Descargue aquí el inserto
Contents
1. LKM y los anticuerpos contra el ant geno soluble del h gado SLA son marcadores para la HAI El 52 de los pacientes con HAI son positivos para ANA y o SMA el 20 para SLA y el 3 para LKM 1 Estos anticuerpos son de valor diagn stico para la HAI pero los nicos autoanticuerpos elevadamente espec ficos para la HAl son los SLA Los ANA SMA tambi n se dan en el 10 15 de los pacientes con hepatitis v rica y otras enfermedades mediadas por el sistema inmune Los LKM 1 tambi n est n asociados con la hepatitis C Se pueden distinguir tres tipos de anticuerpos LKM seg n los ant genos diana Los anticuerpos LKM 1 se dirigen contra el citocromo p450 IID6 una prote na citoplasm tica de 50 kDa que se encuentra en los hepatocitos y en la c lulas tubulares proximales del ri n Los anticuerpos LKM 2 se asocian con la hepatitis inducida por ticrinafen cido tienilico El ant geno diana es el citocromo p450 IIC9 un isoenzima del citocromo p450 que cataliza la oxidaci n metab lica de la droga Los anticuerpos LKM 3 se asocian con la hepatitis D cr nica El ant geno diana es la UDP 1 glucoronosil transferasa Los LKM 1 asociados a HAl aparecen predominantemente en ni as de 2 a 14 a os de edad de ah que la determinaci n de LKM 1 es muy importante en pediatr a Principio del test Las muestras de suero diluidas 1 101 se incuban en la microplaca reve stida con el ant geno espec fico Los anticuerpos de los pacientes si est n pres2. lica muy explosiva Al tirar tirarla deje correr una gran cantidad de agua para evitar que la zida tome consistencia Por favor consulte los procesos de descontaminaci n del CDC u otras directrices locales o nacionales No fume coma o beba mientras manipule el equipo No pipetee con la boca Todo el material de fuente humana utilizado en algunos reactivos de este equipo por ejemplo con troles standards ha sido analizado a trav s de m todos aprobados y ha resultado ser negativo para HbsAg Hepatitis C y HIV 1 No obstante ning n test puede completamente garantizar la ausencia de agentes virales en ese tipo de material Por lo tanto manipule los controles standards y muestras de los pacientes como si se trataran de aut nticos transmisores de enfermedades infecciosas y seg n los requerimientos de manipulaci n de su pa s 5 2 Instrucciones generales para la utilizaci n No mezcle o sustituya reactivos o microplacas de n meros de lote diferentes Esto podr a llevar a una variaci n de los resultados Deje que todos los componentes alcancen la temperatura 20 32 C 68 89 6 F antes de utilizarlos Ag telos bien y siga el esquema de incubaci n recomendado para una ptima realizaci n del ensayo Incubaci n se recomienda realizar las pruebas a 30 C 86 F para sistemas automatizados No exponga nunca los componentes a temperaturas m s altas de 37 C 98 6 F Pipetee siempre la soluci n de substrato con puntas nuevas Prote
3. 101 con tamp n de muestra 1x Tiempo total de incubaci n 90 minutos a temperatura 20 32 C 68 89 6 F Rango de calibraci n 0 300 U ml Sensibilidad anal tica 1 0 U ml Almacenamiento a 2 8 C 35 46 F utilice solo los viales originales N mero de determinaciones 96 tests 10 Datos de funcionamiento 10 1 Sensibilidad anal tica La prueba del agente de muestra 30 veces en AESKULISA LKM 1 REF7703 produjo una sensibili dad anal tica de 1 0 U ml 10 2 Especificidad y Sensibilidad La microplaca est revestida con citocromo p450 IID6 humano recombinante No se encontraron reactividades cruzadas con otros autoant genos Los anticuerpos anti LKM 1 mue stran una especificidad diagn stica de gt 99 para la hepatitis autoinmune del tipo 2 La sensibilidad diagn stica de los anticuerpos anti LKM 1 para la hepatitis autoinmune del tipo 2 es del 84 Los datos se obtuvieron con AESKULISA LKM 1 REF7703 La correlaci n La equivalencia de estos datos se evalu tanto en AESKULISA 7703 como en AESKULISA 3703 con 54 sueros El an lisis de regresi n lineal de los dos productos mostr que ambos son equivalentes En estos sueros est incluidos los sueros 39 cerca del l mite LKM 1 comparison En 30 30 30 vs 30 15 15 30 15 15 U ml 150 200 100 30 30 30 U ml P gina 6 de 9 002 2007 08 28 REF 3703 LKM 1 10 3 Linealidad Se han analizado con este equipo sueros seleccionados y se encontr que de
4. C 68 89 6 F Lave 3x con 300 ul de tamp n de lavado diluido 1 50 Dispense 100 ul de conjugado dentro de cada pocillo Incube durante 30 minutos a temperatura 20 32 C 68 89 6 F Lave 3x con 300 ul de tampon de lavado diluido 1 50 Dispense 100 ul de substrato TMB dentro de cada pocillo Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente 20 32 C 68 89 6 F protegido de la luz directa Dispense 100 ul de soluci n de paro dentro de cada pocillo siguiendo el mismo orden de pocillos que cuando dispens el substrato Incube un m nimo de 5 minutos Agite la placa cuidadosamente durante 5 segundos Lea la absorbancia a 450 nm opcionalmente a 450 620 nm dentro de los 30 minutos siguientes P gina 4 de 9 002 2007 08 28 REF 3703 LKM 1 8 Interpretaci n Cuantitativa y Cualitativa Para una interpretaci n cuantitativa establezca la curva standard trazando la densidad ptica DO de cada calibrador eje y con respecto a los correspondientes valores de concentraci n en U ml eje x Para unos mejores resultados recomendamos coordenadas log lin y un ajuste a 4 PL Partiendo de la DO de cada muestra lea la correspondiente concentraci n de anticuerpo expresada en U ml Rango Normal Indeterminado Resultados Positivos lt 12 U ml 12 18 U ml gt 18 U ml Ejemplo de curva standard Recomendamos dispensar los calibradores en paralelo para cada tanda Calibradores IgG DO 450 620 nm CV Variaci n 0 U ml 0 046
5. AESKULISA LKM 1 REF 3703 Manual de Instrucciones Contenido Utilizaci n Aplicaciones cl nicas y principio del ensayo Contenido del equipo Almacenamiento y caducidad Precauciones Toma de muestra manipulaci n y almacenamiento Procedimiento del ensayo Interpretaci n Cuantitativa y Cualitativa Datos t cnicos Datos de funcionamiento Bibliograf a Esquema de dispensaci n Procedimiento del test 002 2007 08 28 REF 3703 LKM 1 1 Utilizaci n AESKULISA LKM 1 es un enzimoinmunoensayo en fase s lida que emplea citocromo p450 IID6 recombinante humano para la detecci n cuantitativa y cualitativa de anticuerpos contra microsomas h gado ri n LKM en suero humano El ensayo es una herramienta para el diagn stico de la hepatitis autoinmune HAI 2 Aplicaci n cl nica y principio del ensayo La hepatitis autoinmune HAI es una enfermedad del h gado progresiva y cr nica de origen desconocido que responde bien a la terapia inmunosupresora pero tiene un pobre pron stico si no es tratada El diagn stico temprano y preciso es por lo tanto de gran importancia La HIA se caracteriza por rasgos histol gicos de hepatitis periportal en ausencia de marcadores virales por hipergammaglobulinemia y en la mayor a de pacientes por la presencia de autoanticuerpos en el suero Los anticuerpos anti nucleares ANA los anticuerpos anti musculo liso SMA los anticuerpos microsomales anti higado y ri n
6. E 3 U ml 0 171 10 U ml Ejemplo de c lculo Paciente Replicado DO Media DO Resultado U ml 0 533 0 569 0 551 1 156 1 196 1 176 Para conocer los datos espec ficos de lote consulte el documento adjunto de control de calidad Los laboratorios deber an realizar un Control de Calidad interno utilizando controles propios y o un pool de sueros interno tal y como contemplan las regulaciones de la UE No utilice este ejemplo para interpretar resultados de los pacientes Cada laboratorio deber a establecer su rango normal propio basado en sus propias t cnicas contro les equipamiento y poblaci n seg n sus propios procedimientos establecidos Para la interpretaci n cualitativa lea la densidad ptica del calibrador cut off y la de las muestras de los pacientes Compare las DO de los pacientes con la DO del calibrador cut off Para la interpreta ci n cualitativa recomendamos que establezca un rango del 20 al rededor del valor del cut off como zona indeterminada Todas las muestras que tengan DO superior a este rango se consideran positivas y las muestras con valores de DO inferiores a este rango se consideran negativas Negativo DO paciente s 0 8 x OD cut off Indeterminado 0 8 x DOcut of lt DO patient lt 1 2 x DOcut or Positivo DO paciente gt 1 2 X DO cut off P gina 5 de 9 002 2007 08 28 REF 3703 LKM 1 9 Datos T cnicos Muestra suero Volumen de muestra 10 ul de muestra diluida a 1
7. b an diluirse linealmente No obstante debido a la naturaleza heterog nea de los autoanticuerpos humanos pueden haber mue stras que no sigan esta regla concentraci n concentraci n medida esperada Recuperaci n U ml U ml 10 4 Precisi n Para determinar la precisi n del ensayo se valor la variabilidad intra e inter ensayo a traves del an lisis de su reproducibilidad en tres muestras de suero Estas muestras fueron seleccionadas para representar un rango por encima de la curva standard Intra Ensayo Inter Ensayo Media CV U ml 10 5 Calibracion Debido a la no existencia de una calibraci n de referencia internacional este ensayo est calibrado en unidades arbitrarias U ml 1 1 Bibliograf a 1 Krawitt EL 1996 Autoimmune Hepatitis N Engl J Med 334 897 903 2 Meyer zum B schenfelde KH Lohse AW 1995 Autoimmune Hepatitis N Engl J Med 333 1004 1005 3 Alvarez F Berg PA Bianchi et al 1999 International Autoimmune Hepatitis Group Report a review of criteria for diagnosis of auto immune hepatitis J Hepatol 31 929 938 4 Manns MP et al 1991 LKM 1 autoantibodies recognize a short linear sequence in P450 IID6 a cytochrome P 450 monooxygenase J Clin Invest 88 1370 1378 5 Homberg JC Andre C Abuaf A 1984 A new anti liver kidney microsome antiboda anti LKM 2 in tienilic acid induced hepatitis Clin Exp Immunol 55 561 570 6 Philipp T Durazzo M Trautwein C A
8. e todos los reactivos y la microplaca a 2 8 C 35 46 F en sus envases originales Una vez preparadas las soluciones reconstituidas son estables durante 1 mes a 4 C por lo menos Los reactivos y la microplaca deben ser utilizados solamente dentro del margen de caducidad indicado en cada componente Evite la exposici n de la soluci n TMB a la luz intensa Guarde las microplacas en su sobre correspondiente incluyendo el desecante y s llelo bien P gina 2 de 9 002 2007 08 28 REF 3703 LKM 1 5 Precauciones 5 1 Datos de riesgo para la salud ESTE PRODUCTO ES SOLO PARA EL USO EN DIAGN STICO IN VITRO Por lo tanto solamente el personal formado y especialmente asesorado en los m todos de diagn stico in vitro puede realizar el ensayo Aunque no se considera este producto como particularmente t xico o peligroso en condiciones de uso normales rem tase a lo siguiente para una m xima seguridad Recomendaciones y precauciones Este equipo contiene componentes potencialmente peligrosos Aunque los reactivos del equipo no est n clasificados como irritantes de los ojos y la piel recomendamos evitar el contacto de los mismos con los ojos y con la piel y utilizar guantes desechables AVISO Los calibradores controles y agentes contienen zida de sodio NaN como conservante El NaN puede ser t xico si se ingiere o se absorbe por medio de la piel o de los ojos El NaN puede reaccionar con la fontaner a de plomo y de cobre y formar zida met
9. entes en la muestra se unen al ant geno La fracci n no unida es eli minada por el lavado en el paso siguiente Despu s las inmunoglobulinas anti humanas conjudagas con peroxidasa conjugado se incuban y reac cionan con el complejo ant geno anticuerpo de las muestras dentro de la microplaca El conjugado no unido es retirado a trav s del lavado en el paso siguiente La adici n del substrato TMB genera una reacci n colorim trica azul enzim tica que se detiene a trav s de cido diluido el color cambia a amarillo La tasa de formaci n de color por parte del crom geno va en funci n de la cantidad de conjugado unido al complejo antigeno anticuerpo y esto es proporcional a la concentraci n inicial de los respectivos anti cuerpos en la muestra del paciente P gina 1 de 9 002 2007 08 28 REF 3703 LKM 1 3 Contenido del equipo Para ser reconstituido Tamp n de Muestra 5x 1 vial 20 ml concentrado 5x tap n blanco soluci n amarilla Contiene Tris NaCl BSA azida s dica lt 0 1 conservante Tamp n de Lavado 50x 1 vial 20 ml concentrado 50x tap n blanco soluci n verde Contiene Tris NaCl Tween 20 azida s dica lt 0 1 conservante Listo para el uso Control Negativo 1 vial 1 5 ml tap n verde soluci n incolora Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Control Positivo 1 vial 1 5 ml tap n rojo soluci n amarilla Contiene Suero humano diluido az
10. ga este reactivo de la luz Nunca pipetee el conjugado con puntas previamente utilizadas con otros reactivos Un diagn stico cl nico definitivo no debe estar basado solamente en los resultados del ensayo realizado Debe ser elaborado por el m dico despu s de haber evaluado todos los hallazgos cl nicos y de laboratorio Es necesario verificar el diagn stico por medio de distintos m todos 6 Toma manipulaci n y almacenamiento de las muestras Utilice preferentemente muestras de suero reci n extra das La extracci n de sangre debe seguir los requerimientos de protocolo de su pa s No utilice muestras ictericas lip micas hemolizadas o contaminadas por bacterias Los sueros con part culas deben ser purificados por centrifugaci n a baja velocidad lt 1000 x g Las muestras de sangre deben ser recogidas en tubos limpios secos y vac os Despu s de la separaci n las mues tras de suero deben ser utilizadas inmediatamente Pueden guardarse bien cerradas a 2 8 C 35 46 F hasta tres d as o congelarse a 20 C 4 F para per odos m s largos P gina 3 de 9 002 2007 08 28 REF 3703 LKM 1 7 Procedimiento del ensayo 7 1 Preparativos antes de dispensar Diluya los reactivos concentrados Diluya el tamp n de muestra concentrado a 1 5 con agua destilada p e 20 ml en 80 ml Diluya el tamp n de lavado concentrado a 1 50 con agua destilada p e 20 ml en 980 ml Muestras Diluya las muestras de suero a 1 101 con tamp n de m
11. ida s dica lt 0 1 conservante Calibradore Cut off 1 vial 1 5 ml tap n azul soluci n amarilla Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Calibradores 6 viales 1 5 ml cada uno 0 3 10 30 100 300 U ml el color aumenta con la concentraci n soluci n amarilla Contiene Suero humano diluido azida s dica lt 0 1 conservante Conjugado 1 vial 15 ml IgG tap n azul soluci n azul Contiene Inmunoglobulinas anti humanas conjugadas con peroxidasa Substrato TMB 1 vial 15 ml tap n negro Contiene TMB H202 estabilizado Soluci n de Paro 1 vial 15 ml tap n blanco soluci n incolora Contiene cido Clorh drico 1M Placa Microtiter 12x8 tiras rompibles de pocillos Revestimiento ver p rrafo 1 Material necesario pero no suministrado Filtro de lectura de 450 nm del lector de tiras microtiter y filtro de referencia opcional de 620 nm 600 690 nm Equipo de cristal cilindro 100 1000ml tubos de ensayo para disoluciones Mezclador espiral pipetas de precisi n 10 100 200 500 1000 ul o pipeta m ltiple ajustable 100 1000ul Dispositivo de lavado de la microplaca pipeta de repetici n o microcanal de 300 ul o sistema automatizado papel absorbente Nuestras pruebas se han dise ado para el uso con agua destilada seg n la definici n de la farmaco pea de los Estados Unidos USP 26 NF 21 y la europea Eur Ph 4 ed 4 Almacenamiento y Caducidad Guard
12. lex B Straub P Lamb JG Johnson EF Tukey RH Manns MP 1994 Recognition of uridine diphosphate glucuronosyl transferases by LKM 3 antibodies in chronic hepatitis D Lancet 344 578 81 P gina 7 de 9 002 2007 08 28 REF 3703 LKM 1 ANEXO A Esquema de dispensaci n Se sugiere dispensar los calibradores controles y muestras como sigue Para una interpretaci n cuantitativa utilice calibradores para establecer una curva standard Para una interpretaci n cualitativa utilice el calibradore cut off o Johda brators to establish a standard curve off calibrator 1 2 ja ja 5 je 7 ja jo io jn 12 A CACA N ee in en EH lt ana ES ee En nm E caciPo Pa pc E a O RO oe a O E IG cam ne Je f Ema 2S HH saamassa Basessa Esa CalA calibrator A CalB calibrator B CalC calibrator C CalD calibrator D CalE calibrator E CalF calibrator F PC positive control NC negative control CC Cut off calibrator P1 patient 1 P2 patient 2 P3 patient 3 P gina 8 de 9 002 2007 08 28 REF 3703 LKM 1 Anexo B Procedimiento del test Samples 1 101 Controls P gina 9 de 9 002 2007 08 28 REF 3703 LKM 1 LTLTOG VEL9 6p XBA OLTI6 PELI 6Gh 9UO0YZ LULUN 7 FUNA WNIOFOININ VTSUS SPUIM FETSS HAWH SOLLSONOVIG AMSAV DUIEN J UYDSIDJUN JINEUSIS ON nyessdun omyeJo duro meg aeg i qnyuy uonegnou 1189 AESSVY Diagnosi in vitro Pou
13. r diagnostic in vitro In Vitro Diagnostikum Para uso Diagn stico in vitro Numero d ordine R f rence Catalogue Bestellnummer N mero de cat logo Descrizione lotto Lot Chargen Bezeichnung Lote Conformit europea Declaration CE de Conformit Europ ische Konformit t D clarac o CE de Conformidade 96 determinazioni 96 tests 96 Bestimmungen 96 Testes Rispettare le istruzioni per l uso Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Ver as instruc es de uso Da utilizzarsi entro Utilise avant le Verwendbar bis Utilizar antes de Conservare a 2 8 C Conserver a 2 8 C Lagerung bei 2 8 C Conservar entre 2 8 C Prodotto da Fabrique par Hergestellt von Fabricado por Calibratore cut off Etalon Seuil Grenzwert Kalibrator Calibrador de cut off Controllo positivo Contr le Positif Positiv Kontrolle Controlo positivo Controllo negativo Contr le Negatif Negativ Kontrolle Controlo negativo Calibratore Etalon Kalibrator Calibrador Recupero Correlation Wiederfindung Recuperac o Coniugato Conjuge Konjugat Conjugado Micropiastra rivestita Microplaque sensibilisee Beschichtete Mikrotiterplatte Microplaca revestida Piastra ad aghi rivestita Pinplate sensibilis e Beschichtete Pinplatte Pinplate revestida eee Ojo ojo ojo ojo 4 o ojo 4 ojo SIS THF o o 9 ojo e ajo 4 ojo 4 HF ojo 4 HF ojo 4 jo Tampone di lavaggio Tampon de La
14. uestra 1x p e 1000 ul tamp n de muestra 1x 10 ul suero Mezcle bien la diluci n Lavado Prepare 20 ml de tamp n de lavado diluido 1x para 8 pocillos o 200 ml para 96 pocillos p e 4 ml de concentrado en 196 ml de agua destilada Lavado autom tico Tenga en cuenta los vol menes de exceso requeridos para purgar el instrumento y el volumen muerto en el dispensador del aparato Lavado manual Descarte el l quido de los pocillos invertiendo la placa Golpee vigorosamente el marco con los micropocillos sobre papel absorbente limpio manteniendo la placa invertida Dispense 300 ul de tamp n de lavado diluido dentro de cada pocillo y espere 20 segundos Repita el procedimiento entero dos veces m s Microplacas Calcule el n mero de pocillos necesarios para el ensayo Saque los pocillos no utlizados del marco p ngalos de nuevo en la bolsa de pl stico suministrada junto con el desecante y s llela bien 2 8 C 35 46 F 7 2 Esquema de trabajo Vea Anexo A para el esquema de dispensaci n vea Anexo B para el procedimiento Recomendamos la medici n de pipeta de las muestras y calibradores por duplicado El Calibrador Cut off es solamente para uso en las pruebas cualitativas Dispense 100 ul de cada suero diluido de paciente dentro del pocillo correspondiente Dispense 100 ul de los calibratores O calibradore cut off y controles positivo y negativo dentro de los pocillos designados Incube durante 30 minutos a temperatura 20 32
15. vado PuBpoTIK i upa TTA ONS 4 Substrate buffer Tamp n sustrato PuOLIIOTIK DIG AUA UTTOOTPWHATOG 4 Stop solution Soluci n de parada Avri paortijpio lakottiic avTi paong Sample buffer Tamp n Muestras PuByiotik SidAuya Selyyatwv
16. vage Waschpuffer Soluc o de lavagem Tampone substrato Substrat Substratpuffer Substrato 4 Reagente bloccante Solution d Arr t Stopreagenz Soluc o de paragem Tampone campione Tampon Echantillons Probenpuffer Diluente de amostra For in vitro diagnostic use Para uso diagn stico in vitro In Vitro AlayvwoTik go Cataloge number Numero de cat logo Ap du g Trapayyeklag Lot Lote XapakTnpioj s Trapridag EC Declaration of Conformity Declaraci n CE de Conformidad Eupwfrraikri ouupwvia 96 tests 96 pruebas 96 TTpoodiopiovoi See instructions for use 4 Ver las instrucciones de uso AdBete uTr yn TIG o nyleg xp hons Use by Utilizar antes de Xp on HExpi Store at 2 8 C 35 46 F Conservar a 2 8 C uAdooetal 0Toug 2 8 C Manufactured by Fabricado por KataokeudZetal arto Cut off Calibrator Calibrador de cut off Opiak g op Avr paotnp o Baguov unons 4 Positive Control 4 Control Positivo OETIK G OP G EAEYXOU Negative Control Control Negativo Apvntik g op g EAEYXOU Calibrator Calibrador Avr i paotnp o Baguov unons Recovery Recuperado Av xtnon Conjugate Conjugado 2 Zeuya Coated microtiter plate Microplaca sensibilizada ETTIKAAUUJEVN pikporrh xa Coated pinplate 4 Pinplate sensibilizada EmkaAuunevn trAdka Pin Wash buffer Soluci n de la
Download Pdf Manuals
Related Search