3142-U-dsDNA-G 30-30-30.indd
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1. ns ensayo 1 interne ayo gt Muestra Media Muestra Media N IU ml a N IU ml a Ti 3000 at 2 1850 24 10 5 Calibraci n EI eguipo AESKULISA dsDNA G est calibrado contra WHO 80 Los resultados se expresan en IU ml 11 Bibliograf a 1 Tan EM Cohen AS Fries JF et al 1982 Revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus Arthritis Rheumatism 25 1271 1277 2 Witte T Hartung K Matthias T Sachse C Fricke M Deicher H Kalden JR Lakomek HJ Peter HH Schmidt RE 1998 Association of IgA anti dsDNA antibodies with vasculitis and disease activity in systemic lupus erythematosus Rheumatol Int 18 63 69 3 Witte T Hartung K Sachse C Matthias T Fricke M Deicher H Kalden JR Lakomek HJ Peter HH Schmidt RE SLE study group 1998 IgM anti dsDNA antibodies in systemic lupus erythematosus negative association with nephritis Rheumatol Int 18 85 91 P gina 7 de 9 002 2007 08 28 REF 3142 dsDNA G ANEXO A Esquema de dispensaci n Se sugiere dispensar los calibradores controles y muestras como sigue Para una interpretaci n cuantitativa utilice calibradores para establecer una curva standard Para una interpretaci n cualitativa utilice el calibradore cut off rr sa an a brators to establish a standard curve off calibrator 1 2 ja ja s je 7 ja jo 110 jn 12 JA 55109 ESTE IE IE II en Bicker f MA EE fre e nm E caciPo Pa pc E a2. C Conservar entre 2 8 C Prodotto da Fabriqu par 4 Hergestellt von Fabricado por 4 Calibratore cut off Etalon Seuil Grenzwert Kalibrator 4 Calibrador de cut off 4 Controllo positivo Contr le Positif Positiv Kontrolle Controlo positivo 4 Controllo negativo Contr le N gatif Negativ Kontrolle 4 Controlo negativo Calibratore Etalon Kalibrator Calibrador Recupero Corr lation Wiederfindung Recuperac o Coniugato Conjug Konjugat Conjugado 4 Micropiastra rivestita Microplaque sensibilis e Beschichtete Mikrotiterplatte Microplaca revestida 4 Piastra ad aghi rivestita 4 Pinplate sensibilis e Beschichtete Pinplatte Pinplate revestida Tampone di lavaggio Tampon de Lavage Waschpuffer Soluc o de lavagem Tampone substrato Substrat Substratpu Substrato Reagente bloccante Solution d Arr t Stopreagenz Soluc o de paragem Tampone campione Tampon Echantillons Probenpuffer Diluente de amostra For in vitro diagnostic use Para uso diagn stico in vitro In Vitro AlayvwoTik go Cataloge number Numero de cat logo Ap du g Trapayyekiag Lot 4 Lote Xapaktnpicu s Trapridag EC Declaration of Conformity Declaraci n CE de Conformidad Eupwfrraikr ouupwvia 96 tests 96 pruebas 96 TTPOO IOPIONOI 4 See instructions for use Ver las instrucciones de uso AdBete UTTOWN TIG o nyieg Xpriong
3. soluci n amarilla Contiene Tris NaCl BSA azida s dica lt 0 1 conservante Tamp n de Lavado 50x 1 vial 20 ml concentrado 50x tap n blanco soluci n verde Contiene Tris NaCl Tween 20 azida s dica lt 0 1 conservante Listo para el uso Control Negativo 1 vial 1 5 ml tap n verde soluci n incolora Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Control Positivo 1 vial 1 5 ml tap n rojo soluci n amarilla Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Calibradore Cut off 1 vial 1 5 ml tap n azul soluci n amarilla Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Calibradores 6 viales 1 5 ml cada uno 0 3 10 30 100 300 IU ml el color aumenta con la concentraci n soluci n amarilla Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Conjugado 1 vial 15 ml IgG tap n azul soluci n azul Contiene Inmunoglobulinas anti humanas conjugadas con peroxidasa Substrato TMB 1 vial 15 ml tap n negro Contiene TMB H202 estabilizado Soluci n de Paro 1 vial 15 ml tap n blanco soluci n incolora Contiene cido Clorh drico 1M Placa Microtiter 12x8 tiras rompibles de pocillos Revestimiento ver p rrafo 1 Material necesario pero no suministrado Filtro de lectura de 450 nm del lector de tiras microtiter y filtro de referencia opcional de 620 nm 600 690 nm Equipo de cri
4. Use by Utilizar antes de Xp on p xpl Store at 2 8 C 35 46 F Conservar a 2 8 C amp uA ooeral otoug 2 8 C Manufactured by Fabricado por KataoKeudZetai att Cut off Calibrator 4 Calibrador de cut off Opiak c opdc Avr paotnpio Baduov unong Positive Control Control Positivo OETIKOG OPOG E EVXOU Negative Control Control Negativo ApvnTIKOG OpOG E EVXOU Calibrator Calibrador Avri paorijpio Ba nov unong Recovery Recuperado Av xtnon 4 Coated microtiter plate Microplaca sensibilizada ETTIKAAUHUJEVI HIKPOTTA KA Coated pinplate Pinplate sensibilizada ETIKAAUH EVA TTAQKA Pin Wash buffer Soluci n de lavado PUBHIIOTIKO I AUHJA TTAJONG Substrate buffer Tamp n sustrato PuBpoTIK I AUJJO UTTOOTPWHATOG Stop solution Soluci n de parada Avridpaot pro IQKOTT G AVTI PAONG Sample buffer Tamp n Muestras PuOLIIOTIK I AUJA dEIyHATWV
5. eje y con respecto a los correspondientes valores de concentraci n en IU ml eje x Para unos mejores resultados recomendamos coordenadas log lin y un ajuste a 4 PL Partiendo de la DO de cada muestra lea la correspondiente concentraci n de anticuerpo expresada en IU ml Rango Normal Indeterminado Resultados Positivos lt 12 IU ml 12 18 IU ml gt 18 IU ml Ejemplo de curva standard Recomendamos dispensar los calibradores en paralelo para cada tanda Calibradores IgG DO 450 620 nm CV Variaci n 0 IU ml 0 036 2 9 3 IU ml 0 176 2 3 10 IU ml 0 314 2 9 30 IU mi 0 618 100 1U ml 1 312 300 IU ml 2 076 Ejemplo de c lculo Paciente Replicado DO Media DO Resultado IU ml 0 799 0 744 0 772 1 404 1 393 1 399 119 5 Para conocer los datos espec ficos de lote consulte el documento adjunto de control de calidad Los laboratorios deber an realizar un Control de Calidad interno utilizando controles propios y o un pool de sueros interno tal y como contemplan las regulaciones de la UE No utilice este ejemplo para interpretar resultados de los pacientes Cada laboratorio deber a establecer su rango normal propio basado en sus propias t cnicas contro les equipamiento y poblaci n seg n sus propios procedimientos establecidos Para la interpretaci n cualitativa lea la densidad ptica del calibrador cut off y la de las muestras de los pacientes Compare las DO de los pacientes con la DO de
6. se demostr una correlaci n negativa elevadamente significativa entre los anticuerpos anti dsDNA IgM y el lupus nefr tico incluyendo sus par metros de laboratorio Por lo tanto los anticuerpos anti dsDNA de la clase IgM pueden indicar una subclase de pacientes de lupus que est n protegidos contra el riesgo de desarrollar nefritis Principio del test Las muestras de suero diluidas 1 101 se incuban en la microplaca reve stida con el ant geno espec fico Los anticuerpos de los pacientes si est n presentes en la muestra se unen al ant geno La fracci n no unida es eli minada por el lavado en el paso siguiente Despu s las inmunoglobulinas anti humanas conjudagas con peroxidasa conjugado se incuban y reac cionan con el complejo ant geno anticuerpo de las muestras dentro de la microplaca El conjugado no unido es retirado a trav s del lavado en el paso siguiente La adici n del substrato TMB genera una reacci n colorim trica azul enzim tica que se detiene a trav s de cido diluido el color cambia a amarillo La tasa de formaci n de color por parte del crom geno va en funci n de la cantidad de conjugado unido al complejo antigeno anticuerpo y esto es proporcional a la concentraci n inicial de los respectivos anti cuerpos en la muestra del paciente P gina 1 de 9 002 2007 08 28 REF 3142 dsDNA G 3 Contenido del equipo Para ser reconstituido Tamp n de Muestra 5x 1 vial 20 ml concentrado 5x tap n blanco
7. AESKULISA dsDNA G REF 3142 Manual de Instrucciones Contenido 1 Utilizaci n Aplicaciones clinicas y principio del ensayo Contenido del equipo Almacenamiento y caducidad Precauciones Toma de muestra manipulaci n y almacenamiento Procedimiento del ensayo Interpretaci n Cuantitativa y Cualitativa Datos t cnicos Datos de funcionamiento Bibliograf a Esquema de dispensaci n Procedimiento del test 002 2007 08 28 REF 3142 dsDNA G 1 Utilizaci n AESKULISA dsDNA G es un enzimoinmunoensayo en fase s lida que utiliza ADN de doble cadena recombinante humano dsDNA para la detecci n combinada cualitativa y cuantitativa de anticuerpos IgG contra el dsDNA en suero humano Los anticuerpos anti dsDNA reconocen principalmente las unidades fosfato del ADN por tanto estos autoanticuerpos se unen tambi n al ADN de cadena simple ssDNA Para asegurar la correcta cuantificaci n de anticuerpos anti dsDNA se ha comprobado que el ant geno utilizado est libre de contaminaci n por ssDNA 2 Aplicaci n cl nica y principio del ensayo Los anticuerpos que se unen al ADN pertenecen al grupo de anticuerpos antinucleares ANA los cuales han sido observados en varias enfermedades autoinmunes Los anticuerpos que reaccionan con el ADN nativo de doble cadena se ven como espec ficos para el lupus eritematoso sist mico LES y han sido observados en aproximadamente el 50 80 de los pacientes Los anticuerpos co
8. C 35 46 F 7 2 Esquema de trabajo Vea Anexo A para el esquema de dispensaci n vea Anexo B para el procedimiento Recomendamos la medici n de pipeta de las muestras y calibradores por duplicado El Calibrador Cut off es solamente para uso en las pruebas cualitativas Dispense 100 ul de cada suero diluido de paciente dentro del pocillo correspondiente Dispense 100 ul de los calibratores O calibradore cut off y controles positivo y negativo dentro de los pocillos designados Incube durante 30 minutos a temperatura 20 32 C 68 89 6 F Lave 3x con 300 ul de tamp n de lavado diluido 1 50 Dispense 100 ul de conjugado dentro de cada pocillo Incube durante 30 minutos a temperatura 20 32 C 68 89 6 F Lave 3x con 300 ul de tamp n de lavado diluido 1 50 Dispense 100 ul de substrato TMB dentro de cada pocillo Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente 20 32 C 68 89 6 F protegido de la luz directa Dispense 100 ul de soluci n de paro dentro de cada pocillo siguiendo el mismo orden de pocillos que cuando dispens el substrato Incube un m nimo de 5 minutos Agite la placa cuidadosamente durante 5 segundos Lea la absorbancia a 450 nm opcionalmente a 450 620 nm dentro de los 30 minutos siguientes P gina 4 de 9 002 2007 08 28 REF 3142 dsDNA G 8 Interpretaci n Cuantitativa y Cualitativa Para una interpretaci n cuantitativa establezca la curva standard trazando la densidad ptica DO de cada calibrador
9. Este equipo contiene componentes potencialmente peligrosos Aunque los reactivos del equipo no est n clasificados como irritantes de los ojos y la piel recomendamos evitar el contacto de los mismos con los ojos y con la piel y utilizar guantes desechables AVISO Los calibradores controles y agentes contienen zida de sodio NaN como conservante El NaN puede ser t xico si se ingiere o se absorbe por medio de la piel o de los ojos El NaN puede reaccionar con la fontaner a de plomo y de cobre y formar zida met lica muy explosiva Al tirar tirarla deje correr una gran cantidad de agua para evitar que la zida tome consistencia Por favor consulte los procesos de descontaminaci n del CDC u otras directrices locales o nacionales No fume coma o beba mientras manipule el equipo No pipetee con la boca Todo el material de fuente humana utilizado en algunos reactivos de este equipo por ejemplo con troles standards ha sido analizado a trav s de m todos aprobados y ha resultado ser negativo para HbsAg Hepatitis C y HIV 1 No obstante ning n test puede completamente garantizar la ausencia de agentes virales en ese tipo de material Por lo tanto manipule los controles standards y muestras de los pacientes como si se trataran de aut nticos transmisores de enfermedades infecciosas y seg n los requerimientos de manipulaci n de su pa s 5 2 Instrucciones generales para la utilizaci n No mezcle o sustituya reactivos o microplacas
10. O am u gt u eo IG can ne Tel H JI E NET PO SESS CalA calibrator A CalB calibrator B CalC calibrator C CalD calibrator D CalE calibrator E CalF calibrator F PC positive control NC negative control CC Cut off calibrator P1 patient 1 P2 patient 2 P3 patient 3 P gina 8 de 9 002 2007 08 28 REF 3142 dsDNA G Anexo B Procedimiento del test Samples 1 101 Controls 3x 300ul P gina 9 de 9 002 2007 08 28 REF 3142 dsDNA G LTLT96 YEL9 6Y XBA OLTI6 PELI 6Gh 9UOyg AuBULIOD Z FUNA WNIOFOININ Wioysjopuem FETSS HIWD SOLLSONOVIG AMSAV WIEN QpLIyOSISJuN aINyeus s an nyessdwp o myersdwo meg aeg gnu uonegnouj ISO AESSY Diagnosi in vitro 4 Pour diagnostic in vitro In Vitro Diagnostikum Para uso Diagn stico in vitro Numero d ordine Reference Catalogue Bestellnummer N mero de cat logo Descrizione lotto Lot Chargen Bezeichnung 4 Lote Conformit europea Declaration CE de Conformit Europ ische Konformit t Declarac o CE de Conformidade 96 determinazioni 96 tests 96 Bestimmungen 96 Testes Rispettare le istruzioni per l uso Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten 4 Ver as instruc es de uso Da utilizzarsi entro Utilise avant le Verwendbar bis Utilizar antes de Conservare a 2 8 C Conserver a 2 8 C Lagerung bei 2 8
11. de n meros de lote diferentes Esto podr a llevar a una variaci n de los resultados Deje que todos los componentes alcancen la temperatura 20 32 C 68 89 6 F antes de utilizarlos Ag telos bien y siga el esquema de incubaci n recomendado para una ptima realizaci n del ensayo Incubaci n se recomienda realizar las pruebas a 30 C 86 F para sistemas automatizados No exponga nunca los componentes a temperaturas m s altas de 37 C 98 6 F Pipetee siempre la soluci n de substrato con puntas nuevas Protega este reactivo de la luz Nunca pipetee el conjugado con puntas previamente utilizadas con otros reactivos Un diagn stico cl nico definitivo no debe estar basado solamente en los resultados del ensayo realizado Debe ser elaborado por el m dico despu s de haber evaluado todos los hallazgos cl nicos y de laboratorio Es necesario verificar el diagn stico por medio de distintos m todos 6 Toma manipulaci n y almacenamiento de las muestras Utilice preferentemente muestras de suero reci n extra das La extracci n de sangre debe seguir los requerimientos de protocolo de su pa s No utilice muestras ictericas lipemicas hemolizadas o contaminadas por bacterias Los sueros con part culas deben ser purificados por centrifugaci n a baja velocidad lt 1000 x g Las muestras de sangre deben ser recogidas en tubos limpios secos y vac os Despu s de la separaci n las mues tras de suero deben ser utilizadas inmedia
12. es subclases de inmunoglobulinas se obtiene una sensibilidad diagn stica para el equipo AESKULISA dsDNA del 90 Los datos se obtuvieron con AESKULISA dsDNA G REF7142 La correlaci n La equivalencia de estos datos se evalu tanto en AESKULISA 7142 como en AESKULISA 3142 con 50 sueros El an lisis de regresi n lineal de los dos productos mostr que ambos son equivalentes En estos sueros est incluidos los sueros 19 cerca del l mite 35 gt dsDNA G comparison K 30 30 30 vs 30 15 15 350 300 250 r 200 30 15 15 U ml r 150 r 100 r 50 0 976x 0 054 y e R 0870 T T T T T T T 0 0 50 100 150 200 250 300 350 30 30 30 U ml Pagina 6 de 9 002 2007 08 28 REF 3142 dsDNA G 10 3 Linealidad Se han analizado con este equipo sueros seleccionados y se encontr que debian diluirse linealmente No obstante debido a la naturaleza heterog nea de los autoanticuerpos humanos pueden haber mue stras que no sigan esta regla concentraci n concentraci n Factor de medida esperada Recuperaci n diluci n IU ml IU ml 1 1 100 42 9 43 2 99 3 K Zee ee 1 400 10 8 86 1 10 4 Precision Para determinar la precisi n del ensayo se valor la variabilidad intra e inter ensayo a trav s del an lisis de su reproducibilidad en tres muestras de suero Estas muestras fueron seleccionadas para representar un rango por encima de la curva standard Intra Ensayo
13. l calibrador cut off Para la interpreta ci n cualitativa recomendamos que establezca un rango del 20 al rededor del valor del cut off como zona indeterminada Todas las muestras que tengan DO superior a este rango se consideran positivas y las muestras con valores de DO inferiores a este rango se consideran negativas Negativo DO paciente s 0 8 x OD cut off Indeterminado 0 8 x DOcut of lt DO patient lt 1 2 x DOcut or Positivo DO paciente gt 1 2 X DO cut off P gina 5 de 9 002 2007 08 28 REF 3142 dsDNA G 9 Datos T cnicos Muestra suero Volumen de muestra 10 ul de muestra diluida a 1 101 con tamp n de muestra 1x Tiempo total de incubaci n 90 minutos a temperatura 20 32 C 68 89 6 F Rango de calibraci n 0 300 IU ml Sensibilidad analitica 1 0 1U ml Almacenamiento a 2 8 C 35 46 F utilice solo los viales originales N mero de determinaciones 96 tests 10 Datos de funcionamiento 10 1 Sensibilidad anal tica La prueba del agente de muestra 30 veces en AESKULISA dsDNA G REF7142 produjo una sensi bilidad anal tica de 1 0 IU ml 10 2 Especificidad y Sensibilidad Las microplacas est n revestidas con dsDNA humano recombinante No se han encontrado reac ciones cruzadas con otros autoantigenos Los anticuerpos dirigidos contra el dsDNA muestran una sensibilidad diagn stica del 85 para el LES de modo que permiten diferenciar la enfermedad de otras enfermedades reum ticas inflamatorias Combinando las tr
14. ntra el dsDNA se observan durante las fases activas del LES La cantidad de concentraci n en el suero se correlaciona positivamente con la severidad de la enfermedad Debido a esto es importante la detecci n de estos autoanticuerpos para el diagn stico y la monitorizaci n cl nica del LES En consecuencia ha sido establecido como 1 de los 11 criterios del ACR American College of Rheumatology para el diagn stico del LES La mayor a de pacientes con LES muestran anticuerpos de la clase lgG contra el dsDNA Estos autoanticuerpos est n asociados con lupus nefr tico Aproximadamente el 30 de los pacientes con LES desarrollan adicionalmente anticuerpos anti dsDNA de la clase IgA Se ha sugerido que la presencia de estos anticuerpos anti dsDNA de la clase IgA pueda definir un cierto subconjunto de pacientes con LES De hecho hay estudios que demostraron la asociaci n de esta subclase con ciertos par metros de la actividad de la enfermedad como un ratio de sedimentaci n erotrocitaria elevado o como el consumo del componente del complemento C3 as como los par metros cl nicos de vasculitis cut nea necrosis acral y eritema No se encontr ninguna asociaci n con nefritis y artritis Los anticuerpos anti dsDNA de la clase IgM se encontraron en el 52 de los sueros de los pacientes con LES En contraste con los autoanticuerpos de la clase IgG e IgA los anticuerpos de la subclase IgM no correlacionan con la actividad de la enfermedad No obstante
15. stal cilindro 100 1000ml tubos de ensayo para disoluciones Mezclador espiral pipetas de precisi n 10 100 200 500 1000 ul o pipeta m ltiple ajustable 100 1000ul Dispositivo de lavado de la microplaca pipeta de repetici n o microcanal de 300 ul o sistema automatizado papel absorbente Nuestras pruebas se han dise ado para el uso con agua destilada seg n la definici n de la farmaco pea de los Estados Unidos USP 26 NF 21 y la europea Eur Ph 45 ed 4 Almacenamiento y Caducidad Guarde todos los reactivos y la microplaca a 2 8 C 35 46 F en sus envases originales Una vez preparadas las soluciones reconstituidas son estables durante 1 mes a 4 C por lo menos Los reactivos y la microplaca deben ser utilizados solamente dentro del margen de caducidad indicado en cada componente Evite la exposici n de la soluci n TMB a la luz intensa Guarde las microplacas en su sobre correspondiente incluyendo el desecante y s llelo bien P gina 2 de 9 002 2007 08 28 REF 3142 dsDNA G 5 Precauciones 5 1 Datos de riesgo para la salud ESTE PRODUCTO ES SOLO PARA EL USO EN DIAGN STICO IN VITRO Por lo tanto solamente el personal formado y especialmente asesorado en los m todos de diagn stico in vitro puede realizar el ensayo Aunque no se considera este producto como particularmente t xico o peligroso en condiciones de uso normales rem tase a lo siguiente para una m xima seguridad Recomendaciones y precauciones
16. tamente Pueden guardarse bien cerradas a 2 8 C 35 46 F hasta tres d as o congelarse a 20 C 4 F para per odos m s largos P gina 3 de 9 002 2007 08 28 REF 3142 dsDNA G 7 Procedimiento del ensayo 7 1 Preparativos antes de dispensar Diluya los reactivos concentrados Diluya el tamp n de muestra concentrado a 1 5 con agua destilada p e 20 ml en 80 ml Diluya el tamp n de lavado concentrado a 1 50 con agua destilada p e 20 ml en 980 ml Muestras Diluya las muestras de suero a 1 101 con tamp n de muestra 1x p e 1000 ul tamp n de muestra 1x 10 ul suero Mezcle bien la diluci n Lavado Prepare 20 ml de tamp n de lavado diluido 1x para 8 pocillos o 200 ml para 96 pocillos p e 4 ml de concentrado en 196 ml de agua destilada Lavado autom tico Tenga en cuenta los vol menes de exceso requeridos para purgar el instrumento y el volumen muerto en el dispensador del aparato Lavado manual Descarte el l quido de los pocillos invertiendo la placa Golpee vigorosamente el marco con los micropocillos sobre papel absorbente limpio manteniendo la placa invertida Dispense 300 ul de tamp n de lavado diluido dentro de cada pocillo y espere 20 segundos Repita el procedimiento entero dos veces m s Microplacas Calcule el n mero de pocillos necesarios para el ensayo Saque los pocillos no utlizados del marco p ngalos de nuevo en la bolsa de pl stico suministrada junto con el desecante y s llela bien 2 8
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