17 OH-PROGESTERONE ELISA
Contents
1. ACETONITRILE SERUM ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PEG EXTR ELU GEL PRE NEUTR TRACEUR Ab Ag Ab Ag CONJ CHROM CHROM AGENT HRP BUF ACID DIST TRAY PMSF STRIP SUB EXTR CART SAV PIPETTE WASH Used symbols Consult instructions for use Storage temperature Use by Batch code Catalogue number Control In vitro diagnostic medical device Manufacturer Contains sufficient for lt n gt tests Wash solution concentrated Zero calibrator Calibrator Control Tracer Tracer Tracer concentrated Tracer concentrated Tubes Incubation buffer Acetonitrile Serum j Specimen diluent Dilution buffer Antiserum Tamunoadsorbent Calibrator diluent Reconstitution solution Polyethylene glycol Extraction solution Elution solution Bond Elut Silica cartridges Pre treatment solution l Neutralization solution E Tracer buffer Microtiterplate i HRP Conjugate HRP Conjugate HRP Conjugate concentrate HRP Conjugate2. tape sans interruption En r gle g n rale la r action enzymatique est lin airement proportionnelle au temps et la temp rature 6 2 R alisation du dosage Chaque test doit inclure une courbe talon Disposer le nombre de puits de micro titration d sir dans le support D poser 25 uL de chaque Calibrateur Control et les chantillons avec de nouveaux c nes de pipette dans les puits appropri s Incuber pendant 5 minutes temp rature ambiante D poser 200 pL d Enzyme Conjugate dans chaque puits Bien m langer pendant 10 secondes Il est important d obtenir un m lange parfait lors de cette tape Incuber pendant 60 minutes temp rature ambiante EVE CON D canter le contenu des puits et rincer les puits 3 fois avec de la solution de lavage dilu e 400 uL par puits Tapoter les puits sur du papier absorbant afin d liminer les gouttelettes r siduelles Remarque importante La sensibilit et la pr cision de ce test sont fortement d pendantes de la bonne r alisation des tapes de lavage 8 Ajouter 200 pL de Substrate Solution chaque puits 9 Incuber pendant 30 minutes temp rature ambiante 10 Stopper la r action enzymatique en ajoutant 100 pL de Stop Solution chaque puits 11 Lire la densit optique 450 10 nm l aide d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques dans les 10 minutes apr s avoir ajout la Stop Solution Catalogue Nr KAPD1292 PI number 1701131 fr
3. Voir Pr paration des r actifs gt o I A 2 z 4 w co Remarque Un Calibrateur 0 Suppl mentaire peut tre fourni sur demande 4 2 Equipement et mat riel requis mais non fournis Un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr 450 10 nm Des micro pipettes de pr cision variables et calibr es Du papier absorbant De l eau distill e 4 3 Stockage et stabilit du kit Les r actifs contenus dans des flacons non ouverts stock s 2 C 8 C seront stables jusqu la date d expiration inscrite sur l tiquette Ne pas utiliser les r actifs au del de cette date Les r actifs contenus dans des flacons ouverts doivent tre stock s 2 C 8 C Les micro plaques doivent tre stock es 2 C 8 C Une fois la capsule d aluminium ouverte attention bien refermer le flacon Les kits ouverts conservent leur activit durant 6 semaines s ils sont stock s comme pr c demment mentionn 4 4 Pr paration des r actifs Amener tous les r actifs et le nombre de barrettes n cessaires au test temp rature ambiante avant utilisation Wash Solution Diluer 30 mL de Wash Solution concentr e avec 1170 mL d eau d sionis e pour un volume final de 1200 mL Remarque La solution de lavage dilu e est stable deux semaines a temp rature ambiante 4 5 Elimination des d chets relatifs au kit L limination des d chets relatifs au kit doit tre r alis e
4. basal nica para hacer un diagn stico Comienzo tard o de hiperplasia adrenal Recientemente las concentraciones de 17 a OHP se han utilizado en la evaluaci n de mujeres androgenizadas en quienes se sospecha un comienzo tard o de deficiencia de 21 hidroxilasa En esta condici n la presentaci n cl nica es muy poco evidente e igual como se presenta la forma cl sica de la enfermedad de ovario poliqu stico las concentraciones plasm ticas basales de 17 a OHP al contrario de la hiperplasia cong nita adrenal son normales El diagn stico se hace administrando una prueba de estimulaci n de ACTH Otros usos Las mediciones de la concentraci n de 17 a OHP tambi n se usan para evaluar hombres y mujeres con acn vulgaris calvicie masculina y en algunos casos de infertilidad no evidente La experiencia en estos usos es muy limitada 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO El Kit DIAsource 17 a OH Progesterone ELISA es un ensayo en fase s lida de inmunoadsorci n unido a enzimas ELISA basado en el princi pio de uni n competitiva Los pocillos de las placas est n recubiertos con un anticuerpo policlonal dirigido contra un foci antig nico en la mol cula 17 a OHP En las muestras de los pacientes 17 a OHP compite con un conjugado 17 a OHP peroxidasa de r bano en la uni n al anticuerpo inmovilizado Des pu s de la incubaci n el conjugado no unido se lava La cantidad de conjugado de peroxidasa unido es inversamente proporcional a la concentraci
5. n de 17 a OHP en la muestra Despu s de la adici n de la soluci n sustrato la intensidad de color desarrollado es inversamente proporcional a la concentraci n de 17 a OHP en la muestra del paciente Catalogo Nr KAPD1292 Revisi n nr 120604 1 3 PRECAUCIONES e Este kit es solamente para diagn stico in vitro S lo para uso profesional e Para obtener informaci n de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material e Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV I II HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA Sin embargo todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensaci n como potencialmente biopeligrosos e Antes de comenzar el ensayo leer todas las instrucciones cuidadosamente Usar la versi n v lida del inserto que viene con el kit Asegurarse de haber comprendido todas las instrucciones e La microplaca contiene tiras desprendibles Los pocillos no usados deben ser almacenados de 2 C a 8 C en la bolsa de aluminio sellada y colocados en el marco provisto para ser utilizados e El pipeteo de muestras y reactivos debe hacerse lo m s r pido posible y en la misma secuencia para cada paso e Usar las cubetas para un solo reactivo Esto es especialmente importante en el caso de las cubetas para el sustrato Usar una cubeta para soluci n de sustrato que h
6. of congenital adrenal hyperplasia due to incomplete 21 hydroxylase deficiency mimicking polycystic ovarian disease Am J Obstet Gynecol 138 720 1980 7 Urban M D P A Lee and C J Migeon Adult high infertility in men with congenital adrenalized hyperplasia N Engl J Med 299 1392 1978 8 Meikle A W R J Worley and C D West Adrenal corticoid hyper response in hirsute women Fertil Steril 41 575 1984 9 Ueshiba H Zerah M New M I Enzyme linked Immunosorbent assay ELISA Method for screening of non classical steroid 21 Hydroxylase deficiency Norm Metab Res 26 43 1994 fecha de revision 2012 06 04 Catalogo nr KAPD1292 P I numero 1701131 es Revision nr 120604 1 CE 17 a OH Progesterone ELISA fr KAPD1292 A UTILISER EN CAS DE TEST DIAGNOSTIQUE IN VITRO DiAsource ImmunoAssays S A Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium Tel 32 10 84 99 11 Fax 32 10 84 99 91 1 INTRODUCTION Le kit de dosage immuno enzymatique DlAsource 17 a OH Progesterone ELISA propose les mat riaux requis pour la mesure quantitative de 17 a hydroxyprogest rone 17 a OHP dans le s rum ou le plasma Ce kit est a utiliser uniquement dans le cadre de tests diagnostiques in vitro 2 PRINCIPE DU TEST Le kit DIASOURCE 17 a OH Progesterone ELISA est bas sur une r action immuno enzymatique comp titive Les micro plaques sont recouvertes avec un anticorps polyclonal dirig contre un antig ne sp cifique
7. pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absor bente para eliminar las gotas residuales Nota importante La sensibilidad y la precisi n de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realizaci n correcta del proceso de lavado 9 Adicionar 200 uL de Soluci n chrom gena TMB a cada pocillo 10 Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente 11 Parar la reacci n enzim tica mediante la adici n de 100 uL de Soluci n de parada a cada pocillo 12 Leer la OD a 450 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos despu s de la adici n de la Soluci n de parada 6 3 C lculo de los Resultados Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de calibradores controles y muestras de pacientes Construir una curva calibrador mediante la representaci n de la absorbancia media obtenida para cada calibrador frente a su concentraci n con el valor de absorbancia en el eje vertical Y y la concentraci n en el eje horizontal X 3 Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentraci n correspondiente a partir de la curva est ndar 4 M todo automatizado Los resultados en la IFU se han calculado autom ticamente usando una curva de regresi n 4 PL 4 Par metros Log sticos Otras funciones de regresi n dar n lugar a resultados sensiblemente diferentes 5 La concentraci n de las muestra puede leerse directamente de la curva de calibradores Las muestras c
8. selon les r gles nationales en vigueur Les informations sp cifiques au kit sont pr sen t es dans la fiche de s curit voir chapitre 13 4 6 Kits endommag s Dans le cas de dommages importants survenus au kit ou ses composants informer DlAsource au plus tard une semaine apr s r ception du kit Les composants endommag s ne doivent pas tre utilis s pour le test Ils doivent tre stock s jusqu a ce qu une solution adapt e ait t trouv e Apr s cela ils doivent tre limin s selon les directives officielles en vigueur Catalogue Nr KAPD1292 PI number 170113 1 fr Revision Nr 120604 1 5 ECHANTILLON S rum peut tre utilis pour ce test Ne pas utiliser des chantillons h molys s ict riques ou lip miques Remarque Les chantillons contenant de l azide de sodium ne doivent pas tre utilis s pour ce test 5 1 Pr levement et pr paration des chantillons S rum Pr lever le sang par ponction veineuse ex Sarstedt Monovette 02 1388 001 laisser coaguler puis s parer le s rum par centrifugation a temp rature ambiante Ne pas centrifuger avant que la coagulation ne soit termin e Les patients sous traitement anti coagulant peuvent deman der un temps de coagulation plus important 5 2 Conservation des chantillons Les tubes contenant les chantillons doivent tre ferm s et peuvent tre stock s jusqu 24 heures 2 C 8 C avant d tre test s Les chantillons stock s pou
9. values for the patient samples will not be affected e Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes e Donot smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled e Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contamination of reagents or specimens may give false results e Handling should be done in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation e Do not use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels e All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microtiterplate readers e Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding characteristics of the plates may result slightly different e Avoid contact with Stop Solution containing 0 5 M H2SO4 It may cause skin irritation and burns e Some reagents contain Proclin BND and MIT as preservatives In case of contact with eyes or skin flush immediately with water e TMB substrate has an irritant effect on skin and mucosa In case of possible contact wash eyes with an abundant volume of water and skin with soap and abundant water Wash contamin
10. A Calibrator Optical Units 450 nm Calibrator 0_ 0 ng mL Calibrator 1_ 0 15 ng mL Calibrator 2 0 5 ng mL 1 1 EH 1 Calibrator 3 1 5 ng ml 069 7 EXPECTED VALUES It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values In a study using the 17 a OH Progesterone ELISA the following values are observed Newborns girls boys boys and girls 1 month after birth 2 4 16 8 ng mL 0 0 8 0 ng mL 0 16 8 ng mL 2 month after birth 1 6 9 7 ng mL 3 6 13 7 ng mL 1 9 9 8 ng mL 3 month after birth 0 1 3 1 ng mL 1 7 4 0 ng mL 0 1 4 0 ng mL Children 3 14 years 0 07 1 7 ng mL Reproductive aged women Follicular phase 0 1 0 8 ng mL Luteal phase 0 6 2 3 ng mL 0 3 1 4 ng mL Post ACTH lt 3 2 ng mL Third trimester 2 0 12 ng mL Postmenopausal women 0 13 0 51 ng mL Normalmen 0 5 2 1 ng ml The results alone should not be the only reason for any therapeutic consequences The results should be correlated to other clinical observations and diagnostic tests 8 QUALITY CONTROL Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is a
11. ATION Toute utilisation impropre des chantillons ou toute modification du test peut influencer les r sultats 10 1 Substances parasites L h moglobine jusqu 4 mg mL la bilirubine jusqu 0 5 mg mL et les triglyc rides jusqu 7 5 mg mL n ont aucune influence sur les r sul tats du dosage 10 2 Drogues parasites Jusqu pr sent nous ne connaissons aucune substance drogues capable d influencer la mesure de 17 a OHP dans un chantillon 10 3 Effet de surdosage Aucun effet de surdose n a t observ avec ce test 11 ASPECTS LEGAUX 11 1 Fiabilit des r sultats Ce test doit tre exactement utilis selon les instructions d utilisation du fabricant De plus les utilisateurs doivent strictement respecter les r gles de la bonne pratique de laboratoire ou autres lois nationales Cela est sp cialement le cas pour l utilisation des r actifs contr les Pour chaque test il est important d inclure un nombre suffisant de contr les afin de pouvoir valider l exactitude et la pr cision du test Les r sultats du test sont valides si et seulement si tous les contr les sont compris dans les gammes de mesure mentionn es et si tous les autres param tres du test sont galement compris dans les instructions de ce test En cas de doute ou d inqui tude contacter DIAsource 11 2 Cons quences th rapeutiques Les suites th rapeutiques ne devront jamais tre bas es sur les r sultats de laboratoire seuls m me s
12. Corticosterone lt 0 05 Aldosterone lt 0 01 Androstendione lt 0 01 Dehydroepiandrosten sulfate lt 0 01 Prednison lt 0 01 9 3 Analytical Sensitivity The analytical sensitivity was calculated from the mean minus two standard deviations of twenty 20 replicate analyses of Calibrator O and was found to be 0 034 ng mL 9 4 Precision 9 4 1 Intra Assay Variation The within assay variability is shown below M ons CV 9 4 2 Inter Assay Variation The between assay variability is shown below M inomi CV 9 5 Recovery Recovery was determined by adding increasing amounts of the analyte to three different patient sera containing different amounts of endogenous analyte Each sample non spiked and spiked was assayed and analyte concentrations of the samples were calculated from the calibration curve The percentage recoveries were determined by comparing expected and measured values of the samples Endogenous Added e Expected Conc Recovery 17a OH P 17a OH P 17a OH P 17a OH P ng mL ng mL ng mL ng mL Catalogue Nr KAPD1292 PI number 1701131 en Revision Nr 120604 1 9 6 Linearity Measured Conc 17a OH P ng mL Expected Conc Recovery 17a OH P ng mL 10 LIMITATIONS OF USE Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is performed with a complete understanding of the package insert instruction and with adherence to good laboratory practice Any imp
13. DA Ge CE 17 OH PROGESTERONE ELISA KAPD1292 LOT 120604 2 CE 17 a OH Progesterone ELISA ECEN KAPD1292 IN VITRO DIAGNOSTIC USE DiAsource ImmunoAssays S A Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium Tel 32 10 84 99 11 Fax 32 10 84 99 91 1 INTRODUCTION The DiAsource 17 a OH Progesterone Enzyme Immunoassay Kit provides materials for the quantitative determination of 17 a OH Proges terone in serum This assay is intended for in vitro diagnostic use only The steroid 17 a Hydroxyprogesterone 17 a OHP is produced by both the adrenal cortex and gonads Even though 17 a OHP has relatively little progestational activity it is of intense clinical interest because it is the immediate precursor to 11 desoxycortisol Cpd S Because Cpd S is produced by 21 hydroxylation of 17 a OHP measurement of 17 a OHP is a useful indirect indicator of 21 hydroxylase activity In congenital 21 hydroxylase deficiency the most common variety of congenital adrenal hyperplasia CAH 17 a OHP is secreted in abundant excess It is mode rately elevated in the 11 f hydroxylase deficiency as well Measurement of 17 a OHP is therefore valuable in the initial diagnosis of CAH 1 1 CLINICAL PHYSIOLOGY Adult non pregnant women In adult non pregnant women in the childbearing age group 17 a OHP concentrations vary over the menstrual cycle with luteal phase concentra tions being higher than follicular phase concentrations This is because 17
14. HRP Pipeta E Tamp n de lavado Revision nr 140723 P I Number 1701000 ACETONITRILE SERUM SPE BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PEG EXTR ELU GEL PRE NEUTR TRACEUR Ab Ag Ab Ag CONJ CHROM CHROM AGENT HRP BUF ACID DIST TRAY PMSF es STRIP SUB EXTR CART SAV PIPETTE WASH Symboles utilis s Consulter les instructions d utilisation Temp rature de conservation Utiliser jusque Num ro de lot R f rence de catalogue Contr le Dispositif m dical de diagnostic in vitro Fabricant Contenu suffisant pour lt n gt tests Solution de lavage concentr e Calibrateur z ro Calibrateur Contr le Traceur Traceur Traceur concentr Traceur concentr Tubes Tampon d incubation Ac tonitrile S rum Diluant du sp cimen Tampon de dilution Antis rum Immunoadsorbant Diluant de calibrateur Solution de reconstitution Glycol Poly thyl ne Solut
15. Revision Nr 120604 1 6 3 Calcul des r sultats Calculer les valeurs moyennes des densit s optiques pour chaque s rie de calibrateurs contr les et chantillons Etablir la courbe talon en reportant la densit optique moyenne de chaque valeur standard en fonction de sa concentration en posant la densit optique en axe des ordonn es et la concentration en axe des abscisses 3 L utilisation de la densit optique moyenne pour chaque chantillon d termine la concentration correspondante partir de la courbe talon 4 M thode automatique Les r sultats dans le IFU ont t calcul s de fa on automatique en utilisant une courbe de r gression 4 PL 4 Parameter Logistics D autres fonctions logistiques peuvent donner des r sultats l g rement diff rents 5 La concentration des chantillons peut tre lue directement partir de cette courbe talon Les chantillons avec une concentration sup rieure celle du plus haut standard doivent tre dilu s de nouveau Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration 6 3 1 Les r sultats suivants sont ici pr sent s titre d exemple et ne peuvent tre utilis s au moment de l essai Exemple d une courbe calibrateur typique Unit s optiques 450 Calibrateur nm Calibrateur 0 Calibrateur 1 ng mL 0 ng mL 0 15 1 89 1 51 Calibrateur 2 0 5 ng mL 1 1 Calibrateur 3 1 5 ng mL 7 VALEURS ATTENDUES ll est for
16. Tel 32 10 84 99 11 Fax 32 10 84 99 91 1 INTRODUCCI N El Kit de inmunoensayo enzim tico DIAsource 17 a OH Progesterone proporciona los materiales necesarios para la determinaci n cuantita tiva del 17 a Hidroxiprogesterona 17 a OHP en suero Este ensayo est dise ado solo para diagn stico in vitro El esteroide 17 a Hidroxiprogesterona 17 a OHP es producido tanto por las gl ndulas suprarrenales como por las g nadas A pesar de que 17 a OHP tiene una actividad progestacional relativamente d bil es de alto inter s cl nico debido a que es el precursor inmediato del 11 deoxicortisol Cpd S Debido a que Cpd S es producido por la 21 hidroxilaci n de 17 a OHP la medici n de 17 a OHP es un indicador indirecto til para medir actividad de la 21 hydroxylasa En la deficiencia cong nita de 21 hidroxilasa la variedad de hiperplasia cong nita suprarrenal m s com n CAH 17 a OHP es secretada en exceso Tambi n est aumentada en forma moderada en la deficiencia de 11 B hidroxilasa Por lo tanto la medici n de 17 a OHP es de valor para el diagn stico inicial de CAH 1 1 FISIOLOG A CLINICA Mujeres adultas no embarazadas En el grupo de mujeres adultas no embarazadas en edad reproductiva la concentraci n de 17 a OHP var a a trav s del ciclo menstrual con las concentraciones durante la fase l tea siendo m s altas que las concentraciones de la fase folicular Esto se debe a que 17 a OHP es secretada en al mismo tiempo qu
17. a OHP is secreted in parallel with progesterone from maturing follicles or from the corpus luteum There is also a diurnal variation of 17 a OHP concentrations This rhythm is parallel with adrenal cortisol secretion such that maximum 17 a OHP concentrations are measured in samples obtained between midnight and 8 00 am Adult males There is little information available on the systematic variability of 17 a OHP concentration in adult males Pregnant women and newborn children The steroid 17 a OHP is produced in large amounts by the fetus and the adrenals It is secreted in abundance into both the fetal and maternal circulation The maternal concentrations of 17 a OHP increase very sharply after 32 weeks gestational age to about 4 fold above basal concentra tions at term 1 2 CLINICAL APPLICATIONS Congenital adrenal hyperplasia The principal application of the 17 a OHP Elisa is in the diagnosis of CAH in newborns with ambiguous genitalia and in virilized adolescent girls Since 17 a OHP is the immediate precursor to 11 desoxycortisol basal 17 a OHP concentrations are sharply elevated in patients with 21 hydroxylase deficiency and to a lesser degree in patients with 11 hydroxylase deficiency Because 17 a OHP concentrations are so markedly elevated in newborns and adolescent girls afflicted with CAH a single basal measurement is all that is normally required to make the diagnosis Late onset adrenal hyperplasia More recently 17 a OHP con
18. a fiche de s curit concernant ce produit peut tre obtenue en contactant directement DIAsource ImmunoAssays SA Les fiches de s curit sont en accord avec les directives europ ennes EU 91 155 EC Catalogue Nr KAPD1292 PI number 1701131 fr Revision Nr 120604 1 4 KIT COMPONENTS 4 1 Contents of the Kit is El Plaquettes de micro titration 12x8 d tacher barrettes plaques de 96 puits Les puits sont recouverts avec un anticorps Anti 17 a OHP polyclonal N 1 a6 Set de r f rence des calibrateurs 6 flacons 1 ml Contient agent de conservation sans mercure Concentrations 0 15 0 5 1 5 3 7 5 20 ng ml 0 45 1 5 4 5 9 1 22 7 60 6 nmol L Conversion ng mL x 3 03 nmol L Calibrateur 0 1 flacon 1 ml Contient agent de conservation sans mercuure N o gt F wm o f i 4 SONTROL 2 flacons 1 mL pr t l emploi Les valeurs contr les et limites sont indiqu es sur l tiquette du flacon ou sur la fiche QC Contient agent de conservation sans mercure 1 flacon 25 ml pr t l emploi 17 a OH Progesterone conjugu la HRP Contient agent de conservation sans mercure Solution Substrat 1 flacon 25ml pr t l emploi T tram thylbenzidine TMB 7 stop SOLN Solution d arr t 1 flacon 14 ml Contient 0 5 M de H2SO4 Eviter les contacts avec la solution stop Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau Solution de lavage 1 flacon 30 ml concentr 40 x
19. a mala interpretaci n de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 11 2 son tambi n inv lidas A pesar de todo en el caso de cualquier reclamaci n la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit Cualquier da o provocado al kit durante su transporte no est sujeto a la responsabilidad del fabricante 12 REFERENCIAS 1 Abraham G E R S Swerdloff D Tulchinsky et al Radioimmunoassay of plasma 17 hydroxyprogesterone J Clin Endocrinol Metab 33 42 1971 2 Chrousos G P D L Loriaux D L Mann et al Late onset 21 hydroxylase deficiency mimicking idiopathic hirsutism or polycystic avarian disease Annals Intern Med 96 143 1982 3 Buster J E R J Chang D L Preston et al Interrelationships of circulating maternal steroids progesterone 16a hydroxyprogesterone 17a hydroxyprogesterone 20a dihydroprogesterone gamma 5 pregnolonone gamma 5 pregnolonone sulfate gamma 5 pregnolone sulfate and 17 hydroxy gamma 5 pregnolonone J Clin Endocrinol Metab 48 133 1979 4 New MI B Dupont S Pang et al An update on congenital adrenal hyperplasia Recent Progress in Hormone Research 37 105 1981 5 Pang S 5 J Hotchkiss A Drash et al Micro filter paper method for 17a hydroxyprogesterone radioimmunoassay Its application for rapid screening for congenital adrenal hyperplasia J Clin Endocrinol Metab 45 1003 1977 6 Lobo R A U Goebelsmann Adult manifestation
20. a sido usada previamente con la soluci n de conjugado puede colorear la soluci n No devolver los restos de reac tivos a los envases originales ya que puede producirse contaminaci n de los reactivos e Mezclar muy bien el contenido de los pocillos para asegurar un buen resultado No volver a usar las microplacas e No dejar que los pocillos se sequen durante el ensayo agregar los reactivos inmediatamente despu s de terminado el paso de enjuague e Dejar que los reactivos alcancen temperatura ambiente 21 26 C antes de comenzar la prueba La temperatura afectar las lecturas de absorbancia del ensayo Sin embargo los valores de las muestras de los pacientes no se ver n afectados e Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas e No fumar comer beber o usar cosm ticos en reas donde las muestras o los reactivos del kit est n siendo usados e Usar guantes de l tex cuando se utilicen las muestras y los reactivos La contaminaci n microbiana de los reactivos o las muestras puede dar resultados err neos e El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas e No utilizar los reactivos despu s de su fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del kit e Todos los vol menes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo Los resultados ptimos del ensayo s
21. aboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutical conse quences be derived The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutical consequences 11 3 Liability Any modification of the test kit and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 11 2 are also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer Catalogue Nr KAPD1292 PI number 1701131 en Revision Nr 120604 1 12 REFERENCES 1 Abraham G E R S Swerdloff D Tulchinsky et al Radioimmunoassay of plasma 17 hydroxyprogesterone J Clin Endocrinol Metab 33 42 1971 2 Chrousos G P D L Loriaux D L Mann et al Late onset 21 hydroxylase deficiency mimicking idiopathic hirsutism or polycystic avarian disease Annals Intern Med 96 143 1982 3 Buster J E R J Chang D L Preston et al Interrelationships of circulating maternal steroids progesterone 16a hydroxyprogesterone 17a hydroxyprogesterone 20a dihydro
22. antillons Ne pas fumer manger boire ou utiliser des produits cosm tiques dans les zones o les chantillons ou le kit ont t mani s Porter des gants d examen lors de l utilisation des chantillons ou des r actifs Une contamination microbienne des chantillons ou des r actifs pourrait fausser les r sultats l utilisation de ce kit devra tre en accord avec les normes ou recommandations nationales de s curit en vigueur concernant les produits a risque biologique Ne pas utiliser les r actifs au del de la date d expiration inscrite sur l emballage Tous les volumes indiqu s doivent tre scrupuleusement respect s comme indiqu dans le protocole exp rimental Seule l utilisation de pipettes calibr es ou d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr garantit l obtention de r sultats optimaux ce test Ne pas m langer ou utiliser des r actifs contenus dans des kits de lots diff rents Il est conseill de ne pas changer les puits de diff rentes plaques m me si celles ci proviennent du m me lot Les kits peuvent avoir t transport s ou stock s diff remment et les caract ristiques de liaison de chaque plaque pourraient ainsi tre modifi es L limination des solutions chimiques et des r actifs contenus dans ce kit utilis s ou non doit tre en accord avec la r glementation nationale en vigueur concernant l limination des d chets risque biologique L
23. ated objects before reusing them If inhaled take the person to open air e Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guideline or regulation e For information on hazardous substances included in the kit please refer to Material Safety Data Sheets Material Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DIAsource ImmunoAssays S A 4 KIT COMPONENTS 4 1 Contents of the Kit El 12x8 break apart strips 96 wells Wells coated with Anti 17 a OH Progesterone antibody polyclonal 2 CAL En N 1 to 6 Reference Calibrator Set 6 vials 1 ml each Contains non mercury preservative See exact values on vial labels Conversion ng mL x 3 03 nmol L 3 caL lo Zero Calibrator 1 vial 1 ml Contains non mercury preservative 4 2 vials 1 mL each ready to use For control values and ranges please refer to vial label or QC Datasheet Contains non mercury preservative 1 vial 25 ml ready to use 17 a OH Progesterone conjugated to horseradish peroxidase Contains non mercury preservative Substrate Solution 1 vial 25ml ready to use TMB SOLN 1 vial 14 ml contains 0 5M H2SO4 Avoid contact with the stop solution It may cause skin irritations and burns 8 WASH 40x concentrated 1 vial 30 ml See Preparation of Reagents Q o 4 w STOP N Note Additional Calibrator O for sample dilution
24. bles Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control Es importante incluir siempre dentro del procedimiento de ensayo un n mero suficiente de controles para validar la exacti tud y la precisi n del ensayo Los resultados del ensayo son v lidos s lo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros par me tros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo En cado de alguna duda o inquietud por favor contactar con DlAsource 11 2 CONSECUENCIAS TERAP UTICAS Las consecuencias terap uticas nunca deben basarse s lo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo est n de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 11 1 Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro cl nico de un paciente Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio est n en acuerdo con todo el cuadro cl nico de un paciente se pueden derivar con secuencias terap uticas Nunca deben derivarse consecuencias terap uticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo 11 3 RESPONSABILIDAD Cualquier modificaci n del kit y o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente alos resultados esperados y en la validez de todo el test Esas modificaciones y o cambios invalidad cualquier reclamaci n de reposici n Las reclamaciones emitidas debidas a un
25. centrations have been utilized in the evaluation of androgenized women where late onset 21 hydroxylase deficiency is suspected This condition is clinically very subtile and since the presentation is the same as classical polycystic ovarian disease basal plasma 17 a OHP concentrations unlike classical congenital adrenal hyperplasia are normal The diagnosis is made by administration of an ACTH stimulation test Other applications Measurement of 17 a OHP concentrations is also utilized in evaluation of both men and women with acne vulgaris male pattern baldness and in some subtile forms of infertility Experiences with these applications are very limited 2 PRINCIPLE OF THE TEST The DiAsource 17 a OH Progesterone ELISA Kit is a solid phase enzyme linked immunosorbent assay ELISA based on the principle of com petitive binding The microtiter wells are coated with a polyclonal antibody directed towards an antigenic site on the 17 a OHP molecule Endogenous 17 a OHP of a patient sample competes with a 17 a OHP horseradish peroxidase conjugate for binding to the coated antibody After incubation the unbound conjugate is washed off The amount of bound peroxidase conjugate is inversely proportional to the concentration of 17 a OHP in the sample After addition of the sub strate solution the intensity of colour developed is inversely proportional to the concentration of 17 a OHP in the patient sample 3 PRECAUTIONS e This kit is for in vitro diag
26. ciones de uso Limitaci n de temperatura l Fecha de caducidad E Codigo de lote g l N mero de cat logo Control Producto sanitario jara diagn stico in vitro Fabricante Contenido suficiente para lt n gt ensayos Soluci n de lavado concentrada Calibrador cero Calibrador Control Trazador Trazador Trazador concentrada Trazador concentrada Tubos Tampon de incubacion Acetonitrilo Suero Diluyente de Muestra l Tamp n de diluci n Antisuero Inmunoadsorbente iluyente de calibrador luci n de Reconstitucion Glicol Polietileno l Soluci n de extracci n Soluci n de eluci n Cartuchos Bond Elut Silica Soluci n de Pre tratamiento Soluci n de Neutralizaci n Tamp n de trazador 7 Placa de microvaloraci n HRP Conjugado HRP Conjugado HRP Conjugado concentrada HRP Conjugado concentrada Tampon de Conjugado Crom gena TMB concentrada Soluci n Crom gena TMB Tamp n de sustrato Soluci n de Parada Suero de Incubaci n Tamp n i AP Conjugado Sustrato PNPP i Concentrado de conjugado de biotina Agente de precipitaci n Concentrado avidina HRP Tamp n de ensayo Conjugado de biotina Anticuerpo espec fico Estreptavidina HRP Concentrado Uni n no espec fica Segundo anticuerpo Tamp n de Acidificaci n Distribuidor Bandejas de incubaci n Soluci n de PMSF Proteger de la luz Tries Dot Sustrato Concentrado de tamp n de extracci n Cartucho Estreptavidina
27. concentrate Conjugate buffer Chromogenic TMB concentrate Chromogenic TMB solution Substrate buffer Stop solution ncubation serum Buffer AP Conjugate Substrate PNPP Biotin conjugate concentrate Precipitating Agent Avidine HRP concentrate Assay buffer Biotin conjugate f Specific Antibody Streptavidin HRP concentrate Non specific binding 2nd Antibody Acidification Buffer Distributor ncubation trays PMSF solution Protect from light Dot Strip Substrate Extraction Buffer Concentrate Cartridge Streptavidin HRP E Pipette Wash buffer Revision nr 140723 P I Number 1701000 ACETONITRILE SERUM SPE BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PEG EXTR ELU GEL PRE NEUTR TRACEUR Ab Ag Ab Ag CONJ CHROM CHROM AGENT HRP BUF ACID DIST TRAY PMSF es STRIP SUB EXTR CART SAV PIPETTE WASH Simbolos utilisados Consultar las instruc
28. ctivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso Todos los reactivos deben mezclarse sin formar es puma Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupci n Utilizar puntas de pipeta de pl stico nuevas para cada est ndar control o muestra para evitar combinaciones cruzadas La absorbancia es funci n del tiempo de incubaci n y la temperatura Antes de comenzar el ensayo se recomienda que todos los reactivos est n preparados tapas removidas todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente etc Esto asegurar un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones Como regla general la reacci n enzim tica es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura Catalogo nr KAPD1292 P I numero 1701131 es Revisi n nr 120604 1 6 2 Procedimiento de ensayo Cada uno debe incluir una curva de estandares Asegurar el numero deseado de pocillos en el recipiente Dispensar 25 uL de cada Calibrador Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados Incubar durante 5 minutes a temperatura ambiente Dispensar 200 uL de HRP conjugado a cada pocillo Mezclar totalmente durante 10 segundos Es importante mezclar completamente en este paso Incubar durante 60 minutes a temperatura ambiente Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos OOP E E NE Lavar los pocillos 3 veces con soluci n de lavado diluida 400 uL por
29. de la mol cule 17 a OHP Le 17 a OHP endog ne contenu dans l chantillon du patient entre en comp tition avec le conjugu e la HRP pour la liaison l anticorps Apr s incubation le conjugu non li est limin durant le lavage des puits La quantit de peroxidase li e est inversement proportionnelle la concentration de 17 a OHP contenue dans l chantillon Suite a l addition de solution substrat l intensit de coloration obtenue est inversement proportionnelle la concentration de 17 a OHP contenue dans l chantillon 3 PRECAUTIONS D UTILISATION Ce kit est uniquement destin aux tests diagnostiques in vitro Utilisez uniquement la version valide d instructions d utilisation qui est incluse dans le kit Les informations concernant la toxicit des r actifs contenus dans ce kit sont pr sent es dans la fiche de s curit Material Safety Data Sheets Tous les r actifs de ce kit contenant du s rum ou du plasma humain ont t test s avec des r sultats n gatifs pour le VIH I II le HBsAg et le HCV selon les normes FDA en vigueur N anmoins lors de leur utilisation tous les r actifs de ce kit doivent tre manipul s avec pr caution Eviter les contacts avec la Stop Solution celle ci contient 0 5 M de H2SO4 Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau Ne jamais pipeter avec la bouche et viter tout contact de la peau ou des muqueuses avec les r actifs ou les ch
30. del Kit 12x8 tiras separables 96 pocillos Pocillos recubiertos con anticuerpo anti 17 a OHP policlonal El N 1 6 Set de Calibradores de Referencia 6 viales 1 ml cada uno Contiene conservante sin mercurio Mirar los valores exactos en las etiquetas Conversi n ng mL x 3 03 nmol L CONTROL N i y 2 viales 1 mL listo para usar Referir los valores y rangos del control a la etiqueta del vial o a la Hoja de datos QC Contiene conservante sin mercurio N o gt F ad Calibrador Cero 1 vial 1 ml Contiene conservante sin mercurio 1 vial 25 ml listo para usar 17 a OHP conjugado con la Peroxidasa de r bano Contiene conservante sin mercurio al z 6 CHROM TMB Soluci n de sustrato 1 vial 25ml listo para usar cmon me sa 7 1 vial 14 ml contiene 0 5M H2S04 Evitar el contacto con la Soluci n de parada Puede causar irritaci n y quemaduras en la piel WASH 40x concentrado 1 vial 30 ml ver Preparaci n de los Reactivos o Nota Se puede solicitar el Calibrador O para la diluci n de la muestra Catalogo nr KAPD1292 P I numero 1701131 es Revisi n nr 120604 1 4 2 Equipamiento y material requerido pero no provisto Lector de microplacas calibrado 450410 nm Micropipetas de precisi n variable calibradas Papel absorbente Agua destilada Papel de gr fico Semi logar tmico 4 3 Almacenamiento y estabilidad del kit Cuando se almac
31. dvised to assure the day to day validity of results Use controls at both normal and pathological levels The controls and the corresponding results of the QC Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid In this case please check the following technical areas Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing methods 9 ASSAY CHARACTERISTICS 9 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 0 034 20 ng mL 9 2 Specificity of Antibodies Cross Reactivity The following substances were tested for cross reactivity of the assay Steroid Cross Reaction 17 a OH Progesterone 100 0 Estriol lt 0 01 Estradiol 178 lt 0 01 Testosterone lt 0 01 Catalogue Nr KAPD1292 PI number 1701131 en Revision Nr 120604 1 Dihydrotestosterone lt 0 01 DOC 0 05 11 Desoxicortisol 1 4 Progesterone 1 2 DHEA lt 0 01 DHEAS lt 0 001 Cortisol lt 0 01
32. e la progesterona por fol culos en proceso de maduraci n o por el cuerpo l teo Tambi n existe un rango de concentracio nes diurnas de 17 a OHP Este ritmo es paralelo a la secreci n de cortisol suprarrenal de modo que las concentraciones m ximas de 17 a OHP se pueden medir en mues tras obtenidas entre la medianoche y las 8 00 am Hombres Adultos Hay muy poca informaci n disponible acerca de la variabilidad sistem tica de la concentraci n de 17 a OHP en hombres adultos Mujeres embarazadas y reci n nacidos El feto y las suprarrenales producen grandes cantidades del esteroide 17 a OHP Se secreta en forma abundante a la circulaci n tanto de la madre como del feto Las concentraciones maternas de 17 a OHP aumentan dr sticamente despu s de la semana 23 de gestaci n hasta 4 veces sobre la concentraci n basal a t rmino 1 2 USOS CL NICOS Hiperplasia adrenal cong nita El uso m s importante del ELISA 17 a OHP es en el diagn stico de CAH en reci n nacidos con genitalia ambigua y ni as adolecentes viriliza das Ya que 17 a OHP es el precursor inmediato de 11 desoxicortisol las concentraciones basales de 17 a OHP se encuentran aumentadas en forma dr stica en pacientes deficientes en 21 hidroxilasa y en menor grado en pacientes deficientes en 11 hidroxilasa Debido a que las concentraciones est n tan elevadas en los reci n nacidos y ni as adolecentes que presentan CAH normalmente lo nico que se requiere es una medici n
33. e obtienen solo cuan do se utilizan pipetas y lectores de microplacas calibrados e No mezclar o usar componentes de kits con distinto n mero de lote Se recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las caracter sticas de uni n de las pla Cas pueden resultar diferentes e Evitar contacto con la Soluci n de Parada que contiene 0 5 M H2SO4 Puede causar irritaci n en la piel y quemaduras e Algunos reactivos contienen Proclin BND y MIT como conservantes En caso de entrar en contacto con los ojos o la piel lavar inmediata mente con abundante agua e El sustrato TMB tiene un efecto irritante en piel y mucosas En caso de posible contacto lavar los ojos con un volumen abundante agua y la piel con jab n y abundante agua Lavar los objetos contaminados antes de usarlos nuevamente Si se inhala sacar a la persona al aire libre e Los compuestos qu micos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas e Para informaci n sobre sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor referirse a las hojas de datos de seguridad de materiales Las hojas de datos de seguridad de materiales para este producto est n disponibles a pedido en DIAsource ImmunoAssays S A 4 COMPONENTES DEL KIT A 1 Componentes
34. ena a 2 8 C los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad No utilizar los reactivos mas alla de esta fecha Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2 8 C Las placas multipocillo han de almacenarse a 2 8 C Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo Los kits abiertos conservan su actividad durante 6 semanas si se almacenan como se ha descrito arriba 4 4 Preparacion de los Reactivos Dejar que todos los reactivos y el numero requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse Soluci n de lavado Agregar agua desionizada a la soluci n de lavado concentrada x 40 Mezclar 30 mL de la soluci n de lavado concentrada con 1170 mL de agua desionizada hasta un volumen final de 1200 mL La soluci n del lavado diluida es estable durante 2 semanas a temperatura ambiente 4 5 Eliminaci n del Kit La eliminaci n del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales En las hojas de datos de seguridad se proporciona informaci n espe cial de este producto 4 6 Kits da ados En caso de que el kit o sus componentes est n seriamente da ados DIAsource ImmunoAssays S A debe ser informado por escrito a mas tardar una semana despu s de recibido el kit Componentes individuales que han sido seriamente da ados no deben ser utilizados para las pruebas Deben ser almacenados hasta que se encuentre una soluci n adecuada Despu s de esto pueden ser eliminados de acu
35. erdo a las reglas oficiales 5 MUESTRAS En este ensayo pueden usarse suero No usar muestras hemol ticas ict ricas o lip micas Tener en cuenta No deben usarse muestras que contengan acida s dica 5 1 Toma de muestras Suero Recoger la sangre por punci n en la vena ej Sarstedt Monovette 02 1388 001 permitir coagulaci n y separar el suero por centrifugaci n a temperatura ambiente No centrifugar antes de la coagulaci n completa Las muestras de pacientes que reciben terapia anticoagulante requieren m s tiempo para coagular 5 2 Almacenamiento de las muestras Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 24 horas a 2 8 C antes del ensayo Las muestras almacenadas por un per odo de tiempo mas largo han de congelarse s lo una vez a 20 C antes del ensayo Las muestras des congeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo 5 3 Diluci n de las muestras Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el est ndar mas concentrado ha de diluirse con Standard O y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo Para el c lculo de las concentraciones habr que tener en cuenta el factor de diluci n Ejemplo _a diluci n 1 10 10 uL Suero 90 uL Calibrador 0 mezclar totalmente b diluci n 1 100 10 uL diluci n a 1 10 90 uL Calibrador O mezclar totalmente 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 6 1 Consideraciones generales Todos los rea
36. formance of the washing procedure 9 Add 200 uL of Substrate Solution to each well 10 Incubate for 30 minutes at room temperature Qi ON NA 11 Stop the enzymatic reaction by adding 100 uL of Stop Solution to each well 12 Read the OD at 450110 nm with a microtiter plate reader within 10 minutes after adding the Stop Solution Catalogue Nr KAPD1292 PI number 1701131 en Revision Nr 120604 1 6 3 Calculation of Results Calculate the average absorbance values for each set of calibrators controls and patient samples Using semi logarithmic graph paper construct a calibrator curve by plotting the mean absorbance obtained from each calibrator against its concentration with absorbance value on the vertical Y axis and concentration on the horizontal X axis 3 Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the calibrator curve 4 Automated method The results in the IFU have been calculated automatically using a 4 PL 4 Parameter Logistics curve fit Other data reduction functions may give slightly different results 5 The concentration of the samples can be read directly from this calibrator curve Samples with concentrations higher than that of the highest calibrator have to be further diluted For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Na Below is listed a typical example of a calibrator curve with the 17 a OH Progesterone ELIS
37. i tous les r sultats du test sont en accord avec les points mentionn s dans le paragraphe 11 1 Tout r sultat n est qu une partie du tableau clinique complet d un patient Les suites th rapeutiques peuvent d couler des r sultats de laboratoire si et seulement si ceux ci sont en accord avec l ensemble du tableau clinique du patient Le r sultat du test en lui m me ne doit en aucun cas tre le seul d terminant des suites th rapeutiques suivre 11 3 Responsabilit Toute modification du kit et ou change ou m lange d un des composants de diff rents lots d un kit un autre pourrait affecter de fa on n ga tive les r sultats attendus et la validit du test dans son ensemble De telles modifications ou changes invalident toute r clamation pour rempla cement Toutes les r clamations soumises relatives au paragraphe 11 2 et dues une mauvaise interpr tation des r sultats de laboratoire de la part du client sont galement invalides N anmoins en cas de r clamation la responsabilit du fabricant n est pas de d passer les limites de la valeur du kit Tout dommage caus au kit lors de son transport n est pas du ressort de la responsabilit du fabricant 12 REFERENCES BIBLIOGRAPHIE Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise Revision date 2012 06 04 Catalogue Nr KAPD1292 PI number 170113 1 fr Revision Nr 120604 1 P I Number 1701000
38. ion d extraction Solution d elution Cartouches Bond Elut Silica Solution de pr traitement Solution de neutralisation Tampon traceur Microplaque de titration E HRP Conjugu HRP Conjugu HRP Conjugu concentr HRP Conjugu concentr Tampon conjugu Chromog ne TMB concentr Solution chromog ne TMB Tampon substrat Solution d arr t S rum d incubation Tampon AP Conjugu Tampon PNPP Biotine conjugu concentr Agent de pr cipitation Avidine HRP concentr Tampon de test Biotine conjugu Anticorps sp cifique Concentr streptavidine HRP Liant non sp cifique Second anticorps Tampon d acidification Distributeur Plaque d incubation Solution PMSF Conserver l abri de la lumi re Bandelette de dots J Substrat Tampon d extraction concentr Cartouche Streptavidine peroxydase de raifort j Pipette Tampon de lavage Revision nr 140723
39. is available upon request 4 2 Equipment and material required but not provided A microtiter plate calibrated reader 450410 nm Calibrated variable precision micropipettes Absorbent paper Aqua dest Semi logarithmic graph paper 4 3 Storage and stability of the Kit When stored at 2 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 8 C Microtiter wells must be stored at 2 8 C Once the foil bag has been opened care should be taken to close it tightly again Opened kits retain activity for six weeks if stored as described above 4 4 Preparation of Reagents Allow all reagents and required number of strips to reach room temperature prior to use Wash Solution Add deionized water to the 40 x concentrated Wash Solution Dilute 30 mL of concentrated Wash Solution with 1170 mL deionized water to a final volume of 1200 mL The diluted Wash Solution is stable for 2 weeks at room temperature Catalogue Nr KAPD1292 PI number 1701131 en Revision Nr 120604 1 4 5 Disposal of the Kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Material Safety Data Sheets 4 6 Damaged Test Kits In case of any severe damage to the test kit or components DIAsource ImmunoAssays S A has to be informed in writing at the latest one week after receiving the k
40. it Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solution has been found After this they should be disposed according to the official regulations 5 SPECIMEN Serum can be used in this assay Do not use haemolytic icteric or lipaemic specimens Please note Samples containing sodium azide should not be used in the assay 5 1 Specimen Collection Serum Collect blood by venipuncture e g Sarstedt Monovette 02 1388 001 allow to clot and separate serum by centrifugation at room temperature Do not centrifuge before complete clotting has occurred Patients receiving anticoagulant therapy may require increased clotting time 5 2 Specimen Storage Specimens should be capped and may be stored for up to 24 hours at 2 8 C prior to assaying Specimens held for a longer time should be frozen only once at 20 C prior to assay Thawed samples should be inverted several times prior to testing 5 3 Specimen Dilution If in an initial assay a specimen is found to contain more than the highest calibrator the specimens can be diluted with Calibrator O and reas sayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Example a Dilution 1 10 10 uL Serum 90 uL Calibrator O mix thoroughly b Dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Calibrator O mix thoroughly 6 TEST PROCEDURE 6 1 General Rema
41. nostic use only For professional use only e All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV I II HBsAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and for disposal e Before starting the assay read the instructions completely and carefully Use the valid version of the package insert provided with the kit Be sure that everything is understood e The microplate contains snap off strips Unused wells must be stored at 2 C to 8 C in the sealed foil pouch and used in the frame provided e Pipetting of samples and reagents must be done as quickly as possible and in the same sequence for each step Catalogue Nr KAPD1292 PI number 1701131 en Revision Nr 120604 1 e Use reservoirs only for single reagents This especially applies to the substrate reservoirs Using a reservoir for dispensing a substrate solution that had previously been used for the conjugate solution may turn solution colored Do not pour reagents back into vials as reagent contamination may occur e Mix the contents of the microplate wells thoroughly to ensure good test results Do not reuse microwells e Do not let wells dry during assay add reagents immediately after completing the rinsing steps e Allow the reagents to reach room temperature 21 26 C before starting the test Temperature will affect the absorbance readings of the assay However
42. on concentraciones superiores al mayor calibrador han de diluirse Para el c lculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de diluci n Abajo aparece un ejemplo t pico de una curva calibrador con el Biosource 17 a OH Progesterone ELISA Calibrador M 450 Calibrador O_ 0 ng mL Calibrador 1_ 0 15 ng mL Calibrador 3 1 5 ng ml 069 7 VALORES ESPERADOS Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales En un estudio utilizando el 17 a OH Progesterone ELISA se observaron los siguientes valores Reci n nacidos ni as ni os ni as y ni os 1 mes despu s del nacimiento 2 4 16 8 ng mL 0 0 8 0 ng mL 0 16 8 ng mL 2 meses despu s del nacimiento 1 6 9 7 ng mL 3 6 13 7 ng mL 1 9 9 8 ng mL 3 meses despu s del nacimiento 0 1 3 1 ng mL 1 7 4 0 ng mL 0 1 4 0 ng mL Nios aos 007 17 ngm Fase folicular 0 1 0 8 ng mL 0 6 2 3 ng ml 0 3 1 4 ng mL Post ACTH lt 3 2 ng mL 2 0 12 ng mL 0 13 0 51 ng mL Hombres 05 2 1 gil Los resultados por si solos no deben ser la nica raz n para tomar decisiones terap uticas Los resultados deber estar relacionados con otras observaciones cl nicas y pruebas de diagn stico Catalogo nr KAPD1292 P I numero 1701131 es Revisi n nr 120604 1 8 CONTROL DE CALIDAD La buena pr ctica de laboratorio exige que se incluyan controles con cada curva de calib
43. progesterone gamma 5 pregnolonone gamma 5 pregnolonone sulfate gamma 5 pregnolone sulfate and 17 hydroxy gamma 5 pregnolonone J Clin Endocrinol Metab 48 133 1979 4 New MI B Dupont S Pang et al An update on congenital adrenal hyperplasia Recent Progress in Hormone Research 37 105 1981 5 Pang S 5 J Hotchkiss A Drash et al Micro filter paper method for 17a hydroxyprogesterone radioimmunoassay Its application for rapid screening for congenital adrenal hyperplasia J Clin Endocrinol Metab 45 1003 1977 6 Lobo R A U Goebelsmann Adult manifestation of congenital adrenal hyperplasia due to incomplete 21 hydroxylase deficiency mimicking polycystic ovarian disease Am J Obstet Gynecol 138 720 1980 7 Urban M D P A Lee and C J Migeon Adult high infertility in men with congenital adrenalized hyperplasia N Engl J Med 299 1392 1978 8 Meikle A W R J Worley and C D West Adrenal corticoid hyper response in hirsute women Fertil Steril 41 575 1984 9 Ueshiba H Zerah M New M I Enzyme linked Immunosorbent assay ELISA Method for screening of non classical steroid 21 Hydroxylase deficiency Norm Metab Res 26 43 1994 Revision date 2012 06 04 Catalogue Nr KAPD1292 PI number 1701131 en Revision Nr 120604 1 CE 17 a OH Progesterone ELISA S KAPD1292 Para uso diagn stico in vitro DiAsource ImmunoAssays S A Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium
44. r un temps prolong doivent tre congel s 20 C avant d tre test s Les chantillons d congel s doivent tre retourn s plusieurs fois avant le test 5 3 Dilution de l chantillon Si lors d un test pr liminaire la concentration de l chantillon se r v le tre sup rieure celle du calibrateur le plus concentr alors l chantillon doit tre dilu avec le Calibrateur 0 et test de nouveau comme d crit dans R alisation du test Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration Exemple a dilution 1 10 10 uL S rum 90 uL Calibrateur O bien m langer b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Calibrateur O bien m langer 6 R ALISATION DU TEST 6 1 Remarques g n rales Tous les r actifs et chantillons doivent tre amen s temp rature ambiante avant utilisation Tous les r actifs doivent tre m lang s sans formation de mousse Une fois la proc dure engag e toutes les tapes doivent tre r alis es sans interruption Utiliser un nouveau c ne de pipette pour chaque calibrateur contr le ou chantillon ceci afin d viter toute contamination L absorbance est fonction du temps d incubation et de la temp rature Avant de commencer le test il est recommand de pr parer tous les r actifs bouchons ouverts de pr parer les puits des microplaques etc Cela garantira un intervalle de temps quivalent entre chaque
45. raci n Un n mero de controles estad sticamente signifi cativos deben ser ensayados para establecer valores promedio y rangos aceptables para asegurar un desempe o adecuado Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales El uso de muestras control ser recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados Usar controles tanto a niveles normal como patol gico Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad est n fijados en el certificado de control de calidad que acompa an al kit Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la compa raci n directa de los resultados Es recomendable tambi n hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exactitud de los resultados Utilizar m todos estad sticos apropiados para el an lisis de los valores y tendencia de los controles Si los resultados del ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los controles los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inv lidos En este caso por favor comprobar las siguientes reas t cnicas Pipeteo y tiempo empleado fot metro fecha de caducidad de los reactivos condiciones de almacenamiento e incubaci n m todos de aspiraci n y lavado 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 9 1 Rango din mico del ensayo El rango del ensa
46. rks All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps should be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips for each calibrator control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and temperature Before starting the assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption Asa general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature 6 2 Assay Procedure Each run must include a calibrator curve Secure the desired number of Microtiter wells in the holder Dispense 25 uL of each Calibrator Control and samples with new disposable tips into appropriate wells Incubate for 5 minutes at room temperature Dispense 200 pL Enzyme Conjugate into each well Thoroughly mix for 10 seconds It is important to have a complete mixing in this step Incubate for 60 minutes at room temperature Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 3 times with diluted Wash Solution 400 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual drop lets Important note The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct per
47. ron determinados comparando los valores esperados contra los valores obtenidos de las muestras Conc Conc Recupera End geno 17a OH P Medida Esperada do 17a OH P a adido ng mL 17a OH P 17a OH P ng mL ng mL Conc Conc Medida Esperada 17a OH P 17a OH P ng mL ng mL Recuperado 10 LIMITACIONES DE USO Resultados confiables y reproducibles se obtendr n cuando el procedimiento del ensayo se lleve a cabo con una comprensi n absoluta de las instrucciones en el inserto y apeg ndose a una buena pr ctica de laboratorio Cualquier manejo inapropiado de las muestras o modificaci n de esta prueba puede influenciar los resultados 10 1 SUSTANCIAS QUE PUEDEN INTERFERIR Hemoglobina hasta 4 mg mL Bilirrubina hasta 0 5 mg mL y Triglic ridos hasta 7 5 mg mL no influencian los resultados del ensayo 10 2 INTERFERENCIAS CON DROGAS Hasta ahora no se han encontrado sustancias drogas conocidas por nosotros que tengan influencia en la medida de 17 a OHP en una mues tra Catalogo nr KAPD1292 P I numero 1701131 es Revisi n nr 120604 1 10 3 EFECTO GANCHO DOSIS ELEVADA No se ha observado efecto gancho en este ensayo 11 ASPECTOS LEGALES 11 1 FIABILIDAD DE LOS RESULTADOS El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante Mas aun el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL Buenas Pr cticas de Laboratorio o a otros est ndares y o leyes nacionales aplica
48. roper handling of samples or modification of this test might influence the results 10 1 Interfering Substances Haemoglobin up to 4 mg mL Bilirubin up to 0 5 mg mL and Triglyceride up to 7 5 mg mL have no influence on the assay results 10 2 Drug Interferences Until today no substances drugs are known to us which have an influence to the measurement of 17 a OH Progesterone in a sample 10 3 High Dose Hook Effect No hook effect was observed in this test 11 LEGAL ASPECTS 11 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national standards and or laws This is especially relevant for the use of control reagents It is important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifi cations In case of any doubt or concern please contact DIAsource 112 Therapeutical Consequences Therapeutical consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 11 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the l
49. tement recommand chaque laboratoire de d terminer ses propres valeurs normales ou anormales Dans une tude l aide du kit DIASOURCE 17 a OH Progesterone ELISA les valeurs suivantes sont observ es Nouveaux n s sexe feminin sexe masculin feminin et masculin 1 mois apr s naissance 2 4 16 8 ng mL 0 0 8 0 ng mL 0 16 8 ng mL 2 mois apr s naissance 1 6 9 7 ng mL 3 6 13 7 ng mL 1 9 9 8 ng mL 3 mois apr s naissance 0 1 3 1 ng mL 1 7 4 0 ng mL 0 1 4 0 ng mL 3 14 years 0 07 1 7 ng mL 0 1 0 8 ng mL 0 6 2 3 ng mL 0 3 1 4 ng mL Enfants Femmes en age de reproduire Phase folliculaire Phase lut ale Ovulation Post ACTH Troisi me semestre lt 3 2 ng mL 2 0 12 ng mL 0 13 0 51 ng mL Femme post m naupos e p05 2 4 ng mL Hommes normaux 8 CONTROLE DE QUALITE ll est recommand d utiliser les chantillons contr les selon les r glementations nationales en vigueur L utilisation des chantillons contr les est recommand afin de s assurer jour apr s jour de la validit des r sultats Utiliser les contr les de valeurs normales et pathologiques Les contr les et les r sultats correspondants issus du laboratoire QC sont mentionn s dans le certificat QC fourni avec le kit Les valeurs et les limites mentionn es sur la fiche QC font toujours r f rence au lot de kit courant et doivent tre utilis es pour une comparaison directe avec les r s
50. ultats ll est galement recommand d utiliser les programmes d valuation de qualit nationaux ou internationaux afin de s assurer de l exactitude des r sultats Utiliser les m thodes d analyses statistiques appropri es pour l analyse des valeurs contr les et des tendances Si les r sultats ne correspondent pas aux limites tablies des contr les les r sultats concernant ces patients doivent tre consid r es comme non valides Dans ce cas tester les zones techniques suivantes m canisme de pipettage et temps spectrophotom tre dates d expiration des r actifs conditions de stockage et d incubation m thodes d aspiration et de lavage Apr s avoir test les points mentionn s si aucune erreur n est d tect e contacter votre distributeur ou directement DlAsource Catalogue Nr KAPD1292 PI number 1701131 fr Revision Nr 120604 1 9 CARACTERISTIQUES DU TEST 9 1 Zone de mesure Les limites du dosage sont comprises entre 0 034 20 ng mL 9 2 Sp cificit des anticorps R action crois e Voir le manuel d utilisateur en version anglaise 9 3 Sensibilit de l analyse La sensibilit de l analyse a t calcul e a partir de la moyenne la plus faible de deux d viations standards de l analyse de vingt r plicats du Cali brateur 0 et a t mesur e 0 034 ng mL Pour 9 4 Pr cision 9 5 Recouvrement 9 6 Lin arit Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 10 LIMITES D UTILIS
51. yo se encuentra entre 0 034 20 ng mL 9 2 Especificidad de los Anticuerpos Reactividad Cruzada Las siguientes sustancias fueron probadas para determinar reacci n cruzada en el ensayo Esteroide Reacci n cruzada 17 a OH Progesterone 100 0 Estriol lt 0 01 Estradiol 178 lt 0 01 Testosterone lt 0 01 Dihydrotestosterone lt 0 01 DOC 0 05 11 Desoxicortisol 1 4 Progesterone 1 2 DHEA lt 0 01 DHEAS lt 0 001 Cortisol lt 0 01 Corticosterone lt 0 05 Aldosterone lt 0 01 Androstendione lt 0 01 Dehydroepiandrosten sulfate lt 0 01 Prednison lt 0 01 9 3 Sensibilidad Anal tica La sensibilidad anal tica se calcul a partir de la media menos dos desviaciones est ndar de veinte 20 r plicas del Calibrador O y result ser 0 034 ng mL 9 4 Precisi n 9 4 1 Variaci n Intra Ensayo La variabilidad del mismo ensayo se muestra abajo Medi 9 4 2 Variaci n Entre Ensayos La variabilidad entre diferentes ensayos se muestra abajo Medi Lure n ann ses Catalogo nr KAPD1292 P I numero 1701131 es Revision nr 120604 1 9 5 Recuperacion La Recuperaci n fue determinada a adiendo cantidades crecientes del analito a 3 sueros diferentes que conten an diferentes cantidades de analito end geno A cada muestra no adicionada y adicionada se le hizo un ensayo y las concentraciones de los analitos de las muestras se calcularon a partir de la curva de calibraci n Los porcentajes de recuperaci n fue
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