RealStar® HSV PCR Kit 1.0
Contents
1. RealStar HSV PCR Kit 1 0 Mises en garde et pr cautions L utilisation de ce produit est limit e au personnel qualifi et form pour les techniques de PCR en temps r el et aux proc dures de diagnostic in vitro Les chantillons doivent tre manipul s comme s ils taient infectieux et ou dangereux en accord avec les proc dure de s curit en vigueur dans le laboratoire Porter des gants jetables non talqu s une blouse de laboratoire et des lunettes de protection lors de la manipulation des chantillons Eviter les contaminations microbiennes et nucl aires par ADN ARN de l chantillon et des composants du kit Toujours utiliser avec les a rosols des c nes de pipettes jetables non contamin s par l ADNase et l ARNase Toujours porter des gants de protection non talqu s lors de la manipulation des composants des kits Utiliser des aires de travail s par es les unes des autres pour i la pr para tion des chantillons ii la pr paration de la r action et iii l amplification et la d tection de l activit Le flux de travail dans le laboratoire doit tre unidi rectionnel Porter des gants dans chaque aire de travail et les changer avant d entrer dans une aire diff rente Consacrer les fournitures et le mat riel aux diff rentes aires de travail et ne pas les d placer d une aire une autre Conserver le mat riel positif oubien potentielle positif s par des autres com posants du kit Ne2. e 29 Limites et pr cautions eeeesseeeeneee nnne nnn n nnn nnn nnn nnn 30 Controle de qualit a ce dMUS 31 Assistance technique e eceeeseeeeseeenieen eene enhn nnn nnn nnn nnns 31 Marques d pos es et responsabilit 31 Explications des symboles eeeeeeee eee 32 RealStar HSV PCR Kit 1 0 RealStar HSV PCR Kit 1 0 1 Usage pr vu e Des cycles r p t s de d cong lation et de cong lation des r actifs plus de Le kit RealStar HSV PCR 1 0 est un test de diagnostic in vitro bas sur la tech deux doivent tre vit s car ils peuvent affecter les performances du dosage nologie PCR en temps r el pour la d tection et la quantification simultan es de Les r actifs doivent tre s par s en aliquotes et congel s si elles doits tre l ADN sp cifique du virus herpes simplex de type 1 HSV 1 et herpes simplex de utilis s de facon intermittente tye 2 HSV 2 La conservation a 4 C ne doit pas exc der une dur e de 2 heures e Prot ger les Mastermix A et B de la lumi re 2 Composants du kit 4 Mat riels requis non fournis Sous Violet Orange Blanc q couvercle e m Tr c e Instrument adapt la PCR en temps r el Chapitre 6 Description du produit ontroie Mastermix A Mastermix B Calibra Calibra qualit e __ Syst me ou kit approp
3. et la stabilit de l acide nucl ique extrait L thanol est un fort inhibiteur de la PCR en temps r el Si votre syst me de pr paration de l chantillon utilise des tampons de lavage contenant de l thanol assurez vous d liminer toutes les traces d thanol avant de proc der l lution de l acide nucl ique RealStar HSV PCR Kit 1 0 Pour de plus amples informations ou un support technique concernant le pr traitement et la pr paration des chantillons merci de contacter notre support technique e mail support altona diagnostics com t l phone 49 0 40 5480676 0 8 2 Pr paration du Mastermix Tous les r actifs doivent tre compl tement d congel s homog n is s la pipette ou vortex s doucement et bri vement centrifug s avant leur utilisation Le kit RealStar HSV PCR 1 0 contient un contr le interne h t rologue peut tre utilis aussi bien comme un contr le d inhibition de la PCR ou comme un contr le lors de la pr paration de l chantillon extraction de l acide nucl ique et aussi comme un contr le de l inhibition de la PCR e Si le contr le interne est utilis comme un contr le d inhibition de la PCR mais pas comme un contr le lors de la proc dure de pr paration de l chantillon alors le Mastermix doit tre pr par comme d crit par le sch ma de pipetage ci dessous Nombre de r actions rxns Mastermix A Mastermix B Contr le interne Volume Mastermix
4. nome du HSV 1 et ou HSV 2 couvertes par les amorces et ou les sondes peuvent conduire de mauvais r sultats pour la d tection du virus Comme avec tous les tests de diagnostic les r sultats du kit RealStar HSV PCR 1 0 doivent tre interpr t s en prenant en consid ration tous les symp t mes cliniques RealStar HSV PCR Kit 1 0 13 Contr le de qualit D apres le syst me de management de la qualit d altona Diagnostics GmbH selon ISO EN 13485 chaque lot du kit RealStar HSV PCR 1 0 est test selon les sp ci fications pr d finies afin d assurer la qualit constante du produit 14 Assistance technique Pour le support client merci de contacter notre support technique e mail support altona diagnostics com t l phone 49 0 40 5480676 0 15 Marques d pos es et responsabilit RealStar altona Diagnostics GmbH Mx 3005P Stratagene ABI Prism Applied Biosystems HighPure LightCycler Roche Rotor Gene QlAamp QIAGEN VERSANT M Siemens Les noms d pos s les marques d pos es etc utilis es dans ce document m me si ils ne sont pas sp cifi es comme tels ne doivent pas tre consid r es comme non prot g es par la loi Le kit RealStar HSV PCR 1 0 est un test de diagnostic in vitro marqu CE en accord avec la Directive europ enne 98 79 EC N est pas disponible dans tous les pays 2012 altona Diagnostics GmbH tous droits r serv s 21 16 32 RealStar H
5. d velopp et valid pour tre utilis avec les instruments de PCR suivants e m2000rt Abbott Diagnostics e Mx 3005P M QPCR System Stratagene e VERSANT KPCR Molecular System AD Siemens e ABI Prism 7500 SDS and 7500 Fast SDS Applied Biosystems e LightCycler 480 Instrument II Roche e Rotor Gene 3000 6000 Corbett Research e Rotor Gene Q 5 6 plex Platform QIAGEN RealStar HSV PCR Kit 1 0 Le kit RealStar HSV PCR 1 0 est compos de Deux Mastermix Mastermix A et Mastermix B e Mod le de Contr le interne Cl e Quatre calibrateurs QS1 QS4 sp cifiques du HSV 1 e Quatre calibrateurs QS1 QS4 sp cifiques du HSV 2 e Eau de qualit PCR Les r actifs du Mastermix A et du Mastermix B contiennent tous les composants tampon enzyme amorces sondes n cessaires la r alisation de l amplification par PCR la d tection sp cifique de l ADN de HSV 1 et de HSV 2 ainsi que le contr le interne le tout en une seule mise en place de r action Les calibrateurs contiennent des concentrations standardis es d ADN sp cifique de HSV 1 et de HSV 2 virus specific DNA Par cons quent les calibrateurs peuvent tre utilis s individuellement comme des contr les positifs ou bien tous ensemble pour r aliser une courbe talon si la quantification de HSV 1 et ou du HSV 2 dans l chantillon le requiert Les concentrations suivantes sont utilis es Concentration copies pnl Calibrateurs 1 00E 01
6. dosage variabilit entre diff rents essais et la variabilit La variabilit des donn es est exprim e en terme d cart type de variance et de coefficient de variation Les donn es sont bas es sur l analyse quantitative des concentrations d finies d ADN sp cifique de HSV 1 et de HSV 2 et sur la valeur seuil du cycle Ct en terme de contr le interne Au moins six r p titions par chan tillon ont t analys es pour la variabilit intra dosage inter dosage et inter lot La HSV 1 du kit RealStar 27 RealStar HSV PCR Kit 1 0 RealStar HSV PCR Kit 1 0 Table 5 Pr cision des donn es du contr le interne pour le syst me sp cifique au HSV 1 du Table 7 Pr cision des donn es du contr le interne pour le syst me sp cifique au HSV 2 du kit RealStar HSV PCR 1 0 C values kit RealStar HSV PCR 1 0 C values Coefficient Coefficient ala i Cycl il Ecart type Variance de Variation Contr le interne yee EL 96 moyen C Cycle seuil moyen C Contr le interne Ecart type Variance de Variation 76 Variabilit Intra dosage Variabilit Intra dosage Variabilit Inter Lot i Variabilit Inter Lot Table 6 Pr cision des donn es pour le syst me sp cifique HSV 2 du kit RealStar HSV PCR 1 0 11 5 R p tabilit Syst me sp cifique C moyenne l oenen HSV GONE Ecart type Variance de Variation La sp cificit et la sensibilit du kit RealStar HSV PCR 1 0 ont t valu es en 6
7. ique ou 10 yl des contr les contr le positif ou n gatif e Assurez vous qu il y a au moins un contr le positif et un n gatif par essai e Pour une d termination quantitative tous les calibrateurs QS1 to QS4 doivent tre utilis s e Homog n iser avec soin les chantillons et les contr les avec le Mastermix en pipetant e Couvrir la plaque de 96 puits avec un film adh sif opaque appropri et les tubes essai avec un couvercle appropri e Centrifuger les plaque de 96 puits avec un rotor microplaque pendant 30 secondes environ 1000 x g 3000 rpm Pr paration de la r action Mastermix Echantillon ou contr le 9 Programmation des instruments de PCR en temps r el Pour des informations basiques concernant l installation et la programmation des diff rents instruments de PCR en temps r el merci de vous r f rer au manuel d utilisation des diff rents instruments Pour des instructions de programmation d taill es concernant l utilisation du kit RealStar HSV PCR 1 0 sur un instrument de PCR en temps r el sp cifique merci de contacter notre support technique 15 RealStar HSV PCR Kit 1 0 9 1 Parametres e D finir les param tres suivants Param tres Volume de r action 30 yl Taux de rampe par d faut R f rence passive ROX 9 2 Traceurs de fluorescents fluorophores e D finir les traceurs fluorescents fluorophores Detection Nom de tra eur Reporteur Quench
8. part 18 RealStar HSV PCR Kit 1 0 10 2 Interpr tation des r sultats 10 2 1 Analyse qualitative No de Canal de Canal de Canal de echan d tection FAM d tection Cy5 d tection JOE Interpr tation r sultats tillion ADN sp cifique de HSV 1 POSITIF NEGATIF POSITIF 3 d tect ADN sp cifique de HSV 2 d tect NEGATIF POSITIF POSITIF Pas d ADN de HSV 1 ou de HSV 2 d tect NEGATIF NEGATIF POSITIF L chantillon ne contient pas de quantit d tectable de ces ADN sp cifiques Inhibition ou chec de la r actif R p ter le test NEGATIF NEGATIF NEGATIF partir de l chantillon origi nal ou bien en pr lever un nouveau La d tection du contr le interne dans la chaine de d tection JOE n est pas requise ni celle des r sultats positifs dans la chaine de d tection FAM ou dans la Cy5 De fortes charges en HSV 1 ou en HSV 2 dans l chantillon peut conduire des signaux r duits ou absents du contr le interne 19 RealStar HSV PCR Kit 1 0 10 2 2 Analyse quantitative Le kit RealStar HSV PCR 1 0 fournit quatre calibrateurs QS pour le HSV 1 et quatre autres pour le HSV 2 Afin de g n rer une courbe talon pour les analyses quantitatives les QS doivent tre d finis comme des standards avec des concen trations appropri es chapitre 6 description du produit En utilisant ces talons la charge en HSV peut tre d termin e C Cycle seuil C m log Ny b m
9. pas ouvrir les tubes plaques de r action apr s l amplification afin d viter les contaminations avec les amplicons Des contr les additionnels doivent tre faits en accord avec les lignes direc trices aux exigences locales ou gouvernementales ou des organismes d accr ditation Ne pas utiliser des composants au del de leur date d expiration Eliminer les chantillons et les d chets d essai selon la r glementation de s curit s locales 11 RealStar HSV PCR Kit 1 0 8 Mode d emploi 8 1 Pr paration de l chantillon L ADN extrait est le mat riel de d part pour le kit RealStar HSV PCR 1 0 La qualit de l ADN extrait a un impact important sur la performance de l int gralit du test Il est important de s assurer que le syst me d extraction des acides nucl iques utilis est compatible avec la technologie de PCR en temps r el Les syst mes d extraction nucl iques et les kits suivants sont recommand s e VERSANT Molecular System SP Siemens e HighPure Viral Nucleic Acid Kit Roche e QlAamp DNA Mini Kit QIAGEN Si pour la pr paration des chantillons vous utilisez une colonne comportant des tampons de lavage avec de l thanol une tape de centrifugation suppl mentaire de 10 minutes environ 17000 x g 13000 rpm en utilisant un nouveau tube essai est recommand avant l lution des acides nucl iques NOTE L utilisation d ARN porteur est crucial pour l efficacit de l extraction
10. un g nome lin aire double brin d environ 150 kpb Les deux virus HSV 1 et HSV 2 partagent plus de 80 de nucl otides identiques dans leur r gion codant pour les prot ines Les infections par le virus de l herp s simplex se produisent partout dans le monde sans quil y ait de saison particuli re Le virus est propag par contact direct avec des s cr tions infect es La pr valence des infections au HSV 1 augmente gradu ellement depuis l enfance jusqu atteindre 8096 et plus lors de la croissanc La pr valence du HSV 2 quant elle reste basse jusqu l adolescence La plupart des infections primaires au HSV 1 sont acquises comme les infections subcliniques ou non reconnues Les premi res infections avec le HSV 2 sont classiquement des herp s g nitaux Une premi re infection par le HSV 1 ou le HSV 2 est suivie par l tablissement d une phase de latence dans les ganglions de la racine dorsale P riodiquement le virus se r active et se d place par l interm diaire de l axone jusqu aux voies g nitales ou buccales ce qui induit une infection par le virus et dans certains cas la formation de l sions Bien que g n rallement asymptomatique les infections par l HSV peuvent causer un large spectre de manifestations cliniques qui incluent des herp s buccaux g nitaux des maux de t te et des herp s oculaires 6 Description du produit Le kit RealStar HSV PCR 1 0 est un test de diagnostic in vitro bas sur la tech nologi
11. 13 RealStar HSV PCR Kit 1 0 Sile contr le interne est utilis comme un contr le lors de la proc dure de pr paration de l chantillon et comme un contr le d inhibition de la PCR le contr le interne doit tre ajout au moment de la proc dure d extraction de l acide nucl ique e Peu importe la m thode ou le syst me utilis pour l extraction de l acide nucl ique le contr le interne ne doit pas tre ajout directement l chantillon Le CI doit toujours tre ajout au m lange chantillon tampon de lyse Le volume de CI ajouter d pend toujours et uniquement du volume d lution Il repr sente 10 du volume d lution Par exemple si l acide nucl ique va tre lu dans 60 yl de tampon d lution ou de tampon 6 ul de CI par chantillon doivent tre ajout s au m lange chantillon tampon de lyse NOTE Ne jamais ajouter le Contr le Interne directement avec l chantillon e Sile CI a t ajout pendant la phase de pr paration de l chantillon le Mastermix doit tre pr par selon le sch ma de pipetage suivant Nombre de r actions rxns Mastermix A 60 yl Mastermix B 180 yl Volume Mastermix RealStar HSV PCR Kit 1 0 8 3 Pr paration de la r action e Pipeter 20 ul de Mastermix dans chacun des puits n cessaires de la plaque 96 puit ou d un tube essai permettant les r actions optiques e Ajouter 10 ul de l chantillon lu partir de l extraction d acide nucl
12. Pente N Concentration initiale b Intersection partir de la courbe talon la concentration des chantillons inconnus peut tre 1 Ct b m N 0 Fluorescence Threshold Cycle Cycle Number Log Concentration Figure 1 Les calibrateurs noirs un chantillon positif rouge et n gatif bleu sont affich s dans l cran d amplification A et l analyse de la courbe talon B 20 RealStar HSV PCR Kit 1 0 NOTE La concentration de l chantillon est affich e en copies ul et se r f re la concentration dans l eluat Afin de d terminer la charge virale de l chantillon original la formule suivante doit tre appliqu e Charge Viral chantillon Volume Eluate ul x Charge viral Eluate copies ul copies ml M Quantit d chantillon ml 11 Evaluation des performances Etant donn qu il n y a pas d talons internationaux disponibles pour HSV 1 et ou HSV 2 l valuation des performances du kit RealStar HSV PCR 1 0 a t effec tu e en utilisant de l ADN sp cifique d HSV 1 ATCC Num ro VR 1493 et d HSV 2 ATCC Num ro VR 540 11 1 Sensibilit analytique La sensibilit analytique du kit RealStar HSV PCR 1 0 est d finie comme tant la concentration copies par ul d luat de mol cules d ADN sp cifique du virus HSV 1 ou HSV 2 qui peuvent tre d tect es avec un taux sup
13. SV PCR Kit 1 0 Explications des symboles E D KHS gE m s Dispositif medical de diagnostic in vitro R f rence produit Num ro de lot Contient le nombre suffisant pour r aliser n tests rxns Limites de temp rature Version Utiliser avant Attention Se reporter au manuel d utilisation Fabricant NOTES RealStar HSV PCR Kit 1 0 33
14. analysant des panels comp tents tablis pour le HSV 1 and HSV 2 Afin de s assurer Variabilit de la r p tabilit du kit RealStar HSV PCR 1 0 la sp cificit et la sensibilit sont Intra dosage valu es en analysant des panels comp tente ainsi que des chantillons de diag nostic analys es sur une base reguliere Variabilit Inter Lot 28 29 12 30 RealStar HSV PCR Kit 1 0 Limites et pr cautions L utilisation de ces produits est limit e au personnel comp tent et form aux techniques de PCR en temps r el et aux proc dures de diagnostic in vitro Le respect des Bonnes Pratiques de Laboratoire est essentiel pour assurer la performance du dosage Une attention particuli re doit tre donn e la pr paration des chantillons afin de pr server la puret des composants du kit Tous les r actifs doivent tre minutieusement suivis afin d viter les impuret s et les contaminations Le moindre r actif douteux doit tre cart l est n cessaire de respecter les proc dures de pr l vement de l chantillon de transport et de conservation afin d assurer les performances optimales du test Ce dosage n est pas destin tre r alis directement sur l chantillon L extraction des acides nucl iques doit avoir t r alis e au pr alable La pr sence des inhibiteurs de PCR peut tre une cause de faux n gatifs ou de r sultats erron s De potentielles mutations dans les r gions du g
15. e PCR en temps r el pour la d tection et la quantification de l ADN sp cifique de l HSV 1 et de l HSV 2 Le dosage comprend un syst me d amplification h t ro logue Contr le interne afin d identifier d ventuelles inhibitions de la PCR et de confirmer l int grit des r actifs du kit Le test est bas sur la technologie de la PCR en temps r el utilisant une r action en chaine par polym rase PCR pour l amplification de s quences de cibles sp ci 8 RealStar HSV PCR Kit 1 0 fiques et les sondes cibles sp cifiques pour la d tection de l ADN amplifi Les sondes sont marqu es avec un marqueur fluorescent et un quencher Les sondes sp cifiques l ADN de l HSV 1 sont marqu es avec le fluorophore FAM tandis que les sondes sp cifiques au HSV 2 sont marqu es avec un fluorophore pr sentant les m mes caract ristiques que le Cy5 La sonde sp cifiques au Con tr le interne CI est marqu e avec le fluorophore JOE L utilisation de sondes sp cifique li es des dyes distingu s permet la d tection en parall le de l ADN sp cifique de HSV 1 et de HSV 2 et du contr le interne dans les diff rents canaux correspondant de l instrument de PCR en temps r el Le test consiste en deux proc dures r alis es dans un m me tube essai lamplification par PCR de l ADN cible et le Contr le interne e D tection simultan e des amplicoms par des sondes marqu es par fluorescence Le kit RealStar HSV PCR 1 0 a t
16. e diagnostic n est pas respect En cas de test de diagnostic invalide r p ter le test en utilisant les acides nucl iques purifi s restants ou recommencer avec l chantillon de d part 17 RealStar HSV PCR Kit 1 0 10 1 3 Validit des tests de diagnostic quantitatif Pour la validit quantitative des tests de diagnostic toutes les conditions de contr le doivent tre respect es Chapitre 10 1 1 Validit des tests de diagnostic qualitatif De plus pour des r sultats quantitatifs pr cis il est n cessaire de s assurer de la validit de la courbe talon g n r e Pour un test de diagnostic quantitatif valide les param tres de contr les suivants doit tre obtenue Param tres de i ETTTTA TO contr le Pente 3 00 3 74 Efficacit de la PCR 85 96 115 L R square R gt 0 98 NOTE Les diff rents instruments de PCR en temps r el n affichent pas tous les param tres donn s par le logiciel Pour des informations d taill es merci de vous r f rer au manuel de votre instrument 10 1 4 Invalidit des tests de diagnostic quantitatif Un test de diagnostic quantitatif est invalide i si l essai n est pas complet ou ii si les diff rentes conditions de contr le pour un test de diagnostic valide ne sont pas respect es En cas d invalidit du test de diagnostic r p ter le test avec l acide nucl ique purifi restant ou bien en recommencant avec l chantillon de d
17. ealtonae ealtonae DIAGNOSTICS DIAGNOSTICS RealStar HSV PCR Kit 1 0 11 2012 altona Diagnostics GmbH M rkenstr 12 22767 Hamburg Germany phone 49 40 548 06 76 O fax 49 40 548 06 76 10 e mail info altona diagnostics com www altona diagnostics com always a drop ahead MAN 061010 FR 01 RealStar HSV PCR Kit 1 0 Pour utilisation avec m2000rt Abbott Diagnostics Mx 3005P QPCR System Stratagene VERSANT M KPCR Molecular System AD Siemens ABI Prism 7500 SDS and 7500 Fast SDS Applied Biosystems LightCycler 480 Instrument Il Roche Rotor Gene 3000 6000 Corbett Research Rotor Gene Q5 6 plex Platform QIAGEN M M Usage de diagnostic in vitro R f rence 061013 96 tests Conserver 25 C 15 C Novembre 2012 E 2 g8 altona Diagnostics GmbH M rkenstraf3e 12 D 22767 Hamburg RealStar HSV PCR Kit 1 0 Content 1 SACS previ M EEEE 6 2 Composants du RE anna ta etai 6 3 Conservation re M H 6 4 Mat riels requis non fournis ins 7 5 Informations g n rales cesse eeeeeee eene enne nnns 8 6 Description du produit lleleeeeseeeeeeeeeeeen eene nennen nnn 8 T Mises en garde et pr cautions sise 11 8 MO A GImDlOL wriena neuen saeia a side dense iles 12 8 1 Pr paration de l chantillon 12 8 2 Preparation du Mastermix i ssssesesineisiiteeesiteesneneseenses 13 8 3 Pr
18. ed Concentration copies ul Nombre de Cycles 45 y 1 0255 x 0 2157 R 0 9991 Barre d erreur Ecart type Log o Nominal Concentration copies ul 25 RealStar HSV PCR Kit 1 0 11 4 Pr cision 0 55 Fluorescence Log 10 Estimated Concentration copies ul Figure 2 Courbes d amplification et r gressions lin aires des dilutions en s rie analys es de l ADN sp cifique d HSV1 A et d HSV2 B La gamme lin aire du Norm Fluoro Threshold 5 10 15 20 25 30 35 40 Cycle 1 Nombre de Cycles 45 variance totale a t calcul e en combinant les trois analyses Table 4 Pr cision des donn es pour le syst me sp cifique HSV PCR 1 0 HSV Variabilit Intra dosage y 1 0222 x 0 4048 R 0 9998 Barre d erreur Ecart type Variabilit Inter Lot Log Nominal Concentration copies ul kit RealStar HSV PCR 1 0 s tend sur un intervalle d au moins huit ordres de grandeur pour l ADN sp cifique d HSV 1 et sur sept ordres de grandeur pour l ADN sp cifique d HSV 2 26 comme la variabilit Syst me sp cifique RealStar HSV PCR Kit 1 0 intra dosage variabilit inter lot variabilit entre des lots de productions diff rentes C moyenne copies ul Ecart type Variance d un Coefficient de Variation 76 Les donn es de pr cision pour le kit RealStar HSV PCR 1 0 ont t d termin es seul essai la variabilit inter
19. er ADN sp cifique HSV 1 ADN sp cifique HSV 2 Contr le interne CI 9 3 Profil de temp rature et aquisition des fluorophores e D finir le profil de temp rature et l aquisition des fluorophores Nombre cycles Aquisition Temperature D naturation Tenu 10 00 min 0 15 min Amplification Cyclique 1 00 min 16 RealStar HSV PCR Kit 1 0 10 Analyse des donn es Pour des informations basiques concernant l analyse des donn es sur des instru ment sp cifique de PCR en temps r el merci de se r f rer au manuel concern Pour des informations d taill es concernant l analyse des donn es avec le kit RealStar HSV PCR 1 0 sur diff rents instruments de PCR en temps r el merci de contacter notre support technique 10 1 Validit des tests de diagnostic 10 1 1 Validit des tests de diagnostic qualitatif Pour un test de diagnostic valide qualitatif les valeurs suivantes des contr les doivent tre respect s Canal de Canal de Canal de Nom du Contr le d tection d tection d tection FAM Cy5 JOE Contr le positif HSV 4 POSITIF NEGATIF POSITIE Contr le positif NEGATIF POSITIF POSITIF HSV 2 G OS OS Contr le negatif NEGATIF NEGATIF POSITIE 10 1 2 Invalidit des tests de diagnostic qualitatif Un test de diagnostic qualitatif est invalide i si l essai n a pas t r alis com pl tement ou ii si l une des conditions de contr le pour l un des tests de validit du test d
20. nomique extrait d autres virus de l herp s ou d autres patho g nes significatifs chez les patients immunod prim s 23 RealStar HSV PCR Kit 1 0 RealStar HSV PCR Kit 1 0 Table 3 Les organismes test s afin de d montrer la sp cificit analytique du kit RealStar 11 3 Gamme lin aire HSV PCR 1 0 Herpes Simplex Virus 1 Herpes Simplex Virus 2 Varicella Zoster Virus Epstein Barr Virus Cytomegalovirus Human Herpesvirus 6 Human Herpesvirus 7 Human Herpesvirus 8 BK Virus JC Virus Parvovirus B19 Hepatitis B Virus Hepatitis C Virus Human Immunodeficiency Virus 1 organismes sp cifi s ci dessus RealStar HSV PCR Kit 1 0 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Le kit RealStar HSV PCR 1 0 n a pr sent aucune r action crois e avec des La gamme lin aire du kit RealStar HSV PCR 1 0 a t valu e en analysant une dilution en s rie logarythmique d ADN sp cifique d HSV1 et d HSV2 partir de concentrations allant de 1E 08 1E 01 copies ul HSV 1 et de 1E 07 1E 01 copies ul HSV 2 Au moins six r plicats ont t analys s par dilution A Fluorescence Logo Estimat
21. paration de la r action NE S 15 9 Programmation des instruments de PCR en temps r el 15 9 1 PAOMEES PK 16 9 2 Tra eurs de fluorescents fluorophores eeeesess 16 9 3 Profil de temp rature et aquisition des fluorophores 16 10 Analyse des donn es semis 17 10 1 Validit des tests de diagnostic eeseeeeeeeeeeee 17 10 1 1 Validit des tests de diagnostic qualitatif sssesssssssse 17 10 1 2 Invalidit des tests de diagnostic qualitatif sssssuuse 17 10 1 3 Validit des tests de diagnostic quantitatif sssesssssuusse 18 10 1 4 Invalidit des tests de diagnostic quantitatif sssssusse 18 10 2 Interpr tation des r sultats seeseseeeeeeeeeeeernn 19 4 10 2 1 10 2 2 11 11 1 11 2 11 3 11 4 11 5 12 13 14 15 16 RealStar HSV PCR Kit 1 0 Analyse qualitative c 19 Analyse quantitative A de diese ess seit nc 20 Evaluation des performances eeeeee eene enne enne 21 Sensibilit analytique M 21 Sp cificit ANA AQU a iaa rti 23 Gamme A sua osemeteE enteDEccis i pei sUPM CURSUS RU CENE EL E EN ETE 25 PCSI H 27 R p tabilit
22. ri l extraction des acides nucl iques interne teurs QS teurs QS PCR gt SUUS Rep eus ice e Centrifugeuse de bureau avec rotor adapt des tubes de 2 ml e Centrifugeuse avec rotor pour plaques de microdosage si vous utilisez des plaques de 96 puits de r action e Vortex Plaques de 96 puits de r action ou tubes de r action avec le mat riel Le kit RealStar HSV PCR 1 0 contient quatre calibrateurs du HSV 1 QS1 QS4 ainsi que quatre du correspondant pour leur fermeture optique CL Pipettes r glables e Cones de pipettes avec filtres jetables 3 Conservation e Gants non talqu s jetables e Le kit RealStar HSV PCR 1 0 est exp di sous carboglace Les composants du kit doivent arriver congel s Si un ou plusieurs composants ne sont pas NOTE congel s au moment de la r ception ou si l un des tubes a t abim lors de la livraison contacter altona Diagnostics GmbH pour demander conseil Merci de vous assurer que les instruments ont t install s e Tous les composants doivent tre conserv s 20 C d s la livraison calibr s v rifi s et entretenus selon les instructions et les recom mandations du fabricant RealStar HSV PCR Kit 1 0 5 Informations g n rales Les virus de l herpes simplex virus de type 1 et 2 HSV 1 et HSV 2 sont membres de la famille Herpesviridae et ainsi que le VZV sont class s dans la famille des alphaherpesviridae Le HSV 1 et le HSV 2 ont
23. rieur 2 95 96 La sensibilit analytique a t d termin e en analysant les dilutions en s rie d ADN quantifi de d HSV 1 et d HSV 2 21 RealStar HSV PCR Kit 1 0 Table 1 R sultats de PCR utilis s pour le calcul de la sensibilit analytique du syst me sp cifique au HSV 1 du kit RealStar HSV PCR 1 0 C initiale Nombre de Nombre de LEUE copies l cycles positifs succes Table 2 R sultats de PCR pour le calcul de la sensibilit analytique du syst me sp cifique au HSV 2 du kit RealStar HSV PCR 1 0 C initiale Nombre de Nombre de Taux de copies pnl cycles positifs succes 22 RealStar HSV PCR Kit 1 0 La sensibilit analyique du kit RealStar HSV PCR 1 0 d termin e par analyse Probit pour l HSV 1 est 0 33 copies ul d luat intervalle de confiance 95 Cl 0 16 1 3 copies ul et pour la d tection de l ADN sp cifique d HSV 2 1 2 copies ul luat intervalle de confiance 95 CI 0 7 3 5 copies ui 11 2 Sp cificit analytique La sp cificit analytique du kit RealStar HSV PCR 1 0 est assur e par la s lection approfondie des oligonucl otides amorces et sondes Les oligo nucl otides sont v rifi s par comparaison de leur s quence avec les s quences publiques disponibles pour s assurer que toutes les souches int ressantes de HSV seront d tect es La sp cificit analytique du kit RealStar HSV PCR 1 0 a t valu e en testant un panel d ADN ARN g
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