Rosco Diagnostica
Contents
1. adecuada Precauciones Se deben tener en cuenta las instrucciones para uso El funcionamiento de las tabletas Neo Sensitabs depende no s lo de la potencia de las tabletas sino adem s del uso del in culo y de las placas de agar adecuados la temperatura de incubaci n la interpretaci n correcta del di metro de la zona la conservaci n correcta de las tabletas Neo Sensitabs y del uso de cepas de control Muestra La muestra debe ser t pica del lugar de la infecci n es decir se deber tomar una muestra representativa de las bacterias patog nicas en cuesti n Para m s informaci n consulte las instrucciones para uso en las que se incluye la preparaci n del in culo PROCEDIMIENTO Materiales suministrados Tabletas Neo Sensitabs del tipo descrito en la etiqueta Materiales necesarios pero no suministrados Medios de cultivo reactivos organismos para el control de calidad y el equipo de laboratorio necesario para realizar el ensayo de sensibilidad mediante t cnicas de difusi n en agar que respeten el procedimiento estandarizado Prepare un est ndar de 0 5 de turbidez de McFarland a adiendo 0 5 ml de BaCl de 0 048 mol l 1 175 p v de BaCl 2H 0 a 99 5 ml de HSO de 0 18 mol l 1 vol vol sin dejar de agitar Tambi n se puede adquirir un est ndar ya preparado Se debe verificar mediante un espectrofot metro con una banda de luz de 1 cm y una cubeta de referencia la absorbancia a 625 nm debe encontrarse en el intervalo entr2. espectro extendido son inhibidas por el cido clavul nico tazobactam o sulbactam y se puede detectar r pidamente mediante una prueba de sinergia de doble disco comprimido La ceftazidima clavulanato y la cefepima clavulanato son muy tiles en los ensayos confirmatorios de betalactamasas de espectro extendido Para m s informaci n consulte el Neo Sensitabs User s Guide Manual del usuario de Neo Sensitabs y Detection of resistance mechanisms www rosco dk Todas las cepas de betalactamasas de espectro extendido se deben considerar como resistentes frente a todas las penicilinas cefalosporinas y aztreonam Estafilococos resistentes a la meticilina El cribado de los estafilococos resistentes a la meticilina y los estafilococos coagulasa negativos resistentes a la meticilina oxacilina se debe realizar empleando tabletas Oxacilina 1 ug y Cefoxitina La resistencia indica que todos los betalact micos se deben considerar como resistentes Para m s informaci n consulte el User s Guide Neo Sensitabs Manual del usuario de Neo Sensitabs www rosco dk Staphylococcus aureus con sensibilidad reducida a la Vancomicina hVISA VISA GISA and VRSA El Staphylococcus aureus resistente a la Vancomicina VRSA deber a ser detectado usando Vancomicina 5 ug pero la capacidad de detectarlo es desconocida p e no evaluado ya que han sido detectados pocos aislados cl nicos VRSA en el mundo Las cepas con sensibilidad reducida a la Vancomicina
3. suministrar simult neamente 7 9 12 16 tabletas Neo Sensitabs Debido al hecho de que las tabletas tamponan el medio de cultivo no es necesario ejercer ninguna presi n en las tabletas Instrucciones de conservaci n 1 Despu s de su recepci n se deber comprobar el s mbolo de temperatura situado en el envase exterior Las tabletas Neo Sensitabs con el s mbolo 2 C a 8 C se deber n conservar en el frigor fico mientras que las tabletas Neo Sensitabs con el s mbolo de 25 C como temperatura m xima impreso en el envase exterior se deber n conservar a temperatura ambiente 2 Si los cartuchos de tabletas Neo Sensitabs se conservan en el frigor fico se deber esperar hasta que alcancen la temperatura ambiente antes de abrirlos es decir 30 60 minutos para impedir que la humedad se condense sobre las tabletas DBV0004E 1 6 Rosco DIAGNOSTICA CE 3 Las tabletas Neo Sensitabs con el s mbolo de temperatura de 2 C a 8 C se pueden conservar a temperatura ambiente durante 2 meses como m ximo sin que pierdan su actividad 4 Los cartuchos abiertos y colocados en un dispensador se deber n utilizar dentro de los 2 meses siguientes tabletas Neo Sensitabs con el s mbolo de temperatura de 2 C a 8 C y en los 12 meses siguientes tabletas Neo Sensitabs con el s mbolo de temperatura inferior a 25 C La fecha de caducidad de los cartuchos se aplica nicamente a los cartuchos intactos y conservados a la temperatura
4. No emplee m s de nueve tabletas Neo Sensitabs por cada placa de 150 mm o cuatro tabletas Neo Sensitabs por cada placa de 100 mm cuando analice H influenzae N gonorrhoeae y especies de Streptococcus DBV0004E 2 6 Rosco DIAGNOSTICA CE I 3 Incubaci n y lectura de las placas a Durante los 15 minutos siguientes ponga la placa invertida en un incubador a una temperatura de 35 C Las especies de Haemophilus N gonorrhoeae S pneumoniae y otros estreptococos se deben incubar en una atm sfera enriquecida con CO al 5 b Examine las placas una vez que hayan transcurrido 16 18 horas de incubaci n 20 24 horas para N gonorrhoeae S pneumoniae y otros estreptococos Se recomienda incubar durante 24 horas las placas para la detecci n del Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina y de las especies de Enterococcus resistente a la vancomicina Ponga la placa a contraluz y compruebe en las zonas de oxacilina y vancomicina si hay colonias diminutas resistentes a la meticilina o la vancomicina respectivamente en las zonas aparentes de inhibici n Cualquier crecimiento visible en la zona de inhibici n indica resistencia a la meticilina o a la vancomicina Los bordes de las zonas de inhibici n contienen gran cantidad de peque as colonias si se emplean Las tabletas para trimetoprima sulfonamidas y trimetoprima sulfametoxazol En este caso las zonas de inhibici n se miden hasta las colonias de tama o normal no tenga en cuenta los cr
5. Rosco DIAGNOSTICA CE Instrucciones para uso de NEO SENSITABS Revisi n DBVO0004F Fecha de Publicaci n 12 04 2013 Idioma Espa ol NEO SENSITABS Ensayos de sensibilidad a los antimicrobianos Fabricante Rosco Diagnostica A S Taastrupgaardsvej 30 DK 2630 Taastrup Dinamarca www rosco dk Uso previsto Las tabletas Neo Sensitabs se emplean en los ensayos semicuantitivos in vitro realizados para conocer la sensibilidad a los antimicrobianos mediante t cnicas de difusi n en agar con discos tabletas de organismos comunes poco exigentes de crecimiento r pido ciertos pat genos bacterianos exigentes y levaduras Principios del m todo Las tabletas Neo Sensitabs que contienen diferentes agentes antimicrobianos se dispensan en la superficie del agar adecuado que ha sido inoculado con cultivos puros de aislados cl nicos Los organismos poco exigentes como las especies de Enterobacteriaceae Staphylococcus Pseudomonas Acinetobacter Enterococcus y Vibrio cholerae pueden ser analizados en un medio de cultivo que no contenga sangre ni otros suplementos como el agar Mueller Hinton ll MH Para el an lisis de Haemophilus influenzae es necesario el empleo de medios de cultivo para el ensayo de Haemophilus HTM para el Neisseria gonorrhoeae es necesaria una base de agar GC GCA mientras que el Streptococcus pneumoniae y otros estreptococos necesitan agar Mueller Hinton II sangre al 5 MH B Las levaduras se pueden analizar
6. con agar RPMI 1640 o agar modificado de Shadomy mientras que para los organismos anaerobios se deben emplear procedimientos especiales Despu s de la incubaci n se examinan las placas y se mide y se compara el di metro de la zona de inhibici n alrededor de las tabletas con las tablas de interpretaci n de cada antibi tico con el fin de determinar cu les son los agentes antimicrobianos m s adecuados para un tratamiento Las tabletas Neo Sensitabs han sido estandarizadas de acuerdo con los valores l mite puntos de corte de concentraci n m nima inhibitoria MIC recomendados por el CLSI NCCLS y y EUCAST Adem s las tabletas Neo Sensitabs han sido ajustades a los puntos de corte de CMI recomendados por los Grupos de estandarizaci n de ensayos de sensibilidad Susceptibility Testing Standardization Groups en Francia y el Reino Unido Los criterios de interpretaci n de los di metros de zona para cada pa s se pueden encontrar en el Neo Sensitabs User s Guide Manual del usuario de Neo Sensitabs www rosco dk Reactivos Las tabletas Neo Sensitabs miden 9 mm y contienen agentes antimicrobianos cristalinos mezclados cuidadosamente con un granulado para su protecci n Las tabletas llevan impreso en ambos lados un c digo nico formado por 3 caracteres Las Dtabletas Neo Sensitabs se suministran en cartuchos de 50 tabletas cada uno Los cartuchos se pueden emplear con un dispensador de tabletas Neo Sensitabs El dispensador permite
7. e 0 08 y 0 19 I Instrucciones para uso Bacterias 1 1 Estandarizaci n del in culo de acuerdo con el CLSI NCCLS 3 y EUCAST M todo de suspensi n directa de colonias Se prepara una suspensi n de varias colonias morfol gicamente parecidas recogidas de una placa de agar no selectivo preparada 18 24 horas antes en 4 5 ml de una soluci n de NaCl al 0 9 obteniendose usia turbidez equivalente al est ndar de BaSO est ndar de 0 3 de McFarland Este m todo es equivalente al recomendado por el CLSI NCCLS y es m s r pido Se recomienda emplear este m todo para el an lisis de los organismos exigentes como las especies de Haemophilus N gonorrhoeae Moraxella catarrhalis neumococos estreptococos y para la detecci n de la resistencia potencial de los estafilococos a la meticilina o la oxacilina 1 2 Inoculaci n a En los 15 minutos siguientes sumerja una torunda de algod n est ril en la suspensi n ajustada y retire el exceso de in culo de la torunda presionando firmemente el interior del tubo b Las torundas se deben utilizar en los 15 minutos siguientes para inocular las placas de ensayo c Inocule la superficie seca de la placa de agar adecuada frotando la torunda sobre la superficie Deje secar la superficie durante 3 5 minutos o como m ximo durante 15 minutos antes de dispensar las tabletas Neo Sensitabs en el medio de cultivo d Seleccione las tabletas adecuadas por ejemplo las recomendadas por el CLSI NCCLS
8. ea un lote de agar diferente El di metro medido se debe encontrar dentro de los l mites de la combinaci n espercificar de la tableta Neo Sensitabs correspondiente y las cepas de control Los l mites de las cepas de control se detallan en las tablas y son indicativos del funcionamiento correcto de todo el procedimiento RESULTADOS DBV0004E 3 6 Rosco DIAGNOSTICA CE Se debe comparar el di metro observado de la zona con los indicados en las tablas Los resultados de un organismo determinado pueden ser sensible S intermedio I o resistente Ry Sensible S La infecci n causada por la cepa analizada debe responder a una dosis normal del agente antimicrobiano presente en el comprimido Si s lo se especifican los criterios S En el caso de algunas combinaciones de organismos antimicrobianos la ausencia de cepas resistentes determina la categor a sensible En el caso de las cepas cuyos resultados puedan clasificarse como no sensibles se deben confirmar los resultados de la identificaci n del organismo y del ensayo de sensibilidad antimicrobiana Adem s los aislados se deben enviar a un laboratorio de referencia para realizar an lisis complementarios Intermedio I Esta categor a implica el empleo cl nico en aquellas partes del cuerpo en las que los f rmacos se concentran por ejemplo en la orina o si se pueden emplear dosis elevadas de agentes antimicrobianos por ejemplo betalact micos En esta catego
9. ecimientos ligeros y mida el borde m s visible Para m s informaci n consulte el User s Guide Neo Sensitabs Manual del usuario de Neo Sensitabs www rosco dk c El di metro de las zonas de inhibici n completa se determina mediante examen visual Las zonas se miden mil metro m s cercano Il I Instrucciones de uso Levaduras II 1 Preparaci n del in culo El in culo debe resultar en un crecimiento confluente En el caso de la mayor a de las cepas el in culo debe contener aproximadamente 5x107CFU ml est ndar de 0 5 de McFarland diluido al 1 1 con soluci n salina Si se desea analizar Candida krusei deber utilizarse un in culo equivalente al est ndar de 0 5 de McFarland diluido al 1 10 y para las especies de Cryptococcus se debe usar un in culo equivalente al est ndar de 1 0 de McFarland sin diluir 11 2 Inoculaci n a Las placas se secan durante 20 25 minutos a una temperatura de 35 C antes de inocularlas b Se debe verter 0 5 ml placa de 9 cm o 1 0 ml placa de 14 cm del in culo preparado sobre la superficie del agar inundaci n y se debe retirar el exceso de l quido con la ayuda de una pipeta c La placa abierta se debe secar a una temperatura de 35 C durante 10 minutos y posteriormente se deben dispensar las tabletas sobre la superficie del agar 11 3 Incubaci n y lectura de las placas Para la mayor parte de las cepas aisladas de infecciones sist micas es adecuada la incubaci n a una tempera
10. es de Salmonella y Shigella Las cefalosporinas frente a especies de Listeria Glicop ptidos contra S aureus con sensibilidad reducida a la Vancomicina Las Cefalosporinas y Aztreonam frente a cepas de E coli K pneumoniae y P mirabilis productoras de BLEES Los informes rutinarios de los resultados obtenidos con cepas aisladas de muestras de l quido cefalorraqu deo pueden causar errores peligrosos en la elecci n de la terapia en los casos siguientes F rmacos administrados exclusivamente por v a oral Las cefalosporinas de primera y segunda generaci n excepto cefuroxima s dica Clindamicina Macr lidos Tetraciclinas Fluoroquinolonas Algunos agentes antimicrobianos est n asociados a la aparici n de resistencias durante las terapias prolongadas Como consecuencia los aislados inicialmente sensibles pueden hacerse resistentes en el plazo de unos d as despu s del comienzo del tratamiento Esto ocurre con mayor frecuencia con e Las especies de Enterobacter Citrobacter y Serratia con las cefalosporinas de tercera generaci n e Pseudomonas aeruginosa con la mayor a de los agentes antimicrobianos e Los estafilococos con las quinolonas Esencialmente todos los aislados de Enterobacter aerogenes E cloacae Citrobacter freundii las especies de Providencia y Proteus con la excepci n de P mirabilis Serratia marcescens y P aeruginosa tienen los genes responsables de la producci n de betalactamasa del grupo I Por lo tanto
11. hVISA y VISA GISA no pueden ser detectadas por los m todos actuales de difusi n M s informaci n en la Gu a del Usuario de Neo Sensitabs www rosco dk Enterococos resistentes a la vancomicina VRE Para realizar el m todo de difusi n con el objeto de detectar los enterococos resistentes a la vancomicina es necesario seguir el procedimiento siguiente 1 Utilice Las tabletas Neo Sensitabs Vancomicina 5 ug 2 Incube durante 24 horas 3 Examine cuidadosamente la zona de inhibici n Las cepas sensibles tendr n un borde definido mientras que el borde de las cepas resistentes ser difuso Para m s informaci n consulte el User s Guide Neo Sensitabs Manual del usuario de Neo Sensitabs www rosco dk Resistencia de alto nivel a los aminogluc sidos HLR La resistencia de alto nivel a los aminogluc sidos indica que un aislado de enterococo no es afectado sin rgicamente por una combinaci n de penicilina o un glucop ptido y un aminogluc sido El cribado de alto nivel de resistencia frente a la gentamicina y la estreptomicina se debe realizar con aislados de enterococos obtenidos de muestras de sangre o de l quido cefalorraqu deo Las tabletas Neo Sensitabs con concentraciones elevadas como Gentamicina 250 ug Kanamicina 500 ug y Estreptomicina 500 ug se emplean en el cribado de este tipo de resistencia DBV0004E 4 6 Rosco DIAGNOSTICA CE LIMITACIONES DE LOS M TODOS DE DIFUSI N Las tabletas Neo Sensitabs perm
12. iten realizar an lisis r pidos y precisos de la sensibilidad frente a los agentes antimicrobianos Los resultados aceptables obtenidos con las cepas empleadas en el control de calidad no garantizan la precisi n de todos los resultados obtenidos con los aislados de muestras de pacientes Si se obtienen resultados at picos o incongruentes se deber repetir el ensayo el procedimiento de identificaci n o ambos con el fin de asegurar la precisi n de los resultados Los resultados inesperados se deben tener en cuenta en el informe mientras que los cepas pueden enviarse a laboratorios de referencia para realizar an lisis complementarios Se pueden obtener resultados potencialmente equ vocos al analizar ciertos agentes antimicrobianos frente a determinados microorganismos Los mecanismos de resistencia de algunas especies son m s dif ciles de detectar que otros y algunos antibi ticos pueden parecer activos in vitro aunque los agentes antimicrobianos no sean efectivos cl nicamente Entre estas combinaciones se incluyen las siguientes e Todos los antibi ticos betalact micos excepto la oxacilina y la meticilina frente a los estafilococos resistentes a la meticilina e Las cefalosporinas aminogluc sidos excepto los ensayos para la determinaci n de la resistencia a alto nivel la clindamicina y la trimetoprima sulfametoxazol frente a los enterococos e Las cefalosporinas de primera y segunda generaci n y los aminogluc sidos frente a especi
13. la demostraci n de la inducci n in vitro de la enzima no proporciona ninguna informaci n til Los laboratorios se deber n centrar en repetir los an lisis cada 3 4 d as con los aislados recogidos repetidamente de pacientes durante la terapia con el fin de detectar la selecci n de los clones que producen la betalactamasa del grupo I REFERENCIAS 1 Neo Sensitabs User s Guide 2013 www rosco dk 2 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2004 Methods for antimicrobial susceptibility testing of anaerobic bacteria Approved Standard M11 A6 6th ed NCCLS Wayne Pa USA 3 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2009 Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests Approved Standard M2 S10 NCCLS Wayne Pa USA 4 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2002 Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for bacteria isolated from animals Approved Standard M31 A2 2nd ed NCCLS Wayne Pa USA 5 Ericsson H M and J C Sherris 1971 Antibiotic susceptibility testing Report of an international collaborative study Acta Path Microbiol Scand Sec B Suppl 217 1 90 6 Clinical and Laboratory Standards Institute NCCLS 2013 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing M100 5823 23rdInformationalSupp CLSL Wayne Pa USA DBV0004E 5 6
14. r a intermedia se incluye tambi n una zona de tamp n que sirve para evitar que factores insignificantes e incontrolados de tipo t cnico puedan causar discrepancias importantes en la interpretaci n De esta manera si una zona se encuentra en el intervalo intermedio los resultados se pueden considerar como equ vocos y si no existen f rmacos alternativos se recomienda realizar an lisis de concentraci n m nima inhibitoria MIC Resistente R No se puede recomendar en este caso el tratamiento con el agente antimicrobiano en cuesti n Ensayos de cribado y confirmatorios para las betalactamasas de espectro extendido ESBL Se han descrito betalactamasas codificadas por pl smidos transferibles que causan resistencia frente a las cefalosporinas de tercera generaci n y los monobactamos por ejemplo el aztreonam en algunas cepas de Klebsiella pneumoniae K oxytoca E coli y otras enterobacteri ceas Estas enzimas se clasifican como betalactamasas de espectro extendido y se las relaciona con la resistencia cl nica a los monobactamos y las cefalosporinas de espectro amplio Algunas de estas cepas presentar n zonas de inhibici n inferiores a las cepas sensibles normales pero superiores a los puntos de corte est ndar de ciertas cefalosporinas de amplio espectro o del aztreonam Estas cepas se pueden discriminar empleando puntos de corte adecuados para el cribado de betalactamasas de espectro extendido La mayor a de las betalactamasas de
15. tura de 35 C durante una noche Las placas se deben examinar y leer transcurridas entre 18 y 24 horas Si no es visible todav a el crecimiento en ciertas cepas las placas se pueden volver a incubar durante 24 horas m s como m ximo En el caso de las especies de Cryptococcus se pueden incubar las placas a una temperatura de 30 C durante 42 48 horas 11 4 Lectura de las zonas de inhibici n En el caso de los polienos anfotericina B y nistatina se debe medir la zona clara sin crecimientos visibles Para estos antif ngicos estas colonias dentro de esta zona se deben considerar como mutantes resistentes En el caso de los azoles imidazoles y la terbinafina las zonas se deben medir hasta llegar a las colonias de tama o normal Frecuentemente el tama o de las zonas de inhibici n de las colonias parcialmente inhibidas son m s peque as cerca del comprimido que en el borde de la zona real Estas colonias de tama o peque o y mediano no son mutantes resistentes Las tabletas Neo Sensitabs de Imidazoles Azoles contienen doxiciclina para de esta manera facilitar la lectura de las zonas En el caso de la fluorocitosina se debe medir la zona hasta alcanzar las colonias de tama o normal Las colonias individuales dentro de esta zona suelen ser mutantes resistentes se deber n aislar y analizar de nuevo CONTROL DE CALIDAD INTERNO El procedimiento de control de calidad con cepas ATCC se debe realizar al menos semanalmente y cada vez que se empl
Download Pdf Manuals
Related Search