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HYDRAGEL 5 PROTEINURIE

1. HYDRAGEL 5 PROTEINURIE Ref 4115 2013 01 HYDRAGEL 5 PROTEINURIE 2013 01 ESPECIFICACIONES DE USO El kit HYDRAGEL 5 PROTEINURIE esta dise ado para la clasificaci n de proteinurias en orinas no concentradas El kit se utiliza junto con el instrumento semiautomatico HYDRASYS La electroforesis en geles de SDS agarosa tamponados neutralmente separa las proteinas urinarias segun su peso molecular y distingue claramente las proteinas de origen tubular y glomerular Los patrones electrofor ticos resultantes te idos con violeta acido son comparados visualmente con marcadores proteicos de peso molecular en la pista de referencia para identificar las proteinas urinarias individuales y clasificar de esta forma la proteinuria Cada gel de agarosa en el kit HYDRAGEL 5 PROTEINURIE esta disefiado para procesar 5 muestras Para Uso Diagn stico In Vitro NOTA En estas instrucciones el nombre HYDRASYS es usado para designar los sistemas semiautomaticos HYDRASYS e HYDRASYS 2 SEBIA PRINCIPIO DEL TEST En un exceso del detergente ani nico sodio dodecil sulfato SDS las prote nas se transforman en complejos SDS prote na En estos complejos la conformaci n nativa de las prote nas se ve alterada y todas adoptan la misma conformaci n y la misma carga negativa por unidad de masa Cuando tales complejos SDS proteina son sometidos a electroforesis en un medio con las propiedades de filtrado apropiadas como las de los geles HYDRAGEL
2. Current concepts in proteinuria Clin Chem 35 755 765 Westermeier R Electrophoresis in Practice A Guide to Theory and Practice VCH Publishers New York NY 1993 Umbreit A Wiedemann G 2000 Determination of urinary protein fractions A comparison with different electrophoretic methods and quantitatively determined protein concentrations Clinica Chimica Acta 297 163 172 Wendling A Proc dures de diagnostic ou de d pistage Justification et validit d un test de diagnostic ou de d pistage sensibilit sp cificit Impact Internat 1986 Sept 93 97 137 HYDRAGEL 5 PROTEINURIE 2013 01 SCHEMAS FIGURES Figure 1 Figure 2 Figure 3 138
3. umbral normal Los electroforetogramas fueron evaluados visualmente Las fracciones de prote na individuales fueron identificadas mediante su peso molecular Esto se determin a partir de una curva de calibraci n basada en la movilidad de marcadores de peso molecular Pharmacia Adem s las fracciones fueron semicuantificadas mediante evaluaci n visual de su intensidad por ejemplo banda d bil media y fuerte En t rminos de presencia ausencia de una nefropat a y su tipo la interpretaci n de los resultados de una valoraci n cuantitativa de prote nas QPA y la electroforesis de prote nas en SDS SDS EP fue id ntica en 83 casos 80 En 19 casos 18 ambos sistemas detectaron proteinuria pero difer an en su clasificaci n mayoritariamente por una subclase La SDS EP proporciona en un solo paso un patr n completo de las prote nas excretadas en la orina y algunas de ellas son detectadas por esta t cnica pero no por la QPA porque no ha sido utilizada para esta comparaci n como la lisozima Los resultados se resumen abajo QPA SDS EP No Note N N 21 20 2 id ntica interpretaci n T T 6 5 8 id ntica interpretaci n G G 11 10 6 id ntica interpretaci n M M 22 21 1 id ntica interpretaci n M T M T 12 11 5 id ntica interpretaci n M G M G 11 10 6 id ntica interpretaci n M M G 6 5 8 id ntica interpretaci n N M G o G 2 T M T M G o M 4 3 8 la proteina detectada mediante EP no
4. LA MIGRACI N 1 Encender el HYDRASYS 2 Sacar el gel de su envoltorio El gel puede colocarse encima de su caja cerrada 3 Absorber de manera suave y r pida el exceso de l quido de los pocillos con una tira de papel de filtro Centrar la tira de manera que est alineada con los pocillos 4 Aplicar cuidadosamente 5 ul de muestra de orina tratada en cada pocillo sin formar burbujas de aire Limpiar la punta de la pipeta antes de cada aplicaci n No tocar el fondo del pocillo durante la aplicaci n 5 Abrir la tapa del M dulo de Migraci n y elevar los soportes de los electrodos y los aplicadores ATENCI N Nunca cerrar la tapa cuando los soportes est n elevados 6 Seleccione el programa de migraci n 1 5 PROTEINURIE para un gel o el programa de migraci n 2 5 PROTEINURIE para dos geles en el men del instrumento lado izquierdo del teclado 7 Extraer las esponjas tamponadas de su envoltorio asirlas por los extremos de pl stico Engarzar los extremos de pl stico agujereados con las puntas met licas del soporte de los electrodos los extremos de pl stico deben quedar encarados al soporte Fig 1 33 HYDRAGEL 5 PROTEINURIE 2013 01 8 Dispense 120 pl de agua destilada o desionizada en la parte inferior del centro del marco impreso en la Placa de Control de la Temperatura del m dulo de migraci n al trabajar con un gel 6 2 veces 100 pl en la parte inferior de la mitad derecha y de la mitad izquierda al trabajar con
5. Sabot JF Bernard P Picq JP Adeleine P tude comparative de l immuno lectrophor se urinaire et de quatre index de s lectivit glom rulaire au cours des glom rulopathies chroniques 1985 Path Biol 33 23 26 Joachim GR Cameron JS Chwartz M Belker EL 1964 Selectivity of protein excretion in patients with the nephrotic syndrome J Clin Invest 43 2332 2346 Laemli U K Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 Nature 227 680 685 Le Bricon T Erlich D Bengoufa D Dussaucy M Garnier JP Bousquet B 1998 SDS agarose gel electrophoresis of urinary proteins Application to multiple myeloma Clin Chem 44 1991 1997 Le Carrer D 1990 Prot inuries Mise au point sur leur exploration biologique en 1990 L Eurobiologiste 190 395 405 Le Carrer D Chopin N 1994 Profil prot ique urinaire Proposition d un protocole d exploration biologique des prot inuries Revue francaise des laboratoires 269 29 37 Le Carrer D Nicolas A Ducasse L 1992 L analyse des prot inuries au laboratoire de biologie en 1992 Revue fran aise des laboratoires 225 41 47 Linstedt G Lindberg PA 1974 Loss of tubular proteinuria pattern during urine concentration with a commercial membrane filter cell Clin Chem Acta 56 125 126 Philipon C 1989 Prot ines urinaires Int r t clinique et interpr tation Technique et Biologie 6 239 249 Waller KV Ward KM Mahan JD Wismatt DK 1989
6. ha sido medida o esta por debajo del limite de detecci n del QPA M M G o M T G 9 8 6 detecci n de proteinas tubulares por EP menos sensible N T 1 1 detecci n del producto de degradaci n de la proteina mediante EP T M T 1 1 detecci n del producto de polimerizaci n de la proteina mediante EP Total 104 100 N normal T tubular G glomerular M mixta M T mixta principalmente tubular M G mixta principalmente glomerular Sensibilidad La sensibilidad de detecci n se determin a partir de la mayor diluci n seriada de soluciones de alb mina y lisozima que proporcionaban una banda distinguible a 15 mg l 35 PATRON DE MIGRACION Proteinas de origen tubular lt 70 kDa Albumin 70 kDa Proteinas de origen glomerular gt 70 kDa HYDRAGEL 5 PROTEINURIE 2013 01 82 Microglobulina 12 kDa Lisozima 15 kDa RBP proteina de union al retinol 21 kDa Cadenas ligeras Ibres 25 kDa 1 Microproteina 33 kDa Dimero de cadenas ligeras libres 50 kDa Transferrina 80 kDa Ig G 160 kDa Ig A 165 kDa Haptoglobinas 2 Macroglobulina Ig M 800 900 kDa Punto de aplicacion 36 HYDRAGEL 5 PROTEINURIE 2013 01 BIBLIOGRAPHIE BIBLIOGRAPHY 10 11 12 13 14 15 Cameron JS 1987 The nephrotic syndrome Am J Kidney Dis 10 157 171 Chopin N 1991 Etude de la prot inurie Inf Tech Biol 1 23 28 Cohen R Fran ois B
7. ml se diluye hasta 100 litros con agua destilada o desionizada Es conveniente diluir s lo 5 ml de la soluci n stock hasta 5 litros el volumen del contenedor de la soluci n decolorante Despu s de la diluci n la soluci n decolorante contiene una soluci n cida pH 2 Uso Para decolorar esto es la eliminaci n del exceso de tinci n y la coloraci n de fondo de los geles y para enjuagar la c mara de tinci n despu s de la limpieza con soluci n de lavado Para neutralizar la acidez del decolorante introduzca dentro del contenedor de desechos vac o 15 ml de sosa al 50 soluci n comercial Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar la soluci n decolorante stock a temperatura ambiente o refrigerada Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial La soluci n decolorante de trabajo es estable durante una semana a temperatura ambiente en una botella cerrada No a adir azida s dica Desechar la soluci n decolorante de trabajo si cambia su aspecto por ejemplo se vuelve turbia debido a contaminaci n microbiana Para evitar la proliferaci n microbiana en la soluci n decolorante diluida que se vaya a almacenar durante m s de una semana a ada 5 uL dL de ProClin 300 El decolorante diluido al que se ha a adido ProClin es estable en un contenedor cerrado a temperatura ambiente o en la nevera hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial
8. todas las etapas de la migraci n II PUESTA EN MARCHA DEL PROCESADO DEL GEL 1 Abrir la tapa del m dulo de migraci n 2 Elevar ambos soportes extraer las esponjas tamponadas por sus extremos de pl stico y desechar 3 Extraer el gel para su procesado posterior 4 Despu s de cada uso limpiar los electrodos y la superficie de control de temperatura con un pa uelo de papel suave humedecido despu s de lo cual puede iniciarse una nueva migraci n Abrir el soporte del Gel Colocar el gel h medo con el lado de agarosa hacia arriba en los orificios de las dos varillas y cerrar el soporte Comprobar que el gel est correctamente colocado dentro del soporte Fig 3 IMPORTANTE Para la coloraci n de uno o dos geles HYDRAGEL 5 PROTEINURIE en el HYDRASYS 2 use el soporte de gel universal HYDRASYS SEBIA referencia n 1278 6 Colocar el soporte del gel dentro del M dulo de Procesado Tinci n IMPORTANTE Antes de iniciar el programa de procesado tinci n del gel comprobar los siguiente el contenedor de colorante contiene 300 ml de colorante el contenedor de decolorante contiene al menos 1 litro de soluci n decolorante el contenedor de la soluci n de almacenamiento contiene 300 ml de soluci n de almacenamiento el contenedor de deshechos est vac o Para conocer en qu posiciones conectar los reactivos consultar la informaci n que aparece en la pantalla del instrumento escoger la tecla VER CANALES IMPORTA
9. 2 geles Colocar el gel con el lado de agarosa hacia arriba con su borde inferior en contacto con el tope inferior del marco serigrafiado Fig 2 Aplicar el gel en la superficie haci ndolo contactar con el agua Fig 2 Asegurarse de que no haya burbujas de aire de que el agua est extendida bajo toda la superficie del gel y de que el gel est alineado con el marco serigrafiado 9 Devolver ambos soportes a su posici n original En esta posici n as esponjas tamponadas no tocan el gel NO FORZAR LOS SOPORTES HACIA ABAJO 10 Cerrar la tapa del m dulo de migraci n 11 Iniciar el procedimiento inmediatamente presionando la tecla START flecha verde del lado izquierdo del teclado IMPORTANTE Asegurarse de que la toma de aire situada en el lado derecho del instrumento no est bloqueada MIGRACI N DESCRIPCI N DE LAS ETAPAS AUTOM TICAS Difusi n de las muestras en el gel durante 10 minutos Los dos soportes descienden con lo cual las esponjas tamponadas contactan con la superficie del gel La migraci n se realiza a potencia constante de 10 W para un gel o a potencia constante de 20 W para dos geles a 20 C controlados por efecto Peltier hasta que se hayan acumulado 60 Vh durante unos 15 minutos El soporte de los electrodos se eleva para desconectar los electrodos Un pitido audible indica que la tapa del m dulo de migraci n se desbloquea NOTA La tapa del m dulo de migraci n permanece cerrada durante
10. 5 PROTEINURIE que contienen una elevada concentraci n de agarosa se separan seg n su peso molecular En los geles HYDRAGEL 5 PROTEINURIE las prote nas individuales de origen tubular esto es con un peso molecular lt 65 70 kDa y de origen glomerular esto es gt 65 70 kDa son separadas claramente Por lo tanto no s lo se puede detectar la proteinuria sino que tambi n puede clasificarse seg n las prote nas que se detecten por ejemplo glomerular tubular y mixta Los par metros del procedimiento y la sensibilidad de la tinci n con violeta cido permiten la detecci n de prote nas sin ninguna concentraci n previa de la orina El nivel de detecci n m nimo est alrededor de 15 mg l por fracci n REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS EN EL KIT HYDRAGEL 5 PROTEINURIE ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad ART CULO PN 4115 Geles de Agarosa listos para usar 10 geles Esponjas Tamponadas listas para usar 10 bolsas de 2 Colorante Violeta cido soluci n stock 1 vial 75 ml Diluyente listo para usar 1 vial 1 ml Tiras de papel de Filtro 1 bolsa de 10 PARA OBTENER RESULTADOS PTIMOS Los elementos de un mismo kit deben utilizarse conjuntamente y seg n las instrucciones incluidas LEER ATENTAMENTE LAS INSTRUCCIONES 1 GELES DE AGAROSA Preparaci n Los geles de agarosa est n listos para usar Cada gel contiene agarosa tamp n pH 7 0 0 5 componentes inocuos a las conc
11. NTE No olvidar bloquear los canales no utilizados 7 Seleccionar el programa de tinci n PROTEINURIE en el men del instrumento e iniciar el procedimiento presionando la tecla START flecha verde situada en el lado derecho del teclado a Durante las etapas de tinci n decoloraci n y secado el compartimento permanece bloqueado Despu s de la etapa de enfriamiento un pitido audible indica que el compartimento se desbloquea la ventilaci n se mantiene hasta que se saca el soporte del gel lll FINALIZACI N DEL PROCESADO DEL GEL 1 Retirar el soporte del gel del compartimento abrirlo y sacar el gel seco 2 Sies necesario limpiar el respaldo el lado de soporte de pl stico del gel seco con un papel suave y h medo CONTROL DE CALIDAD Se aconseja incluir un control de peso molecular valorado en cada procesado de muestras RESULTADOS Interpretaci n La interpretaci n es cualitativa Para ayudas en la interpretaci n consultar la BIBLIOGRAF A Proteinuria fisiol gica Es d bil generalmente inferior a 120 mg 24 h y no hay diferencias significativas entre hombres y mujeres La prote na principal es la alb mina asociada con trazas de transferrina e inmunoglobulinas Una proteinuria superior a 120 mg 24 h debe ser considerada como patol gica Una proteinuria positiva gt 120 mg 24 horas debe ser examinada con m s detalle mediante un an lisis cualitativo de las prote nas eliminadas La proteinuria glomeru
12. ar si cambia su aspecto por ejemplo se vuelve turbia debido a contaminaci n microbiana NOTAS Las pruebas realizadas durante la validaci n de los reactivos muestran que para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a reconstituir una variaci n del volumen final de un 5 no tiene ning n efecto adverso en el an lisis El agua destilada o desionizada usada para la reconstituci n de las soluciones debe estar exenta de contaminaci n bacteriana o f ngica use un filtro de 0 22 um y debe tener una resistividad superior a 10 Megohms x cm EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 1 Sistema HYDRASYS SEBIA HYDRASYS 2 SCAN PN 1200 HYDRASYS 2 PN 1201 HYDRASYS 2 SCAN FOCUSING PN 1202 HYDRASYS 2 FOCUSING PN 1203 HYDRASYS PN 1210 o PN 1211 o HYDRASYS FOCUSING PN 1212 Kit de Contenedores suministrado con el HYDRASYS Soporte de gel universal HYDRASYS para la coloraci n de geles peque os SEBIA referencia n 1278 en HYDRASYS e HYDRASYS 2 Pipetas 5 pl 20 pl y 200 ul Control de Masa Molecular SEBIA PN 4781 ns D MUESTRAS PARA ANALISIS Extracci n y almacenamiento de muestras El an lisis se realiza con orina fresca recogida durante 24 horas Si es necesario almacenar las muestras entre 2 y 8 C durante una semana Para per odos de almacenamiento m s prolongados almacene las muestras congeladas son estables durante un mes al menos Congelar orina con HEPES 0 1 M pH 6 75 y azida s dica 0 2 g
13. de decolorante 3 SOLUCI N DE LAVADO HYDRASYS Preparaci n Cada vial de la Soluci n de Lavado HYDRASYS stock SEBIA PN 4541 10 viales de 80 ml se diluye hasta 5 litros con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n de lavado contiene tamp n pH 8 7 0 5 Uso Sirve para limpiar el Compartimento de Tinci n del HYDRASYS Usar peri dicamente por ejemplo si el instrumento se utiliza diariamente lavar el compartimento de tinci n semanalmente Ver la hoja de instrucciones para conocer el modo de empleo 32 HYDRAGEL 5 PROTEINURIE 2013 01 Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar las soluciones de lavado stock y de trabajo en contenedores cerrados a temperatura ambiente o refrigeradas Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial Desechar la soluci n de lavado de trabajo si cambia su aspecto por ejemplo se vuelve turbia debido a contaminaci n microbiana 4 SOLUCION DE ALMACENAMIENTO Preparaci n Preparar una soluci n de glicerina al 15 con agua destilada o desionizada vol vol Uso Para tratar los geles con el fin de evitar que se encojan y se rompan durante la etapa de secado final Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar la soluci n de almacenamiento temperatura ambiente 15 a 30 C o refrigerada 2 a 8 C en una botella cerrada Se puede utilizar la misma soluci n de almacenamiento para 3 geles Desech
14. enamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar las esponjas a temperatura ambiente Deben ser conservadas horizontalmente en su bolsa protectora la flecha situada en la parte frontal del kit debe apuntar hacia arriba Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en su bolsa protectora NO LAS CONGELE Deseche las esponjas tamponadas si la bolsa est abierta o si las esponjas est n secas 31 INSTRUCCIONES SEBIA Espa ol HYDRAGEL 5 PROTEINURIE 2013 01 3 COLORANTE VIOLETA ACIDO Preparacion El vial del colorante violeta cido concentrado debe completarse hasta 300 mL con agua destilada o desionizada Despu s de la diluci n la soluci n colorante contiene soluci n cida pH 2 violeta cido etil n glicol componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para la tinci n de geles con separaci n electrofor tica de prote nas IMPORTANTE El colorante est destinado para la coloraci n de 10 geles Cambie el colorante despu s de su utilizaci n en 10 coloraciones Almacenamiento estabilidad y se ales deterioro Almacenar las soluciones stock y de trabajo del colorante temperatura ambiente o refrigeradas en contenedores cerrados para evitar la evaporaci n La soluci n stock del colorante es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial La soluci n de trabajo del colorante es estable durante 6 me
15. entraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Medio de soporte para la electroforesis de prote nas urinarias Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar los geles en posici n horizontal en sus recipientes protectores originales a temperatura ambiente 15 a 30 C La flecha situada en la cara frontal de la caja del kit debe apuntar hacia arriba NO REFRIGERAR NI CONGELAR Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas de sus recipientes Evitar el almacenaje en un lugar cercano a una ventana o a una fuente de calor Evitar variaciones de temperatura importantes durante el almacenamiento Desechar el gel cuando i haya cristales o precipitados en la superficie del gel o su textura sea muy blanda consecuencias de la congelaci n del gel o por haberlo conservado a una temperatura fr a ii se observe crecimiento bacteriano o f ngico iii haya una cantidad de l quido excesiva en la caja del gel como resultado de la exudaci n del tamp n debida a un almacenamiento inadecuado 2 ESPONJAS TAMPONADAS Preparaci n Las esponjas tamponadas est n listas para usar Cada esponja tamponada contiene tamp n pH 7 0 0 5 componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Las esponjas tamponadas funcionan como reservorio del tamp n de electroforesis y aseguran el contacto entre el gel y los electrodos Almac
16. l mejora la estabilidad del almacenaje IMPORTANTE No utilizar cido b rico como conservante Las muestras descongeladas pueden dar lugar a ligeras marcas de aplicaci n debidas a la desnaturalizaci n de prote nas Preparaci n de las muestras Pipetear 20 pl de diluyente esta soluci n es viscosa asegurarse de que no se formen burbujas de aire durante el pipeteo Dispensarlo en el fondo de un microtubo asegurarse de que el l quido viscoso no se adhiera a la pared del microtubo A adir 80 yl de orina Agitar en el vortex durante unos 5 segundos Si la proteinuria es gt 2 g l diluir la muestra con salina para obtener alrededor de 2 g l de prote nas Seguir entonces con el procedimiento habitual NOTA En caso de orinas turbias concentradas o no se recomienda eliminar las part culas centrifugando las muestras durante 10 minutos a 3000 rpm o por filtraci n en un filtro de 0 45 um para obtener una buena difusi n PROCEDIMIENTO El sistema HYDRASYS es un instrumento semiautom tico multiparam trico Las etapas autom ticas incluyen el procesado de los geles de agarosa HYDRAGEL en la secuencia siguiente migraci n electrofor tica secado tinci n decoloraci n y secado final Las etapas manuales incluyen el manejo de las muestras y los geles la aplicaci n de la muestra y la puesta en marcha del instrumento para la operaci n LEER CUIDADOSAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL HYDRASYS HYDRASYS 2 I PUESTA EN MARCHA DE
17. lar est definida por prote nas con un peso molecular gt 65 70 kDa por ejemplo alb mina transferrina Ig G localizadas entre el punto de aplicaci n de la muestra y la fracci n de alb mina En estos casos la alb mina es la fracci n principal La proteinuria tubular est definida por prote nas con un peso molecular lt 65 70 kDa por ejemplo a 1 microglobulina cadenas ligeras libres monoclonales o policlonales 8 2 microglobulina RBP prote na de uni n al retinol lisozima localizadas entre la fracci n de alb mina y el lado an dico del gel En estos casos la alb mina es la fracci n menor Adem s de mon meros 25 kDa puede haber dimeros 50 kDa y o formas m s polimerizadas de cadenas ligeras libres Raras veces s lo se observa una nica banda de cadenas ligeras polimerizadas Una identificaci n mediante inmunofijaci n kits HYDRAGEL 1 2 4 BENCE JONES SEBIA PN 4321 4322 4324 es indispensable para diferenciar las cadenas ligeras libres policlonales de las cadenas ligeras libres monoclonales Para confirmar la presencia de cadenas ligeras en una banda que se sospecha que es un pol mero la muestra deber a ser tratada con un agente reductor por ejemplo B mercaptoetanol para despolimerizar las cadenas ligeras y la electroforesis deber a ser respetada A adir 5 ul de B Mercaptoetanol previamente diluido 10 veces con agua destilada o desionizada a 100 pl de orina mezclar bien y a adir el diluyente como se ha descrit
18. o previamente ver Preparaci n de las muestras La proteinuria mixta est definida por la presencia de prote nas tubulares y glomerulares 34 HYDRAGEL 5 PROTEINURIE 2013 01 Limitaciones Las muestras congeladas y las descongeladas pueden dar lugar a ligeras marcas de aplicaci n a causa de la desnaturalizaci n de prote nas Teniendo en cuenta los principios anal ticos de las t cnicas actuales principios de la electroforesis de zona resoluci n y sensibilidad no puede darse ninguna garant a respecto a la detecci n de la totalidad de todos los componente monoclonales Resoluci n de problemas Llamar al Servicio de Atenci n T cnica del distribuidor cuando la prueba no funcione pese a haber seguido cuidadosamente las instrucciones para la preparaci n y almacenamiento de los materiales y para el procedimiento Las hojas de seguridad de los diferentes reactivos del kit as como las informaciones relativas a la eliminaci n de los desechos est n disponibles en el Servicio de Asistencia T cnica de su distribuidor CARACTER STICAS T CNICAS Todos los electroforetogramas fueron evaluados visualmente Reproducibilidad Se utilizaron muestras de orina que presentaban proteinuria tubular glomerular y mixta Se aplic un control de peso molecular Pharmacia en una pista de cada gel Intra geles Las tres muestras fueron aplicadas cada una en las cuatro pistas de un nico gel Inter geles Se aplicaron cuatro muestra
19. s diferentes en cada uno de los 10 geles de un mismo lote Inter lotes Se aplicaron cuatro muestras diferentes en las cuatro pistas de un nico gel cada uno procedente de tres lotes diferentes No hubo diferencias detectables visualmente entre las repeticiones Exactitud Se utilizaron especimenes de orina de hospital n 90 y orinas de adultos sanos n 14 Las prote nas urinarias escogidas como indicadores del tipo de nefropatias alfa 1 microglobulina beta 2 microglobulina cadenas ligeras kappa libres y unidas y cadenas ligeras lambda libres y unidas para el da o tubular e Ig G alb mina y transferrina para el da o glomerular fueron valoradas cuantitativamente cada una en laboratorios cl nicos de hospitales mediante procedimientos de inmunoensayo nefelometr a de velocidad sistema Beckman Array o inmunoenzim ticamente sistema Abbot IMX Los an lisis se realizaron con muestras de orina frescas Las muestras para el an lisis electrofor tico ciego fueron refrigeradas y utilizadas durante los cuatro d as siguientes a la obtenci n de las mismas Los resultados de las valoraciones cuantitativas de las prote nas fueron interpretados para cada prote na individual en t rminos de gravedad del da o tubular glomerular o mixto mixta mixta principalmente tubular o mixta principalmente glomerular desde ausencia de da o el valor de la prote na estaba por debajo de o en el valor umbral normal hasta da o serio gt 5 veces el valor
20. ses 4 DILUYENTE Preparaci n El diluyente est listo para usar Contiene tamp n pH 7 0 0 5 azul de bromofenol componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Para el tratamiento de las muestras de orina El azul de bromofenol act a como marcador de aplicaci n y migraci n Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar el diluyente a temperatura ambiente Es estable hasta la O caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial El diluyente debe estar exento de precipitados 5 PAPELES DE FILTRO Uso Papeles de filtro finos absorbentes precortados de un solo uso para secar el exceso de humedad de la superficie del gel antes de la aplicaci n de la muestra REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS ATENCI N Ver las fichas de datos de seguridad 1 SALINA Preparaci n Preparar una soluci n de NaCl 0 15 M 9 g l con agua destilada o desionizada Uso Para diluir las muestras de orina con una concentraci n de prote nas gt 2 g l Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacenar a temperatura ambiente o refrigerada Desechar despu s de 3 meses o si cambia su aspecto por ejemplo se vuelve turbia debido a contaminaci n microbiana Para per odos de almacenaje m s prolongados a adir azida s dica 1 g l 2 SOLUCI N DECOLORANTE Preparaci n Cada vial de la Soluci n Decolorante stock SEBIA PN 4540 10 viales de 100

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