SeroCP™ IgM (RT) - Savyon Diagnostics
Contents
1. l chantillon doit tre consid r comme n gatif L interpr tation des r sultats en fonction de la combinaison des anticorps IgG IgA et IgM est pr sent e au Tableau 2 TABLEAU 2 INTERPRETATION DES RESULTATS EN FONCTION DE LA COMBINAISON DES ANTICORPS IgG IgA ET IgM Taux d anticorps sp cifiques Interpr tation des aux chlamydiae r sultats IgG IgA IgM PR Zai Re Pas d infection C N gatif N gatif N gatif pneumoniae N gatif N gatif Positif Indication d une ou positif ou positif infection en cours Indication d une Positif N gatif N gatif infection en cours ou pass e Positif ou Indication d une limi Positif N gatif infection en cours imite A f r cente ou chronique M1192 01F 07 06 15 Tableau 5 Pr cision inter essai entre diff rentes s ries du coffret SeroCP IgM RT z Dr RE Valeur Echantillon R p tabilit moyenne CV Positif 12 1 186 4 43 N gatif 12 0 070 8 37 Limites du Test 1 On ne peut tablir un diagnostic d finitif sur la base d une seule analyse s rologique Il convient de prendre en compte toutes les donn es cliniques et les r sultats de laboratoire 2 Les chantillons pr lev s trop t t lors d une primo infection peuvent ne pas contenir d anticorps d celables Si l on soup onne une infection chlamydiae effectuer un deuxi me pr l vement 14 21 jours plus tard et proc2. es ni trait es peuvent conduire des affections prolong es et persistantes Des tudes r centes montrent une association possible entre C pneumoniae et des infections chroniques 2 La pr valence des anticorps s riques de C pneumoniae chez les enfants d ge pr scolaire est faible et augmente jusqu 50 chez les adultes M1192 01F 07 06 15 Cependant la difficult d effectuer des pr l vements au niveau des sites infect s affecte les performances du d pistage direct de C pneumoniae Aussi la m thode utilis e en routine pour le diagnostic de C pneumoniae est la s rologie La s rologie est un outil non invasif pour le d pistage des infections chroniques C pneumoniae 3 pour lesquelles les m thodes de d pistage direct sont peu efficaces 4 Lors d une primo infection il se produit une r ponse rapide des anticorps IgM souvent en une ou deux semaines L apparition des isotypes IgG et IgA peut ne survenir que 6 8 semaines apr s Les anticorps IgM diminuent entre le 2 me et le 6 me mois apr s une infection aigu 5 Le taux des anticorps IgG augmente puis diminue lentement les anticorps IgA ont tendance dispara tre rapidement 6 En cas de r activation les anticorps IgM peuvent ne pas appara tre ou n appara tre qu un titre faible aussi l absence des anticorps IgM n exclue pas une infection en cours 7 Le taux des anticorps IgG et IgA augmente rapidement entre la premi re et
3. de lavage L 6 Papier absorbant Couvrir la plaque et laisser incuber 30 minutes 7 Agitateur vortex temp rature ambiante 8 Lecteur ELISA quip d un filtre 450nm ou 620 nm 9 Eau distill e ou d sionis e Ajouter 100yl de solution d arr t Lire l absorbance 450 620nm Calculer et interpr ter les r sultats M1192 01F 07 06 15 2 Pr cautions d emploi POUR USAGE IN VITRO 1 Ce kit contient des s rums humains qui ont t test s par des techniques approuv es par la FDA ou marqu es CE Ils ont t trouv s n gatifs vis vis des antig nes HBs des anticorps VIH 1 et 2 et anti VHC Comme aucune technique ne peux garantir l innocuit absolue des produits test s ceux ci doivent donc tre manipul s comme potentiellement infectieux selon les recommandations publi es dans le manuel S curit biologique dans les laboratoires de microbiologie et de biologie m dicale 1988 du CDC NIH National Institute of Health Institut National Am ricain de la Sant La solution de substrat TMB est une substance irritante pour la peau et les muqueuses Eviter tout contact direct L acide sulfurique dilu 1M H2804 est un agent irritant pour les yeux et la peau En cas de contact avec les yeux laver imm diatement et abondamment avec de l eau et consulter un sp cialiste Tous les composants de la trousse ont t test s par lot Ne pas m langer les composants de diff rents lots et ne
4. la deuxi me semaine qui suit une r activation 3 La persistance de taux lev en IgA peut tre le signe d une infection chronique C pneumoniae 6 Dans le cas d une r infection le niveau des anticorps IgA et IgG augmente rapidement le plus souvent d s la premi re ou la deuxi me semaine 8 Les anticorps IgG persistent longtemps et diminuent tr s lentement Leur pr sence indique un contact un moment ind termin avec le C oneumoniae Cependant des taux lev s peuvent indiquer une infection en cours ou chronique Le test SeroCPTM RT mis au point par Savyon Diagnostics Ltd est un test ELISA utilisant des corps l mentaires d antig nes de C pneumoniae TWAR 183 ce qui permet un diagnostic plus pr cis des anticorps sp cifiques de C pneumoniae Pour le diagnostic complet d une infection pr sente chronique ou pass e il est recommand de d terminer les anticorps IgG IgM et IgA sp cifique de C pneumoniae Principe du Test e Des plaques de micro titration SeroCP RT sont enduites d antig nes l mentaires purifi s d antig nes de C pneumoniae e Le s rum tester est dilu puis mis incuber 30 minutes temp rature ambiante dans les puits de la microplaque du test SeroCP RT Lors de cette tape les anticorps sp cifiques de C pneumoniae de l chantillon de s rum vont se fixer aux antig nes immobilis s e Les anticorps non sp cifiques sont limin s par lavage e On int
5. puits s par s Couvrir les plaques avec un couvercle pour plaque et mettre incuber durant 30 minutes temp rature ambiante 22 C 28 C Jeter le liquide contenu dans les puits Tenir compte du d calage li au temps de d p t tape de lavage remplir enti rement chaque puits avec le tampon de lavage 300 3501 puis liminer ce liquide R p ter encore 4 fois pour un total de 5 tapes de lavage Proc der deux phases d aspiration en appliquant un mouvement circulaire C Incubation avec le conjugu Chaque flacon de conjugu HRP ne peut tre utilis que 2 fois 11 D poser 50ul de conjugu pr t l emploi dans chaque puits 12 Couvrir les plaques avec un couvercle pour plaques et mettre incuber durant 30 minutes temp rature ambiante 22 C 28 C 13 Jeter le liquide contenu dans les puits et laver comme d crit aux tapes 9 10 D Incubation avec du substrat TMB Note le substrat TMB est pr t l emploi 14 D poser 100ul de substrat TMB dans chaque puits Couvrir les plaques avec un couvercle pour plaques et mettre incuber durant 30 minutes 15 Arr ter la r action en introduisant 100ul de solution d arr t H2SO4 1M dans chaque puits E D termination des r sultats 16 Essuyer soigneusement le dessous de la plaque v rifier l absence de bulles d air dans les puits et lire 450 620 nm dans les 30 minutes qui suivent l arr t de la r action Note limi
6. C 0483 SeroCP IgM RT Test ELISA pour la d tection des anticorps IgM anti Chlamydia pneumoniae dans le s rum humain Notice Technique Coffret de 96 tests R f rence 1192 01 Pour usage diagnostique in vitro Pour usage professionnel uniquement A conserver 2 C 8 C Ne Pas Congeler m l Savyon Diagnostics Ltd 3 Habosem St Ashdod 7761003 ISRAEL Tel 972 8 8562920 Fax 972 8 8523176 E mail support savyondiagnostics com Le coffret SeroCP RT est destin la d tection des anticorps IgM sp cifiques de Chlamydia pneumoniae dans le s rum humain Le kit SeroCPTM IgM RT est un test immunoenzymatique utilisant un antig ne adsorb ELISA Le coffret Savyon SeroCPTM est une nouvelle version du test ELISA Il comporte les am liorations suivantes incubations temp rature ambiante dur e de test r duite et utilisation de conjugu s pr ts l emploi Pour usage diagnostique in vitro Introduction Chlamydia pneumoniae TWAR 183 est l un des agents infectieux associ de nombreuses pathologies incluant des infections du syst me respiratoire des voix basses et hautes 1 Bien que C pneumoniae puisse provoquer de graves infections telles que des pharyngites des sinusites des bronchites aigu s et des pneumonies communautaires la majorit des infections sont b nignes asymptomatiques et donc d un diagnostic difficile Ces infections si elles ne sont pas d cel
7. H and Valtonen V 1988 Serological Evidence of an Association of a Novel Chlamydia TWAR with Chronic Coronary Heart Disease and Acute Myocardial Infarction Lancet 2 983 986 7 Grayston J T Cambell L A Mordhorst C H Saikku P Thom D and Wang S P 1989 A New Respiratory Pathogen Chlamydia pneumoniae Strain TWAR J Inf Dis 161 618 625 8 Saikku P Leinonen M Tenkanen L Linnanmaki E Ekman M R Mannin V Manttari M Frick M H and Huttunen J K 1992 Chronic Chlamydia pneumoniae Infections as a Risk Factor for Coronary Heart Disease in the Helsinki Heart Study Ann of Int Med 116 273 278 RESUME DU MODE OPERATOIRE MANUEL SeroCP RT Chlamydia pneumoniae IgM 1 Diluer le tampon de lavage au 1 20 5 mi de tampon de lavage 95 ml d eau distill e pour 1 barrette 2 Diluer les s rums des patients au 1 110 Introduire 1090ul de s rum diluant RT dans chaque tube Ajouter 10ul de s rum analyser dans chaque tube 3 D poser dans les puits 50 ul de contr le de seuil en double contr le positif contr le n gatif et les s rums des patients dilu s 1 110 4 Recouvrir les barrettes avec le couvercle de plaque et incuber 30 minutes temp rature ambiante 22 C 28 C 5 Proc der au lavage des barrettes 5x 6 D poser 50 ul de conjugu pr t emploi dans chacun des puits 7 Recouvrir les barrettes avec le couvercle de plaque et incuber 30 minutes te
8. NTERPRETATION DES RESULTATS Interpr tation des col R sultat r sultats N gatif Pas d anticorps Pas d infection C Caract ristiques et performance du test Comparaison du SeroCP IgM RT avec le SeroCPT IgM L tude a t r alis e sur 49 chantillons de s rum provenant d individus symptomatiques et 92 chantillons de s rum provenant d individus ne pr sentant aucune affection La sensibilit et la sp cificit ont t calcul es Sensibilit 14 14 100 Sp cificit 122 124 98 4 Pr cision Tableau 4 Pr cision intra essai dans la m me s rie du coffret SeroCP IgM RT lt 1 0 IgM sp cifiques PA RSR Valeur Echantillon R p tabilit moyenne CV Positif 12 0 882 1 85 N gatif 12 0 317 9 69 de C pneumoniae pneumoniae d celables Indication d une possible exposition Limite C pneumoniae 1 1 1 Faible taux en anticorps IgM Il est conseill de tester un second chantillon pr lev 2 4 semaines plus tard Positif Taux appropri en anticorps IgM Indication en faveur d une infection en cours C pneumoniae gt 1 1 Note Il convient d effectuer une analyse des anticorps IgG et IgA ou d analyser un second chantillon de s rum pr lev 14 21 jours apr s le premier test Si l analyse des IgG et des IgA donne un r sultat n gatif et que les r sultats de l analyse des IgM reste identique valeur limite
9. der une nouvelle analyse 3 interf rences L utilisation de s rums lip miques troubles ou contamin s n est pas recommand e Les particules ou les pr cipit s dans les s rums peuvent engendrer des r sultats erron s Ce type de s rums doit tre centrifug ou filtr avant d tre test Bibliographie 1 Kuo C C Jackson L A and Grayston J T 1995 Chlamydia pneumoniae TWAR Clin Microbiol REV 8 451 461 2 Saikku P Leinonen M Tenkanen L Linnanmaki E Ekman M R Manninen V Manttari M Frick M H and Huttunen J K 1992 Chronic Chlamydia pneumoniae infection as a risk factor for coronary heart disease in the Helsinki heart study Ann Intern Med 116 273 278 3 Puolakkainen M Saikku P Leinonen M Nurminen M Vaananen P and Makela P H 1984 Chlamydia pnemonitis and its serodiagnosis in infants J Infect Dis 149 598 604 4 Campbell L A 1993 PCR detection of Chlamydia pneumoniae In Diagnostic Molecular Microbiology Principles and Applications Persing D H Smith T F Tenover F C and White T J Eds ASM Press pp 247 252 5 Henry Suchet J Askienazy Elbhar M Thibon M Revol C and Akue B A 1994 Post therapeutic evolution of serum chlamydia antibody titers in women with acute salpingitis and tubal infertility Fertility and Sterility 62 No 3 6 Saikku P Matila K Nieminen M S Huttunen J K Leinon M Eckman M R Makela P
10. hantillons doivent tre clarifi s par centrifugation ou filtration avant analyse Conservation Les chantillons tester peuvent tre conserv s 7 jours entre 2 C et 8 C il est recommand de rajouter de l azide de sodium 0 1 Si le test est pr vu dans un d lai plus long conserver et aliquoter les pr l vements 20 C Il est recommand de ne pas effectuer des d cong lations successives M1192 01F 07 06 15 R alisation manuelle du test La proc dure ci dessous correspond une utilisation manuelle veuillez consulter la section suivante pour une utilisation automatis e A Pr paration des R actifs 1 10 Amener tous les r actifs et les chantillons cliniques analyser temp rature ambiante Bien m langer le contr le de seuil le contr le positif le contr le n gatif et les chantillons avant usage D terminer le nombre total d chantillons analyser Outre les chantillons inclure les r actifs suivants dans chaque analyse deux puits pour le contr le de seuil et un puits pour le contr le n gatif et le contr le positif Retirer la plaque de micro titration de son sachet d aluminium en coupant l extr mit du sachet pr s de la partie scell e Laisser le nombre de barrettes voulues dans le portoir de 96 puits Conservation les barrettes non utilis es doivent tre replac es dans le sachet d aluminium avec le dess chant puis sceller le sachet en roulant l extr mi
11. is 11 D poser 50ul de conjugu pr t l emploi dans chaque puits 12 Mettre incuber durant 30 minutes temp rature ambiante 22 C 28 C 13 Jeter le liquide contenu dans les puits et laver comme d crit l tape 8 5 D Incubation avec du substrat TMB Note le substrat TMB est pr t l emploi 14 D poser 100u de substrat TMB dans chaque puits Mettre incuber durant 30 minutes l abri de la lumi re 15 Arr ter la r action en introduisant 100 de solution d arr t 1M H2S04 dans chaque puits E D termination des r sultats 16 D terminer l absorbance 450 620 nm dans les 30 minutes qui suivent l arr t de la r action et enregistrer les r sultats Attention chaque automate a des commandes sp cifiques Programmez voire appareil selon la proc dure Savyon par automatisation lorsque vous utilisez ce coffret Crit res d acceptabilit du test Le test peut tre valid si 1 D O Contr le positif gt 0 8 2 Ratio DO Contr le positif DO contr le de seuil gt 2 3 D O contr le n gatif lt 0 3 Si ces conditions ne sont pas remplies le test doit tre refait Calcul des r sultats 1 Calculer la valeur moyenne des deux puits d talon seuil 2 Pour normaliser les r sultats obtenus calculer les r sultats en index COI selon le ratio D O de l chantillon COI Moyenne D O de l talon seuil Interpr tation des r sultats TABLEAU 1 I
12. mp rature ambiante 22 C 28 C 9 Proc der au lavage des barrettes 5x 10 D poser 100 ul de substrat pr t emploi dans chacun des puits 12 Recouvrir les barrettes avec le couvercle de plaque et incuber 30 minutes temp rature ambiante 13 Ajouter 100 ul de solution STOP dans chacun des puits 14 Lecture des D O 450 620 nm M1192 01F 07 06 15 Theradeg MASID D Aan ata Theradiag 14 Rue ambrioise Croizat 77183 Crossy Beaubourg Tel 33 1 64 62 10 12 Fax 33 1 64 62 09 66 info theradiag com wil Savyon Diagnostics Ltd 3 Habosem St Ashdod 7761003 ISRAEL Tel 972 8 8562920 Fax 972 8 8523176 E mail support savyondiagnostics com C 0483 European Authorized Representative Obelis s a Boulevard G n ral Wahis 53 B 1030 Brussels Tel 32 2 732 59 54 Fax 32 2 732 60 03 E mail mail obelis net Mobile 32 475 45 46 60
13. ner les ventuelles bulles d air pr sentes dans les puits et essuyer soigneusement le dessous de la microplaque avant la lecture au spectrophotom tre Proc dure de test conseill e dans le cas d une utilisation sur automate A Pr paration des R actifs 1 Amener tous les r actifs et les chantillons cliniques analyser temp rature ambiante Bien m langer le contr le de seuil le contr le positif le contr le n gatif et les chantillons avant usage 2 D terminer le nombre total d chantillons analyser Outre les chantillons inclure les r actifs suivants dans chaque analyse deux puits pour le contr le de seuil et un puit pour le contr le n gatif et le contr le positif 3 Retirer la plaque de micro titration de son sachet d aluminium en coupant l extr mit du sachet pr s de la partie scell e Laisser le nombre de barrettes voulues dans le portoir de 96 puits Conservation les barrettes non utilis es doivent tre replac es dans le sachet d aluminium avec le dess chant puis sceller le sachet en roulant l extr mit ouverte et en collant un ruban adh sif sur toute la longueur de l ouverture Note la dur e de conservation des plaques une fois replac es dans un sachet scell est de 90 jours dater du jour de premi re ouverture 4 Diluer le tampon de lavage concentr 1 20 avec de l eau distill e Par exemple pour pr parer un litre de tampon de lavage ajouter 50 ml de tampon de la
14. pas utiliser des r actifs provenant d autres fournisseurs Conservation et Stabilit des R actifs 1 Tous les composants de la trousse doivent tre conserv s entre 2 C 8 C Dans ces conditions les r actifs non ouverts sont stables jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette L exposition des composants de la trousse pendant plusieurs heures temp rature ambiante n alt re pas les r actifs s ils sont munis de leur bouchon d origine ou rest s scell s NE PAS CONGELER Une fois le coffret ouvert les r actifs se conservent pendant 90 jours Le sachet d aluminium contenant les barrettes de puits doit tre soigneusement referm avec le sachet d shydratant Chaque flacon de conjugu HRP ne peut tre utilis que 2 fois Veuillez le d truire apr s la seconde utilisation Il est possible que des cristaux se forment durant la conservation de la solution de lavage concentr e 20x Redissoudre les cristaux en pla ant le tampon 37 C avant dilution Une fois dilu e la solution reconstitu e est stable pendant 21 jours si elles conserv e entre 2 et 8 C Pr l vement des chantillons Recueillir les chantillons de s rum en respectant les conditions d asepsie Ne pas utiliser de s rums inactiv s par la chaleur Il est recommand de ne pas utiliser de s rums lip miques ou troubles Les particules et les pr cipit s contenus dans le s rum peuvent fausser les r sultats Ces c
15. roduit un conjugu anti IgM humaine coupl e la peroxydase de Raifort HRP Durant cette tape le conjugu HRP va se fixer au complexe antig ne anticorps fix auparavant e Le conjugu non li est limin par lavage e L introduction de substrat de TMB provoque l hydrolyse du substrat par la peroxydase ce qui donne une solution bleue de substrat r duit e La solution d arr t est ensuite ajout e La couleur bleue vire au jaune puis la densit optique est mesur e l aide d un spectrophotom tre une longueur d onde de 450 620nm e L absorbance est proportionnelle la quantit d anticorps Composition du coffret pour une utilisation sp cifiques fix s aux antig nes C pneumoniae manuelle pour une utilisation sur automate R sum des tapes Manuelle Automate R sum des tapes Manuelle Automate 4e de 96 tests R f rence A1192 01M A1192 01D Proc dure manuelle Puits de plaque de micro titration enduits d antig nes de C rt i Lin pneumoniae 1 Plaque de micro titration enduite d antig nes de C L pneumoniae 96 puits s cables enduits d antig nes de C pneumoniae plac s dans un sachet d aluminium Introduction de 2 x 50yl de contr le de seuil contenant une carte de dess chant Introduction de 1 x 50ul de contr le n gatif Introduction de 1 x 50 de contr le positif et de sp cimens 1 plaque 1 plaque 2 Tampon de lavage concentr 20 x tampon A PBS dil
16. t l emploi Contient Calculer et interpr ter les r sultats moins de 0 05 de proclin et moins de 0 1 d azide de sodium comme conservateur Proc dure sur automate 1 flacon de 2 ml 1 flacon de 2 ml Puits de plaque de micro titration enduits d antig nes de C 8 Substrat TMB solution pr te l emploi Contient de la pneumoniae 3 3 5 5 t tram thylbenzidine comme chromog ne et du peroxyde comme substrat Introduction de 2 x 100pl de contr le de seuil l 1 flacon de 14 ml 1 flacon de 16 mI Introduction de 1 x 100ul de contr le n gatif 9 Solution d arr t solution pr te l emploi Contient de Introduction de 1 x 100 de contr le positif et de sp cimens l acide sulfurique dilu 1M dilu s 1 flacon de 15 m1l 1 flacon de 16 ml J 10 Couvercle de plaque 1 unit aucun Couvrir la plaque et laisser incuber 20 minutes 11 Manuel d instructions 1 1 temp rature ambiante Laver 5 fois avec le tampon de lavage Mat riel n cessaire non fourni introduire 50ul de conjugu HRP pr t l emploi 1 Tubes h molyse et portoirs pour pr parer les dilutions 4 des s rums de patients Couvrir la plaque et laisser incuber 30 minutes 2 Micropipettes ou pipettes multi canaux 5 50 50 200 et temp rature ambiante 200 1000 avec embouts jetables M 3 prouvette volum trique de 1 litre Laver 5 fois avec le tampon de lavage 4 Une fiole jaug e de 50ml introduite 100p de substrat TMB 5 Bouteille pour la solution
17. t ouverte et en collant un ruban adh sif sur toute la longueur de l ouverture Note la dur e de conservation des plaques une fois replac es dans un sachet scell est de 90 jours dater du jour de premi re ouverture Diluer le tampon de lavage concentr 1 20 avec de l eau distill e Par exemple pour pr parer un litre de tampon de lavage ajouter 50 ml de tampon de lavage concentr 950ml d eau distill e Conservation une fois dilu e la solution peut tre conserv e une temp rature comprise entre 2 et 8 C durant 21 jours maximum Note lors d une conservation au froid des cristaux peuvent se former dans le tampon de lavage concentr 20x Il s agit d un ph nom ne parfaitement normal Faire dissoudre ces cristaux en ramenant le tampon 37 C avant de le diluer Incubation des chantillons de s rums et des contr les Diluer chaque s rum analyser 1 110 avec le diluant de s rum fourni comme suit Exemple introduire 1090ul de diluant de s rum dans chaque tube Ajouter 10ul de s rum analyser dans chaque tube Note le diluant s rum contient des anti IgG humain afin de neutraliser les IgG et ainsi pr venir les interf rences ventuelles dues aux IgG et aux facteurs rhumato des D poser 50ul de contr le de seuil en double pr t l emploi 50ul de contr le positif pr t l emploi 50ul de contr le n gatif liquide pr t l emploi et 50ul de s rum dilu au 1 110 dans des
18. u s Tween Couvrir la plaque et faisser incuber 30 minutes 1 acon de 100 mT tacon ge 190m 3 Diluant de s rum rouge solution tampon pr te temp rature ambiante l emploi Contient moins de 0 05 de proclin comme x conservateur Laver 5 fois avec le tampon de lavage 1 flacon de 30 ml 2 flacons de 60 ml N o j 4 Conjugu HRP vert pr t l emploi anti IgM humaine Introduire 50ul de conjugu HRP pr t l emploi sp cifique de la cha ne u conjugu e de la Y peroxydase de raifort HRP Contient moins de 0 05 Couvrir la plaque et laisser incuber 30 minutes de proclin comme conservateur temp rature ambiante 2 flacons 4 mI chacun amp 2 flacons 7 ml chacun v 5 Contr le de seuil S rum contenant des IgM Laver 5 fois avec le tampon de lavage sp cifiques de C Pneumoniae pr t l emploi visant 4 d terminer des valeurs seuil Contient moins de 0 1 Introduire 100l de substrat TMB d d azide de sodium comme conservateur 4 1 flacon de 2 5 ml 1 flacon de 2 5 ml Couvrir la plaque et laisser incuber 30 minutes 6 Contr le n gatif s rum humain n gatif en IgM temp rature ambiante sp cifiques de C pneumoniae pr t l emploi Contient 4 moins de 0 05 de proclin et moins de 0 1 d azide de Ajouter 100ul de solution d arr t sodium comme conservateur V 1 flacon de 2 ml 1 flacon de 2 ml Lire l absorbance 450 620nm 7 Contr le positif s rum humain positif en IgM sp cifiques de C pneumoniae pr
19. vage concentr 950ml d eau distill e Conservation une fois dilu e la solution peut tre conserv e une temp rature comprise entre 2 et 8 C durant 21 jours maximum Note lors d une conservation au froid des cristaux peuvent se former dans le tampon de lavage concentr 20x Il s agit d un ph nom ne parfaitement normal Faire dissoudre ces cristaux en ramenant le tampon 37 C avant de le diluer M1192 01F 07 06 15 B Incubation des chantillons de s rums et des contr les 5 Diluer chaque s rum analyser 1 110 avec le diluant de s rum fourni comme suit Exemple Introduire 10901 de diluant de s rum dans chaque tube Ajouter 10ul de s rum analyser dans chaque tube Note le diluant s rum contient des anti IgG humain afin de neutraliser les IgG et ainsi pr venir les interf rences ventuelles dues aux IgG et aux facteurs rhumato des 6 D poser 100 ul de contr le de seuil dans chaque puits D poser 100 ul de contr le n gatif la m me quantit de contr le positif et le s rum dilu 1 110 dans des puits distincts de la bande de test 7 Mettre incuber durant 20 minutes temp rature ambiante 22 C 28 C 8 Jeter le liquide de test alt r par l incubation 9 Proc der au lavage 5 fois avec 500 ul de tampon de lavage 10 Proc der deux phases d aspiration circulaire C Incubation avec le conjugu Chaque flacon de conjugu HRP ne peut tre utilis que 2 fo
Download Pdf Manuals
Related Search