APPY1™Test Kit - Español
Contents
1. Pruebas de precisi n concentraci n de MRP 8 14 Par metros Muestra 1 2 3 4 5 MRP 8 14 pg mL Media 0 10 0 15 0 24 0 31 0 52 Sale r DE 0 006 0 009 0 024 0 016 0 058 Reproducibilidad intraensayo CV 63 61 10 0 5 1 112 Entre ensayos DE 0 000 0 007 0 002 0 012 0 000 CV 0 0 4 5 0 7 3 8 0 0 Total DE 0 006 0 011 0 025 0 021 0 062 CV 6 5 7 11 10 6 6 9 12 0 Pruebas de precisi n concentraci n de CRP Par metros Muestra 1 2 3 4 5 CRP pg mL Media 0 58 2 31 5 06 5 25 18 88 Reproducibilidad intraensayo at on oe ae oe 23 Entre ensayos DE 0 013 0 097 0 280 0 262 0 000 CV 2 3 4 2 5 5 5 0 0 0 Total DE 0 028 0 149 0 453 0 453 2 851 CV 4 8 6 5 8 6 8 6 15 1 Reproducibilidad Tres operadores evaluaron la reproducibilidad en el laboratorio de Venaxis cada uno con un lector exclusivo y los resultados se enmascararon a los otros operadores La combinaci n de un operador y un lector se consider un centro individual lo que da un total de 3 centros Cada operador analiz 5 muestras de plasma m s 2 controles durante 3 d as con 2 ciclos al d a y 2 r plicas por ciclo El orden de las muestras cambi en cada ciclo Para calcular la puntuaci n de la prueba APPY1 se asign un recuento leucocitario fijo a cada muestra En la puntuaci n de la prueba APPY1 el CV intraensayo repetibilidad fue lt 3 4 el CV entre ensayos fue lt2. ug ml estimados Precisi n La precisi n de la prueba APPY1 se evalu conforme a la norma EP 5A2 del CLSI Evaluaci n de la precisi n de los m todos de medici n cuantitativos recomendaciones aprobadas Se analizaron 5 muestras de plasma entre el LOQ y el valor de corte Puntuaci n de la prueba APPY1 de 4 0 en o aproximadamente en el valor de corte y en intervalos por encima del valor de corte durante 20 d as realizando 2 ciclos al d a con 2 r plicas por ciclo y 1 operador Las muestras se aleatorizaron entre 5 lectores cada d a de prueba Para poder calcular la puntuaci n de la prueba APPY1 se asign un recuento leucocitario fijo a cada muestra El coeficiente de variaci n porcentual total CV fue del 0 0 al 2 8 en la puntuaci n de la prueba APPY1 del 6 5 al 12 0 en la MRP 8 14 y del 4 8 al 15 1 en la CRP Cerca del punto de decisi n cl nica establecido los CV en la MRP 8 14 y CRP fueron lt 10 6 APPY1 Test Instructions for Use L10003ES 02 Espa ol O 2013 Venaxis Inc Page 30 Pruebas de precisi n puntuaci n de la prueba APPY1 con recuento leucocitario fijo Puntuaci n de Intraensayo Entre ensayos Total la prueba APPY1 Muestra N media DE CV DE CV DE CV 1 80 3 2 0 000 0 0 0 000 0 0 0 000 0 0 2 80 3 9 0 000 0 0 0 000 0 0 0 000 0 0 3 80 4 0 0 050 1 2 0 000 0 0 0 050 1 2 4 80 4 1 0 037 0 9 0 027 0 7 0 046 1 1 5 80 5 2 0 143 2 8 0 000 0 0 0 148 2 8
3. 0 9 el CV entre d as fue lt 0 7 y el CV entre operadores centros fue lt 0 5 La imprecisi n total reproducibilidad fue lt 3 4 Los resultados de la puntuaci n de la prueba APPY1 la MRP 8 14 y la CRP se muestran a continuaci n APPY1 Test Instructions for Use L10003ES 02 Espa ol 2013 Venaxis Inc Page 31 Pruebas de reproducibilidad puntuaci n de la prueba APPY1 con recuento leucocitario fijo Par metros Muestra 1 2 3 4 5 Puntuaci n de la prueba APPY1 Media 3 2 3 9 4 0 4 2 5 4 peg A DE 0 014 0 019 0 048 0 049 0 168 Reproducibilidad intraensayo CV 04 05 12 12 31 DE 0 004 0 010 0 019 0 017 0 049 Entre ensayos CV 0 1 0 3 0 5 0 4 0 9 E di DE 0 005 0 014 0 010 0 012 0 036 pte gles CV 0 1 0 4 0 2 0 3 0 7 Entre operadores DE 0 003 0 005 0 011 0 010 0 030 P CV 0 1 0 1 03 0 3 0 5 AOE DE 0 015 0 026 0 054 0 054 0 182 Reproducibilidad total CV 0 5 0 7 13 13 34 Pruebas de reproducibilidad concentraci n de MRP 8 14 Par metros Muestra 1 2 3 4 5 MRP 8 14 ug ml Media 0 10 0 15 0 25 0 34 0 59 PE y DE 0 003 0 010 0 029 0 026 0 656 Reproducibilidad intraensayo CV 29 66 11 5 7 7 11 1 Ent DE 0 002 0 005 0 009 0 008 0 013 DMG ee CV 19 3 1 35 23 23 Entre d as DE 0 003 0 007 0 006 0 007 0 017 CV 2 6 4 7 2 4 2 0 3 0 Entre operadores DE 0 010 0
4. 002 0 006 0 006 0 015 P CV 9 6 1 6 2 5 17 25 PEN DE 0 009 0 013 0 031 0 029 0 071 Reproducibilidad total CV 86 88 12 6 84 12 0 Pruebas de reproducibilidad concentraci n de CRP 7 Muestra Par metros 7 3 3 4 5 CRP pg ml Media 0 63 2 52 5 55 5 94 24 34 Sis DE 0 039 0 166 0 309 0 568 3 375 Reproducibilidad intraensayo CV 61 66 5 6 96 13 9 Ue eneavos DE 0 016 0 130 0 281 0 228 1 226 y CV 2 5 5 2 5 1 3 8 5 0 Entre d as DE 0 012 0 116 0 065 0 132 0 743 CV 1 9 46 1 2 2 2 3 1 DE 0 009 0 048 0 099 0 121 0 902 Entre operadores CV 1 4 1 9 1 8 2 0 3 7 ett DE 0 044 0 245 0 434 0 638 3 776 Reproducibilidad total CV 7 0 9 7 78 10 7 15 5 Interferencias Se analizaron muestras de mezclas de plasma con concentraciones bajas medias y altas de MRP 8 14 y CRP para evaluar las interferencias con hemoglobina bilirrubina conjugada y sin conjugar lecitina anticuerpos antimurinos humanos HAMA factor reumatoide RF e inmunoglobulina G IgG Los valores de control de cada mezcla de plasma L M H se determinaron con la media de 3 r plicas El efecto de cada sustancia potencialmente interferente se evalu usando la media de las 3 r plicas de cada mezcla de plasma A cada mezcla de plasma se le asign un recuento leucocitario para poder calcular la puntuaci n de la prueba APPY1 A la mezcla de plasma con concentraci n baja se le asign un recuento leucocitario de 4 a la mezcla con concentraci n media se le
5. Pain Academic Emergency Medicine 2012 19 48 55 Kharbanda A et al Novel Serum and Urine Markers for Pediatric Appendicitis Academic Emergency Medicine 2012 19 56 62 Thuijl G et al A Pilot study on potential new plasma markers for diagnosis of acute appendicitis 2010 Shindoh J et al Diagnostic Power of Inflammatory Markers in Predicting Severity of Appendicitis Hepato Gastroenterology 2011 58 2003 2006 Cole M Maldonado N Evidence Based Management of Suspected Appendicitis in the Emergency Department Emergency Medicine Practice 2011 13 1 32 Siddique K et al Diagnostic accuracy of white cell count and C reactive protein for assessing the severity of paediatric appendicitis Journal of the Royal Society of Medicine 2011 2 59 Doraiswamy NW Progress of acute appendicitis a study in children British Journal of Surgery 1978 65 877 9 Symbol Key Symbolschl ssel Leyenda de los s mbolos L gende des symboles Descrizione dei simboli Verklaring van symbolen Symbol EN Used for CE Mark Contents Symbol DE Verwendet fiir CE Zeichen Inhalt S mbolo ES Significa Marca CE Contenido Symbole FR Utilis pour Marque CE Contenu Simbolo IT Spiegazione Marcatura CE Contenuto Symbool NL Gebruikt voor CE markering Inhoud Molenstraat 15 Castle Rock CO 80104 USA C 2513 BH The Hague Venaxis Inc Emergo Europe 1585 South Perry Street www venaxis com The Netherlands Tel 1 303 79
6. 4 2000 The APPY1 Test Kit is for U S Export Only Fax 1 303 798 8332 Venaxis APPY1 and APPYReader are trademarks of Venaxis Inc APPY1 Test Instructions for Use L10003 02 2013 Venaxis Inc Page 67
7. APPY1 Test Kit Espa ol vo Uso previsto La prueba APPY1 es un ensayo de diagn stico in vitro de ndice multivariable IVDMIA que se emplea para ayudar a identificar pacientes con riesgo bajo de apendicitis aguda La prueba APPY1 mide las concentraciones del complejo heterodim rico de prote na mieloide relacionada MRP 8 14 calprotectina y prote na C reactiva CRP en plasma con EDTA mediante inmunoensayo de flujo lateral Las concentraciones cuantitativas de MRP 8 14 y CRP adem s del recuento leucocitario determinado de forma independiente se analizan mediante un algoritmo preprogramado exclusivo con el fin de generar una resulta de la prueba APPY1 Indicaciones de uso La prueba APPY1 est indicada para su uso en pacientes pedi tricos adolescentes y adultos j venes de 2 a 20 a os de edad con dolor abdominal y otros signos y s ntomas f sicos y cl nicos que sugieran apendicitis aguda Exclusivamente para uso profesional Resumen y explicaci n El diagn stico de pacientes que se presentan con dolor abdominal sigue siendo uno de los problemas m s comunes y desafiantes de la medicina de urgencias M s de 22 2 millones de pacientes acudieron a las unidades de urgencias de los hospitales europeos y estadounidenses en 2010 a causa de dolor abdominal La mayor incidencia de la apendicitis se registra en los pacientes pedi tricos adolescentes y adultos j venes de 10 a 19 a os de edad pero el diagn stico de apendicitis
8. APPY1 Test Instructions for Use L10003ES 02 Espa ol 2013 Venaxis Inc Page 32 asign un recuento de 7 y a la mezcla con concentraci n alta se le asign un recuento de 10 las puntuaciones respectivas de la prueba APPY1 fueron 3 1 3 6 y 4 6 No se observaron interferencias importantes en la puntuaci n de la prueba APPY1 en ninguna de las sustancias interferentes todas las diferencias fueron inferiores al 10 No obstante se detect una posible interferencia con niveles bajos de MRP 8 14 cuando se provoc la muestra con bilirrubina sin conjugar Como se demuestra en el gr fico siguiente la interferencia tuvo muy poco efecto en la puntuaci n de la prueba APPY1 Adem s se detect una interferencia con niveles bajos de CRP cuando se compar la muestra de plasma RF positiva con su control No obstante se detectaron niveles bajos de CRP en esta muestra mediante inmunotransferencia independientemente del resto de mezclas Si se analiza una fuente m s pura de RF la diferencia porcentual que se muestra m s abajo se reducir a Se obtuvo un resultado similar en todos los niveles de MRP 8 14 cuando se analiz la interferencia con IgG Se observ que la IgG purificada se contamina con MRP 8 14 y si se obtiene un material de origen m s puro los efectos de interferencia indicados m s abajo ambi n podr an reducirse Pruebas de interferencia prueba APPY1 Mezcla baja Mezcla media Mezcla alta r 2 Prueba APPY1
9. Prueba APPY1 Prueba APPY1 posib e sustancia Concentraci n Punt 3 1 Punt 3 6 Punt 4 6 Diferencia porcentual respecto a la muestra de control o DEN Hemoglobina 2g l 0 69 0 79 0 08 Bilirrubina no conjugada 342 umol 1 37 0 56 1 78 Bilirrubina conjugada 342 umol 0 28 1 52 1 80 Lecitina 11 1 mmol l 0 38 0 09 0 17 HAMA 153 3 ng ml 0 24 0 93 2 18 Factor reumatoide 60 IU ml 0 06 0 42 1 99 IgG 52 8 mg ml 5 55 7 06 4 30 APPY1 Test Instructions for Use L10003ES 02 Espa ol O 2013 Venaxis Inc Page 33 REFERENCES 1 2 12 13 14 15 17 18 19 20 21 22 EU Market Study by Venaxis Inc Benelux France Italy Germany UK 2012 Venaxis analysis of data from National Hospital Ambulatory Medical Care Survey 2010 Available at http www cdc gov nchs ahcd ahcd_questionnaires htm public_use Accessed November 2012 Addiss D et al The Epidemiology of Appendicitis and Appendectomy in the United States American Journal of Epidemiology 1990 132 910 25 Becker et al Atypical Clinical Features of Pediatric Appendicitis Academic Emergency Medicine 2007 14 124 129 Brennan G Pediatric Appendicitis Pathophysiology and appropriate use of diagnostic imaging Canadian Journal of Emergency Medicine 2006 8 425 432 Kharbanda et al A Clinical Decision Rule to Identify Children at Low Risk for Appendicitis Pediatrics 2005 116 709 716 Huckins DS et al A novel biomar
10. a 8 C 35 6 a 46 4 F alejado de la luz directa Los componentes del kit deben guardarse en su envase original sin abrir hasta que vayan a usarse El APPY1 Test Kit es estable hasta la fecha de caducidad impresa en la caja del kit y de los componentes si se almacenan como se recomienda El APPYReader Quality Control QC Cassette debe guardarse a 15 30 C 59 86 F en su envase original hasta el primer uso El OC Cassette es reutilizable y debe guardarse en su bolsa original y sellarse de nuevo inmediatamente despu s de cada uso No lo deseche Evite la exposici n directa a la luz APPY1 Test Instructions for Use L10003ES 02 Espa ol O 2013 Venaxis Inc Page 24 El APPY1 Control Kit debe almacenarse en su envase original a lt 20 C 4 F No lo guarde en un congelador sin escarcha Solo debe descongelarse justo antes de su uso el n mero de viales necesarios y deber n desecharse despu s de la prueba Una vez descongelados los viales de control 1 y 2 APPY1 no se deben volver a congelar Precauciones Precauciones generales Exclusivamente para uso profesional Cada casete de prueba est dise ado para un solo uso con una sola muestra de paciente Los casetes de prueba no se pueden reutilizar No mezcle componentes de distintos lotes ya que los componentes de cada lote est n perfectamente ajustados entre s para obtener un rendimiento ptimo No saque los casetes de prueba de su envase hasta que vayan a
11. a la ID del paciente correcta y pulse Confirm confirmar aparecer una pantalla para indicar que la ID del paciente no coincide APPY1 Test Instructions for Use L10003ES 02 Espa ol O 2013 Venaxis Inc Page 27 Vuelva a introducir la ID del paciente y pulse Confirm confirmar para ver el resultado de la prueba en la pantalla Result List resultados 3 Si la caracter stica de impresi n autom tica del lector est activada el resultado se imprimir autom ticamente 4 Pulse para abrir el cajet n Saque el casete de prueba y des chelo en un recipiente para residuos biopeligrosos Interpretaci n de los resultados RESULTADO DE LA PRUEBA APPY1 INTERPRETACI N Valor por debajo del punto de decisi n cl nica de la prueba NEGATIVO riesgo bajo de apendicitis El riesgo de que el paciente tenga apendicitis aguda es bajo Valor por encima del punto de decisi n cl nica de la prueba INCONCLUYENTE para apendicitis No se puede determinar con certeza el riesgo de que el paciente tenga apendicitis Consulte a continuaci n las limitaciones Repita la prueba Si despu s de repetir la prueba el resultado RESULTADO NO V LIDO O MENSAJE sigue no siendo v lido o aparece un mensaje de error consulte las DE ERROR instrucciones de resoluci n de problemas del Manual del usuario del APPYReader o contacte con Soporte t cnico Control de calidad Caracter sticas de control integradas El software del lect
12. apendicitis de la prueba APPY1 no permite descartar el diagn stico de apendicitis aguda En las primeras etapas de la respuesta de la fase aguda lt 24 horas desde la aparici n de los s ntomas o en casos de apendicitis focal los niveles plasm ticos de MRP 8 14 y CRP pueden no alcanzar la significaci n cl nica lo que dar a un resultado falso negativo 2 El resultado inconcluyente para apendicitis de la prueba APPY1 no sirve como prueba diagn stica de la apendicitis aguda ni debe interpretarse como positivo ya que en otros trastornos inflamatorios o enfermedades infecciosas tambi n aumentan los niveles plasm ticos de MRP 8 14 y CRP adem s del recuento leucocitario 3 El resultado de la prueba APPY1 se basa en una puntuaci n calculada mediante un algoritmo exclusivo con m ltiples variables La puntuaci n se compara despu s con un punto de decisi n cl nica predeterminado y se obtiene el resultado de la prueba APPY1 APPY1 Test Instructions for Use L10003ES 02 Espa ol O 2013 Venaxis Inc Page 28 4 La MRP 8 14 la CRP y el recuento leucocitario se regulan al alza de forma inespecifica en enfermedades inflamatorias como las infecciones agudas lesiones tisulares agudas y otros trastornos inflamatorios Por tanto el diagn stico de apendicitis aguda debe determinarse en el contexto del historial del paciente y en los hallazgos f sicos y cl nicos 5 Las diferencias entre los niveles de CRP en una misma persona puede
13. calcular el resultado de la prueba APPY1 mediante un algoritmo preprogramado exclusivo El APPY1 System tambi n incluye controles de calidad electr nicos en seco y durante el procedimiento con l quido para garantizar la integridad de los resultados El tiempo total necesario para procesar y realizar una prueba es de aproximadamente 20 minutos La MRP 8 14 tambi n denominada S100A8 A9 o calprotectina es un complejo de prote nas fijadoras del calcio presente en el citoplasma de los neutr filos que se asocia con enfermedades inflamatorias agudas Se ha observado que la concentraci n de MRP 8 14 es alta especificamente en el tejido apendicular y la sangre perif rica en pacientes con apendicitis aguda La prote na C reactiva CRP se produce en el h gado y se asocia a la inflamaci n La CRP es una prote na de fase aguda que aumenta en distintas enfermedades y afecciones asociadas con la inflamaci n aguda inespec fica Las concentraciones altas de CRP en la sangre perif rica se han relacionado con la apendicitis aguda Las caracter sticas funcionales anal ticas del ensayo de CRP de la prueba APPY1 coinciden con las de un ensayo de CRP de alta sensibilidad hsCRP como se puede comprobar m s abajo El recuento leucocitario total alto se asocia con la apendicitis aguda si los s ntomas persisten durante 24 horas o m s La leucocitosis no es espec fica de la apendicitis aguda ya que tambi n se presenta en otras infecciones y tra
14. daron a lt 70 C hasta la prueba Se procedi al an lisis ciego de las muestras en el laboratorio de Venaxis usando el APPY1 System Los resultados de la prueba APPY1 se compararon con los datos de las altas negativo para apendicitis aguda AA o los resultados histopatol gicos positivo para apendicitis aguda AA originales de los pacientes En el estudio de validaci n se trabaj con un total de 465 muestras de pacientes extra das durante estudios cl nicos fundamentales anteriores con un volumen suficiente para realizar todo el an lisis La edad de los pacientes era de 2 a 20 a os media de 12 0 4 3 a os Aproximadamente el 49 eran hombres y el 52 mujeres El 70 eran cauc sicos el 19 hispanos latinos y el 11 eran de otra etnia La diferencia en la edad media entre la cohorte AA 12 5 3 8 y la AA 11 9 4 5 no fue significativa Resultados de la prueba APPY1 comparados con el diagn stico cl nico Resultado de la prueba APPY1 N 465 AA AA Por debajo del valor de corte NEGATIVO Riesgo bajo de AA 154 6 160 Por encima del valor de corte INCONCLUYENTE para AA 179 126 305 333 132 465 Datos de funcionamiento cl nico Medida Estimaci n IC del 95 Prevalencia de AA 28 4 24 5 32 6 Sensibilidad 95 5 90 4 97 9 Especificidad 46 2 41 0 51 6 VPN 96 3 92 1 98 3 VPP 41 3 35 9 46 9 Raz n de probabilidad positiva 1 78 1 60 1 99 Raz n de probabi
15. en estos pacientes sigue siendo un reto debido la una amplia variedad de caracter sticas cl nicas at picas que presentan los ni os Hasta el 50 de todos los beb s y ni os j venes con AA pueden presentar signos y s ntomas at picos que pueden retrasar el diagn stico y conllevan complicaciones potencialmente fatales como una perforaci n del ap ndice abscesos abdominales peritonitis septicemia y choque Por ello es muy importante contar con herramientas diagn sticas que ayuden a alcanzar un diagn stico objetivo puntual y preciso y que permitan estratificar el riesgo de los pacientes con posible apendicitis aguda AA En la actualidad la capacidad para diagnosticar con precisi n la apendicitis se limita a recopilar un conjunto de signos y s ntomas f sicos y cl nicos y a distintos modos de diagn stico Con el fin de ayudar a diagnosticar la apendicitis se han desarrollado distintas herramientas de predicci n cl nica que traducen los s ntomas cl sicos en puntos de datos El rendimiento de esos sistemas de puntuaci n es inconsistente y muy variable Adem s las unidades de urgencias no usan estos sistemas de forma rutinaria No obstante s suele realizarse un recuento leucocitario de forma rutinaria aunque ha demostrado ser poco til como marcador exclusivo e incluso combinado con signos y s ntomas que sugieren una AA Dependiendo de la evaluaci n inicial del riesgo del paciente que haga el m dico en los casos en l
16. jo con un ngulo de m s de 45 grados o un rotor oscilante Para calcular la conversi n de RPM a FCR consulte el manual del usuario de la centrifugadora o contacte con el Soporte t cnico de Venaxis Procedimiento de la prueba Ajuste del Lector Siga las instrucciones de ajuste del lector como se describen en el Manual de uso y o la Gu a de ajuste del APPYReader Reg strese en el lector con la ID del operador asignada Deje que el lector se caliente al menos 10 minutos antes de procesar ninguna muestra de paciente APPY1 Test Instructions for Use L10003ES 02 Espa ol 2013 Venaxis Inc Page 25 Preparaci n del CC y los reactivos de la prueba Si realiza un control de calidad CC con l quidos saque el n mero de viales de control 1 y 2 del APPY1 Control Kit almacenados a lt 20 C Descong lelos a temperatura ambiente mientras se calienta el lector Consulte las Instrucciones de uso del APPY1 Control Kit para m s informaci n Extraiga suficientes casetes viales de amortiguador y viales de conjugado de prueba del APPY1 Test Kit almacenado a 2 8 C para realizar todas las pruebas necesarias de CC y muestras de pacientes Deje que los componentes se estabilicen a temperatura ambiente mientras se calienta el lector Uso del QC Cassette Utilice el QC Cassette cada d a que vaya a realizar pruebas de pacientes y o antes de procesar los controles 1 y 2 Las muestras de los pacientes no pueden analizarse a no ser q
17. ker panel to rule out acute appendicitis in pediatric patients with abdominal pain American Journal of Emergency Medicine in press http dx doi org 10 1016 j ajem 2013 06 016 Cardall et al Clinical Value of the Total White Blood Cell Count and Temperature in the Evaluation of Patients with Suspected Appendicitis Academic Emergency Medicine 2004 11 1021 1027 Hennelly K and Bachur R Appendicitis Update Current Opinion Pediatrics 2011 23 1 5 Wan M et al Acute Appendicitis in Young Children Cost Effectiveness of US versus CT in Diagnosis A Markov Decision Analytical Model Radiology 2009 250 378 386 Glatter R What role do imaging studies play in diagnosing pediatric appendicitis in the ED MedScape Emergency Medicine Web MD June 18 2010 Available at http www medscape com viewarticle 723549 Accessed April 9 2012 Stoker J et al Imaging patients with acute abdominal pain Radiology 2009 253 31 46 Bachur R et al Advanced Radiologic Imaging for Pediatric Appendicitis 2005 2009 Trends and Outcomes Journal of Pediatrics 2011 MenochM etal Trends in Computed Tomography Utilization in the Pediatric Emergency Department Pediatrics 2012 129 e690 e697 Bealer J and Colgin M S100A8 A9 A potential New diagnostic Aid for Acute Appendicitis Academic Emergency Medicine 2010 17 333 336 Mills A et al Diagnostic Characteristics of S100A8 A9 in a Multicenter Study with Patients With Acute Right Lower Quadrant Abdominal
18. lidad negativa 0 098 0 045 0 217 APPY1 Test Instructions for Use L10003ES 02 Espa ol O 2013 Venaxis Inc Page 29 Funcionamiento anal tico L mite de detecci n El l mite de blanco LOB el l mite de detecci n LOD y el l mite de cuantificaci n LOQ los determinaron 2 operadores mediante el an lisis de 3 lotes de APPY1 Test Kits frente a 6 muestras de plasma y muestras en blanco de amortiguador de prueba APPY1 durante 3 d as las muestras se aleatorizaron cada d a LOD LOB y LOQ L mite CRP pg mL MRP pg mL Blanco 0 030 Detecci n 0 045 Cuantificaci n 0 341 0 064 Linealidad En cada analito se demostr la linealidad de un intervalo desde aproximadamente el LOD LOQ hasta por encima del valor superior de truncamiento del ensayo El ensayo es lineal con ambos analitos en el intervalo del valor de corte cl nico El ensayo de MRP es lineal desde 0 052 a 0 933 ug ml el ensayo de CRP es lineal desde 0 187 a 51 4 ug ml Al usar el LOD de CRP como valor inferior el ensayo de CRP es lineal desde 0 254 g ml a 51 4 ug ml Linealidad de MRP8 14 1 0 4 y 0 9998x 0 0062 R 0 9959 0 8 Y 0 6 0 4 0 2 MRP 8 14 medida pg ml 0 0 0 2 0 4 0 6 0 8 1 0 pg ml estimados Linealidad de CRP 70 y 1 0545x 0 451 50 R 0 9915 gt 40 2 30 E 4a 3 20 4 E 10 2 o i i i S 0 10 20 30 40 50 60
19. muestra de plasma del paciente diluida al vial de conjugado de prueba Mezcle bien infundiendo y extrayendo con la pipeta asegurandose que toda conjugaci n sea resuspendida Evite introducir aire en la mezcla ya que se crear a espuma Inicie el an lisis 1 A ada inmediatamente 70 ul de la diluci n con muestra del paciente conjugado de anticuerpos al puerto para muestras del casete de prueba 2 Cierre con cuidado el cajet n La prueba se iniciar autom ticamente 3 El lector mostrar el estado de la prueba en la pantalla Run Test realizar prueba 4 Cuando haya finalizado la prueba se le pedir que introduzca el recuento leucocitario o que confirme los valores del recuento introducidos antes de la prueba El esos momentos el casete de prueba debe seguir en el lector 5 Vuelva a introducir el recuento leucocitario del paciente y pulse Confirm confirmar Aparecer la pantalla Test Result resultado de la prueba 6 Pulse Next siguiente para que aparezca la pantalla Confirm Patient ID confirmar ID del paciente 7 Confirme que la ID del paciente que aparece en pantalla es correcta Ver e imprimir resultados 1 Sila ID del paciente es correcta pulse Confirm confirmar para ver el resultado de la prueba en la pantalla Result List resultados Si la caracter stica de impresi n autom tica del lector est activada el resultado se imprimir autom ticamente 2 Sila ID del paciente es incorrecta Introduzc
20. n variar del 30 al 60 La variabilidad de la MRP 8 14 tambi n est bien determinada 6 Los errores durante el procesamiento de las muestras podr an dar resultados falsos negativos o positivos Resultados previstos El algoritmo y el punto de decisi n cl nica de corte se derivan de un estudio cl nico fundamental en el que participaron 503 pacientes Bas ndose en los an lisis de la curva de funcionamiento del receptor ROC y en el consenso cl nico relativo al alta se determin el punto de decisi n cl nica de la prueba APPY1 Los pacientes con resultados de la prueba por debajo del punto de corte se consideran NEGATIVOS de riesgo bajo de apendicitis aguda y los resultados de la prueba por encima del punto de corte se consideran de riesgo INCONCLUYENTE para apendicitis aguda Funcionamiento cl nico El estudio de validaci n cl nica del APPY1 System se realiz usando muestras de plasma congeladas archivadas Las muestras se obtuvieron de un estudio anterior multic ntrico prospectivo abierto y observacional relativo a la evaluaci n valoraci n clasificaci n y disposici n de pacientes de 2 a 20 a os de edad que acuden a urgencias con s ntomas que sugieren una apendicitis aguda A los pacientes participantes en el estudio se les extrajo sangre despu s se proces el plasma y las muestras se congelaron en 2 horas Las muestras se almacenaron en el mismo centro a lt 70 C hasta su env o a Venaxis donde se archivaron y guar
21. nto APPYReader el lector un casete de prueba APPY1 de un solo uso un vial de un solo uso de amortiguador para soluci n y un vial de un solo uso de anticuerpos liofilizados conjugados con micropart culas con marcadores fluorescentes El procedimiento de la prueba requiere a adir plasma del paciente al amortiguador para disoluci n y despu s reconstituir el conjugado liofilizado con la diluci n de plasma amortiguador Los complejos de MRP 8 14 y CRP disponibles en la muestra diluida del paciente se unen al conjugado de anticuerpos reconstituidos Despu s se aplica una parte al cuota de esta mezcla al casete de la prueba donde los complejos de MRP 8 14 y CRP ya fluoromarcados se unen a los anticuerpos correspondientes que hay en la zona de APPY1 Test Instructions for Use L10003ES 02 Espa ol O 2013 Venaxis Inc Page 23 captura de la membrana de nitrocelulosa El casete de la prueba se introduce de inmediato en el lector donde se lee la concentraci n de cada analito presente en la muestra bas ndose en la intensidad de la fluorescencia de cada l nea de prueba de la zona de captura La concentraci n de MRP 8 14 y CRP de la muestra se calcula seg n las curvas de calibraci n preprogramadas en el chip RFID de cada casete de prueba La concentraci n de ambos marcadores se combina con los valores del recuento leucocitario del analizador hematol gico del hospital y una vez introducidos los valores en el lector exclusivo se emplean para
22. or incluye una prueba autom tica de inicializaci n en la que se calibran los motores pticos se comprueba el sistema de transporte del sistema y el sistema de recepci n de la ptica y se comprueba la integridad de los ajustes del lector Sino se cumplen las especificaciones preprogramadas se produce un resultado no v lido o aparece un mensaje de error Controles externos APPYReader OC Cassette El APPYReader QC Cassette comprueba la ptica y la idoneidad del sistema para garantizar el correcto funcionamiento del lector y debe utilizarse a diario antes de procesar reactivos de CC o muestras de pacientes Para poder procesar muestras de pacientes deben pasarse las pruebas del QC Cassette APPY1 Control Kit Tiene a su disposici n controles l quidos de calidad para comprobar la correcta realizaci n de la prueba APPY1 Los intervalos de valores espec ficos de cada control se facilitan con cada lote Si es necesario siga las instrucciones de uso que se entregan con cada kit para procesar los controles Deben realizarse controles Al menos una vez al mes Con cada lote y env o nuevos de APPY1 Test Kits Si duda de la integridad del sistema las condiciones de almacenamiento de los reactivos o la fiabilidad del resultado de cualquier prueba Conforme indiquen las recomendaciones nacionales regionales o locales Conforme a los protocolos de CC de su laboratorio Limitaciones 1 El resultado negativo riesgo bajo de
23. os que la presentaci n cl nica sea inequ voca y se necesite m s informaci n se pueden pedir pruebas radiol gicas de diagn stico como ecograf a abdominal o tomograf a computarizada TC con o sin contraste Aunque la TC permite diagnosticar la apendicitis aguda con precisi n si el ap ndice se puede ver con claridad el uso de esta t cnica conlleva un riesgo importante debido a la mayor exposici n a la radiaci n ionizante y por tanto aumenta la dependencia de las pruebas menos daninas Los ltimos informes demuestran que el uso de TC en la poblaci n pedi trica se ha estabilizado no obstante las dudas relativas a la exposici n que plantea la TC en particular en los pacientes m s j venes no se ha reducido En vez de emplear un solo marcador la combinaci n de tres biomarcadores de la prueba APPY1 mejora la capacidad para identificar pacientes con riesgo bajo La prueba APPY1 junto con los hallazgos f sicos y cl nicos ofrece una informaci n objetiva adicional que ayuda en la toma de decisiones de estratificaci n seg n el riesgo de los pacientes que se presentan con dolor abdominal susceptible de ser apendicitis aguda Aquellos pacientes identificados como de bajo riesgo con la prueba APPY1 pueden tratarse de forma m s tradicional p ej realizando las menos pruebas adicionales o radiol gicas posibles o incluso ninguna solo observaci n o incluso el alta Principios de la prueba El APPY1 System consta del instrume
24. rincipal Valores previstos a Si los valores de unidad de fluorescencia relativa RFU detectados con el QC Cassette se encuentran dentro de los limites aceptables programados en el chip RFID del QC Cassette el resultado del an lisis ser PASS pasa b Silos valores de RFU detectados con el QC Cassette se encuentran fuera de los l mites aceptables programados en el chip RFID del OC Cassette el resultado del an lisis ser FAIL no pasa se bloquear al operador y este no podr procesar m s muestras del paciente Repita la prueba con un QC Cassette distinto c Si el resultado del segundo QC Cassette es PASS pasa proceda a analizar las muestras de los pacientes d Sino dispone de un QC Cassette distinto o si el resultado del segundo QC Cassette es FAIL no pasa el lector seguir bloqueado Contacte con el Soporte t cnico de Venaxis llamando al 1 303 794 2000 o con su distribuidor local para obtener asistencia An lisis de muestras del paciente Prepare el casete de prueba APPY1 1 Inicie sesi n como operador o cambie al modo operador 2 Pulse para mostrar la pantalla Main Menu men principal del operador APPY1 Test Instructions for Use L10003ES 02 Espa ol O 2013 Venaxis Inc Page 26 3 Pulse 4 y Y hasta destacar Run Test realizar prueba y despu s pulse Select seleccionar 4 Introduzca la ID del paciente usando uno de los m todos siguientes Manualmente use el teclado num rico para introd
25. stornos inflamatorios Hay estudios que sugieren que un recuento leucocitario normal junto con unos niveles bajos de MRP 8 14 y CRP adem s de otros biomarcadores reduce la probabilidad de apendicitis aguda Reactivos y materiales APPY1 Test Kit 25 pruebas F10000 Casete de prueba APPY1 envasado 25 unidades Membranas de nitrocelulosa con tiras de anticuerpos monoclonales espec ficos frente a CRP y MRP 8 14 y un anticuerpo policlonal de cabra anti IgY de gallina no relacionado como control interno Amortiguador de prueba APPY1 990 ul 25 unidades Conjugado de prueba APPY1 torta liofilizada 25 unidades Instrucciones de uso 1 unidad Materiales necesarios pero no suministrados APPYReader Kit F10008 APPYReader QC Cassette envasado 1 unidad F10004 APPY1 Control Kit 10 viales F10005 Control APPY1 de nivel 1 40 ul 5 unidades Control APPY1 de nivel 2 40 ul 5 unidades Centrifugadora para el procesamiento del plasma rotor de ngulo fijo a gt 45 grados o rotor oscilante capaz de alcanzar 1300 x g 100 fuerza centr fuga relativa FCR Micropipetas calibradas y puntas de micropipetas desechables para dispensar 10 ul 70 ul y 150 ul Agitadora Mini centrifugadora para aplicar pulsos a los controles si fuera necesario Equipo de protecci n individual y recipientes para desechos biopeligrosos Almacenamiento y estabilidad Cuando lo reciba el APPY1 Test Kit debe almacenarse de 2
26. ucir la ID del paciente a Pulse Keypad teclado para introducir letras espacios y signos de puntuaci n b Cuando aparezca el teclado en la pantalla del lector pulse 4 Y 4 y para destacar el car cter que desee c Pulse Confirm amp Next confirmar y siguiente para a adir el car cter destacado a la ID del paciente d Repita los pasos a b y c como proceda e Cuando la ID del paciente est completa pulse Back anterior o seleccione Done hecho para salir del teclado Usando el lector de c digos de barras opcional externo escanee el c digo de barras del paciente 5 En pantalla Enter Patient ID introducir ID del paciente pulse Confirm confirmar 6 Si dispone del recuento leucocitario introd zcalo y pulse Confirm confirmar De no ser as pulse Skip omitir Si pulsa Skip omitir se le pedir que introduzca el recuento leucocitario del paciente despu s de la prueba 7 Saque el casete de prueba de la bolsa y col quelo en el cajet n para casetes Prepare la muestra de plasma del paciente para el an lisis 1 Prepare los viales de amortiguador y conjugado de prueba 2 Use una punta desechable nueva en la pipeta para cada transferencia 3 Extraiga 10 ul de muestra de plasma del paciente del tubo de centrifugado K2 EDTA con cuidado para no tocar la capa leucocitaria Transfi ralos al vial de amortiguador de prueba T pelo y ag telo bien a mano o por agitadora 4 Transfiera 150 pl de la
27. ue se haya obtenido un resultado v lido PASS pasa con el QC Cassette en las 24 horas previas IMPORTANTE para mantener la vida til prevista del QC Cassette evite su exposici n a la luz Almacene el QC Cassette inmediatamente despu s de su uso en su bolsa original y vuelva a sellarla No deseche el QC Cassette hasta la fecha de caducidad Consulte las instrucciones de uso del APPYReader OC Cassette para m s informaci n 1 Identif quese como operador o cambie al modo operador 2 Pulse para mostrar la pantalla Main Menu men principal 3 Pulse 4 y Y hasta resaltar Maintenance mantenimiento y pulse Select seleccionar 4 Pulse 4 y Y hasta destacar Check APPYReader comprobar APPYReader y pulse Select seleccionar 5 Pulse 4 y Y hasta destacar APPYReader QC Cassette APPYReader QC Cassette y pulse Select seleccionar El cajet n del lector se abrir y aparecer la pantalla Insert Cassette introducir casete La pantalla APPYReader QC Cassette aparecer cuando finalice la prueba 6 Para imprimir el resultado de QC Cassette a Pulse Options opciones b Pulse y Y hasta destacar Print Result imprimir resultado y despu s pulse Select seleccionar 7 Para enviar el resultado a un sistema inform tico de laboratorio consulte el Manual del usuario del APPYReader 8 Pulse Back anterior para volver a la pantalla Check APPYReader comprobar APPYReader o pulse para volver a la pantalla Main Menu men p
28. usarse No saque el conjugado de prueba del envase del kit hasta que vaya a usarse Guarde el APPYReader QC Cassette en su bolsa oscura con cierre reutilizable original despu s de cada uso Despu s de cada uso devuelva el OC Cassette a su bolsa con cierre reutilizable original No lo deseche No use viales de control APPY1 que se hayan descongelado y vuelto a congelar No pinche ni da e el casete de prueba durante la manipulaci n previa al uso Si se pincha o da a des chelo y use un casete de prueba nuevo No use los componentes del kit pasada la fecha de caducidad que se encuentra en la caja del kit y las etiquetas de los componentes Despu s de poner la muestra a analizar en el puerto para muestras del casete de prueba cierre el cajet n para casetes de inmediato para iniciar el an lisis Si se retrasa el resultado de la prueba podr a no ser v lido Para obtener un resultado v lido deber introducirse el valor del recuento leucocitario confirmado antes de que pasen 90 minutos desde el inicio de la prueba Todos los materiales que hayan estado en contacto con sangre humana o sus derivados deber n desecharse como residuo biopeligroso El APPY1 Control Kit contiene derivados de mezclas de plasma humano Cada unidad de donante se ha analizado mediante m todos aprobados por la FDA y ha dado negativo en HBsAg VHC VIH 1 VIH 2 VIH 1Ag VIH 1 NAT ALT y s filis Dado que ning n m todo anal tico puede garanti
29. zar la ausencia total de agentes infecciosos los reactivos deben manipularse como plasma humano potencialmente infeccioso Se recomienda utilizar medidas de precauci n universales y seguir las normas de seguridad frente a pat genos de transmisi n hem tica Cada centro debe seguir sus propios protocolos institucionales de seguridad en el laboratorio Elamortiguador de la prueba contiene un 0 095 de azida s dica como conservante En caso de contacto con la piel enju guese con agua abundante La azida s dica puede reaccionar con las tuber as de cobre y plomo y formar azidas met licas explosivas aclare con agua abundante cuando deseche el amortiguador Todas las muestras de pacientes deber n manipularse como si fueran agentes potencialmente infecciosos Se recomienda utilizar medidas de precauci n universales y seguir las normas de seguridad frente a pat genos de transmisi n hem tica Cada centro debe seguir sus propios protocolos institucionales de seguridad en el laboratorio Obtenci n y almacenamiento de muestras La sangre del paciente se debe extraer mediante venopunci n est ndar o una l nea IV ya implantada con irrigaci n en un tubo K2 EDTA tapa lavanda con 1 8 mg de EDTA cc de sangre Despu s de extraer la sangre centrifugue el tubo durante 10 minutos a 1300 x g 100 FCR a temperatura ambiente La centrifugaci n debe iniciarse antes de pasada una 1 hora de la extracci n La centrifugadora debe tener un rotor fi
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