Soro de Coombs - WAMA Diagnóstica Produtos para Laboratórios
Contents
1. for 1 minute 3 Decant the supernatant by inverting the tube resuspend the erythrocyte pellet and complete again with physiological saline solution Repeat this procedure 3 times 4 After the last wash decant the supernatant completely inverting the tube and drying the edge with filter paper 5 Pipette 100 pl 2 drops of SORO DE COOMBS from WAMA 16 Mix by gentle agitation and centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 7 Gently resuspend the button of erythrocytes and examine for the presence of agglutination TESTINTERPRETATION POSITIVE TEST presence of agglutination and or hemolysis in one or more phases of the test characterizing presence ofirregular antibodies NEGATIVE TEST absence of agglutination and or hemolysis in all phases of the test characterizing absence of irregular antibodies TEST SPECIFICITY The performance of the Imuno HEMATO Soro de Coombs was evaluated in 86 samples collected with the recommended anticoagulants The evaluation showed 100 specificity for each reagent when compared with the results of a Kit used on the market Coefficient of Variation inter intra assay test Application Limit a Intra Assay Precision 2 samples were selected from quality control 2 negative to perform the repeatability test 20 repetitions ofthe test was done by the same operator on the same day According to the tests carried out it was verified that the kit Imuno Hemato Soro de Coombs repeated2. o teste utilizado para detectar a sensibiliza o in vivo das hem cias ajudando no diagn stico da doen a hemol tica do rec m nascido e da anemia hemol tica autoimune tornando se provavelmente o teste mais universalmente aplicado em imuno hematologia Geralmente os anticorpos envolvidos em rea es transfusionais s o de dois tipos ou seja completos e incompletos Os completos aglutinam gl bulos vermelhos em meio salino e os incompletos sensibilizam c lulas vermelhas sem aglutina o Geralmente anticorpos de classe IgM e anticorpos IgG do tipo IgG1 e IgG3 fixam complemento Assim alise celular in vivo mediada atrav s do sistema complemento O soro anti humano de Coombs utilizado em dois tipos de testes o direto e o indireto No direto a globulina anti humana usada para detectar anticorpos adsorvidos s c lulas vermelhas in vivo e portanto anticorpos ligados aos gl bulos vermelhos do paciente sendo utilizado no estudo da doen a hemol tica do rec m nascido de m es Rh negativas na investiga o de anemias hemol ticas autoimunes na hem lise induzida por drogas e nas rea es hemol ticas p s transfusionais No teste indireto a globulina anti humana usada para detectar anticorpos adsorvidos s c lulas vermelhas do sangue in vitro e portanto anticorpos livres no soro ou plasma sendo utilizado na pesquisa e identifica o de anticorpos irregulares e nos testes de compatibilidade O Imuno H
3. 10x75mmo12x75 mm e Micropipeta de 50uI 100ul y 1000uly puntas de pipeta Centrifuga Soluci n salina fisiol gica 0 85 0 0 9 Ba o de agua Recipiente para descarte de material PROCEDIMIENTO Independientemente de la t cnica empleada deje que el reactivo y la muestra alcance la temperatura ambiente antes de comenzar las pruebas PRUEBA ANTI GLOBULINA HUMANO COOMBS DIRECTO 1 Preparar una suspensi n en 5 de eritrocitos lavados para ser sometidas a ensayo en soluci n salina fisiol gica lavan las c lulas 3 veces en soluci n salina 0 85 o 0 9 pipetear 50 ul de eritrocitos lavados 1 ml de soluci n salina en un tubo de ensayo 12 x 75 mm Otros vol menes pueden ser utilizados 2 En un tubo de ensayo etiquetado de 10 x 75 mm o 12 x 75 mm pipetas 50 pl de suspensi n de eritrocitos a 5 3 Complete el tubo con soluci n salina fisiol gica y se centrifugue a 1 000 RPM 100 a 1259 durante 1 minuto 4 Decantar el sobrenadante invirtiendo el tubo resuspenda el sedimento de eritrocitos y complete de nuevo con soluci n salina fisiol gica Repita este procedimiento 3 veces 5 Despu s del ltimo lavado decantar el sobrenadante completamente invirtiendo el tubo y secando la borda con papel de filtro 6 Pipetear 100 pul 2 gotas de Coombs Sera 1 7 Mezclar por agitaci n suave y se centrifugue a 1 000 RPM 100 a 125 g durante 1 minuto 8 Resuspender suavemente el bot n de eritrocitos y examin
4. ausencia de aglutinaci n y o hem lisis en todas las fases de la prueba caracterizando ausencia de anticuerpos irregulares ESPECIFICIDAD DE LA PRUEBA El rendimiento de Imuno HEMATO Soro de Coombs fue evaluada en 86 muestras obtenidas con los anticoagulantes recomiendados La evaluaci n demuestra una especificidad del 100 de cada uno de los reactivos en comparaci n con los resultados de un Kiten el mercado Coeficiente de variaci n prueba inter intra ensayo L mite de Aplicaci n a Precisi n Intraensayo Se seleccionaron 2 muestras de control de calidad 2 negativos para realizar la prueba de repetibilidad 20 repeticiones del test fueran corridas por los mismo operador en mismo dia De acuerdo a las pruebas realizadas se verific que el kit Imuno Hemato Soro de Coombs repiti satisfactoriamente los resultados con las muestras del ensayo en las mismas condiciones b Precisi n Interensayo Se seleccionarn 10 muestras de control de calidad 10 negativos para realizar la prueba de reproducibilidad 3 pruebas se han llevado a cabo con las mismas muestras en d as y t cnicos diferentes y con la misma suerte De acuerdo a las pruebas realizadas se verific que el kit Imuno Hemato Soro de Coombs repiti satisfactoriamente los resultados con las muestras de ensayo incluso bajo diferentes condiciones LIMITACIONES DEUSO e Resultados falsos puede ocurrir debido a la contaminaci n de los materiales de ensayo concentraci
5. n inadecuada de las suspensiones de c lulas insuficiente tiempo de incubaci n o temperatura o errores de procedimiento Los tiempos de centrifugaci n mencionadas son recomendaciones Un tiempo de centrifugaci n apropiado debe ser determinado por cada laboratorio y ser el que produce la reacci n m s fuerte del anticuerpo con el ant geno en las reacciones positivas y tambi n para permitir una f cil resuspensi n de botones de RBC Reacciones m s d biles ser n m s frecuentes con sangre almacenada que con sangre fresca Se recomienda el uso de gl bulos rojos y sueros frescos preferiblemente no refrigerados El lavado inadecuado de los eritrocitos puede causar falso negativo a trav s de la presencia de globulinas s ricas libres neutralizando el suero de Coombs Se recomienda utilizar siempre un control positivo y negativo para el control de calidad delat cnica PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS 1 Los reactivos deben conservarse entre 2 8 C 2 La fecha de caducidad se refiere al ltimo d a del mes indicado en las etiquetas del frasco y de la caja del kit 3 Evite la exposici n de los reactivos a altas temperaturas y la luz solar directa 4 No congele el reactivo ya que esto puede causar da os irreversibles 5 La Imuno HEMATO Soro de Coombs de WAMA aunque derivados de origen animal no puede dar por sentado que se libre de agentes infecciosos Por lo tanto se recomienda tratar todos los reactivos que pued
6. satisfactorily the results with the samples to be tested under the same conditions b Inter Assay Precision 10 semples were selected from quality control 10 negatives to perform the test of reproducibility 3 tests were performed with the same samples in different days and technicians and with same lot According to the tests carried out it was verified that the kit Imuno Hemato Soro de Coombs repeated satisfactorily the results with the samples to be tested even under different conditions LIMITATIONS OF USE False Results can occur due to contamination of the test materials inadequate concentration of suspensions of cells inadequate incubation time or temperature or errors of procedure The centrifugation times mentioned are recommendations A appropriate centrifugation time must be determined by each laboratory and will be the one that produces the strongest reaction of the antibody with the antigen in positive reactions and will also to allowfor easy resuspension ofRBC buttons e Weaker reactions will occur more frequently with stored blood than with fresh blood Itis recommended to use fresh RBCs and sera preferably not chilled e The inadequate washing of erythrocytes can cause false negative through the presence of free serum globulins neutralising the Coombs serum Itis recommended to always use a positive and negative control for the quality control of the technique PRECAUTIONS AND WARNINGS 1 The reagents sh
7. 10 D 10ml 1 Coombs Serum 1x 10 ml 2 Instructions for use 1058050 D 50ml 1 Coombs Serum 5x 10 ml 2 Instructions for use 1058100 D 100ml 1 Coombs Serum 10 x 10 ml 2 Instructions for use REAGENT PREPARATION AND STABILITY COOMBS SERUM 1 ready for use Stable at 2 8 C until expiration date printed on the bottle Improper Storage affects the effectiveness of the reagent Contains sodium azide lt 0 095 w v as a preservative sodium chloride and bovine serum albumin DO NOT FREEZE For in vitro diagnostic use only Note The kit has the same performance after first use and is stable until the expiration date described on the label if itis keptin the indicated temperature 2 8 C SPECIMENS Use fresh blood sample Avoid hemolyzed samples Ifitis not possible to perform the tests after collection the sample must be kept refrigerated at2 8 C In accordance with the anticoagulant used the samples should be tested within the following time limits Heparin or Sodium Oxalate 2days EDTAor Sodium Citrate 14 days ACDorCPD 28 days MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED e Test Tubes 10x 75mmor 12x 75mm e Micropipette of 50 ul 100 ul and 1000 ul and tips Centrifuge Physiological saline Solution 0 85 or 0 9 Water Bath Container for material disposal PROCEDURE Regardless of the technique used let the reagent and the sample reach room temperature before starting the tests I ANTI H
8. EMATO SORO DE COOMBS da WAMA um soro de amplo espectro anti gama e n o gama globulina humana caracterizado por uma mistura de anticorpos contra imunoglobulinas e fatores do complemento preparado por imuniza o de coelhos por IgG humana completa purificada anti IgG policlonal e por cultura in vitro de hibridoma de rato linhagem celular Bric 8 secretando anticorpo monoclonal anti C3 de classe IgM anti C3d monoclonal O reagente de cor verde PRINC PIO DO M TODO O procedimento do ensaio baseado no princ pio da aglutina o onde c lulas vermelhas lavadas de indiv duo com anticorpos ou fatores do complemento adsorvidos sua superf cie Coombs Direto ou anticorpos livres Coombs Indireto aglutinar o na presen a da globulina anti humana poliespec fica Soro de Coombs indicando um resultado positivo O teste considerado negativo quando n o aparece aglutina o APRESENTA O DO KIT 1058010 D 10ml 1 Soro de Coombs 1 x 10 ml 2 Instru es para uso 1058050 D 50ml 1 Soro de Coombs 5 x 10 ml 2 Instru es para uso 1058100 D 100ml 1 Soro de Coombs 10x 10 ml 2 Instru es para uso PREPARA O E ESTABILIDADE DOS REATIVOS SORO DE COOMBS 1 pronto para uso Est vel entre 2 8 C at a data de vencimento impressa na etiqueta do frasco Armazenamento inadequado prejudica a efic cia do reagente Cont m azida s dica lt 0 095 w v como conservante cloreto de s dio e albumina bo
9. MS 10310030162 Imuno Hemato Reagente contendo uma mistura de anticorpos contra imunoglobulinas humana anti lgG policlonal e fatores do complemento anti C3d monoclonal para a realiza o dos testes de antiglobulina direta teste de Coombs direto e de antiglobulina indireta teste de Coombs indireto em tubo por t cnica de aglutina o Reagent containing a mixture of antibodies against human immunoglobulin polyclonalanti lgG and complement factors monoclonal anti C3d to test direct antiglobulin Coombs test and indirect antiglobulin indirect Coombs test in tube through agglutination technique Reactivo que contiene una mezcla de anticuerpos contra la inmunoglobulina humana polyclonal anti IgG y factores de complemento monoclonal anti C3d para prueba de antiglobulina directa prueba de Coombs y antiglobulina indirecta prueba de Coombs indirecto en el tubo mediante t cnica de aglutinaci n 1058010 D 10m 1058050 D 50ml 1058100 D 100ml M WAMA Diagn stica Rua Aldo Germano Klein 100 CEAT CEP 13573 470 S o Carlos SP Brasil Fone 55 16 3377 9977 Fax 55 16 3377 9970 www wamadiagnostica com br SAC 0800 772 9977 WAMA PORTUGU S IMPORT NCIA CL NICA Coombs Mourant e Race ap s alguns anos 1945 do descobrimento dos anticorpos anti Rh descreveram o teste de antiglobulina que utiliza o soro de antiglobulina humana preparado em coelhos para detectar anticorpos Rh incompletos Hoje
10. UMAN GLOBULIN TEST DIRECT COOMBS 1 Prepare a suspension in 5 of washed erythrocytes to be tested in physiological saline solution wash the cells 3 times in 0 85 or 0 9 saline solution pipette 50 ul of washed erythrocytes 1 ml of saline into a 12x 75 mmtesttube Other volumes can be used 2 In a labeled 10 x 75 mm or 12 x 75 mm test tube pipette 50 ul of 5 erythrocytes suspension 3 Complete the tube with physiological saline solution and centrifuge at 1 000 RPM 100 to 1259 for 1 minute 4 Decant the supernatant by inverting the tube resuspend the erythrocyte pellet and complete again with physiological saline solution Repeat this procedure 3 times 5 After the lastwash decant the supernatant completely inverting the tube and drying the edge with filter paper 6 Pipette 100 ul 2 drops of Coombs Sera 1 7 Mix by gentle agitation and centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 8 Gently resuspend the button of erythrocytes and examine for the presence of agglutination Il INDIRECT ANTI HUMAN GLOBULIN TEST INDIRECT COOMBS 1 Prepare a suspension in 5 of washed erythrocytes compatible with the patient serum usually from type O positive Rh which should be washed in physiological saline solution wash the cells 3 times in 0 85 or 0 9 saline solution pipette 50 jul of washed erythrocytes 1 ml of saline into a 12 x 75 mm test tube Other volumes can be used There is commercial RBCs to perform the te
11. a o Expiry Date Fecha de la caducidad Produto diagn stico in vitro In vitro diagnostic Produto diagn stico in vitro Consultar instru es para uso Refer to user s instructions Consultar las instrucciones para el uso Representante Europeu ECJREP European Representative Representante Europeu N mero do lote Lot Number N mero del lote N mero do cat logo Catalog Number N mero del cat logo Limite de temperatura Temperature Limite de temperatura au ENS Fabricado por Manufactured by Fabricado por Edi o Rev 05 2013 Proteger do calor Keep away from sunlight Proteger del calor El
12. a ltima lavagem decantar completamente o sobrenadante invertendo o tubo e enxugando a borda com papel de filtro 15 Pipetar 100 pl 2 gotas do SORO DE COOMBS da WAMA 16 Homogeneizar atrav s de leve agita o e centrifugar a 1 000 RPM 100 a 125 g por 1 minuto 17 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o INTERPRETA O DO TESTE TESTE POSITIVO presen a de aglutina o e ou hem lise em uma ou mais fases do teste caracterizando presen a de anticorpos irregulares TESTE NEGATIVO aus ncia de aglutina o e ou hem lise em todas as fases do teste caracterizando aus ncia de anticorpos irregulares ESPECIFICIDADE DO TESTE O desempenho do Imuno HEMATO Soro de Coombs foi avaliada em 86 amostras colhidas com os anticoagulantes recomendados A avalia o demonstrou especificidade de 100 de cada reagente quando comparados com os resultados de um Kit utilizado no mercado Coeficiente de Varia o inter ensaio intra ensaio Limite de Aplica o a Precis o Intra Ensaio Foram selecionadas 2 amostras do controle de qualidade 2 negativas para realizar o teste de repetibilidade Foram feitas 20 repeti es do teste com mesmo operador no mesmo dia De acordo com os testes realizados foi verificado que o kit Imuno Hemato Soro de Coombs repetiu de maneira satisfat ria os resultados com as amostras testadas nas mesmas condi es b Precis o Inter Ensaio Fo
13. adsorbido a los gl bulos rojos in vivo y porlo tanto los anticuerpos unidos a las c lulas rojas del paciente que se utiliza en el estudio de enfermedad hemol tica del reci n nacido en madres Rh negativas en la investigaci n de las anemias hemol ticas autoinmunes de hem lisis inducida por drogas y en reacciones p s transfusi n hemol ticas En la prueba indirecta el ancicuerpor anti globulina humana se utiliza para la detecci n de anticuerpos adsorbidos en los gl bulos rojos de la sangre in vitro y por lo tanto los anticuerpos libres en suero o plasma que es utilizado en la investigaci n y la identificaci n de anticuerpos irregulares y pruebas de compatibilidad La prueba Imuno HEMATO SORO DE COOMBS de WAMA es un suero de amplio espectro antigama humana y no gamma globulina humana caracterizada por una mezcla de anticuerpos contra las inmunoglobulinas y factores de complemento preparado por la inmunizaci n de conejos con IgG humana purificada anti lgG policlonal y por cultivo in vitro de hibridomas de rat n l nea celular Bric 8 que secretan anticuerpo monoclonal anti C3 clase IgM anti C3 monoclonal El reactivo es de color verde PRINCIPIO DEL M TODO El procedimiento de la prueba se basa en el principio de aglutinaci n donde lavan los gl bulos rojos de individuo con anticuerpos o factores de complemento adsorbidos en su superficie Coombs o de anticuerpos libre Coombs indirecto se aglutinan en presencia de su
14. ar la presencia de aglutinaci n Il PRUEBA ANTI GLOBULINA HUMANO INDIRECTA COOMBS INDIRECTO 1 Preparar una suspensi n en 5 de eritrocitos lavados compatibles con el suero de paciente generalmente de tipo O Rh positivo que deben ser lavadas con soluci n salina fisiol gica lavan las c lulas 3 veces en soluci n salina 0 85 o 0 9 pipetear 50 ul de eritrocitos lavados 1 ml de soluci n salina en un 12 x 75 mm tubo de ensayo Otros vol menes pueden ser utilizados Existe RBC comerciales para realizarla prueba 2 En un tubo de ensayo etiquetado de 10 x 75 mm o 12 x 75 mm pipetas 50 pl de suspensi n de eritrocitos a 5 3 Pipeta en el mismo tubo 100 ul del suero a ser probado 4 Homogeneizar por agitaci n suave e incubar a 37 C por 15 30 minutos 5 Retire el tubo del ba o maria complete con soluci n salina fisiol gica y se centrifugue a 1 000 RPM 100 a 125 g durante 1 minuto 6 Decantar el sobrenadante invirtiendo el tubo resuspenda el sedimento de eritrocitos y complete de nuevo con soluci n salina fisiol gica Repita este procedimiento 3 veces 7 Despu s del ltimo lavado decantar el sobrenadante completamente invirtiendo el tubo y secando la borda con papel de filtro 8 Pipetear 100 pul 2 gotas de Coombs Sera 1 9 Mezclar por agitaci n suave y se centrifugue a 1 000 RPM 100 a 125 g durante 1 minuto 10 Resuspender suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinac
15. cias lavadas 1 ml de salina Outros volumes podem ser usados H hem cias comerciais para a realiza o do teste 2 Emumtubo de ensaio 10x 75 mm ou 12x 75 mm marcado pipetar 50 ul da suspens o de hem cias a 5 3 Pipetar no mesmo tubo 100 ul do soro a ser testado 4 Homogeneizar atrav s de leve agita o e centrifugar a 1 000 RPM 100 a 125 g por 1 minuto 5 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o e ou hem lise 2 FASE Meio Prot ico Temperatura Ambiente 6 Pipetar no mesmo tubo acima 100 yl 2 gotas de Albumina Bovina a 22 1 7 Homogeneizar atrav s de leve agita o e centrifugar a 1 000 RPM 100 a 125 g por 1 minuto 8 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o e ou hem lise 3 FASE Meio Prot ico Temperatura de 37 C 9 Incubar o tubo a 37 C por 15 30 minutos 10 Centrifugar a 1 000 RPM 100 a 1259 por 1 minuto 1 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o e ou hem lise 4 FASE Antiglobulina Humana Coombs Indireto 2 Completar o tubo com solu o salina fisiol gica e centrifugar a 1 000 RPM 100 a 1259 por 1 minuto 3 Decantar o sobrenadante por invers o do tubo ressuspender o sedimento de hem cias e completar novamente com a solu o salina fisiol gica Repetir esse procedimento por 3 vezes 4 Ap s
16. ed erythrocytes compatible with the patient serum usually from type O positive Rh which should be washed in physiological saline solution wash the cells 3 times in 0 85 or 0 9 saline solution pipette 50 ul of washed erythrocytes 1 ml of saline into a 12 x 75 mm test tube Other volumes can be used There is commercial RBCs to perform the test 2 In a labeled 10 x 75 mm or 12 x 75 mm test tube pipette 50 ul of 5 erythrocytes suspension 3 Pipette in the same tube 100 ul ofthe serum to be tested 4 Mix by gentle agitation and centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 5 Gently re suspend the button of erythrocytes and examine for the presence of agglutination and or hemolysis 2ND PHASE Protein Environment at Room Temperature 6 Pipette in the same tube referred to above 100 ul 2 drops of Bovine Albumin at 22 1 7 Mix by gentle agitation and centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 8 Gently re suspend the button of erythrocytes and examine for the presence of agglutination and or hemolysis 3RD PHASE Protein Environment at 37 C 9 Incubate the tube at 37 C for 15 30 minutes 10 Centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 1 Gently re suspend the button of erythrocytes and examine for the presence of agglutination and or hemolysis 4TH PHASE Human Antiglobulin Indirect Coombs 2 Complete the tube with physiological saline solution and centrifuge at 1 000 RPM 100to 125 g
17. en ser infecciosas as como que tenga a su cargo el cuidado de deshacerse de estos materiales 6 Porque hay azida de sodio como conservante en los reactivos la eliminaci n de los reactivos deben ser seguidos por los grandes vol menes de agua con el fin de evitar acumulaci n de azida de los tubos ya que este puede reaccionar con plomo o cobre formando sales altamente explosivos Por otra parte la azida s dica es t xico por ingesti n 7 Dejar que los reactivos adquieran la temperatura ambiente 20 25 C antes de iniciar lostests 8 Los reactivos deben taparse inmediatamente despu s de su uso 9 Noutilice el reactivo despu s de la fecha de caducidad 10 Los procedimientos son s lo para prueba manual Al usar instrumentos autom ticos o semiautom ticos procedimiento que figura en el manual del operador proporcionado porel fabricante del instrumento debe ser seguido 11 Desechar el material siguiendo regulaciones locales 12 Utilice las Buenas Pr cticas de Laboratorio BPL en el almacenamiento la manipulaci n y eliminaci n de los materiales T RMINO DE GARANT A WAMA Diagn stica garantiza el cambio del kit de diagn stico siempre que estea dentro de la fecha de caducidad y que ha sido probado por su apoyo t cnico que no hubo errores t cnicos en la ejecuci n la manipulaci n y el almacenamiento de este producto WAMA y sus distribuidores no se responsabiliza por fallas en el rendimiento de los kits en estas cond
18. ero anti globulina humana poli espec fico Coombs lo que indica un resultado positivo La prueba se considera negativa cuando no aparece ninguna aglutinaci n PRESENTACI N DEL KIT 1058010 D 10ml 1 Suero de Coombs 1 x 10 ml 2 Instrucciones de uso 1058050 D 50ml 1 Suero de Coombs 5 x 10 ml 2 Instrucciones de uso 1058100 D 100ml 1 Suero de Coombs 10 x 10 ml 2 Instrucciones de uso PREPARACI N Y ESTABILIDAD DE REACTIVOS SUERO DE COOMBS 1 listo para su utilizaci n Estable a 2 8 C hasta que fecha de vencimiento impresa en el envase Almacenamiento inadecuado afecta a la eficacia del reactivo Contiene azida de sodio lt 0 095 w v como conservante cloruro de sodio y alb mina s rica bovina NO CONGELAR Para uso diagn stico in vitro Nota El kit mantiene el mismo rendimiento despu s de la primera utilizaci n y es estable hasta la fecha de vencimiento descripta en la etiqueta siempre que se mantenga a la temperatura indicada 2 8 C ESPEC MENES Utilice muestra de sangre fresca Evite muestras hemolizadas Si no es posible realizar las pruebas despu s de la recolecci n la muestra debe mantenerse refrigerada a una temperatura de 2 8 C De acuerdo con el anticoagulante usado las muestras deben ser probados en los siguientes plazos Heparina y Oxalato de Sodio 2Dias EDTAy Citrato de Sodio 14D as ACDyCPD 28 d as MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO Tubos de ensayo
19. i n INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS COOMBS DIRECTO E INDIRECTO REACCI N POSITIVA Aglutinaci n de los eritrocitos visible REACCI N NEGATIVA Ausencia de aglutinaci n de los eritrocitos Ill ESTUDIO DE ANTICUERPOS IRREGULARES EN ANTI GLOBULINA HUMANA INDIRECTA COOMBS INDIRECTO Su prop sito es detectar anticuerpos de grupos sangu neos capaces de provocar reacciones hemol ticas Se lleva a cabo en 4 fases la 1 22 y 3 etapas son m s eficientes en la detecci n de IgM mientras que la 4 fase detecta IgG 1 FASE Soluci n salina a temperatura ambiente 1 Preparar una suspensi n en 5 de eritrocitos lavados compatibles con el suero de paciente generalmente de tipo O Rh positivo que deben ser lavadas con soluci n salina fisiol gica lavan las c lulas 3 veces en soluci n salina 0 85 o 0 9 pipetear 50 ul de eritrocitos lavados 1 ml de soluci n salina en un 12 x 75 mm tubo de ensayo Otros vol menes pueden ser utilizados Existe RBC comerciales para realizarla prueba 2 En un tubo de ensayo etiquetado de 10 x 75 mm o 12 x 75 mm pipetas 50 pl de suspensi n de eritrocitos a 5 3 Pipeta en el mismo tubo 100 ul del suero a ser probado 4 Mezclar por agitaci n suave y se centrifugue a 1 000 RPM 100 a 125 g durante 1 minuto 5 Re suspender suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n y o hem lisis 2 fase Ambiente Proteico a temperatura ambiente 6 Pipetear en el
20. iciones BIBLIOGRAFIA BIBLIOGRAPHY BIBLIOGRAF A 1 Levine P The discovery of Rh haemolytic disease Vox Sanguinis 47 187 190 1984 2 Jones J Scott M M and Voak D Monoclonal anti D specificity and Rh D structure criteria for selection of monoclonal anti D reagents for routine typing of patients and donors Transfusion Medicine 5 171 184 1995 3 Avent N D and Reid M E The Rh blood group system a review Blood 95 375 387 2000 4 Zallen D T Christie D A and Tansey E M The Rhesus Factor and Disease Prevention Witness Seminar held by the Wellcome Trust Centre for the History of Medicine at UCL London June 2003 5 Scott M L The complexities of the Rh system Vox Sanguinis 87 58 62 2004 6 Westhoff C M The Rh blood group system in review A new face for the next decade Transfusion 44 1663 1673 2004 7 Moulds M K Review monoclonal reagents and detection of unusual or rare phenotypes or antibodies Immunohematology 22 2 52 63 2006 8 Van Kim C Colin Y and Cartron J Rh proteins key structural and functional components of the red cell membrane Blood Reviews 20 93 110 2006 9 Westhoff C M The structure and function of the Rh antigen complex Seminars in Hematology 44 42 50 2007 SIMBOLOGIA SIMBOLS SIMBOLOGIA O conte do suficiente para n testes Quantity sufficient for n tests O contenido es suficiente para n testes Data limite de utiliz
21. mismo tubo anteriormente mencionado 100 yl 2 gotas de alb mina bovina al 22 1 7 Mezclar por agitaci n suave y se centrifugue a 1 000 RPM 100 a 125 g durante 1 minuto 8 Re suspender suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n y o hem lisis 3 fase Ambiente Proteico a 37 C 9 Incubarlos tubos a 37 C por 15 30 minutos 0 Centrifugar a 1 000 RPM 100 a 125 g durante 1 minuto 1 Re suspender suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n y o hem lisis 4 fase Antiglobulina Humana Coombs indirecto 2 Complete el tubo con soluci n salina fisiol gica y se centrifugue a 1 000 RPM 100 a 1259 durante 1 minuto 3 Decantar el sobrenadante invirtiendo el tubo resuspenda el sedimento de eritrocitos y complete de nuevo con soluci n salina fisiol gica Repita este procedimiento 3 veces 4 Despu s del ltimo lavado decantar el sobrenadante completamente invirtiendo el tubo y secando la borda con papel de filtro 5 Pipetear 100 pl 2 gotas de SORO DE COOMBS de WAMA 6 Mezclar por agitaci n suave y se centrifugue a 1 000 RPM 100 a 125 g durante 1 minuto 7 Resuspender suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n INTERPRETACI N DE LAPRUEBA PRUEBA POSITIVA presencia de aglutinaci n y o hem lisis en una o m s fases de la prueba caracterizando presencia de anticuerpos irregulares PRUEBA NEGATIVA
22. ntre 2 8 C 2 A data de validade corresponde ao ltimo dia do m s assinalado nos r tulos dos frascos e da caixa do kit 3 Deve ser evitado expor os reagentes a temperaturas elevadas bem como diretamente ao sol 4 N o congelar nenhum reagente pois isto causar deteriora o irrevers vel 5 O Imuno HEMATO Soro de Coombs da WAMA embora seja derivado de fonte animal n o se pode afirmar que esteja isento de agentes infecciosos Portanto recomenda se tratar todos os reagentes como materiais potencialmente infecciosos bem como ter o mesmo cuidado no descarte destes materiais 6 Como se emprega azida s dica como conservante dos reagentes o descarte dos reativos deve ser acompanhado de grandes volumes de gua para evitar ac mulo de res duos de azida nos encanamentos pois esta pode reagir com chumbo ou cobre formando sais altamente explosivos Al m disso a azida t xica quando ingerida 7 Deixar os reagentes adquirir a temperatura ambiente 20 25 C antes de iniciar os testes 8 Os reagentes devem ser tampados imediatamente ap s o uso 9 N o usar reagentes ap s a data de validade 10 Os procedimentos informados s o apenas para testes manuais Ao usar instrumentos autom ticos ou semiautom ticos deve ser seguido o procedimento que est contido no manual do operador fornecido pelo fabricante do instrumento 11 Descartar o material conforme regulamenta es locais 12 Utilizar a Boas Pr ticas de Laborat
23. o red blood cells in vivo and therefore antibodies bound to red blood cells of the patient which is used in the study of hemolytic disease of the newborn in negative Rh mothers in the research of autoimmune hemolytic anemias in drug induced hemolysis and in post transfusion hemolytic reactions In the indirect test the anti human globulin is used for detecting antibodies adsorbed onto the red blood cells in vitro and therefore free antibodies in serum or plasma which is used in the research and identification of irregular antibodies and compatibility test The Imuno HEMATO SORO DE COOMBS from WAMA is a serum of broad spectrum human antigama and non gamma globulin characterized by a mixture of antibodies against immunoglobulins and complement factors prepared by immunization of rabbits with purified human IgG polyclonal anti IgG and by in vitro culture of mouse hybridoma cell line Bric 8 secreting anti C3 monoclonal antibody IgM class monoclonal anti C3d The reagentis green in color PRINCIPLE OF THE METHOD The procedure of the test is based on the principle of agglutination where washed red blood cells from individual with antibodies or complement factors adsorbed to their surface Coombs or antibody free Indirect Coombs will agglutinate in the presence of anti human globulin Serum poly especific Coombs indicating a positive result The test is considered negative when no agglutination appears KIT PRESENTATION 10580
24. ould be kept between 2 8 C 2 The expiry date refers to the last day of the month indicated on the labels of the vial and ofthe kit box 3 Avoid exposing the reagents to high temperatures and direct sunlight 4 Donotfreeze the reagent as this may cause irreversible damage 5 The Imuno HEMATO Soro de Coombs from WAMA though derived from animal source cannot assume to be free of infectious agents Therefore it is recommended to treat all reagents as potentially infectious as well as having the care in disposing of these materials 6 Because there is sodium azide as a preservative in the reagents the disposal of reagents must be followed by large volumes of water to prevent azide buildup in pipes because this can react with lead or copper forming highly explosive salts Furthermore the azide is toxic when ingested 7 Allow the reagents to reach the room temperature 20 25 C before starting the test 8 The reagents must be capped immediately after use 9 Donotuse the reagent after the expiration date 10 The procedures are only for manual testing When using automatic or semi automatic instruments procedure contained in the operator s manual provided by the instrument manufacturer must be followed 11 Discard the material following local regulations 12 Use the Good Laboratory Practices GLPs in storage handling and disposal of materials WARRANTY WAMA Diagn stica guarantees the exchange of the diagnostic kit pr
25. ovided it is within the expiration date and is proven by its technical support that there were no technical mistakes in the execution handling and storage of this product WAMA and its distributors are not liable for failures on the performance of the kits under these conditions ESPANOL IMPORTANCIA CL NICA Coombs Mourant y Raza pocos a os despu s del descubrimiento de lo anticuerpos anti Rh 1945 describen la prueba de antiglobulina humana que utiliza suero antiglobulina humano preparado en conejos para detectar anticuerpos Rh incompletos Hoy el examen se utiliza para detectar la sensibilizaci n in vivo de los eritrocitos ayudando en el diagn stico de la enfermedad hemol tica neonatal y la anemia hemol tica autoinmune por lo que es posiblemente la prueba m s ampliamente utilizado en immunohaematologia En general los anticuerpos implicados en reacciones transfusionales son de dos tipos completo e incompleto Los anticuerpos completos aglutinan los gl bulos rojos en soluci n salina y los incompletos sensibilizan los gl bulos rojos sin aglutinaci n Generalmente anticuerpos de clase IgM y anticuerpos IgG de tipo IgG1 e IgG3 fijan el complemento Por lo tanto la lisis celular en vivo est mediada por el sistema de complemento El suero anti globulina humana Coombs reactivo se utiliza en dos tipos de pruebas directa e indirecta En el directo la globulina anti humana se utiliza para la detecci n de anticuerpos
26. ram selecionadas 10 amostras do controle de qualidade 10 negativas para realizar o teste de reprodutibilidade foram realizados 03 testes com as mesmas amostras em dias e operadores diferentes e com mesmo lote De acordo com os testes realizados foi verificado que o kit Imuno Hemato Soro de Coombs reproduz de maneira satisfat ria os resultados com as amostras testadas mesmo em diferentes condi es LIMITA ES DE USO Resultados falsos podem ocorrer por contamina o dos materiais do ensaio concentra o inadequada das suspens es de c lulas tempo de incuba o ou temperatura inadequados ou por erros de procedimento Os tempos de centrifuga o mencionados s o meras sugest es Um tempo de centrifuga o adequado deve ser determinado por cada laborat rio e ser aquele que produz a mais forte rea o do anticorpo com o ant geno nas rea es positivas mas tamb m que permita a ressuspens o f cil do bot o de hem cias Rea es mais fracas podem ser observadas com sangue armazenado do que com sangue fresco Recomenda se utilizar hem cias e soros frescos de prefer ncia n o refrigerados A lavagem insuficiente dos eritr citos pode causar falsos resultados negativos pela presen a de globulinas s ricas livres neutralizando o Soro de Coombs Recomenda se usar sempre um controle positivo e negativo para controle da qualidade dat cnica PRECAU ES E ADVERT NCIAS 1 Os reagentes devem ser conservados e
27. rios BPLs na conserva o manuseio e descarte dos materiais TERMO DE GARANTIA AWAMA Diagn stica garante a troca deste conjunto diagn stico desde que o mesmo esteja dentro do prazo de validade e que seja comprovado por sua assessoria t cnica que n o houve falhas na execu o manuseio e conserva o deste produto A WAMA e seus distribuidores n o se responsabilizar o por falhas no desempenho do kit sob essas condi es ENGLISH SUMMARY Coombs Mourantand Race a few years after the discovery of anti Rh antibodies 1945 described the antiglobulin test which uses human antiglobulin serum prepared in rabbits to detect incomplete Rh antibodies Today the test is used to detect in vivo sensitization of erythrocytes helping in the diagnosis of newborn hemolytic disease and autoimmune hemolytic anemia making it possibly the most widely used test in immunohaematology Generally the antibodies involved in transfusion reactions are of two types complete and incomplete The complete antibodies agglutinate red blood in saline solution and the incomplete sensitize red cells without agglutination Usually IgM antibodies and IgG1 and IgG3 types of IgG antibodies fix the complement Thus the cellular lysis in vivo is mediated through the complement system The anti human globulin serum Coombs reagent is used in two types oftests direct and indirect In the direct the anti human globulin is used for detecting antibodies adsorbed t
28. st 2 In a labeled 10 x 75 mm or 12 x 75 mm test tube pipette 50 ul of 5 erythrocytes suspension 3 Pipette in the same tube 100 ul ofthe serum to be tested 4 Mix by gentle agitation and incubate at 37 C for 15 30 minutes 5 Remove the tube from the Water Bath complete with physiological saline solution and centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 6 Decant the supernatant by inverting the tube resuspend the erythrocyte pellet and complete again with physiological saline solution Repeat this procedure 3 times 7 After the last wash decant the supernatant completely inverting the tube and drying the edge with filter paper 8 Pipette 100 ul 2 drops of Coombs Sera 1 9 Mix by gentle agitation and centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 10 Gently resuspend the button of erythrocytes and examine for the presence of agglutination INTERPRETATION OF RESULTS DIRECT AND INDIRECT COOMBS POSITIVE REACTION Visible agglutination of erythrocytes NEGATIVE REACTION Absence of agglutination of erythrocytes III SURVEY OF IRREGULAR ANTIBODIES IN INDIRECT ANTI HUMAN GLOBULIN INDIRECT COOMBS lts purpose is to detect antibodies of blood groups capable of causing hemolytic reactions Itis carried out in 4 phases the 1st 2nd and 3rd stages are more efficient in the detection of IgM while the 4th phase detects IgG 1ST PHASE Saline solution at Room Temperature 1 Prepare a suspension in 5 of wash
29. tubo com solu o salina fisiol gica e centrifugar a 1 000 RPM 100 a 1259 por 1 minuto 4 Decantar o sobrenadante por invers o do tubo ressuspender o sedimento de hem cias e completar novamente com a solu o salina fisiol gica Repetir esse procedimento por 3 vezes 5 Ap s a ltima lavagem decantar completamente o sobrenadante invertendo o tubo e enxugando a borda com papel de filtro 6 Pipetar 100 pl 2 gotas do Soro de Coombs 1 7 Homogeneizar atrav s de leve agita o e centrifugar a 1 000 RPM 100 a 125 g por 1 minuto 8 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o Il PROVA INDIRETA DA GLOBULINA ANTI HUMANA COOMBS INDIRETO 1 Preparar uma suspens o a 5 de hem cias compat veis com o soro do paciente geralmente do grupo O Rh positivo as quais dever o ser lavadas em solu o salina isot nica lavar as hem cias 3 vezes em salina a 0 85 ou 0 9 e em um tubo de ensaio 12x 75 mm pipetar 50 ul das hem cias lavadas 1 ml de salina Outros volumes podem ser usados H hem cias comerciais para a realiza o do teste 2 Em um tubo de ensaio 10 x 75 mm ou 12x 75 mm marcado pipetar 50 ul da suspens o de hem cias a 5 3 Pipetar no mesmo tubo 100 ul do soro a ser testado 4 Homogeneizar atrav s de leve agita o e incubar a 37 C por 15 30 minutos 5 Retirar o tubo do Banho Maria completar com solu o salina fisiol gica e centrif
30. ugar a 1 000 RPM 100 a 1259 por 1 minuto 6 Decantar o sobrenadante por invers o do tubo ressuspender o sedimento de hem cias e completar novamente com a solu o salina fisiol gica Repetir esse procedimento por 3 vezes 7 Ap s a ltima lavagem decantar completamente o sobrenadante invertendo o tubo e enxugando a borda com papel de filtro 8 Pipetar 100 ul 2 gotas do Soro de Coombs 1 9 Homogeneizar atrav s de leve agita o e centrifugar a 1 000 rpm 100 a 125 g por 1 minuto 10 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o INTERPRETA O DOS RESULTADOS COOMBS DIRETO E INDIRETO REA O POSITIVA vis vel aglutina o dos eritr citos REA O NEGATIVA aus ncia de aglutina o dos eritr citos ILPESQUISA DE ANTICORPOS IRREGULARES EM PROVA INDIRETA DA GLOBULINA ANTI HUMANA COOMBS INDIRETO Seu objetivo o de detectar anticorpos dos grupos sangu neos capazes de causar rea es hemol ticas E realizada em 4 fases a 1 2 e 3 fases s o mais eficientes na detec o de IgM enquanto a 4 fase detecta IgG 1 FASE Meio Salino Temperatura Ambiente 1 Preparar uma suspens o a 5 de hem cias compat veis com o soro do paciente geralmente do grupo O Rh positivo as quais dever o ser lavadas em solu o salina isot nica lavar as hem cias 3 vezes em salina a 0 85 ou 0 9 e em um tubo de ensaio 12x75 mm pipetar 50 ul das hem
31. vina N O CONGELAR Somente para uso in vitro Obs O kit mant m o mesmo desempenho ap s a primeira utiliza o e est vel at a data de validade descrita no r tulo desde que mantido na temperatura indicada 2 8 C AMOSTRAS Usar amostra de sangue fresco Evitar amostras hemolizadas Se n o for possivel realizar os testes ap s a coleta a amostra deve ser conservada refrigerada entre 2 8 C De acordo com o anticoagulante utilizado as amostras deveriam ser testadas dentro dos seguintes prazos Heparina ou Oxalato de S dio 2 dias EDTAou Citrato de S dio 14 dias ACDouCPD 28 dias MATERIAL NECESS RIO MAS N O FORNECIDO e Tubos testes 10 x75 mm ou 12x75 mm e Micropipeta de 50uI 100ul 1000 pl e ponteiras Centr fuga Solu o salina fisiol gica 0 85 ou 0 9 Banho Maria Recipiente para descarte de material PROCEDIMENTO Independente da t cnica adotada deixar o reagente e as amostras atingir a temperatura ambiente antes de iniciar os testes PROVADIRETA DA GLOBULINA ANTI HUMANA COOMBS DIRETO 1 Preparar uma suspens o a 5 de hem cias lavadas a ser testada em solu o salina fisiol gica lavar as hem cias 3 vezes em salina a 0 85 ou 0 9 e em um tubo de ensaio 12 x 75 mm pipetar 50 ul das hem cias lavadas 1 ml de salina Outros volumes podem ser usados 2 Em um tubo de ensaio 10 x 75 mm ou 12 x 75 mm marcado pipetar 50 ul da suspens o de hem cias a 5 3 Completar o
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