ES HT101.qxd - Sigma
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1. TINCI N DE PLATA STEINER STEINER SIGMA ALDRICH moDIFICADO Procedimiento n mero HT101 APLICACI N La tinci n de plata de Sigma Aldrich Steiner Steiner modificado se utiliza para la demostraci n de espiroquetas y bacterias no filamentosas en cortes de tejido embebidos en parafina Los reactivos de tinci n de plata son para uso diagn stico in vitro Los procedimientos documentados para la demostraci n de espiroquetas y otros microorganismos oportunistas son los de Warthin Starry Dieterle y Steiner Steiner Estos procedimientos con frecuencia requieren una elaborada preparaci n de las soluciones y los resultados pueden variar sustancialmente El m todo de Sigma Aldrich es una modificaci n del m todo Steiner Steiner que incluye un aplicaci n de microondas para acelerar y acentuar la tinci n de plata en cortes de tejido El calor producido en el horno microondas facilita la impregnaci n del nitrato de plata en los cortes de tejido produciendo a menudo un fondo m s limpio que el m todo tradicional Aclarar con agua del grifo y dejar secar al aire o secar mediante absorci n El procedimiento Steiner Steiner modificado de Sigma Aldrich proporciona resultados de tinci n constantes y reproducibles REACTIVOS SOLUCI N DE NITRATO DE URANILO n mero de cat logo HT101 1 Nitrato de uranilo 1 en agua SOLUCI N DE NITRATO DE PLATA n mero de cat logo HT101 2 Nitrato de plata 1 en agua SOLUCI N DE GOMA DE2. Irritante para los ojos sistema respiratorio y piel Mantener el envase bien cerrado Mantener alejado de las llamas no fumar En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Llevar ropa protectora adecuada rganos a los que afecta nervios e h gado El xileno es INFLAMABLE y PERJUDICIAL Posible riesgo de infertilidad Puede causar da os al feto Perjudicial por inhalaci n y por contacto con la piel Irritante para el sistema respiratorio y la piel Riesgo de da o grave para los ojos Mantener alejado de las llamas no fumar En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el rostro En caso de accidente o de malestar buscar atenci n m dica inmediatamente mostrar la etiqueta si es posible 1 ES Declaraci n de riesgos y seguridad U E La soluci n de nitrato de uranilo es T XICA T xica en caso de inhalaci n e ingesti n En caso de accidente o de malestar buscar atenci n m dica inmediatamente mostrar la etiqueta si es posible Soluci n de nitrato de plata Perjudicial para los organismos acu ticos puede causar efectos adversos a largo plazo en el medio acu tico No inhalar los vapores Evitar el contacto con la piel y los ojos La soluci n de goma de lentisco es ALTAMENTE INFLAMABLE e IRRITANTE Altamente inflamable Irritante par
3. 3 y dejarlos incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente 10 Extraer los portaobjetos de la soluci n de goma de lentisco y dejar que los cortes se sequen al aire 11 Preparar la soluci n reductora mezclando 10 ml de soluci n de goma de lentisco n mero de cat logo HT101 3 con 25 ml de soluci n de trabajo de hidroquinona y 5 ml de etanol absoluto Filtrar la soluci n y a adir 200 pl 0 2 ml de soluci n de nitrato de plata Mezclar 12 Poner en el microondas la soluci n reductora en un vaso de Coplin de pl stico sin portaobjetos a 600 vatios durante 15 segundos Mezclar la soluci n con una pipeta Beral o una varilla aplicadora 13 Poner inmediatamente los portaobjetos en la soluci n reductora y en el microondas a 400 vatios durante 20 segundos 14 Mezclar la soluci n con una pipeta Beral o una varilla aplicadora e incubar los portaobjetos en soluci n reductora hasta obtener el grado de tinci n negra deseado Lo ideal es de 45 segundos a 1 minuto Si se desea la tinci n puede durar m s tiempo Desechar la soluci n despu s de un uso 15 Aclarar los portaobjetos con agua desionizada 16 Deshidratar en alcohol aclarar en xileno y montar PO CARACTER STICAS DE FUNCIONAMIENTO Las espiroquetas y otras bacterias no filamentosas se ti en de marr n oscuro a negro Los fondos se ti en de amarillo brillante a marr n claro Si los resultados observados var an de los esperados p ngase en contacto con e
4. LENTISCO ALCOH LICA n mero de cat logo HT101 3 Goma de lentisco en alcohol absoluto TABLETAS DE HIDROQUINONA n mero de cat logo HT101 4 Hidroquinona 0 5 g con excipientes ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Los reactivos de tinci n de plata deben almacenarse refrigerados 2 8 C Desechar si presenta turbidez La etiqueta del reactivo indica la fecha de caducidad DETERIORO Las soluciones de nitrato de uranilo nitrato de plata y goma de lentisco alcoh lica deben desecharse si presentan turbidez PREPARACI N La soluci n de trabajo de hidroquinona se prepara disolviendo una tableta de hidroquinona en 25 ml de agua desionizada Mezclar bien Las soluciones de nitrato de uranilo nitrato de plata y goma de lentisco est n listas para usar PRECAUCIONES Se deben seguir las precauciones normales ejercidas en el manejo de reactivos de laboratorio Deshacerse de los desechos observando todas las normativas locales regionales y nacionales Consultar la Hoja de datos de seguridad del material para obtener cualquier informaci n actualizada sobre riesgos peligros o seguridad Los portaobjetos de control de espiroquetas y helicobacterias TISSUE TROL son tejidos de conejo o humanos embebidos en parafina con espiroquetas y helicobacterias y deben considerarse como potencialmente infecciosos Declaraci n de riesgos y seguridad EE UU La soluci n de nitrato de uranilo es T XICA T xica en caso de inhalaci n e ingesti n E
5. a los ojos sistema respiratorio y piel Mantener el envase bien cerrado Mantener alejada de las llamas no fumar En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Llevar ropa protectora adecuada Las tabletas de hidroquinona son PERJUDICIALES y peligrosas para el medio ambiente Perjudiciales en caso de ingesti n Evidencia escasa de efectos carcin genos Riesgo de da o grave para los ojos Pueden causar sensibilizaci n por contacto con la piel Muy t xicas para los organismos acu ticos Posible riesgo de efectos irreversibles En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el rostro Evitar su liberaci n en el medio ambiente Consultar las hojas de instrucciones y de datos de seguridad El alcohol reactivo es ALTAMENTE INFLAMABLE e IRRITANTE Altamente inflamable Irritante para los ojos sistema respiratorio y piel Mantener el envase bien cerrado Mantener alejado de las llamas no fumar En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Llevar ropa protectora adecuada El xileno es PERJUDICIAL Inflamable Perjudicial por inhalaci n y por contacto con la piel Irritante para la piel Evitar el contacto con los ojos PROCEDIMIENTO RECOGIDA Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS Se recomienda que la recogi
6. da de las muestras se lleve a cabo de acuerdo con las directrices del documento M29 A2 de la NCCLS Ning n m todo de prueba puede garantizar la completa seguridad de que las muestras de sangre o tejido no transmitan infecciones Por lo tanto todos los derivados de la sangre o muestras de tejido deben considerarse potencialmente infecciosos Fijar las muestras en formol tamponado neutro al 10 embeberlas en parafina y cortar secciones de 5 micras MATERIAL ESPECIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO Los portaobjetos de control positivo tales como los de espiroquetas TISSUE TROL n mero de cat logo S 2645 o los de helicobacterias TISSUE TROL n mero de cat logo H 1898 de Sigma deben incluirse en cada proceso Alcohol absoluto Alcohol 95 Xileno S LO PARA PROCEDIMIENTOS EST NDAR Ba os de agua a 45 y 60 C Vasos de tinci n de Coplin de pl stico con tapas n mero de cat logo S 5641 S LO PARA PROCEDIMIENTOS CON MICROONDAS Horno microondas ACCUMATE M H2100 n meros de cat logo A 9084 110 v o A 9209 220 v Vasos de Coplin de pl stico con tapas con respiraderos n mero de cat logo S 3883 NOTAS No deben utilizarse sustitutos del xileno porque decoloran las espiroquetas Si se utiliza el horno microondas H2100 de Sigma Aldrich v anse las instrucciones en el Manual del propietario Los datos obtenidos mediante este procedimiento s lo sirven como ayuda en el diagn stico y deben ser revisados junto con otra
7. en un vaso de Coplin de pl stico sin portaobjetos en un ba o de agua a 45 C A adir cortes para calentar la soluci n reductora e incubar durante un m ximo de 25 minutos gt 14 Dejar los portaobjetos en soluci n reductora a temperatura ambiente hasta obtener el grado de tinci n negra deseado lo ideal es de 1 2 minutos Si se desea la tinci n puede durar m s tiempo Desechar la soluci n despu s de un uso 15 Deshidratar los cortes con alcohol 16 Aclarar con xileno y montar PROCEDIMIENTO CON MICROONDAS ACCUMATE H2100 1 Desparafinar e hidratar con agua desionizada 2 Colocar los portaobjetos en 40 ml de soluci n de nitrato de uranilo n mero de cat logo HT101 1 en un vaso de Coplin de pl stico Tapar el vaso sin apretar la tapa o utilizar tapas con agujeros Poner en el horno microondas a 600 vatios durante 30 segundos Aclarar bien varias veces con agua desionizada cambiando el agua cada vez 5 Colocar los portaobjetos en 40 ml de soluci n de nitrato de plata n mero de cat logo HT101 2 6 Poner en el horno microondas a 600 vatios durante 30 segundos Mezclar la soluci n con una pipeta Beral o una varilla aplicadora y dejarla incubar durante 10 minutos 7 Aclarar en agua desionizada cambi ndola varias veces 8 Aclarar los portaobjetos con alcohol al 95 y alcohol absoluto con dos cambios cada uno 9 Colocar los portaobjetos en soluci n de goma de lentisco n mero de cat logo HT101
8. l Servicio T cnico de Sigma Aldrich REFERENCIAS 1 Van Orden AE Greer PW Modification of the Dieterle spirochete stain J Histotechnol 1 2 51 53 1977 2 Churukian CJ Schenk EA A Warthin Starry method for spirochetes and bacteria using a microwave oven J Histotechnol 11 3 149 151 1988 3 Swisher BL Modified Steiner procedure microwave staining for spirochetes and nonfilamentous bacteria J Histotechnol 10 4 241 243 1987 4 Davis Mary M HT ASCP Joy of Microwaving NSH Symposium Buffalo NY Oct 1995 Sigma Aldrich Inc garantiza que sus productos concuerdan con la informaci n contenida en sta y otras publicaciones de Sigma Aldrich El comprador debe determinar la idoneidad de los productos para su uso particular Es posible que deban aplicarse t rminos y condiciones adicionales En el reverso de la factura o del albar n se incluyen los t rminos adicionales y las condiciones de venta Procedimiento n mero HT101 Revisi n anterior 2003 03 Revisi n 2003 09 AR MED Ltd Runnymede Malthouse C EC REP Egham TW20 9BD Reino Unido SIGMA ALDRICH INC 3050 Spruce Street St Louis MO 63103 EE UU 1 314 771 5765 Servicio T cnico a cobro revertido al 1 314 771 3122 O por correo electr nico a clintech Osial com Para realizar pedidos a cobro revertido al 1 314 771 5750 www sigma aldrich com 2 ES SIGMA ALDRICH CHEMIE GmbH P O 1120 89552 Steinheim Alemania 49 7329 970
9. n caso de accidente o de malestar buscar atenci n m dica inmediatamente mostrar la etiqueta si es posible rganos a los que afecta ri ones e h gado Soluci n de nitrato de plata Perjudicial para los organismos acu ticos puede causar efectos adversos a largo plazo en el medio acu tico Precauci n Evitar el contacto y la inhalaci n rganos a los que afecta sangre y nervios La soluci n de goma de lentisco es INFLAMABLE e IRRITANTE Irritante para los ojos sistema respiratorio y piel Mantener el envase bien cerrado Mantener el envase en un lugar bien ventilado Mantener alejada de las llamas no fumar En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Llevar ropa protectora adecuada rganos a los que afecta h gado y nervios Las tabletas de hidroquinona son T XICAS y peligrosas para el medio ambiente Perjudiciales en caso de ingesti n Irritantes para la piel Evidencia escasa de un efecto carcin geno Riesgo de da o grave para los ojos Pueden causar sensibilizaci n por contacto con la piel Muy t xicas para los organismos acu ticos En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua abundante y buscar atenci n m dica Usar ropa protectora adecuada guantes y protecci n para los ojos y el rostro Evitar su liberaci n en el medio ambiente Consultar las hojas de instrucciones y de datos de seguridad El alcohol reactivo es INFLAMABLE e IRRITANTE
10. s pruebas cl nicas o informaci n de diagn stico PROCEDIMIENTO EST NDAR 1 Utilizar vasos de Coplin de pl stico limpiados qu micamente 2 Precalentar 40 ml de nitrato de uranilo n mero de cat logo HT101 1 y 40 ml de soluci n de nitrato de plata n mero de cat logo HT101 2 a 60 C 3 Calentar la soluci n de goma de lentisco n mero de cat logo HT101 3 a temperatura ambiente Desparafinar e hidratar los cortes con agua desionizada 5 Colocar los cortes en soluci n de nitrato de uranilo precalentada durante 15 minutos en un ba o de agua a 60 C 6 Aclararlos en agua desionizada cambi ndola 3 veces 7 Colocar los cortes en soluci n de nitrato de plata precalentada en un ba o de agua a 60 C durante 1 5 horas 8 Aclararlos en agua desionizada cambi ndola 3 veces 9 Aclararlos con alcohol al 95 y etanol absoluto con dos cambios cada uno 10 Colocar los cortes en soluci n de goma de lentisco durante 5 minutos 11 Extraer los portaobjetos de la soluci n de goma de lentisco y dejar que los cortes se sequen al aire 12 Preparar la soluci n reductora mezclando 10 ml de soluci n de goma de lentisco n mero de cat logo HT101 3 25 ml de soluci n de trabajo de hidroquinona y 5 ml de alcohol absoluto Filtrar las soluciones con un papel Whatman N 54 o equivalente y a adir 200 pl de soluci n de nitrato de plata NOTA La soluci n reductora puede tener un aspecto lechoso 13 Calentar la soluci n reductora
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