(Dako Autostainer/Autostainer Plus) Code IS653
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1. 117383 003 Le systeme de visualisation recommand est le EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 Les tapes de coloration et les temps d incubation sont pr programm s dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume d application de 200 uL ou FLEXRTU3 volume d application de 300 uL Programme automatique ZAP70 sans contre coloration ou ZAP70H avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations2. 4 CE FLEX Monoclonal Mouse Anti Human ZAP 70 Clone 2F3 2 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus on ion Code 1S653 Performance characteristics ENGLISH Intended use For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human ZAP 70 Clone 2F3 2 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody is useful for identification of ZAP 70 in a subset of chronic Iymphocytic leukemias 1 2 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist Summary ZAP 70 amp associated protein of 70 kDa is a tyrosine kinase of the Syk family that plays a critical role in triggering the signaling cascade in response to and explanation T cell receptor stimulation 1 It is primarily expressed in T cells and natural killer NK cells 1 6 but is also detectable in mast cells and basophils 2 ZAP 70 is also expressed in normal pro pre B cells but not in normal mature B cells 4 ZAP 70 is expressed in B cells in a subset of chronic Iymphocytic leukemias CLL closely associated with an unmutated configuration of the immunoglobulin heavy chain variable region IgV genes 1 3 5 6 The precise functional significa
3. formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 ist erforderlich Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 erzielt werden Paraffineingebettete Schnitte Die Vorbehandlung der formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitte mit dem 3 in 1 Probenvorbereitungsverfahren f r Dako PT Link wird empfohlen Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 durchf hren Hinweis Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und mit permanentem Einbettmedium auf den Objekttr ger aufgebracht werden Entparaffinierte Schnitte Eine Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit Dako PT Link nach demselben Verfahren wie f r die paraffineingebetteten Schnitte beschrieben wird empfohlen Die Objekttr ger nach dem F rben mit einem w ssrigen oder permanenten Einbettmedium bedecken Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte
4. l anticorps a marqu les lymphocytes T n oplasiques dans 45 cas sur 62 de n oplasme malin lymphocytes T mais aucun cas sur 41 de leuc mie my log ne aigu L anticorps n a marqu les cellules de Hodgkin que dans 2 cas sur 136 de Iymphomes de Hodgkin Pour les n oplasmes malins lymphocytes B l anticorps a marqu les lymphocytes B n oplasiques dans 12 cas sur 26 de lymphome lymphocytaire 4 cas sur 76 de lymphome diffus grands lymphocytes B un cas sur 6 de lymphome cellules du manteau 7 cas sur 24 de leuc mie lymphoblastique aigu lymphocytes B lymphomes lymphoblastiques L anticorps n a pas marqu les lymphocytes B n oplasiques dans 22 cas de lymphome de la zone marginale 40 cas de lymphome folliculaire 6 cas de lymphome de Burkitt ni dans 5 cas de lymphome lymphoplasmocytaire 6 Dans toutes les tudes mentionn es l anticorps marqu les lymphocytes T sains 1 2 6 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human ZAP 70 Klon 2F3 2 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper eignet sich zur Identifizierung von ZAP 70 bei einer Untergruppe chronisch Iymphatischer Leuk mien 1 2 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit geeigneten Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen
5. pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include tonsil and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code 1S750 The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Link Code K8000 The staining steps and incubation times are pre programmed 117383 003 IS653 EFG MNIV 2009 12 04 p 1 4 117383 003 into the Autostainer Link software Please refer to the proper Autostainer Link User Guide for detailed instructions on loading slides and reagents If the protocols are not available on the used Autostainer platform please contact Dako Technical Services All incubation steps should be performed at room temperature Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory Ifthe evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist T
6. sur la reprogrammation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d hematoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre l amygdale et les cellules structures doivent pr senter les sch mas de r action d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code 1S750 Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent une coloration cytoplasmique et nucl aire Tissus sains l anticorps marque les lymphocytes T dans les tissus lympho des tels que l amygdale et le tissu lympho de associ aux intestins ainsi que dans d autres tissus test s y compris le c lon le rein le foie le pancr as et la prostate Occasionnellement l anticorps marque les v sicules cytoplasmiques dans les tubules proximaux du rein Le cytoplasme des cellules nerv
7. unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer diagnostischer Tests des Patienten vorgenommen werden ZAP 70 Z assoziiertes Protein mit einem Molekulargewicht von 70 kDa ist eine Tyrosinkinase der Syk Familie die eine wichtige Rolle beim Ausl sen der Signalkaskade als Reaktion auf eine Stimulation der T Zell Rezeptoren spielt 1 Es wird vorwiegend in T Zellen und nat rlichen Killerzellen NK Zellen 1 6 exprimiert ist jedoch auch in Mastzellen und Basophilen nachweisbar 2 ZAP 70 wird auch in normalen Pro Pr B Zellen exprimiert nicht jedoch in normalen reifen B Zellen 4 ZAP 70 wird bei einer Untergruppe chronisch Iymphatischer Leuk mien CLL in B Zellen exprimiert die eng mit einer unmutierten Konfiguration der IgV Gene immunoglobulin heavy chain variable region genes assoziiert sind 1 3 5 6 Welche Tragweite die Rolle von ZAP 70 in dieser Untergruppe von CLL B Zellen hat ist nicht genau bekannt Es gibt Indizien daf r dass ZAP 70 bei CLL eine effektivere IgM Signal bertragung in CLL B Zellen bewirkt was den weiteren Krankheitsverlauf erkl ren w rde 5 Au erdem exprimieren einige B Zell 1 6 und T Zell Neoplasmen ZAP 70 6 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Pro
8. ZAP 70 expression in B cell hematologic malignancy is not limited to CLL SLL Am J Clin Pathol 2004 122 582 7 7 Iwashima M Irving BA van Oers NSC Chan AC Weiss A Sequential interactions of the TCR with two distinct cytoplasmic tyrosine kinases Science 1994 263 1136 9 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole 117383 003 Catalogue number R f rence catalogue Bestellnummer In vitro diagnostic medical device Dispositif m dical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostikum Consult instructions for use Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Temperature limitation Use by Limites de temp rature Utiliser avant Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis Manufacturer Fabricant Hersteller Contains sufficient for lt n gt tests Contenu suffisant pour lt n gt tests Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Batch code Num ro de lot Chargenbezeichnung IS653 EFG MNI 2009 12 04 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17
9. aining procedure The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 The staining steps and including materials incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols required but not supplied Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTU3 300 uL dispense volume Autoprogram ZAP70 without counterstaining or ZAP70H with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to Pr paration des none This ascertains comparable wash times chantillons All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the y compris le materiel protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services requis mais non fourni Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory Ifthe evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining
10. an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen Als Visualisierungssystem wird EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 empfohlen Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 ul Anwendungsvolumen oder FLEXRTU3 300 ul Anwendungsvolumen Autoprogramm ZAP70 ohne Gegenf rbung oder ZAP70H mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dies gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen D
11. at cells T Iymphoblastic cell line the antibody labels a band of 70 kDa protein 6 In Western blotting of cell lysates of A431 cells carcinoma cell line no band is observed 6 Precautions 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin no 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations R actifs fournis Storage Store at 2 8 Do not use after expiration date sta mped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a Immunogene problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support Specificite Specimen preparation The antibody can be used for lab
12. be 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Klone 2F3 2 Isotyp IgG2a kappa Rekombinantes ZAP 70 Protein darunter R ckst nde 1 254 und umgebende SH2 Dom nen von humanem ZAP 70 7 Beim Western Blotting von Ganzzell Lysaten normaler mononukle rer Zellen des peripheren Bluts markiert der Antik rper eine Bande die ZAP 70 entspricht 2 Beim Western Blotting von Ganzzell Lysaten CD19 positiver aufgereinigter Leuk miezellen von Patienten mit Ig unmutierter und Ig mutierter CLL markiert der Antik rper eine Bande die ZAP 70 in den Ig unmutierten CLL Proben entspricht w hrend bei den Ig mutierten CLL Proben keine Bande zu sehen ist 2 Beim Western Blotting von Zelllysaten von Jurkat Zellen T Iymphoblastische Zelllinie markiert der Antik rper eine Bande eines Proteins mit einem Molekulargewicht von 70 kDa 6 Beim Western Blotting von Zelllysaten von A431 Zellen Karzinom Zelllinie ist keine Bande zu sehen 6 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Ent
13. c dure de pr traitement indiqu e dans la notice de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Remarque apr s coloration les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes tissulaires d paraffin es fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link en suivant la m me proc dure que pour les coupes incluses en paraffine Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommand Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides R f K8020 IS653 EFG MNI 2009 12 04 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance DEUTSCH Zweckbestimmung Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifitat Vorsichtsma nahmen Lagerung
14. echnical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Link Code K8008 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include tonsil and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Link Code IR750 Cells labeled by the antibody display cytoplasmic and nuclear staining Normal tissues The antibody labels T cells in lymphoid tissues such as tonsil and gut associated Iymphoid tissue as well as in other tested tissues including colon kidney liver pancreas and prostate Occasionally the antibody labels cytoplasmic vesicles in the proximal tubuli of the kidney The cytoplasm of nerve cells is occasional labeled in cerebellum and in the peripheral nerve cells in colon Cytoplasmic vesicles are also occasional labeled in hepatocytes and bile duct epithelial cells of the liver and in pancreatic islets and ducts I
15. eling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately including materials 4 um required but not supplied Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Paraffin embedded sections Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using the 3 in 1 specimen preparation Pr cautions procedure for Dako PT Link Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Note After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link and following the same procedure as described for paraffin embedded sections After staining the slides should be mounted using aqueous or permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended Conservation St
16. es of Burkitt s lymphomas nor in 5 cases of lymphoplasmacytic lymphomas 6 In all mentioned studies the antibody labeled normal T cells 1 2 6 Pour utilisation lors d un diagnostic in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human ZAP 70 Clone 2F3 2 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus L anticorps est utile pour l identification du ZAP 70 dans un sous ensemble de leuc mies lymphocytaires chroniques 1 2 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi La ZAP 70 prot ine de 70 kDa associ e la s quence est une tyrosine kinase de la famille Syk jouant un r le essentiel dans le d clenchement des signaux en cascade en r ponse la stimulation des r cepteurs des lymphocytes T 1 Elle est exprim e principalement dans les lymphocytes T et les cellules tueuses naturelles NK 1 6 mais est galement d tectable dans les mastocytes et les basophiles 2 La ZAP 70 s exprime galement dans les prog niteurs pr curseurs des lymphocytes B sains mais pas dans les lymphocytes B sains matures 4 La ZAP 70 est exprim e dans les lymphocytes B d un sous ensemble de le
17. euses est marqu occasionnellement dans le cervelet et dans les cellules nerveuses p riph riques du c lon Les v sicules cytoplasmiques sont galement marqu es occasionnellement dans les h patocytes et les cellules pith liales du canal biliaire du foie et dans les lots et les conduits pancr atiques En plus des lymphocytes T l anticorps marque fortement le cytoplasme des cellules pith liales des tubules distaux et collecteurs du rein Les lymphocytes T isol s des centres germinatifs des amygdales pr sentent une coloration mod r e forte tandis que la coloration des amas de lymphocytes T dans la zone T tait faible mod r e Tissus tumoraux Dans les n oplasmes lymphocytes B l anticorps marque les lymphocytes B n oplasiques dans 34 cas sur 52 de CLL 9 cas sur 29 de Iymphomes de Burkitt 2 cas sur 7 de lymphomes Iymphoblastiques 3 cas sur 36 de lymphomes cellules du manteau un cas sur 23 de lymphome de la zone marginale et un cas sur 45 de Iymphomes diffus grands lymphocytes Aucun lymphocyte B n tait marqu dans 19 cas de lymphomes folliculaires et 14 cas de lymphomes de Hodgkin 1 Dans une autre tude l anticorps a marqu des lymphocytes B n oplasiques dans un sous ensemble de CLL sur des biopsies de moelle osseuse des biopsies par aspiration et des pellets cellulaires sur paraffine de mononucl aires de sang p riph rique 2 Dans une tude portant sur divers n oplasmes h matopo tiques malins
18. ie Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Mandelgewebe enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS750 Mit diesem Antik rper markierte Zellen weisen ein zytoplasmatisches und nukle res F rbemuster auf Gesundes Gewebe Der Antik rper markiert T Zellen in lymphoiden Geweben z B Mandelgewebe darmassoziierte Iymphoide Gewebe sowie in anderen getesteten Geweben einschlie lich Dickdarm Nieren Leber Pankreas und Prostata Gelegentlich markiert der Antik rper zytoplasmische Vesikel in den proximalen Nierentubuli Manchmal wird das Zytoplasma von Nervenzellen des Kleinhirns und von peripheren Nervenzellen des Darms markiert Gelegentlich werden auch zytoplasmische Vesikel in Hepatozyten und Gallenweg
19. locales et nationales Conserver entre 2 et 8 OC Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur II ny a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L amp paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Un pr traitement avec demasquage d Epitope induit par la chaleur HIER est n cessaire avec le Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de details se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Coupes incluses en paraffine le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide de la proc dure de pr paration d chantillon 3 en un pour le Dako PT Link Suivre la pro
20. lzelllymphomen und 7 24 akuten Iymphatischen B Zell Leuk mien Lymphomen Nicht markiert hat der Antik rper B Zellen in 22 F llen von Marginalzonenlymphomen 40 F llen von Follikel Lymphomen 6 F llen von Burkitt Lymphomen und 5 F llen von Iymphoplasmazytischen Lymphomen 6 Bei allen hier erw hnten Studien markierte der Antik rper normale T Zellen 1 2 6 References References Literatur 1 Carreras J Villamor N Colomo L Moreno C Cajal S Crespo M et al Immunohistochemical analysis of ZAP70 expression in B cell lymphoid neoplasms J Pathol 2005 205 507 13 2 Wiestner A Rosenwald A Barry TS Wright G Davis RE Henrickson SE et al ZAP 70 expression identifies a chronic lymphocytic leukemia subtype with unmutated immunoglobulin genes inferior clinical outcome and distinct gene expression profile Blood 2003 101 4944 51 3 Keating MJ Chiorazzi N Messmer B Damle RN Allen SL Rai KR et al Biology and Treatment of chronic Iymphocytic leukemia review Hematology 2003 153 75 4 Crespo M Villamor N Gin E Munta ola A Colomer D Marafioti T et al ZAP 70 expression in normal pro pre B cells mature B cells and in B cell acute lymphoblastic leukemia Clin Cancer Res 2006 12 726 34 5 Chen L Apgar J Huynh L Dicker F Giago McGahan T Rassenti L et al ZAP 70 directly enhances IgM signaling in chronic lymphocytic leukemia Blood 2005 105 2036 41 6 Sup SJ Domiati Saad R Kelley TW Steinle R Zhao X Hsi ED
21. n addition to T cells the antibody prominently labels the epithelial cell cytoplasma of distale tubuli and collecting ducts in kidney Isolated T cells in the germinal centers in the tonsil show a moderate to strong staining reaction whereas crowded T cells in the T zone show a weak to moderate staining reaction Abnormal tissues In B cell neoplasms the antibody labeled neoplastic B cells in 34 52 CLL 9 29 Burkitt s lymphomas 2 7 Iymphoblastic lymphomas 3 36 mantle cell lymphomas 1 23 marginal zone lymphomas and 1 45 diffuse large B cell lymphomas No B cells were labeled in 19 cases of follicular lymphomas and 14 cases of Hodgkin s lymphomas 1 In another study the antibody labeled neoplastic B cells in a subset of CLLs in both bone marrow biopsies aspirate sections and paraffin cell pellets of peripheral blood mononuclear cells 2 In a study of various hematopoietic malignant neoplasms the antibody labeled the neoplastic T cells in 45 62 T cell malignant neoplasms but in 0 41 of acute myelogenous leukemia Only in 2 136 Hodgkin s lymphomas the antibody labeled Hodgkin s cells Of the B cell malignant neoplasms the antibody labeled neoplastic B cells in 12 26 small lymphocytic lymphomas 4 76 diffuse large B cell lymphomas 1 6 mantle cell lymphomas 7 24 B cell acute lymphoblastic leukemias lymphoblastic lymphomas The antibody did not label neoplastic B cells in 22 cases of marginal zone lymphomas 40 cases of follicular lymphomas 6 cas
22. nce of ZAP 70 in this subset of CLL B cells is unknown Some data indicates that expression of ZAP 70 in CLL allows more effective IgM signaling in CLL B cells which could explain the disease FRAN AIS progress 5 Also some other B cell neoplasms 1 6 and T cell neoplasms express ZAP 70 6 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Utilisation prevu Reagent provided Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Clone 2F3 2 Isotype IgG2a kappa Immunogen Recombinant ZAP 70 protein including residues 1 254 and encompassing SH2 domains of human ZAP 70 7 R sum Specificity In Western blotting of whole cell lysates of normal peripheral blood mononuclear cells the antibody labels a band corresponding to ZAP 70 2 et explication In Western blotting of whole cell lysates of CD19 positive purified leukemia cells from patients with Ig unmutated and Ig mutated CLL the antibody labels a band corresponding to ZAP 70 in the Ig unmutated CLL samples whereas no band is observed in the Ig mutated CLL samples 2 In Western blotting of cell lysates of Jurk
23. sepithelzellen der Leber sowie Pankreasinseln und g ngen markiert Zus tzlich zu T Zellen markiert der Antik rper haupts chlich das Epithelzellenzytoplasma der distalen Tubuli und Sammelg nge der Niere Isolierte T Zellen in den Keimzentren der Mandeln weisen eine m ige bis starke F rbereaktion auf w hrend die eng gepackten T Zellen in der T Zone eine schwache bis m ige F rbereaktion aufweisen Pathologisches Gewebe Bei B Zell Neoplasmen markierte der Antik rper neoplastische B Zellen bei 34 52 CLL 9 29 Burkitt Lymphomen 2 7 lymphoblastischen Lymphomen 3 36 Mantelzell Lymphomen 1 23 Marginalzonenlymphomen und 1 45 diffus gro zelligen B Zell Lymphomen Bei 19 F llen von Follikel Lymphomen und 14 F llen von Hodgkin Lymphomen wurden keine B Zellen markiert 1 Bei einer anderen Studie markierte der Antik rper neoplastische B Zellen in einer Untergruppe von CLLs bei Knochenmarkbiopsien Aspiratschnitten und Paraffin Zellpellets mononukle rer Zellen aus peripherem Blut 2 Beieiner Studie mit verschiedenen h matopoetischen malignen Neoplasmen markierte der Antik rper die neoplastischen T Zellen bei 45 62 malignen T Zell Neoplasmen aber bei 0 41 F llen akuter myeloischer Leuk mie Nur bei 2 136 Hodgkin Lymphomen markierte der Antik rper Hodgkin Zellen Von den malignen B Zell Neoplasmen markierte der Antik rper neoplastische B Zellen bei 12 26 kleinzelligen Iymphatischen Lymphomen 4 76 diffus groBzelligen B Zell Lymphomen 1 6 Mante
24. sorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen IS653 EFG MNIV 2009 12 04 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Auswertung der F rbung Leistungsmerkmale Der Antik rper eignet sich zur Markierung von
25. ticorps marque une bande correspondant la ZAP 70 2 Par Western blot de lysats totaux de cellules leuc miques purifi es positives au CD 19 provenant de patients atteints de CLL Ig non mut e et Ig mut e l anticorps marque une bande correspondant la ZAP 70 dans les chantillons de CLL Ig non mut e alors qu aucune bande n est observ e dans les chantillons de CLL Ig mut e 2 Par Western blot de lysats de cellules de Jurkat lign e cellulaire lymphoblastique T anticorps marque une bande de prot ine de 70 kDa 6 Par Western blot de lysats de cellules A431 lign e cellulaire de carcinome aucune bande n a t observ e 6 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations
26. uc mies Iymphocytaires chroniques CLL fortement associ es une configuration non mut e des g nes de la s quence variable IgV de la cha ne lourde d immunoglobuline 1 3 5 6 La signification fonctionnelle pr cise de la ZAP 70 dans ce sous ensemble de CLL lymphocytes B est inconnue Certaines donn es indiquent que l expression de la ZAP 70 dans les CLL permet un signal IgM plus efficace dans les CLL lymphocytes B ce qui pourrait expliquer la progression de la maladie 5 Certains autres n oplasmes lymphocytes B 1 6 et lymphocytes T expriment galement la ZAP 70 6 Se r f rer aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone 2F3 2 Isotype IgG2a kappa Proteine recombinante ZAP 70 comprenant des residus 1 254 et englobant les domaines SH2 de la ZAP 70 humaine 7 Par Western blot de lysats totaux de mononucl aires sains du sang p riph rique l an
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