Cryptococcus spp. en Venezuela y su relación con el
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1. 1 SOCIEDAD 72 ES j Z MICROBIOLOGIA Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiolog a 2008 28 61 65 Art culo original Cryptococcus spp en Venezuela y su relaci n con el biotipo del MicroScan Celina P rez Wendy Mart nez Heidi Reyes Joel Torres Arantza Rosell Claudia Hartung Mar a Teresa Colella Carolina Olaizola Sof a Mata Secci n de Micolog a M dica Instituto de Medicina Tropical Universidad Central de Venezuela Laboratorio de Micolog a Hospital Dr Domingo Luciani Caracas Venezuela Recibido 13 de febrero de 2008 aceptado 30 de abril de 2008 Resumen El lector del panel microbiol gico automatizado autoScan 4 detecta el crecimiento del hongo en diversos sustratos bioqu mi cos presentes en los pozos de los paneles del MicroScan El prop sito de este estudio fue relacionar el biotipo identificado por el MicroScan con la especie causante de criptococosis con el objeto de permitir una identificaci n en el menor tiempo posible Se evalua ron 82 cepas de Cryptococcus spp aisladas a partir de muestras cl nicas entre 1995 y 2004 Para garantizar la pureza de las cepas se realiz la identificaci n de las mismas por m todos convencionales para identificar las especies se utiliz el medio L canavanina glicina azul de bromotimol CGB Se utiliz tambi n el panel de identificaci n r pida de levaduras del MicroScan con el fin de determinar e2. Utilizaci n del caldo rea de Stuart para el test de la ureasa como prueba en el diagn stico de las levaduras Rev Soc Ven Microb 2002 22 136 40 Mickelsen PA McCarthy R Propst MA Further modifica tions of the auxanographic method for identification of yeasts J Clin Microbiol 1977 5 297 301 P rez C Hern ndez Y Colella M Rosell A Hartung C Olaizola C Mata S Identificaci n de Cryptococcus sp me diante el auxanograma modificado por Araujo Kasmera 2004 32 16 26 Nardelli V P rez C Mata S Colella MT Rosell A Har tung C Landaeta ME Olaizola C Magaldi S Identification of Cryptococcus neoformans isolates using Staib agar with out creatinine Kasmera 2005 33 102 8 Kwon Chung KJ Polacheck I Bennett JE Improved diag nostic medium for separation of Cryptococcus neoformans var neoformans serotypes A y D Cryptococcus neofor mans var gattii serotypes B y C J Clin Microbiol 1982 15 535 7 Dufait R Velho R De Vroey C Rapid identification of the two varietes of Cryptococcus neoformans by D proline as similation Mykosen 1987 10 483 Guy ST Beauchesne D Evaluation of MicroScan Rapid Yeast identification panel J Clin Microbiol 1991 29 2296 9 Hartung C Navas T Dolande M Guaimare G Reviakina V Patogenicidad del Cryptococcus neoformans conservado en agua seg n Castellani Rev Inst Nac Hig Rafael Rangel 1991 22 3 19 22 P rez C Mata S Hartung C Rosello A Colella MT Olaizo la C La
3. 147 891 907 14 Kwon Chung KJ Boekhout T Fell JW D az M Proposal to conserve the name Cryptococcus gattii against C honduri anus and C bacillisporus Basidiomycota Hymenomycetes Tremellomycetidae Taxon 2002 51 804 6 15 Bennett J Kwon Chung K Howard D Epidemiologic dif ferences among serotypes of Cryptococcus neoformans Am J Epidemiol 1977 105 582 6 16 Kwon Chung KJ Bennett JE Epidemiologic differences between the two varieties of Cryptococcus neoformans Am J Epidemiol 1984 120 123 30 17 Ordo ez N Casta eda E Varieties and serotypes of Crypto coccus neoformans clinical isolates in Colombia Rev Iberoam Micol 2001 18 128 30 18 Carrada T Campo M Albarran M Carrillo J Estudio epi demiol gico del Cryptococcus neoformans en M xico Rev Invest Salud P blica 1971 31 92 104 19 Lima SC Sakata E Rocha CE Yasuda PH Stiliano SV Ribeiro FA Variedades y serotipos de Cryptococcus neo formans en pacientes con SIDA y neurocriptococosis en Sao Paulo Brasil Rev Inst Med trop Sao Paulo 1990 32 480 2 20 21 22 23 24 25 26 2il 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 P rez y col Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiolog a 2008 28 61 65 65 Vijaya D Anand BH Nagarathnamma T Case report Dis seminated cutaneus cryptococcosis in an immunocompetent host Mycoses 2001 44 113 4 Arteaga E Cap V P rez ML Micosis o
4. fect Dis 1990 161 809 Dromer F Ronin O Dupont B Isolation of Cryptococcus neoformans var gattii from an Asian patient in France Evi dence for dormant infection in healthy subjets J Med Vet Mycol 1992 30 395 7 Merheb JC Garc a J Infecciones mic ticas en pacientes inmunocomprometidos estudio anatomopatol gico de 404 necropsias Antibi ticos e Infecci n 1991 1 12 7 Levy RM Bredesen DE Rosemblum ML Oportunistic central nervous system pathology in patients with AIDS Ann Neurol 1988 23 57 S12 Medoff G Kobayashi GS Systemic fungal infections an overview Hosp Pract 1991 15 41 52 Calvo B Colombo A Fischman O Thompson L Lazera M Telles F et al Antifungal susceptibilities varieties and elec trophoretic karyotypes of clinical isolates of Cryptococcus neoformans from Brazil Chile and Venezuela J Clin Mi crobiol 2001 39 2348 50 Rivera M Alayo E Balliache N Mar n A Bessignano N Fern ndez H Micosis sist micas asociadas a infecci n por VIH Bol Venez Infectol 2004 15 2 30 1 Panizo M Revi kina V Dolande M Casu stica del aisla miento de levaduras en muestras cl nicas 2001 2003 Bol Venez Infectol 2004 15 2 16 7 Sorrell T Ellis D Ecology of Cryptococcus neoformans Rev Iberoam Micol 1997 14 42 3 Malik R Wigney DJ Muir DB Gregory DJ Love DN Criptococcosis in cats clinical and mycological assessment of 29 cases and evaluation of treatment using orally admin istered fluconazole
5. gattii Total N N N 000 040 000 URE 2 2 67 0 0 00 2 2 44 000 040 004 URE NAG 11 14 67 2 28 57 13 15 85 000 040 024 URE NAG BDF 2 2 67 0 0 00 2 2 44 000 040 040 URE AGL1 1 1 33 0 0 00 1 1 22 000 040 044 URE NAG AGL2 8 10 67 0 0 00 8 9 76 000 042 004 URE NAG SUC2 5 6 67 0 0 00 5 6 10 000 042 024 URE NAG SUC2 BDF 1 1 33 0 0 00 1 1 22 000 042 040 URE AGL2 SUC2 1 1 33 0 0 00 1 1 22 000 042 044 URE NAG AGL2 SUC2 7 9 33 0 0 00 7 8 54 000 060 004 URE NAG 1 1 33 1 14 29 2 2 44 001 040 024 URE NAG BDF AARG 1 1 33 0 0 00 1 1 22 002 040 000 URE GLPR 0 0 00 1 14 29 1 1 22 002 040 004 URE NAG GLPR 9 12 00 1 14 29 10 12 20 002 040 040 URE AGL2 GLPR 1 1 33 0 0 00 1 1 22 002 040 044 URE NAG AGL2 GLPR 3 4 00 0 0 00 3 3 66 002 042 000 URE GLPR SUC2 0 0 00 1 14 29 1 1 22 002 042 004 URE NAG GLPR SUC2 6 8 00 0 0 00 6 7 32 002 042 024 URE NAG GLPR SUC2 BDF 1 1 33 0 0 00 1 1 22 002 042 044 URE AGL2 NAG GLPR SUC2 1 1 33 0 0 00 1 1 22 002 060 044 URE NAG AGL2 GLPR IDX 1 1 33 0 0 00 1 1 22 002 062 044 URE NAG GLPR SUC2 AGL2 IDX 2 2 67 0 0 00 2 2 44 002 240 004 LYAL URE NAG GLPR 0 0 00 1 14 29 1 1 22 003 040 004 URE NAG GLPR AARG 3 4 00 0 0 00 3 3 66 003 040 044 URE NAG AGL2 GLPR AARG 3 4 00 0 0 00 3 3 66 003 042 004 URE NAG GLPR SUC2 AARG 3 4 00 0 0 00 3 3 66 003 042 044 URE AGL2 NAG GLPR SUC2 AARG 1 1 33 0 0 00 1 1 22 003 442 044 LYAL URE AGL2 NAG GLPR SUC2 AARG 1 1 33 0 0 00 1 1 22 Total 75 100 00 7 100 00 82 100 00 p gt 0 05 HPR Hidroxiprolina P N
6. the purpose of determining the biotype The MicroScan revealed 27 different biotypes Of the 82 isolates typed with the CGB medium 91 46 corresponded to C neoformans and 8 5 to C gattii No significant difference was found among the biotypes and the species p lt 0 05 Nevertheless there was a statistically significant difference between the assimilation of p nitrophenil N acetyl B D glucosamine NAG p lt 0 05 by the C gattii and the C neoformans species The fast yeast identification Mi croScan panel was not able to differentiate between both species Keywords Cryptococcus spp C neoformans C gattii automated identification biotypes MicroScan Correspondencia Email celinaperezdesalazarQ gmail com Introducci n Cryptococcus neoformans seguido de Cryptococcus gattii son levaduras de importancia m dica que originan enfermedad respiratoria y meningoencefalitis potencial mente fatales tanto en humanos como en animales La criptococosis humana se desarrolla luego de efectuarse la exposici n ambiental y la inhalaci n de las levaduras 1 41 Evans en los a os 50 y Wilson y col en 1968 reporta ron la presencia de 4 serotipos diferentes entre los cuales est n los serotipos A y D pertenecientes a C neoformans var neoformans y los serotipos B y C pertenecientes a C neoformans var gattii 5 7 Posteriormente Bennett y col en 1978 encontraron diferencias bioqu micas entre ambas varieda
7. J Med Vet Mycol 1992 30 133 44 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 53 56 Lazera M Pires F Camilo Coura L Nishikawa M Bezerra C Trilles L Wanke B Natural habitat of Cryptococcus neo formans var neoformans in decaying wood forming hollows in living trees J Med Vet Mycol 1996 34 127 31 Castan n LR L pez R Isolation of Cryptococcus neofor mans from pigeon Columba livia droppings in Mexico City Mycoses 1994 37 325 7 Ellis DH Pfeiffer TJ Natural habitat of Cryptococcus neo formans var gattii J Clin Microbiol 1990 28 1642 4 Muchmore HG Scott EN Felton FG Fromtling RA Cryptococcus neoformans serotypes groups encountered in Oklahoma Am J Epidemiol 1980 112 32 8 Villanueva E Mendoza M Torres E Albornoz M Serotipi ficaci n de 27 cepas de Cryptococcus neoformans aisladas en Venezuela Acta Cient fica Venezolana 1989 40 151 4 Lacaz C Porto E Heins EM Takahashi N Identificac o dos Fungos En Gu a para ldentificac o de Fungus Actino micetos Algas de interesse m dico Savier Sao Paulo 1998 pp 94 123 Sidrim JJC Morelra JLB Diagn stico laboratorial das leveduras En Sidrim JJC Fundamentos clinicos e laboratoriais da Micolog a M dica Editorial Guanabara Koagan S A Rio de Janeiro 1999 pp 76 89 Goitia K P rez C Mata S Hartung C Colella MT Hern n dez C Villarroel M Reyes H Ontiveros Y Magaldi S Sua rez R
8. aftilamida ILE L Isoleucina P Naftilamida PRO L Prolina P Naftilamida TYR L Tirosina P Naftilamida GLY Glicina P Naftilamida GGLY Glicilglicina P Naftilamida GLAR Glicil L Arginina 4 Metoxi P Naftilamida GLPR Glicil L Prolina 4 Me to xi P Naftilamida AARG L Arginil L Arginina P Naftilamida LYAL L Lisil L Alanina 4 Metoxi P Naftilamida ALA L Alanina 4 Meto xi P Naftilamida STY L Seril L Tirosina P Naftilamida URE Urea IDX 3 Indoxil Fosfato HIS L Histidina P Naftilamida SUCI Saca rosa SUC2 Sacarosa TRE Trehalosa AGL1 p Nitrofenil a D Glucopiran sido AGL2 p Nitrofenil a D Glucopiran sido BGL p Nitro fenil P D Glucopiran sido BGAL o Nitrofenil P D Galactopiran sido BDF p Nitrofenil f Fucopiran sido AGAL p Nitrofenil a D Galac topiran sido NAG p Nitrofenil N Acetil P D Glucosamina CELL p Nitrofenil P D Celobiosa NGAL p Nitrofenil N Acetil P D Galacto samina 64 P rez y col Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiolog a 2008 28 61 65 Los centros de referencia para el diagnostico de las mi cosis identifican generalmente el hongo en los cultivos de rutina solo hasta nivel de g nero Para simplificar la identi ficaci n hasta el nivel de especie de estos micetos seria de gran inter s poder recurrir a m todos automatizados En este estudio se utiliz el medio CGB 51 encontr n dose que hab a un 91 46 de C neoformans y s lo un 8 54 de C gattii El equipo automatizado gene
9. des 8 Para el a o 2004 debido a diferencias ecol gicas morfol gicas bioqu micas serol gicas y actualmente 62 P rez y col Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiolog a 2008 28 61 65 moleculares como la presencia de las secuencias de diversos genes URAS CnLAC CAP59 CAP64 y IGS entre otros y su relaci n filogen tica C neoformans var gattii ha sido elevado al nivel de especie Por tal motivo C neoformans var neoformans es considerado ahora C neoformans y C neoformans var gattii como C gattii cada uno con sus respectivos serotipos 1 8 14 Se han encontrado diferencias en la distribuci n geo gr fica de las 2 especies antes mencionadas C neofor mans es cosmopolita mientras que C gattii est restrin gido a regiones tropicales y subtropicales entre las cuales se encuentran Australia Brasil Camboya Hawai Sur de California M jico Paraguay Tailandia Vietnam Nepal y frica Central En estas reas C gattii puede represen tar m s del 35 de las cepas aisladas C neoformans se ha aislado de diversas fuentes ambientales como por ejemplo excretas de palomas trozos de madera y frutas en descomposici n entre otras mientras que C gattii se ha aislado de los rboles de eucaliptos y almendros de guano de murci lagos y de colmena de avispas de la especie Polybia occidentalis 1 3 15 43 Es infrecuente la incidencia de casos de criptococosis causados por C gattil en pacientes inmunocompet
10. e los resultados se utiliz la prueba exacta de Fisher dos colas Las diferencias fue ron consideradas significativas con una p lt 0 05 Resultados Todos los aislados evaluados mediante el uso de m to dos convencionales fueron identificados como Crypto coccus spp De los 82 aislados sembrados en el medio CGB el 91 46 n 75 fueron C neoformans y el 8 54 n 7 P rez y col Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiolog a 2008 28 61 65 63 fueron identificados como C gattii Las cepas controles arrojaron los resultados esperados Las placas de identifi caci n r pida para levaduras MicroScan revelaron 27 biotipos diferentes No se encontraron diferencias signi ficativas entre los diferentes biotipos y las especies de Cryptococcus identificadas p gt 0 05 Sin embargo se encontr una diferencia estad sticamente significativa entre C neoformans y C gattii y la capacidad de asimila ci n de p nitrofenil N acetil f4 D glucosamina NAG p 0 0236 Tabla 1 Discusi n En Venezuela se desconoce la prevalencia de Crypto coccus spp entre los aislados de muestras cl nicas ya que son escasos los reportes que incluyen el estudio de las especies 44 Tabla 1 N mero de biotipo arrojado por el autoscan 4 y sustratos asimilados con las placas de identificaci n r pida para levaduras Microscan seg n la especie C neoformans o C gattii Biotipo Sustrato C neoformans C
11. entes la raz n de este hecho no se conoce Sin embargo es bien conocido que el principal factor de riesgo para adquirir la infecci n por estas especies de micetos es la exposici n ambiental 1 15 19 22 23 25 27 28 30 31 35 En Venezuela s lo existe un reporte de serotipos de Cryptococcus aislados a partir de muestras cl nicas en donde de 27 aislados se identificaron 63 del serotipo A 29 del serotipo B 4 serotipo D y el resto un 4 no tipificables 44 La identificaci n rutinaria de este g nero de levaduras incluye examen macrosc pico de las colonias examen microsc pico con tinta china diversas pruebas bioqu mi cas como la prueba de ureasa el auxanograma utiliza ci n de la enzima difenoloxidasa y para la identificaci n de especie la utilizaci n del medio de canavanina glicina azul de bromotimol CGB entre otras las cuales con sumen un tiempo considerable en su realizaci n 45 51 Existe en la literatura otra t cnica para la identificaci n de especies la cual fue introducida por Dufait en 1987 con el fin de acelerar este proceso La misma se basa en la capacidad de C gattii de asimilar D prolina Sin em bargo esta t cnica no ha sido ampliamente utilizada debido a su alto costo 52 Entre los m todos de identificaci n automatizada se encuentra el lector del panel microbiol gico automatiza do autoScan 4 que utiliza un sistema ptico con el objeto de detectar el crecimiento f ngico en los poz
12. inguno de los aislados de C gattii asimil dicho compuesto en el m todo automatizado lo cual corrobora lo indicado por Dufait Aunque se encontraron diferencias significativas entre el sustrato asimilado NAG y las especies evaluadas este hallazgo no se puede generalizar puesto que el n mero de aislados de C gattii fue escaso Con este estudio podemos afirmar que el sistema automatizado conformado por las placas de identificaci n r pida para levaduras MicroScan fue incapaz de diferenciar ambas especies C neoformans y C gattii Por lo tanto el medio CGB 51 56 sigue repre sentando la forma m s apropiada de determinar las mis mas Agradecimiento Queremos agradecer a la Lic Mercedes Panizo del Departamento de Micolog a del Instituto Nacional de Higiene en Caracas por el suministro de las cepas de origen cl nico y por las cepas de control A la Lic In s Parra del Departamento de Medios de Cultivo del Institu to Nacional de Higiene por la preparaci n del medio CGB Este estudio fue parcialmente financiado por el CDCH Proyecto N PI 09 00 5384 2004 y por el Pro yecto Fonacit N LAB 2000001587 Referencias 1 Mitchell T Perfect J Cryptococcosis in the era of AIDS 100 years after the discovery of Cryptococcus neoformans Clin Microbiol Rev 1995 8 515 48 2 Negroni R Micosis en pacientes con SIDA Rev Argent Micol 1990 13 3 14 3 Kwon Chung KJ Sorrell TC Dromer F Fung E Levitz SM Cryptococc
13. l biotipo El MicroScan revel 27 diferentes biotipos De los 82 aislados tipificados con el uso del medio CGB el 91 46 correspon dieron a C neoformans y 8 54 a C gattii No se encontr una diferencia significativa entre los biotipos y las especies p gt 0 05 Sin embargo se encontr significancia estad stica entre las especies C gattii y C neoformans y la asimilaci n de p nitrofenil N acetil f3 D glucosamina NAG p lt 0 05 El panel de identificaci n r pida de levaduras del MicroScan no fue capaz de diferenciar ambas especies Palabras claves Cryptococcus spp C neoformans C gattii identificaci n automatizada Biotipos MicroScan Cryptococcus spp in Venezuela and its relationship with the MicroScan biotype Abstract The automated reader of the AutoScan 4 microbiological panels detects fungi growth in various biological substrates present in the MicroScan panel wells The purpose of this study was to relate the biotype identified by the MicroScan with the species causing the criptococcosis in order to obtain identification in the shortest possible period The evaluation included 82 Cryptococcus spp strains isolated from clinical samples between 1995 and 2004 To guarantee the purity of the strains they were also identified by conventional methods to identify the species we used L canavanin glycine bromthymol blue medium CGB We also used the fast yeast identification MicroScan panel with
14. ndaeta ME Mantenimiento de Cryptococcus sp con el m todo de Castellani Rev Soc Ven Microb 2003 23 153 7 P rez C Hern ndez Y Colella MT Rosello A Hartung C Olaizola C Magaldi S Mata S Identificaci n de Crypto coccus neoformans var gattii mediante el uso del medio CGB Rev Soc Ven Microb 2003 23 158 62
15. os de los paneles del MicroScan La identificaci n de deter minada levadura se realiza al observar cambios espec fi cos de color en los pozos los cuales poseen diversos sustratos prueba bioqu mica y dependiendo de los sustratos asimilados se le otorga un n mero al resultado del panel al cual se le denomina biotipo El uso de esta t cnica implica una disminuci n de personal especializa do y del tiempo de emisi n de un resultado 53 Debido a las diferencias epidemiol gicas observadas entre las cepas de C neoformans y C gattii obtenidas a partir de muestras cl nicas de pacientes se hace necesario identificar correctamente la especie aislada Por lo tanto el prop sito de este estudio fue determinar s los biotipos obtenidos por el MicroScan al estudiar las levaduras de Cryptococcus spp son lo suficientemente discriminati vos para su identificaci n a nivel de especie Materiales y M todos Se estudiaron 82 cepas de Cryptococcus spp aisladas de muestras cl nicas de pacientes con criptococosis entre 1995 2004 procedentes del Departamento de Micolog a del Instituto Nacional de Higiene y de la Secci n de Micolog a M dica del Instituto de Medicina Tropical Las mismas se encontraban mantenidas por el m todo de Castellani 54 55 Se utilizaron cepas de control donadas por el Departa mento de Micolog a del Instituto Nacional de Higiene entre las cuales se encontraban 3 cepas aut ctonas C neoformans ser
16. osis clinical and biological aspects Med Mycol 2000 38 Suppl 1 205 13 4 Sorrell TC Cryptococcus neoformans variety gattii Med Mycol 2001 39 155 68 5 Wilson DE Bennett JE Bailey JW Serologic grouping of C neoformans Proc Soc Exp Biol Med 1968 127 820 3 6 Evans EE The antigenic composition of C neoformans J Inmunol 1950 64 423 30 7 Evans EE Kessel JF Serologic grouping of C neoformans J Inmunol 1951 67 109 8 Bennett J Kwon Chung K Theodore T Biochemical differ ences among serotypes of Cryptococcus neoformans Sabouraudia 1978 16 167 74 9 Kwon Chung KJ A new species of Filobasidiella the sex ual state of C neoformans B and C serotypes Mycologia 1976 68 942 6 10 Vanbreuseghem R Takashio M An atypical strain of Cryptococcus neoformans San Felice Vuillemin 1894 Part II C neoformans var gattii var nov Ann Soc Belg Med Trop 1970 50 695 702 11 Kwon Chung KJ Bennett JE Theodore TS Cryptococcus bacillisporus nov serotype B C of Cryptococcus neofor mans Int J Syst Bacteriol 1978 28 616 20 12 Diaz M Boekhout T Theelen B Fell J Molecular sequence analyses of the intergenic spacer IGS associated with rDNA of the two varieties of the pathogenic yeast Crypto coccus neoformans Syst Appl Microbiol 2000 23 535 45 13 Boekhout T Theelen B Diaz M Fell J Hop W Abeln E Dromer F Meyer W Hybrid genotypes in the pathogenic yeast Cryptococcus neoformans Microbiology 2001
17. otipo A L 412000 158 C neoformans serotipo D L 412000 161 C gattii serotipo C L 412000 160 y por ltimo una originaria de B lgica C gattii serotipo B IHEM 4164 Las mismas tambi n se encontraban mantenidas por el m todo de Castellani Luego de realizar los subcultivos a partir del agua en el medio agar Sabouraud con el fin de asegurar la pureza de la cepa se efectu la identificaci n de las especies mediante el uso de los m todos convencionales Las cepas fueron identificadas por la morfolog a de las colo nias la presencia de c psula la forma de la levadura la termotolerancia la prueba de ureasa y el auxanograma Se determin la producci n de la enzima difenoloxidasa al usar el medio de agar Staib 45 47 49 50 Se realiz la siembra en el medio de CGB incubado a 28 C por 5 d as 51 Los resultados fueron evaluados de la siguiente manera la ausencia de un cambio de color color amarillo verdoso se consider como C neofor mans el cambio de color del medio a un azul cobalto como C gattii Por ltimo se efectu la identificaci n por el m todo automatizado con las placas de identificaci n r pida para levaduras MicroScan para lo cual se siguieron las espe cificaciones del manual del operador con el objeto de determinar el biotipo 53 Para el an lisis estad stico se utiliz estad stica descrip tiva Se determinaron frecuencias y porcentajes Para la comparaci n y el an lisis d
18. portunistas invasi vas en el SIDA Un estudio de 211 autopsias Rev Iberoam Micol 1998 15 33 5 Helou S Robles AM Arechavala A Bianchi M Negroni R Criptococcosis respiratoria en pacientes VIH positivos Rev Iberoam Micol 1999 16 126 9 Severo LC Berta I Londero AT Cutaneous cryptococcosis due to Cryptococcus neoformans var gattii Rev Iber Micol 2001 18 200 1 Murakawa G Kerschmann R Berger T Cutaneous Crypto coccus infection and AIDS Arch Dermatol 1996 132 545 de Bava AJ Negroni R Arechavala A Robles AM Bianchi M Cryptococcosis associated with AIDS in the Muniz Hospital of Buenos Aires Mycopathologia 1997 140 13 7 Bottone EJ Kirschner PA Salk IF Isolation of highly en capsulate Cryptococcus neoformans serotype B from a pa tient in New York City J Clin Microbiol 1986 23 186 8 Shimizu RY Howard DH Clancy MN The variety of Cryptococcus neoformans in patients with AIDS J Infect Dis 1986 154 1042 Rinaldi MG Drutz DJ Howell A Sande MA Woesy CB Hadley WK Serotypes of Cryptococcus neoformans in pa tients with AIDS J Infect Dis 1986 153 642 Bava A Negroni R Caracter sticas epidemiol gicas de 105 casos de criptococosis diagnosticados en la Rep blica Ar gentina entre 1981 1990 Rev Inst Med Trop Sao Paulo 1992 34 4 335 40 Clancy MN Fleischmann J Howard DH Kwon Chung KJ Shimizu RY Isolations of Cryptococcus neoformans var gattii from a patient with AIDS in Southern California J In
19. r 27 biotipos diferentes No se demostr una relaci n entre el biotipo emitido por el equipo automatizado y las especies identificadas con el medio CGB El medio CGB emplea glicina como nica fuente de carbono y nitr geno siendo el sulfato de L canavanina el compuesto que ayuda a la tipificaci n de ambas especies C gattii metaboliza dicho compuesto alcalinizando el medio por lo cual vira el color a azul cobalto C neofor mans no lo utiliza permaneciendo el medio del color origi nal 51 Es de hacer notar que el panel para la identificaci n de levaduras contiene glicina compuesto que forma parte del medio CGB pero en sus diferentes isoformas Glicina f Naftilamida GLY Glicilglicina P Naftilamida GGLY Glicil L Arginina 4 Metoxi P Naftilamida GLAR y Glicil L Prolina 4 Metoxi P Naftilamida GLPR Ningu na de las dos especies asimil los sustratos GLY GGLY GLAR por lo cual nos planteamos que la glicina no debe ser la nica fuente de carbono y o de nitr geno en el medio CGB y que las isoformas de glicina utilizadas en el panel de identificaci n automatizada no son las isoformas ade cuadas para identificar Cryptococcus spp 53 As mismo la t cnica de identificaci n de C neofor mans C gattii de Dufait establece que C gattii tiene la capacidad de asimilar D prolina 52 El panel de identifi caci n r pida para levaduras tiene sustratos contentivos de L prolina HPR y PRO En este estudio n
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