FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human CD3 Ready-to
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1. Vorsichtsma nahmen 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Lagerung Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen 115285 002 IS503 EFG MNI 2009 12 04 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup2. 4 CE FLEX Polyclonal Rabbit Anti Human CD3 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS503 ENGLISH Intended use For in vitro diagnostic use FLEX Polyclonal Rabbit Anti Human CD3 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody is useful for the identification of T cells and related neoplasms 1 2 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist Synonym for antigen T3 CD3 complex 3 Summary and explanation CD3 consists of at least four different components y e 0 of 20 28 kDa On the lymphocyte cell surface CD3 is non covalently associated with the T cell receptor TCR It is believed that the CD3 components of the TCR CD3 complex mediate signal transduction upon antigen recognition by TCR 4 CD3 is expressed by T cells in thymus bone marrow peripheral lymphoid tissue and blood 5 6 The only other normal cell type known to be labeled by antibodies to CD3 is Purkinje cells in the cerebellum 7 The CD3 antigen is first detectable in early thymocytes and its appearance probably represents one of the earliest signs of commitment to the T cell lineage 5 In immature thymocyt
3. Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 ist erforderlich Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 erzielt werden Paraffineingebettete Schnitte Die Vorbehandlung der formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitte mit dem 3 in 1 Probenvorbereitungsverfahren f r Dako PT Link wird empfohlen Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 durchf hren Hinweis Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und mit permanentem Einbettmedium auf den Objekttr ger aufgebracht werden Entparaffinierte Schnitte Eine Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit Dako PT Link nach demselben Verfahren wie f r die paraffineingebetteten Schnitte beschrieben wird empfohlen Die Objekttr ger nach dem F rben mit einem w ssrigen oder permanente
4. cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi Synonymes de l antig ne T3 complexe CD3 3 R sum et explication La CD3 comporte au moins quatre composants diff rents g d e z de 20 28 kDa A la surface des lymphocytes la CD3 est li e de mani re non covalente au r cepteur des lymphocytes T TCR On pense que les composants de la CD3 du complexe TCR CD3 interviennent dans la transduction du signal lors de la reconnaissance de l antigene par le TCR 4 La CD3 est exprim e par les lymphocytes T dans le thymus la moelle osseuse le tissu Iymphoide p riph rique et le sang 5 6 Le seul autre type de cellule normal connu pour tre marqu par les anticorps anti CD3 est les cellules de Purkinje du cervelet 7 L antig ne anti CD3 est d abord d tectable dans les thymocytes pr coces et sa pr sence constitue probablement l un des premiers signes d appartenance la lign e des lymphocytes T 5 Dans les thymocytes immatures l expression de la CD3 est uniquement cytoplasmique et la CD3 associ e la membrane appara t par la suite apr s la maturation cellulaire 5 La majorit des n oplasmes lymphocytes T exprime l antig ne anti CD3 alors qu il est absent des tumeurs lympho des non lymphocytes T 8 Conform ment au sch ma de synth se de l antigene des thymocytes normaux le premier site o la CD3 est d tectable au sein des cellules n oplasiques est le cytopla
5. no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support Specimen preparation including materials required but not supplied The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Paraffin embedded sections Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using the 3 in 1 specimen preparation procedure for Dako PT Link Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Note After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link and following the same procedure as described for paraffi
6. rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Geliefertes Reagenz Gebrauchsfertiger polyklonaler Kaninchen Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Immunogen Synthetisches Peptid mit Aminos uren 156 bis 168 aus dem zytoplasmatischen Teil der an Thyroglobulin gekoppelten menschlichen CD3e Kette 1 Spezifit t Beim Western Blotting weist der Antik rper Banden der erwarteten relativen Molek lmassen f r CD3 Antigene nach 2 Der Antik rper erkennt CD3e sowohl in einer T Zelllinie Jurkat als auch in einer NK Zelllinie NK11 reagiert aber nicht mit Lysaten aus verschiedenen B Zelllinien Raji Ramos und JY einer myeloischen Zelllinie U937 oder einer Dickdarmkrebszelllinie Colo 205 11 In der Immunpr zipitation aus Nonidet P40 Lysaten von oberfl chenjodierten T Lymphoblasten pr zipitiert der Antik rper die y 26 kDa 21 kDa und e 19 kDa Kette des CD3 Molek ls hnlich dem Pr zipitationsmuster beim deutlich charakterisierten monoklonalen antinumanen Maus CD3 Klon UCHT1 1 Beim ELISA Verfahren markiert der Antik rper das als Immunogen genutzte CD3 Peptid
7. to strong staining reaction whereas T cells in germinal centers of tonsil and in the colon epithelium show a weak to moderate staining reaction Abnormal tissues The antibody labeled 73 96 T cell neoplasms including 7 9 lymphoblastic 25 35 pleomorphic 5 5 immunoblastic 5 5 angioimmunoblastic lymphadenopathy like 2 2 T zone lymphomas 19 19 mycosis fungoides Sezary syndrome 2 3 Lennert s lymphomas 4 13 Ki 1 positive anaplastic large cell lymphomas 3 4 lymphomatoid papulosis 1 1 coeliac associated Iymphoma 1 The antibody labeled 149 149 cases of T cell precursor acute Iymphoblastic leukaemias lymphomas ALL In 131 149 cases 100 of the cells were positive in 14 cases between 50 90 of the cells were positive and in 4 cases less than 50 of the cells were positive No labeling was observed in 68 68 cases of B cell precursor ALL apart from reactive infiltrating T cells 2 FRANCAIS Utilisation prevue Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Polyclonal Rabbit Anti Human CD3 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destine a une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps est utile pour l identification des lymphocytes T et des n oplasmes li s 1 2 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents
8. 986 i 761 5 9 Braylan RC Orfao A Borowitz MJ Davis BH Optimal number of reagents required to evaluate hematolymphoid neoplasias results of an international consensus meeting Cytometry 2001 46 23 7 10 Kingreen D Siegert W Chronic Iymphatic leukemias of T and NK cell type Leukemia 1997 11 Suppl 2 546 9 11 Lanier LL Chang C Spitz H Pillips JH Expression of cytoplasmic CD3e proteins in activated human adult natural killer NK cells and CD3y e complexes in fetal NK cells Implications for the relationship of NK and T Iymphocytes J Immunol 1992 149 1876 80 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole Catalogue number Temperature limitation Use by Reference catalogue Limites de temp rature Utiliser avant Bestellnummer Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis In vitro diagnostic medical device Contains sufficient for lt n gt tests Manufacturer Contenu suffisant pour lt n gt tests Fabricant Dispositif medical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostikum Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Hersteller Consult instructions for use Batch code Voir les instructions d utilisation Numero de lot Gebrauchsanweisung beachten Chargenbezeichnung 115285 002 IS503 EFG MNI 2009 12 04 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17
9. B Ralfkiaer E et al Co expression of CD79a JCB117 and CD3 by lymphoblastic lymphoma J Pathol 1988 186 140 3 3 CD guide In Kishimoto T Kikutani H von dem Borne AEG Goyert SM Mason DY Miyasaka M et al editors Leucocyte typing VI White cell differentiation antigens Proceedings of the 6th International Workshop and Conference 1996 Nov 10 14 Kobe Japan New York London Garland Publishing Inc 1997 p 1111 4 Jacobs H Pre TCR CD3 and TCR CD3 complexes decamers with differential signalling properties Immunol Today 1997 18 565 9 5 Campana D Thompson JS Amlot P Brown S Janossy G The cytoplasmic expression of CD3 antigens in normal and malignant cells of the T lymphoid lineage J Immunol 1987 138 648 55 6 Tunnacliffe HA Olsson C Traunecker A Krissansen GW Karjalainen K De la Hera A The majority of CD3 epitopes are conferred by the epsilon chain In Knapp W D rken B Gilks WR Rieber EP Schmidt RE Stein H et al editors Leukocyte typing IV White cell differentiation antigens Proceedings of the 4th International Workshop and Conference 1989 Feb 21 25 Vienna Austria Oxford New York Tokyo Oxford University Press 1989 p 295 6 7 Garson JA Beverley PC Coakham HB Harper El Monoclonal antibodies against human T lymphocytes label Purkinje neurones of many species Nature 1982 298 375 7 8 Erber WN Mynheer LC Mason DY APAAP labeling of blood and bone marrow samples for phenotyping leukaemia Lancet 1
10. Lymphozytenzelle ist CD3 nichtkovalent an den T Zellenrezeptor TCR gebunden Man vermutet dass die CD3 Komponenten des TCR CD3 Komplexes bei der Erkennung des Antigens durch den TCR die Signal bertagung vermitteln 4 CD3 wird von T Zellen in Thymus Knochenmark peripherem Iymphoiden Gewebe und in Blut exprimiert 5 6 Die einzigen anderen normalen Zellen von denen bekannt ist dass sie durch Antik rper gegen CD3 markiert werden sind die Purkinje Zellen im Kleinhirn 7 Das CD3 Antigen ist zun chst in fr hen Thymozyten nachweisbar und sein Auftreten ist vermutlich eines der fr hesten Zeichen einer Festlegung auf die T Zell Reihe 5 Bei unreifen Thymozyten ist die CD3 Expression ausschlie lich zytoplasmatisch und membranassoziiertes CDS tritt anschlie end bei Zellreifung auf 5 Die Mehrheit der T Zell Neoplasmen exprimiert das CD3 Antigen w hrend es bei nicht T Zell Iymphoiden Malignit ten fehlt 8 In bereinstimmung mit dem Muster der Antigensynthese bei normalen Thymozyten ist der fr heste Ort an dem CD3 in neoplastischen Zellen nachweisbar ist das Zellzytoplasma 5 CD3 gilt als wesentlicher Marker f r die erste Bewertung chronischer Iymphoproliferativer St rungen 9 Die grobgranul re T Zellen Lymphozytenleuk mie T LGL ist durch den CD3 CD57 CD56 Immunph notyp und durch die klonale Neuanordnung der T Zellrezeptorgene charakterisiert 10 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F
11. and l aide de la proc dure de pr paration d chantillon 3 en un pour le Dako PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Remarque apr s coloration les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes tissulaires d paraffin es fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link en suivant la m me proc dure que pour les coupes incluses en paraffine Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommand Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides R f K8020 115285 002 IS503 EFG MNI 2009 12 04 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni Le syst me de visualisation recommand est le EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8010 Les tapes de coloration et d incubation sont pr programm es dans le logiciel des instruments Dako Autostaine
12. ar s partir de plusieurs lign es de lymphocytes B Raji Ramos et JY d une lign e de cellules my lo des U937 ou d une lign e de cellules de carcinome du c lon Colo 205 11 Lors de l immunoprecipitation partir de Iysats Nonidet P40 de lymphoblastes T surface iod e l anticorps pr cipite les cha nes g 26 kDa d 21 kDa et e 19 kDa de la mol cule CD3 de mani re similaire au sch ma de pr cipitation observ lors de l utilisation d un anticorps monoclonal de souris dirig contre la CD3 humaine bien caract ris clone UCHT1 1 Lors d un test ELISA l anticorps marque le peptide CD3 utilis comme immunog ne Pr cautions 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform
13. es the CD3 expression is solely cytoplasmic membrane associated CD3 appears subsequently upon cell maturation 5 The majority of T cell neoplasms express the CD3 antigen while it is absent from non T cell lymphoid malignancies 8 Consistent with the pattern of synthesis of the antigen in normal thymocytes the earliest site where CD3 is detectable within neoplastic cells is in the cell cytoplasm 5 CD3 has been deemed an essential marker for the initial evaluation of chronic Iymphoproliferative disorders 9 Large granular lymphocyte leukaemia of T cell type T LGL is characterized by the CD3 CD57 CD56 immunophenotype and clonal rearrangement of the T cell receptor genes 10 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Reagent provided Ready to use polyclonal rabbit antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Immunogen Synthetic peptide comprising amino acids 156 168 from the cytoplasmic part of the human CD3e chain coupled to thyroglobulin 1 Specificity In Western blotting the antibody detects bands of the expected molecular weights for CD3 antigens 2 The antibody recogn
14. he evaluating pathologist should 115285 002 IS503 EFG MNI 2009 12 04 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include tonsil and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Rabbit Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS600 Staining interpretation Cells labeled by the antibody display cytoplasmic and or membrane staining Performance characteristics Normal tissues The antibody labels T cells in various tissues including tonsil and colon T cells in the interfollicular areas of tonsil show a moderate
15. izes CD3e in both a T cell line Jurkat and a natural killer cell line NK11 but does not react with lysates prepared from several B cell lines Raji Ramos and JY a myeloid cell line U937 or a colon carcinoma cell line Colo 205 11 In immunoprecipitation from Nonidet P40 lysates of surface iodated T lymphoblasts the antibody precipitates the y 26 kDa 21 kDa and e 19 kDa chain of the CD3 molecule similar to the precipitation pattern seen using the well characterized monoclonal mouse anti human CD3 clone UCHT1 1 In ELISA the antibody labels the CD3 peptide used as immunogen Precautions 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Storage Store at 2 8 Do not use after expiration date sta mped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are
16. ment aux r glementations locales et nationales Conservation Conserver entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L epaisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Un pr traitement avec d masquage d pitope induit par la chaleur HIER est n cessaire avec le Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Coupes incluses en paraffine le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine est recomm
17. n Einbettmedium bedecken Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 uL Abgabevolumen oder FLEXRTU3 300 uL Abgabevolumen Autoprogram CD3 ohne Gegenf rbung oder CD3H mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dieses gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahre
18. n embedded sections After staining the slides should be mounted using aqueous or permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended Staining procedure including materials required but not supplied The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTUS3 300 uL dispense volume Autoprogram CD3 without counterstaining or CD3H with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If t
19. n unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision M FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Mandelgewebe enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene negative Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Rabbit Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS600 Auswertung der F rbung Mit diesem Antik rper markierte Zellen weisen eine zytoplasmatische und oder Membranf rbung auf Leistungsmerkmale Gesundes Gewebe Der Antik rper markiert T Zellen in verschiedenen Geweben einschlie lich Mandeln und Dickdarm T Zellen in den interfollikul ren Bereichen der Mandeln zeigen eine m ige bis s
20. r Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume de distribution de 200 uL ou FLEXRTUS3 volume de distribution de 300 uL Autoprogram CD3 sans contre coloration ou CD3H avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela garantit des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de details se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectue
21. r une contre coloration l aide de EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre l amygdale et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action tels que d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Rabbit Dako Autostainer Autostainer Plus R f IS600 Interpr tation de la coloration Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent une coloration cytoplasmique et ou membranaire Caract ristiques de performance Tissus sains L anticorps marque les lymphocytes T dans divers tissus y compris l amygdale et le c lon Les lymphocytes T des zones interfolliculaires des amygdales pr sentent une coloration mod r e forte tandis que la coloration des lymphocytes T des centres germinatifs de l pith lium du c lon est faible mod r e Tissus tumoraux L anticorps marque 73 96 n oplasmes lymphocytes T y compris 7 9 lymphoblastiques 25 35 pl omorphes 5 5 immunoblastiques 5 5 angio immunoblastiques de type lymphad nopathie 2 2 lymphomes de la zone T 19 19 cas de mycose fongoide s
22. sme cellulaire 5 La CD3 s est r v l e tre un marqueur essentiel de l valuation initiale des troubles Iymphoproliferatifs chroniques 9 La leuc mie grands lymphocytes T granuleux T LGL se caract rise par l immunoph notype CD3 CD57 CD56 et la r organisation clonale des g nes des r cepteurs de lymphocytes T 10 Se r f rer aux nstructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales R actifs fournis Anticorps polyclonal de lapin pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Immunog ne Peptide de synth se comprenant les acides amin s 156 168 provenant de la partie cytoplasmique de la cha ne CD3e humaine coupl e la thyroglobuline 1 Sp cificit Lors des analyses par Western blot l anticorps d tecte des bandes de poids mol culaire attendu pour les antigenes anti CD3 2 L anticorps reconna t la CD30 tant dans une lign e de lymphocytes T Jurkat que dans une lign e de cellules tueuses naturelles NK11 mais ne r agit pas aux lysats pr p
23. tarke F rbereaktion w hrend T Zellen in den Keimzentren der Mandeln und im Dickdarmepithel eine schwache bis m ige F rbereaktion zeigen Pathologisches Gewebe Der Antik rper markierte 73 von 96 T Zellneoplasmen einschlie lich 7 von 9 Iymphoblastischen 25 von 35 pleomorphen 5 von 5 immunoblastischen 5 von 5 angioimmunoblastischen Iymphadenopathieartigen 2 von 2 T Zonen Lymphomen 19 von 19 F llen von Mycosis fungoides Sezary Syndrom 2 von 3 Lennert Lymphomen 4 von 13 Ki 1 positiven anaplastischen gro zelligen Lymphomen 3 von 4 Iymphomatoiden Papulosis 1 von 1 Truncus coeliacus assoziierten Lymphom 1 Der Antik rper markierte 149 von 149 F llen der auf die T Zellreihe Vorl ufer zur ckgehenden akuten Iymphoblastischen Leuk mien Lymphome ALL In 131 von 149 F llen testeten 100 der Zellen positiv in 14 F llen erwiesen sich zwischen 50 90 der Zellen als positiv und in 4 F llen wurden weniger als 50 der Zellen positiv angef rbt Mit Ausnahme reaktiver infiltrierender T Zellen wurde bei 68 von 68 F llen der auf die B Zelllinie Vorl ufer zur ckgehenden ALL Zellen keine Markierung festgestellt 2 References References Literatur 1 Mason DY Cordell J Brown M Pallesen G Ralfkiaer E Rothbard J et al Detection of cells in paraffin wax embedded tissue using antibodies against a peptide sequence from the CD3 antigen J Clin Pathol 1989 42 1 194 1200 2 Pilozzi E Pulford K Jones M M ller Hermelink H K Falini
24. yndrome de S zary 2 3 lymphomes de Lennert 4 13 Ilymphomes grandes cellules anaplasiques positifs la Ki 1 3 4 papuloses lymphomato des 1 1 lymphome associ une maladie coeliaque 1 L anticorps a marqu 149 cas sur 149 de lymphomes leuc mies lymphoblastiques aigu s lymphocytes T pr curseurs LAL Dans 131 cas sur 149 100 des cellules taient positives dans 14 cas entre 50 et 90 des cellules taient positives et dans 4 cas moins de 50 des cellules taient positives Aucun marquage n a t observ dans 68 cas sur 68 de LAL B pr curseurs hormis celui des lymphocytes T infiltrants r actifs 2 DEUTSCH Zweckbestimmung Zur In vitro Diagnostik FLEX Polyclonal Rabbit Anti Human CD3 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper dient zur Erkennung von T Zellen und verwandten Neoplasmen 1 2 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden Synonyme f r das Antigen T3 CD3 Komplex 3 Zusammenfassung und Erkl rung CD3 besteht aus mindestens vier verschiedenen Komponenten y e von 20 28 kDa An der Oberfl che der
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