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400329-01 Pepsinogen I.cdr

1. la date de p remption 6 4 Solution de blanc Contenu Un flacon contenant 1 5 ml de s rum humain en tampon phosphate avec un conservateur Pr paration Pr t l emploi Stabilit Jusqu la date de p remption 6 5 Calibreurs Contenu Trois flacons contenant chacun 1 5 ml de s rum humain calibreur en tampon phosphate avec un conservateur Les valeurs en PGI de ces s rums sont approximativement 25 100 et 200 ug l Les concentrations exactes en PGI des calibreurs sont indiqu es sur chaque flacon Pr paration Pr t l emploi Stabilit Jusqu la date de p remption ESPA OL INSTRUCCIONESDE USO ELISA para Pepsin geno I Cat N 2601010 01 CONTENIDO P gina LUSO PREVISTO 2 ANTECEDENTESCLINICOS 3 PRINCIPIO DE LAPRUEBA 4 ADVERTENCIASY PRECAUCIONES 5 RECOLECCION Y MANIPULACION DE MUESTRAS 6 CONTENIDO DELCONJUNTO PREPARACION DEL REACTIVO ESTABILIDAD DE LOSMATERIALESPROPORCIONADOS 6 1 Microplaca 6 2 Concentrado de tamp n de lavado x 10 6 3 Tamp n diluyente 6 4 Soluci n blanco 6 5 Calibradores 6 6 Control 6 7 Soluci n conjugada 6 8 Soluci n de sustrato 6 9 Soluci n de interrupci n 6 10 Cubiertas deincubaci n 6 11 Instrucciones de uso 7 MATERIALESNECESARIOS PERO NO PROPORCIONADOS 8 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD 9 PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA 10 RESULTADOS ARSS 10 1 Valores de control de calidad 47 10 2 C lculo de los resultados 48 10 3 Prevalencia 49 10 4 Interpretac
2. 58 Sensitivity The sensitivity of the test was determined in two different ways 1 Dilution of akit calibrator with PGI concentration 10 0 ug 1 with diluent buffer gives a 10 CV limit at aconcentration of 0 6 pg 1 2 Mean of 25 zero replicates 2 standard deviations correspondsto 1 9 ng 1PGI Recovery Four serum samples were spiked with 6 2 31 0 and 60 8 ug l human pepsinogen I purified human PGI Biohit D iagnostics The average recovery was 6 2 pg 1 97 5 31 01g 1 89 1 60 8 1g 1 72 6 Correlation Correlation was shown with the relationship between the serum levels of pepsinogen I and histological status of the corpus mucosa 18 Serum Pepsinogen I and Corpus Mucosa Finnish Case Control study 350 300 o 250 N normal n 28 S non atrophic gastritis 20 200 or severe 21 atrophic gastritis R resected stomach o A1 A3 mild 15 moderate 15 8 0 total gastrectomy 1 8 150 3 100 50 4 0 0 r r r i O A1 A2 A3 R Corpus mucosa Serum Pepsinogen I py 1 15 Linearity Three serum samples were assayed in serial dilutions with the diluent buffer to determine the linearity of Biohit Pepsinogen I ELISA Results are listed in the following table Dilution Observed Expected Recovery Sample factor ag D wa D 1 212 4 1 2 105 4 106 2 99 4 52 8 53 1 99 1 146 4 2 2 72 8 73 2 99 4 39 3 36 6 107 1 59 0 3 3 2 29 7 29 5 101 4 14 8 14 7 10
3. 6 9 Stop Solution Contents 15 ml of 0 1 mol l sulphuric acid Preparation Ready for use Stability Stable until expiry date 6 10 Incubation Covers Four plastic sheets to cover the microplate during incubation 6 11 Instruction Manual 7 MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED Distilled or deionized water Micropipettes and disposable tips to accurately deliver 20 1000 pl Pipettes to accurately deliver 1 10ml 8 channel pipette delivering 100 pl Graduated cylinder 1000 ml Vortex mixer for sample dilutions Test tubes for specimen dilutions Microplate washer Paper towels or absorbent paper Timer Incubator 37 C Microplate reader 450 nm e g plastic blood collection tube for serum or plasma Container forice 8 STORAGE AND STABILITY Store the Pepsinogen I kit refrigerated 2 8 C When stored at these temperatures the kit is stable until the expiration date printed on the box label and the label of each individual kit component D o not freeze or expose the kit to high temperatures or store at above 8 C when not in use The substrate solution is sensitive to light The microplate or individual strips should not be removed from the foil pouch until equilibrated to room temperature 20 25 C Unused strips must be returned to the foil pouch sealed and stored at 2 8 C Do not use reagents after the expiration date printed on the label Do not use reagents from kits with different lot numbers
4. on the polystyrene surface of the wells binds PGI molecules present in the sample 2 Wells are washed to remove the residual sample 3 An HRP conjugated monoclonal detection antibody is added to the wells and it binds to the PGI molecules 16 ORDERING INFORMATION BESTELLINFORMATIONEN INFORMATIONS COMMERCIALES INFORMACION DE PEDIDO INFORMAZIONI PERLE ORDINAZIONI Pepsinogen I ELISA kit Pepsinogen I ELISA Test Coffret ELISA Pepsinogene I Conjunto de prueba ELISA para Pepsin geno I Kit del test ELISA per pepsinogeno I Cat No Artikel Nr R f rence catalogueN Cat N N Cat 601 010 01 Headquarters Biohit Plc Laippatie 1 00880 Helsinki Finland Tel 358 9 773 861 Fax 358 9 773 86290 E mail info biohit com www biohit com CHINA Finland Biohit Co Ltd Shanghai Representative O ffice Tel 86 21 62485589 Fax 86 21 62487786 E mail info china biohit com FRANCE Biohit S A Tel 33 1 3088 4130 Fax 33 1 3088 4102 E mail commercial france biohit com GERMANY Biohit D eutchland G mbH Tel 49 6003 82 820 Fax 49 6003 828 222 E mail info biohit de JAPAN Biohit Japan Co Ltd Tel 81 3 5822 0021 Fax 81 3 5822 0022 E mail sales biohit co jp 67 serum pepsinogen I II and of PG 1 PGII ratios in a gastric cancer case control study J Epidemiol 1997 7 143 151 14 Kikuchi S Wada O Miki K Nakajima T Nishi T Kobayashi O Inaba Y Serum pepsinogen as a new marker fo
5. uso La soluci n de sustrato es sensible a la luz La microplaca o tiras individuales no se deben retirar de la bolsa hasta que est n a temperatura ambiente 20 a25 C Las tiras no utilizadas se deben guardar en labolsa sellar y almacenar entre 2a8 C No utilice reactivos despu s dela fecha de vencimiento impresa en la etiqueta No utilice reactivos de conjuntos con diferentes n meros de lote ni reactivos sustitutos de conjuntos de otros fabricantes Utilice solamente agua destilada o desionizada Los componentes del conjunto se proporcionan en concentraciones precisas Diluciones posteriores u otras alteraciones delosreactivos pueden provocar resultados incorrectos Indicaciones de deterioro del conjunto Los componentes l quidos no deben estar visiblemente turbios ni contener material precipitado Sin embargo entre 2 a 8 C el concentrado de tamp n de lavado puede cristalizarse parcialmente pero los cristales se disolver n mezclando a temperatura ambiente 20 a 25 C La soluci n de sustrato debe serincolora o azul claro Cualquier otro colorindica deterioro dela soluci n de sustrato 9 PROCEDIMIENTO DE LAPRUEBA PREPARACIONESPRELIMINARES Permita que todos los reactivos y la microplaca alcancen la temperatura ambiente 20 a 25 C Caliente el incubador hasta 37 C Diluya el concentrado de tamp n de lavado a 1 10 por ejemplo 100 ml 900 ml con agua destilada o desionizada Lea el procedimiento completo del an lisis
6. 20 C Bien homog n iser les chantillons apres la decongelation Eviter les cycles r p t s de congelation decongelation Il est pr f rable de ne pas utiliser les chantillons h molys s lipidiques ou troubles Si vous testez surle m me chantillon tous les tests du G astroPanel Biohit Pepsinog ne I Pepsinogene II gastrine 17 et IgG anti H dicobacter pylori referez vous d abord a la notice d utilisation du dosage Elisa G astrine 17 6 CONTENUDUCOFFRET PREPARATION ET STABILITE DESREACTIFS La quantit de r actif est suffisante pour 96 puits Les r actifs provenant de differents lots ne doivent pas tre m lang s 6 1 Plaque de microtitration Contenu un cadre porteur et 12 barrettes de 8 puits recouvertes d un anticorps monoclonal IgG anti PG I humain de haute affinit Pr paration Pr t l emploi Stabilit Jusqu la date de p remption Jeter les barrettes apr s utilisation 6 2 Solution de lavage concentr e 10x Contenu 120 ml de tampon phosphate concentr x10 contenant du Tween 20 et un conservateur Pr paration D iluer au 1 10 par exemple 100 ml 900 ml avec de l eau distill e Stabilit La solution dilu e est stable pendant deux semaines au r frig rateur 2 8 C 6 3 Tampon de dilution Contenu 100 ml de tampon phosphate contenant de l albumine bovine s rique du Tween 20 un conservateur et un colorant rouge Pr paration Pr t l emploi Stabilit Jusqu
7. 4 2 1 10 42 100 50 44 105 200 4 4 105 26 3 2 10 24 6 93 5 50 27 3 104 0 200 24 5 93 2 56 2 3 10 59 6 106 0 50 60 9 108 0 200 53 3 94 8 72 7 4 10 70 8 97 4 50 72 5 99 7 200 71 9 98 9 100 1 5 10 98 3 98 2 50 99 9 99 8 200 98 7 98 6 14 Figura 1 Ordine di pipettamento 1 2 3 4 5 A BS BS B CAL1 CAL1 C CAL2 CAL2 D CAL3 CAL3 E Controllo Controllo P S1 S1 G S2 S2 A Ecc Ecc LAVAGGIO Lavare i pozzetti tre volte con 350 pl di tampone di lavaggio diluito 1 to 10 e battere delicatamente la piastra capovolta alcune volte su una salvietta di carta pulita FASE II Pipettare 100 pl della soluzione coniugata miscelata nei pozzetti possibilmente con una pipetta a 8 canali Coprire la piastra con la copertura per incubazione Incubare per 30 minuti a37 C LAVAGGIO Vederele procedure di lavaggio descritte nella FA SE I FASE III Pipettare 100 pl della soluzione di substrato miscelata nei pozzetti con una pipetta a 8 canali Iniziare a calcolare il tempo di incubazione dopo aver pipettato la soluzione di substrato nella prima striscia e continuare l incubazione per 30 minuti a temperatura ambiente 20 25 C Non esporre allaluce diretta durante l incubazione FASE IV Pipettare 100 pil della soluzione di arresto miscelata nei pozzetti con unapipettaa8 canali MISURAZIONE Misurare l assorbanza a 450 nm entro 30 minuti 10 RISULTATI 10 1 Va
8. 5 SPECIMEN COLLECTION AND HANDLING 6 KIT CONTENTS REAGENT PREPARATION AND STABILITY FOR MATERIALS PROVDED 6 1 Microplate 6 2 Washing BufferC oncentrate x 10 6 3 Diluent Buffer 6 4 Blank Solution 6 5 Calibrators 6 6 Control 6 7 Conjugate Solution 6 8 Substrate Solution 6 9 Stop Solution 6 10 Incubation Covers 6 11 Instruction Manual 7 MATERIALSREQUIRED BUT NOT PROVIDED 8 STORAGE AND STABILITY 9 TEST PROCEDURE 10 RESULTS 10 1 Quality Control Values 10 2 Calculation of the Results 10 3 Prevalence 10 4 Interpretation of the Results 11 LIMITATIONSOFTHE PROCEDURE 12 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 13 DATE OF ISSUE 14 WARRANTY 15 REFERENCES 16 ORDERING INFORMATION 17 SHORT OUTLINE OF THE PROCEDURE APPENDIX QUALITY CONTROL CERTIFICATE D a DIAJODOO 16 LINTENDED USE The pepsinogen I PGI kit is a microplate based quantitative enzyme linked immunosorbent assay ELISA for the determination of human pepsinogen I from serum or plasmasamples 2 CLINICAL BACKGROUND This test is intended to identify patients who have an advanced atrophic gastritis in the gastric corpus and who correspondingly are at increased risk for gastric cancer 1 2 The serum or plasma PGI S PGI P PGI assay is a reliable tool for detecting patients with advanced atrophic corpus gastritis 3 6 the sensitivity and specificity of the test are 92 and 90 respectively Pepsinogen I PGI is a precursor enzyme of pep
9. C WASCHSCHRITT Siehe Waschschritt oben ARBEITSSCHRITT III Pipettieren Sie 100 pl der gut gemischten Substratl sung in alle Vertiefungen vorzugsweise mit einer 8 K anal Pipette 30 Minuten bei Raumtemperatur 20 25 C ausgehend von der ersten Vertiefung inkubieren W hrend der Inkubation die Platte vor Licht sch tzen ARBEITSSCHRITT IV Beenden Sie die Enzym Substrat Reaktion durch die Zugabe von 100 pl Stoppl sung in jede Vertiefung mit einer 8 K anal Pipette MESSUNG Messen Sie die A bsorption bei 450 nm innerhalb 30 Minuten 10 ERGEBNISSE 10 1 Qualit tskontrolle Um eine gute Laborroutine zu gew hrleisten ist der Einsatz von K ontrollen erforderlich Der Gastrin 17 Test enth lt eine Kontrolle Die ermittelten Werte der K ontrollen sollten graphisch dokumentiert werden um die D urchf hrungen zu 23 verfolgen Zur Auswertung der K ontrollwerte sollte eine geeignete statistische Methode gew hlt werden Jedes Labor sollte f r die Kontrollwerte seine eigenen Vertrauensbereichefestlegen 10 2 Berechnung derE rgebnisse Die Ergebnisse k nnen entweder mit einer a manuellen Methode oder auf einem b Automatensystem ermittelt werden mit der M glichkeit die gemessenen Absorptionswertein Pepsinogen I Konzentrationen umzuwandeln a Manuelle Methode Errechnen Sie von jeder Probe Kontrolle und Standard den Mittelwert der gemessenen Absorption Danach den gemittelten Absorptionswert der Blankl sung von sich selbst
10. PGI medio ng ll CV 1 9 3 5 9 2 31 3 3 0 3 78 1 2 4 4 137 2 2 4 61 controllo oppure utilizzare metodi statistici appropriati per analizzare i valori di controllo che devono rientrare negli intervalli di confidenza appropriati utilizzati in ogni laboratorio 10 2 Calcolo dei risultati I risultati del test possono essere analizzati utilizzando a un metodo manuale o b metodi automatizzati in cui i valori di assorbanza vengono convertiti in concentrazioni di pepsinogeno I a Metodo manuale Calcolare l assorbanza media delle determinazioni in duplicato del bianco dei calibratori del controllo e dei campioni Sottrarre la media del bianco da se stessa considerare questo valore come il primo punto della curva di calibrazione i calibratori il controllo e i campioni Per creare un grafico della curva del calibratore tracciare l assorbanza media del primo punto e di ogni calibratore asse y e le concentrazioni di PGI fornite per i calibratori asse x Tracciare una curva best fit per creare una curva di calibrazione Utilizzare il valore di assorbanza media di tutti i campioni e del controllo perinterpolare il valore di PGI dalla curvadi calibrazione b Metodi automatizzati Vi sono diversi programmi informatici disponibili per interpolare automaticamente le concentrazioni non note Un semplice fit polinomiale di secondo ordine adeguato per l interpolazione di concentrazioni non note nell intervallo di calibrazione Tuttavia
11. Reattivita crociata La reattivita crociata e l interferenza da parte di PGII sono state testate tramite l aggiunta di PGII SocietaZ a cinque campioni di siero a concentrazioni fino a 200 pg 1 Il test non ha mostrato alcun aumento n riduzione significativa del segnale nei campioni con una concentrazione di PG II pari a 200 pg 1 p PGII aggiunto PGI osservato Aggiunto Campione g 1 per campione gD Campione 0 z 42 3 1 10 4 2 100 50 4 4 105 200 4 4 105 26 3 2 10 24 6 93 5 50 27 3 104 0 200 24 5 93 2 56 2 3 0 59 6 106 0 50 60 9 108 0 200 53 3 94 8 72 7 4 0 70 8 97 4 50 72 5 99 7 200 71 9 98 9 100 1 5 0 98 3 98 2 50 99 9 99 8 200 98 7 98 6 62 Figure 1 Pipetting Order 1 2 3 4 5 A BS BS B CAL1 CAL1 C CAL2 CAL2 D CAL3 CAL3 E Control Control F S1 S1 G S2 S2 H etc etc WASHING Wash the wells three times with 350 yl of the diluted 1 to 10 washing buffer and gently tap the inverted plate afew times on aclean paper towel STEPII Pipette 100 pl of the mixed conjugate solution into the wells preferably with an 8 channel pipette Cover the plate with the incubation cover Incubate for 30 minutes at 37 C WASHING See the washing procedure of STEP I STEP III Pipette 100 yl of the mixed substrate solution into wells with an 8 channel pipette Start the incubation time after pipetting the
12. SERA CONSIDERADA NULA SI SE DETERMINA QUE EL PROBLEMA SE PRODUJO A CAUSA DE MALTRATO USO INCORRECTO DANO ACCIDENTAL ALMACENAMIENTO INCORRECTO O UTILIZACI N DE PRODUCTOS PARA OPERACI N MAS ALLA DE SUS LIMITACIONES ESPECIFICADAS O MAS ALLA DE SUS ESPECIFICACIONES QUE CONTRAVENGAN LAS INSTRUCCIONESINDICADASEN EL MANUAL DE INSTRUCCIONES El per odo de esta garant a para el Distribuidor se indica en el manual de instrucci n delos Productos y comenzar a partir de la fecha correspondiente al env o del Producto por parte del Fabricante En caso de que se produzcan desacuerdos relacionados con la interpretaci n se aplica el texto en ingl s Todos los conjuntos Biohit Diagnostics han sido fabricados en conformidad con nuestros protocolos de gesti n de calidad ISO 9001 ISO 13485 y han pasado todos los procedimientos de Aseguramiento de la calidad correspondientes relacionados con estos productos 52 Die genaue PG I Konzentration ist auf dem Fl schchen aufgedruckt Vorbereitung gebrauchsfertig Haltbarkeit siehe aufgedrucktes V erfallsdatum 6 7 Konjugatl sung Inhalt 15 ml HRP konjugiertes Anti Human PG I in einer stabilisierenden Pufferl sung Vorbereitung gebrauchsfertig Haltbarkeit siehe aufgedrucktes V erfallsdatum 6 8 Substratl sung Inhalt 15 ml Tetramethylbenzidin TMB in Pufferl sung mit K onservierungsmittel Vorbereitung gebrauchsfertig Haltbarkeit siehe aufgedrucktes Verfallsdatum Direkte Lichtau
13. anticorps de l h patite B et C et des anticorps anti VIH Cependant tant donn qu aucune m thode ne peut garantir de fa on absolue l absence de ces l ments pathog nes toutes les pr cautions recommand es pour la manipulation des d riv s du sang doivent tre respect es Utiliser toujours des gants de protection lors de la manipulation des chantillons de patient Utiliser un dispositif de pipetage de s curit Ne jamais pipeter avec la bouche Lire toutes les instructions avant d effectuer ce test Tous les r actifs fournis dans ce kit peuvent tre limin s en les d versant dans l vier et en rin ant excessivement avec l eau du robinet 5 PRELEVEMENT ET PREPARATION DESECHANTILLONS La prise de sang est effectu e sur des personnes ayant jetin pendant au moins 10 heures avant le pr levement Le sang est collect dans un tube pour s rum en plastique sans additif ou dans un tube avec h parine ou EDTA Les tubes sont homog n is s imm diatement par retournement 5 a 6 fois Pour le s rum les tubes sont laiss s minimum 30 minutes a temp rature ambiante 20 25 C pour la coagulation Le plasma est s par imm diatement et le s rum apr s coagulation par une centrifugation ex tube plastique 2000g 10 15 min Le s rum ou plasma peut tre conserv au r frig rateur 2 8 C Pourune conservation longue les chantillons doivent tre 31 32 fractionn s et congel s de pr f rence 70 C sinon a
14. for the calibrators x axis D raw a best fit curve to construct a calibration curve Use the mean absorbance value for each sample and the control to interpolate the PGI value from the calibration curve b Automated Methods There are several computer programs available for interpolating the unknown concentrations automatically A simple 2nd order polynomial fit is adequate for interpolating unknown concentrations within the calibrator range However if sample absorbance value exceeds the absorbance value of the highest calibrator amore complex extrapolating algorithm may be more appropriate A typical calibration curve is shown in Figure 2 Figure 2 Example of a Typical Calibration Curve PGI ELISA Typical calibration curve 2 500 I hp Cc o 2 000 500 1 500 8 ol S 1 000 a o 0 500 2 lt 0 000 0 50 100 150 200 250 PGI concentration ug l 12 10 3 Prevalenza Nella popolazione anziana et superiore a 50 anni il 10 rivela gastrite atrofica avanzata a livello del corpo gastrico e livelli anormali di S PGI S PGI lt 25 pg l L esame endoscopico mostra che circa il 5 di questi pazienti affetto da tumore gastrico o lesioni precancerose 7 10 4 Interpretazione dei risultati Un livello basso di S P PGI S P PGI lt 25 g l indica gastrite atrofica avanzata moderata e grave della mucosa del corpo gastrico Questo livello di cut off stato individuato utilizzando il kit Bi
15. se il valore di assorbanza del campione superiore al valore di assorbanza del calibratore maggiore si consiglia di utilizzare un algoritmo di estrapolazione pi complesso La Figura 2 mostra una curva di calibrazione standard Figura 2 E sempio di una curva di calibrazione standard PGI ELISA Curva di calibrazione standard 2 500 2 000 1 500 1 000 0 500 0 000 0 50 100 150 200 250 Concentrazione PGI g l Assorbanza 450 nm 60 10 3 Prevalence In an elderly population age above 50 years 10 shows advanced atrophic corpus gastritis and abnormal S PGI levels S PGI lt 25 ug 1 Approximately 5 of these patients show gastric cancer or precancerous lesions in endoscopy 7 10 4 Interpretation of the Results A low S P PGI result S P PGI lt 25 pg 1 indicates advanced moderate and severe atrophic gastritis of the corpus mucosa This cut off level has been determined using the Biohit Pepsinogen I ELISA kit based on large clinical material A low S P PGI is an indicator for upper gastrointestinal endoscopy gastroscopy because of the increased risk of these patients of developing cancer prelesions and gastric cancer It is recommended that the given limits are considered as guidelines Also the PGI results determined for given specimen with assays from different manufacturers can vary due to differences in standardization assay methods and reagent specificity Results obtained from other m
16. specifiche sui Prodotti fornite dal Produttore QUALSIASI GARANZIA VERRA TUTTAVIA RITENUTA NULLA SE I DIFETTI SONO STATI CAUSATI DA ABUSO USO ERRATO DANNI ACCIDENTALI CONSERVAZIONE O UTILIZZO ERRATO DEI PRODOTTI IN OPERAZIONI CHE ESULANO DAI LIMITI O DALLE SPECIFICHE INDICATE IN MODO NON CONFORME ALLE INDICAZIONI FORNITE NEL MANUALE DI ISTRUZIONI Il periodo di garanzia per il Distributore definito nel manuale di istruzioni dei Prodotti e ha inizio dalla data in cui il Prodotto rilevante viene inviato dal Produttore In caso di controversie interpretative si applicail testo in linguainglese Tutti i kit diagnostici Biohit sono stati prodotti in conformit con i nostri protocolli di gestione della qualit ISO 9001 ISO 13485 e hanno superato tutte le procedure di controllo della qualit rilevanti relative a questi prodotti 64 6 6 Control Contents One vial containing 1 5 ml of human serum based PGI control with preservative The expected PGI level of the controlisindicated on the label Preparation Ready foruse Stability Stable until expiry date 6 7 Conjugate Solution Contents 15 ml of HRP conjugated monoclonal anti human PG I in stabilizing buffer Preparation Ready for use Stability Stable until expiry date 6 8 Substrate Solution Contents 15 ml of tetramethylbenzidine T MB in buffer containing preservative Preparation Ready for use Stability Stable until expiry date A void exposure to direct light
17. substrate solution into the first strip and continue the incubation for 30 minutes at room temperature 20 25 C Avoid direct exposure to light duringincubation STEPIV Pipette 100 pl of the mixed stop solution with an 8 channel pipette into the wells MEASURING Measure the absorbance at 450 nm within 30 minutes 10 RESULTS 10 1 Quality Control Values Good Laboratory Practice requires the use of appropriate controls to establish that all the reagents and protocols are performing as designated The Pepsinogen I ELISA is provided with the control serum 11 Quality control charts should be maintained to follow the performance of the control or appropriate statistical methods should be used for analyzing control values which should fall within the appropriate confidence intervals employed in each laboratory 10 2 Calculation of the Results Assay results can be analyzed by using a manual method orb automated methods where the absorbance readings are converted to pepsinogen I concentrations a Manual Method Calculate the mean absorbance of the duplicate deter minations of the blank solution the calibrators the control and samples Subtract the mean of the blank solution from itself consider this as the first point of the calibration curve the calibrators the control and samples G raph the calibrator curve by plotting the mean absorbance for the first point and each calibrator y axis against the PGI concentrations given
18. tubes for serum allowed to clot for minimum 30 minutes at room temperature 20 25 C Serum after clotting and plasma immediately is separated by centrifugation e g plastic tube acceleration up to 2000 G 10 15 minutes Serum plasma can be stored refrigerated 2 8 C For longer storage the samples should be stored frozen preferably at 70 C alternatively at 20 C Mix the samples thoroughly after thawing Avoid repeated freezing and thawing of the samples Grossly hemolysed lipemic or turbid specimens should be avoided Please refer to Biohit Gastrin 17 ELISA instructions for use if testing the Biohit GastroPanel ELISA assays Pepsinogen I Pepsinogen II Gastrin 17 H dicobacter pylori IgG antibodies from the same sample 6 KIT CONTENTS REAGENT PREPARATION AND STABILITY FOR MATERIALS PROVIDED Thereagents are sufficient for 96 wells Reagents of different kit lots should not be mixed 6 1 Microplate Contents 12 x 8 strips in frame coated with high affinity monoclonal anti human PGI IgG Preparation Ready foruse Stability Stable until expiry date D iscard the strips after use 6 2 Washing BufferC oncentrate x 10 Contents 120 ml of 10 x phosphate buffer concentrate containing Tween 20 and preservative Preparation D ilute 1 to 10 e g 100 ml 900 ml with distilled water and mix well Stability The diluted solution is stable for two weeks refrigerated 2 8 C 6 3 Diluent Buffer Contents 1
19. 00 ml of phosphate buffer containing bovine serum albumin Tween 20 preservative and red dye extract Preparation Ready foruse Stability Stable until expiry date 6 4 Blank Solution Contents One vial containing 1 5 ml of human serum based phosphate buffer with preservative Preparation Ready foruse Stability Stable until expiry date 6 5 Calibrators Contents Three vials each containing 1 5 ml of human serum based calibrators with preservatives The calibrators have lot specific PGI values of approximately 25 100 and 200 1g 1 The exact PGI concentration of the calibrators is labelled on thevials Preparation Ready foruse Stability Stable until expiry date 15 REFERENCES LITERATURHINWEIS REFERENCIAS BIBLIOGRAFIA 1 Varis K Surveillance of pernicious anemia In Precancerous Lesions of the Gastrointestinal Tract Scherlock P Morson PC Barbara L Veronesi U eds Raven Press New Y ork 1983 189 194 2 Sipponen P Kekki M Haapakoski J Iham ki T Siurala M Gastric cancer risk in chronic atrophic gastritis statistical calculations of cross sectional data Int J Cancer 1985 35 173 177 3 Varis K Samloff IM Iham ki T Siurala M An appraisal of tests for severe atrophic gastritis in relatives of patients with pernicious anemia Dig Dis Sci 1979 24 187 191 4 Varis K Kekki M Harkonen M Sipponen P Samloff IM Serum pepsinogen I and serum gastrin in screening of atrophic pangastritis with high risk of gast
20. 1 B DATE OFISSUE Pepsinogen I kit insert Version 01 April 1 2004 14 WARRANTY The Manufacturer shall remedy all defects discovered in any Product the D efective Product that result from unsuitable materials or negligent workmanship and which prevent the mechanical functioning or intended use of the Products including but not limited to the functions specified in the Manufacturer s specifications for the Products ANY WARRANTY WILL HOWEVER BE DEEMED AS VOID IF FAULT IS FOUND TO HAVE BEEN CAUSED BY MALTREATMENT MISUSE ACCIDENTAL DAMAGE INCORRECT STORAGE OR USE OF THE PRODUCTS FOR OPERATIONS OUTSIDE THEIR SPECIFIED LIMITATIONS OR OUTSIDE THEIR SPECIFICATIONS CONTRARY TO THE INSTRUCTIONSGIVEN IN THE INSTRUCTION MANUAL The period of this warranty for the D istributoris defined in the instruction manual of the Products and will commence from the date the relevant Product is shipped by the Manufacturer In case of interpretation disputes the English text applies All Biohit Diagnostic kits have been manufactured according to our ISO 9001 ISO 13485 quality management protocols and have passed all relevant Quality Assurance procedures related to these products 16 6 6 Controllo Contenuto un flacone contenente 1 5 ml di controllo PGI basato su siero umano con conservanti Il livello previsto di PGI del controllo indicata sull etichetta Preparazione pronto perl uso Stabilit stabile fino
21. 17 SHORT OUTLINE OF THE PROCEDURE B O HIT Biohit Plc diagnostics TESTKURZANLEITUNG RESUME DE LA PROCEDURE RESUMEN BREVE DEL PROCEDIMIENTO BREVE ILLUSTRAZIONE DELLA PROCEDURA 100 1 blank solution calibrators control and 1 10 diluted samples BLANK L sung Standards Kontrolle und 1 10 verd nnte Patientprobe solution de blanc des calibreurs du contr le et des chantillons de patient dilu s 1 10 de soluci n blanco los calibratores el control y las muestras de pacientes diluidas 1 10 del bianco i calibratori il controllo e i campioni paziente diluiti 1 a 10 PEPSINOGEN I 60min 37 C 3x350 1 1 10 washingbuffer Waschpuffer solution de lavage tamp n delavado tampone di lavaggio 100 1 conjugate solution Konjugatl sung conjugue soluci n conjugada soluzione coniugata 30min 37 C 3x350 1 1 10 washing buffer Waschpuffer solution de lavage tamp n delavado tampone di lavaggio INSTRUCTIONS FOR USE 100 1 substrate solution Substratl sung substrat soluci n de substrato soluzione di substrato 30min 20 25 C 100 1 Stop Solution Stopl sung Solution d arr t Soluzione di arresto Biohit Plc Laippatie 1 FIN 00880 Helsinki Finland Tel 358 9 773 861 Fax 1358 9 773 86290 601010 01 CE E mail info biohit com www biohit com 450 nm within bei dansles dentro de entro 30 min 400 329 01 EXPLANATION OF THE SYMBOLSUSED IN LABELS ERKL RUNG UTILISESSURLE
22. 20 antes del an lisis 12 CARACTER STICASDE FUNCIONAMIENTO Imprecisi n dentro del an lisis La imprecisi n dentro del an lisis se determin utilizando cuatro muestras de suero Dichas muestras se trabajaron como 17 r plicas en una ejecuci n Muestra MediadePGI ug l CV 1 9 3 5 9 2 31 3 3 0 3 78 1 2 4 4 137 2 24 49 La prueba ELISA para pepsin geno I incluye el suero de control Es recomendable llevar gr ficos de control de calidad para seguir el desempe o del control o bien deben utilizarse m todos estad sticos apropiados para analizar los valores de control Dichos valores deben estar entre los intervalos de confianza correspondientes utilizados en cada laboratorio 10 2 C lculo de los resultados Los resultados de la prueba se pueden analizar utilizando a un sistema automatizado o b m todos manuales en los cuales las lecturas de absorci n se convierten a concentraciones depepsin geno I a M todo manual Calcule la absorci n media de las determinaciones duplicadas de la soluci n blanco los calibradores el contro y las muestras Reste la media de la soluci n blanco a ella misma utilice ste como el primer punto de la curva de calibraci n los calibradores el control y las muestras G rafique la curva de calibraci n marcando la absorci n media para el primer punto y para cada calibrador eje y contra las concentraciones de PGI proporcionadas por los calibradores eje x Trace una curva de mej
23. 6 6 Contr le 6 7 Solution de conjugu 6 8 Solution de substrat 6 9 Solution d arr t 6 10 Films d incubation 6 11 Notice d utilisation 7 MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI 8 CONSERVATION ET STABILITE 9 MODE OPERATOIRE 10 RESULTATS 10 1 Valeurs du contr le qualit 10 2 Calcul des r sultats 10 3 Pr valence 11 LIMITES DE LA PROCEDURE D CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES 13 DATE DE PUBLICATION 14 GARANTIE 15 REFERENCES 16 INFORMATIONS COMMERCIALES 17 RESUME DE LA PROCEDURE ANNEXE CERTIFICAT DE CONTROLE DE QUALITE Page 30 30 30 31 31 32 31 31 31 32 32 33 33 33 33 33 33 33 3 34 35 35 36 37 37 37 38 38 65 67 72 FRANCAIS Cat N 601010 01 29 30 LINDICATION Ce test bas sur une r action immuno enzymatique sur microplaque ELISA permet le dosage quantitatif du pepsinog ne I humain dans le s rum ou le plasma de patients 2 CONTEXTE CLINIQUE Ce test sert identifier les patients qui pr sentent une gastrite atrophique avanc e au niveau du corpus gastrique et qui sont par cons quent expos s un risque accru de cancer de l estomac 1 2 Le dosage de PGI du s rum ou du plasma S PGI P PG I est un outil fiable pour d tecter les patients atteints d une gastrite atrophique avanc e du corpus 3 6 puisque la sensibilit et la sp cificit du test se situent a 92 et 90 respectivement Le Pepsinog ne I PGI est le pr curseur d une enzyme la pepsine
24. CDC 88 8395 del U S Department of Health and Human Services Bethesda MD EE UU sobre informes de procedimientos de seguridad en laboratorios ante diferentes enfermedades o cualquier otraregulaci n local o nacional Este conjunto contiene reactivos fabricados a partir de componentes sangu neos humanos Los materiales de origen proporcionados en este conjunto han sido probados para detectar la presencia de anticuerpos contra la hepatitis B y C como tambi n de anticuerpos contra el VIH y se determin que eran negativos Sin embargo en vista de que ning n m todo de prueba puede ofrecer total certeza de que estos pat genos est n ausentes se recomienda seguir todas las precauciones recomendadas para la manipulaci n de derivados dela sangre Siempre utilice guantes protectores cuando manipule muestras de pacientes Utilice un dispositivo para manipular las pipetas con seguridad Nunca manipule las pipetas con la boca Lea todas las instrucciones antes de realizar este an lisis Todos los reactivos del conjunto pueden ser eliminados verti ndolos en un fregadero y dejando correr el agua 5 RECOLECCI N Y MANIPULACI N DE MUESTRAS Se recomienda que el paciente ayune durante 10 horas antes de tomar las muestras de sangre La muestra de sangre se toma mediante punci n venosa por ejemplo en un tubo de ensayo pl stico para suero sin aditivos o tubo de ensayo de EDTA o heparina Los tubos de sangre se mezclan inmediatamente volte ndol
25. CONSERVAZIONE E STABILITA 58 9 PROCEDURA DEL TEST 58 10 RISULTATI 59 10 1 Valori per il controllo della qualita 59 10 2 Calcolo dei risultati 60 10 3 Prevalenza 61 10 4 Interpretazione dei risultati 61 11 LIMITI DELLA PROCEDURA 61 D CARATTERISTICHE DELLE PRESTAZIONI 61 13 DATA DI PUBBLICAZIONE 64 14 GARANZIA 64 15 BIBLIOGRAFIA 65 16 INFORMAZIONI PER LE ORDINAZIONI 67 17 BREVE ILLUSTRAZIONE DELLA PROCEDURA 72 APPENDICE CERTIFICATO DI CONTROLLO DELLA QUALIT 53 Linealidad Se analizaron tres muestras de suero en diluciones seriadas con el tamp n diluyente para determinar la linealidad de ELISA para pepsin geno I de Biohit Los resultados aparecen en lasiguiente tabla Factor de Observado Esperado Recuperacion Muestra diluci n ug D ug D 1 212 4 1 2 105 4 106 2 99 4 52 8 53 1 99 1 146 4 2 2 72 8 73 2 99 4 39 3 36 6 107 1 59 0 3 2 29 7 29 5 101 4 14 8 14 7 101 13 FECHA DE EMISI N Inserto del conjunto para Pepsin geno I Versi n 01 1 de abril de 2004 14 GARANT A El Fabricante debe reparartodo defecto descubierto en cualquier Producto el Producto defectuoso que sea el resultado de materiales inadecuados o fabricaci n negligente y queimpidael funcionamiento mec nico o el uso previsto para el Producto lo cual incluye pero no se limita a las funciones indicadas en las especificaciones de los Productos del Fabricante SIN EMBARGO TODA GARANT A
26. ERVATION INCORRECTE DUPRODUIT La p riode de la pr sente garantie octroy e au Distributeur est d finie dans la notice d utilisation des kits et prend effet compter de la date de livraison du kit par le Fabricant En cas delitiges c est la version anglaise du texte qui s applique Tousles kits diagnostic Biohit ont t fabriqu s selon un processus de qualit conforme aux normes ISO 9001 ISO 13485 et ont subi avec succ s les proc dures d Assurance Qualit qui se rapportent aces produits 40 6 6 Contr le Contenu Un flacon contenant 1 5 ml de s rum humain de contr le avec un conservateur La concentration attendue en PG I de ce s rum est indiqu e sur l tiquette Pr paration Pr t l emploi Stabilit Jusqu la date de p remption 6 7 Solution de conjugu Contenu 15 ml d un anticorps monoclonal anti PGI humain conjugu la HRP pr par dans un tampon destabilisation Pr paration Pr t l emploi Stabilit Jusqu la date de p remption 6 8 Solution de substrat Contenu 15 mldeTMB dans un tampon contenant un conservateur Pr paration Pr t l emploi Stabilit Jusqu la date de p remption Eviter une exposition directe alalumiere 6 9 Solution d arr t Contenu 15 ml d acide sulfurique 0 1mol 1 Pr paration Pr t l emploi Stabilit Jusqu la date de p remption 6 10 Films d incubation 4 feuilles de plastique pour couvrirlamicroplaque pendant l inc
27. I Kontrolle K und der verd nnten Proben P1 P2 etc als Doppelbestimmung siehe PIPETTIERSCHEMA Decken Sie die Platte mit Abdeckfolie ab und inkubieren sief r60 Minuten bei 37 C 22 Sensibilidad Lasensibilidad delapruebase determin en dosformas distintas 1 Diluci n de un calibrador del conjunto con una concentraci n de PGI de 10 0 1g 1con tamp n diluyente que dio como resultado un limite de CV de 10 aunaconcentraci n de 0 6 g l 2 Media de 25 r plicas de cero 2 desviaciones est ndar que equivale a un PGI de 1 9 pg l Recuperaci n A cuatro muestras de suero se les agreg 6 2 31 0 y 60 8 ug 1 de pepsin geno I humano PGI humano purificado Biohit Diagnostics Larecuperaci n promedio fue 6 2 g l 97 5 31 0 pg 1 89 1 60 8 pg 1 72 6 Correlaci n se apreci una correlaci n con la relaci n entre los niveles s ricos de pepsin geno I y el estado histol gico de lamucosa del cuerpo del est mago 18 Pepsin geno I en suero y mucosa del cuerpo del est mago estudio de control de caso finland s 350 300 gt N normal n 28 2 250 8 S gastritis no atrofica 20 3 A1 A3 gastritis atr fica suave 200 8 e 15 moderada 15 o severa 21 R extracci n del est mago e 1504 8 gastrectomiatotal 1 CPI El 0 2 100 50 0 0 r r r eo Mucosa del cuerpo del 51 Imprecisi n entre an lisis La imprecisi n entre an lisis se evalu en seis an lisis u
28. Il est synth tis par les cellules principales et les cellules du collet du corpus gastrique par les glandes dites a s cr tion acide de la muqueuse gastrique La plus grande partie du PGI est s cr t e dans la lumiere gastrique mais on peut en retrouver une petite quantit dans le sang Il existe une corr lation fiable entre le niveau de S P PGI et le nombre de cellules principales dans la muqueuse du corpus gastrique Par cons quent une perte des cellules principales aboutit une diminution lin aire du S P PGI D autre part la perte de ces cellules est la cons quence d une gastrite atrophique Pour des raisons inconnues la gastrite atrophique augmente le risque de cancer de l estomac Ce risque est multipli par 5 pour des patients atteints de gastrite atrophique avanc e au niveau du corpus et m me multiplie par 90 pour les patients atteints de pangastrite atrophique avanc e corpus t antrum atteints en comparaison avec le risque de cancer des personnes ayant une muqueuse gastrique normale 2 En Finlande un d pistage par le test S PGI a t r alis sur une population d hommes d ge moyen 50 69 ans et fumeurs Un taux faible de S PGI lt 25 ug 1 a t mis en vidence pour 9 8 d entre eux pour lesquels l endoscopie a d montr que 4 7 taient atteints soit d un cancer de l estomac soit d une l sion pr canc reuse 7 Des r sultats similaires ont t publi s auparavant 8 17 3 PRINCIPE DU
29. LISA del PGI basato sulla tecnica di immunodosaggio enzimatico a sandwich con un anticorpo di cattura specifico per PG I assorbito su una micropiastra e un anticorpo di rilevazione marcato con perossidasi di rafano HRP Il dosaggio include le seguenti reazioni 1 Un anticorpo monoclonale specifico del PGI umano sulla superficie in polistirene del pozzetto si lega alle molecole di PGI presenti nel campione 2 Ipozzetti vengono lavati per rimuovere il campione residuo 3 Un anticorpo di rilevazione monoclonale coniugato con HRP viene aggiunto ai pozzetti e si lega allemolecole di PGI 54 2 Das bersch ssige Serum und das unspezifisch gebundene Protein werden weggewaschen 3 Der HRP markierte Z weitantik rper wird zugegeben und bindet sich an die PG I Molek le 4 Nach einem weiteren Waschvorgang wird Tetramethylbenzidin TMB als Substrat zugegeben Das Substrat wird durch das Enzym oxidiert was zu einem farbigen Endprodukt f hrt 5 Die Enzymreaktion wird mit einer Stoppl sung beendet Die Intensit t der Farbentwicklungist proportional zur PG I Konzentration der Probe 4 VORSICHTSMASSN AH MEN UND WARNHINWEISE Anwendung f rin vitro diagnostische Zwecke VORSICHT Behandeln Sie die Serum und Plasmaproben als potentiell gef hrliches biologisches Material Alle Proben sollten als potentiell verunreinigt betrachtet werden und als infekti s behandelt werden Bitte beachten Sie die Ver ffentlichungen des U S Depar
30. Les chantillons de s rum ou plasma sont dilu s au 1 10 50 pl 450 pl avec le tampon de dilution Bien homog n iser ETAPE 1 Homog n iser et distribuer 100 pl de solution de blanc B de calibreurs CAL de contr les et d chantillons dilu s E dans les puits appropri s en double voir la figure1 Recouvrir la plaque d un film de plastique Incuber pendant 60 min a37 C 34 Sensibilit Lasensibilit du test a t d termin e de deux mani res 1 Une s rie de dilutions du calibreur PGI 10 pg la donn un CV limite de 10 une concentration de 0 6 1g 1 2 La valeur moyenne de 25 r plicats de valeur z ro 2D S correspond 1 9 pg 1 de PGI R cup ration Quatre s rums ont t test s avec du PGI humain ajout PGI humain purifi BIOHIT DIAGNOSTICS de concentrations d termin es soit C 6 2 31 0 et 60 8 ug 1 Lar cup ration moyenne tait 62 ug l 97 5 31 0 g l 89 1 60 8 pg 1 72 6 Corr lation La corr lation entre le taux de PGI et le statut histologique de la muqueuse du corpus a t montr e 18 Pepsinogene I s rique et muqueuse du Corpus Etude Finlandaise 350 300 o 250 N normal n 28 S gastrite non atrophique 20 200 Oo A1 A3 gastrite atrophique faible 15 8 150 1 Ha 0 r 1 r mod r e 15 ou s v re 21 R estomac op r gastrectomie totale Serum Pepsinogen I pg 1 Muqueuse du Corpus 39 Reproduc
31. SETIQUETTES EXPLICACI N DE LOSSIMBOLOS English For in vitro F r in vitro diagnostische Pou diagnostic use Zwecke vitre Consult Beachten Sie die Con instructions for use Testanleitung dut Temperature limitation Temperaturempfindlich Lim Store at 2 8 C Lagerung bei 2 8 C Con a 96 determinations F r 96 Bestimmungen 96 ti RN g Nach Gebrauch niht mehr WASH 10 x Wasting buffer Waschpufferkonzentrat x10 SoN concentrate 10x con DILBUF Diluent buffer Verd nnungspuffer Tan BLANK Blank solution BLANK L sung Sol CAL 1 Calibrator 1 3 Standard 1 3 Cali CONTROL Control Kontrollen Con CONJ Conjugate solution Konjugatl sung Sol SUBS Substrate solution Substratl sung Sol STOP Stop solution Stoppl sung Solt 71 70 DER SYMBOLE AUF ETIKETTEN EXPLICATION DESSYMBOLES UTILIZADOS EN LAS ETIQUETAS Francais Espa ol Italiano e diagnostique in Para uso diagn stico in vitro Per Puso diagnostico in vitro ro de Catalogue N mero de cat logo Numero di catalogo du lot C digo de lote Codice lotto ar avant Fecha de vencimiento Utilizzare entro ter la notice sation Consultar instrucciones de uso Consultare le instuzioni d uso 2s de Temp rature Tver 2 8 C Limite de temperature Almacenar entre 2 a 8 C Limiti di temperatura Cons
32. TEST Cetest ELISA du PGI est bas sur la m thode immuno enzymatique de type sandwich utilisant d une part un anticorps de capture sp cifique du PGI adsorb sur les puits d une microplaque et d autre part un anticorps de d tection marqu par la peroxydase de raifort HRP Le test se d roule selon les tapes suivantes 1 Un anticorps monoclonal sp cifique du PGI humain adsorb sur la surface en polystyr ne des puits fixe les mol cules de PGI pr sentes dans l chantillon 2 Lespuitssontlav s pour retirer l exc s d chantillon 3 Se agrega un anticuerpo de detecci n monoclonal conjugado para HRP en los pocillos y ste se une alas mol culas de PGI 4 Los pocillos se lavan y se agrega sustrato TMB La enzima oxigena el sustrato y se formaun producto final de colorazul 5 Se termina la reacci n enzim tica con soluci n de interrupci n La soluci n que se encuentra en los micropocillos debe tomar un color amarillo La intensidad del color amarillento desarrollado se relaciona directamente con la concentraci n de PGI en lamuestra 4 ADVERTENCIASY PRECAUCIONES Para uso diagn stico in vitro PRECAUCI N manipule las muestras de plasma y suero como materiales con riesgo biol gico potencial Todas las muestras deben ser consideradas potencialmente contaminadas y tratadas como si estuvieran infectadas Consulte la publicaci n Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 1999 4a ed CDC NIH y N
33. abziehen beachten Sie dass dies der erste Punkt auf der Standardkurve ist ebenso von den Standards den Kontrollen und den Proben Die graphische Darstellung der Standardkurve soll mit den gemittelten Absorptionswerte des ersten Punktes und jeden Standards auf der y Achse gegen die Pepsinogen I Konzentration auf der x Achse erfolgen Zur Interpolation der Pepsinogen I Werte sollte der gemittelte Absorptionswert jeder Probe und K ontrolle verwendet werden b Automatensystem Es gibt verschiedene PC Programme zum Interpolieren der unbekannten Konzentrationen Zum Beispiel das einfache 2nd polynominal fit w re geeignet Wenn der Absorptionswert der Probe h her ist als der Wert des h chsten Standards empfiehlt sich die Wahl eines komplexeren extrapolierenden Algorithmus Ein Beispiel einer typischen Standardkurve ist sehen sie in Abbildung 2 Abbildung 2 Beispiel einer typischen Standardkurve PGI ELISA einer typischen Standardkurve 2 500 2 000 1 500 1 000 0 500 0 000 0 50 100 150 200 250 PGI Konzentration ug l Absorption 450 nm 24 10 3 Prevalencia En una poblaci n de m s edad personas sobre los 50 a os el 10 presenta una gastritis atr fica avanzada del cuerpo del est mago y niveles anormales de S PGI S PGI lt 25 ug D Aproximadamente el 5 de estos pacientes presenta c ncer g strico o lesiones precancerosas en la endoscopia 7 10 4 Interpretaci n de los resu
34. alla data di scadenza 6 7 Soluzione coniugata Contenuto 15 ml di PGI anti umano monoclonale coniugato con HRP in tampone stabilizzatore Preparazione pronta perl uso Stabilit stabile fino alla data di scadenza 6 8 Soluzione di substrato Contenuto 15 ml di tetrametilbenzidina TMB in tampone con conservanti Preparazione pronta perl uso Stabilit stabile fino alla data di scadenza Non esporre allaluce diretta 6 9 Soluzione di arresto Contenuto 15 ml di acido solforico 0 1 mol 1 Preparazione pronta per l uso Stabilit stabile fino alla data di scadenza 6 10 Copertura per incubazione Quattro fogli di plastica per ricoprire la micro piastra durante l incubazione 6 11 Instruzioni perl uso 7 MATERIALINECESSARIMA NON FORNITI Acquadistillatao deionizzata Micropipette e punte monouso perl erogazione accurata di 20 1000 pl Pipette perl erogazione accurata di 1 10 ml Pipette a 8 canali perl erogazione di 100 pl Cilindro graduato 1000 ml Miscelatore vortex perla diluizione dei campioni Provette perla diluizione dei campioni Dispositivo di lavaggio per micropiastre Salviette di cartao carta assorbente Timer Incubatore 37 C Lettore per micropiastre 450nm ad esempio provetta perla raccolta di sangue in plastica per siero o plasma Contenitore peril ghiaccio 97 Se si eseguono i dosaggi Biohit GastroPanel ELISA pepsinogeno I pepsinogeno II gastrina 17 anticorpi IgG H dicobacter
35. antes de comenzar Se recomienda que todos los calibradores y muestras se apliquen en la placa como duplicados Es necesario utilizarcalibradores y el control en cada prueba realizada Mezcle bien todos los reactivos y las muestras antes de su uso DILUCI N DE LA MUESTRA Diluya las muestras mezcladas de suero o plasma a 1 10 50 pl 450 pl con el tamp n diluyente mezcle bien 46 Sensitivit t Die Sensitivit t des Tests auf zwei verschiedene Weise ermittelt 1 Eine Verd nnungsreihe des 10 0 ug 1 Standards mit Verd nnungspuffer ergab bei derK onzentration 0 6 pg leinen VK von 10 2 Der Mittelwert aus 25 facher Bestimmung der Nullwerte mit Standardabweichung 2 entspricht 1 9 pg 1 Wiederfindung Vier Serumproben wurden mit 6 2 31 0 und 60 8 ug l humanen Pepsinogen I gereinigtes PG I Biohit D iagnotics gespiked Gemittelte Werte der Wiederfindung 6 2ug 1 97 5 31 0pg 1 89 1 60 81g 1 72 6 Korrelation mit anderen Methoden Eine besteht eine Korrelation zwischen der Serumkonzentration des Pepsinogen I und dem histologischen Status der Magenschleimhaut 18 Serumkonzentration Pepsinogen I und Magenschleimhaut des Korpus Finnische Fall Kontrollstudie 350 3 300 8 250 N normal n 28 0 S keine atrophische G astritis A 20 A1 A3 mild 15 moderat 15 Oder schwere 21 atorphische G astritis 150 ji R resezierter Magen totale G astrektomie E 100 50 WA 0 i A e Corpus muco
36. anufacturers assay method should not be used interchangeably This Pepsinogen I ELISA assay enables wide range measurements of both low and high concentrations of S P PGI 11 LIMITATIONSOF THE PROCEDURE As with any diagnostic procedure the Biohit Pepsinogen I ELISA test results must be interpreted together with the patient s clinical presentation and any other information available to the physician Samples suspected of having PGI concentrations greater than the highest calibrator should be further diluted final dilution 1 to 20 before assay 12 PERFORMANCE CHARACTERISTICS Within Assay Imprecision The within assay imprecision was determined with four serum samples These samples were run as 17 replicates in onerun Sample MeanPGI pg 1 CV 1 9 3 5 9 2 31 3 3 0 3 78 1 24 4 137 2 24 13 Between Assay Imprecision The between assay imprecision was evaluated in six assays using four serum samples The PGI concentration of these samples was measured as duplicates Sample MeanPGI ug l CV 1 10 3 4 9 2 47 4 3 0 3 80 4 3 4 4 133 9 2 9 Specificity Cross Reactivity The cross reaction and interference by PGII was tested by spiking five serum samples with PGII Company Z at the concentrations of up to 200 pg 1 T he test showed no significant increase or reduction in the signal of the samples with a PG II concentration of 200 pg 1 PGII added PGI observed e Sample g lin sample WW ee
37. ared with photofluorography Hiroshima Med Sci 1997 46 81 86 11 Miki K Ichinose M Shimizu A Huang SC Oka H Furihata C Matsushima T Takahaski K Serum pepsinogens as a screening test of extensive chronic gastritis Gastroenterol Jpn 1987 22 33 141 12 Kodoi A Yoshihara M Sumii K Haruma K Kajiyama G Serum pepsinogen in screening for gastric cancer J G astroentero 1995 30 452 460 13 AokiK MisumiJ KimuraT Zhao W XieT Evaluation of cut off levels for screening of gastric cancerusing serum pepsinogens and distribution of levels of 65 Linearita Tre campioni di siero sono stati dosati in diluizioni seriali con tampone di diluente per determinare la linearit del test Biohit ELISA per pepsinogeno I I risultati sono riportati nella tabella seguente A Fattore di Osservato Atteso Recupero Campione diluizione wD gD Ch 1 212 4 1 2 105 4 106 2 99 4 52 8 53 1 99 1 146 4 2 2 72 8 73 2 99 4 39 3 36 6 107 1 59 0 3 2 29 7 29 5 101 4 14 8 14 7 101 B DATADIPUBBLICAZIONE Istruzioni d uso per il kit per pepsinogeno I Versione 01 aprile 12004 14 GARANZIA Il Produttore tenuto a porre rimedio a tutti i difetti scoperti in qualsiasi Prodotto Prodotto difettoso causati dall uso di materiali non adeguati o da errori di lavorazione che impediscano il funzionamento meccanico o l uso previsto dei Prodotti tra cui ma non in modo limitativo le funzioni indicate nelle
38. bereitung gebrauchsfertig Haltbarkeit siehe aufgedrucktes V erfallsdatum 6 4 BLAN K L sung Inhalt 1 Fl schchen mit 1 5 ml Tris Puffer und K onservierungsmittel Hinweis Der Pufferist leicht tr b Vorbereitung gebrauchsfertig Haltbarkeit siehe aufgedrucktes V erfallsdatum 6 5 Standards Inhalt 3 Fl schchen mit je 1 5 ml Standard basierend auf Humanserum mit Konservierungsmittel Die Konzentrationen der Standards 25 100 und 200 ng 1 sind chargenabh ngig und k nnen variieren Die genaue PG I Konzentration ist jeweils auf dem Fl schchenetikett aufgedruckt Vorbereitung gebrauchsfertig Haltbarkeit siehe aufgedrucktes Verfallsdatum 6 6 Kontrollen Inhalt 1 Fl schchen mit 15 ml Kontrolle basierend auf Humanserum mit Konservierungsmittel 20 ITALIANO INSTRUZIONIPER L USO ELISA per Pepsinog ne I N Cat 601010 01 INDICE Pagina L APPLICAZIONE CLINICA 54 2 BACKGROUND CLINICO 54 3 PRINCIPIO DEL TEST 54 4 AVVERTENZE E PRECAUZIONI 55 5 RACCOLTA E MANIPOLAZIONE DEI CAMPIONI 55 6 CONTENUTO DEL KIT PREPARAZIONE DEI REAGENTI E STABILITA DEI MATERIALI FORNITI 56 6 1 Micropiastra 56 6 2 Concentrato di tampone di lavaggio x 10 56 6 3 Tampone di diluizione 56 6 4 Bianco 56 6 5 Calibratori 56 6 6 Controllo 57 6 7 Soluzione coniugata 57 6 8 Soluzione di substrato 57 6 9 Soluzione di arresto 57 6 10 Copertura per incubazione 57 6 11 Instruzioni per l uso 57 7 MATERIALI NECESSARI MA NON FORNITI 57 8
39. chen Teste von Biohit wurden nach unseren ISO 9001 ISO 13485 Qualit tsmanagementprotokollen hergestellt und haben alle relevanten Qualit tssicherungsverfahren bestanden 28 aproximadamente 25 100 y 200 g l La concentraci n exacta de PGI de los calibradores seindicaen la etiqueta delos frascos Preparaci n listo parausar Estabilidad estable hastalafecha de vencimiento 6 6 Control Contenido un frasco que contiene 1 5 ml de control de PGI basado en suero humano con preservante El nivel esperado de PGI del control seindica en la etiqueta Preparaci n listo parausar Estabilidad estable hastalafecha devencimiento 6 7 Soluci n conjugada Contenido 15 ml de PGI antihumano monoclonal conjugado para HRP en tamp n estabilizador Preparaci n listo parausar Estabilidad estable hastalafecha de vencimiento 6 8 Soluci n de sustrato Contenido 15 ml de tetrametilbenzidina TMB en un tamp n que contiene preservante Preparaci n listo parausar Estabilidad estable hastala fecha de vencimiento Evitarlaexposici n alaluz directa 6 9 Soluci n de interrupci n Contenido 15 ml de cido sulf rico a0 1 mol 1 Preparaci n listo parausar Estabilidad estable hastalafecha devencimiento 6 10 Cubiertas de incubaci n Cuatro l minas de pl stico para cubrirla microplaca durante laincubaci n 6 11 Instrucciones de uso 7 MATERIALESNECESARIOS PERO NO PROPORCIONADOS Agua destilada o desionizada Micropi
40. ci n lineal del S P PGI Por otra parte la p rdida de c lulas principales es resultado dela gastritis atr fica Por razones desconocidas la gastritis atr fica aumenta el riesgo de c ncer g strico el riesgo es hasta cinco veces mayor en pacientes con gastritis atr fica avanzada del cuerpo del est mago e incluso hasta 90 veces en pacientes con pangastritis atr fica avanzada comprometidos el antro y el cuerpo del est mago en comparaci n con personas cuya mucosa g strica es normal 2 Ex menes realizados con la prueba S PGI en Finlandia a hombres fumadores de mediana edad 50 a 69 a os indicaron que un 9 8 de ellos presentaba un nivel bajo de S PGI lt 25ug 1 de los cuales un 4 7 revel presencia de c ncer g strico o lesiones precancerosas a trav s de una endoscopia 7 Resultados equivalentes tambi n se han publicado en estudios anteriores 8 17 3 PRINCIPIO DE LAPRUEBA Este m todo ELISA para PGI se basa en una t cnica de enzimoinmunoan lisis tipo s ndwich con un anticuerpo de captura espec fico de PGI absorbido en una microplaca y un anticuerpo de detecci n marcado con peroxidasa de r bano HPR El an lisis se realiza de acuerdo con las siguientes reacciones 1 Un anticuerpo monoclonal espec fico de PGI humano en la superficie de poliestireno delos pocillos seune con las mol culas de PG I presentes en la muestra 2 Los pocillos selavan para eliminarla muestra residual 3 L anticorps de detect
41. de PGI a M thode manuelle Calculer la valeur d absorbance moyenne pour le blanc les calibreurs le contr le et chaque chantillon dos s en double Soustraire de ces valeurs la valeur d absorbance moyenne du blanc et consid rer z ro comme le premier point de la courbe de calibrage Tracer le graphe de calibrage en reportant la valeur d absorbance moyenne de chaque calibreur axe des ordonn es en fonction de sa concentration en PGI axe des abscisses Tracer la meilleure courbe passant par ces points Les concentrations en PGI de chaque chantillon et du contr le sont d termin es par interpolation de leurs valeurs d absorbance moyenne sur la courbe de calibrage b Syst me automatis De nombreux programmes sont disponibles pour d terminer automatiquement les concentrations partir de l absorbance Un simple polyn me du second degr est suffisant pour d terminer les concentrations incluses dans la gamme des calibreurs Cependant si la valeur d absorbance d un chantillon exc de la valeur d absorbance du calibreur le plus fort un algorithme d extrapolation plus complexe doit tre utilis La figure 2 montre une courbe de calibrage type Figure 2 Exemple de courbe de calibrage PGI ELISA Courbe de calibrage type 2 500 2 000 1 500 1 000 0 500 0 000 Absorbance 450 nm 0 50 100 150 200 250 Concentration PGI ug l 36 10 3 Pr valence Dans une population ag e plus de 50 a
42. en getestet Die PG I Konzentration dieser Proben wurde als D oppelwert gemessen Probe MittelwertPG Ipg 1 VK 1 10 3 49 2 ATA 3 0 3 80 4 3 4 4 133 9 2 9 Spezifit tund Kreuzreaktivit t Die Kreuzreaktivit t mit dem PG II und die damit verbundene St reinfl sse wurden mit 5 gespikten PG II der Firma Z Proben bis zur Konzentration von 200 ng 1 getestet Probe Cgiimbiob Cad Craneo a 4 2 5 i 10 42 100 50 44 105 200 44 105 263 3 10 24 6 93 5 50 273 104 0 200 24 5 93 2 562 a 10 59 6 106 0 50 60 9 108 0 200 533 94 8 727 A 10 708 974 50 725 99 7 200 719 98 9 100 1 E 10 98 3 98 2 50 99 9 99 8 200 98 7 98 6 26 PASOI Mezcle y utilice la pipeta para agregar 100 ul de soluci n blanco SB los calibradores CAL1 CAL3 el control y las muestras diluidas M1 M2 etc en los pocillos como duplicados veala figura 1 Cubrala placa con la cubierta deincubaci n Incube durante 60 minutosa37 C Figura 1 Orden de las pipetas 1 2 3 4 5 A SB SB B CAL1 CAL1 Cc CAL2 CAL2 D CAL3 CAL3 E Control Control F M1 M1 G M2 M2 H etc etc LAVADO Lave los pocillos tres veces con 350 pl de tamp n de lavado diluido 1 10 y d unos golpecitos suaves ala placainvertida sobre una toalla de papel limpia PASO II Utilice una pipeta de preferencia de 8 canales para agregar a los pocillos 100 pl de la soluci n conjugada
43. enzialmente contaminati e devono essere trattati come se fossero infetti Fare riferimento alla pubblicazione dell U S Department of Health and Human Services Bethesda MD USA Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 1999 4 ed CD C NIH e N CDC 88 8395 per quanto riguarda le procedure di sicurezza di laboratorio relativamente alle diverse malattie o allenormative localio nazionali Il kit contiene reagenti emoderivati Le materie prime fornite nel kit sono state testate in modo da escludere la presenza di anticorpi dell epatite B e C nonch di anticorpi anti HIV Tuttavia poich nessun metodo di verifica pu offrire la certezza assoluta dell assenza di questi patogeni necessario osservare tutte le precauzioni previste perla manipolazione di emoderivati Utilizzare sempre guanti protettivi per la manipolazione dei campioni dei pazienti Utilizzare un dispositivo di pipettamento sicuro per tutte le operazioni di pipettamento Non eseguire mai le operazioni di pipettamento a bocca Prima di eseguire il test leggere tutte le istruzioni Perlo smaltimento di tutti i reagenti inclusi nel kit versare il materiale in unlavandino con abbondante acqua corrente 5 RACCOLTA E MANIPOLAZIONE DEICAMPIONI Per la raccolta dei campioni di sangue il paziente deve essere a digiuno da 10 ore Il campione deve essere raccolto tramite puntura venosa ad esempio in una provetta per siero in plastica senza additivi o in una prove
44. er Chargen oder anderer Hersteller d rfen nicht eingesetzt werden Die einzelnen Komponenten dieses Tests sind auf eine pr zise Konzentration eingestellt und aufeinander abgestimmt worden Weitergehende Verd nnungen oder andere nderungen beeintr chtigen die Richtigkeit der Ergebnisse Anzeichen eines Verfalls derReagenzien Die Testkomponenten sollten keinerlei sichtbare Tr bung oder Zeichen einer Ausf llung aufweisen Bei der Lagerung des Waschpufferkonzentrats bei 2 8 C ist ein Ausfallen bzw eine Flockung m glich sollte sich aber unter Mischen bei RT 20 25 C wieder aufl sen Die Substratl sung ist farblos bis hellblau andere Verf rbungen sind Anzeichen des Verfalls 9 TESTDURCHF HRUNG VORBEREITUNG Alle Reagenzien und die Mikrotiterplatte auf Raumtemperatur 20 25 C bringen Inkubator auf 37 C vorw rmen Waschpufferl sung 1 10 z b 100ml 900ml mit destilliertem Wasser verd nnen Bitte die Testanleitung vor dem Ansetzen vollst ndig durchlesen Es wird empfohlen den Standard die Kontrollen und Proben als Doppelbestimmung durchzuf hren In jedem Ansatz m ssen Standard und Kontrollen angesetzt werden Alle Reagenzien vorGebrauch sorgf ltig mischen PROBENVERDUNNUNG Die Serumproben m ssen im Verh ltnis 1 10 z B 50 pl 450 pl mit Verd nnungspuffer verd nnt werden gut mischen ARBEITSSCHRITTI Pipettieren Sie je 100 pl BLANK L sung B der gebrauchsfertigen Standards STD 1 STD 2 u s w der PG
45. erchanger les r actifs de coffrets portant des num ros de lot diff rents et ne jamais les remplacer par des r actifs de coffrets fournis par d autres fabricants Utiliser uniquement de l eau distill e ou d ionis e Les l ments du coffret sont fournis des concentrations pr cises Toute dilution suppl mentaire ou autre modification des r actifs pourrait entra ner l obtention de r sultats incorrects Indications de l alt ration du coffret Les composants liquides ne doivent pas tre visiblement opalescents ou contenir des l ments pr cipit s Le tampon de lavage concentr conserv entre 2 et 8 C peut toutefois pr senter des cristaux qui doivent se dissoudre apr s homog n isation temp rature ambiante 20 25 C La solution de substrat doit tre incolore ou bleu p le Toute autre coloration indique une d t rioration du substrat 9 MODE OPERATOIRE PREPARATIFS Amener tous les r actifs et la plaque de microtitration a temp rature ambiante 20 25 C Pr chauffer l incubateur 37 C D iluer le tampon de lavage concentr au 1 10 ex 100ml 900 ml avec de l eau distill e ou d ionis e Lire toute la procedure du test avant de commencer Il est recommand de doser tous les calibreurs les contr les et les chantillons en double sur une m me plaque Le calibreur et les contr les doivent tre utilis s chaque test Bien homog n iser tous les r actifs avant usage DILUTION DESECHANTILLONS
46. erum and plasma samples as potential biohazardous material All samples should be regarded as potentially contaminated and treated as if they were infectious Please refer to the U S department of Health and Human Services Bethesda MD USA publication Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 1999 4th ed CD C NIH and No CDC 88 8395 on reports of laboratory safety procedures on different diseases or any other local ornational regulation This kit contains reagents manufactured from human blood components The source materials provided in this kit have been tested for the presence of antibodies to hepatitis B and C as well as antibodies to HIV and found to be negative However as no test method can offer absolute assurance that these pathogens are absent all recommended precautions for the handling of ablood derivative should be observed Always use protective gloves when handling patient samples Use a safety pipetting device for all pipetting Never pipette by mouth Read all instructions prior to performing this assay All reagents provided in the kit can be disposed by pouring into a sink and flushing with an excess of tap water 5 SPECIMEN COLLECTION AND HANDLING Fasting for 10 hours is recommended prior to blood sampling Blood sample is collected by venipuncture into e g a plastic serum tube without additives or EDTA or heparin tube Blood tubes are mixed immediately by turning them upside down 5 6 times and
47. ervare a 2 8 C ts 96 determinaciones 96 determinazioni s r utiliser No volver a utilizar Non riutilizzare on de lavage ntre 10x Concentrado de tampon de lavado x10 Concentrato ditampone di lavaggio on de dilution Tamp n diluyente Tampone di diluizione on de blanc Soluci n blanco Bianco eurs Calibradores Calibratori Sle Control Controllo on de conjugu Soluci n conjugada Soluzione coniugata on de substrat Soluci n de sustrato Soluzione di substrato on d arr t Soluci n de interrupci n Soluzione di arresto PEPSINOGEN I 601010 01 Instructions foruse 5 Testanleitung 17 Notice d utilisation 29 Instrucciones de uso 41 Instruzioni per l uso 53 References Literaturhinweis Referencias Bibliografia 65 Ordering Information Bestellinformationen 67 Informations Commerciales informaci n De Pedido Informazioni Per Le O rdinazioni NOTES 69 RUSSIA BiohitOOO Tel 7 812 327 5327 Fax 7 812 327 5323 E mail main biohit ru UK Biohit Ltd Tel 44 1803 315 900 Fax 44 1803 315 530 E mail info biohit co uk U SA Biohit Inc Tel 1 732 922 4900 Fax 1 732 922 0557 E mail customersvc usa biohit com pipet biohit com 68 INSTRUCTIONSFOR USE ENGLISH Pepsinogen I ELISA Cat No 601010 01 CONTENTS LINTENDED USE 2 CLINICAL BACKGROUND 3 PRINCIPLE OF THE TEST 4 WARNINGSAND PRECAUTIONS
48. est brachten folgendes Ergebnis Ein niedriger S PG I Wert lt 25 1g 1 wurde in 9 8 der F lle beobachtet Durch eine nachfolgende Endoskopie wurde nachgewiesen dass aus dieser Gruppe wiederum 4 7 entweder an Magenkrebs oder einer Vorstufe litten 7 Entsprechende Ergebnisse wurden schon in fr heren Studien ver ffentlicht 8 17 3 TESTPRINZIP Der PG I ELISA basiert auf einem Sandwich Enzym Immunoassay Prinzip Der Antik rper f r das zu bestimmende Antigen ist an die Oberfl che der Mikrotiterplatte fixiert Durch die Zugabe eines Meerrettichperoxidase HRP markierten Z weitantik rpers wird die Menge des gebundenen Antigens bestimmt DerReaktionsablauf 1 PGI spezifische monoklonale Antik rper humanen Ursprungs die an die Polystyroloberfl che fixiert sind binden die im Patientenserum vorhandenen PGI Molek le 18 4 I pozzetti vengono lavati e viene aggiunto il substrato di TMB Il substrato viene ossigenizzato dall enzima e viene generato un prodotto finale di colore blu 5 La reazione dell enzima viene terminata con una soluzione di arresto La soluzione contenuta nei micropozzetti dovrebbe assumere un colore giallo L intensit del colore giallastro sviluppato direttamente correlata alla concentrazione di PGI del campione 4 AVVERTENZE E PRECAUZIONI Perl uso diagnostico in vitro ATTENZIONE i campioni di siero e di plasma sono materiale a rischio biologico Tutti i campioni devono essere considerati come pot
49. i n de los resultados 49 11 LIMITACIONESDEL PROCEDIMIENTO 49 12 CARACTERISTICASDE FUNCIONAMIENTO 49 13 FECHA DE EMISI N 52 14 GARANTIA 52 15 REFERENCIAS 65 16 INFORMACION DE PEDIDO 67 17 RESUMEN BREVE DEL PROCEDIMIENTO 72 AP NDICE CERTIFICADO DE CONTROL DE CALIDAD 41 Lin arit Trois chantillons de s rum ont t dilu s successivement avec le tampon de dilution pour d terminer la lin arit du test Elisa Pepsinog ne I Biohit Les r sultats sont inscrits dansletableau suivant 4 Facteur de Valeur Valeur Attendue FE Echantillon dilution Observ e uy D ug D Recuperation 1 2124 2 1 2 105 4 1065 99 4 52 8 531 99 1 1464 i a 2 2 728 732 99 4 39 3 36 6 107 i 50 0 3 2 29 7 295 101 4 148 147 101 B DATE DE PUBLICATION Brochure du coffret Pepsinogene I Version 01 1 Aprile 2004 14 GARANTIE Le Fabricant devra rem dier a tous les defauts d couverts dans un produit produit defectueux qui r sulte d un composant inappropri ou d une fabrication d fectueuse et qui emp chent le fonctionnement ou l utilisation du produit notamment les fonctions conformes aux caract ristiques et sp cificit s tablies par le Fabricant CEPENDANT LA PRESENTE GARANTIE N EST PAS APPLICABLE SI LE DEFAULT ALTERANT OU MODIFIANT LE PRODUIT A ETE CAUSE NOTAMMENT PAR UNE UTILISATION IMPROPRE OU ABUSIVE DU PRODUIT UNE USURE NORMALE UN DOMMAGE ACCIDENTEL OU ENCORE UNE CONS
50. i 2 8 C aufbewahren F r l ngere Aufbewahrung sollten die Proben eingefroren werden bevorzugt bei 70 C oder alternativ bei 20 C Nach dem Auftauen die Proben stets gut mischen Wiederholtes Einfrieren und Auftauen der Proben sollte vermieden werden Stark h molytische lip mische oder tr be Proben d rfen nicht verwendet werden 19 Bitte beachten Sie die Biohit Gastrin 17 Testanleitung falls Sie das gesamte Biohit GastroPanel Pepsinogen I Pepsinogen II Gastrin 17 und Helicobacter pylori IgG aus einer Probe ansetzen m chten 6 PACKUNGSINHALT REAGENZANSATZ UND STABILIT TSHIN WEISE Die Reagenzien einer Packung sind ausreichend f r 96 Vertiefungen der Mikrotiterplatte Die Reagenzien verschiedener Chargen d rfen nicht gemischt werden 6 1 Mikrotiterplatte Inhalt 12 x 8 Streifen im Plattenrahmen beschichtet mit hochreaktionsf higem anti human PGI IgG1 Vorbereitung gebrauchsfertig Haltbarkeit siehe aufgedrucktes Verfallsdatum Nach dem Benutzen die Streifen verwerfen 6 2 Waschpufferkonzentrat x 10 Inhalt 120 ml 10 fach konzentrierter Phosphatpuffer enth lt Tween 20 und Konservierungsmittel Vorbereitung Verd nnung 1 10 z B 100 ml 900 ml mit dest Wasser Danach gut mischen Haltbarkeit der verd nnte Waschpuffer ist gek hlt 2 8 C zwei Wochen haltbar 6 3 Verd nnungspuffer Inhalt 100 ml Phosphatpuffer enth lt Protein Tween 20 Konservierungsmittel und roten Farbstoffextrakt Vor
51. idad Preparaci n listo parausar Estabilidad estable hastalafecha de vencimiento Eliminelas tiras utilizadas 6 2 Concentrado de tamp n de lavado x 10 Contenido 120 ml de 10x concentrado detamp n de fosfato que contiene Tween 20 y preservante Preparaci n diluya a 1 10 por ejemplo 100 ml 900 ml con agua destilada y mezcle bien Estabilidad la soluci n diluida es estable durante dos semanas en refrigeraci n 2 a 8 C 6 3 Tamp n diluyente Contenido 100 ml de tamp n de fosfato que contiene seroalb mina bovina Tween 20 preservante y extracto detinterojo Preparaci n listo parausar Estabilidad estable hastalafecha de vencimiento 6 4 Soluci n blanco Contenido un frasco que contiene 1 5 ml de tamp n de fosfato basado en suero humano con preservante Preparaci n listo parausar Estabilidad estable hastala fecha de vencimiento 6 5 Calibradores Contenido tres frascos con 1 5 ml de calibradores basados en suero humano con preservantes Los calibradores poseen valores de PGI espec ficos delote de 44 NOTICE D UTILISATION ELISA Pepsinog ne I SOMMAIRE 1 INDICATION 2 CONTEXTE CLINIQUE 3 PRINCIPE DU TEST 4 MISESEN GARDE ET PRECAUTIONS 5 PRELEVEMENT ET PREPARATION DESECHANTILLONS 6 CONTENU DU COFFRET PREPARATION ET STABILITE DES REACTIFS 6 1 Plaque de microtitration 6 2 Solution de lavage concentr e 10x 6 3 Tampon de dilution 6 4 Solution de blanc 6 5 Calibreurs
52. ifici per lotto corrispondenti approssimativamente a 25 100 e 200 pmol l L esatta concentrazione di PGI dei calibratori indicata sui flaconi Preparazione pronti perl uso Stabilit stabile fino alla data di scadenza 56 TESTANLEITUNG Pepsinogen ELISA Artikel Nr 601010 01 INHALT Seite 1 ANWENDUNGSGEBIET 18 2 KLINISCHE DATEN 18 3 TESTPRINZIP 18 4 VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARN HINWEISE 19 5 SAMMLUNG UND HANDHABUNG DER PROBEN 19 6 PACKUNGSINHALT REAGENZANSATZ UND 20 STABILITATSHIN WEISE 20 6 1 Mikrotiterplatte 20 6 2 Waschpufferkonzentrat x 10 20 6 3 Verd nnungspuffer 20 6 4 BLANK L sung 20 6 5 Standards 20 6 6 Kontrollen 20 6 7 Konjugatl sung 21 6 8 Substratl sung 21 6 9 Stoppl sung 21 6 10 Abdeckfolien 21 6 11 Testanleitung 21 7 ZUSATZLICH ERFORDERLICHES ARBEITSMATERIAL 21 8 LAGERUNG UND STABILIT T 22 9 TESTDURCHFUHRUNG 22 10 ERGEBNISSE 23 10 1 Qualit tskontrolle 23 10 2 Berechnung der Ergebnisse 24 10 3 Pr valenz 25 10 4 Interpretation der Ergebnisse 25 11 GRENZEN DESVERFAHRENS 25 D TESTSPEZIFIKATIONEN 25 3 AUSSTELLUNGSDATUM 28 14 GARANTIE 28 15 LITERATURHINWEIS 65 16 BESTELLINFORMATIONEN 67 17 TESTKURZANLEITUNG 72 ANHANG QUALIT TSKONTROLLE ZERTIFIKAT DEUTSCH 17 LANWENDUNGSGEBIET Der Pepsinogen I PG I Test ist ein Enzym Immunoassay ELISA und dient der quantitativen Bestimmung des humanen Pepsinogen I im Serum oder Plasmaproben 2 KLINISCHE DATEN Dieser Te
53. incubation cover Incubate for 60 minutes at 37 C 10 Sensibilita Lasensibilita del test stata determinatain due modi 1 La diluizione di un calibratore del kit con concentrazione di PGI di 10 0 pg 1 con tampone di diluente fornisce un limite di CV pari al 10 alla concentrazione di 0 6 pg 1 2 Lamedia di 25 repliche zero pi 2 deviazioni standard corrisponde a 1 9 ug 1 di PGI Recupero A quattro campioni di siero sono stati aggiunti 6 2 31 0 e 60 8 ug l di pepsinogeno I umano PGI umano purificato diagnostica Biohit Il recupero medio stato pari a 6 2 pg 1 97 5 31 0pg 1 89 1 60 8ug 1 72 6 Correlazione stata dimostrata correlazione tra i livelli di pepsinogeno I nel siero e lo stato istologico dellamucosadel corpo gastrico 18 Pepsinogeno I nel siero e mucosa del corpo gastrico Caso finlandese Studio di controllo 350 300 o N normale n 28 250 S gastrite non atrofica 20 200 moderata 15 o severa 21 O A1 A3 gastrite atrofica lieve 15 8 R stomaco resecato 150 0 gastrectomia totale 1 100 50 i 0 tt Mucosa del corpo Pepsinogeno I nel siero uy 1 63 Imprecisione tra saggi L imprecisione tra saggi stata valutata in sei dosaggi utilizzando quatto campioni di siero Laconcentrazione di PGI di questi campioni stata misuratain duplicato Campione PGI medio pg 1 CV 1 10 3 4 9 2 47 4 3 0 3 80 4 3 4 4 133 9 2 9 Specificita
54. ion conjugu ala HRP est ajout aux puits de la microplaque et se lie aux mol cules de PGI 4 Les puits sont lav s et le substrat TMB T traM thylBenzidine est ajout Ce substrat est oxyd par l enzyme et donne un produit final color bleu 5 La r action enzymatique est stopp e par ajout de la solution d arr t La solution dans les puits devient jaune L intensit de la coloration jaun tre d velopp e est directement proportionnelle la concentration en PGI de l chantillon 4 MISESEN GARDE ET PRECAUTIONS A n utiliser que pourle diagnostic in vitro ATTENTION manipuler les chantillons de serums et de plasma comme du mat riel potentiellement dangereux Tous les chantillons doivent tre consid r s comme potentiellement contamin s et trait s comme si ils taient infectieux Se reporter la publication du Minist re A m ricain de la Sant et des Services Sociaux Bethesda MD USA concernant les mesures de s curit en laboratoires m dicaux et de microbiologie 1999 4 d CDC NIH et la publication n CDC 88 8395 concernant les proc dures de s curit en laboratoire pour diff rentes maladies ou toute autre r glementation locale ou nationale ainsi que la fiche de s curit correspondante ce kit Nos coffrets contiennent des r actifs fabriqu s partir de composants du sang humain Les mati res premi res concern es ont donn des r sultats n gatifs aux tests de recherche des
55. lori peril controllo della qualita Le pratiche standard di laboratorio prevedono l uso di controlli appropriati che consentano di verificare che tutti i reagenti e i protocolli vengano eseguiti nel modo indicato Il kit ELISA per pepsinogeno I includei sieri di controllo necessari E necessario registrare tabelle di controllo della qualit per monitorare le prestazioni del 59 8 CONSERVAZIONE E STABILIT Il kit per pepsinogeno I deve essere conservato in frigorifero 2 8 C Se conservato a queste temperature il kit stabile fino alla data di scadenza indicata sull etichetta della confezione sull etichetta di ogni componente del kit Non congelare enon esporre il kit a temperature elevate Non conservare a temperature superiori a 8 C quando non in uso La soluzione di substrato sensibile alla luce Non rimuovere la micropiastra n le singole strisce dalla confezione in alluminio prima che abbiano raggiunto la temperatura ambiente 20 25 C Le strisce non utilizzate devono essere riposte nella confezione in alluminio sigillate e conservate a 2 8 C Non utilizzare i reagenti dopo la data di scadenza indicata sull etichetta Non utilizzare reagenti di kit con numeri di lotto diverso e non utilizzare reagenti di kit di altri produttori Utilizzare solo acqua distillata o deionizzata I componenti del kit sono forniti con concentrazioni precise Un ulteriore diluizione o altre alterazioni dei reagenti possono portare a risulta
56. ltados Un resultado de S P PGI bajo S P PGI lt 25 pg 1 indica una gastritis atr fica avanzada moderada y severa de la mucosa del cuerpo del est mago Este nivel discriminante se ha determinado con el uso del conjunto ELISA para pepsin geno I de Biohit sobre la base de gran cantidad de material cl nico Un S P PGI bajo es un indicador para realizar la endoscop a gastrointestinal superior gastroscop a ya que estos pacientes presentan un mayor riesgo de desarrollar lesiones precancerosas y c ncer g strico Se recomienda considerar los l mites entregados como pautas Asimismo los resultados de PGI determinados para una muestra dada con an lisis de diferentes fabricantes pueden variar debido a diferencias de estandarizaci n m todos de an lisis y especificidad de los reactivos Los resultados obtenidos utilizando m todos de an lisis de otros fabricantes no deben usarse en formaintercambiable Este an lisis ELISA para pepsin geno I posibilita un amplio espectro de mediciones deconcentraciones altas y bajas de S P PGI 11 LIMITACIONESDEL PROCEDIMIENTO Como cualquier procedimiento de diagn stico los resultados de ELISA para pepsin geno I de Biohit se deben interpretar en conjunto con la presentaci n cl nica del paciente y con cualquier otrainformaci n disponible para el m dico Las muestras que se sospecha que tienen concentraciones de PGI mayores que el calibrador m s alto se deben diluir m s diluci n final a 1
57. mezclada Cubra la placa con la cubierta de incubaci n Incube durante 30 minutosa37 C LAVADO Consulte el procedimiento delavado del PASO 1 PASO III Utilice una pipeta de 8 canales para agregar a los pocillos 100 yl de la soluci n de sustrato mezclada Inicie el tiempo de incubaci n despu s de agregar con la pipeta la soluci n de sustrato en la primera tira y contin e la incubaci n durante 30 minutos a temperatura ambiente 20 a 25 C Evite la exposici n directa a la luz durante la incubaci n PASO IV Utilice una pipeta de 8 canales para agregar a los pocillos 100 yl de la soluci n de interrupci n mezclada MEDICI N Midala absorci n a450 nm dentro de 30 minutos 10 RESULTADOS 10 1 Valores de control de calidad Las buenas pr cticas de laboratorio exigen el uso de controles apropiados que permitan determinar quetodoslos reactivos y protocolos funcionan tal como han sido dise ados 47 Incubador 37 C Lector de microplacas 450 nm por ejemplo tubo de ensayo pl stico para recolectar la sangre para suero o plasma Contenedor para hielo 8 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Almacene el conjunto para pepsin geno I refrigerado 2 a 8 C Cuando se conservaa estas temperaturas el conjunto es estable hasta la fecha de vencimiento impresa en la etiqueta de la caja y en la etiqueta de cada componente del conjunto No congele ni exponga el conjunto a altas temperaturas ni conserve a m s de 8 C cuando no est en
58. nogen I ELISA Test erstellt basierend auf grossen klinischen Studien Der niedrige S P PG I Wert ist ein Indikator f r die Notwendigkeit einer G astroskopie des oberen Gastrointestinaltrakts da f r diese Patienten ein h heres Risiko besteht Magenkrebs zu entwickeln e Die empfohlenen Grenzbereiche sind als eine Richtschnur zu betrachten Ebenso k nnen PG I Ergebnisse anderer Hersteller variieren da Unterschiede in der Standarisierung in der Testmethode und der Reagenzienspezifit t bestehen k nnen Die Ergebnisse die mit Testen anderer Hersteller ermittelt worden sind d rfen nicht untereinander ausgetauscht werden e Der Pepsinogen I Test hat einen weiten Messbereich und erm glicht die Bestimmung niedriger und hoher S P PG I Konzentrationen IL GRENZEN DESVERFAHRENS Wie bei jedem anderen diagnostischen V erfahren m ssen die Ergebnisse des Biohit PG I ELISA Tests zusammen mit dem klinischen Bild des Patienten und weiteren verf gbaren Informationen des Arztes interpretiert werden Proben bei denen PG I Konzentrationen ber den h chsten Standard hinaus erwartet werden m ssen vor dem Einsatz verd nnt werden Maximale Verd nnung 1 20 D TESTSPEZIFIKATIONEN Intra Assay Pr zision DieIntra Assay Prazision wurdemit4 Proben als 17 fach Bestimmung getestet Probe MittelwertPG Ipg 1 VK 1 9 3 5 9 2 31 3 3 0 3 78 1 2 4 4 137 2 24 25 Inter Assay Pr zision DieIntra Assay Prazision wurdein 6 Ans tzen mit 4 Prob
59. ns 10 des personnes pr sentent des gastrites atrophiques avanc es et des taux anormaux de S PGI lt 25 ug 1 Une endoscopie de ces patients montre qu environ 5 sont atteints de cancers gastriques ou de l sions pr canc reuses 7 10 4 Interpr tation des r sultats Un taux de S P PGI bas S P PGI lt 25 yg 1 indique une gastrite atrophique avanc e mod r e s v re de la muqueuse du corpus gastrique Cette valeur a t d termin e avec le coffret ELISA PGI de BIO HIT partir d un large panel de pr l vement clinique Un taux de S P PGI bas est une indication pour l endoscopie gastro intestinale sup rieure gastroscopie en raison du risque accru pour ces patients de d velopper des l sions pr canc reuses et des cancers gastriques La valeur limite doit tre consid r e comme indicative Aussi les r sultats de PGI d termin s pour un chantillon donn avec les tests de diff rents fabricants peuvent varier cause de diff rences de standardisation de sp cificit de la m thode et des r actifs utilis s D onc les r sultats obtenus avec le test d un autre fabricant ne sont pas interchangeables Ce dosage ELISA PGII permet une large gamme de mesures de S P PGI pour de faibles et fortes concentrations ILLIMITESDE LA PROCEDURE De m me que pour toutes les proc dures de diagnostic les r sultats obtenus avec le test ELISA pour PGI de BIOHIT doivent tre interpr t s en corr lation avec le dossie
60. ohit ELISA per pepsinogeno I sulla base di un vasto materiale clinico Un valore basso di S P PGI un indicatore per l endoscopia gastrointestinale superiore gastroscopia a causa del maggior rischio di insorgenza di lesioni precancerose e tumore gastrico in questi pazienti Si raccomanda di considerare i limiti indicati come linee guida I risultati del PGI determinati per un determinato campione con dosaggi di diversi produttori possono variare a causa delle differenze della standardizzazione dei metodi di dosaggio e della specificit dei reagenti I risultati ottenuti con metodi di dosaggio di altri produttori non devono essere utilizzati in modo interscambiabile Questo dosaggio ELISA per pepsinogeno I consente un ampia gamma di misurazioni delle concentrazioni sia elevate che basse di S P PGI 11 LIMITIDELLA PROCEDURA Come con qualsiasi procedura diagnostica i risultati del test Biohit ELISA per pepsinogeno I devono essere interpretati alla luce del quadro clinico del paziente insieme atuttele altre informazioni a disposizione del medico I campioni con sospette concentrazioni di PGI superiori al calibratore pi alto devono essere diluiti ulteriormente diluizione finale 1 a 20 prima del dosaggio 12 CARATTERISTICHE DELLE PRESTAZIONI Imprecisione intra saggio L imprecisione intra saggio stata determinata utilizzando quattro campioni di siero Questi campioni sono stati eseguiti come 17 repliche in una seduta Campione
61. or ajuste para elaborar una curva de calibraci n Utilice el control y el valor de absorci n media de cada muestra para interpolar el valorde PGI dela curva de calibraci n b M todos automatizados Existe una serie de programas inform ticos para la interpolaci n autom tica de concentraciones desconocidas Un simple ajuste polinomial de segundo orden es adecuado para la interpolaci n de concentraciones desconocidas dentro del rango del calibrador Sin embargo si los valores de absorci n de las muestras exceden el valor de absorci n del mayor calibrador puede ser necesario utilizar un algoritmo de extrapolaci n m s complejo En la Figura 2 se muestra una curva de calibraci n tipica Figura 2 Ejemplo de una curva de calibraci n t pica PGI ELISA Curva de calibraci n t pica 2 500 E g 2 000 Y 1 500 9 1 000 2 8 0 500 Q lt 0 000 0 50 100 150 200 250 Concentraci n de PGI ug l 48 10 3 Pr valenz Bei lteren Menschen ber 50 Jahre zeigen 10 eine fortgeschrittene atrophische Gastritis und anormale S PGI Werte lt 25 ug 1 Bei Ungef hr 5 dieser Patienten konnte durch eine Endoskopie Magenkrebs oder Gewebsver nderungen des Krebsfr hstadiums beobachtet werden 7 10 4 Interpretation derE rgebnisse e Niedrige S P PGI Werte lt 25pg 1 indizieren eine fortgeschrittene atrophische Gastritis der Magenschleimhaut im Korpus D ie Cut off Werte wurden mit dem Biohit Pepsi
62. or substitute reagents from kits of other manufacturers Use only distilled or deionized water The components of the kit are provided at precise concentrations Further dilution or other alterations of the reagents may cause incorrect results Indication of Kit Deterioration Liquid components should not be visibly cloudy or contain precipitated material At 2 8 C the washing buffer concentrate may however partially crystallize but the crystals will dissolve by mixing at room temperature 20 25 C The substrate solution should be colorless or pale blue Any other colorindicates deterioration of the substrate solution 9 TEST PROCEDURE PRELIMINARY PREPARATIONS Allow all reagents and the microplate to reach room temperature 20 25 C Warm the incubator to 37 C Dilute the washing buffer concentrate 1 to 10 e g 100 ml 900 ml with distilled or deionized water Read the complete assay procedure before starting It is recommended that all calibrators and samples are applied on the plate as duplicates Itis necessary to use calibrators and the control in eachtestrun Mix all the reagents and samples well before use SPECIMEN DILUTION Dilute serum or plasma samples 1 to 10 50 pl 450 pl with the diluent buffer mix well STEPI Mix and pipette 100 yl of the blank solution BS the calibrators CAL1 CAL3 the control and diluted samples S1 S2 etc into the wells as duplicates see Figure 1 Cover the plate with the
63. os de arriba a abajo 5 a 6 veces y los tubos para suero se dejan a temperatura ambiente 20 a25 C para permitir que coagulen durante al menos 30 minutos Trasla coagulaci n el suero y el plasmase 43 42 1 USO PREVISTO El conjunto para pepsin geno I PGI es un an lisis de inmunoabsorci n enzim tica ELISA cuantitativo basado en microplacas que permite determinar la presencia del pepsin geno I humano en muestras de suero o plasma 2 ANTECEDENTESCL NICOS Esta prueba tiene como objetivo identificar a pacientes que sufren de gastritis atr fica avanzada en el cuerpo del est mago y que en consecuencia presentan un mayor riesgo de desarrollar c ncer g strico 1 2 El an lisis PG I S PGI P PG I para suero o plasma constituye una herramienta confiable para detectar pacientes con este tipo de gastritis 3 6 y ofrece una sensibilidad y una especificidad de 92 y 90 respectivamente El pepsin geno I PGI es una enzima precursora de la pepsina y se sintetiza mediante las c lulas principales y del cuello del cuerpo del est mago de las llamadas gl ndulas oxinticas de la mucosa g strica La mayor parte del PGI es secretada al lumen g strico sin embargo se puede encontrar una peque a cantidad en la sangre El nivel de S P PGI se correlaciona en forma confiable con el n mero de c lulas principales existentes en la mucosa del cuerpo del est mago Como consecuencia la p rdida de dichas c lulas produce una disminu
64. ouvrir la plaque d un film de plastique Incuber pendant 30 min 237 C LAVAGE Voirlaproc dure de lavage apresl etapel ETAPE III Homog n iser et distribuer 100 pl dela solution de substrat homog n is e dans chaque puits l aide d une pipette 8 canaux D clencher un minuteur apr s avoir distribu la solution de substrat dans la premiere barrette et laisser incuber pendant exactement 30 min a temp rature ambiante 20 25 C Eviter l exposition directe a la lumi re durant lincubation ETAPEIV Stopper la r action enzyme substrat en ajoutant 100 pl de solution d arr t dans chaque puits l aide d une pipette 8 canaux LECTURE Mesurer l absorbance 4450 nm dans les 30 minutes 10 RESULTATS 10 1 Valeurs du contr le qualit Les Bonnes Pratiques de Laboratoire requi rent l utilisation d un s rum de contr le appropri pour attester du bon d roulement de chaque test Le s rum de contr le est inclus dans le coffret ELISA PGI D es graphiques de contr le de qualit devront tre 35 conserv pour suivre les performances du contr le ou des m thodes statistiques devront tre utilis es pour analyser la valeur du contr le qui doit tre comprise dans l intervalle de confiance appropri tabli par chaque laboratoire 10 2 Calcul des r sultats Les r sultats du test peuvent tre analys s par une m thode manuelle a ou un syst me automatis b o l absorbancelue sera convertie en concentration
65. petas y boquillas desechables para proporcionar con precisi n 20a1000 pl Pipetas para proporcionar con precisi n 1 a 10 ml Pipeta de 8 canales que proporcione 100 pl Tubo graduado 1000 ml Mezclador Vortex para diluci n de muestras Tubos de ensayo para diluci n de muestras Lavador de microplacas Toallas de papel o papel absorbente Cron metro 45 separan de inmediato mediante centrifugaci n por ejemplo tubo de ensayo pl stico aceleraci n hasta 2000 G 10 a 15 minutos El suero y el plasma se pueden almacenar refrigerados 2 a 8 C Para una conservaci n prolongada las muestras se deben almacenar congeladas de preferencia a 70 C o como alternativa a 20 C Una vez descongeladas las muestras m zclelas cuidadosamente Evite el congelamiento y descongelamiento repetido de las muestras No se deben utilizar muestras demasiado hemolizadas lip micas o turbias Si pruebalos an lisis ELISA G astroPanel de Biohit anticuerpos IgG contra H dicobader pylori Pepsin geno I Pepsin geno II Gastrina 17 de la misma muestra consulte las instrucciones de uso de ELISA paraG astrina 17 de Biohit 6 CONTENIDO DEL CONJUNTO PREPARACI N DEL REACTIVO Y ESTABILIDAD DE LOSMATERIALESPROPORCIONADOS Los reactivos son suficientes para 96 pocillos Los reactivos de diferentes conjuntos no se deben mezclar 6 1 Microplaca Contenido tiras de 12 x 8 en trama recubiertas con anticuerpo IgG PGI antihumano monoclonal dealtaafin
66. pettivamente pari a 92 e 90 Il pepsinogeno I PGI un enzima precursore della pepsina ed sintetizzato dalle cellule adelomorfe e dalle cellule del collo del corpo gastrico dalle cosiddette ghiandole ossintiche della mucosa gastrica La maggior parte del PG I secreta nel lume gastrico ma una piccola quantit pu essere individuata nel sangue Il livello di S P PGI correlato in modo affidabile al numero di cellule adelomorfe presenti nellamucosa del corpo gastrico Di conseguenza la perdita di cellule adelomorfe rispecchiata in una riduzione lineare di S P PGI La perdita delle cellule adelomorfe un risultato della gastrite atrofica Per motivi non noti la gastrite atrofica comporta un aumento del rischio di tumore gastrico Nei pazienti affetti da gastrite atrofica avanzata a livello del corpo gastrico tale rischio di 5 volte maggiore e nei pazienti con pangastrite atrofica avanzata che interessa sia l antro che il corpo gastrico addirittura di 90 volte maggiore che nei soggetti con una mucosa gastrica normale 2 Lo screening con test S PGI di uomini fumatori di mezza et 50 69 anni in Finlandia ha rivelato che bassi livelli di S PGI lt 25 ug 1 sono presenti nel 9 8 degli uomini il 4 7 dei quali si rivelato affetto tramite esame endoscopico da tumore gastrico o lesioni precancerose 7 Risultati analoghi sono stati rilevati anche tramite studi precedenti 8 17 3 PRINCIPIO DELTEST Questo test E
67. pylori con gli stessi campioni fare riferimento alle istruzioni perl uso del kit Biohit G astrin 17 ELISA 6 CONTENUTO DEL KIT PREPARAZIONE DEI REAGENTI E STABILITA DEI MATERIALIFORNITI I reagenti sono sufficienti per 96 pozzetti Non miscelare mai reagenti di lotti di kit diversi 6 1 Micropiastra Contenuto 12 x 8 strisce con telaio ricoperte con PGI IgG anti umana monoclonale ad affinit elevata Preparazione pronta perl uso Stabilit stabile fino alla data di scadenza D opo l uso gettare le strisce 6 2 Concentrato di tampone di lavaggio x 10 Contenuto 120 ml di 10 x di concentrato di tampone di fosfato contenente Tween 20 e conservanti Preparazione diluire con acqua distillata 1 a 10 ad esempio 100 ml 900 ml e miscelare bene Stabilit la soluzione diluita stabile per due settimane se conservata in frigorifero 2 8 C 6 3 Tampone di diluizione Contenuto 100 ml di tampone di fosfato contenente albumina di siero bovina Tween 20 conservanti ed estratto di colorante rosso Preparazione pronto perl uso Stabilit stabile fino alla data di scadenza 6 4 Bianco Contenuto un flacone contenente 1 5 ml di tampone di fosfato basato su siero umano con conservanti Preparazione pronto perl uso Stabilit stabile fino alla data di scadenza 6 5 Calibratori Contenuto tre flaconi contenenti 1 5 ml di calibratori basati su siero umano con conservanti I calibratori hanno valori di PGI spec
68. r clinique du patient et toutes autres informations disponibles pour le m decin Les chantillons susceptibles d avoir une concentration en PGI sup rieure au plus fort des calibreurs devront tre dilu s davantage avant le test dilution finale 1 20 1 CARACTERISTIQUESDE PERFORMANCES R p tabilit La r p tabilit a t d termin e l aide de quatre chantillons de contr le Les r sultats ont t calcul s partir de 17 mesures effectu es au cours du m me test Echantillon Concentration PGI CV moyenne en pg 1 9 3 5 9 2 31 3 3 0 3 78 1 2 4 4 137 2 2 4 37
69. r gastric carsinoma among young adults Research group on prevention of gastric carsinoma among young adults Cancer 1994 73 2695 2702 15 Y oshihara M Sumii K Haruma K Kiyohira K Hattori N Kitadai Y Komoto K Tanka S Kajiyama G Correlation of ratio of serum papsinogen 1 and II with prevalence of gastric cancer and adenoma in Japanese subjects Am J Gastroenterol 1998 93 1090 1096 16 Farinati F Di Mario F Plebani M Cielo R Fanton MC Valiante F Masiero M D eBoni M Della LiberaG Burlin A Pepsinogen A Pepsinogen C or Pepsinogen A multiplied by gastrin in the diagnosis of gastric cancer Ital J G astroenterol 1991 23 194 206 17 Nomura AM Stemmermann GN Samloff IM Serum pepsinogen I as a predictor of stomach cancer Ann Intern Med 1980 93 537 540 18 Sipponen P Ranta P Helske T K ri inen I M ki T Linnala A Suovaniemi O Alanko A H rk nen M Serum levels of amidated gastrin 17 and pepsinogen I in atrophic gastritis an observational case control study Scand J G astroenterol 2002 37 785 791 66 4 The wells are washed and TMB substrate is added The substrate is oxygenized by the enzyme and ablue colored end productis produced 5 The enzyme reaction is terminated with stop solution The solution in the wells should turn yellow The intensity of the yellowish color developed is directly related to the PGI concentration of the sample 4 WARNINGSAND PRECAUTIONS Forin vitro diagnostic use CAUTION Handle s
70. ric cancer Scand G astroenterol 1991 186 117 123 5 Knight T Wyatt J Wilson A Greaves S Newell D Hengels K Corlett M Webb B Forman D Elder J Helicobacter pylori gastritis and serum pepsinogen levels in a healthy population development of a biomarker strategy for gastric atrohpy in high groups Br Cancer 1996 73 819 824 6 Borch K Axelsson CK Halgreen H D amkjaer Nielsen MD Ledin T Szesci PB The ratio of pepsinogen A to pepsinogen C a sensitive test for atrophic gastritis Scand J Gastroenterol 1989 24 870 876 7 Varis K Sipponen P Lax n F Samloff IM Huttunen JK Taylor PR Heinonen OB Albanes D Sande N Virtamo V H rk nen M Helsinki Gastritis Study Group Implications of serum pepsinogen I in early endoscopic diagnosis of gastric cancer and dysplasia Scand J G astroenterol 2000 35 950 956 8 MikiK Ichinose M Ishikawa KB Yahagi N Matsushima M K akei N Tsukada S Kido M Ishihama S Shimizu Y Suzuki T Kurokawa K Clinical application of serum pepsinogen I and II levels for mass screening to detect gastric cancer Jpn J Cancer Res 1993 84 1086 1090 9 Hattori Y Tashiro H Kawamoto T Kodama Y Sensitivity and specificity of mass screening for gastric cancer using the measurement of serum pepsinogens Jpn J Cancer Res 1995 86 1210 1215 10 Y oshihara M Sumii K Haruma K Kiyohira K Hattori N Tanka S Kajiyama G Shigenobu T The usefulness of gastric mass screening using serum pepsinogen levels comp
71. sa 27 Linearitat Mit einer Verd nnungsreihe von drei Seren mit Verd nnungspuffer wurde die Linearit t des Biohit Pepsingen I ELISA ermittelt Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle dargestellt Probe Verd nnungs Gemessen Erwartet Wiederfindung faktor g 1g 1 6 1 212 4 1 2 105 4 106 2 99 4 52 8 53 1 99 1 146 4 2 2 72 8 73 2 99 4 39 3 36 6 107 1 59 0 3 2 29 7 29 5 101 4 14 8 14 7 101 B AUSSTELLUNGSDATUM Pepsinogen I Testanleitung Version 01 April 1 2004 14 GARANTIE Der Hersteller haftet f r alle Sch den des einzelnen Produkts Produktsch den die nachweislich durch fehlerhafte Materialien oder fahrl ssige Arbeitsqualit t entstanden sind und einschliesslich der die die mechanische Funktion oder die Anwendung des Produkts verhindern Aber begrenzt auf Funktionen die in der Produktspezifikation des Herstellers definiert sind DIE GARANTIR ERLISCHT BEI SCHADEN DIE AUF UNSACHGEMASSE BEHANDLUNG MISSBRAUCH ZERST RUNG ODER AUF FALSCHE LAGERUNG ZUR CKZUF HREN SIND ODER DIE PRODUKTE AUSSERHALB IHRER SPEZIFIZIERTEN EINSCHRANKUNGEN UND ENTGEGEN DEN ANWEISUNGEN IN DER TESTANLEITUNG VERWENDET WERDEN Die Dauer dieser Garantie f r den Vertriebsh ndler ist in der Testanleitung des Produktes definiert und beginnt mit dem Versanddatum des relevanten Produktes durch den Hersteller Im Falle einer streitigen Interpretation gilt der englische Text Alle diagnostis
72. sin and is synthesized by the chief cells and neck cells of the gastric corpus from so called oxyntic glands of the gastric mucosa The major part of PGI is secreted into the gastric lumen but a small amount can be found in the blood The S P PGI level reliably correlates with the number of chief cells in the gastric corpus mucosa Correspondingly the loss of chief cells results in a linear decrease in S P PGI Theloss of chief cellsis on the otherhand aresult of atrophic gastritis For unknown reasons atrophic gastritis increases the risk of gastric cancer the risk being even 5 fold in patients with advanced atrophic gastritis in the corpus and even 90 fold in advanced atrophic pangastritis both antrum and corpus affected compared to the cancer risk in persons with normal gastric mucosa 2 Thescreening of middle aged 50 69 years smoking men in Finland with the S PGI test has revealed that alow S PG I level lt 25 pg 1 is detected in 9 8 of men of whom 4 7 revealed either a gastric cancer or precancerous lesion by endoscopy 7 Corresponding results have also been published in earlier studies 8 17 3 PRINCIPLE OF THE TEST This PGI ELISA is based on a sandwich enzyme immunoassay technique with a PGI specific capture antibody adsorbed on a microplate and a detection antibody labeled with horseradish peroxidase HRP The assay proceeds according to the following reactions 1 A monoclonal antibody specific to human PGI
73. ssetzung sollte vermieden werden 6 9 Stoppl sung Inhalt 15 m1 0 1 mol 1 Schwefels ure Vorbereitung gebrauchsfertig Haltbarkeit siehe aufgedrucktes V erfallsdatum 6 10 Abdeckfolien Vier K lebefolien zum A bdecken der Mikrotiterplatten w hrend der Inkubation 6 11 Testanleitung 7 ZUS TZLICH ERFORDERLICHESARBEITSMATERIAL Destilliertes oder entionisiertes Wasser Prazisionspipetten und W egwerfspitzen f r 5 1000 pl Pipetten fur 1 10 ml Kanalpipette f r 100 pl Messzylinder f r 1000 ml Vortexerzum Mischen der Verd nnungen Verd nnungsr hrchen Plattenwascher Fliesspapier Uhr Inkubator 37 C Plattenreader 450 nm Wasserbad 56 C Blutentnahmer hrchen f r Serum oder Plasma Eisbeh lter 21 8 LAGERUNG UND STABILIT T Der Pepsinogen I Test muss gek hlt 2 8 C gelagert werden Wird diese Temperatur eingehalten bleibt der Test bis zum Verfallsdatum der auf der Packung und jeder einzelnen Komponente aufgedruckt ist stabil Bitte den Test nicht einfrieren oder h heren Temperaturen ber 8 C aussetzen Die Substratl sung ist sehr lichtempfindlich Die Mikrotiterplatte und die einzelnen Streifen sollten nicht vor dem Erreichen der RT 20 25 C aus der Folienverpackung herausgenommen werden Die Streifen die nicht sofort verwendet werden m ssen wieder k hl bei 2 8 C gelagert werden Nach dem Verfallsdatum sollen die Reagenzien nicht mehr verwendet werden Die Reagenzien unterschiedlich
74. st erm glicht die Erkennung der fortgeschrittenen atrophischen G astritis im Magenkorpus Die Patienten die daran erkranken haben ein h heres Magenkrebsrisiko 1 2 Dieser Serum bzw Plasma PG I Test mit seiner Sensitivit t und Spezifit t von 92 und 90 bietet somit eine zuverl ssige Diagnose bei Patienten die an fortgeschrittenen atrophischen G astritis 3 6 erkrankt sind Das Pepsinogen I PG 1 ist die inaktive Vorstufe des Enzyms Pepsin und wird von den Hauptzellen den so genannten oxyntischen Dr sen der Magenschleimhaut produziert Dergr te Anteil des PG I wird in das Lumen ausgesch ttet aber eine kleine Menge kann auch im Serum gefunden werden Die S P PG I Menge korreliert zuverl ssig mit der Anzahl der Hauptzellen in der Magenschleimhaut des Korpus Der Verlust dieser Hauptzellen f hrt dementsprechend zu einer linearen Abnahme des S P PG I Dies wiederum ist das Ergebnis einer atrophischen G astritis Aus noch unbekannten Gr nden erh ht die atrophische G astritis das Magenkrebsrisiko Patienten mit fortgeschrittener G astritis im Korpus haben ein 5 fache h heres Risiko an Magenkrebs zu erkranken Bei fortgeschrittener atrophischer Pangastritis beide Antrum und Korpus sind betroffen erh ht sich das Magenkrebsrisiko um das 90 fache verglichen mit dem K rebsrisiko bei Personen mit gesunder Magenschleimhaut 2 Reihenuntersuchungen in Finnland der m nnlichen Raucher mittleren Alters 50 69 Jahre mit dem S PG I T
75. tement of Heath and Human Services Bethesda MD USA 1999 4th ed CD C NIH und Nr CDC 88 8395 bez glich Laborsicherheitsvorschriften sowie lokale oder nationale Regelungen Dieser Test enth lt Reagenzien die aus menschlichen Blutbestandteilen hergestellt wurden D as verwendete Material wurde auf Hepatitis B und C sowie HIV Antik rper getestet und als negativ befunden Dajedoch keine Testmethode die absolute Sicherheit geben kann sollten alle Vorsichtsmassnahmen im Umgang mit Blutderivaten beachtet werden Verwenden Sie bei Umgang mit Proben immer Einmalhandschuhe F r alle Pipettierschritte m ssen sichere Pipettierhilfen verwendet werden Niemals mit dem Mund pipettieren Lesen Sie die Testanleitung vor dem Ansatz des Tests sorgf ltig durch Alle Reagenzienbestandteile des Tests k nnen in den Ausguss entsorgt werden Danach mitreichlich Leitungswassernachsp len 5 SAMMLUNG UND HANDHABUNG DER PROBEN Der Patient sollte f r die Blutentnahme mind 10 Std n chtern sein Die Blutprobe sollte in ein Plastikr hrchen ohne Zus tze oder in ein EDTA Heparinplasmar hrchen entnommen werden Nach der Entnahme die Blutr hrchen 5 6 mal mischen F r die K oagulation d rfen die R hrchen nicht l nger als 30 Minuten bei RT 20 25 C stehen Die Serumproben nach dem G erinnen und die Plasmaproben sofort zentrifugieren z B Plastikr hrchen bei 2000 G 10 15 Minuten und danach in separate Plastikr hrchen berf hren und gek hlt be
76. ti errati Indicazione del deterioramento del kit I componenti liquidi non devono essere visibilmente torbidi e non devono contenere precipitazioni A 2 8 C il concentrato del tampone di lavaggio pu cristallizzarsi anche se parzialmente ma i cristalli si dissolvono tramite miscelazione a temperatura ambiente 20 25 C La soluzione di substrato deve essere incolore o di colore blu pallido Qualsiasi altro coloreindica un deterioramento della soluzione di substrato 9 PROCEDURA DELTEST OPERAZIONI PRELIMINARI Attendere che tutti i reagenti e la micropiastra raggiungano la temperatura ambiente 20 25 C Riscaldare l incubatore a 37 C D iluire il concentrato del tampone di lavaggio 1 a 10 ad esempio 100 ml 900 ml con acqua distillata o deionizzata Leggere la procedura del test per intero prima di iniziare Si consiglia di applicare sulla piastra come duplicati tutti i calibratori e i campioni E necessario utilizzare i calibratori e il controllo in tutte le sedute del test Miscelare bene tutti i reagenti e i campioni prima dell uso DILUIZIONE DEI CAMPIONI Diluire i campioni di plasma o siero 1 a 10 50 pl 450 pl con il tampone di diluente Miscelare bene FASEI Miscelare e pipettare 100 1 di bianco BS i calibratori CAL1 CAL3 il controllo e i campioni diluiti S1 S2 eccetera nei pozzetti come duplicati vedere la Figura 1 Coprire lapiastra con la copertura per incubazione Incubare per 60 minuti a37 C
77. tibilit La reproductibilit du test ELISA PGI Biohit a t d termin e avec quatre s rums de contr le Chaque s rum a t dos en double au cours de 6 tests Echantillon Moyenneglobale ug 1 CV 1 10 3 49 2 474 3 0 3 80 4 34 4 133 9 2 9 Sp cificit r action crois e La r action crois e avec le PGII a t test e avec 5 serums auxquels ont t ajout des concentrations de PGII soci t Z jusqu 200pg 1 Les r sultats du test ne montrent aucune augmentation ou diminution significative du signal m me avec une concentration en PG II de 200pg 1 PGII ajout PGI mesur D viation E chantillon gD gD 42 1 10 42 100 50 44 105 200 44 105 26 3 a 2 10 24 6 93 5 50 27 3 104 0 200 24 5 93 2 56 2 3 10 59 6 106 0 50 60 9 108 0 200 53 3 94 8 72 7 4 10 70 8 974 50 72 5 99 7 200 71 9 98 9 100 1 5 10 98 3 98 2 50 99 9 99 8 200 98 7 98 6 38 Figure 1 Plan de distribution 1 2 3 apes B CALI UNI as ce Jar Dj cars JT E Contr le Contr le F El El G E2 E2 H E3 E3 LAVAGE Laverles puits 3 fois avec 350 ul de solution de lavage dilu e 1 10 et taper mod r ment la plaque retourn e sur du papier absorbant propre a plusieurs reprises ETAPE II Homog n iser et distribuer 100 ul de solution de conjugu homog n is dans chaque puits de pr f rence a l aide d une pipette 8 canaux Rec
78. tilizando cuatro muestras de suero La concentraci n de PGI de estas muestras se midi como duplicados Muestra MediadePGI ug l CV 1 10 3 4 9 2 47 4 3 0 3 80 4 3 4 4 133 9 2 9 Especificidad reactividad cruzada A fin de probarla reacci n cruzada y lainterferencia por PG II atres muestras de suero se agreg PGII compa a Z en concentraciones de hasta 200 pg 1 La prueba no arroj aumentos ni reducciones importantes en la se al de las muestras con una concentraci n de PGII de200 pg 1 Abbildung 1 Pipettierschema PGI Agregado Muestra are agregado observado suela g Len muestra g D E 42 1 0 4 2 100 50 4 4 105 200 4 4 105 26 3 2 10 24 6 93 5 50 27 3 104 0 200 24 5 93 2 56 2 3 10 59 6 106 0 50 60 9 108 0 200 53 3 94 8 72 7 4 10 70 8 97 4 50 72 5 99 7 200 71 9 98 9 100 1 5 0 98 3 98 2 50 99 9 99 8 200 98 7 98 6 50 1 2 A IB B B SID 1 STD 1 C STD 2 STD 2 D STD 3 STD 3 E K K F PI PI G P2 P2 H P3 P3 WASCHSCHRITT Waschen Sie die Streifen mit 3x 350 pl der verd nnten Waschl sung Anschlie end wird die Platte behutsam auf Flie papier ausg eklopft ARBEITSSCHRITT II Pipettieren Sie 100 pl der gut gemischten Konjugatl sung in alle Vertiefungen vorzugsweise mit einer 8 Kanal Pipette Decken Sie die Platte wieder mit der Abdeckfolie ab und inkubieren Sie fiir 30 Minuten bei 37
79. tta per EDTA o eparina Le provette dei campioni devono essere miscelate immediatamente capovolgendole per 5 6 volte le provette di siero devono essere lasciate coagulare per un minimo di 30 minuti a temperatura ambiente 20 25 C Il siero dopo la coagulazione e il plasma immediatamente vengono separati tramite centrifugazione ad esempio provetta di plastica accelerazione fino a 2000 G 10 15 minuti Il siero e il plasma possono essere conservati in frigorifero 2 8 C Per poter conservare i campioni pi alungo si consiglia di congelarli preferibilmente a 70 C in alternativa a 20 C Dopo averli scongelati miscelare con attenzione i campioni Evitare di congelare e scongelare i campioni pi volte I campioni torbidi lipemici o emolizzati in modo grossolano non devono essere utilizzati 55 1 APPLICAZIONE CLINICA Il kit per pepsinogeno I PGI un dosaggio immunoassorbente quantitativo correlato basato su micropiastre ELISA per la determinazione del pepsinogeno I in campioni di siero o plasmaumano 2 BACKGROUND CLINICO Questo test viene utilizzato per identificare i pazienti affetti da gastrite atrofica avanzata nel corpo gastrico con conseguente aumento del rischio di tumore gastrico 1 2 1 dosaggio PGI su siero o plasma S PGI P PGI uno strumento affidabile per l individuazione dei pazienti con gastrite atrofica avanzata a livello del corpo gastrico 3 6 lasensibilita e la specificit del test sono ris
80. ubation 6 11 Notice d utilisation 7 MATERIEL NECESSAIRE MAISNON FOURNI Eau distill e ou d ionis e Micropipettes et pointes jetables pour delivrer avec pr cision des volumes de 20 a 1000 pl Pipettes pour d livrer avec pr cision des volumes de 1 10 ml Pipette 8 canaux pour d livrer 100 pl Eprouvette gradu e 1000 ml Agitateur de type Vortex Tubes aessai pour dilutions d chantillons Laveur de plaque de microtitration Papier absorbant Minuteur Incubateur 37 C Lecteur de plaque de microtitration 450nm Tubes de pr l vement plastiques pour s rum ou plasma Bac glace 33 8 CONSERVATION ET STABILITE Conserver tous les l ments du coffret au r frig rateur 2 8C D ans ces conditions ils sont stables jusqu la date de p remption imprim e sur l emballage ainsi que sur l tiquette des diff rents r actifs Ne pas congeler ou exposer les r actifs des temp ratures lev es ne pas les conserver plus de 8 C en dehors de leur utilisation La solution substrat est sensible la lumi re La plaque de microtitration ou les barrettes individuelles ne doivent pas tre retir es de l emballage aluminium avant d avoir atteint la temp rature ambiante 20 25 C Les barrettes non utilis es doivent tre remises dans l emballage qui sera soigneusement referm et conserv au frais Ne pas utiliser les r actifs apr s la date de p remption imprim e sur l tiquette Ne pas int

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