHODE w Die erforderliche Anzahl an Titan Ill Platten durch Markierung auf der gl nzenden harten Mylar Seite mit einem Helena BioSciences Marker richtig kodieren Es ist zu empfehlen das Identifizierungs Kennzeichen dabei in eine Ecke zu setzen so dass es immer an Probe Nr ausgerichtet ist Platten 20 Minuten in verd nntem HR Puffer einweichen Die Platten sollten laut beiliegender Anleitung im Pufferbad eingeweicht werden Alternativ k nnen die Platten durch zur Vermeidung von Lufteinschl ssen langsames und gleichmaBiges Senken eines Platten Racks in den Puffer angefeuchtet werden BITTE BEACHTEN Der gleiche Soaking Puffer kann zum Einweichen f r bis zu 12 Platten verwendet oder fest verschlossenen f r maximal eine Woche aufbewahrt werden Wird er dar ber hinaus verwendet k nnen sich Restl sungsmittel aus den Platten in Puffer aufbauen oder Verdunstung kann die Pufferkonzentration ver ndern Jeweils ungef hr 100ml verd nnten HR Puffer in die u eren Bereiche der Kammer gie en Zwei Einweg Elektrodenstreifen in Puffer anfeuchten und ber jede Tr gerbr cke legen Dabei darauf achten dass sie mit dem Puffer in Kontakt stehen und unter den Streif
22. Placas Titan lll marcando en el lado brillante duro Mylar con un Marcador Helena Biosciences Se sugiere que se coloque la marca de identificaci n en una esquina de la placa de manera que est siempre alineada con la muestra N I Empapar las placas en tamp n HR diluido durante 20 minutos Las placas deben empaparse en el Tamponizador de acuerdo con las instrucciones de uso incluidas con el tamponizador Otra alternativa es humedecer las placas haciendo descender lenta y uniformemente un soporte de placas en el tamp n de manera que no quede aire atrapado en las placas NOTA Puede usarse el mismo tamp n de empapar para empapar hasta 12 placas o durante aproximadamente una semana si se conserva herm ticamente cerrado Si se usa durante per odos m s prolongados los disolventes residuales de las placas pueden acumularse en el tamp n o la evaporaci n puede alterar la concentraci n de tamp n Verter aproximadamente 00 ml de tamp n HR diluido en cada una de las secciones externas de la c mara Humedecer dos mechas desechables en el tamp n y envolver una sobre cada puente de soporte asegur ndose de que hace contacto con el tamp n y de que no hay burbujas de aire bajo las mechas Cubrir la c mara para impedir la evaporaci n del tamp n Llenar cada pozo en la placa de muestra con 3 ml de muestra usando el microdispensador Expeler las muestras como una gota en la punta del tubo de vidrio luego tocar con esta gotita en el pozo Cu
23. Stability of End Product The completed dried Serum Protein plate is stable for an indefinite period of time and may be stored in Titan Plastic Envelopes Calibration The Optical Density Step Tablet Cat No 1030 should be used to ensure the linearity of the instrument and a Neutral Density Densitometer Standard should be used to validate the zero adjustment and sensitivity of the instrument INTERPRETATION OF RESULTS The fastest moving band and normally the most prominent is the albumin band found closest to the anodic edge of the plate The faint band next to this is alpha globulin followed by alpha globulin beta and gamma globulins Calculation of the Unknown The Helena BioSciences CliniScan Densitometer and other Helena BioSciences densitometers with computer accessories will automatically print the relative percent and the absolute values for each band Alternately the relative percent of each band can be calculated manually from the integrator scale on the scan Refer to the Operator s Manual provided with tHe densitometer The relative percent of each band is calculated by the following formula No Integration Units of the Band x 100 Relative Percent of the Band Total Integration Units Relative Percent of the Band x Total Serum Protein Absolute Value of Protein in each band TITAN Ill SERUM PROTEIN ELECTROPHORESIS QUALITY CONTROL Two different types of normal range quality control materials are available f
24. alysis of Colloidal Mixtures Trans Faraday Soc 33 524 531 1937 3 Ritzmann S E and Daniels J C Diagnostic Proteinology Separation and Characterization of Proteins Qualitative and Quantitative Assays in Laboratory Medicine Harper and Row Inc Hagerstown 1979 4 Ritzmann S E and Daniels J C Serum Protein Abnormalities Diagnostic and Clinical Aspects Little Alan R Liss Inc 1982 5 Killingsworth L M et al Protein Analysis Diag Med Jan Feb 47 58 1980 6 Henry R J Cannon D C and Winkelman J W ed Clinical Chemistry Principals and Techniques 437 Harper and Row Hagerstown 1974 7 Killingsworth L M Plasma Protein Patterns in Health and Disease CRC Crit Rev in Clin Lab Sci 1 30 August 1979 30 Helena Biosciences Europe Queensway South Team Valley Trading Estate Gateshead Tyne and Wear NEII 0SD Tel 44 0 191 482 8440 Fax 44 0 191 482 8442 Email info helena biosciences com www helena biosciences com HL 2 1436P 2007 06 5
25. anipolazione di tutti i componenti del kit Per le indicazioni relative ai rischi e alla sicurezza e per le informazioni sullo smaltimento fare riferimento alle schede tecniche dei prodotti COMPOSIZIONE I Colorante Ponceau S Cod N 5526 ll colorante si presenta sotto forma di polvere ed costituito da una miscela di Ponceau S e acido sulfosalicilico Sciogliere il contenuto del flacone in litro di acqua deionizzata e miscelare per 30 minuti o fino al completo scioglimento 2 Tampone Electra HR Cod N 5805 Contiene tampone tris barbital sodio barbital pH 8 6 9 0 Sciogliere una confezione di tampone secco in 750ml di acqua depurata l tampone pronto per l uso non appena tutto il materiale appare disciolto e completamente miscelato 3 Clear Aid Cod N 5005 Contiene polietilenglicole Per preparare la soluzione chiarificante miscelare 30 parti di acido acetico glaciale 70 parti di metanolo assoluto e 4 parti di Clear Aid Miscelare accuratamente agitando 4 Piastra di acetato di cellulosa Titan III Cod N 3023 o 3024 Contiene una piastra di acetato di cellulosa Per la procedura di preparazione fare riferimento alle istruzioni per l uso 5 Altri componenti del kit Ogni kit contiene un foglio procedurale 19 Italiano CONSERVAZIONE E STABILIT I Colorante Ponceau S Cod N 5526 ll colorante pu essere conservato confezionato o in un piatto di colorazione chiuso ermeticamente a 15 30 C Il colorante no
26. arbstoff kann in seiner Verpackung oder in einer fest verschlossenen F rbeschale bei 15 30 C gelagert werden Nicht gebrauchter Farbstoff ist bis zum aufgedruckten Verfallsdatum stabil berm ige Verdunstung oder eine gro e Anzahl Pr zipitate k nnen auf Verfall hinweisen 2 Electra HR Puffer Kat Nr 5805 Der verpackte Puffer ist bis zum aufgedruckten Verfallsdatum haltbar Verd nnter Puffer ist fest verschlossen aufbewahrt bei 15 30 C 2 Monate stabil Verfall kann durch Feuchtigkeit Verf rbung oder Tr bung angezeigt werden 3 Clear Aid Kat Nr 5005 Clear Aid ist bei 15 30 C bis zum aufgedruckten Verfallsdatum stabil Starke Kontamination oder Verf rbung kann auf Verfall hinweisen Erscheinen die Platten nach dem Clearing Prozess tr be sind sie zu verwerfen 4 Titan 1110 Zellulose Acetat Platte Kat Nr 3023 oder 3024 Die Zellulose Acetat Platte sollte bei 15 30 C gelagert werden und ist bis zum aufgedruckten Verfallsdatum stabil PROBENENTNAHME UND VORBEREITUNG Serum ist das Probenmaterial der Wahl Plasma sollte vermieden werden da Fibrinogen als eine deutliche schmale Bande zwischen der Beta und Gammafraktion erscheint Liquor kann in ungef hr 100 facher Konzentrierung verwendet werden Urin kann nach einer je nach urspr nglicher Proteinkonzentration bis zu 300 facher Konzentrierung eingesetzt werden St rfaktoren I H molytische Proben k nnen falsche Alpha 2 und Beta Werte zeigen 2 Proben die
27. as s ricas de Helena las prote nas se separan de acuerdo con sus respectivas cargas el ctricas a un pH 8 8 en una placa de acetato de celulosa usando tanto las fuerzas electrofor ticas como electroendosm ticas presentes en el sistema Despu s de que se separen las prote nas la placa se coloca en una soluci n de cido sulfosalicilico y cido tricloroac tico para inmovilizar las prote nas y Ponceau S para tefir las bandas de prote nas La intensidad de coloraci n tiene relaci n con la concentraci n de las prote nas Despu s de la deshidrataci n en metanol el fondo de la placa se convierte en transparente por el tratamiento con una soluci n de limpieza ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Todos los reactivos son exclusivamente para uso diagn stico in vitro No ingerir ni chupar con la boca ningun componente del kit Usar guantes para manejar todos los componentes del kit Consultar la hoja con los datos de seguridad del producto acerca de los riesgos de los componentes avisos de seguridad y consejos para su eliminaci n COMPOSICI N I Colorante Ponceau S N Cat 5526 La tinci n se suministra en forma de polvo y es una mezcla de Ponceau S y cido sulfosalic lico Disolver el contenido del frasco en litro de agua desionizada y mezclar durante 30 minutos o hasta que est completamente disuelto 2 Tampon HR Electra N Cat 5805 Contiene un tampon Tris barbital Barbital s dico pH 8 6 9 0 Disolver un paquete de tamp n s
28. azione dell elettroferogramma delle proteine sieriche o del tracciato densitometrico Se si osservano anomalie necessario intraprendere studi di follow up appropriati Tra questi studi possono rientrare l immunoelettroforesi l immunofissazione la quantificazione delle singole immunoglobuline costitutive l esame del midollo osseo ed altri test pertinenti CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI Un siero normale stato analizzato per 26 volte consecutive utilizzando il metodo illustrato in precedenza Sono stato ricavati i seguenti dati Frazione proteica Media 96 relativa DS CV 96 Albumina 55 7 1 4 2 5 Alfal 3 1 0 4 12 5 Alfa2 11 3 0 4 3 8 Beta 11 6 0 5 4 0 Gamma 18 1 0 6 3 5 BIBLIOGRAFIA Alper C A Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid N Eng J Med 291 287 290 1974 2 Tiselius A A New Approach for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures Trans Faraday Soc 33 524 531 1937 3 Ritzmann S E and Daniels J C Diagnostic Proteinology Separation and Characterization of Proteins Qualitative and Quantitative Assays in Laboratory Medicine Harper and Row Inc Hagerstown 1979 4 Ritzmann S E and Daniels J C Serum Protein Abnormalities Diagnostic and Clinical Aspects Little Alan R Liss Inc 1982 5 Killingsworth L M et al Protein Analysis Diag Med Jan Feb 47 58 1980 6 Henry R J Cannon D C and Winkelman J W ed Clinical Chemistry Principals and
29. brir las muestras con un portaobjetos de vidrio si no se usan en 2 minutos Cebar el aplicador hundiendo las puntas en los pozos de muestra 3 4 veces Aplicar esta carga a una pieza de papel secante No cargar el aplicador de nuevo en este momento sino pasar al paso siguiente 27 Espa ol 8 Retirar la placa humedecida del tamp n y secar una vez con firmeza entre dos secantes Antes de colocar la placa en la base de alineaci n colocar una gota de agua o tamp n en el centro de la base de alineaci n As se evitar que la placa se desplace durante la aplicaci n de la muestra Colocar la placa en la base de alineaci n con el lado de acetato de celulosa hacia arriba alineando el borde inferior de la placa con la l nea negra marcada APLICACI N DEL CENTRO La marca de identificaci n debe estar alineada con la muestra N 9 Aplicar la muestra a la placa deprimiendo las puntas del aplicador en el pozo de muestra 3 4 veces y transferir el aplicador a la base de alineaci n Pulsar el bot n y mantenerlo pulsado 5 segundos 10 Colocar la s placa s en la c mara con el lado de acetato de celulosa hacia abajo Colocar un peso sobre la s placa s para asegurar el contacto con las mechas Cubrir la c mara con firmeza y esperar 30 segundos para que la s placa s se equilibren II Realizar la electroforesis de la s placa s 15 minutos 180 voltios NOTA Debe aplicarse corriente en 5 minutos despu s de que la s placa s se haya
30. ca albumina alfal alfa2 beta e gamma Ciascuna di queste classiche zone elettroforetiche ad eccezione dell albumina contiene normalmente 2 o pi componenti Sono state studiate approfonditamente circa 15 proteine sieriche data la facilit con cui potevano essere misurate Le proteine sono grosse molecole costituite da aminoacidi legati covalentemente In funzione delle distribuzioni degli elettroni derivanti dal legame covalente o ionico di sottogruppi strutturali le proteine possiedono cariche elettriche diverse ad un determinato pH Nella procedura di rilevamento delle proteine sieriche Helena le proteine vengono separate in base alle rispettive cariche elettriche ad un pH pari a 8 8 su una piastra di acetato di cellulosa utilizzando sia le forze elettroforetiche sia quelle elettroendosmotiche presenti nel sistema In seguito alla separazione delle proteine la piastra viene collocata in una soluzione di acido sulfosalicilico e acido tricloroacetico per immobilizzare le proteine e Ponceau S per colorare le bande proteiche L intensit di colorazione correlata alla concentrazione delle proteine Successivamente alla disidratazione in metanolo il fondo della piastra viene reso trasparente mediante un trattamento con una soluzione chiarificante AVVERTENZE E PRECAUZIONI Tutti i reagenti sono destinati esclusivamente alla diagnostica in vitro Non ingerire n pipettare con la bocca i componenti del kit Indossare i guanti durante la m
31. e l evaporazione pu alterare la concentrazione del tampone stesso Versare circa 100ml di tampone HR diluito in ogni sezione esterna della camera Inumidire 2 stoppini monouso nel tampone e stenderne uno su ogni ponticello di supporto assicurandosi che entri a contatto con il tampone e che non vi siano bolle d aria sotto gli stoppini Coprire la camera per evitare l evaporazione del tampone Riempire ogni pozzetto della piastra per campioni con 3ul di campione utilizzando il microdispenser Fare fuoriuscire una goccia di campione dalla punta della provetta in vetro quindi applicare la goccia sul pozzetto Se i campioni non vengono utilizzati entro 2 minuti coprirli con un vetrino Per innescare l applicatore premere le punte per 3 4 volte all interno dei pozzetti per campioni Applicare la carica ad un blotter A questo punto non ricaricare l applicatore ma passare alla fase successiva Rimuovere dal tampone la piastra inumidita ed asciugare una volta con decisione tra 2 blotter Prima di collocare la piastra nella base di allineamento applicare una goccia di acqua o di tampone sul centro della base stessa Ci consente di evitare che la piastra si sposti durante l applicazione dei campioni Collocare la piastra nella base di allineamento con il lato dell acetato di cellulosa 21 Italiano verso l alto allineando il bordo inferiore della piastra stessa rispetto alla linea nera contrassegnata da CENTER APPLICATION Il contrassegno di ide
32. eco en 750 ml de agua destilada El tamp n est listo para usar cuando todo el material est disuelto y completamente mezclado 3 Ayuda de limpieza N Cat 5005 Contiene polietilenglicol Para preparar la soluci n de limpieza mezclar 30 partes de cido ac tico glacial 70 partes de metanol absoluto y 4 partes de ayuda de limpieza Agitar hasta que est bien mezclado 4 Placa de acetato de celulosa Titan III N Cat 3023 3024 Contiene una placa de acetato de celulosa Seguir las instrucciones de uso para la preparaci n 5 Otros componentes del kit Cada kit contiene instrucciones de uso 25 Espa ol ALMACENAMIENTO Y PER ODO DE VALIDEZ I Colorante Ponceau S N Cat 5526 El colorante puede conservarse tal como se envasa o en un plato de coloraci n cerrado herm ticamente a 15 30 C El colorante no usado es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta El deterioro puede verse indicado por la aparici n de una excesiva evaporaci n o de grandes cantidades de precipitados 2 Tamp n HR Electra N Cat 5805 El tamp n envasado permanece estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta El tamp n diluido permanece estable durante 2 meses a 15 30 C cuando se envasa herm ticamente cerrado Puede indicarse el deterioro por los signos de humedad o decoloraci n o si se hace turbio 3 Ayuda de limpieza N Cat 5005 La ayuda a la limpieza es estable a 15 30 C hasta la fecha de caducidad
33. ectron distributions resulting from covalent or ionic bonding of structural subgroups proteins have different electrical charges at a given pH In the Helena Serum Protein procedure the proteins are separated according to their respective electrical charges at pH 8 8 on a cellulose acetate plate using both the electrophoretic and electroendosmotic forces present in the system After the proteins are separated the plate is placed in a solution of sulfosalicylic acid and trichloroacetic acid to immobilize the proteins and Ponceau S to stain the protein bands The staining intensity is related to protein concentration After dehydration in methanol the plate background is then rendered transparent by treatment with a clearing solution WARNINGS AND PRECAUTIONS All reagents are for in vitro diagnostic use only Do not ingest or pipette by mouth any kit component Wear gloves when handling all kit components Refer to the product safety data sheet for risk and safety phrases and disposal information COMPOSITION I Ponceau S Stain Cat No 5526 The stain is supplied as a powder and is a mix of Ponceau S and Sulphosalicylic Acid Dissolve the contents of the bottle in litre of deionised water and mix for 30 minutes or until completely dissolved 2 Electra HR Buffer Cat No 5805 Contains a Tris barbital Sodium Barbital buffer pH 8 6 9 0 Dissolve one pack of dry buffer in 750ml of purified water The buffer is ready for use when all materia
34. en en contact avec le tampon et qu aucune bulle d air ne reste dessous Couvrir la chambre pour viter que le tampon ne s vapore Remplir chaque puits du masque applicateur avec 3ul d chantillon en utilisant la micropipette Faire sortir l chantillon sous forme de goutte l extr mit du tube en verre ensuite mettre en contact cette goutte avec le puits Couvrir les chantillons avec une lame de verre s ils ne vont pas tre utilis s dans les 2 minutes 9 Francais 14 15 16 Amorcer l applicateur en abaissant les embouts dans les puits chantillons 3 ou 4 fois D poser cette charge sur un morceau de papier buvard Ne pas charger nouveau l applicateur mais passer l tape suivante Enlever la plaque du tampon et la s cher entre deux buvards Avant de placer la plaque sur l embase d alignement d poser une goutte d eau ou de tampon au centre de celle ci pour viter que la plaque de se d placer lors du d p t de l chantillon Placer la plaque sur l embase d alignement ac tate de cellulose vers le haut en faisant correspondre le bas de la plaque avec la ligne de s paration noire signal e par CENTRE DEPOT Le rep re d identification doit tre align avec l chantillon n 1 D poser l chantillon sur la plaque en abaissant les embouts de l applicateur dans le puits chantillon 3 ou 4 fois puis transf rer l applicateur sur l embase d alignement Appuyer sur le bouton et le maintenir appuy pendant 5 sec
35. en keine Luftblasen sind Die Kammer abdecken um Verdunstung zu verhindern Mit dem Mikrodispenser je 3ul Probe in die Vertiefungen der Probenplatte geben Die Proben dabei als Tropfen an den Rand des Glasr hrchens abgeben dann diesen Tropfen mit der Vertiefung in Ber hrung bringen Mit einem Objekttr ger abdecken sollten sie nicht innerhalb 2 Minuten verarbeitet werden Den Applikator durch 3 bis 4 maliges Herunterdr cken der Spitzen in die Probenvertiefungen einsp len Diese F llung auf ein St ck Blotterpapier auftragen Applikator nicht wieder f llen sondern sofort zum n chsten Schritt bergehen 15 Deutsch 8 Die angefeuchteten Platten aus dem Puffer nehmen und einmal kr ftig zwischen zwei Blotter blotten Vor dem Positionieren der Platte in die Ausrichtungsschiene einen Tropfen Wasser oder Puffer auf die Mitte der Ausrichtungsschiene geben Das verhindert dass die Platte sich w hrend der Probenapplikation verschiebt Die Platte mit der Acetatseite nach oben in die Ausrichtungsschiene geben und die untere Kante der Platte an der schwarzen Strichmarkierung MITTE APPLIKATION ausrichten Das Identifizierungs Kennzeichen sollte dabei an Probe Nr ausgerichtet werden 9 Probe durch 3 oder 4 maliges Herunterdr cken der Applikatorspitzen in die Probenvertiefung auf der Platte auftragen den Applikator auf die Ausrichtungsschiene bertragen Den Knopf herunterdr cken und 5 Sekunden halten 10 Die Platte n mit der Zellul
36. ers le haut sur un buvard dans une tuve de s chage entre 50 60 C pendant 10 minutes ou jusqu ce qu elle soit s che valuation des bandes de prot ines Lire les plaques dans un densitom tre en utilisant un filtre 525nm et une fente troite Stabilit du produit final Les plaques de prot ines s riques termin es et s ches sont stables ind finiment et peuvent tre conserv es dans les enveloppes plastiques Titan talonnage Utiliser la gamme de densit s optiques r f 1030 pour v rifier la lin arit de l instrument et un talon de densit neutre pour valider le r glage du z ro et la sensibilit de l instrument INTERPR TATION DES R SULTATS La bande migrant le plus rapidement et normalement la plus importante aussi est la bande d albumine qui se trouve de c t anodique de la plaque La bande troite suivante celle des alpha globulines suivie des alpha 2 globulines des b ta globulines et des gammaglobulines 10 LECTROPHORESE DES PROT INES S RIQUES TITAN IO Calcul de l inconnue Le densitometre CliniScan Helena BioSciences ainsi que d autres densitom tres Helena quip s de p riph riques informatiques impriment automatiquement le pourcentage relatif et les valeurs absolues pour chaque bande Sinon il est possible de calculer manuellement le pourcentage relatif de chaque bande partir de l chelle des densit s lors de la mesure Consulter le manuel d utilisation fourni avec le densit
37. esamt Protein im Serum Absolutwert des Proteins der einzelnen Banden QUALITATSKONTROLLE Zum Gebrauch mit den Serum Protein Elektrophorese Kits gibt es fiir den Normalbereich zwei Arten von Kontrollen Mindestens eine dieser Kontrollseren bei jedem Lauf mitf hren Kat Nr 5112 Elektrophorese Serumkontrolle Kat Nr 7024 Kemtrol Serum Kontrolle Normal REFERENZWERTE Die erwarteten Werte f r die auf Zellulose Acetat und mit Ponceau S angef rbte Serum Protein Elektrophorese wurde aus einer Studie mit 51 normalen Probanden bestimmt Diese Werte gelten nur der Veranschaulichung Jedes Labor muss seinen eigenen Bereich ermitteln Protein Fraktion Bereich g dl Albumin 3 63 4 91 Alpha 0 11 0 35 Alpha 2 0 65 1 17 Beta 0 74 1 26 Gamma 0 58 1 74 Abweichungen von den erwarteten Werten Studien haben gezeigt dass f r M nner und nicht schwangere Frauen die Werte gleich sind Man hat bei schwangeren Frauen nahe dem Geburtstermin und bei Frauen die orale Verh tungsmittel benutzen einige Abweichungen festgestellt Das Alter kann Auswirkungen auf die Normalwerte haben Nabelschnurblut hat einen verringerten Gesamtproteingehalt Albumin Alpha 2 und Beta Fraktionen leicht erh hte Alpha 1 und normale bzw erh hte Gamma Fraktion weitgehend m tterlicher Herkunft Die Gammaglobuline fallen bis zum Alter von 3 Monaten rasch ab wohingegen andere Fraktionen bis dahin bereits Erwachsenenwerte erre
38. falsi incrementi delle frazioni alfa2 e beta 2 Si possono ottenere risultati inattendibili se i campioni vengono conservati non coperti a causa dell evaporazione Conservazione e stabilit campione ideale costituito da plasma o siero fresco Qualora sia necessaria la conservazione i campioni possono essere conservati coperti a 2 6 C per 48 ore campioni di liquido cerebrospinale e di urine possono essere utilizzati in seguito ad adeguata concentrazione con un concentratore MATERIALI NECESSARI MA NON IN DOTAZIONE Acido acetico al 596 Aggiungere 50ml di acido acetico glaciale a 950ml di acqua depurata Metanolo assoluto per reagenti Cod N 3024 Piastre di acetato di cellulosa Titan III 94 x 76 mm Cod N 3023 Piastre di acetato di cellulosa Titan III 60 x 76 mm Cod N 4084 Applicatore Super Z Cod N 4090 Applicatore Super Z 12 Cod N 4085 Piastra a pozzetti per campioni Super Z 12 2 Cod N 4096 Piastra a pozzetti per campioni Super Z 12 2 Cod N 4094 Base di allineamento Super CPK Cod N 4086 Base di allineamento Super Z Cod N 5114 Set di colorazione 700 Cod N 5122 Set di colorazione 1000 20 ELETTROFORESI DELLE PROTEINE SIERICHE TITAN 1110 Cod N 5526 Ponceau S Cod N 5093 Bufferizer Cod N 5005 Clear Aid Cod N 5090 Prep Zip Zone Cod N 1283 Camera Zip Zone Cod N 5081 Stoppini per camera Zip Zone Cod N 5037 Blocchetti di blotter 102 x 108 mm Cod N 5034 Blocchetti
39. icht haben Bei den Gammaglobulinen werden Erwachsenenwerte erst im Alter zwischen 10 und 16 Jahren erreicht Im Alter von ber 40 Jahren verringert sich das Albumin und das Betaglobulin ist erh ht 17 Deutsch Ergebnisse von normalen Personen schlieBen Alter geschlechtsspezifische Abweichungen und Tagesschwankungen mit ein Zu den Krankheitsbildern bei denen abnormaler Muster gefunden werden geh ren Entz ndungsreaktion Rheumaerkrankungen Lebererkrankungen St rungen mit Proteinverlust Plasmazellendyskrasie und genetisch bedingte Mangelzust nde Es wurden auch abweichende Muster wahrend der Schwangerschaft beobachtet Weitere Untersuchungen erforderlich Abnormalit ten sollten mit dem Elektropherogramm oder densitometrischer Aufzeichnung befundet werden Beim Nachweis von Abnormalit ten sollten entsprechende weitergehende Untersuchungen eingeleitet werden Dazu geh ren Immunelektrophorese Immunfixation Quantifizierung einzelner Immunglobulin Komponenten Knochenmark Untersuchung und hnliche Tests LEISTUNGSEIGENSCHAFTEN Ein Normalserum wurden 26 mal hintereinander mit der oben beschriebenen Methode untersucht Man erhielt folgende Daten Protein Fraktion Mittelwert Relative 96 s VK Albumin 55 7 1 4 2 5 Alpha l 3 1 0 4 12 5 Alpha 2 11 3 0 4 3 8 Beta 11 6 0 5 40 Gamma 18 1 0 6 3 5 LITERATUR Alper C A Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid N Eng J Med 291 287 290 1
40. ion du produit 3 R actif d claircissement r f 5005 Le r actif d claircissement est stable entre 15 30 C jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette Des signes de contamination importante ou une alt ration de la couleur indiquent une d t rioration du produit Ne pas l utiliser et le jeter si les plaques sont troubles apr s l tape d claircissement 4 Plaque d acetate de cellulose Titan III r f 3023 ou 3024 La plaque d ac tate de cellulose doit tre conserv e entre 15 30 C elle est stable jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette PRELEVEMENT DES CHANTILLONS L utilisation de s rum est fortement recommand e Il convient d viter d utiliser du plasma car cela entrainerait l apparition d une une bande de fibrinog ne sous la forme d une bande troite diff renci e entre les fractions b ta et gamma ll est possible d utiliser du liquide c phalo rachidien apr s une tape de concentration environ 100 fois il est possible d utiliser de l urine si elle est concentr e jusqu 300 fois suivant la concentration d origine en prot ines Facteurs interf rents Il En cas d h molyse de l chantillon vous risquez d obtenir des r sultats faussement lev s pour les fractions alpha 2 et b ta 2 Vousrisquez d obtenir des r sultats erron s avec des chantillons ayant subi une concentration par vaporation Conservation et stabilit L utilisation de s rum ou de
41. l is dissolved and completely mixed 3 Clear Aid Cat No 5005 Contains polyethylene glycol To prepare the clearing solution mix 30 parts glacial acetic acid 70 parts absolute methanol and 4 parts Clear Aid Stir until well mixed 4 Titan III Cellulose Acetate Plate Cat No 3023 or 3024 Contains a cellulose acetate plate Refer to instructions for use for preparation instructions 5 Other kit components Each kit contains Instructions For Use I English STORAGE AND SHELF LIFE I Ponceau S Stain Cat No 5526 The stain may be stored as packaged or in a tightly closed staining dish at 15 30 C Unused stain is stable until the expiry date indicated on the label Deterioration may be indicated by excessive evaporation or large amounts of precipitate occuring 2 Electra HR Buffer Cat No 5805 The packaged buffer is stable until the expiry date indicated on the label Diluted buffer is stable for 2 months at 15 30 C when stored tightly closed Deterioration may be indicated by signs of dampness or discoloration or if it becomes turbid 3 Clear Aid Cat No 5005 Clear Aid is stable at 15 30 C until the expiry date indicated on the label Deterioration may be indicated by gross contamination or discoloration Discard if the plates appear cloudy after the clearing procedure 4 Titan III Cellulose Acetate Plate Cat No 3023 or 3024 The cellulose acetate plate should be stored at 15 30 C and is stable until the expir
42. m the plate may build up in the buffer or evaporation may alter buffer conogntration Pour approximately 100ml of diluted HR Buffer into each outer section of the chamber Wet two disposable wicks in the buffer and drape one over each support bridge ensuring it makes contact with the buffer and that there are no air bubbles under the wicks Cover the chamber to prevent buffer evaporation Fill each well in the sample plate with 3l of sample using the miorodispenser Expel the samples as a bead on the tip of the glass tube then touch this bead to the well Cover the samples with a glass slide if they are not used within 2 minutes Prime the applicator by depressing the tips into the sample wells 3 or 4 times Apply this loading to a piece of blotter paper DO NOT load the applicator again at this point but proceed to the next step Remove the wetted plate from the buffer and blot once firmly between two blotters Before placing the plate in the aligning base place a drop of water or buffer on the center of the aligning base This prevents the plate from shifting during the sample application Place the plate in the aligning base cellulose acetate side up aligning the bottom edge of the plate with the black scribe line marked CENTER APPLICATION The identification mark should be aligned with sample No Apply the sample to the plate by depressing the applicator tips into the sample well 3 or 4 times and transfer the applicator to the aligning ba
43. n pathologischen Bedingungen gewissen spezifischen Konzentrationsschwankungen unterliegen Seit der Einf hrung der Kapillarelektrophorese durch Tiselius und die darauf folgende Nutzung der Zonen Elektrophorese sind Serum Proteine aufgrund ihrer elektrischen Ladung in f nf klassische Fraktionen aufgetrennt worden Albumin Alpha I Alpha 2 Beta und Gamma Proteine Mit Ausnahme des Albumins enth lt jede der klassischen Elektrophorese Zonen in der Regel zwei oder mehrere Komponenten Ungef hr f nfzehn Serum Proteine sind ausf hrlich untersucht worden da sie leicht gemessen werden k nnen Proteine sind groBe aus kovalent gebundenen Aminos uren bestehende Molek le Je nach der aus der kovalenten oder ionogenen Bindung struktureller Untergruppen resultierenden Elektronenverteilung haben Proteine bei einem bestimmten pH unterschiedliche elektrische Ladungen Bei dem Serum Protein Verfahren von Helena werden die Proteine nach ihren jeweiligen elektrischen Ladungen unter Verwendung von sowohl elektrophoretischer als auch elektroosmotischer Kr fte dieses Systems auf einer Zellulose Acetat Platte bei pH 8 8 aufgetrennt Nach Auftrennung der Proteine wird die Platte in eine L sung aus Sulphosalicyls ure und Trichloressigs ure um die Proteine zu immobilisieren und Ponceau S um die Protein Banden anzuf rben gegeben Die Intensit t der F rbung h ngt dabei von der Proteinkonzentration ab Nach Dehydratisierung mit Methanol wird der Plattenhintergrund
44. n utilizzato stabile fino alla data di scadenza indicata sull etichetta Il deterioramento pu essere indicato da eccessiva evaporazione o dalla presenza di grandi quantit di precipitato 2 Tampone Electra HR Cod N 5805 Il tampone confezionato stabile fino alla data di scadenza riportata sull etichetta Il tampone diluito stabile per 2 mesi a 15 30 C se conservato ermeticamente chiuso Il deterioramento pu essere indicato da segni di umidit o scolorimento o da torbidit 3 Clear Aid Cod N 5005 Il Clear Aid stabile a 15 30 C fino alla data di scadenza indicata sull etichetta Il deterioramento pu essere indicato da evidente contaminazione o scolorimento Gettare il prodotto se le piastre appaiono torbide dopo la procedura di chiarificazione 4 Piastra di acetato di cellulosa Titan III Cod N 3023 o 3024 La piastra di acetato di cellulosa deve essere conservata a 15 30 C ed stabile fino alla data di scadenza riportata sull etichetta RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Il siero il campione da preferire L utilizzo del plasma deve essere evitato in quanto il fibrinogeno compare come una banda stretta separata tra le frazioni beta e gamma Il liquido cerebrospinale pu essere utilizzato se concentrato di circa 100 volte le urine possono essere utilizzate se concentrate fino a 300 volte a seconda della concentrazione proteica iniziale Fattori d interferenza L emolisi pu causare
45. ntificazione dovr essere allineato con il campione n 9 Perapplicare il campione alla piastra premere le punte dell applicatore per 3 4 volte all interno dei pozzetti per campioni e trasferire l applicatore alla base di allineamento Premere il pulsante e tenerlo premuto per 5 secondi 10 Introdurre la e piastra e nella camera con il lato dell acetato di cellulosa verso il basso Sistemare un peso sulla e piastra e per garantire il contatto con gli stoppini Coprire adeguatamente la camera e attendere 30 secondi affinch la e piastra e si stabilizzi no 11 Sottoporre la e piastra e ad elettroforesi 180 volt per 15 minuti NOTA necessario attivare l alimentazione entro 5 minuti dall introduzione della e piastra e nella camera 12 In seguito all elettroforesi rimuovere la e piastra e dalla camera ed introdurre in 40 50ml di colorante Ponceau S per 6 minuti Durante la colorazione di 2 o pi piastre eseguire il protocollo verticalmente su un rack NOTA Il colorante pu essere riutilizzato sino a quando il fondo della piastra contiene precipitato di colorante 13 Decolorare in 3 bagni da 2 minuti ciascuno di acido acetico al 596 o sino a quando il fondo della piastra non apparir bianco A questo punto la e piastra e pu possono essere essiccata e e conservata e in modo permanente Se si desidera un fondo trasparente per la densitometria procedere alla fase successiva 14 Disidratare la piastra risciacquand
46. ola in 2 bagni di metanolo assoluto per 2 minuti ciascuno Lasciare scolare la piastra per 5 10 secondi prima di introdurla nella soluzione successiva 15 Introdurre la piastra nella soluzione chiarificante per 5 10 minuti 16 Rimuovere la soluzione in eccesso quindi collocare la piastra su un blotter con il lato dell acetato verso l alto introducendola poi in un forno di essiccazione a 50 60 C per 15 minuti o sino a quando non risulter essiccata Valutazione delle bande proteiche Analizzare le piastre in un densitometro utilizzando un filtro a 525nm e la fessura stretta Stabilit del prodotto finale La piastra di proteine sieriche essiccata e completata stabile per un intervallo di tempo indefinito e pu essere conservata nelle buste in plastica Titan Calibrazione La scala dei grigi per densit ottica Cod N 1030 deve essere utilizzata per garantire la linearit dello strumento mentre necessario impiegare uno standard per densitometro a densit neutra per confermare la regolazione dello zero e la sensibilit dello strumento INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI La banda in pi rapido movimento e solitamente la pi pronunciata la banda dell albumina che risulta essere la pi vicina al bordo anodico della piastra La banda debole accanto ad essa l alfa globulina seguita dall alfa2 globulina e dalle beta e gamma globuline 22 ELETTROFORESI DELLE PROTEINE SIERICHE TITAN I1I Calcolo dei valori non n
47. om tre La formule suivante permet de calculer le pourcentage relatif de chaque bande Valeur int gration de la bande x 100 Pourcentage relatif de la bande Valeur int gration totale Pourcentage relatif de la bande x Prot ines s riques totales Valeur absolue des prot ines de chaque bande CONTR LE QUALIT Deux types diff rents de contr le qualit normal pouvant tre utilis s avec les kits d lectrophor se des prot ines s riques sont disponibles Utilisez au moins l un des ces s rums de contr le sur chaque plaque R f 5112 S rum de contr le pour lectrophor se R f 7024 Contr le normal Kemtrol Serum VALEURS DE R F RENCE Les valeurs usuelles pour l lectrophor se des prot ines s riques sur ac tate de cellulose color es avec du Ponceau S ont t d termin es partir d une tude de 51 sujets normaux Ces valeurs ne sont donn es qu titre indicatif Il appartient chaque laboratoire d tablir ses propres valeurs usuelles Fraction prot ique Intervalle g dl Albumine 3 63 4 91 Alpha 0 11 0 35 Alpha 2 0 65 1 17 B ta 0 74 1 26 Gamma 0 58 1 74 Variations par rapport aux valeurs attendues Diff rentes tudes montrent que les valeurs normales sont les m mes pour l homme et la femme non enceinte Certaines modifications sont observ es chez la femme terme et chez la femme sous contraceptif oral Les valeurs normales varient suivant l ge Le
48. ondes Placer la ou les plaques dans la chambre ac tate de cellulose vers le bas Placer un poids dessus de facon assurer un bon contact avec les ponts papier Couvrir la chambre et attendre 30 secondes qu elles s quilibrent Faire migrer pendant 15 minutes 180 volts REMARQUE L lectricit doit tre appliqu e dans les 5 minutes suivant la mise en place de la ou des plaques dans la chambre Une fois l lectrophor se termin e enlever les plaques de la chambre et les placer dans 40 50ml de colorant Ponceau S pendant 6 minutes Si vous colorez plusieurs plaques utiliser un support vertical pour cette op ration REMARQUE Il est possible de r utiliser le colorant jusqu ce que le fond de bande de la plaque pr sente un pr cipit de colorant D colorer dans 3 bains de 2 minutes d acide ac tique 596 ou jusqu ce que le fond de bande de la plaque soit blanc Les plaques doivent tre s ch es et conserv es ce moment si vous d sirez un r sultat permanent Si vous d sirez un fond de bande transparent pour la densitom trie passer l tape suivante D shydrater en ringant les plaques dans 2 bains de m thanol absolu de 2 minutes chacun Laissez les plaques s goutter pendant 5 10 secondes avant de les placer dans la solution suivante Placer les plaques dans la solution d claircissement pendant 5 10 minutes liminer l exc s de solution puis placer la plaque ac tate de cellulose v
49. or use with the serum protein electrophoresis kits Use at least one of these control sera on each plate run Cat No 5112 Electrophoresis Serum Control Cat No 7024 Kemtrol Serum Control Normal REFERENCE VALUES The expected values for serum protein electrophoresis on cellulose acetate stained with Ponceau S were determined from a study of 51 normal subjects These values are for illustrative purposes only Each laboratory should establish its own range Protein Fraction Range gd L Albumin 3 63 4 91 Alpha 0 11 0 35 Alpha 0 65 1 17 Beta 0 74 1 26 Gamma 0 58 1 74 Variations of Expected Values Studies show that values are the same for both males and nonpregnant females Some differences are seen in pregnant females at term and in women on oral contraceptives Age has some effect on normal levels Cord blood has decreased total protein albumin alpha and beta fractions slightly increased alpha and normal or increased gamma fractions largely of maternal origin The gamma drops rapidly until about 3 months of age while the other fractions have reached adult levels by this time Adult levels of the gamma globulins are not reached until 10 16 years of age The albumin decreases and beta globulins increase after the age of 40 Results on normal individuals will cover age and sex related variations and day to day biologic variations Disease states in which abnormal patterns are observed include inflamma
50. oseacetat Seite nach unten in die Kammer geben Ein Gewicht auf die Platte n legen um Kontakt mit den Streifen zu gew hrleisten Die Kammer fest verschlieBen und 30 Sekunden warten damit die Platten sich ausgleichen k nnen 11 Elektrophorese der Platte n durchf hren 15 Minuten 180 Volt BITTE BEACHTEN Nachdem die Platte n in die Kammer gelegt worden sind muss innerhalb von 5 Minuten Strom angelegt werden 12 Nach der Elektrophorese die Platte n aus der Kammer nehmen und 6 Minuten in 40 50ml Ponceau S F rbel sung legen Beim Anf rben von 2 oder mehr Platten sollte der F rbeprozess vertikal in einem F rbe Rack durchgef hrt werden BITTE BEACHTEN Der Farbstoff kann solange wieder verwendet werden bis der Plattenhintergrund Farbstoff Pr zipitate aufweist 13 In Waschschritten von 3 x 2 Minuten oder bis der Hintergrund wei ist mit 5 96 Essigs ure entf rben Zu diesem Zeitpunkt k nnen die Platten getrocknet und archiviert werden Wird ein durchsichtiger Hintergrund gew nscht d h f r die Densitometrie mit dem n chsten Schritt weitergehen 14 Die Platte durch 2 maliges Sp len von je 2 Minuten mit reinem Methanol dehydrieren Die Platte 5 0 Sekunden abtropfen lassen bevor sie in die n chste L sung gegeben wird 15 Die Platte 5 10 Minuten in Clearing L sung geben 16 bersch ssige L sung abtropfen lassen anschlieBend die Platte 15 Minuten oder bis sie trocken ist mit der Acetat Seite nach oben bei 50 60 C in
51. oti Il densitometro CliniScan di Helena BioSciences ed altri densitometri di Helena BioSciences con accessori per computer sono in grado di stampare automaticamente la percentuale relativa e i valori assoluti di ogni banda In alternativa la percentuale relativa delle singole bande pu essere calcolata manualmente utilizzando la scala di integrazione sulla scansione Fare riferimento al manuale utente fornito in dotazione con il densitometro La percentuale relativa di ciascuna banda viene calcolata mediante la seguente formula N Unit di integrazione della banda x 100 Percentuale relativa della banda Unit di integrazione totali Percentuale relativa della banda x Proteine sieriche totali Valore assoluto delle proteine in ciascuna banda CONTROLLO QUALIT Sono disponibili 2 diversi tipi di materiali di controllo qualit del range normale da utilizzare con i kit per elettroforesi delle proteine sieriche Utilizzare almeno uno di questi sieri di controllo su ciascuna piastra analizzata Cod N 5112 Controllo del siero per elettroforesi Cod N 7024 Controllo del siero Kemtrol Normale VALORI DI RIFERIMENTO valori previsti per l elettroforesi delle proteine sieriche su acetato di cellulosa colorato con Ponceau S sono stati determinati in base ad uno studio su 51 soggetti normali Questi valori hanno uno scopo puramente illustrativo Ciascun laboratorio dovr pertanto elaborare il proprio range Frazione
52. sang de cordon a des prot ines totales diminu es ainsi que l albumine les alpha 2 et les b ta la fraction des alpha l est l g rement augment e et celle des gamma est normale ou augment e en partie d origine maternelle Les gammaglobulines diminuent rapidement jusqu un ge d environ 3 mois alors que les autres fractions atteignent progressivement les valeurs adultes La valeur adulte des gammaglobulines n est pas atteinte avant 10 16 ans Apr s 40 ans l albumine diminue et les b ta globulines augmentent Il Francais Les r sultats chez les sujets normaux varient en fonction de l ge et du sexe et pr sentent aussi des variations biologiques d un jour l autre Divers tats pathologiques entrainent un prot inogramme anormal r action inflammatoire rhumatisme maladies h patiques d perdition prot ique dyscrasie plasmocytaire et anomalies g n tiques Des bandes de variants ont aussi t observ es lors de la grossesse Analyses suppl mentaires n cessaires Examiner le prot inogramme des prot ines s riques ou le trac densitom trique la recherche d anomalies Si vous observez des anomalies il est n cessaire de r aliser des tudes suppl mentaires immuno lectrophor se immunofixation dosage des immunoglobulines individuelles et examen de moelle osseuse entre autres PERFORMANCES Un s rum normal a t analys 26 fois cons cutives en utilisant la m thode d crite auparavant Voici les r sulta
53. se Press the button down and hold it for 5 seconds 3 English 10 Place the plate s cellulose acetate side down in the chamber Place a weight on the plate s to ensure contact with the wicks Cover the chamber securely and wait 30 seconds for the plate s to equllibrate II Electrophorese the plate s 15 minutes 180 volts NOTE Power must be applied within 5 minutes after the plate s has been placed in the chamber 12 Following electrophoresis remove the plate s from the chamber and place in 40 50ml of Ponceau S stain for 6 minutes When staining 2 or more plates carry out the protocol vertically in a rack NOTE The stain may be reused until the plate background contains stain precipitate 13 Destain in 3 x 2 minute washes of 596 acetic acid or until the plate background is white The plate s may be dried and stored as a permanent record at this point If a transparent background is desired i e for densitometry proceed to the next step 14 Dehydrate by rinsing the plate in 2 absolute methanol washes of 2 minutes each wash Allow the plate to drain for 5 10 seconds before placing in the next solution 15 Place the plate into the clearing solution for 5 10 minutes 16 Drain off excess solution then place the plate acetate side up onto a blotter and into a drying oven at 50 60 C for 15 minutes or until dry Evaluation of the Protein Bands Scan the plates in a densitometer using a 525 nm filter and the narrow slit
54. tory response rheumatic disease liver diseases protein loss disorders plasma cell dysorasias and genetic deficiencies Variant patterns have also been observed during pregnancy Further Testing Required The serum protein electropherogram or densitometric tracing should be evaluated for abnormalities If abnormalities are observed appropriate follow up studies should be initiated These may include Immunoelectrophoresis immunofixation quantitation of individual component immunoglobulins bone marrow examination and other appropriate tests 5 English PERFOFORMANCE CHARACTERSTICS A normal serum was run 26 consecutive times using the method described above The following data was obtained Protein Fraction Mean Relative 96 SD CV Albumin 55 7 1 4 2 5 Alpha 3 1 0 4 12 5 Alpha 11 3 0 4 3 8 Beta 11 6 0 5 4 0 Gamma 18 1 0 6 3 5 BIBLIOGRAPHY I Alper C A Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid N Eng J Med 291 287 290 1974 2 Tiselius A A New Approach for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures Trans Faraday Soc 33 524 531 1937 3 Ritzmann S E and Daniels J C Diagnostic Proteinology Separation and Characterization of Proteins Qualitative and Quantitative Assays in Laboratory Medicine Harper and Row Inc Hagerstown 1979 4 Ritzmann S E and Daniels J C Serum Protein Abnormalities Diagnostic and Clinical Aspects Little Alan R Liss Inc 19
55. ts obtenus Fraction prot ique Moyenne relatif Ecart type CV Albumine 55 7 1 4 2 5 Alpha l 3 1 0 4 12 5 Alpha 2 11 3 0 4 3 8 B ta 11 6 0 5 40 Gamma 18 1 0 6 3 5 BIBLIOGRAPHIE Alper C A Plasma Protein Measurements as a Diagnostic Aid N Eng J Med 291 287 290 1974 2 Tiselius A A New Approach for Electrophoretic Analysis of Colloidal Mixtures Trans Faraday Soc 33 524 531 1937 3 Ritzmann S E and Daniels J C Diagnostic Proteinology Separation and Characterization of Proteins Qualitative and Quantitative Assays in Laboratory Medicine Harper and Row Inc Hagerstown 1979 4 Ritzmann S E and Daniels J C Serum Protein Abnormalities Diagnostic and Clinical Aspects Little Alan R Liss Inc 1982 5 Killingsworth L M et al Protein Analysis Diag Med Jan Feb 47 58 1980 6 Henry R J Cannon D C and Winkelman J W ed Clinical Chemistry Principals and Techniques 437 Harper and Row Hagerstown 1974 7 Killingsworth L M Plasma Protein Patterns in Health and Disease CRC Crit Rev in Clin Lab Sci 1 30 August 1979 TITAN III SERUM PROTEIN ELEKTROPHORESE ANWENDUNGSBEREICH Das Helena Serum Protein Elektrophorese Verfahren dient zur Auftrennung und Quantifizierung der Serum Proteine mittels Elektrophorese auf Zellulose Acetat Serum enth lt ber hundert einzelne Proteine jedes mit einer Reihe spezifischer Funktionen die unter verschiedene
56. y date indicated on the label SAMPLE COLLECTION AND PREPARATION Serum is the preferred specimen The use of plasma should be avoided as fibrinogen will appear as a distinct narrow band between the beta and gamma fractions Cereospinal fluid may be used if concentrated approximately 100 times urine may be used if concentrated up to 300 times depending on original protein concentration Interfering factors I Hemolysis may cause false elevation in the alpha and beta fractions 2 Inaccurate results may be obtained on speciments left uncovered due to evaporation Storage and Stability Fresh serum or plasma is the specimen of choice If storage is necessary samples may be stored covered at 2 6 C for 48 hours Cerebrospinal fluid and urine specimens may be used after proper concentration with a concentrator ITEMS REQUIRED BUT NOT PROVIDED 5 acetic acid Add 50ml of glacial acetic acid to 950ml of purified water Absolute methanol reagent grade Cat No 3024 Titan IIl Cellulose Acetate Plates 94 x 76 mm Cat No 3023 Titan IIl Cellulose Acetate Plates 60 x 76mm Cat No 4084 Super Z Applicator Cat No 4090 Super Z 12 Applicator Cat No 4085 Super Z 12 Sample Well Plate 2 Cat No 4096 Super Z 12 Sample Well Plate 2 Cat No 4094 Super CPK Aligning Base Cat No 4086 Super Z Aligning Base Cat No 5114 700 Staining Set Cat No 5122 1000 Staining Set Cat No 5526 Ponceau S Cat No 5093 Bufferizer Cat No
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