SHBG-ELISA - DIAsource Immunoassays
Contents
1. WASH SOLN Tampon de lavage2. 2013 08 19 Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 fr Revision Nr 130819 1 P I Number 1701000 Ag 1251 Ab 1251 Ag 1251 Ab 1251 CONC INC BUF ACETONITRILE SERUM DIL SPE DIL BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL NEUTR SOLN TRACEUR BUF EXTR SOLN conc WASH SOLN CONTROL N Used symbols Wash buffer Revision nr 130513 P I Number 1701000 Simbolos utilisados Producto sanitario para diagn stico in vitro Fabricante WASH SOLN cone 1251 CONC Ab 1251 conc ACETONITRILE DIL BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PEG EXTR SOLN ELU SOLN GEL PR
3. dans un puits Apr s une tape de lavage l enzyme conjugu est ajout e c est dire un anticorps anti SHBG conjugu e avec la peroxidase de Raifort horseradish peroxidase HRP Apres l incubation le conjugu non li est limin durant le lavage des puits La quantit de conjugu HRP li e est proportionnelle la concentration de SHBG contenu dans l chantillon Suite l addition de solution substrat l intensit de la coloration obtenue est proportionnelle a la concentration de SHBG contenue dans l chantillon 3 PRECAUTIONS D UTILISATION 1 Ce kit est uniquement destin aux tests diagnostiques in vitro Les informations concernant la toxicit des r actifs contenus dans ce kit sont pr sent es dans la fiche de s curit Material Safety Data Sheets 3 Tous les r actifs de ce kit contenant du s rum ou du plasma humain ont t test s avec des r sultats n gatifs pour le VIH MII le HBsAg et le HCV selon les normes FDA en vigueur N anmoins lors de leur utilisation tous les r actifs de ce kit doivent tre manipul s avec pr caution Eviter les contacts avec la Stop Solution celle ci contient 0 5 M de H2SO Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau Ne jamais pipeter avec la bouche et viter tout contact de la peau ou des muqueuses avec les r actifs ou les chantillons Ne pas fumer manger boire ou utiliser des produits cosm tiques dans les zones o les chantillons ou le ki
4. Serum Collect blood by venipuncture e g Sarstedt Monovette for serum allow to clot and separate serum by centrifugation at room temperature Do not centrifuge before complete clotting has occurred Patients receiving anticoagulant therapy may require increased clotting time Plasma Whole blood should be collected into centrifuge tubes containing anti coagulant and centrifuged immediately after collection E g for Heparin plasma Sarstedt Monovette orange cap 02 165 001 5 2 Specimen Storage and Preparation Specimens should be capped and may be stored for up to 2 days at 2 C to 8 C prior to assaying Specimens held for a longer time should be frozen only once at 20 C prior to assay Thawed samples should be inverted several times prior to testing 5 3 Specimen Dilution If in an initial assay a specimen is found to contain more SHBG than the highest calibrator the specimens can be diluted with Assay Buffer and reassayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Example a dilution 1 10 10 uL sample 90 uL Assay Buffer mix thoroughly b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Assay Buffer mix thoroughly 6 ASSAY PROCEDURE 6 1 General Remarks All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps sh
5. 1 vial 80 mL listo para usar Contiene conservante Enzyme Conjugate Conjugado enzim tico 1 vial 14 mL listo para usar Anticuerpo anti SHBG conjugado con la Peroxidasa de r bano Contiene conservante a dl o Substrate Solution Soluci n de sustrato 1 vial 14 mL listo para usar Tetrametilbencidina TMB o O I H O E ou T SOLN Stop Solution Soluci n de parada 1 vial 14 mL listo para usar contiene 0 5M H2SO4 Evitar el contacto con la Soluci n de parada Puede causar irritaci n y quemaduras en al piel O0 SOLN Wash Solution Soluci n de lavado 1 vial 25 mL concentrado 40X ver Preparaci n de los Reactivos WASH 4 2 Equipamiento y material requerido pero no provisto Lector de microplacas calibrado 450 10 nm Micropipetas de precisi n variable calibradas Papel absorbente Agua destilada Depositos para dispensar los reactivos estandar muestras 4 3 Almacenamiento y estabilidad del kit Cuando se almacena a 2 C 8 C los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad No utilizar los reactivos mas alla de esta fecha Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2 C 8 C Las placas multipocillo han de almacenarse a 2 C 8 C Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo Los kits abiertos conservan su actividad durante dos meses si se almacenan como se ha descrito arriba 4 4 Prepa
6. 13 4 6 Kits endommag s Dans le cas de dommages importants survenus au kit ou ses composants informer DlAsource au plus tard une semaine apr s r ception du kit Les composants endommag s ne doivent pas tre utilis s pour le test Ils doivent tre stock s jusqu ce qu une solution adapt e ait t trouv e Apr s cela ils doivent tre limin s selon les directives officielles en vigueur Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 fr Revision Nr 130819 1 5 ECHANTILLON S rum ou h parine plasma peuvent tre utilis s pour ce test EDTA plasma peuvent donner des r sultats l g rement inf rieurs Ne pas utiliser des chantillons h molys s ict riques ou lip miques Remarque Les chantillons contenant de l azide de sodium ne doivent pas tre utilis s pour ce test 5 1 Pr l vement et pr paration des chantillons S rum Pr lever le sang par ponction veineuse ex Sarstedt Monovette pour s rum laisser coaguler puis s parer le s rum par centrifugation temp rature ambiante Ne pas centrifuger avant que la coagulation ne soit termin e Les patients sous traitement anti coagulant peuvent demander un temps de coagulation plus important Plasma Le sang total doit tre pr lev dans des tubes de centrifugation contenant un anti coagulant et centrifug imm diatement apr s le pr l vement Ex pour h parine plasma Sarstedt Monovette bouchon orange 02 165 001 5 2 Conservation
7. 996 Para uso diagnostico in vitro DlAsource ImmunoAssays S A Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium Tel 32 10 84 99 11 Fax 32 10 84 99 90 1 INTRODUCCI N El Kit de inmunoensayo enzim tico DIAsource SHBG proporciona los materiales necesarios para la determinaci n cuantitativa del SHBG globulina de uni n a hormona sexual en suero y plasma heparinizado Este ensayo est dise ado solo para diagn stico in vitro 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO El Kit DIAsource SHBG ELISA es un ensayo en fase s lida de inmunoadsorci n unido a enzimas ELISA basado en el principio del s ndwich Los pocillos de las placas est n recubiertos con un anticuerpo monoclonal dirigido contra un nico foci antig nico en una mol cula de SHBG Se incuba una al cuota de una muestra perteneciente a un paciente que contiene SHBG end gena en los pocillos recubiertos Despu s de un paso de lavado se adiciona el enzima conjugado que es un anticuerpo anti SHBG conjugado con la peroxidasa end gena Despu s de la incubaci n se lava el conjugado que no se ha unido La cantidad de peroxidasa unida es proporcional a la concentraci n de SHBG en la muestra Cuando se a ade la soluci n del sustrato de la peroxidasa la intensidad del color desarrollado es proporcional a la concentraci n de SHBG en la muestra del paciente 3 PRECAUCIONES Este kit es solamente para diagn stico in vitro Por favor se usa solo la version valida de la
8. DA Ge CE SHBG ELISA KAPD2996 DIAsource ImmunoAssays S A Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium LOT 130819 1 SHBG ELISA KAPD2996 IN VITRO DIAGNOSTIC USE DlAsource ImmunoAssays SA Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium Tel 32 10 84 99 11 Fax 32 10 84 99 90 1 INTRODUCTION 1 1 Intended Use The DlAsource SHBG ELISA is an enzyme immunoassay for the quantitative in vitro diagnostic measurement of SHBG in serum and heparin plasma 1 2 Summary and Explanation Sex hormone binding globulin SHBG is a B globulin that specifically binds steroid hormones Its molecular weight is 86 kDa mol The major site of SHBG synthesis is thought to be the hepatocytes Its production is regulated by androgen estrogen balance thyroid hormones insulin and dietary factors among others SHBG is involved in the transport of sex steroids in plasma Its concentration is a major factor regulating their distribution between protein bound and free states Determination of SHBG concentration is mainly of importance in the evaluation of mild disorders of androgen metabolism and it allows identification of women with hirsutism who are likely to respond to estrogen therapy Testosterone SHBG ratios correlate well with both measured and calculated values for free testosterone and help to discriminate between subjects with excessive androgen activity and normal individuals 2 PRINCIPLE OF TEST The DlAsource SHBG ELISA Ki
9. E SOLN NEUTR SOLN TRACEUR BU HRP HRP HRP HRP CONJ BUF CHROM TMB conc CHROM TMB Concentrado de conjugado de biotina Concentrado avidina HRP Tamp n de ensayo Conjugado de biotina Anticuerpo espec fico Estreptavidina HRP Concentrado WASH SOLN Tampon de lavado Revision nr 130513 P I Number 1701000 Revision nr 130513 Symboles utilis s y fin un E e O a T Un E n z Q T 5 un a E a o p 5 Dispositif m dical de diagnostic in vitro Fabricant SOLN cone ACETONITRILE SERUM DIL SPE DIL BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PRE NEUTR SOLN TRACEUR Ag HRP CONJ BUF CHROM TMB conc CHROM TMB SUB BUF
10. Equipement et mat riel requis mais non fournis Un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr 450 10 nm ex le lecteur de microplaques de DlAsource Des micro pipettes de pr cision variables et calibr es Du papier absorbant De l eau distill e 4 3 Stockage et stabilit du kit Les r actifs contenus dans des flacons non ouverts stock s 2 C 8 C seront stables jusqu la date d expiration inscrite sur l tiquette Ne pas utiliser les r actifs au del de cette date Les r actifs contenus dans des flacons ouverts doivent tre stock s 2 C 8 C Les micro plaques doivent tre stock es 2 C 8 C Une fois la capsule d aluminium ouverte attention bien refermer le flacon Les kits ouverts conservent leur activit durant deux mois s ils sont stock s comme pr c demment mentionn 4 4 Pr paration des r actifs Amener tous les r actifs et le nombre de barrettes n cessaires au test temp rature ambiante avant utilisation Diluer 25 mL de Wash Solution concentr e avec 975 mL d eau d sionis e pour un volume final de 1000 mL Remarque La solution de lavage dilu e est stable deux semaines temp rature ambiante 4 5 Elimitation des d chets relatifs au kit L limination des d chets relatifs au kit doit tre r alis e selon les r gles nationales en vigueur Les informations sp cifiques au kit sont pr sent es dans la fiche de s curit voir chapitre
11. Pr cticas de Laboratorio o a otros est ndares y o leyes nacionales aplicables Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control Es importante incluir siempre dentro del procedimiento de ensayo un n mero suficiente de controles para validar la exacti tud y la precisi n del ensayo Los resultados del ensayo son v lidos s lo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros par me tros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo En cado de alguna duda o inquietud por favor contactar con DIASOURCE IMMUNOASSAYS S A 11 2 Consecuencias Terap uticas Las consecuencias terap uticas nunca deben basarse s lo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo est n de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 11 1 Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro cl nico de un paciente Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 es Revision Nr 130819 1 Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio estan en acuerdo con todo el cuadro clinico de un paciente se pueden derivar con secuencias terap uticas Nunca deben derivarse consecuencias terap uticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo 11 3 Responsabilidad Cualquier modificaci n del kit y o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente a los resultado
12. Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupci n Utilizar puntas de pipeta de pl stico nuevas para cada est ndar control o muestra para evitar combinaciones cruzadas La absorbancia es funci n del tiempo de incubaci n y la temperatura Antes de comenzar el ensayo se recomienda que todos los reactivos est n preparados tapas removidas todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente etc Esto asegurar un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones Como regla general la reacci n enzim tica es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura El pipeteo de las muestras no debe exceder los 10 minutos para evitar desviaciones Si se utiliza m s de una placa en el mismo ensayo se recomienda incluir una curva est ndar en cada placa Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 es Revision Nr 130819 1 6 2 Procedimiento de ensayo Cada uno debe incluir una curva de estandares Asegurar el numero deseado de pocillos en el recipiente 2 Diluir los est ndares control y las muestras 1 20 1 19 en el Assay Buffer Ejemplo 10 uL Est ndar 190 uL Assay Buffer 3 Pipetear 100 ul de Assay Buffer en cada pocillo 4 Dispensar 25 uL de cada Standard Control y muestras diluidos con puntas nuevas en los pocillos adecuados Mezclar totalmente durante 5 segundos Es importante mezclar completamente en este paso 5 Incubar durante 30 minute
13. ant 15 minutes temp rature ambiante 9 D canter le contenu des puits Rincer les puits 3 fois avec de la Wash Solution dilu e 300 400 uL par puits Tapoter les puits sur du papier absorbant afin d liminer les gouttelettes r siduelles 10 Ajouter 100 uL of Substrate Solution chaque puits Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 fr Revision Nr 130819 1 11 Incuber pendant 12 minutes temp rature ambiante 20 C 25 C pendant 8 minutes a temp rature ambiante 2 26 C 12 Stopper la r action enzymatique en ajoutant 100 uL de Stop Solution chaque puits 13 Lire la densit optique 450 10 nm l aide d un spectrophotometre lecteur de micro plaques dans les 10 minutes apr s avoir ajout la Stop Solution 6 3 Calcul des r sultats Calculer les valeurs moyennes des densit s optiques pour chaque s rie de calibrateurs contr les et chantillons Etablir la courbe talon en reportant la densit optique moyenne de chaque valeur calibrateur en fonction de sa concentration en posant la densit optique en axe des ordonn es et la concentration en axe des abscisses 3 L utilisation de la densit optique moyenne pour chaque chantillon d termine la concentration correspondante a partir de la courbe talon 4 M thode automatique Les r sultats dans le IFU ont t calcul s de fa on automatique en utilisant une courbe de r gression 4 PL 4 Parameter Logistics D autres fonctions logi
14. che QC font toujours r f rence au lot de kit courant et doivent tre utilis es pour une comparaison directe avec les r sultats Il est galement recommand d utiliser les programmes d valuation de qualit nationaux ou internationaux afin de s assurer de l exactitude des r sultats Utiliser les m thodes d analyses statistiques appropri es pour l analyse des valeurs contr les et des tendances Si les r sultats ne correspondent pas aux limites tablies des contr les les r sultats concernant ces patients doivent tre consid r es comme non valides Dans ce cas tester les zones techniques suivantes m canisme de pipettage et temps spectrophotom tre dates d expiration des r actifs conditions de stockage et d incubation m thodes d aspiration et de lavage Apr s avoir tester les points mentionn s si aucune erreur n est d tect e contacter votre distributeur ou directement DlAsource 9 CARACT RISTIQUES DU TEST 9 1 Zone de mesure Les limites du dosage sont comprises entre 0 77 260 nmol L 9 2 Sp cificit des anticorps R action crois e Voir le manuel d utilisateur en version anglaise Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 fr Revision Nr 130819 1 9 3 Sensibilit de l analyse La sensibilit de l analyse a t calcul e a partir de la moyenne la plus lev e de deux d viations standards de l analyse de vingt r plicats du Calibrateur 0 et a t mesur e 0 77 nmol L 9 4 Pr cision V
15. des chantillons Les tubes contenant les chantillons doivent tre ferm s et peuvent tre stock s jusqu deux jours 2 C 8 C avant d tre test s Les chantillons stock s pour un temps prolong doivent tre congel s 20 C avant d tre test s Les chantillons d congel s doivent tre retourn s plusieurs fois avant le test 5 3 Dilution des chantillons Si lors d un test pr liminaire la concentration de l chantillon de SHBG se r v le tre sup rieure celle du calibrateur le plus concentr alors l chantillon doit tre dilu avec le Assay Buffer et test de nouveau comme d crit dans R alisation du test Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration Exemple a dilution 1 10 10 uL S rum 90 uL Assay Buffer bien m langer b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Assay Buffer bien m langer 6 REALISATION DU TEST 6 1 Remarques g n rales Tous les r actifs et chantillons doivent tre amen s temp rature ambiante avant utilisation Tous les r actifs doivent tre m lang s sans formation de mousse Une fois la proc dure engag e toutes les tapes doivent tre r alis es sans interruption Utiliser un nouveau c ne de pipette pour chaque calibrateur contr le ou chantillon ceci afin d viter toute contamination L absorbance est fonction du temps d incubation et de la temp rature Avan
16. ement with the items as stated under point 11 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutic consequences be derived The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences 11 3 Liability Any modification of the test kit and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 11 2 are also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer 12 REFERENCES LITERATURE 1 Moore J W and Bulbrook R D 1988 The epidemiology and function of sex hormone binding globulin IN Oxford Rewievs of Reproductive Biology 10 180 236 2 Selby C 1990 Sex hormone binding globulin origin function and clinical significance Ann Clin Biochem 27 532 541 Revision date 2013 08 19 Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 en Revision Nr 130819 1 SHBG ELISA KAPD2
17. ero por centrifugaci n a temperatura ambiente No centrifugar antes de la coagulaci n completa Las muestras de pacientes que reciben terapia anticoagulante requieren m s tiempo para coagular Plasma Toda la sangre ha de recogerse en tubos de centr fuga que contengan anticoagulante y centrifugar inmediatamente tras la recogida Ej para plasma Heparina Sarstedt Monovette tapa naranja 02 165 001 5 2 Almacenamiento de las muestras Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 2 dias a 2 C a 8 C antes del ensayo Las muestras almacenadas por un per odo de tiempo mas largo han de congelarse s lo una vez a 20 C antes del ensayo Las muestras des congeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo 5 3 Diluci n de las muestras Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el est ndar mas concentrado ha de diluirse con Assay Buffer y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo Para el c lculo de las concentraciones habr que tener en cuenta el factor de diluci n Ejemplo a diluci n 1 10 10 uL muestra 90 uL Assay Buffer mezclar totalmente b diluci n 1 100 10 uL diluci n a 1 10 90 uL Assay Buffer mezclar totalmente 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 6 1 Consideraciones generales Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso Todos los reactivos deben mezclarse sin formar espuma
18. icrotiterplate readers 16 Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding characteristics of the plates may result slightly different 17 Avoid contact with Stop Solution containing 0 5 M H2S0 It may cause skin irritation and burns 18 Some reagents may contain Proclin BND and or MIT as preservatives In case of contact with eyes or skin flush immediately with water 19 TMB substrate has an irritant effect on skin and mucosa In case of possible contact wash eyes with an abundant volume of water and skin with soap and abundant water Wash contaminated objects before reusing them If inhaled take the person to open air 20 Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guideline or regulation 21 For information on hazardous substances included in the kit please refer to Material Safety Data Sheets Material Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DlAsource N co Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 en Revision Nr 130819 1 4 REAGENTS 4 1 Reagents provided 1 Microtiterwells 12 x 8 break apart strips 96 wells wells coated with anti SHBG antibody monoclonal 2 ae Assay Buffer 1 vial 80 mL Ready to use Contain
19. ificity of the SHBG ELISA was studied by measuring apparent SHBG response caused by high levels of TBG Thyroxine Binding Globulin and CBG Cortisol Binding Globulin No cross reactions were found when testing up to 500 mg L of TBG and 500 mg L of CBG Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 en Revision Nr 130819 1 9 3 Sensitivity The analytical sensitivity of the DIAsource ELISA was calculated by adding 2 standard deviations to the mean of 20 replicate analyses of the Zero Calibrator SO and was found to be 0 77 nmol L 9 4 Reproducibility 9 4 1 Intra Assay The within assay variability is shown below Mean i w oo 1 9 4 2 Inter Assay The between assay variability is shown below ev 04 Du a 9 5 Recovery known amount of SHBG was added to three patient sera and the quantities recovered were measured The results are shown in the Endogenous SHBG Added SHBG measured measured value minus Recovery Expected value value SHBG endogenous value nmol L total observed value nmol L nmol L nmol L 9 6 Linearity Three patient samples were diluted with Assay Buffer to 1 2 1 4 and 1 8 SHBG values were assayed and the results were corrected using dilution factors Recovery results of these dilution tests are shown in the following table nmol L At dilution 1 2 At dilution 1 4 At dilution 1 8 10 LIMITATIONS OF USE Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is perfor
20. lacas calibrados No mezclar o usar componentes de kits con distinto n mero de lote Se recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las caracter sticas de uni n de las pla cas pueden resultar diferentes Los compuestos qu micos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas Las hojas de los datos de seguridad de este producto est n disponibles bajo pedido directamente a DIAsource ImmunoAssays S A Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 es Revision Nr 130819 1 4 COMPONENTES DEL KIT 4 1 Componentes del Kit 1 Microtiterwells Placas multipocillo 12 x 8 tiras separables 96 pocillos Pocillos recubiertos con anticuerpo anti SHBG monoclonal 2 en on Standard Standard A E Est ndar 5 viales 0 5 mL listo para usar Concentraciones 0 4 16 65 260 nmol L Los est n calibrados seg n WHO Standard parar Est ndar WHO NIBSC 08 266 Referir los valores exactos a la etiqueta del vial o a la Hoja de datos QC Contiene conservante 3 CONTROL N Control 1 vial 0 5 mL listo para usar Referir los valores y rangos del control a la etiqueta del vial o a la Hoja de datos QC Contiene conservante 4 Ass BUF Assay Buffer Tamp n de ensayo
21. libration curve A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results Use controls at both normal and pathological levels The controls and the corresponding results of the QC Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid In this case please check the following technical areas Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing methods After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DIAsource directly 9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 9 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 0 77 260 nmol L 9 2 Specificity of Antibodies Cross Reactivity Spec
22. logue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 fr Revision Nr 130819 1 4 COMPOSITION DU KIT 4 1 Contenu du kit 1 Microtiterwells Plaques de micro titration 12 x 8 d tacher barrettes plaques de 96 puits les puits sont recouverts avec un anticorps anti SHBG monoclonal 2 Assay Buffer tampon d essai 1 flacon 80 mL pr t l emploi Contient agent de conservation 3 CAL EE SHBG Calibrators calibrateur N 0 to 4 5 flacons 0 5 mL pr t l emploi Concentrations 0 4 16 65 260 nmol L Les calibrateurs ont t calibr s selon le WHO Standard for SHBG NIBSC 95 560 Contient agent de conservation gt CONTROL Control contr le 1 flacon 0 5 mL pr t l emploi Les valeurs contr les et limites sont indiqu es sur l tiquette du flacon ou sur la fiche QC Contient agent de conservation Enzyme Conjugate conjugu enzymatique 1 flacon 14 mL pr t l emploi Anticorps anti SHBG conjugu la HRP Contient agent de conservation Ab O al SOLN Wash Solution solution de lavage 1 flacon concentr 40 x Voir Pr paration des r actifs S O I H O E E ou Substrate Solution solution substrat 1 flacon 14 mL pr t l emploi T tram thylbenzidine TMB 8 SOLN Stop Solution solution d arr t 1 flacon 14 mL pr t l emploi Contient 0 5 M H2SO Eviter les contacts avec la solution stop Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau 4 2
23. ls sharply on absorbent paper to remove residual droplets Important note The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure 7 Dispense 100 uL Enzyme Conjugate into each well 8 Incubate for 15 minutes at room temperature 9 Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 3 times with diluted Wash Solution 300 400 uL per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 en Revision Nr 130819 1 10 Add 100 uL of Substrate Solution to each well 11 Incubate for 12 minutes at room temperature 20 C 25 C for 8 minutes at room temperature 26 C and more 12 Stop the enzymatic reaction by adding 100 uL of Stop Solution to each well 13 Determine the absorbance OD of each well at 450 10 nm with a microtiter plate reader It is recommended that the wells be read within 10 minutes after adding the Stop Solution 6 3 Calculation of Results 1 Calculate the average absorbance values for each set of calibrators controls and patient samples Using semi logarithmic graph paper construct a calibration curve by plotting the mean absorbance obtained from each calibrator against its concentration with absorbance value on the vertical Y axis and concentration on the horizontal X axis 3 Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concent
24. med with a complete understanding of the package insert instruction and with adherence to good laboratory practice Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results 10 1 Interfering Substances Haemoglobin bilirubin and triglyceride have no influence on the assay results Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 en Revision Nr 130819 1 10 2 Drug Interferences Until today no substances drugs are known to us which have an influence to the measurement of SHBG in a sample 10 3 High Dose Hook Effect No hook effect was observed in this test up to 40 000 nmol L of SHBG 11 LEGAL ASPECTS 11 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national calibrators and or laws This is especially relevant for the use of control reagents It is important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications In case of any doubt or concern please contact DIAsource 11 2 Therapeutic Consequences Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agre
25. metodico t cnico incluido aqui en el kit Para obtener informaci n de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV I II HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA Sin embargo todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensaci n como potencialmente biopeligrosos Evitar contacto con Stop Solution que contiene H2SO 0 5 M Puede provocar irritaci n y quemaduras en la piel Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas No fumar comer beber o usar cosm ticos en reas donde las muestras o los reactivos del kit est n siendo usados Usar guantes de latex cuando se utilicen las muestras y los reactivos La contaminaci n microbiana de los reactivos o las muestras puede dar resultados err neos El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas No utilizar los reactivos despu s de su fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del kit Todos los vol menes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo Los resultados ptimos del ensayo se obtienen solo cuan do se utilizan pipetas y lectores de microp
26. n con el valor de absorbancia en el eje vertical Y y la concentraci n en el eje horizontal X 3 Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentraci n correspondiente a partir de la curva est ndar 4 M todo automatizado Los resultados en la IFU se han calculado autom ticamente usando una curva de regresi n 4 PL 4 Par metros Log sticos Otras funciones de regresi n dar n lugar a resultados sensiblemente diferentes 5 La concentraci n de las muestra puede leerse directamente de la curva de est ndares Las muestras con concentraciones superiores al mayor est ndar han de diluirse Para el c lculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de diluci n N a 6 3 1 Ejemplo de una Curva Est ndar T pica Los siguientes datos son solamente para la explicaci n y no pueden ser utilizados en lugar de los datos generados en el momento del ensayo Standard A 0 nmol L Standard B_ 4 nmol L Standard C 16 nmol L Standard D_ 65 nmol L Standard E 260 nmol L 7 VALORES ESPERADOS Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales En un estudio con adultos aparentemente sanos utilizando el DDASOURCE SHBG ELISA se observaron los siguientes valores Poblaci n N v lido SHBG nmol L Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 es Revision Nr 130819 1 8 CONTROL DE CALIDAD Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leye
27. oir le manuel d utilisation en version anglaise 9 5 Recouvrement Voir le manuel d utilisation en version anglaise 9 6 Lin arit Voir le manuel d utilisation en version anglaise 10 LIMITES D UTILISATION Toute utilisation impropre des chantillons ou toute modification du test peut influencer les r sultats 10 1 Substances parasites L h moglobine la bilirubine et les triglyc rides n ont aucune influence sur les r sultats du dosage 10 2 Drogues parasites Jusqu a pr sent nous ne connaissons aucune substance drogues capable d influencer la mesure de SHBG dans un chantillon 10 3 Effet de surdosage Jusqu a 40 000 nmol L de SHBG aucun effet de surdosage n a t d tect avec ce test 11 ASPECTS L GAUX 11 1 Fiabilit des r sultats Ce test doit tre exactement utilis selon les instructions d utilisation du fabricant De plus les utilisateurs doivent strictement respecter les r gles de la bonne pratique de laboratoire ou autres lois nationales Cela est sp cialement le cas pour l utilisation des r actifs contr les Pour chaque test il est important d inclure un nombre suffisant de contr les afin de pouvoir valider l exactitude et la pr cision du test Les r sultats du test sont valides si et seulement si tous les contr les sont compris dans les gammes de mesure mentionn es et si tous les autres param tres du test sont galement compris dans les instructions de ce test En cas de doute ou d inqui tude c
28. ontacter DlAsource 11 2 Cons quences th rapeutiques Les suites th rapeutiques ne devront jamais tre bas es sur les r sultats de laboratoire seuls m me si les tous les r sultats du test sont en accord avec les points mentionn s dans le paragraphe 11 1 Tout r sultat n est qu une partie du tableau clinique complet d un patient Les suites th rapeutiques peuvent d couler des r sultats de laboratoire si et seulement si ceux ci sont en accord avec l ensemble du tableau clinique du patient Le r sultat du test en lui m me ne doit en aucun cas tre le seul d terminant des suites th rapeutiques suivre 11 3 Responsabilit Toute modification du kit et ou change ou m lange d un des composants de diff rents lots d un kit un autre pourrait affecter de fa on n gative les r sultats attendus et la validit du test dans son ensemble De telles modifications ou changes invalident toute r clamation pour remplacement Toutes les r clamations soumises relatives au paragraphe 11 2 et dues une mauvaise interpr tation des r sultats de laboratoire de la part du client sont galement invalides N anmoins en cas de r clamation la responsabilit du fabricant n est pas de d passer les limites de la valeur du kit Tout dommage caus au kit lors de son transport n est pas du ressort de la responsabilit du fabricant 12 REFERENCES BIBLIOGRAPHIE Voir le manuel d utilisation en version anglaise Date de r vision
29. ored at 2 C to 8 C Once the foil bag has been opened care should be taken to close it tightly again Opened kits retain activity for two months if stored as described above 4 4 Reagent Conditions Bring all reagents and required number of strips to room temperature prior to use Wash Solution Add deionized water to the 40X concentrated Wash Solution Dilute 25 mL of concentrated Wash Solution with 975 mL deionized water to a final volume of 1000 mL The diluted Wash Solution is stable for 2 weeks at room temperature 4 5 Disposal of the kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Material Safety Data Sheet 4 6 Damaged Test Kits In case of any severe damage to the test kit or components DIAsource has to be informed in writing at the latest one week after receiving the kit Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solution has been found After this they should be disposed according to the official regulations Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 en Revision Nr 130819 1 5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Serum or heparin plasma can be used in this assay EDTA plasma may give slightly lower results Do not use haemolytic icteric or lipaemic specimens Please note Samples containing sodium azide should not be used in the assay 5 1 Specimen Collection
30. ould be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips for each calibrator control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and temperature Before starting the assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption As a general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature Pipetting of samples should not exceed 10 minutes to avoid assay drift If more than one plate is used in the same run it is recommended to include a calibration curve on each plate 6 2 Test Procedure Each run must include a calibration curve Secure the desired number of Microtiter wells in the frame holder 2 Dilute each Calibrator Control and sample 1 20 with Assay Buffer 1 part Calibrators Control sample 19 parts Assay Buffer Example 10 uL Calibrator 190 uL Assay Buffer 3 Dispense 100 uL Assay Buffer into each well 4 Dispense 25 uL of each diluted Calibrator Control and sample with new disposable tips into appropriate wells Thoroughly mix for 5 seconds It is important to have a complete mixing in this step 5 Incubate for 30 minutes at room temperature 6 Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 3 times with diluted Wash Solution 300 400 uL per well Strike the wel
31. possible and in the same sequence for each step 6 Use reservoirs only for single reagents This especially applies to the substrate reservoirs Using a reservoir for dispensing a substrate solution that had previously been used for the conjugate solution may turn solution colored Do not pour reagents back into vials as reagent contamination may occur 7 Mixthe contents of the microplate wells thoroughly to ensure good test results Do not reuse microwells Do not let wells dry during assay add reagents immediately after completing the rinsing steps Allow the reagents to reach room temperature 21 26 C before starting the test Temperature will affect the absorbance readings of the assay However values for the patient samples will not be affected 10 Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes 11 Do not smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled 12 Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contamination of reagents or specimens may give false results 13 Handling should be done in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation 14 Do not use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels 15 All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and m
32. racion de los Reactivos Dejar que todos los reactivos y el numero requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse Wash Solution Mezclar 25 mL de Wash Solution concentrada con 975 mL de agua desionizada hasta un volumen final de 1000 mL La soluci n del lavado diluida es estable durante 2 semanas a temperatura ambiente 4 5 Eliminacion del Kit La eliminacion del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales En las hojas de datos de seguridad se proporciona informacion espe cial de este producto ver capitulo 13 4 6 Kits de ensayo danados En caso de que exista cualquier dano severo del kit de ensayo o de sus componentes ha de informarse por escrito a DIASOURCE IMMUNOASSAYS S A no mas tarde de una semana despu s de recibir el kit No deben utilizarse componentes da ados para llevar a cabo un ensayo Han de almacenarse hasta que se encuentre una soluci n Despu s de esto deben ser eliminados de acuerdo con las leyes oficiales Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 es Revision Nr 130819 1 5 MUESTRAS En este ensayo pueden usarse suero o plasma heparinizado El plasma EDTA puede dar resultados ligeramente m s bajos No usar muestras hemol ticas ict ricas o lip micas Tener en cuenta No deben usarse muestras que contengan acida s dica 5 1 Toma de muestras Suero Recoger la sangre por punci n en la vena ej Sarstedt Monovette para el suero permitir coagulaci n y separar el su
33. ration from the calibration curve 4 Automated method The results in the IFU have been calculated automatically using a 4 PL 4 Parameter Logistics curve fit 4 Parameter Logistics is the preferred method Other data reduction functions may give slightly different results 5 The concentration of the samples can be read directly from this calibration curve Samples with concentrations higher than that of the highest calibrator have to be further diluted or reported as gt 260 nmol L For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account 6 3 1 Example of Typical Calibration Curve The following data is for demonstration only and cannot be used in place of data generations at the time of assay Calibrator Optical Units 450 nm Calibrator O 0 nmol L 0 01 Calibrator 1 4 nmol L Calibrator 2 16 nmol L 0 30 Calibrator 3 65 nmol L 1 07 Calibrator 4 260 nmol L 2 04 7 EXPECTED NORMAL VALUES It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values In a study conducted with apparently normal healthy adults using the DIAsource SHBG ELISA the following values are observed Population SHBG nmol L The results alone should not be the only reason for any therapeutic consequences The results should be correlated to other clinical observations and diagnostic tests 8 QUALITY CONTROL Good laboratory practice requires that controls be run with each ca
34. rpos Reactividad Cruzada Se estudi la especificidad del ensayo SHBG ELISA TEST mediante la medida de la respuesta aparente de SHBG causada por los niveles elevados de TBG Globulina de uni n a Tiroxina y CBG Globulina de uni n a Cortisol No se encontraron reacciones cruzadas cuando se ensayaron hasta 500 mg L de TBG y 500 mg L de CBG 9 3 Sensibilidad Anal tica La sensibilidad anal tica se calcul a partir de la media mas dos desviaciones est ndar de 20 r plicas del Est ndar 0 y result ser 0 77 nmol L 9 4 Precisi n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 5 Recuperaci n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 6 Linealidad Consultar el manual de usuario en ingl s 10 LIMITACIONES DE USO Cualquier manipulaci n inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden influenciar los resultados 10 1 Sustancias que pueden interferir Hemoglobina Bilirrubina y Triglic ridos no influencian los resultados del ensayo 10 2 Interferencias con drogas Hasta ahora no se han encontrado sustancias drogas conocidas por nosotros que tengan influencia en la medida de SHBG en una muestra 10 3 Efecto Gancho Dosis Elevada No se ha observado efecto gancho en este ensayo hasta 40000 nmol L de SHBG 11 ASPECTOS LEGALES 11 1 Fiabilidad de los Resultados El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante Mas a n el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL Buenas
35. s a temperatura ambiente 6 Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 3 veces con Wash Solution diluida 300 400 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absor bente para eliminar las gotas residuales Nota importante La sensibilidad y la precisi n de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realizaci n correcta del proceso de lavado Dispensar 100 uL de Enzyme Conjugate a cada pocillo 8 Incubar durante 15 minutes a temperatura ambiente 9 Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 3 veces con Wash Solution diluida 300 400 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absor bente para eliminar las gotas residuales 10 Adicionar 100 uL de Substrate Solution a cada pocillo 11 Incubar la placa durante 12 minutos a temperatura ambiente 20 C 25 C durante 8 minutos a teme paturra ambiente 26 C y mas 12 Parar la reacci n enzim tica mediante la adici n de 100 uL de Stop Solution a cada pocillo 13 Leer la OD a 450 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos despu s de la adici n de la Stop Solution 6 3 C lculo de los Resultados Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de est ndares controles y muestras de pacientes Construir una curva est ndar mediante la representaci n de la absorbancia media obtenida para cada est ndar frente a su concentraci
36. s esperados y en la validez de todo el test Esas modificaciones y o cambios invalidad cualquier reclamaci n de reposici n Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretaci n de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 11 2 son tambi n inv lidas A pesar de todo en el caso de cualquier reclamaci n la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit Cualquier da o provocado al kit durante su transporte no est sujeto a la responsabilidad del fabricante 12 REFERENCIAS Consultar el manual de usuario en ingl s fecha de revisi n 2013 08 19 Catalogue Nr KAPD2996 P I Number 1701132 es Revision Nr 130819 1 SHBG ELISA KAPD2996 IN VITRO DIAGNOSTIC USE DlAsource ImmunoAssays SA Rue du Bosquet 2 B 1348 Louvain la Neuve Belgium Tel 32 10 84 99 11 Fax 32 10 84 99 90 1 INTRODUCTION Le kit de dosage immuno enzymatique DIAsource SHBG ELISA propose les mat riaux requis pour la mesure quantitative de la Sex Hormone binding globulin SHBG dans le s rum ou l h parine plasma Ce kit est a utiliser uniquement dans le cadre de tests diagnostiques in vitro 2 PRINCIPLE DU TEST Le kit DIAsource SHBG ELISA est bas sur une r action immuno enzymatique en sandwich en phase solide Les microplaques sont recouvertes avec un anticorps monoclonal dirig contre un antig ne sp cifique de la mol cule SHBG Un aliquot de l chantillon contenant la SHBG endog ne est incub
37. s estatales y federales El uso de muestras control ser recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados Usar controles tanto a niveles normal como patol gico Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad est n fijados en el certificado de control de calidad que acompa an al kit Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la compa raci n directa de los resultados Es recomendable tambi n hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exactitud de los resultados Utilizar m todos estad sticos apropiados para el an lisis de los valores y tendencia de los controles Si los resultados del ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los controles los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inv lidos En este caso por favor comprobar las siguientes reas t cnicas Pipeteo y tiempo empleado fot metro fecha de caducidad de los reactivos condiciones de almacenamiento e incubaci n m todos de aspiraci n y lavado Despu s de comprobar los asuntos mencionados arriba sin encontrar ning n error contactar con su distribuidor o con DIAsource ImmunoAs says S A directamente 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 9 1 Rango din mico del ensayo El rango del ensayo se encuentra entre 0 77 260 nmol L 9 2 Especificidad de los Anticue
38. s preservative SHBG Calibrators N 0 to 4 5 vials 0 5 mL ready to use Concentrations 0 4 16 65 260 nmol L The calibrators are calibrated against human SHBG WHO Standard NIBSC 95 560 Contain preservative a z E 2 0 4 CONTROL Control N 1 1 vial 0 5 mL ready to use For control values and ranges please refer to vial label or QC Datasheet Contains preservative Enzyme Conjugate 1 vial 14 mL ready to use Anti SHBG antibody conjugated to horseradish peroxidase Contains preservative al Ab o WASH Wash Solution 1 vial 25 mL 40x concentrated See Preparation of Reagents N O I H O E E U TMB Substrate Solution 1 vial 14 mL ready to use Tetramethylbenzidine TMB 8 SOLN Stop Solution 1 vial 14 mL ready to use Contains 0 5 M H2SO Avoid contact with the stop solution It may cause skin irritations and burns 4 2 Materials required but not provided A microtiter plate calibrated reader 450 10 nm Calibrated variable precision micropipettes Absorbent paper Distilled or deionized water Tubes for sample calibrator dilution Timer Semi logarithmic graph paper or software for data reduction 4 3 Storage Conditions When stored at 2 C to 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 C to 8 C Microtiter wells must be st
39. stiques peuvent donner des r sultats l g rement diff rents 5 La concentration des chantillons peut tre lue directement partir de cette courbe talon Les chantillons avec une concentration sup rieure celle du plus haut calibrateur doivent tre dilu s de nouveau Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration 6 3 1 Exemple d une courbe calibrateur typique Les r sultats suivants sont ici pr sent s titre d exemple et ne peuvent tre utilis s au moment de l essai Calibrateur Unit s optiques 450 nm Calibrateur 0 nmol L 0 01 7 VALEURS ATTENDUES Il est fortement recommand chaque laboratoire de d terminer ses propres valeurs normales ou anormales Dans une tude r alis e avec des adultes normaux et sains l aide du kit DIAsource SHBG ELISA les valeurs suivantes sont observ es Population SHBG nmol L valeur moyenne Coms o s so Ces u e aw 8 CONTROLE DE QUALIT Il est recommand d utiliser les chantillons contr les selon les r glementations nationales en vigueur L utilisation des chantillons contr les est recommand afin de s assurer jour apr s jour de la validit des r sultats Utiliser les contr les de valeurs normales et pathologiques Les contr les et les r sultats correspondants issus du laboratoire QC sont mentionn s dans le certificat QC fourni avec le kit Les valeurs et les limites mentionn es sur la fi
40. t de commencer le test il est recommand de pr parer tous les r actifs bouchons ouverts de pr parer les puits des microplaques etc Cela garantira un intervalle de temps quivalent entre chaque tape sans interruption En r gle g n rale la r action enzymatique est lin airement proportionnelle au temps et la temp rature 6 2 R alisation du dosage Chaque test doit inclure une courbe talon Disposer le nombre de puits de micro titration d sir dans le support 2 Diluer chaque Calibrateur Control et chantillon 1 20 avec Assay Buffer 1 partie Calibrateur Control chantillon 19 parties Assay Buffer Exemple 10 uL Calibrateur 190 uL Assay Buffer 3 D poser 100 uL Assay Buffer dans chaque puits 4 D poser 25 uL de chaque Calibrateur Control et les chantillons dilu e avec de nouveaux c nes de pipette dans les puits appropri s Bien m langer pendant 5 secondes ll est important d obtenir un m lange parfait lors de cette tape 5 Incuber pendant 30 minutes a temp rature ambiante 6 D canter le contenu des puits Rincer les puits 3 fois avec de la Wash Solution dilu e 300 400 uL par puits Tapoter les puits sur du papier absorbant afin d liminer les gouttelettes r siduelles Remarque importante La sensibilit et la pr cision de ce test sont fortement d pendantes de la bonne r alisation des tapes de lavage 7 D poser 100 uL Enzyme Conjugate dans chaque puits 8 Incuber pend
41. t is a solid phase enzyme linked immunosorbent assay ELISA based on the sandwich principle The microtiter wells are coated with a monoclonal mouse antibody directed towards a unique antigenic site of the SHBG molecule An aliquot of patient sample containing endogenous SHBG is incubated in the coated well After a washing step enzyme conjugate is added which is a monoclonal anti SHBG antibody conjugated with horseradish peroxidase After incubation the unbound conjugate is washed off The amount of bound peroxidase is proportional to the concentration of SHBG in the sample Having added the substrate solution the intensity of colour developed is proportional to the concentration of SHBG in the patient sample 3 WARNINGS AND PRECAUTIONS This kit is for in vitro diagnostic use only For professional use only All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV I Il HBSAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and for disposal 3 Before starting the assay read the instructions completely and carefully Use the valid version of the package insert provided with the kit Be sure that everything is understood 4 The microplate contains snap off strips Unused wells must be stored at 2 C to 8 C in the sealed foil pouch and used in the frame provided 5 Pipetting of samples and reagents must be done as quickly as
42. t ont t mani s Porter des gants d examen lors de l utilisation des chantillons ou des r actifs Une contamination microbienne des chantillons ou des r actifs pourrait fausser les r sultats L utilisation de ce kit devra tre en accord avec les normes ou recommandations nationales de s curit en vigueur concernant les produits risque biologique 9 Ne pas utiliser les r actifs au del de la date d expiration inscrite sur l emballage 10 Tous les volumes indiqu s doivent tre scrupuleusement respect s comme indiqu dans le protocole exp rimental Seule l utilisation de pipettes calibr es ou d un spectrophotometre lecteur de micro plaques calibr garantit l obtention de r sultats optimaux ce test 11 Ne pas m langer ou utiliser des r actifs contenus dans des kits de lots diff rents Il est conseill de ne pas changer les puits de diff rentes plaques m me si celles ci proviennent du m me lot Les kits peuvent avoir t transport s ou stock s diff remment et les caract ristiques de liaison de chaque plaque pourraient ainsi tre modifi es 12 L limination des solutions chimiques et des r actifs contenus dans ce kit utilis s ou non doit tre en accord avec la r glementation nationale en vigueur concernant l limination des d chets a risque biologique 13 La fiche de s curit concernant ce produit peut tre obtenue en contactant directement DIAsource ImmunoAssays S A LOUE a Cata
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