QUANTA Flash® PR3 - annar diagnóstica
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1. p ngase en contacto con el servicio t cnico de INOVA Diagnostics Inc en la direcci n o n mero de tel fono indicados al final de estas instrucciones de uso Para vaciar el recipiente de residuos s lidos abra el caj n de residuos Retire el recipiente de residuos s lidos y elim nelo de forma adecuada Vuelva a colocar el recipiente de residuos s lidos en su lugar cierre el caj n de residuos y haga clic en Yes en la ventana Empty Waste Drawer Para sustituir los iniciadores haga clic en el bot n Bulks Inventory F9 situado en la parte superior derecha a En la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Triggers situado a la izquierda Se abrir la ventana Add Triggers Remove old bottles b Abra y retire el caj n de residuos del instrumento BIO FLASH Tire todas las cubetas en el caj n de residuos secos Haga clic en Yes en la ventana Empty Waste Drawer Retire los frascos del iniciador de sus soportes y haga clic en el bot n Next Desenrosque los frascos viejos del iniciador de sus tapones y sustit yalos por nuevos iniciadores Realice la operaci n frasco a frasco y respete el c digo de color de los tapones blanco blanco rojo rojo c Siga las instrucciones de la ventana que se abrir Add Triggers Add Trigger 2 bottle Una vez aceptado el c digo de barras coloque el iniciador 2 en el soporte de color blanco Haga clic en Next d Siga las instrucciones de la ventana Add Triggers Add Trigger2. en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Aseg rese de limpiar siempre el instrumento seg n el procedimiento recomendado que est indicado en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de almacenamiento 1 2 Guarde los calibradores no abiertos a 2 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y manipulan como est indicado Los calibradores abiertos deben desecharse al cabo de 8 horas Procedimiento 1 Cada nuevo lote de cartucho de reactivos debe calibrarse antes del primer uso El software no permitir usar un lote nuevo hasta que se calibre Cada calibrador debe mezclarse suavemente antes de utilizarlo para garantizar su homogeneidad Evite la formaci n de espuma ya que las burbujas pueden interferir en la detecci n del nivel de l quido de los instrumentos Destape los dos tubos del calibrador y col quelos en una gradilla de muestras con los c digos de barras orientados hacia delante a trav s de las aberturas de la gradilla Coloque la gradilla de muestras en la bandeja de muestras del instrumento BIO FLASH y cierre la puerta El instrumento leer los c digos de barras de los tubos del calibrador e identificar el cartucho de reactivos adecuado Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimio
3. opci n denominada Rean lisis autom tico Si esta opci n est seleccionada el instrumento volver a analizar de manera autom tica cualquier muestra con un resultado superior a 3285 3 CU diluy ndola nuevamente seg n un factor de 10 y calcular las CU utilizando este factor de diluci n adicional Interpretaci n de los resultados El ensayo QUANTA Flash permite detectar peque as diferencias en las poblaciones de pacientes Cada laboratorio debe determinar su propio rango normal bas ndose en los controles y la poblaci n de pacientes que utilice de acuerdo con los procedimientos espec ficos que establezca Es recomendable que los resultados comunicados por el laboratorio incluyan esta informaci n Los siguientes resultados se han obtenido mediante el inmunoensayo por quimioluminiscencia QUANTA Flash PR3 de INOVA Los valores obtenidos con m todos de ensayo de otros fabricantes pueden no ser intercambiables La magnitud de los niveles de anticuerpos obtenidos no siempre puede correlacionarse con un t tulo de punto final Limitaciones del procedimiento 1 No todos los pacientes con granulomatosis con poliange tis son positivos para los anticuerpos anti PR3 2 Los resultados de este an lisis deben utilizarse junto con datos cl nicos y otras pruebas serol gicas 3 Si los reactivos no se mezclan correctamente antes del primer uso pueden obtenerse resultados err neos 4 Las caracteristicas de rendimiento de est
4. una concentraci n de 403 CU Asimismo se ha realizado un an lisis de linealidad y se ha obtenido un valor de R de 1 0 Puede utilizarse un factor de conversi n de 0 25 para convertir las CU a Ul mL Si se selecciona Ul mL el software BIO FLASH emplea el factor de conversi n para indicar los resultados en Ul mL Limitaciones Estos controles est n dise ados para 15 usos La etiqueta de cada tubo de control posee una fila de 15 casillas que pueden marcarse para controlar el n mero de usos El tiempo m ximo durante el que los tubos de control pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 2 5 horas o 10 minutos por uso Los controles destapados que permanezcan en el instrumento durante m s tiempo deben desecharse Si se utilizan los mismos tubos de control para m s de 15 usos y o durante m s de 2 5 horas en total pueden producirse resultados err neos Bibliograf a 1 Kallenberg CG Pathogenesis of ANCA associated vasculitides Ann Rheum Dis 2011 70 Suppl 1 159 163 Trevisin M Pollock W Dimech W Savige J Evaluation of a multiplex flow cytometric immunoassay to detect PR3 and MPO ANCA in active and treated vasculitis and in inflammatory bowel disease IBD J Immunol Methods 2008 336 104 112 Holle JU Hellmich B Backes M Gross WL Csernok E Variations in performance characteristics of commercial enzyme immunoassay kits for detection of antineutrophil cytoplasmic antibodies what is the optim
5. 1 bottle Una vez aceptado el c digo de barras coloque el iniciador 1 en el soporte de color rojo Haga clic en Finish Vuelva a colocar el caj n de residuos en su lugar y ci rrelo Para sustituir el recipiente de l quido de lavado del sistema haga clic en el bot n Bulks Inventory F9 en la esquina superior derecha En la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Sys Rinse En la ventana que se abrir Add System Rinse Remove bottles haga clic en Next Siga las instrucciones de la ventana que aparecera Add System Rinse Add bottle Una vez aceptado el c digo de barras haga clic en Finalizar si es necesario Para vaciar el recipiente de residuos l quidos en la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Fluid Waste Extraiga el residuo l quido y t relo Haga clic en Next Una vez sustituido el frasco vac o haga clic en Finish M todo Preparaci n del cartucho de reactivos La primera vez que se utilice el cartucho de reactivos deben seguirse los pasos indicados a continuaci n para instalar el cartucho con precisi n en el instrumento BIO FLASH Nota No utilice el cartucho de reactivos si observa alg n signo de da o Cartucho de reactivos QUANTA Flash PR3 Durante el env o y el almacenamiento las micropart culas se depositan y es preciso mezclarlas para volver a suspenderlas 1 La primera vez que se utiliza el cartucho invierta suavemente el cartucho 30 veces evitando la formaci n de esp
6. CU a partir de las RLU obtenidas con cada paciente Reactivos 1 El cartucho de reactivos del QUANTA Flash PR3 contiene los siguientes reactivos para 50 determinaciones a Part culas paramagn ticas recubiertas de PR3 en un tamp n que contiene l quido estabilizantes de prote nas y conservante b Tamp n de an lisis l quido transparente que contiene soluci n salina tamponada con fosfato Tween 20 estabilizantes de prote nas y conservantes C IgG trazadora anticuerpos anti lgG humana etiquetada con isoluminol que contiene tamp n estabilizantes de prote nas y conservante Advertencias 1 Se utiliza azida s dica como conservante La azida s dica es una sustancia venenosa y puede resultar t xica si se ingiere o si se absorbe a trav s de la piel o los ojos La azida s dica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuber as y formar azidas met licas potencialmente explosivas Si utiliza las pilas de lavado para eliminar reactivos aclare con abundante cantidad de agua para evitar la formaci n de azidas met licas 2 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 3 Los vertidos de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente para la eliminaci n de residuos Precauciones 1 Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro Este ensayo solo debe utilizarse con el instru
7. Dispositivo m dico para diagn stico In Vitro Consulte las instrucciones de uso L mites de temperatura No reutilizar Riesgos biol gicos C digo del lote N mero de cat logo Utilizar antes del tiempo indicado Fabricante Representante autorizado Contenido suficiente para n an lisis Control positivo Control negativo Calibrador 1 Calibrador 2 Caja de cart n reciclable Mantener en esta posici n QUANTA Flash es una marca comercial registradade INOVA Diagnostics Inc BIO FLASH es una marca comercial registrada de Biokit SA O 2012 Fabricado por INOVA Diagnostics Inc 9900 Old Grove Road San Diego CA 92131 Estados Unidos de Am rica Servicio t cnico solo para EEUU y Canad 877 829 4745 Servicio t cnico fuera de EEUU 1 858 805 7950 support inovadx com Representante autorizado en la UE Medical Technology Promedt Consulting GmBH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemania Tel 49 6894 581020 Fax 49 6894 581021 www mt procons com 621135ESP Septiembre 2012 Revisi n 2
8. QUANTA Flash PR3 701138 Reactivos Para uso diagn stico In Vitro Uso previsto El QUANTA Flash PR3 es un inmunoensayo quimioluminiscente CIA para la detecci n semicuantitativa de autoanticuerpos IgG antiproteinasa 3 PR3 en suero humano con el instrumento BIO FLASH El QUANTA Flash PR3 sirve de ayuda en el diagn stico de la granulomatosis con poliange tis GPA en combinaci n con datos cl nicos y otras pruebas de laboratorio Resumen y explicaci n de la prueba La prueba basada en el anticuerpo citoplasm tico antineutr filo ANCA ha revolucionado el diagn stico y el tratamiento de las diferentes vasculitis mediadas por inmunocomplejos El ANCA perinuclear pANCA y el ANCA citoplasm tico CANCA han demostrado tener utilidad cl nica para ayudar en el diagn stico de vasculitis de vasos peque os como la granulomatosis con poliange tis GPA conocida anteriormente como granulomatosis de Wegener WG la glomerulonefritis extracapilar necrotizante idiop tica la poliange tis microsc pica MPA y el s ndrome de Churg Strauss CSS Asimismo el ANCA puede encontrarse en otras enfermedades como la poliarteritis nodosa el s ndrome de Goodpasture y la enfermedad inflamatoria intestinal Los dos principales ant genos diana del ANCA son la mieloperoxidasa MPO y la serina proteasa 3 PR3 Existen varios estudios que analizan la prevalencia de los ANCA anti PR3 y anti MPO en diferentes enfermedades e investigan la sensibil
9. a casilla Show All Assays Seleccione el ensayo PR3 de la lista y haga clic en Add Haga clic en Save Realice este proceso para ambos controles Se recomienda utilizar los controles QUANTA Flash PR3 una vez cada d a en que se utilice el ensayo aunque los usuarios tambi n deben tener en cuenta los requisitos de la legislaci n nacional y local Cada control debe mezclarse suavemente antes de utilizarlo para garantizar su homogeneidad Evite la formaci n de espuma ya que las burbujas pueden interferir en la detecci n del nivel de l quido de los instrumentos Destape los dos tubos del control y col quelos en una gradilla de muestras con los c digos de barras orientados hacia delante a trav s de las aberturas de la gradilla Coloque la gradilla de muestras en la bandeja de muestras del instrumento BIO FLASH y cierre la puerta El instrumento leer los c digos de barras de los tubos del control e identificar el cartucho de reactivos adecuado Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH Trazabilidad Actualmente no existe ning n est ndar internacional reconocido para la determinaci n de anticuerpos anti PR3 Sin embargo se ha analizado el suero de referencia internacional 152721 n m 16 ANCA anti PR3 del Center for Disease Control and Prevention CDC y se ha determinado
10. activos 3 Una vez validada la calibraci n el lote de cartuchos de reactivos en el que se ha efectuado la calibraci n estar preparado para utilizarse Programaci n y an lisis de muestras 1 Pulse el bot n Worklist de la parte superior de la pantalla y seleccione la pesta a Racks de la parte inferior 2 Seleccione la gradilla de muestras que se utilizar marc ndola en la pantalla o escaneando su c digo de barras con el lector manual de c digos de barras Escanee o escriba el nombre de la muestra indique el tipo de muestra elija el tipo de recipiente tubo copa y seleccione PR3 en el panel del ensayo Repita estos pasos para todas las muestras 3 Cargue las muestras en las posiciones seleccionadas de la gradilla de muestras y coloque la gradilla en el carro de muestras del instrumento 4 Cuando todos los materiales necesarios est n cargados en el instrumento el icono de inicio pasar a estar disponible en color verde en la parte superior de la pantalla Pulse el icono de Start F4 para comenzar la sesi n de an lisis Control de calidad Los controles QUANTA Flash PR3 vendidos por separado n mero de producto de INOVA 701137 contienen los controles positivos y negativos para la PR3 Consulte el apartado QUANTA Flash Controles PR3 701137 de este documento para obtener instrucciones de uso detalladas sobre c mo introducir el valor de la unidad y la desviaci n est ndar de cada control y c mo analizar los con
11. al cut off Ann Rheum Dis 2005 64 1773 1779 Mahler M Radice A Yang W Bentow C Seaman A Bianchi L Sinico RA Development and performance evaluation of novel chemiluminescence assays for the detection of anti PR3 and anti MPO antibodies Clin Chim Acta 2012 413 719 26 Trevisin M Pollock W Dimech W Melny J Paspaliaris B Gillis D et al Antigen specific ANCA ELISAs have different sensitivities for active and treated vasculitis and for nonvasculitic disease Am J Clin Pathol 2008 129 42 53 Xu PC Chen M Cui Z Zhao MH Influence of myeloperoxidase by anti myeloperoxidase antibodies and its association with the disease activity in microscopic polyangiitis Rheumatology Oxford 2010 49 2068 2075 Westman KW Bygren PG Eilert Wiik A Wieslander J Rapid screening assay for anti GBM antibody and ANCAs an important tool for the differential diagnosis of pulmonary renal syndromes Nephrol Dial Transplant 1997 12 1863 1868 Aslam A Newman TL Misbah SA Audit of the clinical usefulness of a rapid qualitative ELISA screen for antimyeloperoxidase and antiproteinase 3 antibodies in the assessment of patients with suspected vasculitis J Clin Pathol 2003 56 775 777 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 2007 Fifth Edition 0 qf EM RESO ol o Ed ONTROL oO o ONTROL O gt E Es BE imbolos utilizados
12. do un an lisis de linealidad y se ha obtenido un valor de R de 1 0 Puede utilizarse un factor de conversi n de 0 25 para convertir las CU a Ul mL Si se selecciona Ul mL el software BIO FLASH emplea el factor de conversi n para indicar los resultados en Ul mL Limitaciones Estos calibradores est n dise ados para realizar 4 calibraciones El tiempo m ximo durante el que los tubos del calibrador pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es 8 horas Si los calibradores destapados permanecen en el instrumento durante m s de 8 horas deben desecharse Si se utilizan los mismos tubos de calibrador para m s de 4 calibraciones y o durante m s de 8 horas es posible que la calibraci n del ensayo sea incorrecta lo que producir resultados err neos QUANTA Flash PR3 701137 Controles Para uso diagn stico In Vitro Uso previsto Los Controles QUANTA Flash PR3 est n destinados al control de calidad del kit de inmunoensayo quimioluminiscente CIA QUANTA Flash PR3 en un instrumento BIO FLASH utilizado para la determinaci n de autoanticuerpos IgG antiproteinasa PR3 en suero humano Resumen y principios del procedimiento Los controles QUANTA Flash PR3 est n constituidos por un control negativo y un control positivo Cada uno de ellos contiene una cantidad diferente de anticuerpos anti PR3 El control negativo est dise ado para evaluar la precisi n y la exactitud del ensayo a niveles muy bajos de anticuerp
13. documento EP5 A2 del CLSI la tabla siguiente resume los datos obtenidos Intraensayo Interensayo Interd a Total Muestra N Media DE CV DE CV DE CV DE CV A 100 7 0 0 3 4 7 0 2 3 3 0 2 2 3 0 4 6 2 B 100 15 0 0 5 3 5 0 5 3 7 0 4 2 6 0 9 5 7 C 100 23 5 1 0 4 2 0 8 3 4 0 6 2 3 1 4 5 9 D 100 34 2 1 4 4 1 1 0 2 9 0 7 2 2 1 9 5 5 E 100 72 0 2 8 3 9 2 2 3 1 2 1 2 9 4 1 5 8 F 100 307 9 9 7 3 1 104 34 10 5 3 4 17 77 5 7 G 100 717 5 234 33 158 2 2 23 1 3 2 36 5 5 11 H 100 1 343 1 82 7 6 2 41 8 3 1 334 2 5 985 7 3 J 100 2 496 3 123 5 4 9 81 5 3 3 104 5 4 2 181 1 7 3 L mites de detecci n rangos lineales y notificables El l mite inferior de detecci n del ensayo de acuerdo con el documento EP17 A del CLSI es de 645 RLU aproximadamente lo que equivale a 0 04 CU muy por debajo del m nimo del rango notificable El limite superior de detecci n aproximado es de 1 772 000 RLU que est aproximadamente un 240 por encima del m ximo del rango notificable El rango notificable completo que va de 2 3 CU a 3285 3 CU es lineal Se ha realizado un estudio de linealidad siguiendo el documento EP6 A del CLSI y los datos obtenidos son los siguientes Muestra Rango del an lisis CU Pendiente IC del 95 Intersecci n en Y IC del 95 R2 1 D
14. e 1 6 a 16 2 1 00 de 0 97 a 1 03 0 03 de 0 34 a 0 28 1 00 2 De 2 8 a 28 4 0 96 de 0 92 a 1 01 0 13 de 0 63 a 0 89 0 99 3 De 6 5 a 65 3 1 01 de 0 98 a 1 05 0 35 de 1 14 a 1 84 0 99 4 De 8 8 a 87 7 1 02 de 0 98 a 1 05 1 33 de 3 13 a 0 48 0 99 5 De 70 0 a 699 8 0 98 de 0 94 a 1 01 4 03 de 18 27 a 10 22 0 99 6 De 391 1 a 3520 11 0 96 de 0 94 a 0 99 67 70 de 118 4 a 17 0 1 00 Interferencia Las muestras que conten an hasta 10 mg dL de bilirrubina 200 mg dL de hemoglobina 1 000 mg dL de triglic ridos 224 mg dL de colesterol o 500 Ul mL de factor reumatoide IgM no presentaron interferencia en el QUANTA Flash PR3 QUANTA Flash PR3 701136 Calibradores Para uso diagn stico In Vitro Uso previsto Los Calibradores QUANTA Flash PR3 est n destinados a utilizarse con el inmunoensayo quimioluminiscente CIA QUANTA Flash PR3 en el instrumento BIO FLASH Cada calibrador establece un punto de referencia para la curva de trabajo utilizada en la determinaci n de autoanticuerpos IgG antiproteinasa PR3 en suero humano Resumen y principios del procedimiento El CIA QUANTA Flash PR3 emplea una curva maestra predefinida espec fica de cada lote que se guarda en el c digo de barras del cartucho de reactivos Los calibradores QUANTA Flash PR3 est n dise ados para generar una curva de trabajo espec fica para el instrumento a partir de los par metros de la curva maestra con un punto de decisi n ba
15. e ensayo no se han establecido para sustratos distintos del suero Valores esperados Para establecer los valores esperados se han analizado sueros de 400 donantes de sangre aparentemente sanos La media fue lt 3 3 CU y el percentil 95 se calcul como lt 4 9 CU Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios rangos de referencia para reflejar la poblaci n estudiada Trazabilidad Actualmente no existe ning n est ndar internacional reconocido para la determinaci n de anticuerpos anti PR3 Sin embargo se ha analizado el suero de referencia internacional 152721 n m 16 ANCA anti PR3 del Center for Disease Control and Prevention CDC y se ha determinado una concentraci n de 403 CU Asimismo se ha realizado un an lisis de linealidad y se ha obtenido un valor de R de 1 0 Puede utilizarse un factor de conversi n de 0 25 para convertir las CU a Ul mL Si se selecciona Ul mL el software BIO FLASH emplea el factor de conversi n para indicar los resultados en Ul mL Comparaci n de m todos con un ensayo comercializado con el mismo fin Las muestras usadas en la comparaci n de m todos fueron las de los estudios de validaci n cl nica que se encontraban dentro del rango notificable del ensayo Dichas muestras se analizaron mediante el QUANTA Flash PR3 y un ELISA destinado al mismo fin Comparaci n de m todos ELISA PR3 Concordancia N 199 Positivo Negativo intervalo de confianza 95 QUANTA Positiv
16. idad y la especificidad de dichos autoanticuerpos Recientemente se han desarrollado ensayos de captura o fijaci n para la detecci n de ANCA anti PR3 y anti MPO A diferencia de la mayor a de ELISA de ANCA anti PR3 y anti MPO los ensayos de captura y fijaci n no inmovilizan al ant geno mediante adsorci n por lo que se considera que presentan un mayor rendimiento de an lisis gracias a una exposici n ptima al ant geno La prevalencia de ANCA anti PR3 y anti MPO en sus enfermedades asociadas depende de la cohorte de pacientes y de la metodolog a utilizada para detectar los anticuerpos Se ha comunicado que los ANCA anti PR3 y anti MPO se correlacionan con la actividad de la vasculitis La mayor parte de los expertos en el campo de la vasculitis autoinmunitaria todav a recomiendan utilizar el ensayo de inmunofluorescencia con neutr filos humanos fijados en formalina y etanol para la detecci n inicial A causa de la naturaleza r pidamente progresiva de la vasculitis de vasos peque os la detecci n precoz de ANCA anti PR3 y anti MPO es de gran importancia Principios del procedimiento Se recubren con PR3 purificada nativa part culas de l tex paramagn ticas que se guardan en el cartucho de reactivos en unas condiciones que mantienen el ant geno en su estado reactivo Cuando el cartucho de an lisis est preparado para ser utilizado por primera vez se invierte varias veces todo el cartucho para mezclar completamente los reactiv
17. ilizarse suero muy hemolizado lip mico o ict rico Tras la recogida el suero debe separarse del co gulo El documento H18 A3 del CLSI recomienda las siguientes condiciones de almacenamiento de muestras 1 No guarde las muestras a temperatura ambiente durante m s de 8 horas 2 Si el an lisis no se efect a en un plazo de 8 horas refrigere las muestras a 2 8 C 3 Si el an lisis no va a realizarse en un plazo de 48 horas o si debe preparar las muestras para enviarlas cong lelas a una temperatura de 20 C o inferior Las muestras congeladas deben mezclarse bien despu s de descongelarse y antes del an lisis Procedimiento Materiales suministrados 1 Cartucho de reactivos QUANTA Flash PR3 Materiales adicionales necesarios no suministrados Instrumento BIO FLASH con ordenador para manejarlo L quido de lavado del sistema BIO FLASH n mero de componente 3000 8205 Iniciadores BIO FLASH n mero de componente 3000 8204 Cubetas BIO FLASH n mero de componente 3000 8206 Calibradores QUANTA Flash PR3 n mero de componente 701136 Controles QUANTA Flash PR3 n mero de componente 701137 Uso del analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH 1 Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH Para obtener m s informaci n o solucionar problemas relativos al ensayo
18. luminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH El instrumento analizar cada calibrador por triplicado Una vez analizados los calibradores el software solicitar la validaci n de la calibraci n En la pantalla Instrument Summary haga clic en bot n Choose more options Ctrl M V se alado con una flecha Seleccione Calibration Ctrl F3 En la ventana Calibraci n marque el ensayo deseado y haga clic en Details En la ventana Calibration Details que se abrir seleccione la calibraci n que acaba de efectuar La curva maestra se visualizar como una l nea discontinua y la nueva curva maestra como una l nea continua Si los resultados de la calibraci n son v lidos en la parte inferior izquierda de la pantalla aparecer un bot n de validaci n Haga clic en el bot n Validate Calibration Una vez validada la calibraci n el lote de cartuchos de reactivos en el que se ha efectuado la calibraci n estar preparado para utilizarse Se recomienda analizar QUANTA Flash PR3 controles vendidos por separado n mero de producto 701137 tras calibrar un lote de cartuchos de reactivos Trazabilidad Actualmente no existe ning n est ndar internacional reconocido para la determinaci n de anticuerpos anti PR3 Sin embargo se ha analizado el suero de referencia internacional 152721 n m 16 ANCA anti PR3 del Center for Disease Control and Prevention CDC y se ha determinado una concentraci n de 403 CU Asimismo se ha realiza
19. mento BIO FLASH Una vez abierto el cartucho de reactivos debe almacenarse en la bandeja de reactivos del instrumento La colocaci n del cartucho de reactivos en el instrumento por primera vez debe realizarse con todo cuidado para no verter los reactivos 4 Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o aclarado inadecuados del instrumento Los residuos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Aseg rese de limpiar siempre el instrumento seg n el procedimiento recomendado que est indicado en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de almacenamiento 1 Guarde los cartuchos de reactivos no abiertos a 2 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y manipulan como est indicado 2 Los cartuchos de reactivos abiertos deben guardarse cargados en el instrumento y permanecen estables durante 70 d as tras este per odo deben desecharse El software BIO FLASH supervisa las fechas de caducidad de los cartuchos cargados as como las de los lotes de cartuchos de reactivos Recogida preparaci n y manejo de las muestras Este procedimiento debe realizarse con una muestra de suero No deben utilizarse muestras que est n contaminadas con microorganismos que hayan recibido un tratamiento por calor o que contengan part culas visibles No debe ut
20. o Conc pos 98 2 90 4 100 0 Flash PR3 Negativo Conc neg 91 6 85 8 95 6 CIA Total Conc total 93 5 89 1 96 5 Sensibilidad y especificidad cl nicas El estudio de validac n cl nica cont con 101 muestras de GPA 73 de poliange tis microsc pica MPA 10 de s ndrome de Churg Strauss 68 de s ndrome de Goodpasture 64 de artritis reumatoide 43 de lupus eritematoso sist mico 7 de s ndrome de Sjogren 70 de enfermedad inflamatoria intestinal no diferenciada 50 de esclerosis sist mica 20 de esclerosis m ltiple 32 con el virus de la hepatitis B 47 con el virus de la hepatitis C 10 con el virus de la inmunodeficiencia humana 9 de s filis y 81 con otras enfermedades Tambi n se incluyeron muestras procedentes de 405 donantes de sangre normales Los resultados de este an lisis son los siguientes Diagn stico An lisis Sin GPA intervalo de confianza 95 Positivo Sensibilidad 68 3 58 3 77 2 Negativo Especificidad 97 4 95 8 98 6 Total Conc total 93 1 91 0 94 9 Ocho muestras discrepantes de pacientes con Ell dos de pacientes con MPA dos de pacientes con el VIH una de un paciente con el VHB una de un paciente con MCTD y una de un paciente con polimialgia reum tica Estudio cl nico n 686 QUANTA Flash PR3 Precisi n y reproducibilidad La precisi n del ensayo QUANTA Flash PR3 se ha evaluado analizando 9 pacientes seg n el
21. o a la presencia de anticuerpos frente al VIH el HBsAg y el VHC seg n m todos aprobados por la FDA Sin embargo ning n m todo de an lisis puede ofrecer plenas garant as de la ausencia del VIH el VHB el VHC u otros agentes infecciosos Por ello los controles QUANTA Flash PR3 deben manipularse como si se tratara de material potencialmente infeccioso 4 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 5 Los vertidos de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente para la eliminaci n de residuos Precauciones 1 Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro Los controles QUANTA Flash PR3 deben utilizarse con el ensayo QUANTA Flash PR3 No transfiera los reactivos de los controles a tubos secundarios Los c digos de barras de los tubos son utilizados por el instrumento para identificar al control Cada tubo de control una vez abierto es v lido para 15 usos y puede permanecer como m ximo 10 minutos en el instrumento en cada uso Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o aclarado inadecuados del instrumento Los residuos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Aseg rese de limpiar siempre el instrumento seg n el procedimiento recomendado que e
22. os A continuaci n se coloca el cartucho de reactivos en el instrumento BIO FLASH Mediante el instrumento se prediluye una muestra de suero del paciente con l quido de lavado del sistema a adido a una cubeta desechable de pl stico Se combinan en una segunda cubeta y se mezclan peque as cantidades del suero de paciente diluido las part culas de PR3 y el tamp n de an lisis Esta cubeta se incuba a 37 C y despu s se magnetizan las part culas y se lavan varias veces A continuaci n se a aden anticuerpos anti lgG humana conjugados con isoluminol a la cubeta y se incuba a 37 C De nuevo las part culas se magnetizan y se lavan repetidamente El conjugado de isoluminol produce una reacci n luminiscente cuando se a aden a la cubeta los reactivos iniciadores La luz generada por la reacci n se mide como unidades relativas de luz URL mediante el sistema ptico del BIO FLASH El n mero de URL es proporcional a la cantidad de conjugado de isoluminol ligado que a su vez es proporcional a la cantidad de autoanticuerpos IgG anti PR3 unidos a la PR3 en las part culas El ensayo QUANTA Flash PR3 utiliza una curva maestra predefinida espec fica para cada lote que se carga en el instrumento mediante el c digo de barras del cartucho de reactivos De acuerdo con los resultados del an lisis de dos calibradores se crea una curva de trabajo espec fica para el instrumento que se usa para calcular las unidades de quimioluminiscencia
23. os El control positivo est dise ado para evaluar la precisi n y la exactitud del ensayo a niveles de anticuerpos de moderados a altos Reactivos 1 Control negativo QUANTA Flash PR3 Dos 2 tubos etiquetados mediante c digo de barras con tamp n que contiene anticuerpos de suero humano anti PR3 preparado para ser utilizado y de 0 5 ml de volumen contienen tamp n estabilizantes de prote nas y conservantes 2 Control positivo QUANTA Flash PR3 Dos 2 tubos etiquetados mediante c digo de barras con tamp n que contiene anticuerpos de suero humano anti PR3 preparado para ser utilizado y de 0 5 ml de volumen contienen tamp n estabilizantes de prote nas y conservantes Advertencias 1 Los controles contienen una sustancia qu mica cloranfenicol al 0 02 que est clasificada como cancer gena por el Estado de California 2 Se utiliza azida s dica como conservante La azida s dica es una sustancia venenosa y puede resultar t xica si se ingiere o si se absorbe a trav s de la piel o los ojos La azida s dica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuber as y formar azidas met licas potencialmente explosivas Si utiliza las pilas de lavado para eliminar reactivos aclare con abundante cantidad de agua para evitar la formaci n de azidas met licas 3 Todo el material de origen humano usado en la preparaci n de los controles para este producto ha sido analizado y ha producido un resultado negativo con respect
24. paraci n de los controles para este producto ha sido analizado y ha producido un resultado negativo con respecto a la presencia de anticuerpos frente al VIH el HBsAg y el VHC seg n m todos aprobados por la FDA Sin embargo ning n m todo de an lisis puede ofrecer plenas garant as de la ausencia del VIH el VHB el VHC u otros agentes infecciosos Por ello los calibradores QUANTA Flash PR3 deben manipularse como si se tratara de material potencialmente infeccioso 4 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 5 Los vertidos de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente para la eliminaci n de residuos Precauciones 1 Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro Los calibradores QUANTA Flash PR3 deben utilizarse con el ensayo QUANTA Flash PR3 No transfiera los reactivos de los calibradores a tubos secundarios Los c digos de barras de los tubos son utilizados por el instrumento para ajustar los calibradores al tipo de ensayo adecuado Los tubos de los calibradores una vez abiertos pueden utilizarse durante un m ximo de 8 horas o 4 calibraciones transcurrido este tiempo los reactivos deben desecharse Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o aclarado inadecuados del instrumento Los residuos de sustancias qu micas habituales
25. sado en las caracter sticas operativas y en la evaluaci n cl nica del CIA QUANTA Flash PR3 Los calibradores se analizan en varios instrumentos con diversos lotes de reactivos antes de efectuar la asignaci n de valores Reactivos 1 Calibrador 1 del QUANTA Flash PR3 Dos 2 tubos etiquetados mediante c digo de barras con tamp n que contiene anticuerpos de suero humano anti PR3 prediluido y preparado para ser utilizado y de 0 3 ml de volumen contienen tamp n estabilizantes de prote nas y conservantes 2 Calibrador 2 del QUANTA Flash PR3 Dos 2 tubos etiquetados mediante c digo de barras con tamp n que contiene anticuerpos de suero humano anti PR3 prediluido y preparado para ser utilizado y de 0 3 ml de volumen contienen tamp n estabilizantes de prote nas y conservantes Advertencias 1 Los calibradores contienen una sustancia qu mica cloranfenicol al 0 02 que est clasificada como cancer gena por el Estado de California 2 Se utiliza azida s dica como conservante La azida s dica es una sustancia venenosa y puede resultar t xica si se ingiere o si se absorbe a trav s de la piel o los ojos La azida s dica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuber as y formar azidas met licas potencialmente explosivas Si utiliza las pilas de lavado para eliminar reactivos aclare con abundante cantidad de agua para evitar la formaci n de azidas met licas 3 Todo el material de origen humano usado en la pre
26. st indicado en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de almacenamiento 1 Guarde los controles no abiertos a 2 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y manipulan como est indicado Los controles abiertos son v lidos para 15 usos y pueden permanecer como m ximo 10 minutos en el instrumento en cada uso El tiempo m ximo durante el que los tubos de control pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 2 5 horas o 10 minutos por uso Los controles destapados que permanezcan en el instrumento durante un periodo de tiempo de m s de 2 Ye horas en total deben desecharse Si se utiliza el mismo tubo de control para m s de 15 usos y o durante m s de 2 5 horas en total pueden producirse resultados err neos Para conseguir una estabilidad ptima retire los controles del sistema inmediatamente despu s de tomar las muestras y almac nelos tapados a 2 8 C en el vial original Procedimiento Para crear nuevos materiales de control de calidad para el ensayo PR3 1 Antes de utilizar los controles QUANTA Flash PR3 por primera vez en el instrumento introduzca en el software el nombre el lote la caducidad el valor o dosis y la DE objetivo En la pantalla Instrument Summary haga clic en el bot n Choose more options Ctrl M Y se alado con una flecha Seleccione QC Ctrl F2 Haga clic en el bot n New QC Material Cada grupo de con
27. trol incluye una hoja de datos espec fica del lote En primer lugar introduzca el nombre el n mero de lote y la caducidad de esta hoja de datos en el software A continuaci n haga clic en el bot n Add Assay En la ventana que se abrir aseg rese de que est marcada la casilla Show All Assays Seleccione el ensayo PR3 de la lista y haga clic en Add Por ltimo introduzca la dosis objetivo y la DE objetivo Haga clic en Save Realice este proceso para ambos controles Para crear un nuevo lote para los materiales de control de calidad existentes 1 Antes de utilizar un nuevo lote de controles QUANTA Flash PR3 por primera vez introduzca en el software el lote la caducidad el valor o dosis y la DE objetivo 2 En la pantalla Instrument Summary haga clic en el bot n Choose more options Ctrl M V se alado con una flecha Seleccione QC Ctrl F2 Marque el ensayo PR3 en la columna de la izquierda A continuaci n seleccione el material de control apropiado en la derecha PR3N para el control negativo o bien PR3P para el control positivo Haga clic en el bot n New QC Lot 3 Cada grupo de control incluye una hoja de datos espec fica del lote Introduzca la informaci n de esta hoja de datos en el software Dicha informaci n debe comprender el n mero de lote la caducidad la dosis objetivo y la DE objetivo Si es necesario haga clic en el bot n Add Assay En la ventana que se abrir aseg rese de que est marcada l
28. troles Se recomienda analizar los controles una vez cada d a en que se utilice el ensayo aunque los usuarios tambi n deben tener en cuenta los requisitos de la legislaci n nacional y local C lculo de los resultados En INOVA se produce una curva maestra de seis puntos para cada nuevo lote de QUANTA Flash PR3 Esta curva log stica de cuatro par metros se codifica mediante el c digo de barras de cada cartucho de reactivos Una vez calibrado un cartucho de reactivos se utilizar una curva de trabajo espec fica del equipo para convertir las RLU en CU La reactividad del anticuerpo frente a la PR3 puede entonces clasificarse seg n la tabla siguiente Reactividad CU Negativo lt 20 Positivo 220 La reactividad expresada en CU est directamente relacionada con la titulaci n del autoanticuerpo en las muestras de paciente Los aumentos y disminuciones de las concentraciones de anticuerpos de pacientes se reflejar n en un correspondiente aumento o disminuci n de las CU que es proporcional a la cantidad de anticuerpo El rango notificable del ensayo va de 2 3 CU a 3285 3 CU Si el resultado de un paciente es inferior a 2 3 CU el sistema BIO FLASH indicar lt 2 3 CU Dado que este valor es inferior a 20 CU se considera un resultado negativo Si el resultado de un paciente es superior a 3285 3 CU el sistema BIO FLASH indicar gt 3285 3 CU Este valor se considera un resultado positivo El software BIO FLASH dispone de una
29. uma Compruebe que las micropart culas se resuspenden completamente Si las micropart culas no se han resuspendido totalmente siga invirtiendo el cartucho hasta que se produzca la resuspensi n Si las micropart culas no se resuspenden NO UTILICE EL CARTUCHO 2 Una vez que se hayan resuspendido las micropart culas coloque el cartucho de reactivos sobre una superficie s lida para retirar la anila roja Con una mano sostenga el cartucho de reactivos en su lugar Con la otra mano agarre con fuerza la anilla roja de la parte posterior del cartucho de reactivos y tire de ella completamente 3 Pulse las dos pesta as laterales del tap n de perforaci n parte gris y aplique presi n a la parte superior del cartucho de reactivos hasta que descienda y alcance un tope Las pesta as deber an quedar ocultas NO INVIERTA EL CARTUCHO ABIERTO 4 Coloque con cuidado el cartucho de reactivos en cualquier ranura abierta del carro de reactivos del instrumento BIO FLASH Una vez colocado el cartucho en la bandeja de reactivos el instrumento realiza mezclas peri dicas adicionales de las part culas Calibraci n del ensayo 1 Cada nuevo lote de cartucho de reactivos debe calibrarse antes del primer uso El software no permitir usar un lote nuevo hasta que se calibre 2 Consulte el apartado QUANTA Flash PR3 Calibradores 701136 de este documento para obtener instrucciones de uso detalladas sobre c mo calibrar el cartucho de re
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