FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD246, ALK Protein
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1. FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD246 ALK Protein Clone ALK1 Ready to Use CE Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS641 ENGLISH Intended use Synonym for antigen Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied 117499 002 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD246 ALK protein Clone AKL1 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody labels normal human ALK protein and the NPM ALK chimeric protein and is useful for the identification of the subgroup of anaplastic large cell lymphomas ALCL that are ALK positive 1 2 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist CD246 3 The wild type anaplastic lymphoma kinase ALK protein is a 200 kDa transmembrane receptor tyrosine kinase 4 Postnatal ALK expression is restricted to a few scattered cells in the nervous system some glial cells and neurons and a few endothelial cells and pericytes 1 About 72 52. La prot ine kinase ALK de type sauvage du lymphome anaplasique est un r cepteur tyrosine kinase transmembranaire de 200 kDa 4 L expression postnatale de l ALK est limit e quelques cellules parpill es dans le syst me nerveux certaines cellules gliales et neurones et quelques cellules endoth liales et p ricytes 1 Environ 72 5 des LAGC positifs ALK sont associ s une translocation chromosomique 2 5 o le g ne codant pour la nucl ophosmine NPM situ en 5q35 fusionne avec le g ne ALK situ en 2p23 Lors de cette fusion la partie du g ne NPM codant pour la r gion terminale N de la prot ine NPM est juxtapos e la partie du g ne ALK codant pour toute la r gion cytoplasmique de la prot ine ALK Par cons quent le gene ALK passe sous contr le de l acc l rateur NPM ce qui provoque une transcription permanente et g n rale du g ne hybride NPM ALK et d bouche sur la production d une prot ine chim rique NPM ALK de 80 kDa 4 Dans 3 grandes s ries de LAGC 15 28 des lymphomes positifs ALK chimerique taient n gatifs la translocation t 2 5 et le principal autre g ne impliqu dans la fusion tait identifi comme le g ne tropomyosine 3 repr sentant 17 5 des cas de LAGC positifs PALK 4 Se r f rer aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant
3. Hodgkin s like ALCL was positive for ALK All 50 cases of classical Hodgkin lymphoma were unlabelled as were a wide range of other lymphomas and leukemias analyzed 1 In another study 2 51 36 70 cases of ALCL were positive with the antibody including 15 42 T cell 16 44 null and 5 14 B cell cases None of these B cell cases had the morphology and immunophenotype of the rare large B cell lymphomas positive for ALK but negative for CD30 reported by Delsol et al 5 suggesting that true B cell ALK ALCL does exist In anaplastic large cell lymphoma with t 2 5 translocation scattered neoplastic cells show a moderate to strong staining reaction Pour utilisation lors d un diagnostic in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD246 ALK protein Clone AKL1 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps marque les prot ines ALK et la prot ine chim rique NPM ALK humaines normales et permet l identification du sous groupe de Iymphomes anaplasiques grandes cellules LAGC positifs l ALK 1 2 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi CD246 3
4. n a t observ e lorsque la lign e cellulaire 293T n a t transfect e qu avec le vecteur 1 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures
5. t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Es ist eine Vorbehandlung mit hitzeinduzierter Epitopdemaskierung HIER Verfahren erforderlich Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8015 erzielt werden Entparaffinierte Schnitte Die Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte sollte mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 erfolgen Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8015 durchf hren F r PT Link sollten die folgenden Parameter verwendet werden Vorw rmtemperatur 65 Temperatur und Zeit f r Epitopdemaskierung 97 f r 20 1 Minuten auf 65 abk hlen Das Autostainer Objektktr gergestell mit den Objekttr
6. Blood 1999 93 3913 21 3 Pulford K Mason DY TC5 CD246 ALK cluster report In Mason D Andr P Bensussan A Buckley C Civin C Clark E et al editors Leucocyte typing VII White cell differentiation antigens Proceedings of the 7th International Workshop and Conference 2000 Jun 19 23 Harrogate United Kingdom New York Oxford University Press Inc 2002 p 694 6 Stein H Foss H D D rkop H Marafioti T Delsol G Pulford K et al CD30 anaplastic large cell lymphoma a review of its histopathologic genetic and clinical features Blood 2000 96 3681 95 Delsol G Lamant L Mariam B Pulford K Dastugue N Brousset P et al A new subtype of large B cell lymphoma expressing the ALK kinase and lacking the 2 5 translocation Blood 1997 89 148 3 90 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole 117499 002 Catalogue number Reference catalogue Bestellnummer In vitro diagnostic medical device Dispositif medical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostikum Consult instructions for use Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Temperature limitation Use by Limites de temperature Utiliser avant Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis Manufacturer Fabricant Contains sufficient for lt n gt tests Contenu suffisant pour lt n gt tests Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Hersteller Batch code Numero de lot Chargenbezeichnung IS64
7. of ALK positive ALCL are associated with a 2 5 chromosomal translocation where the nucleophosmin NPM gene located at 5q35 fuses with the ALK gene located at 2p23 With the fusion the portion of the NPM gene encoding the N terminal part of the NPM protein is juxtaposed to the part of the ALK gene that codes for the entire cytoplasmic region of the ALK protein As a consequence the ALK gene comes under the control of the NPM promoter which induces a permanent and ubiquitous transcription of the NPM ALK hybrid gene resulting in the production of a 80 kDa NPM ALK chimeric protein 4 In 3 large series of ALCL 15 28 of chimeric ALK positive lymphomas were negative for the t 2 5 translocation and the main alternative fusion gene was identified as the tropomyosin 3 gene representing 17 5 ofthe ALK positive ALCL cases 4 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Clone ALK1 1 Isotype IgG3 kappa DHFR ALK recombinant protein comprising mouse dihydrofolate reductase DHFR and amino acids 1359 1460 of the fu
8. von 26 F llen 88 5 positiv als bei Erwachsenen 16 von 47 F llen 34 0 Mit wenigen Ausnahmen wurden alle malignen Zellen jeder positiven Probe stark markiert Nur 1 von 17 F llen von Hodgkin artiger ALCL reagierte positiv auf ALK Alle 50 F lle klassischer Hodgkin Lymphome blieben unmarkiert ebenso wie eine breite Palette anderer untersuchter Lymphome bzw Leuk mief lle 1 In einer weiteren Studie 2 reagierten 51 36 von 70 der ALCL F lle positiv mit dem Antik rper darunter 15 42 T Zell 16 44 Null Zell und 5 14 B Zell Lymphome Keiner der F lle von B Zell Lymphomen wies die Morphologie und den Immun Ph notyp des seltenen auf ALK positiven aber CD30 negativen von Delsol et al 5 beschriebenen gro zelligen B Zell Lymphoms auf was darauf hindeutet dass eine echte B Zell ALK ALCL existiert Bei anaplastischen gro zelligen Lymphomen mit t 2 5 Translokation wiesen verstreute neoplastische Zellen eine m ige bis starke F rbereaktion auf 1 Pulford K Lamant L Morris SW Butler LH Wood KM Stroud D et al Detection of anaplastic lymphoma kinase ALK and nucleolar protein nucleophosmin NPM ALK proteins in normal and neoplastic cells with the monoclonal antibody ALK1 Blood 1997 89 1394 404 2 Gascoyne RD Aoun P WU D Chhanabhai M Skinnider BF Greiner TC et al Prognostic significance of anaplastic lymphoma kinase ALK protein expression in adults with anaplastic large cell lymphoma
9. 1 EFG SSM 07 04 08 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17
10. M 07 04 08 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Interpretation de la coloration Caracteristiques de performance DEUTSCH Verwendungszweck Synonym f r das Antigen Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifit t Vorsichtsma nahmen Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 117499 002 Programme automatique CD246 sans contre coloration ou CD246H avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service t
11. aining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include anaplastic large cell lymphoma with t 2 5 translocation and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS750 Cells labeled by the antibody display cytoplasmic and or nuclear staining Normal tissues In the nervous system the antibody labels some glial cells a few endothelial cells pericytes and a few scattered neuronal cells There was no labeling of any cells in hematopoietic and Iymphoid tissues nor of tissues from the gastrointestinal tract and the genito urinary system 1 Abnormal tissues A total of 239 cases of lymphoma were analyzed with the antibody Overall 53 4 39 73 cases of CD30 ALCL were positive More cases of ALCL in children 23 26 cases 88 5 were positive than in adults 16 47 cases 34 0 With only a few exceptions all malignant cells in any positive sample were strongly labeled Only 1 of 17 cases of
12. d be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol IS641 EFG SSM 07 04 08 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Staining interpretation Performance characteristics FRANCAIS Utilisation prevue Synonyme de l antig ne Resume et explication Reactifs fournis Immunogene Specificite Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni 117499 002 Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the st
13. du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L epaisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Le pr traitement avec un d masquage d Epitope induit par la chaleur HIER est n cessaire Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8015 Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes de tissus d paraffin s fix s au formol et inclus en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice pour la EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8015 Les param tres suivants doivent tre utilis s pour le PT Link temp rature de pr chauffage 65 temp rature et dur e de restauration de l Epitope 97 pendant 20 1 minutes refroidissement 65 Retirer le portoir lames et les lames Autostainer de la cuve du PT Link et plonger imm diatement les lames dans un r cipient une cuve p ex PT Link Rinse Station r f PT109 contenant du EnVision FLEX Wash Buffer 10
14. echnique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la reprogrammation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d hematoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre un lymphome anaplasique grandes cellules avec translocation t 2 5 et les cellules structures doivent pr senter les sch mas de r action d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code 1S750 Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent une coloration cytoplasmique et ou nucl aire Tissus sains dans le syst me nerveux l anticorps marque certaines cellules gliales quelques cellules endoth liales les p ricytes et quelques cellules neuronales diss min es On n a constat aucun marquage des cellules des tissus h matopo tiques et Iy
15. gern aus dem PT Link Beh lter herausnehmen und die Objekttr ger sofort in einen Beh lter z B PT Link Rinse Station Code Nr PT109 mit verd nntem auf Zimmertemperatur gebrachten EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 eintauchen Die Objekttr ger f r 1 5 Minuten im Wash Buffer belassen IS641 EFG SSM 07 04 08 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Auswertung de r F rbung Leistungsmerkmale References References Literatur Paraffineingebettete Schnitte Zur Probenpr paration kann f r Entparaffinierung und Epitopdemaskierung im PT Link auch ein modifiziertes Verfahren verwendet werden Weitere Informationen finden Sie im PT Link Benutzerhandbuch Nach Abschluss des F rbeverfahrens m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und unter Verwendung eines permanenten Fixiermittels auf die Objekttr ger aufgebracht werden Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern werden Dako Silanized Slides Code Nr S3003 empfohlen Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 welches die Hi
16. gh pH Target Retrieval Solution dieses Systems durch EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8015 ersetzt Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 uL Anwendungsvolumen oder FLEXRTU3 300 uL Anwendungsvolumen Autoprogramm CD246 ohne Gegenf rbung oder CD246H mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dies gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiz
17. him ren NPM ALK Proteins von 80 kDa f hrende Transkription des NPM ALK Hybridgens ausl st 4 Bei 3 gro en ALCL Serien waren 15 28 der Chim ren ALK positiven Lymphome bei der t 2 5 Translokation negativ als alternatives Hauptfusionsgen wurde das bei 17 5 der ALK positiven ALCL F lle vorliegende Tropomyosin 3 Gen identifiziert 4 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Klon ALK1 1 Isotyp IgG3 Kappa Rekombinantes DHFR ALK Protein mit Dihydrofolat Reduktase DHFR der Maus und den Aminos uren 1359 1460 des vollst ndigen menschlichen ALK Proteins entsprechend den Aminos uren 419 520 des chim ren NPM ALK Proteins 1 Anti Human CD246 Klon ALK1 wurde bei dem der 7th International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens 7 Internationale r Workshop und Konferenz ber leukozytendifferenzierende Antigene als Anti CD246 geclustert 3 Beim Western Blotting eines Lysats der Zel
18. iert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Gewebe von anaplastischen gro zelligen Lymphomen mit einer t 2 5 Translokation enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die unter Leistungsmerkmale f r dieses Gewebe beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS750 Mit diesem Antik rper markierte Zellen weisen eine zytoplasmatische bzw eine nukle re F rbung auf Gesundes Gewebe Im Nervensystem markiert einige Gliazellen wenige Endothelzellen Perizyten und einige verstreute Nervenzellen In h matopoetischem und Iymphoidem Gewebe wurden keinerlei Zellen markiert ebensowenig wie in Gewebe aus dem Verdauungs bzw Urogenitaltrakt 1 Pathologisches Gewebe Insgesamt wurden 239 F lle von Lymphomen mit dem Antik rper analysiert Von diesen reagierten 53 4 39 von 73 der F lle von CD30 ALCL positiv Bei Kindern waren mehr ALCL F lle 23
19. les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone ALK1 1 Isotype I9G3 kappa Prot ine recombinante DHFR ALK comprenant une r ductase dihydrofolate de souris DHFR et les acides amin s 1359 1460 de la prot ine humaine ALK pleine longueur correspondant aux acides amin s 419 520 de la prot ine chimerique NPM ALK 1 Anti Human CD246 clone ALK1 a t class comme un anti CD246 la 7th International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens 7 Conf rence et Atelier internationaux sur les antig nes de diff renciation des leucocytes humains 3 Lors d un Western blot effectu sur un lysat de lign e cellulaire SU DHL 1 avec t 2 5 l anticorps marque une bande de 80 kDa correspondant la prot ine NPM ALK L anticorps reconna t galement une bande de 200 kDa correspondant la prot ine ALK dans la lign e cellulaire Rh30 du rhabdomyosarcome humain qui exprime la prot ine ALK pleine longueur et dans la lign e cellulaire 293T transfect e avec l ADNc encodant la prot ine ALK pleine longueur Aucune r activit
20. ll length human ALK protein corresponding to amino acids 419 520 of the chimeric NPM ALK protein 1 Anti Human CD246 clone ALK1 was clustered as anti CD246 at the 7th International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens 3 In Western blotting of lysate of the t 2 5 SU DHL 1 cell line the antibody labels a band of 80 kDa corresponding to NPM ALK protein The antibody also recognizes a band of 200 kDa corresponding to the ALK protein in the human rhabdomyosarcoma cell line Rh30 that expresses full length ALK protein and in the 293T cell line transfected with cDNA encoding full length ALK protein No reactivity was observed when the 293T cell line was transfected with the vector alone 1 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are sto
21. llinie t 2 5 SU DHL 1 markiert der Antik rper eine dem NPM ALK Protein entsprechende Bande von 80 kDa Der Antik rper erkennt ferner eine dem ALK Protein entsprechende Bande von 200 kDa in der vollst ndigen ALK Protein exprimierenden Zelllinie Rh30 des menschlichen Rhabdomyosarkoms sowie in der mit cCDNA transfizierten vollst ndigen ALK Protein kodierenden Zelllinie 293T Wurde die Zelllinie 293T nur mit dem Vektor transfiziert trat keine Reaktivit t auf 1 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schch en aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit
22. mphoides ni des tissus de l appareil digestif ou g nito urinaire 1 Tissus tumoraux un total de 239 cas de lymphome ont t analys s avec l anticorps Sur l ensemble 53 4 39 sur 73 des cas de LAGC positifs au CD30 taient positifs Il y avait plus de LAGC positifs chez les enfants 23 cas sur 26 88 5 que chez les adultes 16 cas sur 47 34 0 Sauf quelques rares exceptions toutes les cellules malignes des chantillons positifs taient fortement marqu es Seul 1 cas sur 17 de LAGC de type hodgkinien tait positif PALK Aucun des 50 cas de lymphome hodgkinien classique n a t marqu de m me qu un grand nombre d autres Iymphomes et leuc mies analys s 1 Dans une autre tude 2 51 36 sur 70 des cas de LAGC taient positifs l anticorps dont 15 42 cas de Iymphomes lymphocytes T 16 44 cellules nulles et 5 14 lymphocytes B Aucun des cas lymphocytes B n avaient la morphologie et l immunoph notype des rares cas de lymphomes grands lymphocytes B positifs l ALK mais n gatifs au CD30 rapport s par Delsol et al 5 sugg rant qu existe un vrai LAGC lymphocytes B positif l ALK Dans le lymphome anaplasique grandes cellules avec translocation t 2 5 les cellules n oplasiques diss min es pr sentent une coloration mod r e forte Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD246 ALK Protein Klon AKL1 Ready to Use Dako Autostainer A
23. red under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8015 Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8015 The following parameters should be used for PT Link Pre heat temperature 65 epito pe retrieval temperature and time 97 for 20 1 minutes cool down to 65 Remove Autostainer slide ra ck with slides from the PT Link tank and immediately dip
24. slides into a jar tank e g PT Link Rinse Station Code PT109 containing diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 Leave slides in Wash Buffer for 1 5 minutes Paraffin embedded sections As alternative specimen preparation both deparaffinization and epitope retrieval can be performed in the PT Link using a modified procedure See the PT Link User Guide for instructions After the staining procedure has been completed the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of Dako Silanized Slides Code S3003 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 replacing the High pH Target Retrieval Solution from this kit with EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8015 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTUS3 300 uL dispense volume Autoprogram CD246 without counterstaining or CD246H with counterstaining The Auxiliary step shoul
25. utostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper markiert normales menschliches ALK Protein und das chim re NPM ALK Protein und dient der Identifizierung der Untergruppe der anaplastischen gro zelligen Lymphome ALCL die ALK positiv ist 1 2 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit geeigneten Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer diagnostischer Tests des Patienten vorgenommen werden CD246 3 Der Wildtyp des anaplastischen Lymphokinase ALK Proteins ist eine transmembrane Rezeptor Tyrosinkinase von 200 kDa 4 Die postnatale ALK Expression beschr nkt sich auf wenige verstreute Zellen im Nervensystem einige Glia und Nervenzellen wenige Endothelzellen und Perizyten 1 Etwa 72 5 der ALK positiven ALCL werden mit einer chromosomalen Translokation von 2 5 assoziiert bei der das bei 5q35 liegende Nukleophosmin NPM Gen mit dem bei 2p23 liegenden ALK Gen fusioniert Bei der Fusion wird der die N terminale Seite des NPM Proteins kodierende Teil des NPM Gens an denjenigen Teil des ALK Gens angelagert der den gesamten zytoplasmatischen Bereich des ALK Proteins kodiert Dadurch wird das ALK Gen durch den NPM Promotor kontrolliert der eine dauerhafte und h ufig vorkommende zur Produktion eines c
26. x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 dilu temp rature ambiante Laisser les lames dans le Wash Buffer pendant 1 5 minutes Coupes incluses en paraffine comme pr paration alternative des chantillons le d paraffinage et la restauration de l Epitope peuvent tre r alis s dans le PT Link l aide d une proc dure modifi e Se r f rer aux instructions du Guide d utilisation du PT Link Une fois que la proc dure de coloration est termin e les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames Dako Silanized Slides R f S3003 Le systeme de visualisation recommand est EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 rempla ant la High pH Target Retrieval Solution de ce kit avec la EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8015 Les tapes de coloration et les temps d incubation sont pr programm s dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume d application de 200 uL ou FLEXRTU3 volume d application de 300 uL IS641 EFG SS
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