Manual de Uso
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1. Ensayo r pido en casete para la detecci n del Virus Respiratorio Sincitial en muestras nasofar ngeas Ref 5049 1 USO AL QUE SE DESTINA La prueba VRSTOP OPTIMA es un ensayo inmunocromatogr fico para la detecci n cualitativa de ant genos de RSV en torundas nasales muestras de lavados rinofar ngeos y aspirados nasales 2 INTRODUCCI N El Virus Respiratorio Sincitial RSV es la causa m s com n de bronquiolitis y neumon as pedi tricas y sobre todo en ni os con menos de 1 a o La enfermedad aparece frecuentemente con fiebre catarro de nariz tos y a veces respiraci n dificultosa Pueden aparecer afecciones severas del tracto respiratorio inferior a cualquier edad especialmente en edades avanzadas o en casos con compromiso de los sistemas cardiaco pulmonar o inmune RSV se propaga en las secreciones respiratorias a trav s de contactos estrechos con personas infectadas o contacto con superficies u objetos contaminados 3 PRINCIPIO DEL ENSAYO El VRSTOP MA cs un ensayo inmunocromatogr fico cualitativo en casete para la determinaci n de RSV en muestras nasales La membrana est pre tapizada con anticuerpos monoclonales de rat n frente a ant genos virales en la regi n de la banda test Durante el ensayo la muestra puede reaccionar con el conjugado coloreado Anticuerpos monoclonales de rat n anti RSV unidos a microesferas rojas los cuales est n pre desecados en el dispositivo ensayo La mezcla entonces mig2. ADOS Ver ilustraci n inferior A adir 5 o 6 gotas Q A y t l AR Zona Zona de de Control Resultados 1 2 3 4 A adir 6 A adir 3 Mezclar la gotas del gotas del soluci n Leer a los 10 minutos aspirado Reactivo Al menos 10 nasal B veces INTERPRETACI N DE RESULTADOS Ver ilustraci n inferior VERDE Hf a ROJO ROJO NO V LIDO RSV RSV NO NEGATIVO POSITIVO VALIDO RSV NEGATIVO Solo aparece una banda Verde en la ventana central en la zona marcada con la letra C l nea Control RSV POSITIVO Adem s de la banda Verde de control aparece una banda Roja L nea test RSV en la zona marcada con la letra T l neas de resultados NO V LIDO La ausencia total de banda Verde de control invalida la aparici n o no de la l nea de resultados Roja Un volumen insuficiente de muestra procedimiento t cnico incorrecto o deterioro de los reactivos son los motivos mas habituales del fallo de la l nea control Revisar el procedimiento y repetir el ensayo con un dispositivo nuevo Si persiste el problema suspenda el uso del kit y contacte con su distribuidor local 9 NOTAS A LA INTERPRETACI N DE RESULTADOS La intensidad de la banda coloreada Roja en la zona de resultados T puede variar dependiendo de la concentraci n de ant geno en la muestra Sin embargo ni la cantidad ni la tasa de variaci n de ant genos se puede determinar con este ensayo cuali
3. CAS DE LA PRUEBA Sensibilidad Se analizaron diferentes diluciones de extractos de cultivo viral directamente con diluyente de muestra o en muestras nasales negativas de acuerdo con las instrucciones del kit La detecci n de RSV presenta un 95 de concordancia en sensibilidad con otros ensayos r pidos del mercado El l mite de detecci n del ensayo es de 50 ng ml Especificidad El uso de anticuerpos monoclonales de rat n en la elaboraci n del ensayo VRSTOP OMA asegura un alto grado de especificidad 99 en la detecci n de dichos ant genos en comparaci n con otros ensayos r pidos del mercado Reactividad Cruzada Se realiz una evaluaci n para determinar la reactividad cruzada del dispositivo VRSTOP PMA no existiendo reacci n con pat genos respiratorios habituales Virus Influenza A y B Adenovirus respiratorio otros organismos ni sustancias presentes ocasionalmente en muestras nasofar ngeas 13 ALMACENAJE Y ESTABILIDAD Almacenar en su envase en la bolsa sellada entre 2 y 30 C El ensayo es estable hasta la fecha de caducidad impresa en la bolsita sellada El test debe permanecer en la bolsa hasta su uso El dispositivo debe utilizarse dentro de las 2 horas siguientes a la apertura de su envase No congelar El kit se puede conservar y transportar hasta a 45 C durante 5 d as sin que se alteren sus caracter sticas ni su vida media 14 PRECAUCIONES Solamente para uso profesional de diagn stico i
4. mL sta saldr por el lado opuesto Inclinar y girar el irrigador de lado a lado y de arriba abajo dirigiendo el flujo de la soluci n en todas direcciones de la cavidad nasal Recoger el lavado en un contenedor de muestras limpio ladear la cabeza hacia delante y permitir que la soluci n con moco salga fuera de la fosa Manual de Uso VRSTOP OPTIMA Y al contenedor de muestra Repetir la recogida de moco de la otra fosa y a adirla al mismo contenedor En ni os Utilizar un aspirador o jeringa nasal para introducir la soluci n salina en una fosa nasal inclinando la cabeza del ni o Aspirar la mezcla de moco soluci n salina con el aspirador y transferirla a un contenedor limpio Repetir la actuaci n en la otra fosa y transferir el l quido al mismo contenedor de muestras Las muestras se deben procesar lo antes posible despu s de su recogida Las muestras se pueden conservar en nevera 2 4 C durante 8 horas antes de su an lisis 7 PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO Llevar los casetes escobillones y controles a temperatura ambiente 15 30C previamente a la prueba No abrir la envoltura hasta estar listos para la realizaci n del ensayo Llevar solamente a temperatura ambiente el n mero de dispositivos necesarios para el an lisis antes de abrirlos Procedimiento A utilizando muestras de torundas nasales 1 A adir 15 gotas 1 de Reactivo B e inmediatamente colocar el escobill n en el tubo 2 Mezclar la soluci n rotando la
5. n vitro No utilizar despu s de la fecha de caducidad Todas las muestras se deben considerar potencialmente peligrosas y manipular igualmente como portadoras de agentes infecciosos Los dispositivos y restos del ensayo se deben desechar en un contenedor de bioseguridad apropiado despu s de la prueba 15 BIBLIOGRAF A 1 ANN R FALSEY and EDWARD E WALSH Respiratory Syncytial Infection in Adults Clinical Microbiology Reviews July 2000 Vol 13 No 3 p 371 384 2 DIANE C HALSTEAD SANDRA TODD and GALE FRITCH Evaluation of Five Methods for Respiratory Syncytial Virus Detection Journal of Clinical Microbiology May 1990 Vol 28 No 5 p 1021 1025 Atenci n ver Pruebas manual de uso por kit Diagn stico In vitro MIER Version 1 07 09 2012 Directive 98 79 CE N mero de referencia en cat logo ALLDIAG 5 rue Ettor Bugatti CS 28006 67038 STRASBOURG Cedex FRANCE T l 03 68 78 80 98 Fax 03 88 787678 www alldiag com infoP alldiag com sl Fabriquant
6. ra a trav s de la membrana por capilaridad Como la muestra fluye por de la membrana las part culas coloreadas migran tambi n En caso de un resultado positivo los anticuerpos espec ficos presentes en la membrana capturar n el conjugado coloreado La mezcla contin a movi ndose a trav s de la membrana hasta los anticuerpos inmovilizados situados en la zona de la banda control donde siempre aparecer una banda coloreada VERDE La presencia de esta banda VERDE sirve como 1 verificaci n de volumen de muestra suficiente 2 que se ha obtenido un flujo adecuado y 3 control interno de los reactivos 4 MATERIALES SUMINISTRADOS 10 Casetes VRSTOP OP UIMA 1 Frasco de reactivo B diluyente de muestras 10 Tubos de ensayo 10 Escobillones est riles rayon 10 Pipetas desechables 1 Manual de instrucciones 5 MATERIAL NECESARIO NO PROVISTO Guantes desechables Cron metro avisador 6 RECOGIDA Y PREPARACI N DE MUESTRAS Muestras de Torunda nasal Recoger la muestra con un escobill n est ril de una fosa nasal Insertar la torunda aproximadamente 3 cm en la fosa rotando contra la pared nasal Procesar el escobill n lo antes posible despu s de recogida la muestra Las muestras se pueden conservar en nevera 2 4 C durante 8 horas antes de su an lisis Muestras de Aspirados o Lavados nasales En adultos Emplazar el irrigador en la nariz Dejar que la soluci n salina est ril entre en la cavidad nasal 2 5
7. tativo 10 CONTROL DE CALIDAD El ensayo incluye controles internos del procedimiento La aparici n de una l nea Verde en la zona control C es un control interno Este confirma la existencia de volumen suficiente de muestra as como de un correcto procedimiento t cnico El kit no incluye control externo Se recomienda el uso de un control por ejemplo sobre cada nuevo lote o cada nuevo env o Cada laboratorio deber asegurarse una apropiada planificaci n de realizaci n de controles 11 LIMITACIONES El ensayo suministra un diagn stico presuntivo de infecciones respiratorias por RSV Un diagn stico confirmado de infecci n solamente debe realizarse por un m dico despu s de haber evaluado todos los datos cl nicos y de laboratorio El ensayo VRSTOP 9P MA debe utilizarse solo con torundas nasales o muestras de lavados y aspirados nasales El uso de escobillones con tomas de otros sitios o el uso de otras muestras como saliva esputos u orina no se ha estudiado La calidad de los resultados depende de la calidad de las muestras Se deben utilizar muestras nasales adecuadas Si la muestra no es adecuada o la concentraci n antig nica est por debajo de la sensibilidad del ensayo se pueden obtener resultados falsamente negativos Si el ensayo no fluyese debido a la existencia de moco dispensar una gota de diluyente de muestra hasta que se vea que el l quido circula hacia la zona de reacci n 12 CARACTER STI
8. torunda fuertemente contra el interior del tubo al menos 10 veces Se obtendr n resultados ptimos si la muestra se extrae vigorosamente en la soluci n 2 Extraer tanto l quido como sea posible del escobill n escurriendo en las paredes del tubo hasta que est seco Desechar la torunda 3 Extraer el dispositivo VRSTOP OPTIMA de su envase en el momento de utilizarlo 4 Situar el dispositivo en una superficie plana Utilizar una pipeta y un dispositivo diferente para cada muestra o control Dispensar 5 o 6 gotas o 200 uL de la muestra elu da en la ventana circular marcada con una flecha 3 5 Leer el resultado a los 10 minutos A adir 4 gotas Zona Zona de Control de Resultados 1 2 3 A adir 15 gotas Colocar la torunda en el de Reactivo B Tubo y rotarla 10 veces Leer a los 10 minutos Procedimiento B utilizando aspirados o lavados nasales 1 A adir 6 gotas 450 ul 1 del aspirado o lavado nasal con una pipeta y 3 gotas 2 de Reactivo B en un tubo de ensayo Extraer el dispositivo VRSTOP OPTIMA de su envase en el momento de utilizarlo Situar el dispositivo en una superficie plana 3 Mezclar la soluci n con la pipeta al menos 10 veces Se obtienen resultados ptimos cuando la muestra se extrae en rgicamente en la soluci n 3 4 Dispensar 5 o 6 gotas o 200 uL de la muestra eluida en la ventana circular marcada con una flecha 4 5 Leer el resultado a los 10 minutos 8 INTERPRETACI N DE RESULT
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