Home

Xpert MRSA/SA SSTI - Diagnostic Technology

1. de correspondencia total por centro 100 140 140 97 9 137 140 95 7 134 140 97 9 411 420 78 301 0190 Rev C February 2012 Reproducibilidad Tabla 11 Resumen de resultados de valores de Uc por nivel de muestra y sonda CPM Nivel Media Desv est ndar CV MRSA1 Neg Alto 34 52 0 82 2 36 MRSA2 Neg Alto 34 46 0 85 2 46 Neg MSSE 34 44 0 90 2 62 SA Neg Alto 34 38 0 92 2 66 Spa Nivel Media Desv est ndar CV MRSA1 Pos Bajo 32 96 0 8 2 44 MRSA2 Pos bajo 31 05 0 69 2 21 SA Pos Bajo 33 91 0 8 2 35 mecA Nivel Media Desv est ndar CV MRSA1 Pos Bajo 33 25 0 80 2 40 MRSA2 Pos bajo 31 50 0 68 2 16 SCCmec Nivel Media Desv est ndar CV MRSA1 Pos Bajo 34 19 0 90 2 63 MRSA2 Pos bajo 33 13 0 68 2 05 Se realiz un segundo estudio de reproducibilidad con un panel de 4 muestras de SA 10X LoD MRSA1 10X LoD MRSA2 10X LoD y control negativo Staphylococcus epidermidis Los paneles se analizaron por duplicado en 10 d as diferentes en cada uno de los tres centros 4 muestras x 2 veces d a x 10 d as x 3 centros Se us un lote de Ensayos Xpert MRSA SA SSTI en cada uno de los tres centros de prueba Los Ensayos Xpert MRSA SA SSTI se realizaron siguiendo el procedimiento de Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Se obtuvieron resultados correctos en 239 de las 240 pruebas Tabla 12 Resumen de los resultados de reproducibilidad
2. Culture SARM SA SARM N g pas de Total croissance SARM 47 0 4 51 r 8 SA SARM 2 45 8 55 SA 1 2 91 94 Total 50 47 103 200 Deux des 47 chantillons pr sentaient une infection mixte au SARM et au SA Correspondance de pourcentage positif SARM 94 0 intervalle de confiance 95 83 5 98 7 Correspondance de pourcentage n gatif SARM 97 3 intervalle de confiance 93 3 94 7 99 3 Correspondance de pourcentage positif SA SARM 96 9 intervalle de confiance 95 91 2 99 4 Correspondance de pourcentage n gatif SA SARM 88 3 intervalle de confiance 95 80 5 93 8 Parmi les sujets dont Pusage ventuel d antibiotiques dans les 3 semaines pr c dant la collecte des chantillons tait inconnu le test Xpert MRSA SA SSTI a identifi 94 0 des chantillons positifs au SARM et 97 3 des chantillons n gatifs au SARM par rapport la m thode de culture de r f rence ainsi que 96 9 des chantillons positifs au SA et 88 3 de ceux n gatifs au SA par rapport la m thode de culture de r f rence 32 301 0190 Rev C February 2012 Variantes cassette vide Parmi les sujets dont on ignorait s ils avaient re u des antibiotiques ou non 97 0 194 200 des chantillons ont r ussi recevoir un r sultat des la premiere tentative avec le test Xpert MRSA SA SSTI Les 6 chantillons restants ont obtenu des r sultats ind termin s lors de la
3. Desinfectante antibacteriano para as m os Alcool etilico a 62 1 e5 p v Alcool isopropilico a 70 Alcool isopropilico a 70 50 v v 12 301 0190 Rev C February 2012 Valores esperados Valores esperados No estudo cl nico do Xpert MRSA SA SSTI foi inclu do um total de 848 amostras de SSTI obtidas em quatro hospitais de grandes dimens es nos EUA O n mero e percentagem de casos positivos obtidos atrav s do m todo de cultura de refer ncia calculados por grupos et rios s o apresentados na Tabela 3 Tabela 3 Preval ncia observada de MRSA e SA por cultura MRSA por cultura SA por cultura a e Idade inferior a 3 anos 34 11 32 4 21 61 8 Idade entre os 3 e os 18 anos 100 25 25 0 55 55 0 Idade entre os 19 e os 65 anos 614 188 30 6 300 48 9 Idade igual ou superior a 66 anos 100 22 22 0 35 35 0 Caracter sticas de desempenho Desempenho cl nico As caracter sticas de desempenho do ensaio Xpert MRSA SA SSTI foram determinadas num estudo de investiga o prospectivo multic ntrico realizado em quatro institui es dos EUA que comparou o ensaio Xpert MRSA SA SSTI com a cultura de refer ncia Os participantes inclu am indiv duos cujos cuidados de sa de de rotina implicavam a recolha de uma zaragatoa da infec o da pele e tecidos moles do paciente para cultura Foram colhidas zaragatoas duplas de cada participante Uma zaragatoa foi testada pelo en
4. Le prestazioni del saggio Xpert MRSA SA SSTI sono state calcolate rispetto ai risultati della coltura di riferimento Risultati completi Sono stati analizzati complessivamente 848 campioni per MRSA e SA mediante saggio Xpert MRSA SA SSTI e coltura Tra gli 848 casi nel set di dati idoneo per 207 soggetti stato riportato l uso di antibiotici nelle 3 settimane precedenti la raccolta del campione per 441 soggetti non stata confermato alcun uso di antibiotici infine in 200 casi l eventuale uso di antibiotici non era noto Una diminuzione statisticamente rilevante del tasso di positivit all SA relativamente ai risultati della coltura stata osservata in concomitanza con l uso di antibiotici p 0 007 questo fenomeno riportato anche nella letteratura 9 11 12 13 14 Anche il tasso di positivit al MRSA per la coltura risultava diminuito seppur in misura minore p 0 022 La diminuzione della positivit non stata osservata con il saggio Xpert MRSA SA SSTI in caso di utilizzo di antibiotici n stata osservata alcuna inibizione nel saggio in presenza di antibiotici ad uso topico vedere Sostanze Interferenti La diminuzione dei tassi di positivit della coltura per MRSA e SA in presenza di antibiotici ha generato tassi falsi positivi pi elevati di quanto previsto in relazione a quanto osservato con il saggio Xpert MRSA SA SSTI Cinque 5 delle 246 colture positive per MRSA presentavo infezioni miste di MRSA e S
5. das vezes com uma confian a de 95 para uma zaragatoa de ferida contendo 150 UFC e um resultado positivo em termos de MRSA em 95 das vezes com uma confianga de 95 para uma zaragatoa de ferida contendo 300 UFC Foram testadas cento e vinte e uma 121 estirpes adicionais de Staphylococcus aureus utilizando o ensaio Xpert MRSA SA SSTI Foram desenvolvidas culturas durante a noite em meio BHI Brain Heart Infusion sendo ajustadas a 0 5 unidades de McFarland Todas as estirpes foram testadas em triplicado utilizando 100 ul de culturas adicionalmente dilu das cem mil a um milh o de vezes Foram seleccionadas estirpes de MRSA 78 e SA 43 para representar de forma alargada a gama de diversidade gen tica encontrada na esp cie Staphylococcus aureus com base na estrutura filogen tica As selecg es representavam linhagens principais com nfase em 301 0190 Rev C February 2012 117 Portugu s complexos clonais espec ficos nos quais o MRSA predominantemente observado Foram inclu das estirpes contendo MRSA e SA assim como as que continham exclusivamente SA O ensaio Xpert MRSA SA SSTI identificou correctamente 116 das 121 estirpes As 5 discordantes foram caracterizadas atrav s de catalase coagulase em tubo e colora o Gram A resist ncia oxacilina mediada porMecA foi avaliada atrav s de difus o em disco utilizando um disco de 30 ug de cefoxitina e um limite de di metro de 21 22 mm Tr s 3 das 78 estirpes de MRSA
6. es detalhadas sobre como visualizar e imprimir os resultados consulte o Manual do utilizador do sistema GeneXpert Dx Controlo de qualidade Controlos de qualidade integrados Cada teste inclui um controlo de processamento da amostra SPC ou BG3 no ecr de visualiza o de resultados para o utilizador de n vel administrativo e um controlo de verifica o da sonda PCC Controlo de processamento da amostra SPC assegura que a amostra foi correctamente processada O SPC cont m esporos de Bacillus globigii sob a forma de um bolo de esporos secos que inclu do em cada cartucho para verificar o processamento adequado da amostra do ensaio Xpert MRSA SA SSTI O SPC verifica se ocorreu a lise do Staphylococcus aureus se os organismos estiverem presentes e verifica se o processamento da amostra adequado Al m disso este controlo detecta a inibi o associada amostra do ensaio de PCR em tempo real assegura que as condi es da reac o de PCR temperatura e tempo s o adequadas para a reac o de amplifica o e que os reagentes da PCR est o funcionais O SPC deve ser positivo numa amostra negativa e pode ser negativo ou positivo numa amostra positiva O SPC aprovado se preencher os crit rios de aceita o validados Controlo de verifica o da sonda PCC Antes do in cio da reac o de PCR o sistema GeneXpert Dx mede o sinal de fluoresc ncia das sondas para monitorizar a reidrata o das esferas o enchimento d
7. natureza fluorescente do mesmo 301 0190 Rev C February 2012 111 Portugu s O ensaio Xpert MRSA SA SSTI produzir um resultado falso positivo para MRSA quando se testa uma amostra de infec o SSTI mista que contenha Staphylococcus coagulase negativo resistentes meticilina MRCNS e Staphylococcus aureus de cassete vazia sens veis meticilina SA Subst ncias interferentes No estudo de investiga o do ensaio Xpert MRSA SA SSTI 428 das 848 amostras continham sangue e 404 amostras continham outras subst ncias n o espec ficas as quais poderiam eventualmente interferir com o ensaio note que algumas das amostras continham mais do que um tipo de contaminantes potenciais Testes exactos de Fisher realizados com base nos dados obtidos a partir de zaragatoas com e sem estas potenciais subst ncias interferentes demonstraram que a presen a das mesmas n o afectava o desempenho do ensaio Num estudo n o cl nico subst ncias potencialmente interferentes que poder o estar presentes em amostras de infec o da pele e tecidos moles foram avaliadas directamente em rela o ao desempenho do ensaio Xpert MRSA SA SSTI As subst ncias potencialmente interferentes que poder o estar presentes na pele e tecidos moles podem incluir entre outras sangue pus plasma pomadas t picas antibi ticas antis pticas analg sicas agentes de desbridamento e tinturas Estas subst ncias s o referidas nas Tabelas 1 e 2 estando indicad
8. 1 Strappare a livello della tacca per aprire la busta e rimuovere il KWIK STIK 2 Premere la parte inferiore dell ampolla nel tappo per rilasciare il liquido idratante 3 Tenere in posizione verticale e picchiettare delicatamente per facilitare il flusso del liquido attraverso il collo nella parte inferiore dell unit che contiene il pellet 4 Per facilitare la risospensione del pellet di cellule liofilizzato schiacciare il pellet e premere delicatamente la parte inferiore della camera 5 Staccare il KWIK STIK per rilasciare il tampone e inserire quest ultimo nella provetta che contiene il reagente di eluizione tappo a vite 6 Il tampone KWIK STIK pronto per il test del saggio Xpert MRSA SA SSTI 7 Se il CQ esterno non funziona secondo le previsioni ripetere il test di controllo esterno e o contattare Cepheid per l assistenza Alcuni esempi dei risultati del saggio Xpert MRSA SA SSTI sono illustrati nelle figure da 2 a 5 301 0190 Rev C February 2012 87 Italiano Figura 3 Esempio di un risultato MRSA negativo e SA positivo 88 301 0190 Rev C February 2012 Interpretazione dei risultati Test and Analyte Result Detail Errors History Figura 5 Esempio di un risultato non valido Interpretazione dei risultati I risultati sono interpolati da GeneXpert Dx System a partire dai segnali di fluorescenza misurati e dagli algoritmi di calcolo predefiniti e sono visualizzati nella finestra V
9. Prozentuale positive bereinstimmung MRSA 93 8 95 Konfidenzintervall 88 6 97 1 Prozentuale negative bereinstimmung MRSA 97 3 95 Konfidenzintervall 94 7 98 8 Prozentuale positive bereinstimmung SA MRSA 95 7 95 Konfidenzintervall 92 2 97 9 Prozentuale negative bereinstimmung SA MRSA 89 5 95 Konfidenzintervall 84 6 93 3 Von den Patienten ohne Antibiotikaeinnahme innerhalb von 3 Wochen vor der Probenentnahme wurden von der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung 93 8 der MRSA positiven Proben und 97 3 der MRSA negativen Proben im Verh ltnis zum Referenzkulturverfahren und 95 7 der SA positiven Proben und 89 5 der SA negativen Proben im Verh ltnis zum Referenzkulturverfahren erkannt Von diesen F llen ohne Antibiotikaeinsatz ergab sich bei 96 8 427 von 441 mit der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung beim ersten Versuch erfolgreich ein Ergebnis In den brigen 14 Fallen ergaben sich beim ersten Versuch unbestimmte Ergebnisse 6 INVALID UNG LTIG 7 ERROR FEHLER und 1 NO RESULT KEIN ERGEBNIS F r alle 14 F lle die beim ersten Versuch unbestimmte Ergebnisse ergaben wurde beim zweiten Versuch ein Ergebnis erzielt 52 301 0190 Rev C February 2012 Leistungsmerkmale Tabelle 5 MRSA SA Leistung bei Patienten mit unbekannter Antibiotikaeinnahme innerhalb von 3 Wochen vor der Probenentnahme im Verh ltnis zum Referenzkulturverfahren Kult
10. l amplificazione SA pu competere con questo controllo e Probe Check PASS tutti i risultati del controllo sonda sono superati Un risultato positivo dell analisi non indica necessariamente la presenza di organismi vitali E tuttavia presuntivo per la presenza di MRSA o SA MRSA NEGATIVE SA NEGATIVE MRSA NEGATIVO SA NEGATIVO Non viene rilevata la sequenza del DNA bersaglio di Staphylococcus aureus L SPC soddisfa i criteri di accettazione NEGATIVE non viene rilevata il DNA bersaglio spa di Staphylococcus aureus Il DNA bersaglio per mecA pu o non pu essere rilevato oppure il DNA bersaglio per SCCmec pu o non pu essere rilevato SPC PASS PSPC ha un valore Ct compreso nell intervallo valido e un valore finale sopra l impostazione del valore minimo del punto finale e Probe Check PASS tutti i risultati del controllo sonda sono superati Un falso negativo per MRSA un risultato di MRSA NEGATIVE SA POSITIVE anzich MRSA POSITIVE SA POSITIVE pu essere ottenuto se entrambi MRSA e SA sono presenti nel campione con una proporzione MRSA SA pari a 1 1x10 o superiore Negli studi clinici 5 delle 246 colture positive per MRSA presentavo infezioni miste di MRSA e SA Xpert MRSA SA SSTI ha identificato 3 delle 5 infezioni miste come MRSA positive e 2 delle 5 come SA positive MRSA negative INVALID NON VALIDO La presenza o l assenza di sequenze di DNA bersaglio per MRSA SA non possono esser
11. la culture de d tection de SARM chez des patients sous antibiotiques dans les 3 semaines pr c dant le test Xpert MRSA SA tait de 9 5 Un r sultat de test positif indique pas forc ment la pr sence d organismes viables Cependant il suppose la pr sence du SARM ou SA Le test Xpert MRSA SA SSTI doit venir en compl ment des autres m thodes disponibles Des r sultats de test erron s peuvent r sulter d une collecte d chantillon inad quate ne suivant pas la proc dure de collecte d chantillon recommand e de proc dures de manipulation et de stockage inad quates d une erreur technique d une confusion d chantillons ou d un nombre d organismes dans l chantillon insuffisant pour permettre une d tection Il est n cessaire de respecter scrupuleusement les instructions de cette notice pour viter des r sultats erron s La fiabilit des r sultats d pend d une collecte d chantillon ad quate d une manipulation et d un stockage corrects car la d tection du SARM et du SA repose sur le nombre d organismes pr sents dans l chantillon Des mutations ou des polymorphismes dans les r gions de fixation de Pamorce ou de la sonde peuvent affecter la d tection de variantes du SARM nouvelles ou inconnues entra nant un r sultat n gatif erron Dans les chantillons contenant la fois des SARM et des SA le test Xpert MRSA SA SSTI peut tre incapable de d tecter les organismes SA r sistants la m thici
12. la tapoter pour faciliter l coulement du liquide travers la tige dans le fond de l unit contenant la pastille 4 Pour faciliter la dissolution de la pastille de cellules lyophilis es crasez la pastille et pincez doucement la chambre du fond 5 D tachez le KWIK STIK pour lib rer l couvillon et ins rez celui ci dans le tube contenant le r actif d lution couvercle visser 6 L couvillon KWIK STIK est alors pr t pour le test Xpert MRSA SA SSTI 7 Si le contr le qualit externe ne pr sente pas les r sultats escompt s r p tez le test de contr le externe et ou contactez Cepheid pour obtenir de l aide Les Figures 2 5 pr sentent des exemples de r sultats de tests utilisant le test Xpert MRSA SA SSTI Assay 301 0190 Rev C February 2012 25 Fran ais Figure 3 Exemple d un r sultat MRSA Negative SA Positive n gatif SARM positif SA 26 301 0190 Rev C February 2012 Interpr tation des r sultats Test and Analyte Result Detail Errors History Assay Name MRSA SASSTI Assay Version 2 Figure 5 Exemple de r sultat non valide Interpr tation des r sultats Les r sultats sont interpol s par le GeneXpert Dx System partir de signaux fluorescents mesur s et d algorithmes de calcul int gr s Ils seront affich s dans la fen tre View Results Afficher les r sultats Les r sultats possibles sont MRSA POSITIVE SA POSITIVE SARM POSITIF SA POSITIF
13. taient mises en subculture sur g lose au sang La confirmation des colonies suppos es positives a t effectu e par catalase par test de coagulase en tube et par coloration de Gram La r sistance loxacilline li e au gene MecA a t test e par diffusion de disque en utilisant un disque de c foxitine de 30 ug et une limite de 21 22 mm Si les cultures des plaques SA et SARM se sont r v l es n gatives le bouillon de soja trypticase archiv avec 6 5 de NaCl a t mis en subculture sur g lose au sang pour une investigation du SA SARM comme d crit pr c demment Les performances du test Xpert MRSA SA SSTI sont r sum es dans les Tableaux 4 6 R sultats g n raux Au total 848 chantillons ont t test s la recherche de SARM et de SA par le test Xpert MRSA SA SSTI et par culture Parmi les 848 cas figurant dans les jeux de donn es admissibles l utilisation d antibiotiques dans les 3 semaines pr c dant la collecte des chantillons a t signal e chez 207 sujets et Pabsence d administration d antibiotiques a t confirm e pour 441 sujets pour 200 cas Pusage ventuel d antibiotiques tait inconnu Une baisse statistiquement significative du taux de positivit au SA par rapport aux r sultats de culture a t observ e en cas d administration d antibiotiques p 0 007 ce ph nom ne a galement t rapport dans la litt rature 10 11 12 13 14 Le taux de positivit au SARM pour la culture a
14. 1 SA 23 6 0 26 0 SA TN TP 2 SA 14 7 0 16 5 SA TN TP 3 SA 20 5 0 34 0 SA TN TP 4 SA 18 4 0 21 0 SA TN TP 5 SA 15 6 0 28 4 MRSA FN TP 6 SA 17 2 0 31 6 SA TN TP 7 SA 34 1 0 35 6 Neg TN FP 8 SA 29 1 0 33 0 SA TN TP 9 SA 12 7 0 23 5 SA TN TP 10 SA 18 2 0 27 6 SA TN TP 11 SA 18 4 0 22 0 SA TN TP 12 SA 25 5 0 27 7 SA TN TP 13 SA 20 0 0 22 1 Neg TN FP 14 SA 26 0 0 28 3 SA TN TP 15 SA 23 9 0 25 7 SA TN TP 16 SA 19 9 0 34 0 SA TN TP Rendimiento anal tico Especificidad anal tica Estudio de reactividad cruzada Se recogieron ciento cinco 105 cepas que se cuantificaron y analizaron con el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Los 98 cultivos de la American Type Culture Collection ATCC y 7 cepas de la Network on Antimicrobial Resistance in Staphylococcus aureus NARSA representan especies relacionadas filogen ticamente con el Staphylococcus aureus o con especies potencialmente presentes en entornos hospitalarios En ellos se incluyeron 29 eran cepas de estafilococos coagulasa negativos sensibles a la meticilina y 9 eran cepas de estafilococos coagulasa negativos resistentes a la meticilina Los organismos analizados se identificaron como Gram positivos 74 Gram negativos 28 u hongos 3 Los organismos tambi n se clasificaron como aerobios 95 o anaerobios 10 Dos 2 o m s r plicas de cada cepa se probaron con unidades McFarland de 1 7 3 2 Bajo las condiciones del estudio todas las cepas dieron negativas para MRSA y SA y ningu
15. Contattare il rappresentante Cepheid locale 301 0190 Rev C February 2012 101 Italiano Tabella dei simboli Simbolo Significato Numero di catalogo Dispositivo medico per diagnostica in vitro e El El Non riutilizzare O Codice lotto Attenzione consultare la documentazione allegata Produttore Contiene quantit sufficiente per lt n gt analisi Data di scadenza Controllo foce Rappresentante autorizzato nella Comunit Europea CN m Marchio CE Comunit Europea Limitazione della temperatura Bs Rischi biologici Cepheid AB R ntgenv gen 5 SE 171 54 Solna Svezia Prodotto in Svezia Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Francia Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 E mail cepheid cepheideurope fr C ivo 102 301 0190 Rev C February 2012 Portugu s Apenas para utiliza o em diagn stico in vitro Nome patenteado Xpert MRSA SA SSTI Nome comum ou usual Ensaio MRSA SA SSTI Utilizac o prevista O ensaio de infec o da pele e tecidos moles Xpert MRSA SA da Cepheid Ensaio Xpert MRSA SA SSTT efectuado no sistema GeneXpert Dx um teste de diagn stico in vitro qualitativo concebido para a detec o r pida de Staphylococcus aureus SA e de Staphylococcus aureus resistentes meticilina MRSA a partir de zaragatoas de infec o da pele e tecidos moles O teste utiliza a re
16. Id de muestra Centro 1 Centro 2 Centro 3 Correspondencia total Neg MSSE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 SA Pos Moderado 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 MRSA1 Pos Moderado 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 MRSA2 Pos Moderado 100 20 20 100 20 20 95 19 20 98 3 59 60 de correspondencia total por centro 100 80 80 100 80 80 98 8 79 80 99 6 239 240 110X LoD 301 0190 Rev C February 2012 79 Espa ol Tabla 13 Resumen de resultados de valores de Uc por nivel de muestra y sonda oo 0 CPM Nivel Media Desv est ndar CV MRSA1 Pos Moderado 35 72 1 87 5 24 MRSA2 Pos Moderado 36 29 2 66 7 34 SA Pos Moderado 34 55 1 19 3 44 NEG 34 45 1 06 3 09 Spa Nivel Media Desv est ndar CV MRSA1 Pos Moderado 29 52 1 30 4 40 MRSA2 Pos Moderado 28 91 1 03 3 57 SA Pos Moderado 30 59 0 91 2 99 mecA Nivel Media Desv est ndar CV MRSA1 Pos Moderado 29 78 1 28 4 29 MRSA2 Pos Moderado 29 32 1 24 4 22 SCCmec Nivel Media Desv est ndar CV MRSA1 Pos Moderado 31 49 1 26 3 99 MRSA2 Pos Moderado 31 05 1 12 3 59 301 0190 Rev C February 2012 Bibliografia Bibliograf a 1 Bannerman TL 2003 Cap tulo 28 Staphylococcus Micrococcus and Other Catalase Positive Cocci that Grow Aerobically Manual of clinical microbiology 8 ed ASM Press Washington DC P ginas
17. Le test Xpert MRSA SA SSTI peut d tecter l ADN de SARM et ou de SA partir d organismes non viables Les s quences d ADN cible de SARM sont d tect es la s quence d ADN cible de SA est d tect e e MRSA POSITIVE SARM POSITIF toutes les cibles du SARM spa mecA et SCCmec pr sentent un seuil de cycle Ct compris dans la gamme valide et la valeur finale se situe au dessus de la valeur finale minimale requise SPC CTE NA sans objet le CTE est ignor parce que l amplification SARM peut s opposer ce contr le Probe Check PASS Contr le de la sonde r ussi tous les r sultats du contr le de la sonde sont r ussis 301 0190 Rev C February 2012 27 Fran ais MRSA NEGATIVE SA POSITIVE SARM N GATIF SA POSITIF Le test Xpert MRSA SA SSTI peut d tecter PADN de SARM et ou de SA partir d organismes non viables Les s quences d ADN cible de SARM ne sont pas d tect es la s quence d ADN cible de SA est d tect e SA POSITIVE SA POSITIF la cible du SA spa pr sente un Ct compris dans la gamme valide et sa valeur finale se situe au dessus de la valeur minimale LADN cible pour le SCC mec nest pas d tect l ADN cible pour le mecA peut tre d tect ou non ou l ADN cible pour le SCC mec est d tect et l ADN cible pour le mecA nest pas d tect cassette vide SPC CTE NA sans objet le CTE est ignor parce que Pamplification SA peut s opposer ce contr le Probe C
18. Manual of clinical microbiology 8e d ASM Press Washington DC Pages 384 404 Mainous AG Hueston WJ Everett et al 2006 Nasal Carriage of Staphylococcus aureus and Methicillin Resistant S aureus in the United States 2001 2002 An Family Medicine 4 2 132 137 National Nosocomial Infections Surveillance NNIS System Report data summary from January 1992 through June 2004 issued October 2004 Am J Infect Control 2004 32 470 85 Chaix C Durand Zileski I Alberti C Buisson B 1999 Control of Endemic Methicillin Resistant Staphylococcus aureus JAMA 282 19 1745 51 Shopsin B Kreiswirth BN 2001 Molecular Epidemiology of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus Emerging Infectious Diseases 7 2 323 6 Salgado CD etal 2003 Community Acquired Methicillin Resistant Staphylococcus aureus A Meta analysis of Prevalence and Risk Factors CID 36 131 Donnio P Y F vrier F Bifani P et al 2007 Molecular and epidemiological evidence for the spread of multiresistant methicillin susceptible Staphylococcus aureus strains in hospitals Antimicrobial Agents Chemother 51 4342 4350 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 301 0190 Rev C February 2012 Assistance 9 Clinical and Laboratory Standards Institute anciennement National Committee for Clinical Laboratory Standards Pro
19. Xpert MRSA SA SSTI Testkartusche geben 6 Den Kartuschendeckel schlie en Abbildung 1 Xpert MRSA SA SSTI Testkartusche Draufsicht Testbeginn Wichtig Vor Beginn des Tests ist sicherzustellen dass die Definition der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung in die Software importiert wurde In diesem Abschnitt werden die Grundschritte der Testausf hrung beschrieben F r genauere Anweisungen das Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System verwenden 1 Schalten Sie das GeneXpert Dx System ein und anschlie end den Computer Die GeneXpert Software startet automatisch 2 Mit Ihrem Benutzernamen und Kennwort bei der GeneXpert Dx Systemsoftware anmelden 3 Im Fenster GeneXpert Dx System auf Create Test Test erstellen klicken Daraufhin wird das Dialogfeld zum Scan Cartridge Barcode Scannen des Kartuschen Barcodes angezeigt 4 Den Barcode auf der Xpert MRSA SA SSTI Testkartusche einscannen Das Fenster Create Test Test erstellen wird ge ffnet Mithilfe der Barcode Informationen gibt die Software automatisch die Daten in die folgenden Felder ein Select Assay Untersuchung ausw hlen Reagent Lot ID Reagenzienchargen ID Cartridge SN Testkartuschen SN und Expiration Date Verfallsdatum 5 Die Sample ID Proben ID in das Feld einscannen oder tippen Auf die Eingabe der korrekten Proben ID achten Die Proben ID h ngt mit den Testergebnissen zusammen und wird im Fenster View Results Ergebnisse anzeigen und in allen Berichten angez
20. a integridade da sonda e a estabilidade do corante Os primers e as sondas presentes no ensaio Xpert MRSA SA SSTI detectam sequ ncias patenteadas da prote na estafiloc cica A spa o gene da resist ncia meticilina necA e a cassete no cromossoma estafiloc cico SCC mec inserida no local cromossom tico attB do SA 301 0190 Rev C February 2012 103 Portugu s Reagentes e instrumentos Material fornecido O kit do ensaio Xpert MRSA SA SSTI cont m reagentes suficientes para processar 10 amostras biol gicas ou amostras de controlo da qualidade O kit cont m os seguintes itens Cartuchos do ensaio Xpert MRSA SA SSTI com tubos de reac o integrados 10 Esferas 1 2 e 3 liofilizadas 1 por cartucho Reagente 1 do ensaio Xpert MRSA SA SSTI 2 8 ml por cartucho Reagente 2 do ensaio Xpert MRSA SA SSTI 3 2 ml por cartucho Reagente de elui o do ensaio Xpert MRSA SA SSTI 10 Reagente de eluic o tiocianato de guanidina 1 x 2 0 ml por bolsa CD 1 por kit Ficheiro de defini o de ensaio ADF Instru es para importar ADF em sistema GX Instru es Notas As Fichas de Dados de Seguran a SDS est o dispon veis em www cepheid com tests and reagents literature msds ou www cepheidinternational com tests and reagents literature msds A albumina s rica bovina BSA bovine serum albumin presente nas esferas foi produzida exclusivamente a partir de plasma bovino proveniente dos EUA O fabrico da BSA tamb m decor
21. consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx Control de calidad Controles de calidad integrados Cada prueba incluye un Control de procesamiento de muestras CPM o BG3 en la pantalla de visualizaci n de resultados para el usuario administrador y un Control de comprobaci n de sonda PCC Sample processing control SPC Control de procesamiento de muestras CPM Garantiza que la muestra se ha procesado correctamente El CPM contiene esporas de Bacillus globigii en forma de pastel de espora seca que se incluye en cada cartucho para comprobar el adecuado procesamiento de la muestra del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI El CPM comprueba si se ha producido la lisis de Staphylococcus aureus en caso de haber organismos y comprueba si el procesamiento de la muestra es correcto Adicionalmente este control detecta la inhibici n asociada a la muestra del ensayo de RCP en tiempo real garantiza que las condiciones de la reacci n de RCP temperatura y tiempo sean las adecuadas para la reacci n de amplificaci n y que los reactivos RCP sean funcionales El CPM debe ser positivo en una muestra negativa y puede ser negativo o positivo en una muestra positiva El CPM es correcto si cumple los criterios de aceptaci n validados Control de comprobaci n de sonda PCC antes de iniciar la reacci n en cadena de la polimerasa el sistema GeneXpert Dx mide la se al de fluorescencia de las sondas para controlar la rehidrataci n de las perlas el l
22. o alimentar miocardite pericardite cerebrite meningite corioamnionite s ndrome da pele queimada e abcessos dos m sculos tracto urogenital sistema nervoso central e de v rios rg os intra abdominais No in cio da d cada de 1950 a aquisi o e dissemina o de plasm deos produtores de beta lactamase diminu ram a efic cia da penicilina no tratamento de infec es por S aureus Em 1959 foi introduzida a meticilina uma penicilina sint tica Contudo em 1960 foram identificadas estirpes de S aureus resistentes meticilina Determinou se que esta situa o resultava da aquisi o pelo S aureus do gene mecA Actualmente nos EUA o MRSA respons vel por cerca de 25 das infec es nosocomiais tendo vindo a aumentar o n mero de participa es de casos de MRSA adquiridos na comunidade resultando em morbilidade e mortalidade significativas Foram registadas 33 e 16 de mortalidades atribu veis s bacteriemias causadas por MRSA e S aureus SA sens vel meticilina respectivamente Tamb m existem preocupa es relativamente ao aumento dos custos associados s infec es por MRSA Numa tentativa de limitar a propaga o destas infec es est o a ser desenvolvidas e implementadas estrat gias e pol ticas de controlo nas unidades de cuidados de sa de O controlo do MRSA um objectivo principal da maioria dos programas de controlo de infec es hospitalares Actualmente o m todo padr o para detectar MRSA e SA
23. 240 tests Tableau 12 Resume des r sultats de reproductibilite ID de l chantillon Site 1 Site 2 Site 3 Accord total N g SERM 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Pos mod r SA 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Pos mod r SARM1 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Pos mod r SARM2 100 20 20 100 20 20 95 19 20 98 3 59 60 accord total par site 100 80 80 100 80 80 98 8 79 80 99 6 239 240 110X LDD 301 0190 Rev C February 2012 37 Fran ais Tableau 13 R sum des r sultats de valeur Ct par sonde et niveau d chantillon CTE Niveau Moyenne carttype CV Pos mod r SARM1 35 72 1 87 5 24 Pos mod r SARM2 36 29 2 66 7 34 Pos mod r SA 34 55 1 19 3 44 N G 34 45 1 06 3 09 Spa Niveau Moyenne cart type CV Pos mod r SARM1 29 52 1 30 4 40 Pos mod r SARM2 28 91 1 03 3 57 Pos mod r SA 30 59 0 91 2 99 mecA Niveau Moyenne cart type CV Pos mod r SARM1 29 78 1 28 4 29 Pos mod r SARM2 29 32 1 24 4 22 SCCmec Niveau Moyenne cart type CV Pos mod r SARM1 31 49 1 26 3 99 Pos mod r SARM2 31 05 1 12 3 59 R f rences 1 Bannerman TL 2003 Chapter 28 Staphylococcus Micrococcus and Other Catalase Positive Cocci that Grow Aerobically D gt SA Si w
24. 3 der 5 Mischinfektionen als MRSA positiv und 2 der 5 F lle als SA positiv MRSA negativ INVALID UNG LTIG Es kann nicht ermittelt werden ob MRSA SA Ziel DNA Sequenzen vorhanden sind oder nicht Test gem den Anweisungen im Abschnitt weiter unten wiederholen Die SPC erf llt die Akzeptanzkriterien nicht die Probe wurde nicht ordnungsgem verarbeitet oder die PCR war gehemmt INVALID UNG LTIG Es kann nicht ermittelt werden ob Staphylococcus aureus DNA vorhanden ist oder nicht SPC FAIL NICHT BESTANDEN Das SPC Zielergebnis ist negativ der Grenzwert der SPC liegt nicht innerhalb des g ltigen Bereichs und der Endpunkt liegt unterhalb der Mindesteinstellung Sondenpr fung PASS BESTANDEN alle Sondenpr fungen wurden bestanden ERROR FEHLER Es kann nicht ermittelt werden ob MRSA SA Ziel DNA Sequenzen vorhanden sind oder nicht Test gem den Anweisungen im Abschnitt weiter unten wiederholen Der Sondentest ist wahrscheinlich bedingt dadurch fehlgeschlagen dass das Reaktionsgef unsachgem bef llt wurde oder dadurch dass der Maximaldruck berschritten wurde MRSA NO RESULT KEIN ERGEBNIS SA NO RESULT KEIN ERGEBNIS SPC NO RESULT KEIN ERGEBNIS Sondenpr fung FAIL NICHT BESTANDEN mindestens eine Sonde hat die Pr fung nicht bestanden Wenn der Sondentest bestanden wurde wurde der Fehler durch den Ausfall einer Systemkomponente verursacht NO RESULT KEIN
25. 384 404 2 Mainous AG Hueston WJ Everett et al 2006 Nasal Carriage of Staphylococcus aureus and Methicillin Resistant S aureus in the United States 2001 2002 An Family Medicine 4 2 132 137 3 National Nosocomial Infections Surveillance NNIS System Report resumen de datos de enero de 1992 a junio de 2004 publicado en octubre de 2004 Am J Infect Control 2004 32 470 85 4 Chaix C Durand Zileski I Alberti C Buisson B 1999 Control of Endemic Methicillin Resistant Staphylococcus aureus JAMA 282 19 1745 51 5 Shopsin B Kreiswirth BN 2001 Molecular Epidemiology of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus Emerging Infectious Diseases 7 2 323 6 6 Salgado CD et al 2003 Community Acquired Methicillin Resistant Staphylococcus aureus A Meta analysis of Prevalence and Risk Factors CID 36 131 7 Donnio P Y F vrier F Bifani P et al 2007 Molecular and epidemiological evidence for the spread of multiresistant methicillin susceptible Staphylococcus aureus strains in hospitals Antimicrobial Agents Chemother 51 4342 4350 8 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY y McKinney RW eds 1993 HHS N mero de publicaci n CDC 93 8395 9 Instituto de Est ndares Cl nicos y de Laboratorio anteriormente denominado Comit Nacional de Est ndares Cl nicos y de Laboratorio Protection of laboratory workers from occupationally acquired in
26. 43 sono stati selezionati per rappresentare ampiamente la gamma di diversit genetica riscontrata nella specie Staphylococcus aureus e basata sulla struttura filogenetica Le selezioni rappresentano le stirpi primarie con enfasi sui complessi clonali specifici nei quali LMRSA stato osservato in misura maggiore Sono state incluse le stirpi contenenti MRSA e SA cos come quelle contenenti solo SA Il saggio Xpert MRSA SA SSTI ha identificato correttamente 116 ceppi su 121 I 5 ceppi discordanti erano caratterizzati da catalisi coagulasi in provetta e colorazioni di Gram La resistenza alloxicillina mediata da MecA stata valutata mediante disco diffusione utilizzando un disco di cefoxitina di 30 ug e un cutoff di diametro di 21 22 mm Tre 3 dei 78 ceppi di MRSA sono risultati MRSA negativi SA positivi con Putilizzo del saggio MRSA SA SSTI Lulteriore caratterizzazione indica che tali ceppi non sono resistenti e sono quindi stati correttamente identificati come MRSA negativi SA positivi Due 2 dei 43 ceppi di SA sono risultati MRSA positivi SA positivi con Putilizzo del saggio MRSA SA SSTI Lulteriore caratterizzazione indica che tali ceppi sono resistenti e sono quindi stati correttamente identificati come MRSA positivi SA positivi Ognuno dei 12 isolati noti di USA300 stato correttamente identificato come MRSA positivo e SA positivo come da previsioni Valutazione delle varianti a cassetta vuota Ventidue 22 isolati di Staphylococ
27. 55 1675 1683 16 Ribeiro J et al Misclassification of Susceptible Strains of Staphylococcus aureus as Methicillin Resistant aureus by a rapid Automated Susceptibility Testing System 1999 37 1619 1620 Assistance For assistance contact Cepheid using one of the following contact details Make sure you provide the instrument serial number and reagent lot ID when you call or email European Union For technical support use the following contact details Tel 33 563 82 53 19 Email techsupport cepheideurope fr Other Locations Contact your local Cepheid representative 301 0190 Rev C February 2012 19 English Table of Symbols Symbol Meaning Catalog number In vitro diagnostic medical device Do not reuse e El El Batch code o Caution consult accompanying documents Manufacturer Contains sufficient for lt n gt tests Expiration date CONTROL Control le R i ea lt E gt Authorized representative in the European Community CN m CE marking European Conformity Temperature limitation ws Biological risks Cepheid AB R ntgenv gen 5 SE 171 54 Solna Sweden Product of Sweden Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Email cepheid cepheideurope fr C vo 20 301 0190 Rev C February 2012 Fran ais Pour une utilisation de diagn
28. 87 5 24 MRSA2 Mittel Pos 36 29 2 66 7 34 SA Mittel Pos 34 55 1 19 3 44 NEG 34 45 1 06 3 09 Spa Stufe Mittelwert Std abw CV MRSA1 Mittel Pos 29 52 1 30 4 40 MRSA2 Mittel Pos 28 91 1 03 3 57 SA Mittel Pos 30 59 0 91 2 99 mecA Stufe Mittelwert Std abw CV MRSA1 Mittel Pos 29 78 1 28 4 29 MRSA2 Mittel Pos 29 32 1 24 4 22 SCCmec Stufe Mittelwert Std abw CV MRSA1 Mittel Pos 31 49 1 26 3 99 MRSA2 Mittel Pos 31 05 1 12 3 59 Quellenangaben Quellenangaben Bannerman TL 2003 Kapitel 28 Staphylococcus Micrococcus and Other Catalase Positive Cocci that Grow Aerobically Manual of clinical microbiology 8th ed ASM Press Washington DC Seite 384 404 pa D Mainous AG Hueston WJ Everett et al 2006 Nasal Carriage of Staphylococcus aureus and Methicillin Resistant aureus in the United States 2001 2002 An Family Medicine 4 2 132 137 w National Nosocomial Infections Surveillance NNIS System Report data summary from January 1992 through June 2004 issued October 2004 Am J Infect Control 2004 32 470 85 Chaix C Durand Zileski I Alberti C Buisson B 1999 Control of Endemic Methicillin Resistant Staphylococcus aureus JAMA 282 19 1745 51 gt 5 Shopsin B Kreiswirth BN 2001 Molecular Epidemiology of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus Emerging Infectious Diseases 7 2 323 6 6 Salgado CD et al 2003 Community Acquired Methicillin Resistant Staphylococcus aureus A Meta analysis of Preval
29. Assay was used at each of the 3 testing sites Xpert MRSA SA SSTI assays were performed according to the Xpert MRSA SA SSTI Assay procedure The correct results were obtained in 239 of 240 tests Table 12 Summary of Reproducibility Results Specimen ID Site 1 Site 2 Site 3 Total Agreement Neg MSSE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 SA Moderate Pos 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 MRSA1 Moderate Pos 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 MRSA2 Moderate Pos 100 20 20 100 20 20 95 19 20 98 3 59 60 Total Agreement by Site 100 80 80 100 80 80 98 8 79 80 99 6 239 240 110X LoD 301 0190 Rev C February 2012 17 English Table 13 Summary of Ct Value Results by Sample Level and Probe SPC Level Mean Std Dev CV MRSA1 Moderate Pos 35 72 1 87 5 24 MRSA2 Moderate Pos 36 29 2 66 7 34 SA Moderate Pos 34 55 1 19 3 44 NEG 34 45 1 06 3 09 Spa Level Mean Std Dev CV MRSA1 Moderate Pos 29 52 1 30 4 40 MRSA2 Moderate Pos 28 91 1 03 3 57 SA Moderate Pos 30 59 0 91 2 99 mecA Level Mean Std Dev CV MRSA1 Moderate Pos 29 78 1 28 4 29 MRSA2 Moderate Pos 29 32 1 24 4 22 SCCmec Level Mean Std Dev CV MRSA1 Moderate Pos 31 49 1 26 3 99 MRSA2 Moderate Pos 31 05 1 12 3 59 301 0190 Rev C February 2012 References References 1 Bannerman TL 2003 Chapte
30. ERGEBNIS Es kann nicht ermittelt werden ob MRSA SA Ziel DNA Sequenzen vorhanden sind oder nicht Test gem den Anweisungen im Abschnitt weiter unten wiederholen Die erfassten Daten reichen f r ein Testergebnis nicht aus Das ist beispielsweise der Fall wenn der Bediener den Test abgebrochen hat bevor er abgeschlossen war MRSA NO RESULT KEIN ERGEBNIS SA NO RESULT KEIN ERGEBNIS SPC NO RESULT KEIN ERGEBNIS Sondenpr fung NA keine Angaben 48 301 0190 Rev C February 2012 Griinde fiir eine Wiederholung des Tests Griinde fiir eine Wiederholung des Tests Den Test mit einer neuen Kartusche Gebrauchte Kartuschen nicht erneut verwenden und neuen Reagenzien wiederholen Der Wiederholungstest ist innerhalb von 3 Stunden nach Erhalt des unbestimmten Ergebnisses durchzuf hren Das Ergebnis INVALID UNG LTIG weist darauf hin dass die SPC Kontrolle fehlgeschlagen ist Die Probe wurde nicht ordnungsgem verarbeitet oder die PCR war gehemmt Das Ergebnis ERROR FEHLER weist darauf hin dass die Sondenpr fungskontrolle fehlgeschlagen ist und dass der Test abgebrochen wurde und zwar wahrscheinlich bedingt dadurch dass das Reaktionsgef unsachgem bef llt ein Problem mit der Sondenintegrit t festgestellt oder der Maximaldruck berschritten wurde Das Ergebnis NO RESULT KEIN ERGEBNIS weist darauf hin dass nicht gen gend Daten erfasst wurden Beispielsweise hat der Bediener den Test abgeb
31. MRSA 44 2 10 56 PR 3 SA MRSA 3 31 19 53 SA 3 1 94 98 Total 50 34 123 207 Porcentaje de correspondencia positiva MRSA 88 0 95 Intervalo de confianza 75 7 95 5 Porcentaje de correspondencia negativa MRSA 92 4 95 Intervalo de confianza 87 0 96 0 Porcentaje de correspondencia positiva SA MRSA 95 2 95 Intervalo de confianza 88 3 98 7 Porcentaje de correspondencia negativa SA MRSA 76 4 95 Intervalo de confianza 67 9 83 6 En los sujetos en los que se conoce el uso de antibi ticos 3 semanas antes de la recogida de la muestra el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI identific un 88 0 de muestras positivas para MRSA y un 92 4 de muestras negativas para MRSA con respecto al m todo de cultivo de referencia y un 95 2 de muestras positivas para SA y un 76 4 de muestras negativas para SA con respecto al m todo de cultivo de referencia De estos sujetos en los que se conoc a el uso de antibi ticos el 96 1 199 207 de las pruebas aptas arroj un resultado correcto en el primer Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Los 8 restantes arrojaron resultados indeterminados en el primer intento 5 INVALID y 3 ERROR De los 8 resultados indeterminados en el primer intento todos dieron resultados en el segundo intento Variantes de casete vac o Para que una cepa sea identificada como MRSA positiva con el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI la prueba de spa debe ser positiva as como la de mecA
32. MRSA SA SSTI puede detectar ADN de MRSA y o SA de organismos no viables La probabilidad de que esto ocurre aumenta en los pacientes que est n tomando antibi ticos En el estudio cl nico pivotal la tasa de falsos positivos con relaci n al cultivo en las pruebas de detecci n de SA en pacientes que usaban antibi ticos realizadas en las 3 semanas anteriores a la prueba Xpert MRSA SA fue del 13 8 La tasa de falsos positivos con relaci n al cultivo en las pruebas detecci n de MRSA en pacientes que usaban antibi ticos realizadas en las 3 semanas anteriores a la prueba Xpert MRSA SA fue del 9 5 Un resultado de prueba positivo no indica necesariamente la presencia de organismos viables No obstante se puede suponer la presencia de MRSA o SA La prueba del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI debe usarse como complemento a otros m todos disponibles Se pueden obtener resultados err neos debido a una recogida de muestras incorrecta si no se sigue el procedimiento de recogida los procedimientos de manipulaci n o almacenamiento de muestras recomendados en caso de error t cnico mezcla de la muestra o debido a que el n mero de organismos es demasiado reducido como para que la prueba lo detecte El estricto cumplimiento de las instrucciones del embalaje es necesario para evitar resultados err neos Debido a que la detecci n de MRSA y SA depende del n mero de organismos presentes en la muestra los resultados fiables dependen de la recogida manipu
33. MRSA Stamm ID Typ PFGE LoD 95 CI 95 CI CFU Abstrich 64 4176 I USA500 221 195 271 N315 Il USA100 122 106 152 11373 Ill unbekannt 124 115 155 MW2 IVa USA400 82 68 113 ST59 MRSA V V USA1000 242 208 305 HDE288 VI USA800 183 161 223 Die Ergebnisse dieser Studie weisen darauf hin dass die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung in 95 der Falle ein positives SA Ergebnis mit einer Konfidenz von 95 f r einen Wundabstrich mit 150 CFU und in 95 der F lle ein positives MRSA Ergebnis mit einer Konfidenz von 95 f r einen Wundabstrich mit 300 CFU erzielt Einhunderteinundzwanzig 121 weitere Staphylococcus aureus St mme wurden mit der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung getestet Uber Nacht wurden Kulturen in BHI Medium Brain Heart Infusion gez chtet und auf 0 5 McFarland Einheiten eingestellt Alle St mme wurden unter Verwendung von 100 ul Kultur die 100 000 bis 1 000 000 fach verd nnt wurde dreifach getestet MRSA 78 und SA St mme 43 wurden ausgew hlt um weitgehend den Bereich genetischer Diversit t zu repr sentieren der bei der Spezies Staphylococcus aureus aufgrund der phylogenetischen Struktur angetroffen wird Die ausgew hlten St mme stellen Prim rlinien dar wobei das Augenmerk auf spezifischen klonalen Komplexen liegt in denen MRSA h ufig festgestellt wird Linien die MRSA und SA enthielten und solche die ausschlie lich SA enthielten wurden einbezogen Die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung erkannte 116 der 121 St
34. National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition 10 Ewig S Schlochtermeier M Goke N et al 2002 Applying sputum as a diagnostic tool in pneumonia limited yield minimal impact on treatment decisions Chest 121 1486 1492 11 RG Dotson and SK Pingleton 1993 The effect of antibiotic therapy on recovery of intracellular bacteria from bronchoalveolar lavage in suspected ventilator associated nosocomial pneumonia Chest 103 541 546 12 Souweine B Veber B Bedos JP et al 1998 Diagnostic accuracy of protected specimen brush and bronchoalveolar lavage in nosocomial pneumonia impact of previous antimicrobial treatments Crit Care Med Feb 26 2 236 244 13 Kanegaye JT Soliemanzadeh P Bradley JS et al 2001 Lumbar puncture in pediatric bacterial meningitis defining the time interval for recovery of cerebrospinal fluid pathogens after parenteral antibiotic pretreatment Pediatrics 108 5 1169 1174 14 Brook I Gober A 2005 Effects of amoxicillin and cefdinir on nasopharyngeal bacterial flora Arch Otolaryngol Head Neck Surg Sep 131 785 787 15 Nadarajah J et al Identification of different clonal complexes and diverse amino acid substitutions in penicillin binding protein 2 PBP2 associated with borderline oxacillin resistance in Canadian Staphylococcus aureus isolates J of Med Micro 2006
35. Reagente di eluizione tiocianato di guanidinio 1x 2 0 ml per busta CD 1 per kit File di Definizione del Saggio ADF Istruzioni per importare ADF in sistema GX Foglietto illustrativo Notas Le schede dati di sicurezza SDS sono disponibili nei siti www cepheid com tests and reagents literature msds o www cepheidinternational com tests and reagents literature msds Lalbumina di siero bovino BSA nelle microsfere di questo prodotto stata prodotta esclusivamente da plasma bovino di origine statunitense Anche la produzione della BSA viene eseguita negli Stati Uniti Gli animali non sono stati nutriti con proteine bovine o altre proteine animali gli animali hanno superato i test ante mortem e post mortem Durante l elaborazione il materiale non stato miscelato con altro materiale animale Conservazione e manipolazione Conservare le cartucce e i reagenti del saggio Xpert MRSA SA SSTI a una temperatura di 2 28 C Non utilizzare reagenti o cartucce oltre la data di scadenza Non aprire una cartuccia finch non si pronti per eseguire l analisi Utilizzare la cartuccia e i reagenti entro 30 minuti dall apertura del coperchio della cartuccia Non utilizzare reagenti diventati torbidi o che presentino una colorazione alterata Materiali necessari ma non forniti GeneXpert Dx System il numero di catalogo varia in base alla configurazione Strumento GeneXpert computer lettore di codici a barre a penna e manua
36. Staphylococcus aureus strains in hospitals Antimicrobial Agents Chemother 51 4342 4350 8 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 9 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refere se edi o mais recente 10 Ewig S Schlochtermeier M G ke N et al 2002 Applying sputum as a diagnostic tool in pneumonia limited yield minimal impact on treatment decisions Chest 121 1486 1492 11 RG Dotson and SK Pingleton 1993 The effect of antibiotic therapy on recovery of intracellular bacteria from bronchoalveolar lavage in suspected ventilator associated nosocomial pneumonia Chest 103 541 546 12 Souweine B Veber B Bedos JP et al 1998 Diagnostic accuracy of protected specimen brush and bronchoalveolar lavage in nosocomial pneumonia impact of previous antimicrobial treatments Crit Care Med Feb 26 2 236 244 13 Kanegaye JT Soliemanzadeh P Bradley JS et al 2001 Lumbar puncture in pediatric bacterial meningitis defining the time interval for recovery of cerebrospinal fluid pathogens after parenteral antibiotic pretreatment Pediatrics 108 5 1169 1174 14 Brook I Gober A 2005 Effects of amoxicillin and
37. animal Almacenamiento y manipulaci n Conserve los cartuchos y reactivos del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI a 2 28 C No utilice reactivos o cartuchos despu s de la fecha de caducidad indicada No abra un cartucho hasta que est preparado para realizar la prueba Utilice el cartucho y los reactivos antes de que transcurran 30 minutos despu s de abrir la tapa del cartucho No utilice los reactivos si observa que est n turbios o se han decolorado Material necesario no suministrado Sistema GeneXpert Dx el n mero de referencia var a seg n la configuraci n Instrumento GeneXpert ordenador lector manual de c digos de barras y Manual del operador Impresora consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx para conocer las indicaciones sobre compatibilidad Dispositivo de recogida de muestras de Cepheid 900 0370 o equivalente Copan Mezclador Vortex Pipetas de transferencia desechables Gasa est ril Materiales disponibles pero no suministrados KWIK STIKs de MicroBiologics n de referencia 0158MRSA y n de referencia 0360SA como controles positivos y n referencia 0371MSSE Staphylococcus epidermidis sensible a la meticilina como control negativo 64 301 0190 Rev C February 2012 Advertencias y precauciones Advertencias y precauciones A Trate todas las muestras biol gicas incluidos los cartuchos usados como posibles agentes transmisores de infecciones Al ser con frecuencia imposible saber
38. cartuchos GeneXpert de utiliza o nica e aut nomos impedem a contamina o por carry over durante o ensaio de amostras negativas ap s a presen a de amostras altamente positivas no mesmo m dulo GeneXpert O estudo consistiu no processamento de uma amostra negativa no mesmo m dulo GeneXpert imediatamente ap s o processamento de uma amostra altamente positiva para MRSA aproximadamente 107 UFC teste Este procedimento foi repetido 20 vezes entre 2 m dulos GeneXpert num total de 42 testes N o se verificaram evid ncias de contamina o por carry over Todas as 21 amostras positivas foram correctamente reportadas como sendo positivas para MRSA positivas para SA Todas as 21 amostras negativas foram correctamente reportadas como sendo negativas para MRSA negativas para SA Reprodutibilidade Um painel de 10 amostras com concentra es vari veis de SA MRSA e Staphylococcus epidermidis negativo foi testado em duplicado em 10 dias diferentes em cada um dos tr s locais 10 amostras x 2 vezes dia x 10 dias x 3 locais Foi utilizado um lote do kit Xpert MRSA SA em cada um dos 3 locais de teste Os ensaios Xpert MRSA SA foram realizados de acordo com o procedimento do ensaio Xpert MRSA SA SSTI Tabela 10 Resumo dos resultados da reprodutibilidade ID da amostra Local 1 Local 2 Local 3 Concord ncia total Neg MSSE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Neg forte p SA 100 20 20 1
39. consiste na cultura a qual bastante laboriosa e pode necessitar de v rios dias para gerar um resultado definitivo 234567 Princ pio do procedimento O sistema GeneXpert Dx automatiza e integra a purifica o das amostras a amplifica o dos cidos nucleicos e a detec o das sequ ncias alvo em amostras simples ou complexas utilizando ensaios de PCR em tempo real O sistema composto por um instrumento um computador e software pr instalado para efectuar testes e visualizar os resultados O sistema requer a utiliza o de cartuchos descart veis de utiliza o nica que cont m os reagentes de PCR e onde decorre o processo de PCR Como os cartuchos s o aut nomos a contamina o cruzada entre amostras minimizada Para uma descri o completa do sistema consulte o Manual do utilizador do sistema GeneXpert Dx O ensaio Xpert MRSA SA SSTI inclui reagentes para a detec o de MRSA e SA assim como um controlo de processamento da amostra SPC do ingl s sample processing control para controlar o processamento adequado das bact rias alvo e para monitorizar a presen a de inibidor es da reac o de PCR O SPC tamb m assegura que as condi es da reac o de PCR temperatura e tempo s o adequadas para a reac o de amplifica o e que os reagentes da PCR est o funcionais O controlo de verifica o da sonda PCC do ingl s Probe Check Control verifica a reidrata o dos reagentes o enchimento do tubo de PCR no cartucho
40. de detec o Foram realizados estudos para determinar os intervalos de confian a de 95 para o limite de detec o anal tico LoD de c lulas de Staphylococcus aureus SA e de c lulas de Staphylococcus aureus resistentes meticilina MRSA dilu das numa matriz de substituto de ferida de origem humana matriz de substituto de ferida consistia num concentrado de gl bulos brancos preparado a partir de sangue total por centrifuga o A matriz tamb m continha gl bulos vermelhos e plasma bem como uma quantidade insignificante de anticoagulante CPD ou CPDA 1 O limite de detec o definido como o menor n mero de unidades formadoras de col nias UFC por amostra que pode ser distinguido com reprodutibilidade das amostras negativas com 95 de confian a ou a concentra o mais baixa na qual 19 ou 20 r plicas s o positivas Em termos de MRSA foram avaliadas r plicas de 20 em cada concentra o testada de MRSA UFC zaragatoa para 6 isolados individuais representando SCC mec dos tipos I II III IVa V e VI Quando caracterizadas atrav s de electroforese em gel de campo pulsado PFGE do ingl s pulsed field gel electrophoresis a USA100 a estirpe adquirida com maior frequ ncia nas unidades de cuidados de sa de bem como a USA400 uma das estirpes adquiridas com maior frequ ncia na comunidade estavam representadas Em termos de SA foram avaliadas r plicas de 20 em cada concentra o de SA UFC zaragatoa para 3
41. dei campioni negativi per MRSA rispetto al metodo della coltura di riferimento quindi il 96 9 dei campioni positivi per SA e 88 3 dei campioni negativi per SA rispetto al metodo della coltura di riferimento Tra tali soggetti con utilizzo di antibiotici sconosciuto per il 97 0 194 200 il saggio Xpert MRSA SA SSTI riuscito al primo tentativo I restanti 6 hanno generato risultati incerti al primo tentativo 2 INVALID Non valido 3 ERROR Errore e 1 NO RESULT Nessun risultato I 6 incerti al primo tentativo hanno tutti fornito un risultato al secondo tentativo Tabella 6 Prestazioni MRSA SA in soggetti con utilizzo conosciuto di antibiotici nelle 3 settimane dalla raccolta del campione rispetto alla Coltura di riferimento Coltura MRSA SA MRSA Neg Crescita Totale assente MRSA 44 2 10 56 FR 3 SA MRSA 3 31 19 53 SA 3 1 94 98 Totale 50 34 123 207 Concordanza percentuale positiva MRSA 88 0 Intervallo di confidenza 95 75 7 95 5 Concordanza percentuale negativa MRSA 92 4 Intervallo di confidenza 95 87 0 96 0 Concordanza percentuale positiva SA MRSA 95 2 Intervallo di confidenza 95 88 3 98 7 Concordanza percentuale negativa SA MRSA 76 4 Intervallo di confidenza 95 67 9 83 6 Tra i soggetti con utilizzo di antibiotici conosciuto nelle 3 settimane precedenti la raccolta del campione il saggio Xpert MRSA SA SSTI ha iden
42. em Create Test Criar teste Surge a caixa de di logo Scan Cartridge Barcode Ler c digo de barras do cartucho 4 Leia o c digo de barras do cartucho do ensaio Xpert MRSA SA SSTI Surge a janela Create Test Criar teste Utilizando as informa es do c digo de barras o software vai preencher automaticamente as caixas dos campos seguintes Select Assay Seleccionar ensaio Reagent Lot ID ID do lote de reagente Cartridge SN N s rie do cartucho e Expiration Date Prazo de validade 5 Na caixa Sample ID ID da amostra leia ou introduza a ID da amostra Certifique se de que introduz a ID da amostra correcta A ID da amostra est associada aos resultados do teste e apresentada na janela View Results Ver resultados e em todos os relat rios Clique em Start Test Iniciar teste Na caixa de di logo apresentada introduza a sua palavra passe 6 7 Abra a porta do m dulo do instrumento com a luz verde a piscar e coloque o cartucho 8 Feche a porta O teste inicia se e a luz verde p ra de piscar Quando o teste termina a luz desliga se 9 Antes de abrir a porta do m dulo e retirar o cartucho aguarde at o sistema desbloquear a porta 10 Os cartuchos usados devem ser eliminados nos contentores adequados para res duos biol gicos de acordo com as pr ticas padr o da sua institui o 106 301 0190 Rev C February 2012 Controlo de qualidade Visualiza o e impress o dos resultados Para obter instru
43. en trois exemplaires en utilisant 100 ul de cultures dilu es 100 000 un million de fois 301 0190 Rev C February 2012 35 Fran ais Les souches SARM 78 et SA 43 ont t s lectionn es de mani re repr senter toute la diversit g n tique de l esp ce Staphylococcus aureus sur base de leur structure phylog n tique Les s lections repr sentent les lign es principales avec un accent sur les complexes clonaux sp cifiques dans lesquels le SARM est fr quemment observ Des lign es contenant des SARM et des SA ainsi que des SA exclusivement ont t incluses Le test Xpert MRSA SA SSTI a correctement identifi 116 souches sur 121 Les 5 chantillons discordants ont t caract ris s par la catalase la coagulase en tube et la coloration de Gram La r sistance l oxacilline li e au gene MecA a t valu e par diffusion de disque en utilisant un disque de c foxitine de 30 ug et une limite de diam tre de 21 22 mm Trois 3 des 78 souches de SARM ont obtenu des r sultats n gatifs au SARM positifs au SA Paide du test Xpert MRSA SA SSTI Une caract risation suppl mentaire indique que ces souches ne sont pas r sistantes et ont t correctement rapport es comme n gatives au SARM et positives au SA Deux 2 des 43 souches de SA ont obtenu des r sultats positifs au SARM positifs au SA Paide du test Xpert MRSA SA SSTI Une caract risation suppl mentaire indique que ces souches sont r sistantes e
44. eran correctamente clasificadas como MRSA negativas SA positivas Dos 2 de las 43 cepas de SA demostraron ser MRSA positivas SA negativas en el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Caracterizaciones adicionales indican que estas cepas son resistentes y que por tanto eran correctamente clasificadas como MRSA positivas SA negativas Cada una de las 12 cepas de USA300 conocidas aparec an correctamente clasificadas como MRSA positivas SA negativas tal y como se esperaba Evaluaci n de variantes de casete vac o Se analizaron veintid s 22 cepas de Staphylococcus aureus identificadas como variantes de casete vac o utilizando el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Los cultivos se dejaron crecer toda una noche y se ajustaron a 0 5 unidades McFarland Todas las cepas de los cultivos analizados se diluyeron despu s 100 veces alta y 100 000 veces baja El Ensayo Xpert MRSA SA SSTI identific correctamente todas las 22 cepas como MRSA negativas y SA positivas En las dos concentraciones de c lulas analizadas s lo se encontraron Uc de spa y de SCC mec No se detectaron Uc de mecA Estudio de contaminaci n por arrastre Se realiz un estudio para demostrar que los cartuchos independientes de un solo uso GeneXpert evitan la contaminaci n por arrastre en muestras negativas analizadas despu s de muestras altamente positivas en el mismo m dulo GeneXpert El estudio se compuso de una muestra negativa procesada en el mismo m dulo GeneXpert inmedi
45. foram reportadas como sendo negativas para MRSA positivas para SA utilizando o ensaio Xpert MRSA SA SSTI A caracteriza o adicional indica que estas estirpes n o s o resistentes e foram correctamente reportadas como negativas para MRSA e positivas para SA Duas 2 das 43 estirpes de SA foram reportadas como sendo positivas para MRSA positivas para SA utilizando o ensaio Xpert MRSA SA SSTI A caracteriza o adicional indica que estas estirpes s o resistentes e foram correctamente reportadas como positivas para MRSA positivas para SA Cada um dos 12 isolados que se sabia conterem USA300 foi correctamente reportado como sendo positivo para MRSA e positivo para SA conforme previsto Avalia o de variantes de cassete vazia Foram testados vinte e dois 22 isolados de Staphylococcus aureus identificados como variantes de cassete vazia utilizando o ensaio Xpert MRSA SA SSTI As culturas durante a noite foram ajustadas para 0 5 unidades de McFarland Todas as estirpes foram testadas a partir de culturas adicionalmente dilu das 100 vezes elevado e 100 000 vezes baixo O ensaio Xpert MRSA SA SSTI identificou correctamente todos os 22 isolados como sendo negativos para MRSA e positivos para SA Em ambas as concentra es de c lulas testadas apenas foram reportados os Ct para os alvos spa e SCC mec N o foram registados Ct de mecA Estudo de contaminac o por carry over Foi realizado um estudo para demonstrar que os
46. globuli bianchi ottenuto da centrifugazione di sangue intero La matrice conteneva anche globuli rossi e plasma e una quantit trascurabile di anticoagulante CPD o CPDA 1 Il limite di rilevamento definito come il numero pi basso delle unit formanti colonie CFU per campione che possono essere riproducibilmente distinte da campioni negativi con intervallo di confidenza del 95 o con la concentrazione minima alla quale risultano positivi 19 su 20 repliche Per IMRSA repliche di 20 sono state valutate in ciascuna concentrazione di MRSA analizzata CFU tampone per 6 singoli isolati rappresentanti i tipi SCCmec I II 111 IVa V e VI Quando caratterizzati da elettroforesi in campo pulsato PFGE sono stati rappresentati PUSA 100 il ceppo pi comune contratto in strutture sanitarie e PUSA400 uno dei ceppi pi comuni contratto in comunit Per PSA le repliche di 20 sono state valutate su ciascuna concentrazione di SA CFU tampone per 3 singoli isolati di SA Sono stati rappresentati i tipi USA900 ed USA1200 Gli intervalli di stima e confidenza sono stati determinati utilizzando la regressione logistica con dati numero di risultati positivi per numero di repliche a ogni livello su tutta la gamma di CFU tamponi analizzati Gli intervalli di confidenza sono stati determinati utilizzando le stime di probabilit sui parametri di modelli logistici con la matrice varianza covarianza del campione grande Le stime del punto LoD e gli interva
47. i tamponi a2 8 C per analisi fino a 5 giorni Colture microbiologiche Per i metodi di coltura dell SSTT seguire le procedure operative standard di laboratorio in vigore Per le colture i campioni dei tamponi rimasti devono essere posti in sistemi di trasporto adeguati e la coltura allestita entro 4 giorni 301 0190 Rev C February 2012 85 Italiano Procedura Preparazione della cartuccia Importante Avviare l analisi entro 15 minuti dall aggiunta dei reagenti nella cartuccia Per aggiungere il campione e il reagente nella cartuccia de 2 Estrarre la cartuccia e il reagente dalla confezione Rimuovere il tampone marcato dal contenitore di trasporto Nota Utilizzare una garza sterile per ridurre al minimo il rischio di contaminazione durante la manipolazione del campione 3 4 Inserire il tampone nella provetta che contiene il reagente di eluizione e spezzare il tampone Chiudere il coperchio del flacone di eluizione e vortexare ad alta velocit per 10 secondi Aprire il coperchio della cartuccia Utilizzando una pipetta di trasferimento sterile trasferire tutto il contenuto del reagente di eluizione nella camera S della cartuccia del saggio Xpert MRSA SA SSTI Chiudere il coperchio della cartuccia S Campione Figura 1 Cartuccia del saggio Xpert MRSA SA SSTI vista superiore Avvio dell analisi Importante Prima di avviare l analisi accertarsi che il file di definizione del saggio Xpert MRS
48. isolados individuais de SA As estirpes dos tipos USA900 e USA1200 estavam representadas Os intervalos de estimativa e confian a foram determinados utilizando regress o log stica com dados n mero de resultados positivos por n mero de r plicas em cada n vel ao longo do intervalo de UFC zaragatoa testado Os intervalos de confianga foram determinados utilizando estimativas de m xima probabilidade sobre os par metros do modelo log stico utilizando a grande matriz de vari ncia covari ncia da amostra As estimativas do ponto de LoD e os intervalos de confian a de 95 superiores e inferiores para cada tipo de SCCmec de SA e MRSA testado s o resumidos nas tabelas 8 e 9 Tabela 8 Intervalos de confian a de 95 para o LoD anal tico SA Identifica o da PFGE LoD IC de 95 IC de 95 estirpe de SA UFC zaragatoa inferior superior N7129 USA900 51 42 69 102 04 USA1200 87 76 109 29213 desconhecida 123 97 188 Tabela 9 Intervalos de confian a de 95 para o LoD anal tico MRSA Identifica o da Tipo LoD IC de 95 IC de 95 estirpe de MRSA SCCmec PFGE UFC zaragatoa inferior superior 64 4176 l USA500 221 195 271 N315 Il USA100 122 106 152 11373 IN desconhecida 124 115 155 MW2 IVa USA400 82 68 113 ST59 MRSA V V USA1000 242 208 305 HDE288 VI USA800 183 161 223 Os resultados deste estudo indicam que o ensaio Xpert MRSA SA SSTI produzir um resultado positivo em termos de SA em 95
49. la corretta di identificazione di tali varianti come SA Tra i campioni idonei inclusi nelle analisi dei dati presentate in questo rapporto 16 isolati in totale corrispondono al profilo della cassetta vuota generando quindi risultati delle analisi positivi per spa e SCC mec anche se non stato rilevato alcun mecA Ct 0 come illustrato in Tabella 7 Quindici 15 su 16 sono stati identificati come isolati veri negativi di MRSA rispetto alla coltura e 14 su 16 sono stati invece identificati come isolati veri positivi di SA rispetto alla coltura Un isolato stato identificato come MRSA dalla coltura e 2 isolati risultavano negativi sia a MRSA che a SA secondo la coltura 301 0190 Rev C February 2012 95 Italiano Tabella 7 Prestazioni MRSA SA SSTI rispetto alla Coltura di riferimento Varianti a cassetta vuota Nr Xpert spa mecA SCCmec Xpert rispetto a Coltura soggetti Risultato Ct Ct Ct Coltura MRSA SA 1 SA 23 6 0 26 0 SA VN VP 2 SA 14 7 0 16 5 SA VN VP 3 SA 20 5 0 34 0 SA VN VP 4 SA 18 4 0 21 0 SA VN VP 5 SA 15 6 0 28 4 MRSA EN VP 6 SA 17 2 0 31 6 SA VN VP 7 SA 34 1 0 35 6 Neg VN FP 8 SA 29 1 0 33 0 SA VN VP 9 SA 12 7 0 23 5 SA VN VP 10 SA 18 2 0 27 6 SA VN VP 11 SA 18 4 0 22 0 SA VN VP 12 SA 25 5 0 27 7 SA VN VP 13 SA 20 0 0 22 1 Neg VN FP 14 SA 26 0 0 28 3 SA VN VP 15 SA 23 9 0 25 7 SA VN VP 16 SA 19 9 0 34 0 SA VN VP Prestazioni analitiche Specificit anal
50. la detecci n de la secuencia objetivo en muestras sencillas o complejas mediante ensayos de RCP en tiempo real El sistema consta de un instrumento un ordenador personal y un software cargado previamente para ejecutar pruebas y visualizar los resultados Este sistema requiere el uso de cartuchos desechables de un solo uso para los reactivos y el proceso de RCP Dado que los cartuchos son independientes se minimiza el riesgo de contaminaci n cruzada entre muestras Si desea obtener una descripci n detallada del sistema consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx El Ensayo Xpert MRSA SA SSTI incluye reactivos para la detecci n del MRSA y el SA as como el control de procesamiento de muestra CPM para el procesamiento adecuado de las bacterias diana y para supervisar la presencia de inhibidores en la RCP El CPM tambi n garantiza que las condiciones de la reacci n de RCP temperatura y tiempo sean las adecuadas para la reacci n de amplificaci n y que los reactivos RCP sean funcionales Mediante la funci n de comprobaci n de sonda PCC por sus siglas en ingl s se comprueba la rehidrataci n de los reactivos el llenado del tubo de RCP en el cartucho la integridad de la sonda y la estabilidad del fluorocromo Los iniciadores y sondas del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI detectan secuencias exclusivas de la prote na A del estafilococo spa el gen resistente a la meticilina mecA y el cromosoma con casete de estafilococo SCCme
51. le frode Representante autorizado na Comunidade Europeia CN m Marca o CE Conformidade Europeia Limites de temperatura ws Riscos biol gicos Cepheid AB R ntgenv gen 5 SE 171 54 Solna Su cia Produto da Su cia Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Fran a Telefone 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 E mail cepheid cepheideurope fr C ivo 122 301 0190 Rev C February 2012
52. minimale inhibitrice CMI d oxacilline gt 2 et lt 8 pg ml Il est particuli rement n cessaire de distinguer le SARM du BORSA pour viter Putilisation superflue et inappropri e de vancomycine et de mesures d isolation qui ne s imposent pas pour les patients infect s par une souche sensible au 8 lactam Dans les conditions de cette tude les 7 isolats BORSA y compris la variante cassette vide apparente ont obtenu un r sultat n gatif au SARM positif au SA des concentrations cellulaires lev es et faibles l aide du test Xpert MRSA SA SSTI Aucun signal mecA na t rapport Ces r sultats d montrent qu une souche BORSA sera correctement identifi e comme negative au SARM positive au SA et nobtiendra pas de faux r sultat positif au SARM l aide du test Xpert MRSA SA SSTI 34 301 0190 Rev C February 2012 Performances analytiques Sensibilit analytique tudes de limites de d tection Des tudes ont t men es pour d terminer l intervalle de confiance 95 pour la limite de detection LDD analytique des cellules de Staphylococcus aureus SA et de Staphylococcus aureus r sistant la m thicilline SARM dilu es dans une matrice de blessure simul e d origine humaine La matrice de blessure simul e tait constitu e d un concentr de globules blancs GB pr par par centrifugation partir de sang entier La matrice contenait galement des globules rouges GR et du plasma ainsi qu
53. mme Die 5 diskordanten F lle wurden durch Katalase R hrchen Koagulase und Gram F rbung charakterisiert Die von MecA bewirkte Oxacillin Resistenz wurde durch Disk Diffusion mit einer 30 ug Cefoxitin Disk and einem Durchmesser Ausschnitt von 21 22 mm ermittelt Drei 3 der 78 MRSA St mme wurden von der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung als MRSA negativ SA positiv erkannt Die weitere Charakterisierung ergab dass diese St mme nicht resistent sind und somit korrekt als MRSA negativ SA positiv eingestuft wurden Zwei 2 der 43 SA St mme wurden von der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung als MRSA positiv SA positiv erkannt Die weitere Charakterisierung ergab dass diese St mme resistent sind und somit korrekt als MRSA positiv SA positiv eingestuft wurden Alle 12 bekannten USA300 Isolate wurden erwartungsgem als MRSA positiv und SA positiv erkannt al 6 301 0190 Rev C February 2012 Auswertung der Varianten mit leerer Kassette Auswertung der Varianten mit leerer Kassette Zweiundzwanzig 22 Staphylococcus aureus Isolate die als Varianten mit leerer Kassette identifiziert worden waren wurden mit der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung getestet Kulturen wurden ber Nacht auf 0 5 McFarland Einheiten eingestellt Alle St mme wurden anhand von Kulturen getestet die 100 fach hohe Konzentration und 100 000 fach niedrige Konzentration verd nnt wurden Die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung erkannte alle 22 Isolate korr
54. muestra de SSTI con infecci n mixta que contenga Staphylococcus coagulasa negativos sensibles a la meticilina MRCNS y Staphylococcus aureus SA sensibles a la meticilina de casete vac o Sustancias interferentes En el estudio de investigaci n del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI se observ que 428 de las 848 muestras conten an sangre y que 404 conten an otras sustancias inespec ficas que podr an interferir en el ensayo algunas de las muestras conten an m s de un tipo de posible contaminante Las pruebas exactas de Fisher realizadas con los datos obtenidos de las muestras con y sin estas sustancias potencialmente interferentes demostraron que su presencia no afectaba al rendimiento del ensayo En un estudio no cl nico se analizaron las sustancias potencialmente interferentes que pod an estar presentes en muestras cl nicas de infecci n de piel y tejidos blandos para evaluar su relaci n directa con el rendimiento del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Las sustancias potencialmente interferentes presentes en las infecciones de piel y tejidos blandos pueden incluir entre otras sangre pus plasma pomadas t picas antibi ticos antis pticos calmantes ap sitos y tinturas Las tablas 1 y 2 recogen todas estas sustancias as como los ingredientes activos y las concentraciones con las que se han realizado pruebas Se ha observado inhibici n del Ensayo MRSA SA SSTI con las siguientes sustancias StaphA Septic 5 p v hidrocortisona 5 p v y l
55. negativas para MRSA relativamente ao m todo de cultura de refer ncia e 96 9 das amostras positivas para SA e 88 3 das amostras negativas para SA relativamente ao m todo de cultura de refer ncia Entre estes participantes com utiliza o de antibi ticos desconhecida 97 0 194 200 obtiveram um resultado v lido na primeira tentativa do ensaio Xpert MRSA SA SSTI Os restantes 6 apresentaram resultados indeterminados na primeira tentativa 2 INV LIDO 3 ERRO e 1 SEM RESULTADO Dos 6 participantes que apresentaram resultados indeterminados na primeira tentativa todos apresentaram um resultado na segunda tentativa Tabela 6 Desempenho MRSA SA em participantes com utilizac o de antibi ticos confirmada nas 3 semanas anteriores recolha vs cultura de refer ncia Cultura MRSA SA MRSA Neg Sem Total crescimento MRSA 44 2 10 56 PR 3 SA MRSA 3 31 19 53 SA 3 1 94 98 Total 50 34 123 207 Concord ncia de percentagem positiva MRSA 88 0 intervalo de confian a de 95 75 7 95 5 Concord ncia de percentagem negativa MRSA 92 4 intervalo de confian a de 95 87 0 96 0 Concord ncia de percentagem positiva SA MRSA 95 2 intervalo de confian a de 95 88 3 98 7 Concord ncia de percentagem negativa SA MRSA 76 4 intervalo de confianga de 95 67 9 83 6 Entre os participantes que tinham utilizado antibi ticos nas 3 semanas anteriore
56. not applicable 8 301 0190 Rev C February 2012 Reasons to Repeat the Assay Reasons to Repeat the Assay Repeat the test using a new cartridge do not re use the cartridge and new reagents Perform the retest procedure within 3 hours of an indeterminate result An INVALID result indicates that the control SPC failed T he sample was not properly processed or PCR was inhibited An ERROR result indicates that the Probe Check Control failed and the assay was aborted possibly due to the reaction tube being filled improperly a reagent probe integrity problem was detected or because the maximum pressure limits were exceeded A NO RESULT indicates that insufficient data were collected For example the operator stopped a test that was in progress Ifan External QC fails to perform as expected repeat external control test and or contact Cepheid for assistance To perform a retest If retesting within 3 hours of an indeterminate result 1 Transfer remaining contents from Chamber S to a new elution reagent using a disposable transfer pipette 2 Vortex and add the entire contents of the elution reagent to Chamber S of the new MRSA SA SSTI Assay cartridge 3 Close the lid and start new test If the retest can not be performed within 3 hours use a new sample Limitations The performance of the Xpert MRSA SA SSTI Assay was validated using the procedures provided in this package insert only Modifications to these procedures may alter the
57. o controlo de qualidade externo n o funcionar como esperado repita o teste de controlo externo e ou contacte a Cepheid para obter assist ncia As figuras 2 a 5 apresentam exemplos de resultados de ensaio Xpert MRSA SA SSTI 301 0190 Rev C February 2012 107 Portugu s Figura 3 Exemplo de um resultado MRSA negativo SA positivo 108 301 0190 Rev C February 2012 Interpreta o dos resultados Testand Anadte Result Detail Errors History Figura 5 Exemplo de um resultados inv lido Interpreta o dos resultados Os resultados s o interpolados pelo sistema GeneXpert Dx a partir dos sinais de fluoresc ncia medidos e dos algoritmos de c lculo incorporados sendo apresentados na janela View Results Ver resultados Os resultados poss veis s o MRSA POSITIVE SA POSITIVE MRSA POSITIVO SA POSITIVO O ensaio Xpert MRSA SA SSTI pode detectar ADN de MRSA e ou SA a partir de organismos n o vi veis Detectadas sequ ncias alvo de ADN de MRSA detectada sequ ncia alvo de ADN de SA MRSA POSITIVE MRSA POSITIVO todos os alvos MRSA spa mecA e SCC mec t m um limite de ciclo Ct dentro do intervalo v lido e um endpoint acima do valor m nimo SPC NA n o aplic vel o SPC ignorado na medida em que a amplifica o de MRSA pode competir com este controlo Probe Check PASS Verifica o da sonda APROVADA todos os resultados de verifica o da sonda s o aprovados 301 01
58. of the Xpert MRSA SA SSTI Assay was calculated relative to the reference culture results Overall Results A total of 848 specimens were tested for MRSA and SA by Xpert MRSA SA SSTI Assay and culture Among the 848 cases in the eligible data set antibiotic use within the 3 weeks prior to sample collection was reported for 207 subjects and no antibiotic use was confirmed for 441 subjects for 200 cases antibiotic status was unknown A statistically significant decrease in the positivity rate of SA with respect to culture results was observed when antibiotics were used p 0 007 this phenomenon has also been reported in the literature 1 11 12 13 14 The MRSA positivity rate for culture was also decreased although to a lesser extent p 0 022 The decrease in positivity was not observed with the Xpert MRSA SA SSTI Assay when antibiotics were used nor was any inhibition observed in the assay in the presence of topical antibiotics see Interfering Substances The decreased culture positivity rates for MRSA and SA in the presence of antibiotics caused the higher than expected false positive rates observed with the Xpert MRSA SA SSTI Assay Five 5 of the 246 MRSA positive cultures had mixed infections of MRSA and SA Xpert MRSA SA SSTI identified 3 of the 5 mixed infections as MRSA positive and 2 of the 5 as SA positive MRSA negative The performance of the Xpert MRSA SA SSTI Assay is summarized in Table 4 through Table 6 301 0190 Rev C Februa
59. perform susceptibility testing Do not substitute Xpert MRSA SA SSTI Assay reagent with other reagents Do not open the Xpert MRSA SA SSTI Assay cartridge lid except when adding sample and reagent or performing a retest Do not use a cartridge that has been dropped or shaken after you have added the sample and reagent Do not use a cartridge that has a damaged reaction tube Each single use Xpert MRSA SA SSTI Assay cartridge is used to process one test Do not reuse spent cartridges Consult your institution s environmental waste personnel on proper disposal of used cartridges and unused reagents This material may exhibit characteristics of federal EPA Resource Conservation and Recovery Act RCRA hazardous waste requiring specific disposal requirements Check state and local regulations as they may differ from federal disposal regulations Institutions outside the USA should check their country hazardous waste disposal requirements Store the Xpert MRSA SA SSTI Assay kit at 2 28 C Do not open a cartridge lid until you are ready to perform testing Elution Reagent contains guanidinium thiocyanate H402 EUH301 which is harmful to aquatic life and contact with acid liberates toxic gas Reagent 2 contains sodium hydroxide H314 which is corrosive to eyes and skin requiring eye and skin protection Specimen Collection Transport and Storage Swab specimens of skin and soft tissue infections can be taken with the Cepheid Sample Collecti
60. performance of the test Results from the Xpert MRSA SA SSTI Assay should be interpreted in conjunction with other laboratory and clinical data available to the clinician The Xpert MRSA SA SSTI Assay can detect MRSA and or SA DNA from non viable organisms The probability of this occurring increases for patients on antibiotics In the pivotal clinical study the false positive rate relative to culture of detecting SA in patents using antibiotics within 3 weeks prior to Xpert MRSA SA testing was 13 8 The false positive rate relative to culture of detecting MRSA in patients using antibiotics within 3 weeks prior to Xpert MRSA SA testing was 9 5 A positive test result does not necessarily indicate the presence of viable organisms It is however presumptive for the presence of MRSA or SA Testing with the Xpert MRSA SA SSTI Assay should be used as an adjunct to other methods available Erroneous test results might occur from improper specimen collection failure to follow the recommended sample collection handling and storage procedures technical error sample mix up or because the number of organisms in the specimen is too low to be detected by the test Careful compliance with the instructions in this insert is necessary to avoid erroneous results Because the detection of MRSA and SA is dependent on the number of organisms present in the sample reliable results are dependent on proper specimen collection handling and storage Mut
61. premi re tentative 2 INVALID 3 ERROR et 1 NO RESULT Ils ont toutefois tous re u un r sultat la seconde tentative Tableau 6 Performances de d tection de SARM SA chez les sujets ayant t trait s par antibiotiques dans les 3 semaines pr c dant la collecte des chantillons par rapport la culture de r f rence Culture SARM SA SARM N g pas de Total croissance SARM 44 2 10 56 PR 3 SA SARM 3 31 19 53 SA 3 1 94 98 Total 50 34 123 207 Correspondance de pourcentage positif SARM 88 0 intervalle de confiance 95 75 7 95 5 Correspondance de pourcentage n gatif SARM 92 4 intervalle de confiance 87 0 94 7 96 0 Correspondance de pourcentage positif SA SARM 95 2 intervalle de confiance 95 88 3 98 7 Correspondance de pourcentage n gatif SA SARM 76 4 intervalle de confiance 95 67 9 83 6 Parmi les sujets ayant t trait s par antibiotiques dans les 3 semaines pr c dant la collecte des chantillons le test Xpert MRSA SA SSTI a identifi 88 0 des chantillons positifs au SARM et 92 4 des chantillons n gatifs au SARM par rapport la m thode de culture de r f rence ainsi que 95 2 des chantillons positifs au SA et 76 4 de ceux n gatifs au SA par rapport la m thode de culture de r f rence Parmi les sujets trait s par antibiotiques 96 1 199 207 des chantillons admissible
62. qu muestras podr an ser infecciosas todas las muestras biol gicas deben tratarse tomando las precauciones habituales Las directrices para la manipulaci n de muestras se pueden consultar en U S Center for Disease Control and Prevention Centros para el Control y la Prevenci n de Enfermedades de EE UU y el Clinical and Laboratory Standards Institute Instituto de Est ndares Cl nicos y de Laboratorio anteriormente National Committee for Clinical Laboratory Standards Comit Nacional de Control de Est ndares de Laboratorio En un cultivo mixto que contenga MRSA SA y otros organismos p ej bacilos Gram negativos u hongos los resultados pueden ser falso negativos o variables en funci n de la concentraci n de MRSA SA presente especialmente si la concentraci n de MRSA SA est cercana al LoD del ensayo Respete las medidas de seguridad establecidas por su instituci n al trabajar con productos qu micos y manipular muestras biol gicas El Ensayo Xpert MRSA SA SSTI puede detectar ADN de MRSA y o SA de organismos no viables La probabilidad de que esto ocurra aumenta en los pacientes que est n tomando antibi ticos El Ensayo Xpert MRSA SA SSTI no proporciona resultados de pruebas de sensibilidad antimicrobiana Se necesita tiempo adicional para los cultivos y para realizar pruebas de sensibilidad No sustituya el reactivo del ensayo Xpert MRSA SA SSTI por ning n otro reactivo No abra la tapa del cartucho del e
63. que el Control de comprobaci n de la sonda ha fallado y que el ensayo ha sido anulado probablemente debido a que el tubo de reacci n se ha llenado de forma inadecuada se ha detectado un problema de integridad del reactivo o se han superado los l mites de presi n m xima Un NO RESULT indica que no se han recogido suficientes datos Por ejemplo si el operador detiene una prueba que estaba en progreso Si un CC externo no tiene el rendimiento que se esperaba repita la prueba de control externo o p ngase en contacto con Cepheid para recibir ayuda Para volver a realizar la prueba Si se repite la prueba en un plazo de 3 horas de un resultado indeterminado 1 Transfiera el contenido restante del Compartimento S a un nuevo reactivo de diluci n utilizando una pipeta de transferencia desechable 2 Agite y a ada todo el contenido del reactivo de diluci n al Compartimento S del nuevo cartucho del Ensayo MRSA SA SSTI 3 Cierre la tapa e inicie la nueva prueba Si no se puede repetir la prueba en un plazo de 3 horas utilice una muestra nueva Limitaciones El rendimiento del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI se ha validado nicamente mediante los procedimientos suministrados con estas instrucciones Las modificaciones de estos procedimientos pueden alterar el rendimiento de la prueba Los resultados del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI se deben interpretar junto con otros datos cl nicos y de laboratorio a disposici n del m dico El Ensayo Xpert
64. qui suivent l ajout des r actifs la cartouche Pour ajouter l chantillon et le r actif la cartouche 1 Retirer la cartouche et le r actif de l emballage 2 Retirez P couvillon du r cipient de transport Remarque Utilisez de la gaze st rile lors de la manipulation de l couvillon pour r duire le risque de contamination 3 Ins rez l couvillon dans le tube contenant le r actif d lution puis cassez l couvillon 4 Fermez le couvercle du flacon d lution et vortexez vitesse lev e pendant 10 secondes 5 Ouvrez le couvercle de la cartouche Utilisez une pipette de transfert st rile et transf rez le contenu complet du r actif d lution dans la chambre marqu e S de la cartouche de test Xpert MRSA SA SSTI 6 Fermez le couvercle de la cartouche S chantillon Figure 1 Cartouche de test Xpert MRSA SA SSTI vue de dessus D marrage du test Important Avant de d marrer le test assurez vous que le fichier de d finition du test Xpert MRSA SA SSTI est import dans le logiciel Cette section r pertorie les tapes de base de la r alisation du test Pour obtenir des instructions d taill es consultez le Manuel d utilisation de GeneXpert Dx System 1 Allumer l instrument GeneXpert Dx puis allumer l ordinateur Le logiciel GeneXpert d marrera automatiquement 2 Ouvrez une session du logiciel GeneXpert Dx System en utilisant votre nom d utilisateur et votre mot de passe 3 Dans la fen t
65. smidos productores de beta lactamasa frustraron la efectividad de la penicilina para el tratamiento de las infecciones por S Aureus En 1959 se introdujo la meticilina una penicilina sint tica No obstante en 1960 se identificaron las primeras cepas de S Aureus resistentes a la meticilina Se determin entonces que esto era el resultado de la adquisici n por parte del aureus del gen mecA Hoy en d a en los EE UU el MRSA es responsable de aproximadamente el 25 de las infecciones nocosomiales y est n aumentando los informes de MRSA adquirido en la comunidad lo cual repercute significativamente en la morbilidad y en la mortalidad Se han detectado mortalidades del 33 y el 16 atribuibles al MRSA y a bacteriemias por S aureus SA sensible a la meticilina respectivamente Tambi n preocupan cada vez m s los costes derivados de las infecciones por MRSA En un intento por limitar la extensi n de estas infecciones se est n desarrollando e implementando estrategias y pol ticas de control en instalaciones m dicas El control del MRSA es el principal objetivo de la mayor a de los programas de control de infecciones hospitalarias Actualmente el m todo est ndar de detecci n de MRSA es el cultivo m todo muy laborioso que puede tardar varios d as en generar un resultado definitivo 234 6 7 Principio del procedimiento El sistema GeneXpert Dx automatiza e integra la purificaci n de muestras la multiplicaci n del cido nucleico y
66. un hisopo de herida que contenga 300 UFC Se analizaron ciento veintiuna 121 cepas adicionales de Staphylococcus aureus con el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Se dejaron crecer los cultivos durante toda la noche en un medio de infusi n de cerebro y coraz n y se ajustaron a 0 5 unidades McFarland Todas las cepas se evaluaron por triplicado utilizando 100 pl de cultivos que luego se diluyeron entre 100 000 y un mill n de veces 301 0190 Rev C February 2012 77 Espa ol Se seleccionaron 78 cepas de MRSA y 43 de SA para representar el amplio intervalo de diversidad gen tica t pico de la especie Staphylococcus aureus en lo que se refiere a estructura filogen tica Las selecciones representan los principales linajes con un nfasis especial en los complejos clonales espec ficos predominantes en el MRSA Se incluyeron linajes que conten an MRSA y SA y tambi n linajes que s lo conten an SA El Ensayo Xpert MRSA SA SSTI identific correctamente 116 de 121 cepas Las cinco cepas discordantes estaban caracterizadas por catalasa coagulasa en tubo y tinci n de Gram Se analiz la resistencia a la oxacilina mediada por el gen MecA utilizando una prueba de difusi n de disco con un disco de 30 pg de cefoxitina y un l mite de di metro de 21 22 mm Tres 3 de las 78 cepas de MRSA demostraron ser MRSA negativas SA positivas en el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Caracterizaciones adicionales indican que estas cepas no son resistentes y que por tanto
67. une quantit n gligeable d anticoagulant CPD ou CPDA 1 La limite de detection est d finie comme le nombre le plus bas de bact ries souches par chantillon qui peut tre d tect plusieurs reprises dans des chantillons n gatifs avec un niveau de confiance de 95 ou la concentration la plus basse laquelle 19 r plicats sur 20 taient positifs Pour le SARM des r plicats de 20 ont t valu s chaque concentration de SARM test e bact ries souches couvillon pour 6 isolats repr sentant le SCC mec de type I II III IVa V et VI Une fois caract ris es par lectrophor se sur gel en champ pulse PFGE la souche USA 100 la plus courante en milieu hospitalier et la souche USA400 responsable de la plupart des cas communautaires ont t repr sent es Pour le SA des r plicats de 20 ont t valu s chaque concentration de SA bact ries souches couvillon pour 3 isolats SA Les types USA900 et USA1200 taient repr sent s Lestimation et les intervalles de confiance ont t d termin s en utilisant la r gression logistique avec des donn es nombre de r sultats positifs par nombre de r plicats chaque niveau sur la gamme des bact ries souches couvillon test es Les intervalles de confiance ont t d termin s en utilisant les estimations de probabilit s maximales sur les param tres du mod le logistique en utilisant la matrice de variance covariance de grand chantillon Les estimat
68. 00 20 20 90 18 20 96 7 58 60 Pos fraco p SA 100 20 20 100 20 20 95 19 20 98 3 59 60 Neg forte p MRSA1 100 20 20 90 18 20 100 20 20 96 6 58 60 Pos fraco p MRSA1 100 20 20 100 20 20 90 18 20 96 6 58 60 Neg forte p MRSA2 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Pos fraco p MRSA2 100 20 20 95 19 20 95 19 20 96 6 58 60 de concord ncia total por local 100 140 140 97 9 137 140 95 7 134 140 97 9 411 420 118 301 0190 Rev C February 2012 Reprodutibilidade Tabela 11 Resumo dos resultados de valor de Ct por n vel de amostra e sonda SPC N vel M dia Desv padr o CV Neg forte p MRSA1 34 52 0 82 2 36 Neg forte p MRSA2 34 46 0 85 2 46 Neg MSSE 34 44 0 90 2 62 Neg forte p SA 34 38 0 92 2 66 Spa N vel M dia Desv padr o CV Pos fraco p MRSA1 32 96 0 8 2 44 Pos fraco p MRSA2 31 05 0 69 2 21 Pos fraco p SA 33 91 0 8 2 35 mecA N vel M dia Desv padr o CV Pos fraco p MRSA1 33 25 0 80 2 40 Pos fraco p MRSA2 31 50 0 68 2 16 SCCmec N vel M dia Desv padr o CV Pos fraco p MRSA1 34 19 0 90 2 63 Pos fraco p MRSA2 33 13 0 68 2 05 Foi realizado um segundo estudo de reprodutibilidade utilizando um painel de 4 amostras de SA 10X LoD MRSA1 10X LoD MRSA2 10X LoD e controlo negativo Staphylococcus epidermidis Os pain
69. 1 obtiveram um resultado v lido na primeira tentativa do ensaio Xpert MRSA SA SSTI Os restantes 14 apresentaram resultados indeterminados na primeira tentativa 6 INVALIDO 7 ERRO e 1 SEM RESULTADO Dos 14 participantes que apresentaram resultados indeterminados na primeira tentativa todos apresentaram um resultado na segunda tentativa Tabela 5 Desempenho MRSA SA em participantes com utiliza o de antibi ticos desconhecida nas 3 semanas anteriores recolha vs cultura de refer ncia Cultura MRSA SA MRSA Neg Sem Total crescimento MRSA 47 0 4 51 r 8 SA MRSA 2 45 8 55 SA 1 2 91 94 Total 50 47 103 200 2 das 47 apresentavam infec es mistas por MRSA e SA Concord ncia de percentagem positiva MRSA 94 0 intervalo de confian a de 95 83 5 98 7 Concord ncia de percentagem negativa MRS A 97 3 intervalo de confian a de 95 93 3 99 3 Concord ncia de percentagem positiva SA MRSA 96 9 intervalo de confian a de 95 91 2 99 4 Concord ncia de percentagem negativa SA MRSA 88 3 intervalo de confian a de 95 80 5 93 8 114 301 0190 Rev C February 2012 Variantes de cassete vazia Nos casos em que se desconhecia se os participantes tinham ou n o utilizado antibi ticos nas 3 semanas anteriores recolha de amostras o ensaio Xpert MRSA SA SSTI identificou 94 0 das amostras positivas para MRSA e 97 3 das amostras
70. 1 per kit Assay Definition File ADF Instructions to import ADF into GX software Package Insert Notes Safety Data Sheets SDS are available at www cepheid com tests and reagents literature msds or www cepheidinternational com tests and reagents literature msds The bovine serum albumin BSA in the beads within this product was produced exclusively from bovine plasma sourced in the United States The manufacturing of the BSA is also performed in the United States No ruminant protein or other animal protein was fed to the animals the animals passed ante and post mortem testing During processing there was no commingling of the material with other animal materials Storage and Handling 2 28 ce a Store the Xpert MRSA SA SSTI Assay cartridges and reagents at 2 28 C Do not use reagents or cartridges that have passed the expiration date Do not open a cartridge until you are ready to perform testing Use the cartridge and reagents within 30 minutes after opening the cartridge lid Do not use any reagents that have become cloudy or discolored Materials Required but Not Provided GeneXpert Dx System catalog number varies by configuration GeneXpert instrument computer barcode wand reader and Operator Manual Printer See the GeneXpert Dx System Operator Manual for compatibility guidelines Cepheid Sample Collection Device 900 0370 or Copan equivalent Vortex mixer Disposable transfer pipettes Sterile Gau
71. 16 5 SA TN TP 3 SA 20 5 0 34 0 SA TN TP 4 SA 18 4 0 21 0 SA TN TP 5 SA 15 6 0 28 4 MRSA EN TP 6 SA 17 2 0 31 6 SA TN TP 7 SA 34 1 0 35 6 Neg TN FP 8 SA 29 1 0 33 0 SA TN TP 9 SA 12 7 0 23 5 SA TN TP 10 SA 18 2 0 27 6 SA TN TP 11 SA 18 4 0 22 0 SA TN TP 12 SA 25 5 0 27 7 SA TN TP 13 SA 20 0 0 22 1 Neg TN FP 14 SA 26 0 0 28 3 SA TN TP 15 SA 23 9 0 25 7 SA TN TP 16 SA 19 9 0 34 0 SA TN TP Analytical Performance Analytical Specificity Cross reactivity Study One hundred five 105 strains were collected quantitated and tested using the Xpert MRSA SA SSTI Assay The 98 cultures from the American Type Culture Collection ATCC and 7 strains from the Network on Antimicrobial Resistance in Staphylococcus aureus NARSA represent species phylogenetically related to Staphylococcus aureus or those potentially encountered in a hospital environment Of these methicillin sensitive coagulase negative staphylococci 29 and methicillin resistant coagulase negative staphylococci 9 were included The organisms tested were identified as either Gram positive 74 Gram negative 28 or yeast 3 The organisms were further classified as either aerobic 95 or anaerobic 10 Two 2 or more replicates of each isolate were tested at 1 7 3 2 McFarland units Under the conditions of the study all isolates were reported MRSA negative and SA negative none of the isolates were detected by the Xpert MRSA SA SSTI Assay Positive and Negative controls we
72. 2 0 27 6 SA VN VP 11 SA 18 4 0 22 0 SA VN VP 12 SA 25 5 0 27 7 SA VN VP 13 SA 20 0 0 22 1 Neg VN FP 14 SA 26 0 0 28 3 SA VN VP 15 SA 23 9 0 25 7 SA VN VP 16 SA 19 9 0 34 0 SA VN VP Desempenho anal tico Especificidade anal tica Estudo de reactividade cruzada Cento e cinco 105 estirpes foram colhidas quantificadas e testadas utilizando o ensaio Xpert MRSA SA SSTI As 98 culturas obtidas da American Type Culture Collection ATCC e as 7 estirpes obtidas da Network on Antimicrobial Resistance in Staphylococcus aureus NARSA representam esp cies filogeneticamente relacionadas com o Staphylococcus aureus ou com estafilococos potencialmente existentes num ambiente hospitalar Destes foram inclu dos os estafilococos coagulase negativos sens veis meticilina 29 e os estafilococos coagulase negativos resistentes meticilina 9 Os organismos testados foram identificados como Gram positivo 74 Gram negativo 28 ou levedura 3 Os organismos foram tamb m classificados como aer bicos 95 ou anaer bicos 10 Duas 2 ou mais r plicas de cada isolado foram testadas a 1 7 3 2 unidades de McFarland Sob as condi es do estudo todos os isolados foram indicados como negativos para MRSA e SA nenhum dos isolados foi detectado pelo ensaio Xpert MRSA SA SSTI Foram inclu dos no estudo controlos Positivos e Negativos A especificidade anal tica foi de 100 Avalia o de estirpes BORSA Foram testadas sete 7 estirp
73. 240 110X LoD 301 0190 Rev C February 2012 99 Tabella 13 Sintesi dei risultati del valore Ct per livello e controllo del campione 00 SPC Livello Media Dev Std CV Pos Moderato MRSA1 35 72 1 87 5 24 Pos Moderato MRSA2 36 29 2 66 7 34 Pos Moderato SA 34 55 1 19 3 44 NEG 34 45 1 06 3 09 Spa Livello Media Dev Std CV Pos Moderato MRSA1 29 52 1 30 4 40 Pos Moderato MRSA2 28 91 1 03 3 57 Pos Moderato SA 30 59 0 91 2 99 mecA Livello Media Dev Std CV Pos Moderato MRSA1 29 78 1 28 4 29 Pos Moderato MRSA2 29 32 1 24 4 22 SCCmec Livello Media Dev Std CV Pos Moderato MRSA1 31 49 1 26 3 99 Pos Moderato MRSA2 31 05 1 12 3 59 301 0190 Rev C February 2012 Riferimenti bibliografici Riferimenti bibliografici 1 Bannerman TL 2003 Capitolo 28 Staphylococcus Micrococcus and Other Catalase Positive Cocci that Grow Aerobically Manual of clinical microbiology 8th ed ASM Press Washington DC Pagine 384 404 2 Mainous AG Hueston WJ Everett et al 2006 Nasal Carriage of Staphylococcus aureus and Methicillin Resistant S aureus in the United States 2001 2002 An Family Medicine 4 2 132 137 3 National Nosocomial Infections Surveillance NNIS System Report data summary from January 1992 through June 2004 issued October 2004 Am J Infect Control 2004 32 470 85 4 Chaix C Durand Zileski 1 Alberti C Buisson B 1999 Contro
74. 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Courrier lectronique cepheid cepheideurope fr C vo 40 301 0190 Rev C February 2012 Deutsch Nur zur Verwendung in der In vitro Diagnostik Markenname Xpert MRSA SA SSTI blicher Name MRSA SA SSTI Test Verwendungszweck Beim Cepheid Xpert MRSA SA Test von Haut und Weichgewebeinfektionen Xpert MRSA SA SSTI Assay der mit dem GeneXpert Dx System ausgef hrt wird handelt es sich um einen qualitativen In vitro Diagnostiktest zum Nachweis des Staphylococcus aureus SA und des Methicillin resistenten Staphylococcus aureus MRSA aus Haut und Weichgewebeinfektions Abstrichen Der Test verwendet die Echtzeit Polymerase Kettenreaktion PCR zum Nachweis der MRSA SA DNA Die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung ist in Kombination mit anderen Labortests wie z B mikrobiologischen Kulturen und mit klinischen Daten die dem Kliniker zur Verf gung stehen als Hilfsmittel zam Nachweis von MRSA SA aus Haut und Weichgewebeinfektionen einzusetzen Die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung ist nicht zur berwachung der Behandlung von MRSA SA Infektionen vorgesehen Begleitkulturen sind im Falle von SA und MRSA erforderlich um Organismen f r Resistenztestung oder epidemiologische Untersuchungen zu gewinnen Zusammenfassung und Erkl rung Staphylococcus aureus SA ist ein gut dokumentierter humaner opportunistischer und ein verbreiteter nosokomialer Krankheitserreger der eine Reihe von Erkrankunge
75. 8 60 accord total par site 100 140 140 97 9 137 140 95 7 134 140 97 9 411 420 301 0190 Rev C February 2012 Reproductibilit Tableau 11 R sum des r sultats de valeur Ct par sonde et niveau d chantillon CTE Niveau Moyenne cart type CV N g lev SARM1 34 52 0 82 2 36 N g lev SARM2 34 46 0 85 2 46 N g SERM 34 44 0 90 2 62 N g lev SA 34 38 0 92 2 66 Spa Niveau Moyenne cart type CV Pos faible SARM1 32 96 0 8 2 44 Pos faible SARM2 31 05 0 69 2 21 Pos faible SA 33 91 0 8 2 35 mecA Niveau Moyenne cart type CV Pos faible SARM1 33 25 0 80 2 40 Pos faible SARM2 31 50 0 68 2 16 SCCmec Niveau Moyenne cart type CV Pos faible SARM1 34 19 0 90 2 63 Pos faible SARM2 33 13 0 68 2 05 Une deuxi me tude de reproductibilit a t r alis e sur une s rie de 4 chantillons SA 10X LDD SARMI 10X LDD SARM2 10X LDD et t moin n gatif Staphylococcus epidermidis Les s ries ont t test es en deux exemplaires pendant 10 jours distincts sur chacun des trois sites 4 chantillons x 2 fois par jour x 10 jours x 3 sites Un lot du kit du test Xpert MRSA SA SSTI a t utilis sur chacun des 3 sites de test Les tests Xpert MRSA SA SSTI ont t r alis s conform ment la proc dure de test Xpert MRSA SA SSTI Des r sultats corrects ont t obtenus dans 239 des
76. 848 muestras de SSTI procedentes de cuatro hospitales de gran tama o de diversos lugares de Estados Unidos En Tabla 3 se presentan el n mero y el porcentaje de casos positivos obtenidos por el m todo de cultivo de referencia calculados por grupo de edad Tabla 3 Prevalencia observada de MRSA y SA por cultivo MRSA por cultivo SA por cultivo ee i era cereale gn Menores de 3 a os 34 11 32 4 21 61 8 Entre 3 y 18 a os 100 25 25 0 55 55 0 Entre 19 y 65 a os 614 188 30 6 300 48 9 Mayores de 66 100 22 22 0 35 35 0 Caracter sticas de funcionamiento Resultados cl nicos Las caracter sticas de funcionamiento del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI se determinaron en un estudio de investigaci n prospectivo multicentro realizado en cuatro centros de EE UU en el que se compar el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI con un cultivo de referencia Los sujetos incluyeron individuos cuya atenci n de rutina requer a la recogida de un hisopo de la infecci n de la piel y tejidos blandos de los pacientes para su cultivo Se recogieron hisopos dobles de cada sujeto Uno de los hisopos se analiz con el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI en el centro de estudio y el otro con el m todo est ndar del centro y los dem s se enviaron al laboratorio central para someterlos a una prueba de cultivo de referencia En el laboratorio central la muestra se dej enriquecer hasta el d a siguiente en un caldo de soja tripticasa con un 6 5 de NaCl
77. 90 Rev C February 2012 109 Portugu s MRSA NEGATIVE SA POSITIVE MRSA NEGATIVO SA POSITIVO O ensaio Xpert MRSA SA SSTI pode detectar ADN de MRSA e ou SA a partir de organismos n o vi veis Nao foram detectadas sequ ncias alvo de ADN de MRSA detectada sequ ncia alvo de ADN de SA SA POSITIVE SA POSITIVO o SA alvo spa tem um Ct dentro do intervalo v lido e um endpoint acima do valor m nimo N o foi detectado ADN alvo de SCC mec o ADN alvo de mecA pode ter sido detectado ou n o ou foi detectado ADN alvo de SCC mec e n o foi detectado ADN alvo de mecA cassete vazia SPC NA n o aplic vel o SPC ignorado na medida em que a amplifica o de SA pode competir com este controlo Probe Check PASS Verifica o da sonda APROVADA todos os resultados de verifica o da sonda s o aprovados Um resultado positivo n o indica necessariamente a presen a de organismos vi veis Indica no entanto a presen a presum vel de MRSA ou SA MRSA NEGATIVE SA NEGATIVE MRSA NEGATIVO SA NEGATIVO N o foi detectada sequ ncia alvo de ADN de Staphylococcus aureus O SPC cumpre os crit rios de aceita o NEGATIVE NEGATIVO n o foi detectada sequ ncia alvo de ADN de Staphylococcus aureus spa Pode ter sido detectado ou n o ADN alvo de mec4 ou pode ter sido detectado ou n o ADN alvo de SCC mec SPC PASS SPC APROVADO o SPC tem um Ct dentro do intervalo v lido e um endpoint acima do va
78. A N vel M dia Desv padr o CV Pos moderado p MRSA1 29 78 1 28 4 29 Pos moderado p MRSA2 29 32 1 24 4 22 SCCmec N vel M dia Desv padr o CV Pos moderado p MRSA1 31 49 1 26 3 99 Pos moderado p MRSA2 31 05 1 12 3 59 301 0190 Rev C February 2012 Refer ncias Refer ncias 1 Bannerman TL 2003 Cap tulo 28 Staphylococcus Micrococcus and Other Catalase Positive Cocci that Grow Aerobically Manual of clinical microbiology 8th ed ASM Press Washington DC P ginas 384 404 2 Mainous AG Hueston WJ Everett et al 2006 Nasal Carriage of Staphylococcus aureus and Methicillin Resistant aureus in the United States 2001 2002 An Family Medicine 4 2 132 137 3 National Nosocomial Infections Surveillance NNIS System Report data summary from January 1992 through June 2004 issued October 2004 Am J Infect Control 2004 32 470 85 4 Chaix C Durand Zileski I Alberti C Buisson B 1999 Control of Endemic Methicillin Resistant Staphylococcus aureus JAMA 282 19 1745 51 5 Shopsin B Kreiswirth BN 2001 Molecular Epidemiology of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus Emerging Infectious Diseases 7 2 323 6 6 Salgado CD et al 2003 Community Acquired Methicillin Resistant Staphylococcus aureus A Meta analysis of Prevalence and Risk Factors CID 36 131 7 Donnio P Y F vrier F Bifani P et al 2007 Molecular and epidemiological evidence for the spread of multiresistant methicillin susceptible
79. A Xpert MRSA SA SSTI ha identificato 3 delle 5 infezioni miste come MRSA positive e 2 delle 5 come SA positive MRSA negative Le prestazioni del saggio Xpert MRSA SA SSTI sono riassunte nelle tabelle da 4 a 6 301 0190 Rev C February 2012 93 Italiano Tabella 4 Prestazioni MRSA SA in soggetti che non utilizzano antibiotici nelle 3 settimane dalla raccolta del campione rispetto alla Coltura di riferimento Coltura MRSA SA MRSA Neg Crescita Totale assente MRSA 137 2 6 145 3 SA MRSA 3b 79 16 98 SA 6 4 188 198 Totale 146 85 210 441 2 1 delle 137 era un infezione mista da MSRA e SA b 2 delle 3 erano infezioni miste da MSRA e SA Concordanza percentuale positiva MRSA 93 8 Intervallo di confidenza 95 88 6 97 1 Concordanza percentuale negativa MRSA 97 3 Intervallo di confidenza 95 94 7 98 8 Concordanza percentuale positiva SA MRSA 95 7 Intervallo di confidenza 95 92 2 97 9 Concordanza percentuale negativa SA MRSA 89 5 Intervallo di confidenza 95 84 6 93 3 Tra i soggetti che non hanno utilizzato antibiotici nelle 3 settimane precedenti la raccolta del campione il saggio Xpert MRSA SA SSTI ha identificato il 93 8 dei campioni positivi per MRSA e il 97 3 dei campioni negativi per MRSA rispetto al metodo della coltura di riferimento quindi il 95 7 dei campioni positivi per SA e 89 5 dei campioni negativi per SA rispetto al metodo dell
80. A SA SSTI sia importato nel software Questa sezione elenca i passaggi di base per lesecuzione dell analisi Per istruzioni dettagliate vedere il Manuale dell operatore di GeneXpert Dx System 1 2 3 na Accendere lo strumento GeneXpert Dx e successivamente il computer il software GeneXpert si avvia automaticamente Connettersi al software di GeneXpert Dx System con il proprio nome utente e la password Nella finestra GeneXpert Dx System fare clic su Create Test Crea analisi Verr visualizzata la finestra di dialogo Scan Cartridge Barcode Analizza codice a barre cartuccia Eseguire la scansione del codice a barre sulla cartuccia del saggio Xpert MRSA SA SSTI Verr visualizzata la finestra Create Test Crea analisi Utilizzando le informazioni del codice a barre il software completa automaticamente le caselle dei campi seguenti Select Assay Seleziona saggio Reagent Lot ID ID lotto reagenti Cartridge SN Cartuccia SN ed Expiration Date Data di scadenza Nella casella Sample ID ID campione eseguire la scansione o digitare l ID del campione Accertarsi di digitare correttamente l ID del campione LTD del campione associato ai risultati dell analisi ed mostrato nella finestra View Results Visualizza risultati e in tutte le relazioni Fare clic su Start Test Avvia analisi Nella finestra di dialogo visualizzata digitare la password Aprire lo sportello del modulo dello strumento con la spia verde lampegg
81. El caldo de soja tripticasa se frot en placas con cefoxitina para MRSA y sin cefoxitina para SA Si la placa de SA la placa de MRSA o ambas mostraban presuntas colonias de S aureus se preparaban en un subcultivabo de placa de agar sangre La confirmaci n de las presuntas colonias positivas se llev a cabo con catalasa coagulasa en tubo y tinci n de Gram Se analiz la resistencia a la oxacilina mediada por el gen MecA en una prueba de difusi n de disco utilizando un disco de 30 ug de cefoxitina con un l mite de 21 22 mm Si ambos cultivos de placas de SA y MRSA daban resultados negativos se preparaba un subcultivo del caldo de soja tripticasa registrado con un 6 5 de NaCl en placa de agar sangre seguido de un tratamiento para SA MRSA tal y como se ha descrito anteriormente El rendimiento del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI se calcul en relaci n con los resultados del cultivo de referencia Resultados generales Se sometieron a la prueba de MRSA y SA mediante el ensayo Xpert MRSA SA SSTI y de cultivo a un total de 848 muestras De los 848 casos con datos aptos 207 sujetos hab an tomado antibi ticos en las 3 semanas anteriores a la recogida de la muestra 441 no hab an tomado antibi ticos y en 200 casos se desconoc a este hecho Se observ una reducci n estad sticamente significativa en la tasa de positivos de SA con respecto a los resultados del cultivo cuando se hab an utilizado antibi ticos p 0 007 un fen meno que ya ha apar
82. F lle gem dem Referenzkulturverfahren werden nach Altersgruppen in Tabelle 3 dargestellt Tabelle 3 Festgestellte Pr valenz von MRSA und SA nach Kultur MRSA nach Kultur SA nach Kultur Altersgruppe Gesamtanzahl Anzahl Festgestellte Anzahl Festgestellte positiver F lle Pr valenz positiver F lle Pr valenz Unter 3 J hrige 34 11 32 4 21 61 8 3 bis 18 J hrige 100 25 25 0 55 55 0 19 bis 65 J hrige 614 188 30 6 300 48 9 66 J hrige und ltere 100 22 22 0 35 35 0 Leistungsmerkmale Klinische Leistung Die Leistungsmerkmale der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung wurden in den Vereinigten Staaten im Rahmen einer multizentrischen Prospektiv Forschungsstudie an vier Institutionen ermittelt indem die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung mit dem Referenzkulturverfahren verglichen wurde Zu den Patienten geh rten Personen f r deren Routineversorgung ein Abstrich aus der Haut und Weichgewebeinfektion des Patienten zur Ansetzung einer Kultur erforderlich war Bei jedem Patienten wurden doppelte Abstriche entnommen Ein Abstrich wurde mit dem Xpert MRSA SA SSTI Verfahren in dem Zentrum untersucht bei dem der Patient registriert war w hrend der andere Abstrich nach dem Standardverfahren dieser Einrichtung getestet wurde Die verbleibende Probe wurde f r Referenzkulturtests an das Zentrallabor gesendet In dem zentralen Labor wurde die Probe ber Nacht in tryptischer Soja Bouillon mit 6 5 NaCl angereiche
83. GeneXpert Powered By CEPHEID INNOVATION Xpert MRSA SA SSTI GXMRSA SA SSTI CE E Cepheid In Vitro Diagnostic Medical Device 301 0190 Rev C February 2012 Copyright 2012 O Cepheid Cepheid the Cepheid logo GeneXpert and Xpert are trademarks of Cepheid This product is licensed under US Patent Nos 5 582 989 and 5 851 767 and corresponding claims of any non US counterpart s thereof This product is sold under license from bioM rieux under US Patent No 6 156 507 and corresponding claims of any non US counterpart s thereof The purchase of this product includes a limited non transferable license under U S Patents Nos 6 787 338 6 503 720 and 6 303 305 and claims 9 10 11 56 76 80 and 107 of U S Patent No 6 174 670 and corresponding claims in patents and patent applications outside the United States owned by the University of Utah Research Foundation and licensed to Idaho Technology Inc to use only this amount of product and only in an instrument marketed distributed sold leased or otherwise transferred using a Cepheid trademark No right is conveyed expressly by implication or estoppel under any other patent or patent claims owned by the University of Utah Research Foundation or Idaho Technology Inc Without limiting the foregoing no right title or license is herein granted with respect to the uses that are proprietary to Idaho Technology or the University of Utah Research Foundation of fluorescen
84. I ausgewertet Bei der Charakterisierung mit der Pulsed Field Gelelektrophorese PFGE waren USA 100 der am h ufigsten im Gesundheitswesen erworbene Stamm und USA400 einer der am h ufigsten auftretenden ambulant erworbenen St mme vertreten F r SA wurden 20 Replikate bei jeder SA Konzentration CFU Abstrich f r 3 einzelne SA Isolate ausgewertet Die US Arten USA900 und USA1200 waren vertreten Die Bewertung und die Konfidenzintervalle wurden unter Verwendung der logistischen Regression anhand von Daten Anzahl der positiven Ergebnisse pro Anzahl der Replikate auf jeder Stufe verteilt ber den getesteten CFU Abstrich Bereich ermittelt Die Konfidenzintervalle wurden mithilfe maximaler Wahrscheinlichkeitsbewertungen basierend auf den logistischen Modellparametern unter Verwendung der Varianz Kovarianz Matrix anhand gro er Proben ermittelt Die LoD Punkt Sch tzwerte und das obere und untere 95 Konfidenzintervall f r jeden getesteten SA und MRSA SCC mec Typ sind in den Tabellen 8 und 9 zusammengefasst 301 0190 Rev C February 2012 55 Deutsch Tabelle 8 95 Konfidenzintervalle f r die analytische Nachweisgrenze SA SA Stamm ID PFGE Nachweisgrenze Unterer Oberer LoD 95 Cl 95 CI CFU Abstrich N7129 USA900 51 42 69 102 04 USA1200 87 76 109 29213 unbekannt 123 97 188 Tabelle 9 95 Konfidenzintervalle f r die analytische Nachweisgrenze MRSA SCCmec Nachweisgrenze Unterer Oberer
85. Neg 100 20 20 100 20 20 90 18 20 96 7 58 60 SA Low Pos 100 20 20 100 20 20 95 19 20 98 3 59 60 MRSA1 High Neg 100 20 20 90 18 20 100 20 20 96 6 58 60 MRSA1 Low Pos 100 20 20 100 20 20 90 18 20 96 6 58 60 MRSA2 High Neg 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 MRSA2 Low Pos 100 20 20 95 19 20 95 19 20 96 6 58 60 Total Agreement by Site 100 140 140 97 9 137 140 95 7 134 140 97 9 411 420 16 301 0190 Rev C February 2012 Reproducibility Table 11 Summary of Ct Value Results by Sample Level and Probe SPC Level Mean Std Dev CV MRSA1 High Neg 34 52 0 82 2 36 MRSA2 High Neg 34 46 0 85 2 46 Neg MSSE 34 44 0 90 2 62 SA High Neg 34 38 0 92 2 66 Spa Level Mean Std Dev CV MRSA1 Low Pos 32 96 0 8 2 44 MRSA2 Low Pos 31 05 0 69 2 21 SA Low Pos 33 91 0 8 2 35 mecA Level Mean Std Dev CV MRSA1 Low Pos 33 25 0 80 2 40 MRSA2 Low Pos 31 50 0 68 2 16 SCCmec Level Mean Std Dev CV MRSA1 Low Pos 34 19 0 90 2 63 MRSA2 Low Pos 33 13 0 68 2 05 A second reproducibility study was performed using a panel of 4 specimens of SA 10X LoD MRSA1 10X LoD MRSA2 10X LoD and Negative Control Staphylococcus epidermidis The panels were tested in duplicate on 10 different days at each of the three sites 4 specimens x 2 times day x 10 days x 3 sites One lot of Xpert MRSA SA SSTI
86. RSA SA SSTI con la coltura di riferimento I soggetti comprendevano individui la cui cura di routine richiedeva la raccolta di un tampone dall infezione della cute e dei tessuti molli del paziente per coltura Tamponi doppi sono stati raccolti da ogni soggetto Un tampone stato analizzato dal saggio Xpert MRSA SA SSTI presso il centro di arruolamento e l altro tampone stato analizzato con il metodo standard del sito e il restante campione stato inviato al laboratorio centrale per le analisi sulla coltura di riferimento Nel laboratorio centralizzato il campione stato arricchito per tutta la notte in brodo di soia triptico con NaCl al 6 5 Il brodo di soia triptico stato quindi strisciato su piastre con cefoxitina per PMRSA e senza cefoxitina per PSA Se una delle due o entrambe le piastre di SA o MRSA evidenziavano presunte colonie di S Aureus veniva eseguita una subcoltura su una piastra di agar sangue La conferma di colonie presuntivamente positive stata eseguita con catalasi un test della coagulasi in provetta e colorazione di Gram La resistenza alloxacillina mediata da Meca stata testata con test di disco diffusione utilizzando un disco di cefoxitina da 30 ug e un cutoff di 21 22 mm Se le colture di entrambe le piastre di SA e MRSA risultavano negative il brodo di soia triptica archiviato con NaCl al 6 5 veniva sottoposto a subcoltura su agar sangue con successivo workup per SA MRSA come descritto in precedenza
87. SA Performance in Subjects with Unknown Antibiotic Use within 3 weeks of sample collection vs Reference Culture Culture MRSA SA MRSA Neg No Growth Total MRSA 47 0 4 51 PR 3 SA MRSA 2 45 8 55 SA 1 2 91 94 Total 50 47 103 200 2 of the 47 were mixed infections of MRSA and SA Positive Percent Agreement MRSA 94 0 95 Confidence Interval 83 5 98 7 Negative Percent Agreement MRSA 97 3 95 Confidence Interval 93 3 99 3 Positive Percent Agreement SA MRSA 96 9 95 Confidence Interval 91 2 99 4 Negative Percent Agreement SA MRSA 88 3 95 Confidence Interval 80 5 93 8 12 301 0190 Rev C February 2012 Empty Cassette Variants When it was unknown if subjects took antibiotics within the 3 weeks prior to sample collection the Xpert MRSA SA SSTI Assay identified 94 0 of the specimens positive for MRSA and 97 3 of the specimens negative for MRSA relative to the reference culture method and 96 9 of the specimens positive for SA and 88 3 of the specimens negative for SA relative to the reference culture method Among these subjects with unknown antibiotic use 97 0 194 200 were successful on the first attempt with the Xpert MRSA SA SSTI Assay The remaining 6 gave indeterminate results on the first attempt 2 INVALID 3 ERROR and 1 NO RESULT Of the 6 indeterminate on the first attempt all gave a result on the second attempt Table 6 MRSA SA Pe
88. SA target DNA sequence is detected SA POSITIVE the SA target spa has a Ct within the valid range and endpoint above the minimum setting Target DNA for SCC mec is not detected target DNA for mecA may or may not be detected or target DNA for SCC mec is detected and target DNA for mecA is not detected empty cassette SPC NA not applicable SPC is ignored because SA amplification may compete with this control Probe Check PASS all probe check results pass A Positive test result does not necessarily indicate the presence of viable organisms It is however presumptive for the presence of MRSA or SA MRSA NEGATIVE SA NEGATIVE Staphylococcus aureus target DNA sequence is not detected SPC meets acceptance criteria NEGATIVE the Staphylococcus aureus target spa DNA is not detected Target DNA for mecA may or may not be detected or target DNA for SCCmec may or may not be detected SPC PASS SPC has a Ct within the valid range and endpoint above the endpoint minimum setting Probe Check PASS all probe check results pass A False Negative for MRSA a result of MRSA NEGATIVE SA POSITIVE instead of MRSA POSITIVE SA POSITIVE could be obtained if both MRSA and SA are present in the sample at an MRSA SA ratio of 1 1x10 or greater In the Clinical studies 5 of the 246 MRSA positive cultures had mixed infections of MRSA and SA Xpert MRSA SA SSTI identified 3 of the 5 mixed infection
89. STI devono essere utilizzati in aggiunta ad altri metodi disponibili Risultati errati dell analisi potrebbero verificarsi in seguito a errori di raccolta del campione esecuzione non corretta della procedura consigliata di raccolta del campione manipolazione o conservazione errata errori tecnici scambio di campioni o presenza nel campione di un numero di organismi inferiore alla soglia di sensibilit analitica del test Per evitare risultati errati necessario attenersi scrupolosamente alle istruzioni descritte in questo foglio illustrativo Il rilevamento dell MRSA e dell SA dipende dal numero di organismi presenti nel campione pertanto l affidabilit dei risultati dipende dalla raccolta dalla manipolazione e dalla conservazione appropriate del campione Le mutazioni o i polimorfismi nelle regioni di legame dei primer e delle sonde possono influire sul rilevamento di nuove o sconosciute varianti dell MRSA dando origine a un risultato falso negativo Nei campioni contenenti sia MRSA che SA il saggio Xpert MRSA SA SSTI potrebbe non rilevare gli organismi SA resistenti alla meticillina Nello studio clinico cruciale il saggio Xpert MRSA SA SSTI non riuscito a rilevare 2 dei 5 campioni positivi di colture di MRSA in situazioni che presentavano infezioni miste di MRSA SA In una coltura mista il LoD analitico dell MRSA variabile se sono presenti concentrazioni estremamente elevate di SA La rivalit da SA stata osservata ad un
90. Spa Livello Media Dev Std CV MRSA1 Basso Pos 32 96 0 8 2 44 MRSA2 Basso Pos 31 05 0 69 2 21 SA Basso Pos 33 91 0 8 2 35 mecA Livello Media Dev Std CV MRSA1 Basso Pos 33 25 0 80 2 40 MRSA2 Basso Pos 31 50 0 68 2 16 SCCmec Livello Media Dev Std CV MRSA1 Basso Pos 34 19 0 90 2 63 MRSA2 Basso Pos 33 13 0 68 2 05 Riproducibilit Un secondo studio di riproducibilit stato eseguito utilizzando un panello di 4 campioni di SA 10X LoD MRSA1 10X LoD MRSA2 10X LoD e Controllo Negativo Staphylococcus epidermidis I pannelli sono stati analizzati in duplicato in 10 giorni diversi in ciascuno dei tre laboratori 4 campioni x 2 volte giorno x 10 giorni x 3 laboratori In ognuno dei 3 laboratori stato utilizzato un lotto del saggio Xpert MRSA SA SSTI I saggi Xpert MRSA SA SSTI sono stati eseguiti secondo la procedura del saggio Xpert MRSA SA SSTI Risultati corretti sono stati ottenuti in 239 su 240 analisi Tabella 12 Riepilogo dei risultati di riproducibilit Laboratorio 1 Laboratorio 2 Laboratorio 3 Concordanza totale ID del campione Neg MSSE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Pos Moderato SA 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Pos Moderato MRSA1 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Pos Moderato MRSA2 100 20 20 100 20 20 95 19 20 98 3 59 60 Concordanza totale per laboratorio 100 80 80 100 80 80 98 8 79 80 99 6 239
91. TI Untersuchungsreagenz 2 3 2 ml pro Kartusche Xpert MRSA SA SSTI Elutionsreagenz 10 Elutionsreagenz Guanidiniumthiocyanat 1x 2 0 ml pro Beutel CD 1proset Untersuchungsdefinitionsdateien ADF Anweisungen an die ADF in die Software GX importieren Packungsbeilage Hinweis Sicherheitsdatenblatter SDS Safety Data Sheets sind auf den Webseiten www cepheid com tests and reagents literature msds oder www cepheidinternational com tests and reagents literature msds erh ltlich Das BSA Rinderserumalbumin in den K gelchen in diesem Produkt wurde ausschlie lich aus bovinem Plasma hergestellt das aus den USA stammt Auch die Herstellung des BSA erfolgte in den USA Die Tiere erhielten keinerlei Wiederk uer oder anderes Tierprotein mit dem Futter und wurden ante und post mortem Tests unterzogen Bei der Verarbeitung wurde das Material nicht mit anderen Tiermaterialien vermischt Lagerung und Handhabung 2 ce Die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchungs Testkartuschen und Reagenzien bei 2 28 C lagern os Reagenzien und Testkartuschen die das Verfallsdatum berschritten haben d rfen nicht verwendet werden Testkartuschen d rfen erst unmittelbar vor Testdurchf hrung ge ffnet werden Kartusche und Reagenzien innerhalb von 30 Minuten nach dem ffnen des Deckels der Kartusche verwenden Keine tr ben oder verf rbt Reagenzien verwenden Materialien die nicht im Lieferumfang enthalten sind Das GeneXpert Dx System die Katalo
92. a coltura di riferimento Tra tali soggetti che non hanno fatto uso di antibiotici per il 96 8 427 441 il saggio Xpert MRSA SA SSTI riuscito al primo tentativo I restanti 14 hanno generato risultati incerti al primo tentativo 6 INVALID Non valido 7 ERROR Errore e 1 NO RESULT Nessun risultato I 14 incerti al primo tentativo hanno tutti fornito un risultato al secondo tentativo Tabella 5 Prestazioni MRSA SA in soggetti con utilizzo sconosciuto di antibiotici nelle 3 settimane dalla raccolta del campione rispetto alla Coltura di riferimento Coltura MRSA SA MRSA Neg Crescita Totale assente MRSA 47 0 4 51 8 SA MRSA 2 45 8 55 SA 1 2 91 94 Totale 50 47 103 200 2 delle 47 erano infezioni miste da MSRA e SA Concordanza percentuale positiva MRSA 94 0 Intervallo di confidenza 95 83 5 98 7 Concordanza percentuale negativa MRSA 97 3 Intervallo di confidenza 95 93 3 99 3 Concordanza percentuale positiva SA MRSA 96 9 Intervallo di confidenza 95 91 2 99 4 Concordanza percentuale negativa SA MRSA 88 3 Intervallo di confidenza 95 80 5 93 8 94 301 0190 Rev C February 2012 Varianti a cassetta vuota Se Putilizzo di antibiotici da parte dei soggetti nelle 3 settimane precedenti la raccolta del campione era sconosciuto il sageio Xpert MRSA SA SSTI ha identificato il 94 0 dei campioni positivi per MRSA e il 97 3
93. a de sequ ncias alvo de ADN de MRSA SA repita o teste de acordo com as instru es da sec o seguinte O controlo de verifica o da sonda falhou provavelmente devido ao enchimento inadequado do tubo de reac o detec o de um problema de integridade da sonda ou porque os limites m ximos da press o foram excedidos e MRSA NO RESULT MRSA SEM RESULTADO SA NO RESULT SA SEM RESULTADO SPC NO RESULT SPC SEM RESULTADO Probe Check FAIL Verifica o da sonda N O APROVADA um ou mais resultados da verifica o da sonda falharam Se a verifica o da sonda for aprovada o erro causado por uma falha de um componente do sistema NO RESULT SEM RESULTADO N o poss vel determinar a presen a ou aus ncia de sequ ncias alvo de ADN de MRSA SA repita o teste de acordo com as instru es da sec o seguinte N o foram recolhidos dados suficientes para produzir um resultado de teste Por exemplo isto pode ocorrer se o operador interrompeu um teste que estava a decorrer MRSA NO RESULT MRSA SEM RESULTADO SA NO RESULT SA SEM RESULTADO SPC NO RESULT SPC SEM RESULTADO Probe Check NA Verifica o da sonda n o aplic vel 110 301 0190 Rev C February 2012 Motivos para repetir um ensaio Motivos para repetir um ensaio Repita o teste utilizando um novo cartucho n o reutilize o cartucho e reagentes novos Efectue o procedimento de rep
94. a pr vention des maladies etle Clinical and Laboratory Standards Institute Institut des normes cliniques et de laboratoire anciennement National Committee for Clinical Laboratory Standards tiennent disposition des directives concernant la manipulation des chantillons Une culture mixte contenant des SARM SA et d autres organismes p ex bacilles gram n gatif levures peut renvoyer des r sultats n gatifs erron s ou variables selon la concentration de SARM SA pr sente en particulier si elle est proche de la LDD du test Respectez les proc dures de s curit de votre institution pour la manipulation de produits chimiques et d chantillons biologiques Le test Xpert MRSA SA SSTI peut d tecter l ADN de SARM et ou de SA partir d organismes non viables Cette probabilit augmente chez les patients sous antibiotiques Le test Xpert MRSA SA SSTI ne fournit pas de r sultats aux tests de pr disposition antimicrobiens Davantage de temps est n cessaire pour la culture et la r alisation de tests de pr disposition Ne pas substituer le r actif du test Xpert MRSA SA SSTI par d autres r actifs Ne pas ouvrir le couvercle de la cartouche du test Xpert MRSA SA SSTI sauf pour l ajout de l chantillon et du r actif ou pour retester Ne pas utiliser une cartouche qui est tomb e ou qui a t agit e apr s avoir ajout l chantillon et le r actif N utilisez pas une cartouche dont le tube r actio
95. ac o em cadeia da polimerase automatizada em tempo real PCR para detectar o ADN de MRSA SA O ensaio Xpert MRSA SA SSTI est indicado para utiliza o em conjunto com outros testes laboratoriais tais como cultura microbiol gica e dados cl nicos disposi o do m dico como um m todo auxiliar para a detec o de MRSA SA em infec es da pele e tecidos moles O ensaio Xpert MRSA SA SSTI n o se destina a monitorizar o tratamento de infec es por MRSA SA As culturas concomitantes de SA e MRSA s o necess rias para recolher organismos para testes de susceptibilidade ou tipagem epidemiol gica Resumo e explica o O Staphylococcus aureus SA um patog nio oportunista humano bem documentado e um importante patog nio nosocomial que causa um espectro de doen as Algumas das doen as envolvem infec es da pele e tecidos moles incluindo carb nculos e fur nculos bem como infec es de feridas p s operat rias em v rias zonas do corpo Enquanto patog nio nosocomial o aureus tem sido uma das principais causas de morbilidade e mortalidade As infec es causadas por aureus s o muitas vezes agudas e piog nicas e se n o forem tratadas podem propagar se aos tecidos envolventes ou atrav s de bacteriemia aos locais metast ticos envolvendo outros rg os Algumas das infec es mais graves causadas pelo S aureus s o a bacteriemia pneumonia osteomielite endocardite aguda s ndrome de choque t xico intoxica
96. ach Pos 33 13 0 68 2 05 Eine zweite Reproduzierbarkeitsuntersuchung wurde an einer Auswahl von 4 Proben SA 10x LoD MRSA1 10x LoD MRSA2 10x LoD und negative Kontrolle Staphylococcus epidermidis durchgef hrt Die Proben wurden an 10 verschiedenen Tagen an jedem der drei Standorte zweifach getestet 4 Patientenproben x 2 Tag x 10 Tage x 3 Standorte An jeder der 3 Testeinrichtungen wurden Xpert MRSA SA SSTI Tests derselben Charge verwendet Die Xpert MRSA SA SSTI Tests wurden entsprechend dem Xpert MRSA SA SSTI Untersuchungsverfahren durchgef hrt In 239 der 240 Tests wurden die korrekten Werte ermittelt Tabelle 12 Zusammenfassung der Reproduzierbarkeitsergebnisse Standort 1 Gesamt berein stimmung Patientenproben ID Standort 2 Standort 3 Neg MSSE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 SA Mittel Pos 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 MRSA1 Mittel Pos 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 MRSA2 Mittel Pos 100 20 20 100 20 20 95 19 20 98 3 59 60 Prozentuale Gesamt bereinstimmung 100 80 80 100 80 80 98 8 79 80 99 6 239 240 nach Standort HoxLoD UT 8 301 0190 Rev C February 2012 Tabelle 13 bersicht der Ergebnisse f r Ct Werte nach Probenstufe und Sonde SPC Stufe Mittelwert Std abw CV MRSA1 Mittel Pos 35 72 1
97. age positif SARM 93 8 intervalle de confiance 95 88 6 97 1 Correspondance de pourcentage n gatif SARM 97 3 intervalle de confiance 95 94 7 98 8 Correspondance de pourcentage positif SA SARM 95 7 intervalle de confiance 95 92 2 97 9 Correspondance de pourcentage n gatif SA SARM 89 5 intervalle de confiance 95 84 6 93 3 Parmi les sujets n ayant pas re u d antibiotiques dans les 3 semaines pr c dant la collecte des chantillons le test Xpert MRSA SA SSTI a identifi 93 8 des chantillons positifs au SARM et 97 3 des chantillons n gatifs au SARM par rapport la m thode de culture de r f rence ainsi que 95 7 des chantillons positifs au SA et 89 5 de ceux n gatifs au S par rapport la m thode de culture de r f rence Parmi les sujets n ayant pas utilis d antibiotiques 96 8 427 441 des chantillons ont r ussi recevoir un r sultat des la premi re tentative avec le test Xpert MRSA SA SSTI Les 14 chantillons restants ont obtenu des r sultats ind termin s lors de la premi re tentative 6 INVALID 7 ERROR et 1 NO RESULT Ils ont toutefois tous regu un r sultat la seconde tentative Tableau 5 Performances de d tection de SARM SA chez les sujets dont l utilisation ventuelle d antibiotiques est inconnue dans les 3 semaines pr c dant la collecte des chantillons par rapport la culture de r f rence
98. almente interferenti che possono trovarsi nei campioni clinici di infezioni della cute e dei tessuti molli sono state valutate direttamente in relazione alle prestazioni del saggio Xpert MRSA SA SSTI Le sostanze potenzialmente interferenti nelle infezioni della cute e dei tessuti molli possono includere ma non si limitano a sangue pus plasma unguenti per uso topico antibiotici antisettici analgesici agenti di sbrigliamento e tinture Tali sostanze sono elencate nella Tabella 1 e nella Tabella 2 con illustrati gli ingredienti attivi e le concentrazioni analizzati Linibizione del saggio MRSA SA SSTI stata osservata con le seguenti sostanze StaphA Settico 5 w v Idrocortisone 5 w v e disinfettante antibatterico per le mani 5 w v I campioni contenenti mercurio cromo non devono essere utilizzati a causa della natura fluorescente di quest ultimo Tabella 1 Sostanze potenzialmente interferenti con SSTI analizzate Sostanza Ingrediente attivo analizzata Buffer TET controllo Controllo Controllo Buffy Coat ferita surrogata Globuli bianchi 1 5e9 mL 50 v v Sangue intero privo di MRSA SA Non applicabile 50 v v Plasma Non applicabile 50 v v Neosporina Bacitracina 400 unit 1 e 5 w v Polimixina B 5 000 unit Neomicina 3 5 mg StaphA Settico 0 2 Benzetonio cloruro 1 e 5 w v 2 5 Lidocaina HCI Idrocortisone 1 Idrocortisone 1 e 5 w v Sostanze per il trattamento dei forun
99. as de cartucho Escanee el c digo de barras del cartucho del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Aparece la ventana Create Test Crear prueba Utilizando la informaci n del c digo de barras el software rellenar autom ticamente los cuadros de los siguientes campos Select Assay Seleccionar ensayo Reagent Lot ID Id de lote de reactivos Cartridge SN N de serie del cartucho y Expiration Date Fecha de caducidad En el cuadro Sample ID Id de muestra escanee o escriba el Id de muestra Aseg rese de escribir el Id de muestra correcto El Id de muestra est asociado a los resultados de la prueba y se muestra en la ventana View Results Ver resultados y en todos los informes Haga clic en Start Test Iniciar prueba En el cuadro de di logo que aparece escriba su contrase a Abra la puerta del m dulo del instrumento mientras la luz est parpadeando en verde y cargue el cartucho Cierre la puerta La prueba se inicia y la luz verde deja de parpadear Una vez finalizada la prueba la luz se apaga Espere hasta que el sistema desbloquee la puerta para abrir la puerta del m dulo y retirar el cartucho 301 0190 Rev C February 2012 Control de calidad 10 Los cartuchos usados deben desecharse en los contenedores de residuos de muestras apropiados de acuerdo con las pr cticas est ndar del centro Visualizaci n e impresi n de los resultados Si desea obtener instrucciones detalladas sobre c mo ver e imprimir los resultados
100. atamente despu s de una muestra altamente positiva de MRSA aproximadamente 107 UFC prueba Esto se repiti 20 veces entre dos m dulos GeneXpert hasta un total de 42 experimentos No se encontraron pruebas de contaminaci n por arrastre Las 21 muestras positivas aparecieron correctamente clasificadas como MRSA positivas SA positivas Las 21 muestras negativas aparecieron correctamente clasificadas como MRSA negativas SA negativas Reproducibilidad Se analiz un panel de 10 muestras con distintas concentraciones de SA MRSA y Staphylococcus epidermidis negativo por duplicado en 10 d as distintos en cada uno de los tres centros 10 muestras x 2 veces d a x 10 d as x 3 centros Se us un lote de kits Xpert MRSA SA en cada uno de los tres centros de prueba El Ensayo Xpert MRSA SA se realiz siguiendo el procedimiento de Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Tabla 10 Resumen de los resultados de reproducibilidad Id de muestra Centro 1 Centro 2 Centro 3 Correspondencia total Neg MSSE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 SA Neg Alto 100 20 20 100 20 20 90 18 20 96 7 58 60 SA Pos Bajo 100 20 20 100 20 20 95 19 20 98 3 59 60 MRSA1 Neg Alto 100 20 20 90 18 20 100 20 20 96 6 58 60 MRSA1 Pos Bajo 100 20 20 100 20 20 90 18 20 96 6 58 60 MRSA2 Neg Alto 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 MRSA2 Pos bajo 100 20 20 95 19 20 95 19 20 96 6 58 60
101. ations or polymorphisms in primer or probe binding regions may affect detection of new or unknown MRSA variants resulting in a false negative result In samples containing both MRSA and SA the Xpert MRSA SA SSTI Assay may not detect the methicillin resistant SA organisms In the pivotal clinical trial the Xpert MRSA SA SSTI Assay failed to detect 2 of 5 MRSA culture positive samples in situations with documented MRSA SA mixed infections In a mixed culture the analytical LoD of MRSA is variable when extremely high concentrations of SA are present Competition from SA was observed at an MRSA SA ratio of 1 1x10 In the Clinical studies 5 of the 246 MRSA positive cultures had mixed infections of MRSA and SA Xpert MRSA SA SSTI identified 3 of the 5 mixed infections as MRSA positive and 2 of the 5 as SA positive MRSA negative Inhibition of the MRSA SA SSTI Assay has been observed with the following substances StaphA Septic 5 w v Hydrocortisone 5 w v and antibacterial hand sanitizer 5 w v Samples containing Mercurochrome may not be used due to its fluorescent nature The Xpert MRSA SA SSTI Assay will generate a false positive MRSA result when testing a mixed infection SSTI specimen containing both methicillin resistant coagulase negative Staphylococcus MRCNS and empty cassette methicillin sensitive Staphylococcus aureus SA 301 0190 Rev C February 2012 9 English Interfering Substances In the investigational study f
102. azioni variabili di SA MRSA e Staphylococcus epidermidis negativo stato analizzato in duplicato in 10 giorni diversi in ciascuno dei tre laboratori 10 campioni x 2 volte giorno x 10 giorni x 3 laboratori In ognuno dei 3 laboratori stato utilizzato un lotto del kit Xpert MRSA SA I saggi Xpert MRSA SA sono stati eseguiti secondo la procedura del saggio Xpert MRSA SA SSTI Tabella 10 Riepilogo dei risultati di riproducibilit ID del campione Laboratorio 1 Laboratorio 2 Laboratorio 3 Concordanza totale Neg MSSE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 SA Alto Neg 100 20 20 100 20 20 90 18 20 96 7 58 60 SA Basso Pos 100 20 20 100 20 20 95 19 20 98 3 59 60 MRSA1 Alto Neg 100 20 20 90 18 20 100 20 20 96 6 58 60 MRSA1 Basso Pos 100 20 20 100 20 20 90 18 20 96 6 58 60 MRSA2 Alto Neg 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 MRSA2 Basso Pos 100 20 20 95 19 20 95 19 20 96 6 58 60 Concordanza totale per laboratorio 100 140 140 97 9 137 140 95 7 134 140 97 9 411 420 98 301 0190 Rev C February 2012 Tabella 11 Sintesi dei risultati del valore Ct per livello e controllo del campione SPC Livello Media Dev Std CV MRSA1 Alto Neg 34 52 0 82 2 36 MRSA2 Alto Neg 34 46 0 85 2 46 Neg MSSE 34 44 0 90 2 62 SA Alto Neg 34 38 0 92 2 66
103. belle 6 MRSA SA Leistung bei Patienten mit bekannter Antibiotikaeinnahme innerhalb von 3 Wochen vor der Probenentnahme im Verh ltnis zum Referenzkulturverfahren Kultur MRSA SA MRSA Neg Kein Insgesamt Wachstum MRSA 44 2 10 56 PR 3 SA MRSA 3 31 19 53 SA 3 1 94 98 Insgesamt 50 34 123 207 Prozentuale positive Ubereinstimmung MRSA 88 0 95 Konfidenzintervall 75 7 95 5 Prozentuale negative Ubereinstimmung MRSA 92 4 95 Konfidenzintervall 87 0 96 0 Prozentuale positive bereinstimmung SA MRSA 95 2 95 Konfidenzintervall 88 3 98 7 Prozentuale negative Ubereinstimmung SA MRSA 76 4 95 Konfidenzintervall 67 9 83 6 Von den Patienten mit bekannter Antibiotikaeinnahme innerhalb von 3 Wochen vor der Probenentnahme wurden von der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung 88 0 der MRSA positiven Proben und 92 4 der MRSA negativen Proben im Verh ltnis zum Referenzkulturverfahren und 95 2 der SA positiven Proben und 76 4 der SA negativen Proben im Verh ltnis zum Referenzkulturverfahren erkannt 301 0190 Rev C February 2012 53 Deutsch Von diesen Fallen mit Antibiotikaeinsatz ergab sich bei 96 1 199 von 207 der Proben mit der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung beim ersten Versuch erfolgreich ein Ergebnis In den brigen 8 Fillen ergaben sich beim ersten Versuch unbestimmte Ergebnisse 5 INVALID UNG LTIG und 3 ERROR FEHLER F r alle 8 F
104. c insertado en el sitio cromos mico attB del SA 301 0190 Rev C February 2012 63 Espa ol Reactivos e instrumentos Material suministrado El kit de Ensayo Xpert MRSA SA SSTI contiene suficientes reactivos para procesar 10 especimenes o muestras de control de calidad El kit incluye lo siguiente Cartuchos de Ensayo Xpert MRSA SA SSTI con tubos de reacci n integrados 10 Perlas 1 2 3 liofilizadas 1 por cartucho Reactivo 1 del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI 2 8 ml por cartucho Reactivo 2 del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI 3 2 ml por cartucho Ensayo Xpert MRSA SA SSTI reactivo de diluci n 10 Reactivo de diluci n Tiocianato de guanidina 1x 2 0 ml por bolsa CD 1 por kit Archivo de definici n del ensayo ADF Instrucciones para importer el ADF en el sistema GX Instrucciones Notas Las fichas de datos de seguridad SDS Safety Data Sheets est n disponibles en www cepheid com tests and reagents literature msds o www cepheidinternational com tests and reagents literature msds La alb mina s rica bovina BSA en las microesferas contenidas en este producto se obtuvo exclusivamente a partir de plasma bovino originario de Estados Unidos Tambi n la BSA se fabrica en Estados Unidos No se aliment a los animales con prote nas de rumiante ni otras prote nas de origen animal los animales fueron sometidos a pruebas ante y post mortem Durante el procesamiento no se produjo mezcla alguna del material con otras materias de origen
105. ce double stranded nucleic acid binding dyes specifically including but not limited to SYBR Green I LCGreen or LCGreen Plus The purchase of this product includes a limited non transferable license under U S Patent No 7 449 289 owned by GeneOhm Sciences Canada Inc a subsidiary of Becton Dickinson and Company to use such product for human IVD use with a GeneXpert instrument No right under U S Patent No 7 449 289 is conveyed expressly by implication or by estoppel to use this product for any other purpose NO OTHER RIGHTS ARE CONVEYED EXPRESSLY BY IMPLICATION OR BY ESTOPPEL TO ANY OTHER PATENTS FURTHERMORE NO RIGHTS FOR RESALE ARE CONFERRED WITH THE PURCHASE OF THIS PRODUCT Cepheid AB Rontgenvagen 5 SE 171 54 Solna Sweden English For In Vitro Diagnostic Use Only Proprietary Name Xpert MRSA SA SSTI Common or Usual Name MRSA SA SSTI Assay Intended Use The Cepheid Xpert MRSA SA Skin and Soft Tissue Infection Assay Xpert MRSA SA SSTI Assay performed in the GeneXpert Dx System is a qualitative in vitro diagnostic test intended for the detection of Staphylococcus aureus SA and methicillin resistant Staphylococcus aureus MRSA from skin and soft tissue infection swabs The test utilizes automated real time polymerase chain reaction PCR to detect MRSA SA DNA The Xpert MRSA SA SSTI Assay is indicated for use in conjunction with other laboratory tests such as microbiology culture and clinical data ava
106. cefdinir on nasopharyngeal bacterial flora Arch Otolaryngol Head Neck Surg Sep 131 785 787 15 Nadarajah J et al Identification of different clonal complexes and diverse amino acid substitutions in penicillin binding protein 2 PBP2 associated with borderline oxacillin resistance in Canadian Staphylococcus aureus isolates J of Med Micro 2006 55 1675 1683 16 Ribeiro J et al Misclassification of Susceptible Strains of Staphylococcus aureus as Methicillin Resistant aureus by a rapid Automated Susceptibility Testing System 1999 37 1619 1620 Assist ncia Para obter assist ncia contacte a Cepheid atrav s de uma das seguintes informa es de contacto No seu contacto telef nico ou quando enviar uma mensagem de e mail certifique se de que indica o n mero de s rie do instrumento e a ID do lote de reagente Uni o Europeia Para obter apoio t cnico utilize as seguintes informa es de contacto Telefone 33 563 82 53 19 E mail techsupport cepheideurope fr Outras localiza es Contacte o representante Cepheid local 301 0190 Rev C February 2012 121 Portugu s Tabela de s mbolos S mbolo Significado Refer ncia Dispositivo m dico para diagn stico in vitro N o reutilizar e EE C digo do lote O Aten o consultar os documentos anexos Fabricante Conte do suficiente para lt n gt testes Prazo de validade CONTROL Controlo
107. coli 20 Benzocaina 1 e 5 w v Tintura di iodio 2 lodio 50 v v Tabella 2 Sostanze potenzialmente interferenti con SSTI analizzate Sostanza Ingrediente attivo analizzata Buffer TET controllo Controllo Controllo Mupirocina 0 2 Benzetonio cloruro 5 v v 2 5 Lidocaina HCl Sangue intero privo di MRSA SA Non applicabile 50 v v Soluzione salina 0 65 Cloruro di sodio 50 v v Disinfettante antibatterico per le mani 62 Alcol etilico 1 e 5 w v 70 Alcol isopropilico 70 Alcol isopropilico 50 v v 2 301 0190 Rev C February 2012 Ko Valori previsti Valori previsti Nello studio clinico Xpert MRSA SA SSTI un totali di 848 campioni SSTI sono stati inclusi da quattro grandi ospedali statunitensi Il numero e la percentuale di casi positivo per metodo di coltura di riferimento calcolati per gruppi di et sono presentati in Tabella 3 Tabella 3 Prevalenza osservata di MRSA e SA per coltura MRSA per coltura SA per coltura o de dema mao nas Et inferiore a 3 34 11 32 4 21 61 8 Et da 3 a 18 100 25 25 0 55 55 0 Et da 19 a 65 614 188 30 6 300 48 9 Et 66 e oltre 100 22 22 0 35 35 0 Caratteristiche sulle prestazioni Prestazioni cliniche Le caratteristiche sulle prestazioni del saggio Xpert MRSA SA SSTI sono state determinate in uno studio sperimentale prospettico in pi laboratori presso 4 istituti statunitensi confrontando il saggio Xpert M
108. correctly identified all 22 isolates as MRSA negative and SA positive At both cell concentrations tested only Cts for the spa and SCCmec targets were reported No mecA Cts were reported Carry Over Contamination Study A study was conducted to demonstrate that single use self contained GeneXpert cartridges prevent carry over contamination in negative samples run following very high positive samples in the same GeneXpert module The study consisted of a negative sample processed in the same GeneXpert module immediately following a very high MRSA positive sample roughly 107 CFU test This was repeated 20 times between 2 GeneXpert modules for a total of 42 runs There was no evidence of any carry over contamination All 21 positive samples were correctly reported MRSA positive SA positive All 21 negative samples were correctly reported MRSA negative SA negative Reproducibility A panel of 10 specimens with varying concentrations of SA MRSA and Staphylococcus epidermidis negative were tested in duplicate on 10 different days at each of the three sites 10 specimens x 2 times day x 10 days x 3 sites One lot of Xpert MRSA SA kit was used at each of the 3 testing sites Xpert MRSA SA assays were performed according to the Xpert MRSA SA SSTI Assay procedure Table 10 Summary of Reproducibility Results Specimen ID Site 1 Site 2 Site 3 Total Agreement Neg MSSE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 SA High
109. ctif test Tampon TET contr le Contr le Contr le Couche leuco plaquettaire substitut de plaie Leucocytes 1 5e9 ml 50 v v Sang total sans SARM SA SO 50 v v Plasma SO 50 v v Neosporin 400 unit s de bacitracine 1 et5 m v 5 000 unit s de polymyxine B 3 5 mg de n omycine StaphA Septic 0 2 de chlorure de benz thonium 1 et 5 m v 2 5 de lidocaine Hydrocortisone 1 d hydrocortisone 1 et5 m v Boil Ease 20 de benzocaine 1 et5 m v Teinture d iode 2 diode 50 v v Tableau 2 Substances parasites potentielles test es pour les SSTI Substance Ingr dient actif test Tampon TET contr le Contr le Contr le Mupirocine 0 2 de chlorure de benz thonium 5 m v 2 5 de lidocaine Sang total sans SARM SA SO 50 v v S rum physiologique 0 65 de chlorure de sodium 50 v v D sinfectant antibact rien pour les mains 62 d alcool thylique 1 et 5 m v 70 d isopropanol 70 d isopropanol 50 v v 30 301 0190 Rev C February 2012 Valeurs attendues Valeurs attendues L tude clinique Xpert MRSA SA SSTI portait sur un total de 848 chantillons d infections de la peau et des tissus mous provenant de quatre grande h pitaux des Etats Unis Le nombre et le pourcentage de cas positifs par la m thode de culture de r f rence calcul s par groupe d Age sont pr sent s au Tableau 3 Tableau 3 Pr valence observ e du SARM e
110. cus aureus identificati come varianti a cassetta vuota sono stati analizzati con il saggio Xpert MRSA SA SSTI Le colture incubate durante la notte sono state regolate a 0 5 unit McFarland Tutti i ceppi sono stati analizzati da colture diluite ulteriormente 100 volte alto e 100mila volte basso Il saggio Xpert MRSA SA SSTI ha identificato correttamente tutti i 22 isolati come MRSA negativi e SA positivi Con entrambe le concentrazioni cellulari sottoposte ad analisi sono state riportati solo i valori Ct per i bersagli spa e SCCmec Non stato riportato alcun Ct mecA Studio di contaminazione da carry over E stato condotto uno studio per dimostrare che le cartucce GeneXpert monouso indipendenti impediscono la contaminazione da carry over in campioni negativi eseguiti successivamente a campioni positivi molto elevati nello stesso modulo GeneXpert Lo studio consisteva nell elaborazione di un campione negativo nello stesso modulo GeneXpert subito dopo un campione positivo molto elevato di MSA all incirca 10 CFU analisi L operazione stata ripetuta 20 volte tra 2 moduli GeneXpert per un totale di 42 esecuzioni Non risultata evidenza alcuna di eventuali contaminazioni da carry over Tutti i 21 campioni positivi sono stati correttamente identificati come MRSA positivi SA positivi Tutti i 21 campioni positivi sono stati correttamente identificati come MRSA negativi SA negativi Riproducibilit Un pannello di 10 campioni a concentr
111. del saggio PCR in tempo reale garantisce che le condizioni di reazione PCR temperatura e tempo siano adeguate alla reazione di amplificazione e che i reagenti PCR siano funzionali L SPC deve essere positivo in un campione negativo e pu essere negativo o positivo in un campione positivo L SPC viene superato se soddisfa i criteri di accettazione validati Probe Check Control PCC Controllo per il controllo sonda prima dell avvio della reazione PCR GeneXpert Dx System misura il segnale di fluorescenza dalle sonde per monitorare la reidratazione delle microsfere il riempimento della provetta di reazione l integrit della sonda e la stabilit del dye Il controllo sonda viene superato se soddisfa i criteri di accettazione assegnati Controlli esterni KWIK STIKs MicroBioLogics numero di catalogo 0158MRSA SCC mec tipo II e 0360SA come controlli positivi e 0371MSSE come controllo negativo possono essere usati per addestramento test di competenza e controllo qualit esterno di GeneXpert Dx System I ceppi MRSA che rappresentano tipi SCC mec se disponibili possono essere utilizzato come controlli positivi esterni aggiuntivi per il monitoraggio dei primer del saggio e delle sonde non direttamente controllate nel saggio I controlli esterni possono essere utilizzati in accordo con gli istituti di accreditamento e le normative governative se applicabile Attenersi alla procedura per il controllo esterno MicroBioLogics descritta di seguito
112. der Ergebnisse Das GeneXpert Dx System interpoliert die Ergebnisse aus gemessenen Fluoreszenzsignalen und eingebetteten Berechnungsalgorithmen die Ergebnisse werden im Fenster View Results Ergebnisse anzeigen angezeigt Die folgenden Ergebnisse sind m glich MRSA POSITIVE SA POSITIVE MRSA POSITIV SA POSITIV Die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung kann MRSA und oder SA DNA aus nicht lebenden Organismen anzeigen Es wurden MRSA DNA Zielsequenzen nachgewiesen Es wurden SA DNA Zielsequenzen nachgewiesen e MRSA POSITIV Alle MRSA Ziele spa mecA und SCC mec verf gen ber einen Grenzwertzyklus innerhalb des g ltigen Bereichs und einen Endpunkt ber der Mindesteinstellung SPC NA keine Angaben die SPC wird ignoriert da die MRSA Amplifizierung u U mit dieser Kontrolle konkurriert Sondenpr fung PASS BESTANDEN alle Sondenpr fungen wurden bestanden 301 0190 Rev C February 2012 47 Deutsch MRSA NEGATIVE SA POSITIVE MRSA NEGATIV SA POSITIV Die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung kann MRSA und oder SA DNA aus nicht lebenden Organismen nachweisen Es wurden keine MRSA DNA Zielsequenzen nachgewiesen Es wurden SA DNA Zielsequenzen nachgewiesen SA POSITIV Das SA Ziel spa verf gt ber einen Grenzwertzyklus innerhalb des g ltigen Bereichs und einen Endpunkt ber der Mindesteinstellung Ziel DNA f r SCC mec wurde nicht nachgewiesen Ziel DNA f r mecA wurde m glicherweise nachgewiesen oder nicht oder Zi
113. dies wird auch in der Literatur berichtet 9 11 12 13 14 Auch f r die MRSA positiven Ergebnisse wurde bei Kulturverfahren eine Abnahme festgestellt wenngleich in geringerem Ausma p 0 022 Diese Abnahme positiver Ergebnisse nach Einnahme von Antibiotika wurde bei der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung nicht festgestellt Auch wurde keine Inhibition der Untersuchung bei Vorhandensein topischer Antibiotika siehe interferierende Substanzen verzeichnet Die geringeren Anteile positiver F lle im Kulturverfahren f r MRSA und SA bei Vorhandensein von Antibiotika verursachten die h her als erwartet ausfallenden Anteile falsch positiver F lle bei der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung Bei f nf 5 der 246 MRSA positiven Kulturen lagen Mischinfektionen von MRSA und SA vor Xpert MRSA SA SSTI identifizierte 3 der 5 Mischinfektionen als MRSA positiv und 2 der 5 F lle als SA positiv MRSA negativ Die Leistung des Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung wird in den Tabellen 4 bis 6 zusammengefasst Tabelle 4 MRSA SA Leistung bei Patienten ohne Antibiotikaeinnahme innerhalb von 3 Wochen vor der Probenentnahme im Verh ltnis zum Referenzkulturverfahren Kultur MRSA SA MRSA Neg Kein Insgesamt Wachstum MRSA 137 2 6 145 PP 3 SA MRSA 3b 79 16 98 SA 6 4 188 198 Insgesamt 146 85 210 441 2 In 1 der 137 F lle lag eine Mischinfektion mit MRSA und SA vor In 2 der 3 F lle lagen Mischinfektionen mit MRSA und SA vor
114. dimento Prepara o do cartucho Importante Inicie o teste nos 15 minutos seguintes adi o dos reagentes ao cartucho Para adicionar a amostra e o reagente ao cartucho 1 Retire o cartucho e o reagente da embalagem 2 Retire a zaragatoa do recipiente de transporte Nota Utilize gaze esterilizada para manipular a zaragatoa de forma a minimizar o risco de contamina o 3 Insira a zaragatoa no tubo que cont m o reagente de elui o e quebre a zaragatoa 4 Feche a tampa do frasco de elui o e agite o mesmo em vortex a alta velocidade durante 10 segundos 5 Abra a tampa do cartucho Utilizando uma pipeta de transfer ncia esterilizada transfira todo o conte do do reagente de elui o para a c mara S do cartucho do ensaio Xpert MRSA SA SSTI 6 Feche a tampa do cartucho S Amostra Figura 1 Cartucho do ensaio Xpert MRSA SA SSTI vista de cima In cio do teste Importante Antes de iniciar o teste certifique se de que as defini es do ensaio Xpert MRSA SA SSTI s o importadas para o software Esta sec o lista os passos b sicos para realizar o teste Para obter instru es detalhadas consulte o Manual do utilizador do sistema GeneXpert Dx 1 Ligue o instrumento GeneXpert Dx e depois ligue o computador O software GeneXpert arranca automaticamente 2 Inicie sess o no software do sistema GeneXpert Dx utilizando o nome de utilizador e a palavra passe 3 Na janela do sistema GeneXpert Dx clique
115. e Selections represent primary lineages with emphasis on specific clonal complexes within which MRSA is predominantly observed Lineages that contain MRSA and SA as well as those that contain SA exclusively were included 301 0190 Rev C February 2012 15 English The Xpert MRSA SA SSTI Assay correctly identified 116 of 121 strains The 5 discordants were characterized by catalase tube coagulase and Gram stain MecA Mediated Oxacillin resistance was assessed by disk diffusion using a 30 ug cefoxitin disk and a diameter cut off of 21 22 mm Three 3 of 78 MRSA strains were reported MRSA negative SA positive using the Xpert MRSA SA SSTI Assay Further characterization indicates these strains are not resistant and were correctly reported MRSA negative SA positive Two 2 of 43 SA strains were reported MRSA positive SA positive using the Xpert MRSA SA SSTI Assay Further characterization indicates these strains are resistant and were correctly reported MRSA positive SA positive Each of the 12 known USA300 isolates were correctly reported MRSA positive and SA positive as expected Evaluation of Empty Cassette Variants Twenty two 22 Staphylococcus aureus isolates identified as empty cassette variants were tested using the Xpert MRSA SA SSTI Assay Overnight cultures were adjusted to 0 5 McFarland units All strains were tested from cultures further diluted 100 fold high and 100 thousand fold low The Xpert MRSA SA SSTI Assay
116. e test for mecA and SCCmec An isolate that is positive for spa and SCC mec but not mecA is reported SA because it is methicillin sensitive This situation can occur when the portion of the SCCmec element carrying mecA is excised but the ends of this mobile element remain in place yielding a positive SCC mec signal These isolates are sometimes referred to as empty cassette variants and are not uncommon in the clinical environment The significance of these isolates is to potentially confound an assay for MRSA that does not detect the mecA gene directly The Xpert MRSA SA SSTI Assay was designed to correctly identify these variants as SA Among the eligible specimens included in the data analyses presented in this report a total of 16 isolates fit the empty cassette profile resulting in positive spa and SCC mec test results but no mecA detection Ct 0 as shown in Table 7 Fifteen 15 of the 16 were verified MRSA true negative isolates relative to culture and 14 of 16 were verified true positive SA isolates relative to culture One isolate was identified as MRSA by culture and 2 isolates were both MRSA and SA negative by culture 301 0190 Rev C February 2012 13 English Table 7 MRSA SA SSTI Performance vs Reference Culture Empty Cassette Variants Xpert spa mecA SCCmec Xpert vs Culture Subject Result Ct Ct Ct Culture MRSA SA 1 SA 23 6 0 26 0 SA TN TP 2 SA 14 7 0
117. e determinate ripetere l analisi osservando le istruzioni riportate di seguito L SPC non soddisfa i criteri di accettazione il campione non stato elaborato correttamente o la PCR stata inibita INVALID non pu essere determinata l assenza o la presenza del DNA di Staphylococcus aureus SPC FAIL il risultato del target SPC negativo e il valore Ct dell SPC non rientra nell intervallo valido e il valore finale sotto l impostazione del valore minimo e Probe Check PASS tutti i risultati del controllo sonda sono superati ERROR ERRORE La presenza o l assenza di sequenze di DNA bersaglio per MRSA SA non possono essere determinate ripetere l analisi osservando le istruzioni riportate di seguito Il controllo per il controllo sonda non riuscito probabilmente a causa del riempimento scorretto della provetta di reazione di un problema di integrit della sonda o perch sono stati superati i limiti della pressione massima e MRSA NO RESULT SA NO RESULT SPC NO RESULT Probe Check FAIL uno o pi risultati del controllo sonda non riescono Se il controllo della sonda stato superato si verificato un errore di un componente del sistema NO RESULT NESSUN RISULTATO La presenza o l assenza di sequenze di DNA bersaglio per MRSA SA non possono essere determinate ripetere l analisi osservando le istruzioni riportate di seguito Sono stati raccolti dati insufficienti per produrr
118. e no facto dos mesmos poderem potencialmente confundir um ensaio de determina o de MRSA que n o detecte o gene mec directamente O ensaio Xpert MRSA SA SSTI foi concebido para identificar correctamente estas variantes como SA Entre as amostras eleg veis inclu das nas an lises de dados apresentadas neste relat rio um total de 16 isolados correspondem ao perfil de cassete vazia originando resultados de testes de spa e SCC mec positivos mas sem detec o de mecA Ct 0 conforme se mostra na Tabela 7 Verificou se que quinze 15 das 16 amostras eram isolados verdadeiros negativos VN em termos de MRSA relativamente cultura e 14 das 16 amostras foram identificadas como isolados verdadeiros positivos VP em termos de SA relativamente cultura Um isolado foi identificado como MRSA pela cultura e 2 isolados foram identificados pela cultura como sendo negativos em termos de MRSA e SA 301 0190 Rev C February 2012 115 Portugu s Tabela 7 Desempenho MRSA SA SSTI vs cultura de refer ncia Variantes de cassete vazia N do Xpert spa mecA SCCmec Xpert vs cultura participante Resultado Ct Ct Ct Cultura MRSA SA 1 SA 23 6 0 26 0 SA VN VP 2 SA 14 7 0 16 5 SA VN VP 3 SA 20 5 0 34 0 SA VN VP 4 SA 18 4 0 21 0 SA VN VP 5 SA 15 6 0 28 4 MRSA EN VP 6 SA 17 2 0 31 6 SA VN VP 7 SA 34 1 0 35 6 Neg VN FP 8 SA 29 1 0 33 0 SA VN VP 9 SA 12 7 0 23 5 SA VN VP 10 SA 18
119. e un risultato del test ci pu verificarsi per esempio quando l operatore ha interrotto un analisi in corso e MRSA NO RESULT SA NO RESULT SPC NO RESULT Probe Check NA non applicabile 90 301 0190 Rev C February 2012 Motivi per ripetere il saggio Motivi per ripetere il saggio Ripetere Panalisi utilizzando una cartuccia nuova non riutilizzare la cartuccia e dei reagenti nuovi Eseguire la procedura di ripetizione delPanalisi entro 3 ore da un risultato indeterminato Un risultato INVALID NON VALIDO indica che il controllo SPC non riuscito Il campione non stato elaborato correttamente o la PCR era inibita Un risultato ERROR ERRORE indica che il controllo per il controllo sonda non riuscito e il saggio stato interrotto probabilmente a causa del riempimento scorretto della provetta di reazione stato rilevato un problema di integrit della sonda o sono stati superati me imiti della pressione massima Un risultato NO RESULT NESSUN RISULTATO indica che sono stati raccolti dati insufficienti Per esempio l operatore ha interrotto un analisi in corso Se il CQ esterno non funziona secondo le previsioni ripetere il test di controllo esterno e o contattare Cepheid per l assistenza Per ripetere l analisi Se l analisi viene ripetuta entro 3 ore da un risultato incerto 1 Trasferire il contenuto restante dalla camera S ad un nuovo reagente di eluizione utilizzando una pi
120. ecci n ocular y cut nea Recogida transporte y almacenamiento de muestras Las muestras de infecciones de piel y tejidos blandos se pueden tomar con el Dispositivo de recogida de muestras Cepheid de acuerdo con los procedimientos est ndar del centro del usuario Los hisopos con las muestras se colocan de nuevo en el tubo de transporte de pl stico se recomienda medio l quido Stuarts Dispositivo de recogida de muestras Cepheid o Copan se almacenan a temperatura ambiente y se env an al rea de pruebas de GeneXpert para procesarlas en el plazo del d a siguiente al env o Los hisopos restantes sin analizar destinados al cultivo microbiol gico deben colocarse en sistemas de transporte apropiados y realizar el cultivo en un plazo de 4 d as Si no se env an antes del d a siguiente la muestra deber transportarse en hielo Como alternativa los hisopos se pueden almacenar a 2 8 C para analizarlos en el plazo m ximo de 5 d as Cultivo microbiol gico Para los m todos de cultivo SSTI siga los actuales procedimientos operativos est ndar del laboratorio Para los cultivos los hisopos restantes sin analizar deben colocarse en sistemas de transporte apropiados y realizar el cultivo en un plazo de 4 d as 301 0190 Rev C February 2012 65 Espa ol Procedimiento Preparaci n del cartucho Importante Inicie la prueba en un plazo de 15 minutos despu s de a adir los reactivos al cartucho Para a adir la muestra y el react
121. ecido reflejado en la literatura 10 11 12 13 14 La tasa de positivos de MRSA tambi n fue inferior aunque en menor medida p 0 022 En el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI no se observ una reducci n de positivos cuando se hab an utilizado antibi ticos ni tampoco se observ ninguna inhibici n en presencia de antibi ticos t picos consulte Sustancias interferentes Las menores tasas de positivos en el cultivo de MRSA y SA en presencia de antibi ticos explicaron las tasas de falso positivos m s elevadas de lo esperado que se obtuvieron en el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Cinco 5 de los 246 cultivos positivos de MRSA ten an infecciones mixtas por MRSA y SA Xpert MRSA SA SSTI identific 3 de las 5 infecciones mixtas como MRSA positiva y 2 de las 5 como SA positivo MRSA negativo En las tablas 4 a 6 se resume el rendimiento del ensayo Xpert MRSA SA SSTI 301 0190 Rev C February 2012 73 Espa ol Tabla 4 Rendimiento de MRSA SA en sujetos que no usaban antibi ticos 3 semanas antes de la recogida de la muestra frente a cultivo de referencia Cultivo MRSA SA MRSA Neg Sin Total crecimiento MRSA 137 2 6 145 3 SA MRSA 3b 79 16 98 SA 6 4 188 198 Total 146 85 210 441 2 1 de las 137 era una infecci n mixta por MRSA y SA 2 de las 3 eran infecciones mixtas por MRSA y SA Porcentaje de correspondencia positiva MRSA 93 8 95 Intervalo de confianza 88 6 97 1 Porcentaje de co
122. ecte transport et stockage d chantillons Les chantillons d infections de la peau et des tissus mous sur couvillons peuvent tre pris l aide du dispositif de collecte des chantillons de Cepheid conform ment aux pratiques standard de votre institution Les couvillons sont replac s dans le tube de transport en plastique milieu de Stuart liquide dispositif de collecte des chantillons de Cepheid ou dispositif recommand de Copan stock s temp rature ambiante et envoy s la zone de test GeneXpert pour traitement dans les 24 heures suivantes Les couvillons non test s restants pour culture microbiologique doivent tre plac s dans des syst mes de transport appropri s et mis en culture dans les 4 jours S il n est pas envoy dans les 24 heures l chantillon doit tre transport sur glace Les couvillons peuvent galement tre stock s une temp rature comprise entre 2 et 8 C pour tre test s dans les 5 jours maximum Culture microbiologique Pour les m thodes de culture concernant les infections de la peau et des tissus mous respectez les consignes d utilisation standard de votre laboratoire Pour la culture les chantillons sur couvillons non test s restants doivent tre plac s dans des syst mes de transport appropri s et mis en culture dans les 4 jours 301 0190 Rev C February 2012 23 Fran ais Proc dure Pr paration de la cartouche Important D marrez le test dans les 15 minutes
123. edos JP et al 1998 Diagnostic accuracy of protected specimen brush and bronchoalveolar lavage in nosocomial pneumonia impact of previous antimicrobial treatments Crit Care Med Feb 26 2 236 244 13 Kanegaye JT Soliemanzadeh P Bradley JS et al 2001 Lumbar puncture in pediatric bacterial meningitis defining the time interval for recovery of cerebrospinal fluid pathogens after parenteral antibiotic pretreatment Pediatrics 108 5 1169 1174 14 Brook I Gober A 2005 Effects of amoxicillin and cefdinir on nasopharyngeal bacterial flora Arch Otolaryngol Head Neck Surg Sep 131 785 787 15 Nadarajah J et al Identification of different clonal complexes and diverse amino acid substitutions in penicillin binding protein 2 PBP2 associated with borderline oxacillin resistance in Canadian Staphylococcus aureus isolates J of Med Micro 2006 55 1675 1683 16 Ribeiro J et al Misclassification of Susceptible Strains of Staphylococcus aureus as Methicillin Resistant aureus by a rapid Automated Susceptibility Testing System 1999 37 1619 1620 Assistenza Per ricevere assistenza contattare Cepheid a uno dei seguenti recapiti Quando si contatta l Assistenza tramite telefono o posta elettronica accertarsi di fornire il numero di serie dello strumento e PID del lotto reagenti Unione Europea Per l assistenza tecnica utilizzare i seguenti recapiti Tel 33 563 82 53 19 E mail techsupport cepheideurope fr Altri Paesi
124. eigt 6 Auf Start Test Test starten klicken Kennwort in das angezeigte Dialogfeld eingeben 7 Die T r des Instrumentenmoduls mit der gr n blinkenden Anzeige ffnen und die Kartusche laden 8 Die T r schlie en Der Test beginnt und die gr ne Anzeige h rt auf zu blinken Wenn der Test abgeschlossen ist geht die Lampe aus 9 Die Modult r kann erst ge ffnet und die Kartusche entnommen werden wenn das System die T r entriegelt hat 44 301 0190 Rev C February 2012 Qualit tskontrolle 10 Die gebrauchten Kartuschen sind gem den Standardverfahren Ihrer Institution in entsprechenden Probenabfallbeh ltern zu entsorgen Anzeigen und Drucken der Ergebnisse Siehe das Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System f r genaue Informationen zum Anzeigen und Drucken der Ergebnisse Qualit tskontrolle Integrierte Qualit tskontrollen Zu jedem Test geh ren eine Probenverarbeitungskontrolle SPC oder BG3 im Fenster mit der Ergebnisanzeige f r Benutzer mit Administratorrechten und eine Sondenpr fungskontrolle PCC Probenverarbeitungskontrolle SPC Stellt sicher dass die Probe ordnungsgem verarbeitet wurde Die SPC enth lt Sporen des Bacillus globigii in Form getrockneter Sporen der in jeder Kartusche enthalten ist um eine angemessene Verarbeitung der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchungsprobe sicherzustellen Bei der SPC wird berpr ft ob die Lyse der Staphylococcus aureus Bakterien durchgef hrt wurde sofern Organi
125. ekt als MRSA negativ und SA positiv Bei beiden getesteten Zellkonzentrationen wurden nur Ct Werte f r spa und SCC mec gemeldet Es wurden keine mecA Signale festgestellt Studie zur Kontaminations bertragung Eine Studie wurde durchgef hrt um nachzuweisen dass die in sich abgeschlossenen Einweg Testkartuschen des GeneXpert Systems verhindern dass Kontaminationen von deutlich positiven Proben auf negative Proben die danach im selben GeneXpert Modul untersucht werden bertragen werden Bei dieser Studie wurde eine negative Probe unmittelbar nach einer sehr stark MRSA positiven Probe ca 107 CFU Test im selben GeneXpert Modul untersucht Dies wurde 20 Mal zwischen 2 GeneXpert Modulen in insgesamt 42 Tests wiederholt Es ergaben sich keine Hinweise auf eine Kontaminations bertragung Alle 21 positiven Proben wurden korrekt als MRSA positiv SA positiv erkannt Alle 21 negativen Proben wurden korrekt als MRSA negativ SA negativ erkannt Reproduzierbarkeit Eine Auswahl von 10 Proben mit unterschiedlichen Konzentrationen von SA MRSA und Staphylococcus epidermidis negativ wurde an 10 verschiedenen Tagen an jedem der drei Standorte zweifach getestet 10 Proben x 2 x 10 Tage x 3 Standorte An jeder der 3 Testeinrichtungen wurden Xpert MRSA SA Kits derselben Charge verwendet Xpert MRSA SA Tests wurden entsprechend dem Xpert MRSA SA SSTI Untersuchungsverfahren durchgef hrt Tabelle 10 Zusammenfassung der Reproduzierbarkeitsergebnisse Pr
126. el DNA f r SCCmec wurde nachgewiesen und Ziel DNA f r mecA wurde nicht nachgewiesen leere Kassette SPC NA keine Angaben die SPC wird ignoriert da die SA Amplifikation u U mit dieser Kontrolle konkurriert Sondenpr fung PASS BESTANDEN alle Sondenpr fungen wurden bestanden Ein positives Testergebnis weist nicht zwingend auf das Vorhandensein lebensf higer Organismen hin Es l sst jedoch vermuten dass MRSA oder SA vorhanden sind MRSA NEGATIVE SA NEGATIVE MRSA NEGATIV SA NEGATIV Es wurde keine Staphylococcus aureus DNA Zielsequenz nachgewiesen Die SPC erf llt die Akzeptanzkriterien NEGATIVE Es wurde keine Staphylococcus aureus Ziel DNA spa nachgewiesen Ziel DNA f r mecA wurde m glicherweise nachgewiesen oder nicht oder Ziel DNA f r SCCmec wurde m glicherweise nachgewiesen oder nicht SPC PASS BESTANDEN die SPC verf gt ber einen Grenzwert innerhalb des g ltigen Bereichs und einen Endpunkt ber der Mindesteinstellung des Endpunkts Sondenpr fung PASS BESTANDEN alle Sondenpr fungen wurden bestanden Ein Falsch negatives Ergebnis Ergebnis MRSA NEGATIV SA POSITIV anstelle von MRSA POSITIV SA POSITIV k nnte sich ergeben wenn MRSA und SA in einem MRSA SA Verh ltnis von 1 1x10 oder gr er in der Probe vorliegen In klinischen Studien lagen bei 5 von 246 MRSA positiven Kulturen Mischinfektionen von MRSA und SA vor Xpert MRSA SA SSTI identifizierte
127. el MRSA puede competir con este control Probe Check PASS APTA Todos los resultados de la comprobaci n de sonda son aptos 301 0190 Rev C February 2012 69 Espa ol MRSA NEGATIVE SA POSITIVE MRSA NEGATIVO SA POSITIVO El Ensayo Xpert MRSA SA SSTI puede detectar ADN de MRSA y o SA de organismos no viables No se detectan secuencias de ADN diana del MRSA Se detecta secuencia de ADN diana del SA SA POSITIVE El SA diana spa tiene un Uc dentro del rango v lido y un punto final por encima de los par metros m nimos No se detecta el ADN diana del SCCmec puede que se detecte o no el ADN diana del mecA o bien se detecta el ADN del SCC mec y no se detecta el ADN diana del mecA casete vac o SPC NA no aplicable El CPM se ignora porque la amplificaci n del SA puede competir con este control Probe Check PASS Todos los resultados de la comprobaci n de sonda son aptos Un resultado de prueba positivo no indica necesariamente la presencia de organismos viables No obstante se puede suponer la presencia de MRSA o SA MRSA NEGATIVE SA NEGATIVE MRSA NEGATIVO SA NEGATIVO No se detecta secuencia de ADN diana del Staphylococcus aureus El CPM cumple los criterios de aceptaci n NEGATIVE No se detecta ADN diana del Staphylococcus aureus spa Puede que se detecte o no el ADN diana del mecA o puede que se detecto o no el ADN diana del SCC mec SPC PASS El CPM tiene un Uc dentro del ran
128. el m dico como ayuda para la detecci n de MRSA SA en infecciones de piel y tejidos blandos El Ensayo Xpert MRSA SA SSTI no est dise ado para supervisar tratamientos de infecciones por MRSA SA Los cultivos concomitantes de SA y MRSA son necesarios para recuperar organismos destinados a pruebas de sensibilidad o a clasificaciones epidemiol gicas Resumen y explicaci n El Staphylococcus aureus SA es un pat geno oportunista humano bien documentado adem s de un pat geno nosocomial principal responsable de diversas enfermedades Entre ellas infecciones de la piel y los tejidos blandos como carbuncos y fur nculos e infecciones de heridas postoperatorias en distintas localizaciones Como pat geno nosocomial el S aureus ha sido una causa importante de morbilidad y mortalidad Las infecciones por aureus son a menudo agudas y piog nicas y si no reciben tratamiento pueden propagarse a tejidos circundantes o mediante bacteriemia a lugares metast ticos afectando a otros rganos Algunas de las infecciones m s graves producidas por el S aureus son bacteriemia neumon a osteomielitis endocarditis aguda s ndrome de shock t xico intoxicaci n por alimentos miocarditis pericarditis cerebritis meningitis corioamnionitis s ndrome de la piel escaldada y abscesos en m sculos tracto urogenital sistema nervioso central y varios rganos intraabdominales A principios de la d cada de 1950 la adquisici n y expansi n de los pl
129. empenho do ensaio Xpert MRSA SA SSTI resumido nas tabelas 4 a 6 301 0190 Rev C February 2012 113 Portugu s Tabela 4 Desempenho MRSA SA em participantes sem utiliza o de antibi ticos nas 3 semanas anteriores recolha vs cultura de refer ncia Cultura MRSA SA MRSA Neg Sem Total crescimento MRSA 137 2 6 145 3 SA MRSA 3b 79 16 98 SA 6 4 188 198 Total 146 85 210 441 21 das 137 apresentava uma infec o mista por MRSA e SA 2 das 3 apresentavam infecc es mistas por MRSA e SA Concord ncia de percentagem positiva MRSA 93 8 intervalo de confian a de 95 88 6 97 1 Concord ncia de percentagem negativa MRS A 97 3 intervalo de confian a de 95 94 7 98 8 Concord ncia de percentagem positiva SA MRSA 95 7 intervalo de confian a de 95 92 2 97 9 Concord ncia de percentagem negativa SA MRSA 89 5 intervalo de confian a de 95 84 6 93 3 Entre os participantes que n o tinham utilizado antibi ticos nas 3 semanas anteriores recolha de amostras o ensaio Xpert MRSA SA SSTI identificou 93 8 das amostras positivas para MRSA e 97 3 das amostras negativas para MRSA relativamente ao m todo de cultura de refer ncia e 95 7 das amostras positivas para SA e 89 5 das amostras negativas para SA relativamente ao m todo de cultura de refer ncia Entre estes participantes que n o tinham utilizado antibi ticos 96 8 427 44
130. en Iterferierende Substanzen In der Forschungsstudie zur Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung wurden bei 428 der 848 Proben Blut als Inhaltsstoff und bei 404 Proben andere unspezifische Substanzen als Inhaltsstoffe verzeichnet die m glicherweise die Untersuchung beeintr chtigen k nnten Zu beachten ist dass manche Proben mehrere Typen potenzieller Verunreinigungen enthielten Fishers Exakte Iests die an den Daten aus Abstrichtupfern mit und ohne diese potenziell interferienden Substanzen durchgef hrt wurden zeigten dass deren Vorhandensein die Untersuchungsleistung nicht beeintr chtigte In einer nicht klinischen Studie wurden potenziell interferienden Substanzen die in klinischen Proben von Haut und Weichgewebeinfektionen vorhanden sein k nnen im direkt im Bezug auf die Leistung der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung gepr ft Zu den potenziell interferienden Substanzen bei Haut und Weichgewebeinfektionen geh ren ohne darauf beschr nkt zu sein Blut Eiter Plasma topische antibiotische antiseptische schmerzstillende Salben Wundreinigungsmittel und Tinkturen Diese Substanzen werden in Tabelle 1 und 2 mit den getesteten aktiven Inhaltsstoffen und Konzentrationen aufgef hrt Eine Inhibition der MRSA SA SSTI Untersuchung wurde bei folgenden Substanzen beobachtet StaphA Septic Wundsalbe 5 w v Hydrocortison 5 w v und antibakterielle Handwaschl sung 5 w v Proben die Mercurochrom enthalten d rfen wegen dessen fluoreszie
131. en alle 7 BORSA Isolate auch die anscheinend leere Kassette in der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung sowohl bei hohen als auch bei niedrigen Zellkonzentrationen als MRSA negativ SA positiv nachgewiesen Es wurden keine mecA Signale erkannt Diese Ergebnisse verdeutlichen dass mit der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung BORSA St mme korrekt als MRSA negativ SA positiv erkannt werden und dass kein falsches positives MRSA Testergebnis gemeldet wird Analytische Sensitivit t Studien zur Nachweisgrenze Studien wurden zur Ermittlung der 95 Konfidenzintervalle der analytischen Nachweisgrenze LoD f r Zellen von Staphylococcus aureus SA und Methicillin resistentem Staphylococcus aureus MRSA die in einer Wundsurrogatmatrix menschlichen Ursprungs verd nnt wurden durchgef hrt Die Wundsurrogatmatrix bestand aus einem Leukozytenkonzentrat das durch Zentrifugieren aus Vollblut hergestellt wurde Die Matrix enthielt ferner Erythrozyten und Plasma sowie eine geringe Menge Antikoagulanzien CPD oder CPDA 1 Die Nachweisgrenze ist definiert als die niedrigste Anzahl der kolonienbildenden Einheiten CFU pro Probe die reproduzierbar von negativen Proben mit einer Zuverl ssigkeit von 95 unterschieden werden k nnen oder als die niedrigste Konzentration bei der 19 von 20 Replikaten positiv waren F r MRSA wurden 20 Replikate bei jeder getesteten MRSA Konzentration CFU Abstrich f r 6 einzelne Isolate der SCCmec Typen I II III IVa V und V
132. en el tubo que contiene el reactivo de diluci n tap n negro El hisopo KWIK STIK est preparado para la prueba del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI os mM Si el CC externo no da el resultado esperado repita la prueba de control externo o p ngase en contacto con Cepheid para recibir ayuda En las figuras 2 a 5 se ilustran ejemplos de resultados del ensayo Xpert MRSA SA SSTI 301 0190 Rev C February 2012 67 Espa ol Figura 3 Ejemplo de un resultado negativo de MRSA positivo de SA 68 301 0190 Rev C February 2012 Interpretaci n de los resultados Test and Analyte Result Detail Errors History Assay Name MRSA SASSTI Assay Version 2 Figura 5 Ejemplo de resultado no v lido Interpretaci n de los resultados El sistema GeneXpert Dx interpola los resultados a partir de las se ales de fluorescencia medidas y los algoritmos de c lculo integrados y los muestra en la ventana View Results Ver resultados Los resultados posibles son MRSA POSITIVE SA POSITIVE MRSA POSITIVO SA POSITIVO El Ensayo Xpert MRSA SA SSTI puede detectar ADN de MRSA y o SA de organismos no viables Se detectan secuencias de ADN diana del MRSA Se detecta secuencia de ADN diana del SA e MRSA POSITIVE Todos los MRSA diana spa mecA y SCCmec tienen un umbral de ciclo Uc dentro del rango v lido y un punto final por encima de los par metros m nimos SPC NA no aplicable El CPM se ignora porque la amplificaci n d
133. ence and Risk Factors CID 36 131 7 Donnio P Y F vrier F Bifani P et al 2007 Molecular and epidemiological evidence for the spread of multiresistant methicillin susceptible Staphylococcus aureus strains in hospitals Antimicrobial Agents Chemother 51 4342 4350 8 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 2 7 Clinical and Laboratory Standards Institute fr her National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 siehe letzte Ausgabe pa o Ewig S Schlochtermeier M G ke N et al 2002 Applying sputum as a diagnostic tool in pneumonia limited yield minimal impact on treatment decisions Chest 121 1486 1492 pa 1 RG Dotson and SK Pingleton 1993 The effect of antibiotic therapy on recovery of intracellular bacteria from bronchoalveolar lavage in suspected ventilator associated nosocomial pneumonia Chest 103 541 546 301 0190 Rev C February 2012 59 Deutsch 16 Souweine B Veber B Bedos JP et al 1998 Diagnostic accuracy of protected specimen brush and bronchoalveolar lavage in nosocomial pneumonia impact of previous antimicrobial treatments Crit Care Med Feb 26 2 236 244 Kanegaye JT Soliemanzadeh P Bradley JS et al 2001 Lumbar puncture
134. ensibile alla meticillina rispettivamente del 33 e del 16 A ci si aggiungono le aumentate preoccupazioni relative ai costi per il trattamento delle infezioni da MRSA Nel tentativo di limitare la diffusione di queste infezioni si stanno mettendo a punto e realizzando strategie e politiche di controllo negli ambienti sanitari Il controllo del MRSA l obiettivo principale della maggior parte dei programmi di controllo delle infezioni nosocomiali Attualmente il metodo di rilevamento standard per PMRSA e PSA la coltura che molto laboriosa e pu richiedere diversi giorni prima di produrre un risultato definitivo 23 45 6 7 Principio della procedura Il sistema GeneXpert Dx consente di automatizzare e integrare la purificazione dei campioni l amplificazione degli acidi nucleici e il rilevamento della sequenza bersaglio in campioni semplici e complessi utilizzando saggi PCR in tempo reale Il sistema composto da uno strumento un personal computer e dal software gi installato per l esecuzione di analisi e per la visualizzazione dei risultati Il sistema richiede l uso di cartucce monouso nelle cartucce sono contenuti i reagenti per la PCR e sempre nella cartuccia avviene la reazione di PCR Poich le cartucce sono indipendenti il rischio di contaminazione crociata tra campioni ridotto al minimo Per una descrizione completa del sistema vedere il Manuale dell operatore di GeneXpert Dx System Il saggio Xpert MRSA SA SSTI
135. er uso diagnostico in vitro Nome registrato Xpert MRSA SA SSTI Nome comune o usuale Saggio MRSA SA SSTI Uso previsto Il saggio Cepheid Xpert MRSA SA per le infezioni della cute e dei tessuti molli saggio Xpert MRSA SA SSTT eseguito su GeneXpert Dx System un test diagnostico in vitro qualitativo progettato per il rilevamento dello Staphylococcus aureus SA e dello Staphylococcus aureus resistente alla meticillina MRSA da campioni di infezioni della cute e dei tessuti molli Il test utilizza la PCR Polymerase Chain Reaction reazione a catena della polimerasi real time automatizzata per rilevare il DNA del MRSA SA Il saggio Xpert MRSA SA SSTI indicato per l utilizzo in associazione ad altri test di laboratorio quali colture microbiologiche e ai dati clinici a disposizione del medico come ausilio per il rilevamento del MRSA SA dalle infezioni della cute e dei tessuti molli Il saggio Xpert MRSA SA SSTI non destinato al monitoraggio del trattamento delle infezioni da MRSA SA Le colture concomitanti per SA e MRSA sono necessarie per recuperare gli organismi per test di sensibilit o per la tipizzazione epidemiologica Riepilogo e spiegazione Lo Staphylococcus aureus SA un patogeno opportunistico dell uomo ben noto ed anche un importante patogeno nosocomiale causa di diverse malattie Alcune malattie coinvolgono le infezioni della cute e dei tessuti molli tra cui carbonchio cutaneo e foruncoli e le infezione da feri
136. es bem caracterizadas de Staphylococcus aureus com baixo n vel de resist ncia oxacilina BORSA do ingl s borderline oxacillin resistant Staphylococcus aureus incluindo uma de cassete vazia aparente consultar acima O Staphylococcus aureus resistente meticilina resistente a todos os f rmacos beta lact micos por via da prote na alternativa de liga o penicilina PBP2a codificada pelo mec As estirpes BORSA s o negativas em termos de mecA mas exibem uma concentra o inibit ria m nima CIM de oxacilina gt 2 e lt 8 pg ml especialmente importante distinguir os MRSA dos BORSA para impedir a utiliza o desnecess ria e inadequada de vancomicina e a implementa o de precau es de isolamento n o justificadas para pacientes infectados com uma estirpe sens vel aos beta lact micos Sob as condi es deste estudo todos os 7 isolados BORSA incluindo o isolado de cassete vazia aparente foram indicados como negativos para MRSA e positivos para SA tanto em altas como em baixas concentra es celulares utilizando o ensaio Xpert MRSA SA SSTI N o foram registados sinais de mecA Estes resultados demonstraram que utilizando o ensaio Xpert MRSA SA SSTI uma estirpe BORSA ser correctamente identificada como MRSA negativa SA positiva e n o reportar um teste falso positivo em termos de MRSA 116 301 0190 Rev C February 2012 Desempenho anal tico Sensibilidade anal tica Estudos sobre o limite
137. es de estimaci n y confianza se determinaron mediante una regresi n log stica con datos n mero de resultados positivos por n mero de r plicas en cada nivel tomados en todo el intervalo de UFC hisopo analizados Los intervalos de confianza se determinaron con estimaciones de probabilidad m xima seg n los par metros del modelo log stico utilizando la matriz de varianza covarianza de muestras de gran tama o Las estimaciones puntuales del LD y los intervalos de confianza superior e inferior del 95 para cada SA y cada tipo SCCmec de SARM analizados se resumen en las tablas 8 y 9 Tabla 8 Intervalos de confianza del 95 para LoD anal tico SA Id de cepa de SA PFGE LoD Inferior Superior UFC hisopo 95 IC 95 IC N7129 USA900 51 42 69 102 04 USA1200 87 76 109 29213 desconocido 123 97 188 Tabla 9 Intervalos de confianza del 95 para LoD anal tico MRSA Id de cepa de SCCmec LoD Inferior Superior MRSA Tipo PFGE UFC hisopo 95 IC 95 IC 64 4176 I USA500 221 195 271 N315 Il USA100 122 106 152 11373 IN desconocido 124 115 155 MW2 IVa USA400 82 68 113 ST59 MRSA V V USA1000 242 208 305 HDE288 VI USA800 183 161 223 Los resultados de este estudio indican que el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI arrojar un resultado positivo de SA el 95 de las veces con una confianza del 95 para un hisopo de herida que contenga 150 UFC y un resultado positivo de MRSA el 95 de las veces con una confianza del 95 para
138. este folheto necess rio para evitar resultados errados Como a detec o de MRSA e SA depende do n mero de organismos presentes na amostra os resultados fidedignos dependem da correcta colheita manuseamento e conserva o da amostra Muta es ou polimorfismos nas zonas de liga o do primer ou da sonda podem afectar a detec o de variantes de MRSA novas ou desconhecidas resultando num resultado falso negativo Em amostras que contenham tanto MRSA como SA o ensaio Xpert MRSA SA SSTI pode n o detectar os organismos SA resistentes meticilina No ensaio cl nico central o ensaio Xpert MRSA SA SSTI n o detectou 2 das 5 amostras de cultura positiva de MRSA em situa es em que existiam infec es mistas de MRSA SA documentadas Numa cultura mista o limite de detec o LoD anal tico do MRSA vari vel quando est o presentes concentra es extremamente elevadas de SA Foi observada competi o por parte de SA num r cio MRSA SA de 1 1x10 Nos estudos cl nicos 5 das 246 culturas positivas de MRSA apresentavam infec es mistas de MRSA e SA O Xpert MRSA SA SSTI identificou 3 das 5 infec es mistas como MRSA positivo e 2 das 5 infec es como SA positivo MRSA negativo Foi observada inibi o do ensaio MRSA SA SSTI com as subst ncias seguintes StaphA Septic 5 p v hidrocortisona 5 p v e desinfectante antibacteriano para as m os 5 p v N o podem ser utilizadas amostras contendo mercurocromo devido
139. eti o de teste no prazo de 3 horas ap s a obten o de um resultado indeterminado Um resultado INV LIDO indica que o controlo SPC falhou A amostra n o foi processada correctamente ou o PCR foi inibido Um resultado com ERRO indica que o controlo de verifica o da sonda falhou e que o ensaio foi cancelado possivelmente devido ao enchimento inadequado do tubo de reac o detec o de um problema de integridade da sonda de reagente ou porque os limites m ximos da press o foram excedidos SEM RESULTADO indica que os dados recolhidos foram insuficientes Por exemplo o operador parou um teste que estava a decorrer Se um controlo de qualidade externo n o funcionar como esperado repita o teste de controlo externo e ou contacte a Cepheid para obter assist ncia Para efectuar a repeti o do teste Se efectuar a repeti o do teste no prazo de 3 horas ap s a obten o de um resultado indeterminado 1 Transfira o conte do restante da c mara S para um novo reagente de elui o utilizando uma pipeta de transfer ncia descart vel 2 Agite em vortex e adicione todo o conte do do reagente de elui o c mara S do novo cartucho do ensaio MRSA SA SSTI 3 Feche a tampa e inicie o novo teste Se a repeti o do teste n o puder ser efectuada num prazo de 3 horas utilize uma nova amostra Limita es O desempenho do ensaio Xpert MRSA SA SSTI foi validado utilizando apenas os procedimentos fornecidos neste folheto Qual
140. euve de contamination carry over n a t trouv e Les 21 chantillons positifs ont t correctement rapport s comme positifs au SARM positifs au SA Les 21 chantillons n gatifs ont t correctement rapport s comme n gatifs au SARM n gatifs au SA Reproductibilit Une s rie de 10 chantillons pr sentant des concentrations variables de SA de SARM et de Staphylococcus epidermidis n gatif ont t test s en deux exemplaires pendant 10 jours distincts sur chacun des trois sites 10 chantillons x 2 fois par jour x 10 jours x 3 sites Un lot du kit Xpert MRSA SA a t utilis sur chacun des 3 sites de test Les tests Xpert MRSA ont t r alis s conform ment la proc dure de test Xpert MRSA SA SSTI Tableau 10 R sum des r sultats de reproductibilit ID de l chantillon Site 1 Site 2 Site 3 Accord total N g SERM 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 N g lev SA 100 20 20 100 20 20 90 18 20 96 7 58 60 Pos faible SA 100 20 20 100 20 20 95 19 20 98 3 59 60 N g lev SARM1 100 20 20 90 18 20 100 20 20 96 6 58 60 Pos faible SARM1 100 20 20 100 20 20 90 18 20 96 6 58 60 N g lev SARM2 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Pos faible SARM2 100 20 20 95 19 20 95 19 20 96 6 5
141. fections Approved Guideline Document M29 consultar la ltima edici n 10 Ewig S Schlochtermeier M G ke N et al 2002 Applying sputum as a diagnostic tool in pneumonia limited yield minimal impact on treatment decisions Chest 121 1486 1492 11 RG Dotson y SK Pingleton 1993 The effect of antibiotic therapy on recovery of intracellular bacteria from bronchoalveolar lavage in suspected ventilator associated nosocomial pneumonia Chest 103 541 546 12 Souweine B Veber B Bedos JP et al 1998 Diagnostic accuracy of protected specimen brush and bronchoalveolar lavage in nosocomial pneumonia impact of previous antimicrobial treatments Crit Care Med Feb 26 2 236 244 13 Kanegaye JT Soliemanzadeh P Bradley JS et al 2001 Lumbar puncture in pediatric bacterial meningitis defining the time interval for recovery of cerebrospinal fluid pathogens after parenteral antibiotic pretreatment Pediatrics 108 5 1169 1174 14 Brook I Gober A 2005 Effects of amoxicillin and cefdinir on nasopharyngeal bacterial flora Arch Otolaryngol Head Neck Surg Sep 131 785 787 15 Nadarajah J et al Identification of different clonal complexes and diverse amino acid substitutions in penicillin binding protein 2 PBP2 associated with borderline oxacillin resistance in Canadian Staphylococcus aureus isolates J of Med Micro 2006 55 1675 1683 16 Ribeiro J et al Misclassification of Susceptible Strains of Staphylococcus aureus as Me
142. galement t r duit dans une moindre mesure p 0 022 Le baisse du taux de positivit n a pas t observ e avec le test Xpert MRSA SA SSTI en association avec des antibiotiques En outre aucune inhibition n a t observ e dans le test en pr sence d antibiotiques topiques voir Substances parasites La baisse du taux de positivit des cultures pour le SARM et le SA en presence d antibiotiques a entra n l obtention d un taux de faux r sultats positifs sup rieur aux attentes observ avec le test Xpert MRSA SA SSTI Cinq 5 des 246 cultures positives au SARM pr sentaient des infections mixtes au SARM et au SA Xpert MRSA SA SSTI a identifi 3 des 5 infections mixtes comme positives au SARM et les 2 autres comme positives au SA n gatives au SARM Les performances du test Xpert MRSA SA SSTI sont r sum es dans les tableaux 4 6 301 0190 Rev C February 2012 31 Fran ais Tableau 4 Performances de d tection de SARM SA chez les sujets n utilisant pas d antibiotiques dans les 3 semaines pr c dant la collecte des chantillons par rapport la culture de r f rence Culture SARM SA SARM N g pas de Total croissance SARM 137 2 6 145 3 SA SARM 3b 79 16 98 SA 6 4 188 198 Total 146 85 210 441 2 Un des 137 chantillons pr sentait une infection mixte au SARM et au SA Deux des 3 chantillons pr sentaient une infection mixte au SARM et au SA Correspondance de pourcent
143. gnummer h ngt von der Konfiguration ab GeneXpert Instrument Computer Barcode Leseger t und Benutzerhandbuch Drucker Kompatibilit tshinweise finden Sie im Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System Cepheid Abstrichtupfer 900 0370 oder entsprechendes Copan Produkt Vortex Mixer Einweg bertragungspipetten Sterile Gaze 42 301 0190 Rev C February 2012 Warnungen und Vorsichtshinweise Erh ltliche Materialien die nicht im Lieferumfang enthalten sind KWIK STIKs von MicroBiologics Bestellnr 0158MRSA und Bestellnr 0360SA als Positivkontrollen und Bestellnr 0371MSSE Methicillin sensitiver Staphylococcus epidermidis als Negativkontrolle Warnungen und Vorsichtshinweise e gt Alle biologischen Patientenproben und auch die gebrauchten Kartuschen sind als potenziell infekti s zu behandeln Da es oft unm glich ist potenziell infekti se Patientenproben zu erkennen sind alle biologischen Patientenproben gem den blichen Vorsichtsma nahmen zu behandeln Die Richtlinien zum Umgang mit Proben sind bei der US amerikanischen CDC Center for Disease Control and Prevention US amerikanische staatliche Beh rde f r den Schutz der Bev lkerung vor Krankheiten und Seuchen und beim Clinical and Laboratory Standards Institute US amerikanisches Institut f r Standards in Klinik und Labor fr her National Committee for Clinical Laboratory Standards erh ltlich In Mischkulturen aus MRSA SA und anderen Organis
144. go v lido y un punto final por encima de los par metros m nimos Probe Check PASS Todos los resultados de la comprobaci n de sonda son aptos Se podr a obtener un falso negativo para MRSA un resultado MRSA NEGATIVE SA POSITIVE en lugar de MRSA POSITIVE SA POSITIVE si en la muestra aparecen MRSA y SA en una proporci n de MRSA SA de 1 1x10 o superior En los estudios cl nicos 5 de los 246 cultivos positivos de MRSA ten an infecciones mixtas por MRSA y SA Xpert MRSA SA SSTI identific 3 de las 5 infecciones mixtas como MRSA positivas y 2 de las 5 como SA positivas MRSA negativas INVALID INV LIDO No se puede determinar la presencia o ausencia de secuencias de ADN diana del MRSA SA Repita la prueba de acuerdo con las instrucciones de la siguiente secci n El CPM no cumple los criterios de aceptaci n la muestra no se ha procesado correctamente o se ha inhibido la reacci n en cadena de la polimerasa e INVALID No se puede determinar la presencia o ausencia de ADN de Staphylococcus aureus SPC FAIL FALLA SPC El resultado del CPM diana es negativo la Uc de CPM no se encuentra dentro del rango v lido y el punto final est por debajo de los par metros m nimos Probe Check PASS Todos los resultados de la comprobaci n de sonda son aptos ERROR No se puede detectar la presencia o ausencia de secuencias de ADN diana del MRSA SA diana Repita la prueba de acuerdo con las instrucciones de la s
145. h hung der Krankheitsziffern und Sterblichkeit f hren nehmen zu Die Mortalit tsraten die der MRSA Bakteremie und der Bakteremie durch die Methicillin empfindliche Variante von S aureus SA zugeschrieben werden belaufen sich auf 33 bzw auf 16 Auch die steigenden Kosten von MRSA Infektionen sind besorgniserregend In Einrichtungen des Gesundheitswesens wird daher durch die Umsetzung von Kontrollstrategien und regeln versucht die weitere Verbreitung dieser Infektionen einzud mmen Die Kontrolle von MRSA Infektionen ist einer der Hauptschwerpunkte in Programmen gegen Krankenhausinfektionen Zurzeit ist die Ansetzung von Kulturen die Standardmethode zum Nachweis von MRSA und SA Bei dieser sehr arbeitsaufwendigen Methode kann es allerdings mehrere Tage dauern bis ein definitives Ergebnis vorliegt 2345 6 7 Prinzipien der Prozedur Das GeneXpert Dx System automatisiert und integriert die Probenvorbereitung die Amplifizierung von Nukleins uren und die Detektion der Zielsequenz aus einfachen und komplexen Proben mittels Echtzeit PCR Tests Das System besteht aus einem Instrument und einem PC mit vorinstallierter Software die zur Ausf hrung von Tests und zur Anzeige der Ergebnisse dient Das System sieht die Verwendung von Einweg Testkartuschen vor die die PCR Reagenzien enthalten und in denen der PCR Prozess abl uft Da die Testkartuschen in sich abgeschlossen sind werden Kreuzkontaminationen minimiert Eine vollst ndige Beschreibung des S
146. heck PASS Contr le de la sonde r ussi tous les r sultats du contr le de la sonde sont r ussis Un r sultat de test positif indique pas forc ment la pr sence d organismes viables Cependant il suppose la pr sence du SARM ou SA MRSA NEGATIVE SA NEGATIVE SARM N GATIF SA N GATIF La s quence d ADN cible du Staphylococcus aureus n est pas d tect e Le CTE satisfait aux crit res d acceptation NEGATIVE N GATIF PADN cible du Staphylococcus aureus spa n est pas d tect LADN cible du mecd est d tect ou non ou l ADN cible du SCC mec est d tect ou non SPC PASS CTE r ussi le CTE pr sente un Ct compris dans la gamme valide et sa valeur finale se situe au dessus de la valeur finale minimale requise Probe Check PASS Contr le de la sonde r ussi tous les r sultats du contr le de la sonde sont r ussis Un faux r sultat n gatif pour le SARM r sultat MRSA NEGATIVE SA POSITIVE au lieu de MRSA POSITIVE SA POSITIVE peut tre obtenu en pr sence de SARM et de SA dans l chantillon avec un rapport SARM SA gal ou sup rieur 1 1x10 Dans les tudes cliniques 5 des 246 cultures positives au SARM pr sentaient des infections mixtes au SARM et au SA Xpert MRSA SA SSTI a identifi 3 des 5 infections mixtes comme positives au SARM et les 2 autres comme positives au SA n gatives au SARM INVALID non valide La presence ou Pabsence de s quences d ADN cibles du SARM SA ne pe
147. iante e caricare la cartuccia Chiudere lo sportello L analisi viene avviata e la spia verde cessa di lampeggiare Al termine dell analisi la spia si spegne Attendere che il sistema sblocchi il meccanismo di chiusura dello sportello prima di aprire lo sportello del modulo e rimuovere la cartuccia 10 Le cartucce utilizzate devono essere smaltite negli appositi contenitori per rifiuti in base alle pratiche standard dell istituto 86 301 0190 Rev C February 2012 Controllo di qualit Visualizzazione e stampa dei risultati Per istruzioni su come visualizzare e stampare i risultati vedere il Manuale dell operatore del sistema GeneXpert Controllo di qualit Controlli di qualit integrati Ciascuna analisi include un controllo elaborazione del campione SPCo BG3 nella schermata di visualizzazione dei risultati per l utente di livello amministratore e un controllo per il controllo sonda PCC Sample processing control SPC Controllo elaborazione del campione assicura la corretta elaborazione del campione LSPC contiene le spore del Bacillus globigii sotto forma di una tavoletta di spore secche in ogni cartuccia per verificare che l elaborazione del campione del saggio Xpert MRSA SA SSTI sia adeguata USPC verifica che sia avvenuta la lisi dello Staphylococcus aureus se gli organismi sono presenti e verifica l adeguatezza dell elaborazione del campione Inoltre questo controllo rileva l inibizione associata al campione
148. ico Sensibilidad anal tica Estudios de l mite de detecci n Se han llevado a cabo estudios para determinar el intervalo de confianza del 95 del l mite de detecci n LoD anal tico de c lulas de Staphylococcus aureus SA y c lulas de Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina MRSA diluidas en una matriz simuladora de heridas de origen humano La matriz simuladora de heridas se compon a de un concentrado de leucocitos preparado a partir de sangre total por centrifugaci n La matriz tambi n conten a gl bulos rojos y plasma y una cantidad apenas apreciable de anticoagulante CPD o CPDA 1 El l mite de detecci n se define como el n mero m s bajo de unidades formadoras de colonias UFC por muestra que puede distinguirse de forma reproducible a partir de muestras negativas con un 95 de confianza o la concentraci n m s baja a la que 19 de 20 r plicas sean positivas Para MRSA se analizaron r plicas de 20 en cada concentraci n de MRSA estudiada UFC hisopo para 6 cepas individuales representativas de los tipos I II III IVa V y VI del SCCmec Al caracterizarse con gel de electroforesis de campo pulsado PFGE se representaron USA100 la cepa m s com n adquirida en hospital y USA400 una de las cepas m s comunes adquiridas en la comunidad Para SA se analizaron r plicas de 20 en cada concentraci n de SA UFC hisopo para 3 cepas individuales de SA Se representaron los tipos USA900 y USA1200 Los nivel
149. icurezza del proprio istituto relative alla manipolazione di sostanze chimiche e di campioni biologici Il saggio Xpert MRSA SA SSTI riesce a rilevare DNA di MRSA e o SA da organismi non vitali La probabilit che ci si verifichi aumenta nei pazienti trattati con antibiotici Il saggio Xpert MRSA SA SSTI non fornisce risultati sui test di sensibilit antimicrobica necessario ulteriore tempo per eseguire la coltura e il test di sensibilit Non sostituire il reagente del saggio Xpert MRSA SA SSTI con altri reagenti Non aprire il coperchio della cartuccia del saggio Xpert MRSA SA SSTI se non per Paggiunta di campioni e reagenti o per la ripetizione del test Non utilizzare le cartucce dopo averle fatte cadere o agitate in seguito all aggiunta di campioni e reagenti Non utilizzare una cartuccia con una provetta di reazione danneggiata Ciascuna cartuccia monouso del saggio Xpert MRSA SA SSTI utilizzata per elaborare un analisi Non riutilizzare le cartucce usate Consultare il personale addetto allo smaltimento dei rifiuti ambientali del proprio istituto per il corretto smaltimento delle cartucce usate e dei reagenti non utilizzati Questo materiale pu rientrare tra i rifiuti pericolosi in base alla normativa stabilita dalla EPA Resource Conservation and Recovery Act RCRA e richiedere requisiti di smaltimento specifici Controllare le normative regionali e locali che possono differire dalla normativa nazionale sullo s
150. ido de s dio H314 que corrosivo para os olhos e a pele exigindo a utiliza o de protec o dos olhos e da pele Colheita transporte e conserva o de amostras As zaragatoas das amostras de infec es da pele e tecidos moles podem ser recolhidas com o dispositivo de colheita de amostras Cepheid seguindo os procedimentos padr o da institui o do utilizador As zaragatoas das amostras s o recolocadas no tubo de transporte de pl stico recomenda se um meio Stuarts l quido dispositivo de colheita de amostras Cepheid ou Copan equivalente conservadas temperatura ambiente e enviadas para a rea de teste GeneXpert para serem processadas no dia seguinte As restantes zaragatoas n o testadas destinadas cultura microbiol gica devem ser colocadas em sistemas de transporte adequados e semeadas nos 4 dias seguintes Se n o tiver sido enviada at ao dia seguinte a amostra dever ser transportada em gelo Em alternativa as zaragatoas poder o ser conservadas para teste a 2 8 C at 5 dias Cultura microbiol gica Relativamente aos m todos de cultivo de infec es da pele e tecidos moles SSTI do ingl s Skin and soft tissue infections siga os procedimentos operativos normalizados em vigor no laborat rio Para efectuar as culturas as zaragatoas restantes n o testadas devem ser colocadas em sistemas de transporte adequados e semeadas nos 4 dias seguintes 301 0190 Rev C February 2012 105 Portugu s Proce
151. iew Results Visualizza risultati I risultati possibili sono MRSA POSITIVE SA POSITIVE MRSA POSITIVO SA POSITIVO Il saggio Xpert MRSA SA SSTI riesce a rilevare DNA di MRSA e o SA da organismi non vitali Vengono rilevate le sequenze del DNA bersaglio di MRSA viene rilevata la sequenza del DNA bersaglio di SA e MRSA POSITIVE tutti i bersagli di MRSA spa mecA and SCC mec hanno una soglia del ciclo Ct dentro l intervallo valido e un punto finale al di sopra dell impostazione del valore minimo SPC NA non applicabile PSPC viene ignorato poich l amplificazione MRSA pu competere con questo controllo Probe Check PASS tutti i risultati del controllo sonda sono superati 301 0190 Rev C February 2012 89 Italiano MRSA NEGATIVE SA POSITIVE MRSA NEGATIVO SA POSITIVO Il saggio Xpert MRSA SA SSTI riesce a rilevare DNA di MRSA e o SA da organismi non vitali Non vengono rilevate le sequenze del DNA bersaglio di MRSA viene rilevata la sequenza del DNA bersaglio di SA SA POSITIVE il bersaglio di SA spa ha un valore Ct compreso nell intervallo valido e un valore finale sopra l impostazione del valore minimo Il DNA bersaglio per SCCmec non viene rilevato il DNA bersaglio per mecA pu o non pu essere rilevato oppure il DNA bersaglio per SCC mec viene rilevato e il DNA bersaglio per mecA non viene rilevato empty cassette cassetta vuota SPC NA non applicabile PSPC viene ignorato poich
152. ifs 1 2 et 3 lyophilis es 1 par cartouche R actif 1 de test Xpert MRSA SA SSTI 2 8 ml par cartouche R actif 2 de test Xpert MRSA SA SSTI hydroxyde de sodium 3 2 ml par cartouche R actif d lution de test Xpert MRSA SA SSTI 10 R actif d lution guanidine thiocyanate 1 x2 0 ml par pochette CD 1 par kit Fichier de d finition de test ADF Instructions pour importer les ADF dans le logiciel GX Notice Remarques Les fiches techniques de donn es de s curit SDS Safety Data Sheets sont disponibles l adresse www cepheid com tests and reagents literature msds ou www cepheidinternational com tests and reagents literature msds Lalbumine de s rum bovin BSA bovine serum albumin contenu dans les billes de ce produit a t produite exclusivement partir de plasma bovin provenant des tats Unis La fabrication du SAB est galement r alis e aux tats Unis Les aliments donn s aux animaux ne contenaient pas de prot ines de ruminants ou d autres prot ines animales les animaux ont subi des tests ante et post mortem Au cours du processus aucun m lange ne s est produit avec d autres mati res animales Stockage et manipulation 2 ce Conservez les cartouches et les r actifs du test Xpert MRSA SA SSTI une temp rature comprise entre 2 et 28 C os e N utilisez pas les r actifs ou les cartouches dont la date d expiration est d pass e Nouvrez pas de cartouche tant que vous n tes pas pr t effectuer u
153. iguiente secci n El Control de comprobaci n de sonda ha fallado probablemente debido a que el tubo de reacci n se ha llenado de forma inadecuada se ha detectado un problema de integridad de la sonda o se han excedido los l mites de presi n m xima MRSA NO RESULT SIN RESULTADO e SA NO RESULT SPC NO RESULT Probe Check FAIL FALLA SPC Una o m s comprobaciones de la sonda han fallado Si la comprobaci n de sonda es correcta el error se debe a un fallo de un componente del sistema NO RESULT SIN RESULTADO No se puede determinar la presencia o ausencia de secuencias de ADN diana del MRSA SA Repita la prueba de acuerdo con las instrucciones de la siguiente secci n No se recogieron datos suficientes para conseguir un resultado de la prueba Esto puede ocurrir por ejemplo si el operador detiene una prueba que estaba en progreso MRSA NO RESULT SA NO RESULT SPC NO RESULT Probe Check NA no aplicable 70 301 0190 Rev C February 2012 Motivos para repetir el ensayo Motivos para repetir el ensayo Repita la prueba utilizando un cartucho nuevo no reutilice cartuchos y reactivos nuevos Realice de nuevo la prueba en las 3 horas posteriores a la obtenci n de un resultado indeterminado Un resultado INVALID indica que el control CPM ha fallado La muestra no se ha procesado correctamente o se ha inhibido la reacci n en cadena de la polimerasa Un resultado ERROR indica
154. il r pond aux crit res d acceptation valid s Contr le de la sonde avant de d marrer la r action PCR le GeneXpert Dx System mesure le signal de fluorescence provenant des sondes afin de contr ler la r hydratation des billes de r actifs le remplissage des tubes r actionnels l int grit de la sonde et la stabilit du fluorochrome Le contr le de la sonde r ussit s il r pond aux crit res d acceptation attribu s Contr les externes Des couvillons pr ts l emploi KWIK STIK MicroBioLogics n de r f 0158 MRSA SCC mec type II et n de r f 0360SA comme contr les positifs et n de r f 0371MSSE comme contr le n gatif peuvent tre utilis s avec le GeneXpert Dx System pour la formation des op rateurs les preuves de comp tence et le CQ externe Les ventuelles souches de SARM pr sentant d autres types SCC mec sont utilisables comme contr les positifs externes suppl mentaires pour contr ler les amorces du test et les sondes non directement contr l es dans le test Les contr les externes peuvent tre utilis s en accord avec les organisations d accr ditation et les r glementations gouvernementales comme appropri Suivez la proc dure de contr le externe de MicroBioLogics d crite ci dessous 1 D chirez l tui au niveau de l entaille et retirez le KWIK STIK 2 Pincez le bas de Pampoule dans le couvercle pour lib rer le liquide hydratant 3 Veillez tenir Pampoule verticalement et
155. ilable to the clinician as an aid in the detection of MRSA SA from skin and soft tissue infections The Xpert MRSA SA SSTI Assay is not intended to monitor treatment for MRSA SA infections Concomitant cultures for SA and MRSA are necessary to recover organisms for susceptibility testing or epidemiological typing Summary and Explanation Staphylococcus aureus SA is a well documented human opportunistic pathogen and a major nosocomial pathogen that causes a range of diseases Some of the diseases involve the skin and soft tissue infections including carbuncles and boils and postoperative wound infections of various sites As a nosocomial pathogen aureus has been a major cause of morbidity and mortality S aureus infections are often acute and pyogenic and if untreated may spread to surrounding tissue or via bacteremia to metastatic sites involving other organs Some of the more serious infections produced by aureus are bacteremia pneumonia osteomyelitis acute endocarditis toxic shock syndrome food poisoning myocarditis pericarditis cerebritis meningitis chorioamnionitis scalded skin syndrome and abscesses of the muscle urogenital tract central nervous system and various intra abdominal organs In the early 1950s acquisition and spread of beta lactamase producing plasmids thwarted the effectiveness of penicillin for treating S aureus infections In 1959 methicillin a synthetic penicillin was introduced However by 1960 me
156. impiador para manos antibacteriano 5 p v Las muestras que contienen mercurocromo no se pueden utilizar debido a su naturaleza fluorescente Tabla 1 Sustancias potencialmente interferentes analizadas Sustancia Ingrediente activo analizado B fer de TET control Control Control Capa leucoplaquetaria simuladora de Leucocitos 1 5e9 ml 50 v v heridas Sangre total libre de MRSA SA N A 50 v v Plasma N A 50 v v Neosporina 400 unidades de bacitracina 1 y 5 p v 5 000 unidades de polimixina B 3 5 mg de neomicina StaphA Septic 0 2 de cloruro de benzetonio 1 y 5 p v 2 5 de clorhidrato de lidoca na Hidrocortisona 1 de hidrocortisona 1 y 5 p v Facilidad de la ebullici n 20 de benzoca na 1 y 5 p v Tintura de yodo 2 de yodo 50 v v Tabla 2 Sustancias potencialmente interferentes analizadas Sustancia Ingrediente activo analizado B fer de TET control Control Control Mupirocina 0 2 de cloruro de benzetonio 5 p v 2 5 de clorhidrato de lidoca na Sangre total libre de MRSA SA N A 50 v v Soluci n salina 0 65 de cloruro s dico 50 v v Limpiador para manos antibacteriano 62 de alcohol et lico 1 y 5 p v 70 de alcohol isoprop lico 70 de alcohol isoprop lico 50 v v 72 301 0190 Rev C February 2012 Valores previstos Valores previstos En el estudio cl nico de Xpert MRSA SA SSTI se incluyeron un total de
157. in pediatric bacterial meningitis defining the time interval for recovery of cerebrospinal fluid pathogens after parenteral antibiotic pretreatment Pediatrics 108 5 1169 1174 Brook I Gober A 2005 Effects of amoxicillin and cefdinir on nasopharyngeal bacterial flora Arch Otolaryngol Head Neck Surg Sep 131 785 787 Nadarajah J et al Identification of different clonal complexes and diverse amino acid substitutions in penicillin binding protein 2 PBP2 associated with borderline oxacillin resistance in Canadian Staphylococcus aureus isolates J of Med Micro 2006 55 1675 1683 Ribeiro J et al Misclassification of Susceptible Strains of Staphylococcus aureus as Methicillin Resistant S aureus by a rapid Automated Susceptibility Testing System 1999 37 1619 1620 Unterst tzung Wenn Sie Unterst tzung ben tigen wenden Sie sich bitte mithilfe der folgenden Kontaktadressen an Cepheid Geben Sie bei Ihrem Anruf bzw in Ihrer E Mail auf jeden Fall die Seriennummer des Instruments und die Chargen ID des Reagenz an EU Kontaktdaten f r technischen Support Tel 33 563 82 53 19 E Mail techsupport cepheideurope fr Andere Standorte Wenden Sie sich an Ihre lokale Cepheid Niederlassung oder Vertretung Symboltabelle Symbol Bedeutung Katalog Nr Medizinisches Ger t zur In vitro Diagnostik Nicht wiederverwenden Chargencode Vorsicht beiliegendes Dokument konsultieren Hers
158. include reagenti per il rilevamento dell MRSA e dell SA e un controllo elaborazione del campione SPC per controllare l adeguatezza l adeguatezza del processamento dei batteri bersaglio dei batteri bersaglio e per monitorare la presenza di inibitori nella reazione PCR L SPC garantisce inoltre che le condizioni della reazione PCR temperatura e durata siano adatte alla reazione di amplificazione e che i reagenti PCR siano funzionali Il controllo per il controllo sonda PCC verifica la reidratazione dei reagenti il riempimento della provetta PCR nella cartuccia l integrit della sonda e la stabilit del dye I primer e le sonde nel saggio Xpert MRSA SA SSTI rilevano sequenze brevettate per la proteina A stafilococcica spa il gene per la resistenza alla meticillina mecA e il cromosoma nella cassetta stafilococcica SCC mec inserito nel sito attB cromosomico dell SA 301 0190 Rev C February 2012 83 2 28 24 Italiano Reagenti e strumenti Materiale fornito Il kit del saggio Xpert MRSA SA SSTI contiene reagenti sufficienti per elaborare 10 campioni o campioni di controllo qualit Il kit contiene il seguente materiale Cartucce del saggio Xpert MRSA SA SSTI con provette di reazione integrate 10 Microsfere 1 2 e 3 liofilizzate 1 per cartuccia Reagente 1 del saggio Xpert MRSA SA SSTI 2 8 ml per cartuccia Reagente 2 del saggio Xpert MRSA SA SSTI 3 2 ml per cartuccia Reagente di eluizione del saggio Xpert MRSA SA SSTI 10
159. inem falsch negativen Ergebnis f hren kann In Proben die sowohl MRSA als auch SA enthalten werden die Methicillin resistenten SA Organismen mit der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung unter Umst nden nicht nachgewiesen In der ma geblichen klinischen Studie wies die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung 2 von 5 MRSA positiven Kulturproben in F llen mit dokumentierten MRSA SA Mischinfektionen nicht nach In Mischkulturen ist die analytische Nachweisgrenze von MRSA variabel wenn extrem hohe SA Konzentrationen vorliegen Eine SA Konkurrenz wurde bei einem MRSA SA Verh ltnis von 1 1x10 beobachtet In klinischen Studien lagen bei 5 von 246 MRSA positiven Kulturen Mischinfektionen von MRSA und SA vor Xpert MRSA SA SSTI identifizierte 3 der 5 Mischinfektionen als MRSA positiv und 2 der 5 F lle als SA positiv MRSA negativ 301 0190 Rev C February 2012 49 Deutsch Eine Inhibition der MRSA SA SSTI Untersuchung wurde bei folgenden Substanzen beobachtet StaphA Septic Wundsalbe 5 w v Hydrocortison 5 w v und antibakterielle Handwaschl sung 5 w v Proben die Mercurochrom enthalten d rfen wegen dessen fluoreszierender Eigenschaften nicht verwendet werden Die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung ergibt ein falsch positives MRSA Ergebnis beim Testen von Mischinfektions SSTI Proben die Methicillin resistenten Koagulase negativen Staphylococcus MRCNS und Methicillin empfindlichen Staphylococcus aureus SA leere Kassette enthalt
160. int estimates and 95 upper and lower confidence intervals for each SA and each MRSA SCC mec type tested are summarized in Table 8 and Table 9 Table 8 95 Confidence Intervals for Analytical LoD SA SA Strain ID PFGE LoD Lower Upper CFU swab 95 Cl 95 Cl N7129 USA900 51 42 69 102 04 USA1200 87 76 109 29213 unknown 123 97 188 Table 9 95 Confidence Intervals for Analytical LoD MRSA SCCmec LoD Lower Upper MRSA Strain ID Type PFGE CFU swab 95 CI 95 CI 64 4176 USA500 221 195 271 N315 Il USA100 122 106 152 11373 Ill unknown 124 115 155 MW2 IVa USA400 82 68 113 ST59 MRSA V V USA1000 242 208 305 HDE288 VI USA800 183 161 223 The results of this study indicate that the Xpert MRSA SA SSTI Assay will produce a positive SA result 95 of the time with 95 confidence for a wound swab containing 150 CFU and a positive MRSA result 95 of the time with 95 confidence for a wound swab containing 300 CFU One hundred twenty one 121 additional Staphylococcus aureus strains were tested using the Xpert MRSA SA SSTI Assay Overnight cultures were grown in Brain Heart Infusion BHI media and adjusted to 0 5 McFarland units All strains were tested in triplicate using 100 uL of cultures further diluted 100 thousand to one million fold MRSA 78 and SA 43 strains were selected to broadly represent the range of genetic diversity found in the species Staphylococcus aureus based on phylogenetic structur
161. ion of Susceptible Strains of Staphylococcus aureus as Methicillin Resistant aureus by a rapid Automated Susceptibility Testing System 1999 37 1619 1620 Assistance Pour b n ficier d une assistance contactez Cepheid en utilisant Pune des informations relatives aux contacts suivantes Assurez vous de communiquer le num ro de s rie de Pappareil et le num ro d ID du lot de r actifs lorsque vous appelez ou envoyez un courrier lectronique Union europ enne Pour b n ficier d une assistance technique utilisez les informations de contact suivantes T l 33 563 82 53 19 Courrier lectronique techsupport cepheideurope fr Autres sites Contactez votre repr sentant local Cepheid 301 0190 Rev C February 2012 39 Fran ais Tableau des symboles Symbole Signification R f rence Appareil usage m dical de diagnostic in vitro e EE ne pas r utiliser O Code du lot Attention consultez le document d accompagnement Fabricant Contenu suffisant pour lt n gt tests Date limite d utilisation Contr le le LSSI Mandataire agr pour la Communaut europ enne CN m Marquage CE Conformit europ enne Limitation de la temp rature amp Risques biologiques Cepheid AB R ntgenv gen 5 SE 171 54 Solna Suede Produit de Su de Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France T l 33
162. ions du point de LDD et les intervalles de confiance sup rieur et inf rieur 95 pour chaque SA et chaque type SCCmec de SARM test s sont r sum s aux Tableaux 8 et 9 Tableau 8 Intervalles de confiance 95 pour LDD analytique SA ID souche SA PFGE LDD bact ries IC IC souches couvillon 95 inf 95 sup N7129 USA900 51 42 69 102 04 USA1200 87 76 109 29213 inconnu 123 97 188 Tableau 9 Intervalles de confiance 95 pour LDD analytique SARM ID souche SARM SCCmec PFGE LDD bact ries IC IC type souches 95 sup 95 sup couvillon 64 4176 I USA500 221 195 271 N315 Il USA100 122 106 152 11373 Ill inconnu 124 115 155 MW2 IVa USA400 82 68 113 ST59 MRSA V V USA1000 242 208 305 HDE288 VI USA800 183 161 223 Les r sultats de cette tude indiquent que le test Xpert MRSA SA SSTI produit des r sultats positifs au SA dans 95 des cas avec un niveau de confiance de 95 pour un couvillon de plaie comportant 150 bact ries souches et un r sultat positif au SARM dans 95 des cas avec un niveau de confiance de 95 pour un couvillon de plaie comportant 300 bact ries souches Cent vingt et un 121 souches suppl mentaires de Staphylococcus aureus ont t test es l aide du test Xpert MRSA SA SSTT Des cultures de 18 heures ont t r alis es dans un milieu d infusion c ur cervelle BHI et ajust es 0 5 unit McFarland Toutes les souches ont t test es
163. is foram testados em duplicado em 10 dias diferentes em cada um dos tr s locais 4 amostras x 2 vezes dia x 10 dias x 3 locais Foi utilizado um lote do kit Xpert MRSA SA SSTI em cada um dos 3 locais de teste Os ensaios Xpert MRSA SA SSTI foram realizados de acordo com o procedimento do ensaio Xpert MRSA SA SSTI Os resultados correctos foram obtidos em 239 dos 240 testes Tabela 12 Resumo dos resultados da reprodutibilidade ID da amostra Local 1 Local 2 Local 3 Concord ncia total Neg MSSE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Pos moderado p SA 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Pos moderado p MRSA1 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Pos moderado p MRSA2 100 20 20 100 20 20 95 19 20 98 3 59 60 de concord ncia total por local 100 80 80 100 80 80 98 8 79 80 99 6 239 240 110X LoD 301 0190 Rev C February 2012 119 Portugu s Tabela 13 Resumo dos resultados de valor de Ct por n vel de amostra e sonda 20 SPC Nivel M dia Desv padrao CV Pos moderado p MRSA1 35 72 1 87 5 24 Pos moderado p MRSA2 36 29 2 66 7 34 Pos moderado p SA 34 55 1 19 3 44 NEG 34 45 1 06 3 09 Spa N vel M dia Desv padr o CV Pos moderado p MRSA1 29 52 1 30 4 40 Pos moderado p MRSA2 28 91 1 03 3 57 Pos moderado p SA 30 59 0 91 2 99 mec
164. istente a tutti i farmaci con beta lattame grazie alla proteina PBP2 legante la penicillina codificata dal mecA 5 I ceppi BORSA sono mecA negativi ma inibiscono una concentrazione minima inibitoria MIC di oxacillina gt 2 e lt 8 pg mL E molto importante distinguere tra PMRSA e i ceppi BORSA per evitare un uso non necessario ed inappropriato di vancocimina e le precauzioni di isolamento non garantite per pazienti infetti da un ceppo sensibile al beta lattame Nelle condizioni di questo studio tutti i 7 isolati BORSA incluso Pisolato apparente a cassetta vuota sono stati identificati come MRSA negativi SA positivi a concentrazioni cellulari sia elevate che ridotte utilizzando il saggio Xpert MRSA SA SSTI Non stato riportato alcun segnale mecA Tali risultati dimostrano che un ceppo BORSA sar identificato correttamente come MRSA negativo SA positivo e non produrr un risultato falso positivo alPanalisi dell MRSA utilizzando il saggio Xpert MRSA SA SSTI 96 301 0190 Rev C February 2012 Prestazioni analitiche Sensibilit analitica Studi sul limite di rilevamento Gli studi sono stati eseguiti per determinare intervalli di confidenza al 95 per il limite di rilevamento analitico LoD di cellule di Staphylococcus aureus SA e cellule di Staphylococcus aureus resistente alla meticillina MRSA diluite in una matrice di ferita surrogata di origine umana La matrice di ferita surrogata era composta da un concentrato di
165. itica Studio di reattivit crociata Centocinque 105 ceppi sono stati raccolti quantificati e analizzati con il saggio Xpert MRSA SA SSTI Le 98 colture provenienti dal American Type Culture Collection ATCC e i 7 ceppi provenienti dal Network on Antimicrobial Resistance in Staphylococcus aureus NARSA rappresentano le specie filogeneticamente correlate allo Staphylococcus aureus o quelle potenzialmente riscontrate in ambiente ospedaliero In queste sono state incluse gli stafilococchi coagulasi negativi sensibili alla meticillina 29 e gli stafilococchi coagulasi negativi resistenti alla meticillina 9 Gli organismi analizzati sono stati identificati come Gram positivi 74 Gram negativi 28 o lieviti 3 Gli organismi sono stati inoltre identificati come aerobici 95 o anaerobici 10 Sono state analizzate due 2 o pi repliche di ogni isolato a 1 7 3 2 unit McFarland Nelle condizioni dello studio tutti gli isolati sono stati riportati negativi per MRSA e negativi per SA nessuno degli isolati stato rilevato dal saggio Xpert MRSA SA SSTI I controlli positivi e negativi sono stati inclusi nello studio La specificit analitica era del 100 Valutazione dei ceppi BORSA Sono stati analizzati sette 7 ceppi di Staphylococcus aureus con resistenza borderline all oxacillina BORSA tra cui uno apparente a cassetta vuota vedere quanto riportato sopra Lo Staphylococcus aureus resistente alla meticillina res
166. ivo al cartucho de 2 Saque el cartucho y los reactivos del envase Extraiga el hisopo del recipiente de transporte Nota Use una gasa est ril cuando manipule el hisopo para disminuir el riesgo de contaminaci n 3 4 5 Inserte el hisopo en el tubo con el reactivo de diluci n y rompa el hisopo Cierre el tap n del vial de diluci n y agite a alta velocidad durante 10 segundos Abra la tapa del cartucho Utilice una pipeta de transferencia est ril y transfiera todo el contenido del reactivo de diluci n al compartimento S del cartucho de Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Cierre la tapa del cartucho S Muestra Figura 1 Cartucho del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI vista superior Inicio de la prueba Importante Antes de empezar la prueba aseg rese de haber importado el archivo de definici n del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI en el software En esta secci n se incluyen los pasos b sicos para realizar la prueba Si desea obtener instrucciones detalladas consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx 1 sono 66 Encienda el instrumento GeneXpert Dx y a continuaci n encienda el ordenador El software GeneXpert se iniciar autom ticamente Inicie una sesi n en el software del sistema GeneXpert Dx con su nombre de usuario y contrase a En la ventana del sistema GeneXpert Dx haga clic en Create Test Crear prueba Aparece el cuadro de di logo Scan Cartridge Barcode Escanear c digo de barr
167. l Der verbleibende nicht getestete Abstrich ist f r eine mikrobiologische Kultur in entsprechende Transportsysteme zu legen und innerhalb von 4 Tagen zu z chten Wenn die Probe nicht bis zum n chsten Tag abgeschickt wird sollte sie auf Eis transportiert werden Alternativ k nnen Abstrichtupfer auch bis zu 5 Tage lang bei 2 8 C f r Tests gelagert werden Mikrobiologische Kultur Die Methoden zum Z chten von SSTI Kulturen richten sich nach den blichen aktuellen Laborstandardvorgehensweisen Zum Z chten von Kulturen sind verbleibende nicht getestete Abstrichproben in entsprechende Transportsysteme zu legen und innerhalb von 4 Tage zu z chten 301 0190 Rev C February 2012 43 Deutsch Prozedur Vorbereiten der Testkartusche Wichtig Den Test innerhalb von 15 Minuten nach Hinzuf gen der Reagenzien zur Testkartusche beginnen Zugabe von Probe und Reagenzien in die Kartusche 1 Kartusche und Reagens aus der Verpackung nehmen 2 Den Abstrichtupfer aus dem Transportbeh lter nehmen Hinweis Zur Minimierung des Kontaminationsrisikos bei der Handhabung des Abstrichtupfers sterile Gaze verwenden 3 Den Tupfer in das R hrchen mit dem Elutionsreagenz einf hren und abbrechen 4 Den Deckel das Elutionsreagenzfl schchen schrauben aufsetzen und bei hoher Geschwindigkeit 10 Sekunden lang vortexen 5 Kartuschendeckel ffnen Mit einer sterilen bertragungspipette den gesamten Inhalt des Elutionsreagenz in die Kammer S der
168. l of Endemic Methicillin Resistant Staphylococcus aureus JAMA 282 19 1745 51 5 Shopsin B Kreiswirth BN 2001 Molecular Epidemiology of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus Emerging Infectious Diseases 7 2 323 6 6 Salgado CD et al 2003 Community Acquired Methicillin Resistant Staphylococcus aureus A Meta analysis of Prevalence and Risk Factors CID 36 131 7 Donnio P Y F vrier F Bifani P et al 2007 Molecular and epidemiological evidence for the spread of multiresistant methicillin susceptible Staphylococcus aureus strains in hospitals Antimicrobial Agents Chemother 51 4342 4350 8 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 9 Clinical and Laboratory Standards Institute gi National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition 10 Ewig S Schlochtermeier M G ke N et al 2002 Applying sputum as a diagnostic tool in pneumonia limited yield minimal impact on treatment decisions Chest 121 1486 1492 11 RG Dotson and SK Pingleton 1993 The effect of antibiotic therapy on recovery of intracellular bacteria from bronchoalveolar lavage in suspected ventilator associated nosocomial pneumonia Chest 103 541 546 12 Souweine B Veber B B
169. laci n y almacenamiento correctos de las muestras Las mutaciones o polimorfismos de los iniciadores o de las regiones de uni n de la sonda pueden afectar a la detecci n de variantes nuevas o desconocidas de MRSA generando un resultado falso negativo En las muestras que contienen MRSA y SA es posible que el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI no detecte los organismos SA resistentes a la meticilina Durante el estudio cl nico pivotal el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI no detect 2 de las 5 muestras positivas de cultivo de MRSA en situaciones documentadas de infecciones mixtas por MRSA SA En un cultivo mixto el l mite de detecci n anal tico de MRSA es variable cuando hay presentes concentraciones extremadamente altas de SA Se ha observado competencia por parte de SA en una proporci n de MRSA SA de 1 1x10 En los estudios cl nicos 5 de los 246 cultivos positivos de MRSA ten an infecciones mixtas por MRSA y SA Xpert MRSA SA SSTI identific 3 de las 5 infecciones mixtas como MRSA positiva y 2 de las 5 como SA positivo MRSA negativo Se ha observado inhibici n del Ensayo MRSA SA SSTI con las siguientes sustancias StaphA Septic 5 p v hidrocortisona 5 p v y limpiador para manos antibacteriano 5 p v 301 0190 Rev C February 2012 71 Espa ol Las muestras que contienen mercurocromo no se pueden utilizar debido a su naturaleza fluorescente El Ensayo Xpert MRSA SA SSTI generar un resultado falso positivo de MRSA cuando analice una
170. lase negative Staphylokokken 9 in die Tests einbezogen Die untersuchten Organismen wurden als Gram positiv 74 Gram negativ 28 oder Hefe 3 identifiziert Au erdem wurden die Organismen als aerob 95 oder anaerob 10 klassifiziert Mindestens zwei 2 Replikate jedes Isolats wurden mit 1 7 3 2 McFarland Einheiten untersucht Unter den Bedingungen der Studie waren alle Isolate MRSA negativ und SA negativ und keines der Isolate wurde durch die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung nachgewiesen Es wurden positive und negative Kontrollen in die Studie einbezogen Die analytische Spezifit t betrug 100 Ermittlung von BORSA St mmen Sieben 7 deutlich charakterisierte BORSA St mme Borderline Oxacillin resistenter Staphylococcus aureus wurden getestet darunter eine anscheinend leere Kassette siche oben Methicillin resistenter Staphylococcus aureus ist resistent gegen ber allen amp Laktam Medikamenten durch das alternative Penicillin bindende Protein PBP2a das durch mecA codiert wird BORSA St mme sind mecA negativ weisen aber eine inhibitorische Mindestkonzentration MIC an Oxacillin gt 2 und lt 8 pg ml auf Eine Unterscheidung zwischen MRSA und BORSA ist von besonderer Bedeutung um eine unn tige und unangebrachte Gabe von Vancomycin und Isolierungsma nahmen zu vermeiden die bei Patienten mit einer Infektion durch einen Laktam empfindlichen Stamm nicht gerechtfertigt sind Unter den Bedingungen dieser Studie wurd
171. le dell operatore Stampante perle linee guida sulla compatibilit consultare il Manuale dell operatore di GeneXpert Dx System Dispositivo di raccolta del campione Cepheid 900 0370 o equivalente Copan e Miscelatore vortex e Pipette di trasferimento monouso Garza sterile Materiali necessari ma non forniti KWIK STIKs dal catalogo MicroBiologics n 0158MRSA e n 0360SA come controlli positivi e n 0371MSSE Staphylococcus epidermidis sensibile alla meticillina come controllo negativo 84 301 0190 Rev C February 2012 Avvertenze e precauzioni Avvertenze e precauzioni A Tutti i campioni biologici di analisi comprese le cartucce usate devono essere trattati come potenziali veicoli di agenti infettivi Poich spesso impossibile sapere quale campione potrebbe essere infetto tutti i campioni biologici di analisi devono essere trattati adottando le precauzioni standard Le linee guida per la manipolazione dei campioni sono disponibili presso gli U S Center for Disease Control and Prevention e il Clinical and Laboratory Standards Institute in precedenza denominato National Committee for Clinical Laboratory Standards In una coltura mista contenente MRSA SA ed altri organismi es bacilli Gram negativi lieviti i risultati possono essere falsi negativi o variabili a seconda della concentrazione di MRSA SA presente in particolare se tale concentrazione prossima al LoD del saggio Attenersi alle procedure di s
172. lenado del tubo de reacci n la integridad de la sonda y la estabilidad del fluorocromo La comprobaci n de sonda es correcta si cumple los criterios de aceptaci n asignados Controles externos Pueden utilizarse KWIK STIKs MicroBioLogics n de referencia 0158MRSA SCC mec tipo II y n de referencia 0360SA como controles positivos y n de referencia 0371MSSE como control negativo para la formaci n de usuarios para pruebas de aptitud y como CC externo del GeneXpert Dx System Las cepas de MRSA que representan otros tipos del SCC mec si est n disponibles pueden usarse como controles positivos externos adicionales para supervisar los iniciadores y las sondas que no se controlan directamente en el ensayo Los controles externos pueden emplearse de acuerdo con las instituciones de acreditaci n y normativas gubernamentales seg n corresponda Siga el procedimiento de control externo de MicroBioLogics descrito a continuaci n 1 Abra la bolsa por la ranura y retire el KWIK STIK 2 Perfore la parte inferior de la ampolla con la tapa para liberar el l quido hidratante 3 Mant ngala en posici n vertical mientras la golpea ligeramente para facilitar el flujo del l quido a trav s del eje hasta el fondo de la unidad que contiene el precipitado A fin de facilitar la disoluci n del precipitado celular liofilizado apl stelo y frote suavemente contra el compartimento inferior Tire del KWIK STIK para liberar el hisopo e inserte ste
173. les chantillons est minimis e car les cartouches sont ind pendantes Pour obtenir une description complete du syst me consultez le Manuel d utilisation de DX GeneXpert System Le test Xpert MRSA SA SSTI comprend des r actifs pour la d tection du SARM et du SA ainsi qu un contr le du traitement de l chantillon CTE pour contr ler le traitement appropri des bact ries cibles ainsi que la presence d inhibiteur s lors de la r action PCR Le CTE s assure galement que les conditions de r action PCR temp rature et temps sont appropri es pour la r action d amplification et que les r actifs PCR sont fonctionnels Le contr le de la sonde consiste v rifier la r hydratation des r actifs le remplissage des tubes de PCR dans la cartouche Pint grit de la sonde et la stabilit du fluorochrome Les amorces et les sondes du test Xpert MRSA SA SSTI d tectent les s quences brevet es de la prot ine A staphylococcique spa le gene de resistance la m thicilline mecA et la cassette chromosomique staphylococcique SCC mec ins r e dans le site chromosomique attB du SA 301 0190 Rev C February 2012 21 Fran ais R actifs et appareils Mat riel fourni Le kit du test Xpert MRSA SA SSTI contient suffisamment de r actifs pour traiter 10 chantillons ou contr les qualit Le kit contient les l ments suivants Cartouches de test Xpert MRSA SA SSTI avec tubes r actionnels int gr s 10 Billes de r act
174. lle die beim ersten Versuch unbestimmte Ergebnisse ergaben wurde beim zweiten Versuch ein Ergebnis erzielt Varianten mit leerer Kassette Damit ein Isolat von der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung als MRSA positiv erkannt wird m ssen der Test auf spa sowie der Test auf mecA und SCC mec positiv sein Ein Isolat das positiv f r spa und SCC mec jedoch nicht f r mecd ist wird aufgrund seiner Methicillin Empfindlichkeit als SA gemeldet Dieser Fall kann eintreten wenn der Teil des SCCmec Elements der mecA tr gt herausgetrennt wird die Enden dieses mobilen Elements jedoch an Ort und Stelle verbleiben wodurch sich ein positives SCCmec Signal ergibt Solche Isolate werden manchmal als Varianten mit leerer Kassette bezeichnet und sind im klinischen Alltag nicht un blich Die Bedeutung dieser Isolate besteht in der potenziellen Verf lschung von Untersuchungen auf MRSA bei denen das Gen mecA nicht direkt erkannt wird Die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung wurde daf r konzipiert diese Varianten korrekt als SA zu identifizieren Von den Proben die Gegenstand der Datenanalysen in diesem Bericht waren entsprachen insgesamt 16 Isolate dem Profil der leeren Kassette mit positiven Testergebnissen f r spa und SCCmec aber ohne Nachweis von mecA Ct 0 wie in Tabelle 7 dargestellt F nfzehn 15 der 16 wurden als echte MRSA negative Isolate im Verh ltnis zum Kulturverfahren und 14 der 16 wurden als echte SA positive Isolate im Verh ltnis zu
175. lli di confidenza al 95 superiore e inferiore per ciascun SA e ciascun tipo SCCmec MRSA analizzato sono riassunte nelle tabelle 8 e 9 Tabella 8 Intervalli di confidenza del 95 per LoD analitico SA ID ceppo SA PFGE LoD Minore Maggiore CFU tampone IC al 95 IC al 95 N7129 USA900 51 42 69 102 04 USA1200 87 76 109 29213 sconosciuto 123 97 188 Tabella 9 Intervalli di confidenza del 95 per LoD analitico MRSA SCCmec LoD Minore Maggiore ID ceppo MRSA Tipo PFGE CFU tampone IC al 95 IC al 95 64 4176 I USA500 221 195 271 N315 Il USA100 122 106 152 11373 IN sconosciuto 124 115 155 MW2 IVa USA400 82 68 113 ST59 MRSA V V USA1000 242 208 305 HDE288 VI USA800 183 161 223 I risultati di questo studio indicano che il saggio Xpert MRSA SA SSTI produrr un risultato SA positivo nel 95 dei casi con confidenza al 95 per un tampone di ferita contenente 150 CFU e un risultato MRSA positivo nel 95 dei casi con confidenza al 95 per un tampone di ferita contenente 300 CFU Centoventuno 121 ceppi aggiuntivi di Staphylococcus aureus sono stati analizzati con il saggio Xpert MRSA SA SSTI Le colture sono state incubate tutta la notte in un infuso cuore cervello BHI e regolate a 0 5 unit McFarland Tutti i ceppi sono stati analizzati in triplicato con 100 uL di colture diluite ulteriormente da 100 mila a un milione di volte 301 0190 Rev C February 2012 97 Italiano I ceppi di MRSA 78 e di SA
176. lline Dans l essai clinique cl le test Xpert MRSA SA SSTI ra pas pu d tecter 2 des 5 cultures positives au SARM dans des situations o des infections mixtes au SARM SA taient document es Dans une culture mixte la LDD analytique du SARM est variable en pr sence de concentrations extr mement lev es de SA La concurrence du SA a t observ e avec un rapport SARM SA de 1 1x106 Dans les tudes cliniques 5 des 246 cultures positives au SARM pr sentaient des infections mixtes au SARM et au SA Xpert MRSA SA SSTI a identifi 3 des 5 infections mixtes comme positives au SARM et les 2 autres comme positives au SA n gatives au SARM Une inhibition du test MRSA SA SSTT a t observ e avec les substances suivantes StaphA Septic 5 m v hydrocortisone 5 m v et d sinfectant antibact rien pour les mains 5 m v 301 0190 Rev C February 2012 29 Fran ais Les chantillons contenant du mercurochrome ne doivent pas tre utilis s en raison de sa nature fluorescente Le test Xpert MRSA SA SSTI g n rera un faux r sultat positif au SARM lors du test d un chantillon pr sentant une infection mixte de la peau et des tissus mous contenant la fois des staphylocoques coagulase n gative r sistants la m thicilline SCNRM et des Staphylococcus aureus SA sensibles la m thicilline cassette vide Substances parasites Dans l tude du test Xpert MRSA SA SSTI 428 des 848 chantillons se sont av r s c
177. lons appropri s conform ment aux pratiques standard de votre institution 24 301 0190 Rev C February 2012 Contr le qualit Affichage et impression des r sultats Pour obtenir des instructions d taill es sur la mani re d afficher et d imprimer les r sultats consultez le Manuel d utilisation de GeneXpert Dx System Contr le qualit Contr les qualit int gr s Chaque test comprend un contr le du traitement de l chantillon CTE ou BG3 dans l cran d affichage des r sultats pour Putilisateur de niveau administrateur et un contr le de la sonde Contr le du traitement de l chantillon CTE v rifie que l chantillon a t correctement trait Le CTE comprend des spores de Bacillus globigii sous la forme d un biscuit sec de spores plac dans chaque cartouche afin de v rifier le bon d roulement du traitement de l chantillon du test Xpert MRSA SA SSTI Le CTE v rifie que la lyse de Staphylococcus aureus a eu lieu si les organismes sont pr sents et contr le que le traitement de l chantillon est ad quat En outre ce contr le d tecte l inhibition associ e l chantillon du test de PCR en temps r el v rifie que les conditions de r action PCR temp rature et temps sont appropri es pour la r action d amplification et que les r actifs PCR sont fonctionnels Le CTE doit tre positif dans un chantillon n gatif et peut tre n gatif ou positif dans un chantillon positif Le CTE r ussit s
178. lor m nimo Probe Check PASS Verifica o da sonda APROVADA todos os resultados de verifica o da sonda s o aprovados Poder obter se um resultado falso negativo para MRSA um resultado de MRSA NEGATIVE SA POSITIVE MRSA NEGATIVO SA POSITIVO em vez de MRSA POSITIVE SA POSITIVE MRSA POSITIVO SA POSITIVO se tanto o MRSA como o SA estiverem presentes na amostra num r cio MRSA SA de 1 1x10 ou superior Nos estudos cl nicos 5 das 246 culturas positivas de MRSA apresentavam infec es mistas de MRSA e SA O Xpert MRSA SA SSTI identificou 3 das 5 infec es mistas como MRSA positivo e 2 das 5 infec es como SA positivo MRSA negativo INVALID INV LIDO N o poss vel determinar a presen a ou aus ncia de sequ ncias alvo de ADN de MRSA SA repita o teste de acordo com as instru es da sec o seguinte O SPC n o preenche os crit rios de aceita o a amostra n o foi processada adequadamente ou o PCR foi inibido INVALID INVALIDO N o pode ser determinada a presen a ou aus ncia de ADN de Staphylococcus aureus SPC FAIL SPC N O APROVADO o resultado do alvo do SPC negativo o limite de ciclo Ct do SPC n o est dentro do intervalo v lido e o endpoint est abaixo do valor m nimo Probe Check PASS Verifica o da sonda APROVADA todos os resultados de verifica o da sonda s o aprovados ERROR ERRO N o poss vel determinar a presen a ou aus nci
179. m Kulturverfahren best tigt Ein Isolat wurde gem Kulturverfahren als MRSA identifiziert und 2 Isolate waren gem Kulturverfahren sowohl MRSA als auch SA negativ Tabelle 7 MRSA SA SSTI Leistung gegen ber Referenzkulturverfahren Varianten mit leerer Kassette Xpert spa mecA SCCmec Xpert Kultur Fall Nr Ergebnis Ct Ct Ct Kultur MRSA SA 1 SA 23 6 0 26 0 SA TN TP 2 SA 14 7 0 16 5 SA TN TP 3 SA 20 5 0 34 0 SA TN TP 4 SA 18 4 0 21 0 SA TN TP 5 SA 15 6 0 28 4 MRSA FN TP 6 SA 17 2 0 31 6 SA TN TP 7 SA 34 1 0 35 6 Neg TN FP 8 SA 29 1 0 33 0 SA TN TP 9 SA 12 7 0 23 5 SA TN TP 10 SA 18 2 0 27 6 SA TN TP 11 SA 18 4 0 22 0 SA TN TP 12 SA 25 5 0 27 7 SA TN TP 13 SA 20 0 0 22 1 Neg TN FP 14 SA 26 0 0 28 3 SA TN TP 15 SA 23 9 0 25 7 SA TN TP 16 SA 19 9 0 34 0 SA TN TP 301 0190 Rev C February 2012 Analytische Leistung Analytische Leistung Analytische Spezifit t Kreuzreaktivit tsstudie Es wurden einhundertf nf 105 St mme gesammelt quantifiziert und mit der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung getestet Die 98 ATCC Kulturen American Type Culture Collection und 7 NARSA St mme Network on Antimicrobial Resistance in Staphylococcus aureus sind phylogenetisch mit Staphylococcus aureus und potenziell in einer Krankenhausumgebung zu findenden Arten verwandt Davon wurden Methicillin empfindliche Koagulase negative Staphylokokken 29 und Methicillin resistente Koagu
180. maltimento Gli istituti al di fuori degli USA devono controllare le normative sullo smaltimento dei rifiuti pericolosi del proprio paese Ae Conservare il kit del saggio Xpert MRSA SA SSTI a una temperatura di 2 28 C Aprire il coperchio della cartuccia solo immediatamente prima di eseguire il test N Ilreagente di eluizione contiene guanidina tiocianato H402 EUH301 sostanza pericolosa per gli organismi acquatici e che a contatto con gli acidi sprigiona gas tossici Ilreagente 2 contiene idrossido di sodio H314 sostanza corrosiva per gli occhi e la pelle che richiede l impiego di apposite protezioni Raccolta trasporto e conservazione del campione I campioni dei tamponi di infezioni della cute e dei tessuti molli possono essere prelevati con il dispositivo di raccolta del campione Cepheid attenendosi alle procedure standard del proprio istituto I tamponi dei campioni vengono quindi riposti nella provetta di trasporto blu si consigliano liquido Stuart dispositivo di raccolta del campione Cepheid o Copan conservati a temperatura ambiente e inviati all area di analisi GeneXpert per l elaborazione entro il giorno successivo I restanti campioni non analizzati dei tamponi per le colture microbiologiche devono essere posti in sistemi di trasporto adeguati e la coltura allestita entro 4 giorni Se non inviato entro il giorno seguente il campione deve essere trasportato nel ghiaccio In alternativa possibile conservare
181. men z B Gram negative Bazillen Hefe k nnen die Ergebnisse je nach der vorhandenen MRSA SA Konzentration falsch negativ oder variabel sein besonders wenn die MRSA SA Konzentration in der N he der Nachweisgrenze der Untersuchung liegt Es sind die Sicherheitsprozeduren der jeweiligen Institution f r den Umgang mit Chemikalien und die Handhabung von biologischen Proben zu beachten Die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung kann MRSA und oder SA DNA aus nicht lebenden Organismen anzeigen Die Wahrscheinlichkeit eines solchen Falls steigt bei Patienten die mit Antibiotika behandelt werden Die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung liefert keine Testergebnisse im Hinblick auf die antimikrobielle Resistenztestung Es ist zus tzliche Zeit erforderlich um Kulturen anzusetzen und eine Resistenztestung durchzuf hren Keine Reagenzien des Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung durch andere Reagenzien ersetzen Der Deckel der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung Kartusche darf nur f r die Zugabe von Probe und Reagenzien und bei der Durchf hrung von Wiederholungstests ge ffnet werden Keine Kartuschen verwenden die nach der Zugabe von Probe und Reagens fallen gelassen oder gesch ttelt wurden Kartuschen mit besch digtem Reaktionsgef d rfen nicht verwendet werden Jede Einweg Xpert MRSA SA SSTI Testkartusche dient zur Durchf hrung eines einzigen Tests Gebrauchte Testkartuschen nicht erneut verwenden F r eine ordnungsgem e Entsorgung gebrauchter Probenkart
182. methicillin resistant Staphylococcus aureus MRSA cells diluted into a surrogate wound matrix of human origin The surrogate wound matrix consisted of a white blood cell WBC concentrate prepared from whole blood by centrifugation The matrix also contained red blood cells RBC and plasma and a negligible amount of anticoagulant CPD or CPDA 1 The limit of detection is defined as the lowest number of colony forming units CFU per sample that can be reproducibly distinguished from negative samples with 95 confidence or the lowest concentration at which 19 of 20 replicates were positive For MRSA replicates of 20 were evaluated at each MRSA concentration tested CFU swab for 6 individual isolates representing SCC mec types I II III IVa V and VI When characterized by pulsed field gel electrophoresis PFGE USA 100 the most common healthcare acquired strain and USA400 one of the most common community acquired strains were represented For SA replicates of 20 were evaluated at each SA concentration CFU swab for 3 individual SA isolates USA types USA900 and USA1200 were represented The estimate and confidence intervals were determined using logistic regression with data number of positive results per number of replicates at each level over the range of CFU swab tested The confidence intervals were determined using maximum likelihood estimates on the logistic model parameters using the large sample variance covariance matrix The LoD po
183. n hervorruft Zu diesen Erkrankungen geh ren Haut und Weichgewebeinfektionen wie Karbunkel und Furunkel sowie postoperative Wundinfektionen an verschiedenen Stellen Als nosokomialer Krankheitserreger stellt S aureus eine wesentliche Morbidit ts und Mortalit tsursache dar Infektionen mit aureus sind h ufig akut und pyogen und k nnen sich wenn sie unbehandelt bleiben auf das umgebende Gewebe oder durch Bakteremie auf metastatische andere Organe betreffende Stellen ausbreiten Zu den ernsteren durch aureus hervorgerufenen Infektionen geh ren Bakteremie Pneumonie Osteomyelitis akute Endokarditis toxisches Schocksyndrom Lebensmittelvergiftung Myokarditis Pericarditis Enzephalitis Meningitis Chorioamnionitis toxische epidermale Nekrolyse und Abszesse an Muskeln Urogenitaltrakt Zentralnervensystem und verschiedenen Intraabdominalorganen In den fr hen 50er Jahren begann Penicillin durch die bertragung und Verbreitung von Beta Laktamase produzierenden Plasmiden f r die Behandlung von S aureus Infektionen seine Wirkung zu verlieren 1959 wurde das synthetische Penicillin Methicillin auf den Markt gebracht Jedoch wurden schon 1960 Methicillin resistente S aureus St mme MRSA nachgewiesen Als Ursache konnte die bertragung des mecA Gens auf aureus ermittelt werden In den USA ist MRSA heutzutage f r rund 25 der nosokomialen Infektionen verantwortlich Berichte ber ambulant erworbene MRSA Infektionen die zu einer Er
184. n test e Utiliser la cartouche et les r actifs dans les 30 minutes qui suivent louverture de l emballage N utilisez aucun r actif devenu trouble ou d color Mat riel requis mais non fourni GeneXpert Dx System la r f rence varie en fonction de la configuration Appareil GeneXpert ordinateur lecteur de codes barres et manuel d utilisation Imprimante consultez le Manuel d utilisation de GeneXpert Dx System pour obtenir des indications de compatibilit Dispositif de collecte des chantillons de Cepheid 900 0370 ou quivalent de Copan e Agitateur vortex Pipettes de transfert jetables e Gaze st rile Mat riel disponible mais non fourni Des couvillons pr ts l emploi KWIK STIK MicroBioLogics n de r f 0158MRSA et 0360MSSA comme contr les positifs et n de r f 0371 MSSE Staphylococcus epidermidis sensible la m thicilline comme contr les negatifs peuvent tre utilis s 22 301 0190 Rev C February 2012 Avertissements et pr cautions Avertissements et pr cautions A Traiter tous les chantillons biologiques y compris les cartouches usag es comme s ils taient susceptibles de transmettre des agents infectieux Puisqu il est souvent impossible de savoir ce qui peut tre infectieux tous les chantillons biologiques doivent tre trait s en respectant les pr cautions standard Les U S Centers for Disease Control and Prevention centres am ricains pour le contr le et l
185. na fue detectada por el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Se incluyeron en el estudio controles positivos y negativos La especificidad anal tica fue del 100 Evaluaci n de las cepas BORSA Se analizaron siete 7 cepas BORSA de Staphylococcus aureus resistentes a la oxacilina bien caracterizas y lim trofes incluyendo un casete vac o aparente ver m s arriba El Staphylococcus aureus resistente a la meticilina es resistente a todos los medicamentos betalact micos mediante la prote na alternativa fijadora de penicilina PBP2a codificada por mecA S Las cepas BORSA son mecA negativas pero muestran una concentraci n inhibidora m nima MIC de la oxacilina de gt 2 y lt 8 pg ml Esto es especialmente til para diferenciar el MRSA del BORSA con el fin de evitar el uso innecesario e inadecuado de vancomicina y de precauciones de aislamiento no garantizadas para pacientes infectados con una cepas sensibles a betalact micos Bajo las condiciones de este estudio las 7 cepas BORSA incluida la cepa de casete vac o aparente demostraron ser MRSA negativas SA positivas tanto en las concentraciones altas y bajas de c lulas con el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI No se detectaron se ales de mecA Estos resultados demuestran que el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI es capaz de identificar correctamente la cepa BORSA como MRSA negativa SA positiva y que no arrojar un resultado MRSA falso positivo 76 301 0190 Rev C February 2012 Rendimiento anal t
186. ng When the test is finished the light turns off Wait until the system releases the door lock before opening the module door and removing the cartridge 10 The used cartridges should be disposed in the appropriate specimen waste containers according to your institution s standard practices 301 0190 Rev C February 2012 Quality Control Viewing and Printing Results For detailed instructions on how to view and print the results see the GeneXpert Dx System Operator Manual Quality Control Built in Quality Controls Each test includes a Sample Processing Control SPC or BG3 in the view result screen for the administrative level user and Probe Check Control PCC Sample Processing Control SPC Ensures the sample was correctly processed The SPC contains spores of Bacillus globigii in the form of a dry spore cake that is included in each cartridge to verify adequate processing of Xpert MRSA SA SSTI Assay sample The SPC verifies that lysis of Staphylococcus aureus has occurred if the organisms are present and verifies that specimen processing is adequate Additionally this control detects specimen associated inhibition of the real time PCR assay ensures the PCR reaction conditions temperature and time are appropriate for the amplification reaction and that the PCR reagents are functional The SPC should be positive in a negative sample and can be negative or positive in a positive sample The SPC passes if it meets the valida
187. nisse im Verh ltnis zum Kulturverfahren beim Nachweis von SA in Patienten die innerhalb von 3 Wochen vor dem Xpert MRSA SA Test Antibiotika genommen hatten bei 13 8 Der Anteil falsch positiver Ergebnisse im Verh ltnis zum Kulturverfahren beim Nachweis von MRSA in Patienten die innerhalb von 3 Wochen vor dem Xpert MRSA SA Test Antibiotika genommen hatten lag bei 9 5 Ein positives Testergebnis weist nicht zwingend auf das Vorhandensein lebensf higer Organismen hin Es l sst jedoch vermuten dass MRSA oder SA vorhanden sind Das Testverfahren mit der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung sollte erg nzend zu anderen verf gbaren Methoden eingesetzt werden Fehlerhafte Testergebnisse k nnen auf eine unsachgem e Probenentnahme die Nichtbeachtung des empfohlenen Verfahrens zur Probenentnahme die Handhabung und Lagerung technisches Versagen Probenverwechslung oder auf den Umstand zur ckzuf hren sein dass die Zahl der Organismen in der Probe durch den Test nicht nachzuweisen ist Zur Vermeidung fehlerhafter Ergebnisse sind die Anweisungen in dieser Beilage einzuhalten Da der Nachweis von MRSA und SA von der Anzahl der Organismen in der Probe abh ngig ist ist die ordnungsgem e Entnahme Handhabung und Lagerung der Proben zur Erzielung verl sslicher Ergebnisse unverzichtbar Mutationen oder Polymorphismen in Primer oder Sondenbindungsregionen k nnen sich auf den Nachweis neuer oder unbekannter MRSA Varianten auswirken was zu e
188. nnel est endommag Chaque cartouche de test Xpert MRSA SA SSTI usage unique est utilis e pour effectuer un seul test Ne r utilisez pas des cartouches usag es e Adressez vous au personnel de votre tablissement charg de la gestion environnementale des d chets afin de conna tre les proc dures correctes de mise au rebut des cartouches usag es et des r actifs non utilis s Ces quipements peuvent pr senter les caract ristiques des d chets dangereux selon la loi f d rale sur la conservation et la r cup ration des ressources Resource Conservation and Recovery Act RCRA de PEPA et donc n cessiter des mesures de mise au rebut sp cifiques Consultez les r glementations r gionales et locales qui peuvent diff rer de la r glementation f d rale Les tablissements situ s hors des Etats Unis doivent consulter la l gislation de leur pays relative l limination des d chets dangereux Conservez le kit du test Xpert MRSA SA SSTI une temp rature comprise entre 2 et 28 C Ne pas ouvrir le couvercle de la cartouche avant d tre en mesure de r aliser le test Le r actif d lution contient du thiocyanate de guanidinium risque H402 UE H301 qui est nocif pour les organismes aquatiques et qui en contact avec de Pacide lib re un gaz toxique Le r actif 2 contient de l hydroxyde de sodium risque H314 qui est corrosif pour les yeux et la peau et exige une protection oculaire et cutan e Coll
189. nsayo Xpert MRSA SA SSTI excepto cuando vaya a a adir la muestra y el reactivo o a repetir la prueba No utilice un cartucho que se haya ca do o agitado despu s de haber a adido la muestra y el reactivo No use un cartucho con un tubo de reacci n da ado Cada cartucho Xpert MRSA SA SSTI de un solo uso se utiliza para procesar una prueba No reutilice los cartuchos Para eliminar correctamente los cartuchos usados y no utilizados reactivos consulte al personal de su instituci n encargado de eliminar los residuos Puede que este material tenga algunas caracter sticas que requieran una eliminaci n de residuos espec fica contemplada en la Resource Conservation and Recovery Act RCRA o Ley de Conservaci n y Recuperaci n de recursos de la Agencia de Protecci n Ambiental de EE UU Compruebe la normativa local y estatal ya que stas pueden ser diferentes a las normativas de eliminaci n federales Los centros que se encuentran fuera de los EE UU deben comprobar los requisitos para la eliminaci n de residuos de su pa s Conserve el kit del Ensayo Xpert MRSA SA SSTI a 2 28 C No abrir la tapa del cartucho hasta el momento de procesar el test El reactivo de eluci n contiene tiocianato de guanidina H402 EUH301 que es nocivo para la vida acu tica y el contacto con el cido libera gas t xico El reactivo 2 contiene hidr xido de sodio H314 que es corrosivo para los ojos y la piel y requiere el uso de prot
190. o tubo de reac o a integridade da sonda e a estabilidade do corante O PCC aprovado se preencher os crit rios de aceita o atribu dos Controlos externos KWIK STIKs MicroBioLogics ref 0158MRSA SCC mec tipo II e ref 0360SA como controlos positivos e ref 0371MSSE como controlo negativo podem ser utilizados para forma o testes de profici ncia e controlo de qualidade externo do GeneXpert Dx System Estirpes de MRSA que representem outros tipos de SCC mec se estiverem dispon veis podem ser utilizadas como controlos positivos externos adicionais para monitorizar os primers e sondas n o directamente controlados no ensaio Os controlos externos podem ser utilizados de acordo com os regulamentos dos organismos de acredita o e governamentais conforme aplic vel Siga o procedimento do controlo externo da MicroBioLogics descrito a seguir Abra a bolsa no entalhe e retire o KWIK STIK Aperte o fundo da ampola na tampa para libertar o l quido hidratante Segure na vertical e bata levemente para facilitar a passagem do l quido pela haste at ao fundo da unidade que cont m o pellet Para facilitar a dissolu o do pellet de c lulas liofilizadas esmague o e aperte suavemente a c mara inferior Rasgue o KWIK STIK para libertar a zaragatoa e insira a no tubo que cont m o reagente de elui o tampa de enroscar A zaragatoa KWIK STIK est agora pronta para o teste do ensaio Xpert MRSA SA SSTI N JOS pe e A CID or Se
191. oben ID Standort 1 Standort 2 Standort 3 Gesamt bereinstimmung Neg MSSE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 SA Hoch Neg 100 20 20 100 20 20 90 18 20 96 7 58 60 SA Schwach Pos 100 20 20 100 20 20 95 19 20 98 3 59 60 MRSA1 Hoch Neg 100 20 20 90 18 20 100 20 20 96 6 58 60 MRSA1 Schwach Pos 100 20 20 100 20 20 90 18 20 96 6 58 60 MRSA2 Hoch Neg 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 MRSA2 Schwach Pos 100 20 20 95 19 20 95 19 20 96 6 58 60 Prozentuale Gesamt bereinstimmung 100 140 140 97 9 137 140 95 7 134 140 97 9 411 420 nach Standort 301 0190 Rev C February 2012 57 Deutsch Tabelle 11 bersicht der Ergebnisse f r Ct Werte nach Probenstufe und Sonde SPC Stufe Mittelwert Std abw CV MRSA1 Hoch Neg 34 52 0 82 2 36 MRSA2 Hoch Neg 34 46 0 85 2 46 Neg MSSE 34 44 0 90 2 62 SA Hoch Neg 34 38 0 92 2 66 Spa Stufe Mittelwert Std abw CV MRSA1 Schwach Pos 32 96 0 8 2 44 MRSA2 Schwach Pos 31 05 0 69 2 21 SA Schwach Pos 33 91 0 8 2 35 mecA Stufe Mittelwert Std abw CV MRSA1 Schwach Pos 33 25 0 80 2 40 MRSA2 Schwach Pos 31 50 0 68 2 16 SCCmec Stufe Mittelwert Std abw CV MRSA1 Schwach Pos 34 19 0 90 2 63 MRSA2 Schw
192. on Device following the user institution s standard procedures The specimen swabs are placed back in the plastic transport tube liquid Stuarts medium Cepheid Sample Collection Device or Copan recommended stored at room temperature and sent to the GeneXpert testing area for processing within the next day The remaining untested swab for microbiology culture should be placed in appropriate transport systems and cultured within 4 days If not sent by the next day the specimen should be transported on ice Alternatively swabs may be stored at 2 8 C for testing up to 5 days Microbiology Culture For SSTI culturing methods follow current laboratory standard operating procedures For culturing remaining untested swab specimens should be placed in appropriate transport systems and cultured within 4 days 301 0190 Rev C February 2012 3 English Procedure Preparing the Cartridge Important Start the test within 15 minutes of adding the reagents to the cartridge To add the sample and reagent into the cartridge de 2 Remove the cartridge and reagent from the package Remove the swab from the transport container Note Use sterile gauze to handle swab to minimize risk of contamination 3 4 5 Insert the swab into the tube containing the elution reagent and break the swab Close the elution vial lid and vortex at high speed for 10 seconds Open the cartridge lid Using a sterile transfer pipette transfer the entire c
193. onjunto de dados eleg vel a utiliza o de antibi ticos nas 3 semanas anteriores recolha das amostras foi reportada em 207 participantes sendo confirmada a n o utiliza o de antibi ticos em 441 participantes em 200 dos casos desconhecia se se tinham sido utilizados antibi ticos anteriormente ou n o Foi observada uma diminui o estatisticamente significativa em termos de taxa de resultados positivos de SA comparativamente com os resultados obtidos com a cultura nos casos em que tinham sido utilizados antibi ticos p 0 007 este fen meno tamb m se encontra descrito na literatura 10 11 12 13 14 A taxa de resultados positivos de MRSA para a cultura tamb m diminuiu embora em menor grau p 0 022 N o foi observada uma diminui o da taxa de resultados positivos com o ensaio Xpert MRSA SA SSTI nos casos em que tinham sido utilizados antibi ticos nem foi observada qualquer inibi o no ensaio na presen a de antibi ticos t picos consulte Subst ncias Interferentes A diminui o das taxas de culturas positivas para MRSA e SA na presen a de antibi ticos causou um valor mais elevado do que o esperado em termos de taxas de resultados falsos positivos observado com o ensaio Xpert MRSA SA SSTI Cinco 5 das 246 culturas positivas para MRSA apresentavam infec es mistas de MRSA e SA O Xpert MRSA SA SSTI identificou 3 das 5 infec es mistas como MRSA positivo e 2 das 5 infec es como SA positivo MRSA negativo O des
194. ontenir du sang et 404 contenaient d autres substances non sp cifiques susceptibles d interf rer avec le test notez que certains chantillons contenaient plusieurs types de contaminants potentiels La m thode exacte de Fisher appliqu e sur les donn es g n r es partir des couvillons comportant ou non ces substances parasites potentielles a d montr que leur presence n affectait pas les performances du test Dans une tude non clinique les substances parasites potentielles pouvant tre pr sentes dans des chantillons cliniques d infections de la peau et des tissus mous ont t directement valu es en comparaison avec les performances du test Xpert MRSA SA SSTI Les substances parasites potentielles dans les infections de la peau et des tissus mous peuvent inclure sans s y limiter le sang le pus le plasma les pommades topiques antibiotiques antiseptiques antalgiques les agents de parage et les teintures Ces substances figurent aux tableaux 1 et 2 avec les ingr dients actifs et les concentrations test s Une inhibition du test MRSA SA SSTI a t observ e avec les substances suivantes StaphA Septic 5 m v hydrocortisone 5 m v et d sinfectant antibact rien pour les mains 5 m v Les chantillons contenant du mercurochrome ne doivent pas tre utilis s en raison de sa nature fluorescente Tableau 1 Substances parasites potentielles test es pour les SSTI Substance Ingr dient a
195. ontents of the elution reagent to the S chamber of the Xpert MRSA SA SSTI Assay cartridge Close the cartridge lid Figure 1 Xpert MRSA SA SSTI Assay cartridge top view Starting the Test Important Before you start the test make sure the Xpert MRSA SA SSTI Assay definition file is imported into the software This section lists the basic steps for running the test For detailed instructions see the GeneXpert Dx System Operator Manual 1 2 3 4 N Turn on the GeneXpert Dx instrument and then turn on the computer The GeneXpert software will launch automatically Log on to the GeneXpert Dx System software using your user name and password In the GeneXpert Dx System window click Create Test The Scan Cartridge Barcode dialog box appears Scan the barcode on the Xpert MRSA SA SSTI Assay cartridge The Create Test window appears Using the barcode information the software automatically fills the boxes for the following fields Select Assay Reagent Lot ID Cartridge SN and Expiration Date In the Sample ID box scan or type the sample ID Make sure you type the correct sample ID The sample ID is associated with the test results and is shown in the View Results window and all the reports Click Start Test In the dialog box that appears type your password Open the instrument module door with the blinking green light and load the cartridge Close the door The test starts and the green light stops blinki
196. or Xpert MRSA SA SSTI Assay 428 of the 848 specimens were observed to contain blood and 404 were observed to contain other non specific substances which could potentially interfere with the assay note that some specimens contained more than one type of potential contaminant Fisher s exact tests conducted on the data generated from swabs with and without these potential interfering substances demonstrated that their presence did not affect the assay performance In a non clinical study potential interfering substances that may be present in clinical skin and soft tissue infection specimens were evaluated directly relative to the performance of the Xpert MRSA SA SSTI Assay Potential interfering substances in skin and soft tissue infections may include but are not limited to blood pus plasma topical ointments antibiotic antiseptic pain relieving debriding agents and tinctures These substances are listed in Table 1 and Table 2 with the active ingredients and concentrations tested shown Inhibition of the MRSA SA SSTI Assay has been observed with the following substances StaphA Septic 5 w v Hydrocortisone 5 w v and antibacterial hand sanitizer 5 w v Samples containing Mercurochrome may not be used due to its fluorescent nature Table 1 Potential Interfering SSTI Substances Tested Substance Active Ingredient Tested TET Buffer control Control Control Buffy Coat wound surrogate WBC 1 5e9 mL 50
197. or Xpert MRSA SA SSTI Assay testing 7 If the External QC fails to perform as expected repeat external control test and or contact Cepheid for assistance Examples of Xpert MRSA SA SSTI Assay results are shown in Figure 2 through Figure 5 301 0190 Rev C February 2012 5 English Figure 3 An example of a MRSA negative SA positive result 6 301 0190 Rev C February 2012 Interpretation of Results Test and Analyte Result Detail Errors History Figure 5 An example of an invalid result Interpretation of Results The results are interpolated by the GeneXpert Dx System from measured fluorescent signals and embedded calculation algorithms and will be shown in the View Results window Possible results are MRSA POSITIVE SA POSITIVE The Xpert MRSA SA SSTI Assay can detect MRSA and or SA DNA from non viable organisms MRSA target DNA sequences are detected SA target DNA sequence is detected e MRSA POSITIVE all MRSA targets spa mecA and SCC mec have a cycle threshold Ct within the valid range and endpoint above the minimum setting SPC NA not applicable SPC is ignored because MRSA amplification may compete with this control Probe Check PASS all probe check results pass 301 0190 Rev C February 2012 7 English MRSA NEGATIVE SA POSITIVE The Xpert MRSA SA SSTI Assay can detect MRSA and or SA DNA from non viable organisms MRSA target DNA sequences are not detected
198. os os ingredientes activos e as concentra es testadas Foi observada inibi o do ensaio MRSA SA SSTI com as subst ncias seguintes StaphA Septic 5 p v hidrocortisona 5 p v e desinfectante antibacteriano para as m os 5 p v N o podem ser utilizadas amostras contendo mercurocromo devido natureza fluorescente do mesmo Tabela 1 Subst ncias potencialmente interferentes com as SSTI testadas Subst ncia Ingrediente activo testada Tamp o TET controlo Controlo Controlo Camada leucoplaquet ria substituto de ferida Leuc citos 1 5e9 ml 50 viv Sangue total isento de MRSA SA N o aplic vel 50 v v Plasma N o aplic vel 50 v v Neosporina 400 unidades de bacitracina 1 e 5 p v 5000 unidades de polimixina B 3 5 mg de neomicina StaphA Septic Cloreto de benzet nio a 0 2 1 e5 p v lidoca na HCl a 2 5 Hidrocortisona Hidrocortisona a 1 1 e 5 p v Pomada para al vio cut neo Benzoca na a 20 1 e 5 p v Tintura de iodo lodo a 2 50 v v Tabela 2 Subst ncias potencialmente interferentes com as SSTI testadas Subst ncia Ingrediente activo testada Tamp o TET controlo Controlo Controlo Mupirocina Cloreto de benzet nio a 0 2 5 p v lidoca na HCl a 2 5 Sangue total isento de MRSA SA N o aplic vel 50 viv Solu o salina Cloreto de s dio a 0 65 50 v v
199. ostic in vitro uniquement Nom d pos Xpert MRSA SA SSTI Nom d usage Test MRSA SA SSTI Utilisation pr vue Le test Xpert MRSA SA des infections de la peau et des tissus mous SSTT Skin and Soft Tissue Infection de Cepheid r alis dans le GeneXpert Dx System est un test de diagnostic in vitro qualitatif con u pour la d tection du Staphylococcus aureus SA et du Staphylococcus aureus r sistant la m thicilline SARM sur couvillon lors d infections de la peau et des tissus mous Le test utilise la r action en cha ne par la polym rase PCR en temps r el automatis e pour d tecter l ADN du SARM SA Le test Xpert MRSA SA SSTI est con u pour tre utilis en association avec d autres tests de laboratoire tels que la culture microbiologique ainsi qu avec les donn es cliniques dont dispose le clinicien pour contribuer la d tection du SARM SA lors d infections de la peau et des tissus mous Le test Xpert MRSA SA SSTI n est pas indiqu pour contr ler le traitement des infections SARM SA Les cultures simultan es du SA et du SARM servent uniquement r cup rer des organismes pour le typage pid miologique ou pour des tests de sensibilit R sum et explication Le Staphylococcus aureus SA est un agent pathog ne opportuniste humain bien connu et un important agent pathog ne nosocomial l origine de nombreuses pathologies Certaines peuvent comporter des infections de la peau et des tissus mous notammen
200. petta di trasferimento monouso 2 Vortexare e aggiungere tutto il contenuto del reagente di eluizione nella camera S di una nuova cartuccia del saggio MRSA SA SSTI 3 Chiudere il coperchio e avviare una nuova analisi Se non possibile eseguire nuovamente l analisi entro 3 ore utilizzare un campione nuovo Limitazioni Le prestazioni del saggio Xpert MRSA SA SSTI sono state validate solo con le procedure fornite in questo foglio illustrativo Le modifiche apportate a queste procedure possono alterare le prestazioni dell analisi I risultati del saggio Xpert MRSA SA SSTI devono essere interpretati contestualmente agli altri dati clinici e di laboratorio a disposizione del medico Il saggio Xpert MRSA SA SSTI riesce a rilevare DNA di MRSA e o SA da organismi non vitali La probabilit che ci si verifichi aumenta nei pazienti trattati con antibiotici Nello studio clinico cruciale il tasso falso positivo rispetto alla coltura di rilevamento di SA in pazienti trattati con antibiotici nelle 3 settimane precedenti all analisi con Xpert MRSA SA era pari al 13 8 Il tasso falso positivo rispetto alla coltura di rilevamento di MRSA in pazienti trattati con antibiotici nelle 3 settimane precedenti all analisi con Xpert MRSA SA era pari al 9 5 Un risultato positivo dell analisi non indica necessariamente la presenza di organismi vitali E tuttavia presuntivo per la presenza di MRSA o SA I test con il saggio Xpert MRSA SA S
201. positiva MRSA 94 0 95 Intervalo de confianza 83 5 98 7 Porcentaje de correspondencia negativa MRSA 97 3 95 Intervalo de confianza 93 3 99 3 Porcentaje de correspondencia positiva SA MRSA 96 9 95 Intervalo de confianza 91 2 99 4 Porcentaje de correspondencia negativa SA MRSA 88 3 95 Intervalo de confianza 80 5 93 8 74 301 0190 Rev C February 2012 Variantes de casete vac o En los sujetos en los que se desconoc a el uso de antibi ticos 3 semanas antes de la recogida de la muestra el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI identific un 94 0 de muestras positivas para MRSA y un 97 3 de muestras negativas para MRSA con respecto al m todo de cultivo de referencia y un 96 9 de muestras positivas para SA y un 88 3 de muestras negativas para SA con respecto al m todo de cultivo de referencia De estos sujetos en los que se desconoc a el uso de antibi ticos el 97 0 194 200 arroj un resultado correcto en el primer Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Los 6 restantes arrojaron resultados indeterminados en el primer intento 2 INVALID 3 ERROR y 1 NO RESULT De los 6 resultados indeterminados en el primer intento todos dieron resultados en el segundo intento Tabla 6 Rendimiento de MRSA SA en sujetos en los que se conoce el uso de antibi ticos 3 semanas antes de la recogida de la muestra frente a cultivo de referencia Cultivo MRSA SA MRSA Neg Sin Total crecimiento
202. quer modifica o destes procedimentos pode alterar o desempenho do teste Os resultados do ensaio Xpert MRSA SA SSTI devem ser interpretados em conjunto com outros dados laboratoriais e cl nicos disposi o do m dico O ensaio Xpert MRSA SA SSTI pode detectar ADN de MRSA e ou SA a partir de organismos n o vi veis A probabilidade de isto ocorrer aumenta em pacientes que estejam a tomar antibi ticos No estudo cl nico central a taxa de resultados falsos positivos relativamente cultura de detec o de SA em pacientes que utilizaram antibi ticos durante as 3 semanas anteriores realiza o do teste Xpert MRSA SA foi de 13 8 A taxa de resultados falsos positivos relativamente cultura de detec o de MRSA em pacientes que utilizaram antibi ticos durante as 3 semanas anteriores realiza o do teste Xpert MRSA SA foi de 9 5 Um teste positivo n o indica necessariamente a presen a de organismos vi veis Indica no entanto a presen a presum vel de MRSA ou SA Os testes com o ensaio Xpert MRSA SA SSTI devem ser utilizados como auxiliares de outros m todos dispon veis Podem ocorrer resultados de teste errados devido a colheita de amostra incorrecta incumprimento dos procedimentos recomendados para colheita manuseamento e conserva o da amostra erro t cnico troca de amostras ou porque o n mero de organismos na amostra est abaixo do limite de detec o do teste O cumprimento cuidadoso das instru es d
203. r 28 Staphylococcus Micrococcus and Other Catalase Positive Cocci that Grow Aerobically Manual of clinical microbiology 8th ed ASM Press Washington DC Pages 384 404 2 Mainous AG Hueston WJ Everett et al 2006 Nasal Carriage of Staphylococcus aureus and Methicillin Resistant S aureus in the United States 2001 2002 An Family Medicine 4 2 132 137 3 National Nosocomial Infections Surveillance NNIS System Report data summary from January 1992 through June 2004 issued October 2004 Am J Infect Control 2004 32 470 85 4 Chaix C Durand Zileski I Alberti C Buisson B 1999 Control of Endemic Methicillin Resistant Staphylococcus aureus JAMA 282 19 1745 51 5 Shopsin B Kreiswirth BN 2001 Molecular Epidemiology of Methicillin Resistant Staphylococcus aureus Emerging Infectious Diseases 7 2 323 6 6 Salgado CD et al 2003 Community Acquired Methicillin Resistant Staphylococcus aureus A Meta analysis of Prevalence and Risk Factors CID 36 131 7 Donnio P Y F vrier F Bifani P et al 2007 Molecular and epidemiological evidence for the spread of multiresistant methicillin susceptible Staphylococcus aureus strains in hospitals Antimicrobial Agents Chemother 51 4342 4350 8 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 9 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly
204. rapporto MRSA SA di 1 10x10 Negli studi clinici 5 delle 246 colture positive per MRSA presentavo infezioni miste di MRSA e SA Xpert MRSA SA SSTI ha identificato 3 delle 5 infezioni miste come MRSA positive e 2 delle 5 come SA positive MRSA negative Linibizione del saggio MRSA SA SSTI stata osservata con le seguenti sostanze StaphA Settico 5 w v Idrocortisone 5 w v e disinfettante antibatterico per le mani 5 w v 301 0190 Rev C February 2012 91 Italiano I campioni contenenti mercurio cromo non devono essere utilizzati a causa della natura fluorescente di quest ultimo Il saggio Xpert MRSA SA SSTI generer un risultato MRSA falso positivo durante l analisi di un campione SSTI da infezione mista contenente sia Staphylococcus coagulasi negativo resistente alla meticillina MRCNS che una cassetta vuota di Staphylococcus aureus SA resistente alla meticillina Sostanze interferenti Nello studio sperimentale per il saggio Xpert MRSA SA SSTI 428 degli 848 campioni osservati contenevano sangue e 404 contenevano sostanze non specifiche capaci di interferire potenzialmente con il saggio notare che alcuni campioni contenevano pi di un tipo di potenziali sostanze contaminanti I test esatti di Fischer condotti sui dati generati da campioni con e senza tali sostanze potenzialmente interferenti hanno dimostrato che la loro presenza non ha effetti sulle prestazioni del saggio In uno studio non clinico le sostanze potenzi
205. re de GeneXpert Dx System cliquez sur Create Test Cr er un test La bo te de dialogue Scan Cartridge Barcode scanner le code barres de la cartouche s affiche 4 Lisez le code barres de la cartouche du test Xpert MRSA SA SSTT La fen tre Create Test Cr er un test appara t En utilisant les informations du code barres le logiciel compl te automatiquement les cases des champs suivants Select Assay S lectionner un test Reagent Lot ID N Id du lot de r actifs Cartridge SN Cartouche SN et Expiration Date Date limite d utilisation 5 Dans la case Sample ID N Id de l chantillon scannez ou saisissez le num ro d identification de l chantillon Assurez vous de saisir le num ro d identification correct Le num ro d identification de l chantillon est associ aux r sultats du test et affich dans la fen tre View results Afficher les r sultats et dans tous les rapports Cliquez sur Start Test D marrer le test Dans la bo te de dialogue qui appara t saisissez votre mot de passe Ouvrez la porte du module de l appareil dont le voyant vert clignote et chargez la cartouche Fermez la porte Le test d marre et le voyant vert cesse de clignoter Lorsque le test est termin le voyant s teint D EN CD Attendez que le syst me d verrouille la porte du module avant de l ouvrir et de retirer la cartouche 10 Les cartouches usag es doivent tre limin es dans les conteneurs d chets pour chantil
206. re included in the study The analytical specificity was 100 Evaluation of BORSA Strains Seven 7 well characterized borderline oxacillin resistant Staphylococcus aureus BORSA strains were tested including one apparent empty cassette see above Methicillin resistant Staphylococcus aureus is resistant to all amp lactam drugs through the alternative penicillin binding protein PBP2a encoded by mecA BORSA strains are mecA negative but exhibit an oxacillin minimum inhibitory concentration MIC gt 2 and lt 8 pg mL It is especially valuable to distinguish MRSA from BORSA to prevent the unnecessary and inappropriate use of vancomycin and isolation precautions not warranted for patients infected with a lactam susceptible strain Under the conditions of this study all 7 BORSA isolates including the apparent empty cassette isolate were reported MRSA negative SA positive at both high and low cell concentrations using the Xpert MRSA SA SSTI Assay No mecA signals were reported These results demonstrate that a BORSA strain will be correctly identified as MRSA negative SA positive and will not report a false positive MRSA test result using the Xpert MRSA SA SSTI Assay 14 301 0190 Rev C February 2012 Analytical Performance Analytical Sensitivity Limit of Detection Studies Studies were performed to determine the 95 confidence intervals for the analytical limit of detection LoD of Staphylococcus aureus SA cells and
207. render Eigenschaften nicht verwendet werden Tabelle 1 Getestete potenziell interferierende Substanzen bei Haut und Weichgewebeinfektionen SSTI Substanz Aktiver Inhaltsstoff Getesteter Prozentsatz TET Buffer Kontrolle Kontrolle Kontrolle Buffy Coat Wundsurrogat Leukozyten 1 5e9 ml 50 v v Vollblut MRSA SA frei N A 50 v v Plasma N A 50 v v Neosporin 400 Einheiten Bacitracin 1 und 5 w v 5 000 Einheiten Polymyxin B 3 5 mg Neomycin StaphA Septic Wundsalbe 0 2 Benzethoniumchlorid 1 und 5 w v 2 5 Lidocain HCI Hydrocortison 1 Hydrocortison 1 und 5 w v Boil Ease Furunkelmittel 20 Benzocain 1 und 5 w v Jodtinktur 2 Jod 50 v v 50 301 0190 Rev C February 2012 Erwartete Werte Tabelle 2 Getestete potenziell interferierende Substanzen bei Haut und Weichgewebeinfektionen SSTI Substanz Aktiver Inhaltsstoff Getesteter Prozentsatz TET Buffer Kontrolle Kontrolle Kontrolle Mupirocin 0 2 Benzethoniumchlorid 2 5 5 w v Lidocain HCI Vollblut MRSA SA frei N A 50 v v Kochsalzl sung 0 65 Natriumchlorid 50 v v Antibakterielle Handwaschl sung 62 Ethylalkohol 1 und 5 w v 70 Isopropanol 70 Isopropanol 50 v v Erwartete Werte In der klinischen Xpert MRSA SA SSTI Studie wurden insgesamt 848 SSTI Proben aus vier gro en Krankenh usern in den USA untersucht Anzahl und Prozentanteil positiver
208. reu nos EUA Nenhuma prote na de ruminante ou outra prote na animal foi administrada aos animais os animais foram aprovados em testes ante e post mortem Durante o processamento n o houve mistura do material com outros materiais de origem animal Conservac o e manuseamento JE Conserve os cartuchos e reagentes do ensaio Xpert MRSA SA SSTI a 2 28 C Do Nao utilize reagentes ou cartuchos fora do prazo da validade N o abra um cartucho at estar pronto para realizar o teste e Utilize o cartucho e os reagentes dentro de 30 minutos ap s a abertura da tampa do cartucho Nao utilize quaisquer reagentes que tenham ficado turvos ou descoloridos Materiais necess rios n o fornecidos Sistema GeneXpert Dx a refer ncia varia com a configura o instrumento GeneXpert computador leitor de c digos de barras e Manual do utilizador Impressora consulte o Manual do utilizador do sistema GeneXpert Dx para obter as orienta es de compatibilidade Dispositivo de colheita de amostras Cepheid 900 0370 ou Copan equivalente e Agitador vortex e Pipetas de transfer ncia descart veis Gaze esterilizada Materiais necess rios n o fornecidos KWIK STIKs MicroBiologics ref 0158MRSA e ref 0360SA como controlos positivos e ref 0371MSSE Staphylococcus epidermis sens veis meticilina como controlo negativo 104 301 0190 Rev C February 2012 Advert ncias e precau es Advert ncias e precau es Tra
209. rformance in Subjects with Known Antibiotic Use within 3 weeks of sample collection vs Reference Culture Culture MRSA SA MRSA Neg No Growth Total MRSA 44 2 10 56 PR 3 SA MRSA 3 31 19 53 SA 3 1 94 98 Total 50 34 123 207 Positive Percent Agreement MRSA 88 0 95 Confidence Interval 75 7 95 5 Negative Percent Agreement MRSA 92 4 95 Confidence Interval 87 0 96 0 Positive Percent Agreement SA MRSA 95 2 95 Confidence Interval 88 3 98 7 Negative Percent Agreement SA MRSA 76 4 95 Confidence Interval 67 9 83 6 Among subjects with known antibiotic use within the 3 weeks prior to sample collection the Xpert MRSA SA SSTI Assay identified 88 0 of the specimens positive for MRSA and 92 4 of the specimens negative for MRSA relative to the reference culture method and 95 2 of the specimens positive for SA and 76 4 of the specimens negative for SA relative to the reference culture method Among these subjects with antibiotic use 96 1 199 207 of these eligible specimens were successful on the first attempt with the Xpert MRSA SA SSTI Assay The remaining 8 gave indeterminate results on the first attempt 5 INVALID and 3 ERROR Of the 8 indeterminate on the first attempt all gave a result on the second attempt Empty Cassette Variants For an isolate to be identified as MRSA positive with the Xpert MRSA SA SSTI Assay the test for spa must be positive as well as th
210. robial Resistance in Staphylococcus aureus repr sentent des esp ces phylog n tiquement proches du Staphylococcus aureus ou potentiellement pr sentes dans un environnement hospitalier Elles comprenaient des staphylocoques coagulase n gative sensibles la m thicilline 29 et des staphylocoques coagulase n gative r sistants la m thicilline 9 Les organismes test s ont t identifi s comme esp ces Gram positif 74 Gram n gatif 28 ou comme levures 3 Ils ont galement t classifi s comme a robies 95 ou ana robies 10 Deux 2 r plicats ou plus de chaque isolat ont t test s dans la plage de 1 7 3 2 unit s McFarland Dans les conditions de l tude tous les isolats ont t d clar s n gatifs au SARM et au SA aucun des isolats n a t d tect par le test Xpert MRSA SA SSTI Des t moins positifs et n gatifs taient inclus dans Fetude La sp cificit analytique tait de 100 valuation de souches BORSA Sept 7 souches de Staphylococcus aureus r sistance de bas niveau loxacilline BORSA ont t test es dont une semblant pr senter une variante cassette vide voir ci dessus Le Staphylococcus aureus r sistant la m thicilline est r sistant tous les m dicaments lactam en raison de la prot ine alternative PBP2a liant la p nicilline qui est encod e par le g ne mecA Les souches BORSA sont n gatives au mecA mais pr sentent une concentration
211. rochen bevor er abgeschlossen war Wenn eine externe Qualit tskontrolle nicht erwartungsgem verl uft den externen Kontrolltest wiederholen und oder Kontakt zu Cepheid wegen Unterst tzung aufnehmen So f hren Sie einen Wiederholungstest durch Wenn der Wiederholungstest innerhalb von 3 Stunden nach einem unbestimmten Ergebnis durchgef hrt wird 1 Den restlichen Inhalt mit einer Einweg bertragungspipette aus Kammer S in ein neues Elutionsreagenz bertragen 2 Vortexen und den gesamten Inhalt des Elutionsreagenz zu Kammer S der neuen MRSA SA SSTI Testkartusche hinzuf gen 3 Den Deckel schlie en und den Wiederholungstest starten Wenn der Wiederholungstest nicht innerhalb von 3 Stunden durchgef hrt werden kann eine neue Probe verwenden Einschr nkungen Die Leistung der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung wurde nur anhand der Prozeduren gepr ft die in der Packungsbeilage beschrieben sind nderungen an diesen Prozeduren k nnen die Leistung des Tests beeintr chtigen Ergebnisse der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung sollten unter Ber cksichtigung anderer Klinik und Labordaten interpretiert werden die dem Kliniker zur Verf gung stehen Die Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung kann MRSA und oder SA DNA aus nicht lebenden Organismen anzeigen Die Wahrscheinlichkeit eines solchen Falls steigt bei Patienten die mit Antibiotika behandelt werden In der ma geblichen klinischen Studie lag der Anteil falsch positiver Ergeb
212. rollen k nnen gegebenenfalls nach Ma gabe anerkannter Institutionen und beh rdlicher Vorschriften verwendet werden Es sind die weiter unten beschriebenen externen MicroBioLogics Kontrollverfahren anzuwenden 1 Den Beutel am Einschnitt aufrei en und den KWIK STIK entnehmen 2 Den unteren Teil der Ampulle in den Deckel dr cken um das hydrierende Fluid freizusetzen 3 Vertikal halten und punktieren um den Fl ssigkeits Flow durch den Schaft in den unteren Bereich des Ger ts mit den K gelchen zu erleichtern 4 Um die Aufl sung des lyophilisierten Zellk gelchens zu erleichtern das K gelchen zerdr cken und den unteren Kammerbereich vorsichtig zusammendr cken 5 Den KWIK STIK auseinanderziehen um den Tupfer freizugeben und den Tupfer in das R hrchen mit dem Elutionsreagenz Schraubkappe einf hren 6 Der KWIK STIK Tupfer ist jetzt f r den Xpert MRSA SA SSTI Untersuchungstest bereit 7 Wenn die externe Qualit tskontrolle nicht erwartungsgem verl uft den externen Kontrolltest wiederholen und oder Kontakt zu Cepheid wegen Unterst tzung aufnehmen Beispiele f r Ergebnisse des MRSA SA SSTI Untersuchung werden in den Abbildungen 2 bis 5 gezeigt 301 0190 Rev C February 2012 45 Deutsch Abbildung 3 Beispiel f r das Ergebnis MRSA negativ SA positiv 46 301 0190 Rev C February 2012 Interpretation der Ergebnisse Abbildung 5 Beispiel eines ung ltigen Ergebnisses Interpretation
213. rrespondencia negativa MRSA 97 3 95 Intervalo de confianza 94 7 98 8 Porcentaje de correspondencia positiva SA MRSA 95 7 95 Intervalo de confianza 92 2 97 9 Porcentaje de correspondencia negativa SA MRSA 89 5 95 Intervalo de confianza 84 6 93 3 En los sujetos que no usaron antibi ticos 3 semanas antes de la recogida de la muestra el Ensayo Xpert MRSA SA SSTI identific un 93 8 de muestras positivas para MRSA y un 97 3 de muestras negativas para MRSA con respecto al m todo de cultivo de referencia y un 95 7 de muestras positivas para SA y un 89 5 de muestras negativas para SA con respecto al m todo de cultivo de referencia De estos sujetos que no usaron antibi ticos el 96 8 427 441 arroj un resultado correcto en el primer Ensayo Xpert MRSA SA SSTI Los 14 restantes arrojaron resultados indeterminados en el primer intento 6 INVALID 7 ERROR y 1 NO RESULT De los 14 resultados indeterminados del primer intento todos dieron resultados en el segundo intento Tabla 5 Rendimiento de MRSA SA en sujetos en los que se desconoce el uso de antibi ticos 3 semanas antes de la recogida de la muestra frente a cultivo de referencia Cultivo MRSA SA MRSA Neg Sin Total crecimiento MRSA 47 0 4 51 r 8 SA MRSA 2 45 8 55 SA 1 2 91 94 Total 50 47 103 200 2 2 de las 47 eran infecciones mixtas por MRSA y SA Porcentaje de correspondencia
214. rt Die tryptische Soja Bouillon wurde anschlie end auf Platten mit Cefoxitin f r MRSA und ohne Cefoxitin f r SA ausgestrichen Wenn eine oder beide der SA oder MRSA Platten vermutete Kolonien von S aureus aufwies wurden die Kolonien auf einer Blutagarplatte subkultiviert Die Best tigung der vermutet positiven Kolonien erfolgte mittels Katalase R hrchen Koagulase und Gram F rbung Die von MecA bewirkte Oxacillin Resistenz wurde durch Disk Diffusionstests mit einer 30 ug Cefoxitin Disk and einem Ausschnitt von 21 22 mm ermittelt Wenn die Kulturen f r die SA und die MRSA Platten beide negativ waren wurde die archivierte tryptische Soja Bouillon mit 6 5 NaCl auf Blutagar subkultiviert und anschlie end auf SA MRSA untersucht wie oben beschrieben Die Leistung der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung wurde im Verh ltnis zu den Referenzkulturergebnissen berechnet 301 0190 Rev C February 2012 51 Deutsch Gesamtergebnisse Insgesamt wurden mit der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung und im Kulturverfahren 848 Proben auf MRSA und SA getestet Von diesen 848 F llen waren 207 Patienten innerhalb von drei Wochen vor der Probenentnahme mit Antibiotika behandelt worden bei 441 Patienten war dies nicht der Fall gewesen und in 200 F llen war nicht bekannt ob Antibiotika genommen worden waren oder nicht Eine statistisch signifikante Abnahme der SA positiven Ergebnisse bei Kulturverfahren wurde nach Einnahme von Antibiotika festgestellt p 0 007
215. ry 2012 11 English Table 4 MRSA SA Performance in Subjects with No Antibiotic Use within 3 weeks of sample collection vs Reference Culture Culture MRSA SA MRSA Neg No Growth Total MRSA 137 2 6 145 3 SA MRSA 3b 79 16 98 SA 6 4 188 198 Total 146 85 210 441 1 of the 137 was mixed infection of MRSA and SA 2 of the 3 were mixed infections of MRSA and SA Positive Percent Agreement MRSA 93 8 95 Confidence Interval 88 6 97 1 Negative Percent Agreement MRSA 97 3 95 Confidence Interval 94 7 98 8 Positive Percent Agreement SA MRSA 95 7 95 Confidence Interval 92 2 97 9 Negative Percent Agreement SA MRSA 89 5 95 Confidence Interval 84 6 93 3 Among subjects with no antibiotic use within the 3 weeks prior to sample collection the Xpert MRSA SA SSTI Assay identified 93 8 of the specimens positive for MRSA and 97 3 of the specimens negative for MRSA relative to the reference culture method and 95 7 of the specimens positive for SA and 89 5 of the specimens negative for SA relative to the reference culture method Among these subjects with no antibiotic use 96 8 427 441 were successful on the first attempt with the Xpert MRSA SA SSTI Assay The remaining 14 gave indeterminate results on the first attempt 6 INVALID 7 ERROR and 1 NO RESULT Of the 14 indeterminate on the first attempt all gave a result on the second attempt Table 5 MRSA
216. s recolha de amostras o ensaio Xpert MRSA SA SSTI identificou 88 0 das amostras positivas para MRSA e 92 4 das amostras negativas para MRSA relativamente ao m todo de cultura de refer ncia e 95 2 das amostras positivas para SA e 76 4 das amostras negativas para SA relativamente ao m todo de cultura de refer ncia Entre estes participantes com utiliza o de antibi ticos confirmada 96 1 199 207 das amostras eleg veis obtiveram um resultado v lido na primeira tentativa do ensaio Xpert MRSA SA SSTI As restantes 8 apresentaram resultados indeterminados na primeira tentativa 5 INV LIDO e 3 ERRO Dos 8 participantes que apresentaram resultados indeterminados na primeira tentativa todos apresentaram um resultado na segunda tentativa Variantes de cassete vazia Para que um isolado seja identificado como positivo para MRSA com o ensaio Xpert MRSA SA SSTI o teste de spa tem de ser positivo bem como o teste de mecA e SCCmec Um isolado que apresente um resultado positivo para spa e SCC mec mas n o para mecd reportado como SA porque sens vel meticilina Esta situa o pode ocorrer quando a por o do elemento SCC mec que transporta mecA excisada mas as extremidades deste elemento m vel permanecem no lugar originando um sinal SCC mec positivo Estes isolados s o por vezes referidos como variantes de cassete vazia n o sendo invulgares no ambiente cl nico import ncia destes isolados resid
217. s as MRSA positive and 2 of the 5 as SA positive MRSA negative INVALID Presence or absence of MRSA SA target DNA sequences cannot be determined repeat test according to instructions in the section below SPC does not meet acceptance criteria the sample was not properly processed or PCR was inhibited INVALID Presence or absence of Staphylococcus aureus DNA cannot be determined SPC FAIL SPC target result is negative and the SPC Ct is not within valid range and endpoint below minimum setting Probe Check PASS all probe check results pass ERROR Presence or absence of MRSA SA target DNA sequences cannot be determined repeat test according to instructions in the section below The Probe Check Control failed which is probably due to an improperly filled reaction tube a probe integrity problem or because the maximum pressure limits were exceeded MRSA NO RESULT SA NO RESULT SPC NO RESULT Probe Check FAIL one or more of the probe check results fail If the probe check passed the error is caused by a system component failure NO RESULT Presence or absence of MRSA SA target DNA sequences cannot be determined repeat test according to instructions in the section below Insufficient data were collected to produce a test result For example this can occur if the operator stopped a test that was in progress MRSA NO RESULT SA NO RESULT SPC NO RESULT Probe Check NA
218. s d ADN cibles du SARM SA ne peut pas tre d termin e r p tez le test conform ment aux instructions de la section suivante Trop peu de donn es ont t collect es pour produire un r sultat de test Par exemple cela peut se produire si lop rateur a interrompu un test en cours MRSA SARM NO RESULT PAS DE R SULTAT SA NO RESULT PAS DE R SULTAT SPC NO RESULT CTE PAS DE R SULTAT Probe Check NA Contr le de la sonde sans objet 28 301 0190 Rev C February 2012 Raisons pour lesquelles le test doit tre r p t Raisons pour lesquelles le test doit tre r p t R p tez le test Paide d une nouvelle cartouche ne r utilisez pas la cartouche et de nouveaux r actifs R p tez la proc dure de test dans les 3 heures suivant un r sultat ind termin Le r sultat INVALID NON VALIDE indique que le CTE a chou L chantillon n a pas t trait correctement ou la PCR est inhib e Le r sultat ERROR ERREUR indique l chec du contr le de la sonde et Pinterruption du test probablement cause du remplissage incorrect du tube de r action de la d tection d un probl me d int grit de la sonde de r actif ou du d passement des limites maximales de pression Le r sultat NO RESULT PAS DE R SULTAT indique que trop peu de donn es ont t collect es Par exemple l op rateur a interrompu un test en cours Si le contr le qualit externe ne pr sente pas les r sulta
219. s et le nombre de cas de SARM communautaire augmente provoquant une morbidit et une mortalit importantes Un taux de mortalit attribuable de 33 est signal pour le SARM et de 16 pour les bact ri mies SASM aureus sensible la m thicilline Les frais li s aux infections SARM augmentent galement consid rablement Pour tenter de limiter la propagation de ces infections des strat gies et des politiques de contr le ont t d velopp es et mises en ceuvre dans les tablissements de sant Le contr le du SARM constitue l objectif principal de la plupart des programmes de contr le des infections des h pitaux l heure actuelle la m thode standard de detection du SARM et du SA est la mise en culture qui est tr s laborieuse et peut prendre plusieurs jours pour l obtention d un r sultat d finitif 4567 Principe de la proc dure GeneXpert Dx System automatise et int gre la purification d chantillons l amplification d acide nucl ique et la d tection de la s quence cible dans des chantillons simples ou complexes en utilisant la r action en cha ne par la polym rase RT PCR en temps r el Le syst me est compos d un appareil d un ordinateur personnel et d un logiciel pr charg pour effectuer des tests et afficher les r sultats Le syst me requiert l utilisation de cartouches jetables et usage unique qui contiennent les r actifs PCR et abritent la proc dure de PCR La contamination crois e entre
220. s ont r ussi recevoir un r sultat d s la premi re tentative avec le test Xpert MRSA SA SSTT Les 8 chantillons restants ont obtenu des r sultats ind termin s lors de la premi re tentative 5 INVALID et 3 ERROR Ils ont toutefois tous re u un r sultat la seconde tentative Variantes cassette vide Pour identifier un isolat comme positif au SARM avec le test Xpert MRSA SA SSTI le test du spa doit tre positif ainsi que le test du mecA et du SCC mec Un isolat positif pour les g nes spa et SCC mec mais pas pour le gene mecA est signal positif au SA car il est sensible la m thicilline Cette situation peut survenir lorsque la partie de l l ment SCC mec portant le gene mecA est excis e alors que les extr mit s de cet l ment mobile restent en place ce qui renvoie un signal SCC mec positif Ces isolats parfois appel s variantes cassette vide ne sont pas rares dans un environnement clinique La signification de ces isolats risque d tre confuse pour un test de SARM qui ne d tecte pas directement le g ne mecA N anmoins le test Xpert MRSA SA SSTT a t d velopp de mani re identifier correctement ces variantes comme SA Parmi les chantillons admissibles inclus dans les analyses de donn es pr sent es dans ce rapport un total de 16 isolats correspondent au profil cassette vide ce qui entra ne un r sultat positif au test du spa et du SCC mec sans d tection du g ne mecA C
221. saio Xpert MRSA SA SSTI na institui o de inscri o do paciente a outra zaragatoa foi testada atrav s do m todo padr o da institui o sendo a amostra restante enviada para o laborat rio central para ensaios da cultura de refer ncia No laborat rio central a amostra foi enriquecida durante a noite em caldo tripticase soja com 6 5 de NaCl O caldo de tripticase soja foi seguidamente semeado em placas com cefoxitina para MRSA e sem cefoxitina para SA Se alguma ou ambas as placas de SA ou MRSA revelassem a presen a presum vel de col nias de S aureus as col nias eram subcultivadas numa placa de gelose de sangue A confirma o de col nias presumivelmente positivas foi realizada com catalase coagulase em tubo e colora o Gram resist ncia oxacilina mediada por MecA foi testada atrav s de um teste de difus o em disco utilizando um disco de 30 ug de cefoxitina e um valor limite cutoff de 21 22 mm No caso de ambas as culturas das placas de SA e MRSA serem consideradas negativas o caldo de tripticase soja arquivado com 6 5 NaCl era subcultivado em gelose de sangue seguindo se o exame de SA MRSA conforme anteriormente descrito O desempenho do ensaio Xpert MRSA SA SSTI foi calculado em rela o aos resultados da cultura de refer ncia Resultados totais Para determina o de MRSA e SA foi testado um total de 848 amostras atrav s do ensaio Xpert MRSA SA SSTI e de cultura Entre os 848 casos contidos no c
222. smen vorhanden sind und ob die Probe ordnungsgem verarbeitet wurde Ferner wird mit dieser Kontrolle auch eine mit der Probe in Zusammenhang stehende Inhibition der Echtzeit PCR Untersuchung nachgewiesen und sichergestellt dass die PCR Reaktionsbedingungen Temperatur und Zeit f r die Amplifikationsreaktion korrekt und die PCR Reagenzien funktionst chtig sind In einer negativen Probe sollte die SPC positiv sein in einer positiven Probe kann sie negativ oder positiv sein Die SPC gilt als bestanden wenn sie die vorbestimmten Akzeptanzkriterien erf llt Sondenpr fungskontrolle PCC Vor Beginn der PCR Reaktion misst das GeneXpert Dx System das Fluoreszenzsignal aus den Sonden um die Rehydrierung der Reagenzk gelchen die Bef llung des Reaktionsgef es die Sondenintegrit t und die Farbstabilit t zu berwachen Der Sondentest gilt als bestanden wenn er die vorbestimmten Akzeptanzkriterien erf llt Externe Kontrollen KWIK STIKs MicroBioLogics Bestellnr 0158MRSA SCCmec type II und Bestellnr 0360SA als Positivkontrollen und Bestellnr 0371MSSE als Negativkontrolle k nnen f r Schulungszwecke F higkeitstests und zur externen QK des GeneXpert Dx Systems eingesetzt werden MRSA St mme die andere SCCmec Typen darstellen k nnen gegebenenfalls als zus tzliche externe Positivkontrollen zur berwachung von Untersuchungs Primern und Sonden eingesetzt werden die in der Untersuchung nicht direkt kontrolliert werden Externe Kont
223. stics Clinical Performance Performance characteristics of the Xpert MRSA SA SSTI Assay were determined in a multi site prospective investigation study at four US institutions by comparing the Xpert MRSA SA SSTI Assay with reference culture Subjects included individuals whose routine care called for collection of a swab from the patient s skin and soft tissue infection for culture Double swabs were collected from each subject One swab was tested by the Xpert MRSA SA SSTI Assay at the enrolling center and the other swab was tested by the site s standard method and the remaining specimen was sent to the central laboratory for reference culture testing At the centralized laboratory the specimen was enriched overnight in trypticase soy broth with 6 5 NaCl The trypticase soy broth was then streaked onto plates with cefoxitin for MRSA and without cefoxitin for SA If either or both the SA or MRSA plates showed aureus presumptive colonies the colonies were subcultured onto a blood agar plate Confirmation of presumptive positive colonies was performed with catalase tube coagulase and Gram stain MecA Mediated Oxacillin resistance was tested by disk diffusion test using a 30 pg cefoxitin disk and cutoff of 21 22 mm If the cultures for both the SA and MRSA plates were determined to be negative the archived trypticase soy broth with 6 5 NaCl was subcultured onto blood agar followed by workup for SA MRSA as previously described Performance
224. system see the GeneXpert Dx System Operator Manual The Xpert MRSA SA SSTI Assay includes reagents for the detection of MRSA and SA as well as a sample processing control SPC to control for adequate processing of the target bacteria and to monitor the presence of inhibitor s in the PCR reaction The SPC also ensures the PCR reaction conditions temperature and time are appropriate for the amplification reaction and that the PCR reagents are functional The Probe Check Control PCC verifies reagent rehydration PCR tube filling in the cartridge probe integrity and dye stability The primers and probes in the Xpert MRSA SA SSTI Assay detect proprietary sequences for the staphylococcal protein A spa the gene for methicillin resistance mecA and the staphylococcal cassette chromosome SCC mec inserted into the SA chromosomal attB site 301 0190 Rev C February 2012 1 English Reagents and Instruments Material Provided The Xpert MRSA SA SSTI Assay kit contains sufficient reagents to process 10 specimens or quality control samples The kit contains the following Xpert MRSA SA SSTI Assay Cartridges with integrated reaction tubes 10 Bead 1 Bead 2 and Bead 3 freeze dried 1 per cartridge Xpert MRSA SA SSTI Assay Reagent 1 2 8 ml per cartridge Xpert MRSA SA SSTI Assay Reagent 2 Sodium Hydroxide 3 2 ml per cartridge Xpert MRSA SA SSTI Assay Elution Reagent 10 Elution Reagent Guanidinium thiocyanate 1x 2 0 mL per pouch CD
225. t 0 comme illustr au tableau 7 Quinze 15 de ces 16 isolats ont re u un vrai r sultat n gatif au SARM v rifi par rapport la culture et 14 des 16 isolats ont re u un vrai r sultat positif au SA v rifi par rapport la culture Un isolat a t identifi comme positif au SARM par culture et 2 isolats ont t identifi s comme n gatifs au SARM et au SA par la culture 301 0190 Rev C February 2012 33 Fran ais Tableau 7 Performances du test MRSA SA SSTI par rapport la culture de r f rence Variantes cassette vide Xpert par rapport Xpert spa mecA SCCmec la culture N sujet R sultat Ct Ct Ct Culture SARM SA 1 SA 23 6 0 26 0 SA TN VP 2 SA 14 7 0 16 5 SA TN VP 3 SA 20 5 0 34 0 SA TN VP 4 SA 18 4 0 21 0 SA TN VP 5 SA 15 6 0 28 4 SARM EN VP 6 SA 17 2 0 31 6 SA TN VP 7 SA 34 1 0 35 6 N g TN FP 8 SA 29 1 0 33 0 SA TN VP 9 SA 12 7 0 23 5 SA TN VP 10 SA 18 2 0 27 6 SA TN VP 11 SA 18 4 0 22 0 SA TN VP 12 SA 25 5 0 271 SA TN VP 13 SA 20 0 0 22 1 N g TN FP 14 SA 26 0 0 28 3 SA TN VP 15 SA 23 9 0 25 1 SA TN VP 16 SA 19 9 0 34 0 SA TN VP Performances analytiques Sp cificit analytique tude de r activit crois e Cent cinq 105 souches ont t collect es quantifi es et test es Paide du test Xpert MRSA SA SSTI Les 98 cultures provenant de PATCC American Type Culture Collection et les 7 souches du NARSA Network on Antimic
226. t MRSA SA SSTI excepto ao adicionar a amostra e o reagente ou ao repetir um teste N o utilize um cartucho que tenha ca do ou sido agitado depois de ter adicionado a amostra e o reagente N o utilize um cartucho que tenha um tubo de reac o danificado Cada cartucho de utiliza o nica do ensaio Xpert MRSA SA SSTI utilizado para processar um teste N o reutilize cartuchos usados Consulte o pessoal respons vel pelos res duos ambientais da institui o para obter informa es sobre a elimina o adequada dos cartuchos usados e dos reagentes n o utilizados Este material pode apresentar caracter sticas de res duos perigosos de acordo com a lei federal Resource Conservation and Recovery Act RCRA Lei da Recupera o e Conserva o dos Recursos da Associa o de Protec o Ambiental Environmental Protection Agency dos EUA e deve cumprir os requisitos espec ficos sobre elimina o Consulte os regulamentos locais e estatais podem diferir dos regulamentos de elimina o federais As institui es fora dos EUA devem consultar os requisitos sobre a elimina o ambiental de res duos perigosos do pa s Conserve o kit do ensaio Xpert MRSA SA SSTI a 2 28 C N o abra a tampa do cartucho at estar pronto para realizar o teste O reagente de elui o cont m tiocianato de guanidina H402 EUH301 que nocivo para os organismos aqu ticos e o contacto com cido liberta gases t xicos O reagente 2 cont m hidr x
227. t Panthrax et des furoncles ainsi que des infections postop ratoires de plaies en diff rents endroits En tant qu agent pathog ne nosocomial le aureus est une cause majeure de morbidit et de mortalit Les infections aureus sont fr quemment aigu s et pyog nes En Pabsence de traitement elles peuvent se propager aux tissus environnants ou par bact ri mie des foyers m tastatiques impliquant d autres organes Les infections plus graves dues au S aureus comprennent la bact ri mie la pneumonie lost omy lite lendocardite aigu le syndrome de choc toxique l intoxication alimentaire la myocardite la p ricardite la c r brite la m ningite la chorioamnionite T rythrodermie bulleuse avec pidermolyse ainsi que des abc s des muscles de Pappareil g nito urinaire du syst me nerveux central et de divers organes intra abdominaux Au d but des ann es cinquante le d veloppement de plasmides producteurs de b ta lactamases a contrecarr l efficacit de la p nicilline pour le traitement des infections aureus En 1959 l utilisation de la m thicilline une p nicilline synth tique a t adopt e Vers 1960 des souches de aureus r sistantes la m thicilline ont toutefois t identifi es Des tudes ont montr que ce ph nom ne r sultait de l acquisition du gene mecA par le S aureus Actuellement aux tats Unis le SARM est responsable d environ 25 des infections nosocomiale
228. t du SA par culture SARM par culture SA par culture edo SONNE DO dde ee ei Moins de 3 ans 34 11 32 4 21 61 8 De 3 18 ans 100 25 25 0 55 55 0 De 19 65 ans 614 188 30 6 300 48 9 66 ans et plus 100 22 22 0 35 35 0 Caract ristiques des performances Performances cliniques Les caract ristiques de performances du test Xpert MRSA SA SSTI ont t d termin es dans le cadre d une tude de cohorte multisite men e dans quatre institutions am ricaines et reposant sur la comparaison du test Xpert MRSA SA SSTI avec une culture de r f rence Les sujets comprenaient des individus dont les soins de routine exigeaient l utilisation d un couvillon sur l infection de la peau et des tissus mous pour une culture Des couvillons doubles ont t recueillis pour chaque sujet L un des couvillons a t utilis pour le test Xpert MRSA SA SSTI au centre de s lection tandis que Pautre a t test l aide de la m thode standard du site le reste des chantillons tant envoy au laboratoire central des fins de test de culture de r f rence Au laboratoire central l chantillon a t enrichi durant une nuit dans un bouillon de soja trypticase avec 6 5 de NaCl Le bouillon de soja trypticase a ensuite t ensemenc sur des plaques avec pour le SARM et sans c foxitine pour le SA Si la plaque SA et ou SARM comportait des colonies suppos es infect es par le S aureus ces colonies
229. t ont t correctement rapport es comme positives au SARM et positives au SA Chacun des 12 isolats USA300 connus a t correctement rapport comme positif au SARM et au SA comme pr vu valuation des variantes cassette vide Vingt deux 22 isolats de Staphylococcus aureus identifi s comme variantes cassette vide ont t test es Paide du test Xpert MRSA SA SSTI Des cultures de 18 heures ont t ajust es 0 5 unit McFarland Toutes les souches ont t test es partir de cultures dilu es 100 fois lev es et 100 000 fois faibles Le test Xpert MRSA SA SSTI a correctement identifi les 22 isolats comme n gatifs au SARM et positifs au SA Aux deux concentrations cellulaires test es seuls les Ct des cibles spa and SCCmec ont t rapport s Aucun Ct de mecd n a t rapport pp pp tude de contamination carry over Une tude a t men e pour d montrer que les cartouches GeneXpert ind pendantes usage unique emp chent la contamination carry over des chantillons n gatifs analys s apr s des chantillons positifs tr s haute concentration dans le m me module GeneXpert L tude consistait analyser un chantillon n gatif dans un m me module GeneXpert juste apr s un chantillon positif tr s haute concentration en SARM environ 107 bact ries souches test Lop ration a t r p t e 20 fois entre 2 modules GeneXpert pour un total de 42 exp riences Aucune pr
230. te post chirurgiche di diversi siti Come patogeno nosocomiale lo S aureus ha rappresentato una causa rilevante di morbidit e mortalit Le infezioni da aureus sono spesso acute e purulente e se non trattate possono diffondersi ai tessuti circostanti o tramite batteriemia ai siti metastatici coinvolgendo altri organi Tra le infezioni pi gravi causate dallo aureus vi sono batteriemia polmonite osteomielite endocardite acuta sindrome da shock tossico intossicazione alimentare miocardite pericardite encefalite meningite corioamnionite necrolisi epidermica tossica ascessi muscolari del tratto urogenitale del sistema nervoso centrale e di vari organi intra addominali All inizio degli anni Cinquanta l acquisizione e la diffusione dei plasmidi che producono la beta lattamasi contrastavano l efficacia della penicillina per il trattamento delle infezioni da aureus Nel 1959 fu introdotta la meticillina una penicillina sintetica Tuttavia nel 1960 i ceppi di S aureus meticillino resistenti erano stati identificati stato determinato che ci il risultato delPacquisizione del gene mecA da parte dello S aureus Attualmente negli Stati Uniti PMRSA responsabile di circa il 25 delle infezioni nosocomiali e i casi riportati di MRSA contratto in comunit sono in aumento determinando morbidit e mortalit significative La percentuale della mortalit riportata attribuibile alle batteriemie da MRSA e S aureus SA s
231. te todas as amostras biol gicas incluindo os cartuchos usados como sendo capazes de transmitir agentes infecciosos Dado que frequentemente imposs vel saber quais as amostras biol gicas que poder o ser infecciosas todas dever o ser tratadas aplicando as precau es padr o As directivas para o manuseamento de amostras est o dispon veis nos Centros de Controlo e Preven o de Doengas e no Clinical and Laboratory Standards Institute anteriormente National Committee for Clinical Laboratory Standards dos EUA Numa cultura mista contendo MRSA SA e outros organismos por exemplo bacilos Gram negativo levedura os resultados poder o ser falsos negativos ou vari veis dependendo da concentra o de MRSA SA presente em particular se a concentra o de MRSA SA for pr xima do limite de detec o LoD do ensaio Siga os procedimentos de seguran a da sua institui o para trabalhar com produtos qu micos e manusear amostras biol gicas O ensaio Xpert MRSA SA SSTI pode detectar ADN de MRSA e ou SA a partir de organismos n o vi veis A probabilidade de isto ocorrer aumenta em pacientes que estejam a tomar antibi ticos O ensaio Xpert MRSA SA SSTI n o fornece resultados de testes de susceptibilidade antimicrobiana necess rio tempo adicional para as culturas e para efectuar testes de susceptibilidade N o substitua o reagente de ensaio Xpert MRSA SA SSTI por outros reagentes N o abra a tampa do cartucho do ensaio Xper
232. tection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition 10 Ewig S Schlochtermeier M G ke N et al 2002 Applying sputum as a diagnostic tool in pneumonia limited yield minimal impact on treatment decisions Chest 121 1486 1492 11 RG Dotson and SK Pingleton 1993 The effect of antibiotic therapy on recovery of intracellular bacteria from bronchoalveolar lavage in suspected ventilator associated nosocomial pneumonia Chest 103 541 546 12 Souweine B Veber B Bedos JP et al 1998 Diagnostic accuracy of protected specimen brush and bronchoalveolar lavage in nosocomial pneumonia impact of previous antimicrobial treatments Crit Care Med Feb 26 2 236 244 13 Kanegaye JT Soliemanzadeh P Bradley JS et al 2001 Lumbar puncture in pediatric bacterial meningitis defining the time interval for recovery of cerebrospinal fluid pathogens after parenteral antibiotic pretreatment Pediatrics 108 5 1169 1174 14 Brook I Gober A 2005 Effects of amoxicillin and cefdinir on nasopharyngeal bacterial flora Arch Otolaryngol Head Neck Surg Sep 131 785 787 15 Nadarajah J et al Identification of different clonal complexes and diverse amino acid substitutions in penicillin binding protein 2 PBP2 associated with borderline oxacillin resistance in Canadian Staphylococcus aureus isolates J of Med Micro 2006 55 1675 1683 16 Ribeiro J et al Misclassificat
233. ted acceptance criteria Probe Check Control PCC Before the start of the PCR reaction the GeneXpert Dx System measures the fluorescence signal from the probes to monitor bead rehydration reaction tube filling probe integrity and dye stability Probe Check passes if it meets the assigned acceptance criteria External Controls KWIK STIKs MicroBioLogics catalog 0158MRSA SCC mec type II and catalog 0360SA as positive controls and 0371MSSE as negative control may be used for training proficiency testing and external QC of the GeneXpert Dx System MRSA strains representing other SCC mec types if available may be used as additional external positive controls to monitor assay primers and probes not directly controlled in the assay External controls may be used in accordance with accrediting institutions and government regulations as applicable Follow the MicroBioLogics external control procedure described below 1 Tear open the pouch at notch and remove the KWIK STIK Pinch the bottom of the ampoule in the cap to release the hydrating fluid Hold vertically and tap to facilitate flow of fluid through shaft into bottom of unit containing pellet Pull apart the KWIK STIK to release the swab and insert the swab into the tube containing the elution reagent screw cap 2 3 4 To facilitate dissolution of the lyophilized cell pellet crush the pellet and gently pinch the bottom chamber 5 6 The KWIK STIK swab is now ready f
234. teller Reicht f r lt n gt Tests Verfallsdatum CONTROL Kontrolle E ral SB Bevollm chtigter in der Europ ischen Gemeinschaft CE Kennzeichnung EU My Mm Temperaturbegrenzung Biologische Risiken Bs 301 0190 Rev C February 2012 Cepheid AB R ntgenv gen 5 SE 171 54 Solna Schweden Hergestellt in Schweden Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Frankreich Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 E Mail cepheid cepheideurope fr C vo 301 0190 Rev C February 2012 61 Deutsch 62 301 0190 Rev C February 2012 Espa ol Para uso exclusivo de diagn stico in vitro Denominaci n com n Xpert MRSA SA SSTI Nombre com n o de uso frecuente Ensayo de Xpert MRSA SA SSTI Uso previsto El Ensayo Xpert MRSA SA de Cepheid para infecciones de piel y tejidos blandos Ensayo Xpert MRSA SA SSTT realizado en el Sistema GeneXpert Dx es una prueba de diagn stico cualitativa in vitro dise ada para detectar la presencia de Staphylococcus aureus SA y Staphylococcus aureus resistente a la meticilina MRSA en muestras de infecciones de piel y tejidos blandos En esta prueba se utiliza una reacci n en cadena de la polimerasa RCP en tiempo real con el objeto de detectar el ADN del MRSA SA El ensayo Xpert MRSA SA SSTI est indicado para su uso conjunto con otras pruebas de laboratorio como cultivos de microbiolog a y con datos cl nicos al alcance d
235. thicillin Resistant aureus by a rapid Automated Susceptibility Testing System 1999 37 1619 1620 Asistencia Si desea obtener asistencia p ngase en contacto con Cepheid No olvide facilitar el n mero de serie del instrumento y el Id del lote de reactivos si realiza una llamada o env a un correo electr nico Uni n Europea Para acceder al servicio t cnico utilice los siguientes datos de contacto Tel 33 563 82 53 19 Correo electr nico techsupport cepheideurope fr Otras oficinas P ngase en contacto con su representante local de Cepheid 301 0190 Rev C February 2012 81 Espa ol Tabla de s mbolos S mbolo Significado N mero de referencia Producto sanitario para diagn stico in vitro No reutilizar e El El C digo de lote O Precauci n consultar el documento adjunto Fabricante Contiene cantidad suficiente para lt n gt pruebas Fecha de caducidad CONTROL Control le E lt a gt Representante autorizado en la Comunidad Europea CN m Marca CE Comunidad Europea Limite de temperatura Riesgos biol gicos Cepheid AB R ntgenv gen 5 SE 171 54 Solna Suecia Producto de Suecia Cepheid Europa Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Francia Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Correo electr nico cepheid cepheideurope fr C vo 82 301 0190 Rev C February 2012 Italiano Solo p
236. thicillin resistant aureus strains were identified This was determined to be the result of S aureus acquiring the mecA gene In the U S today MRSA is responsible for approximately 25 of nosocomial infections and reports of community acquired MRSA are increasing resulting in significant morbidity and mortality Attributable mortalities of 33 and 16 have been reported for MRSA and methicillin sensitive S aureus SA bacteremias respectively There are also rising cost concerns for MRSA infections In attempts to limit the spread of these infections control strategies and policies are being developed and implemented in healthcare settings Controlling MRSA is a primary focus of most hospital infection control programs Currently the standard method for detecting MRSA and SA is culture which is very laborious and can require several days to generate a definitive result 234567 Principle of the Procedure The GeneXpert Dx System automates and integrates sample purification nucleic acid amplification and detection of the target sequence in simple or complex samples using real time PCR assays The system consists of an instrument personal computer and preloaded software for running tests and viewing the results The system requires the use of single use disposable cartridges that hold the PCR reagents and host the PCR process Because the cartridges are self contained cross contamination between samples is minimized For a full description of the
237. tificato il 88 0 dei campioni positivi per MRSA e il 92 4 dei campioni negativi per MRSA rispetto al metodo della coltura di riferimento quindi il 95 2 dei campioni positivi per SA e il 76 4 dei campioni negativi per SA rispetto al metodo della coltura di riferimento Tra tali soggetti con utilizzo di antibiotici per il 96 1 199 207 dei campioni idonei il saggio Xpert MRSA SA SSTI riuscito al primo tentativo I restanti 8 hanno generato risultati incerti al primo tentativo 5 INVALID Non valido e 3 ERROR Errore Gli 8 incerti al primo tentativo hanno tutti fornito un risultato al secondo tentativo Varianti a cassetta vuota Affinch un isolato venga identificato come positivo per MRSA con il saggio Xpert MRSA SA SSTI il test per la spa deve risultare positivo cos come il test per il mecA e PSCC mec Un isolato positivo per la spa e PSCC mec ma non per il mecA viene riportato come SA poich sensibile alla meticillina Questa situazione pu verificarsi quando la porzione dell elemento SCC mec che porta il mecA viene recisa ma le estremit di tale elemento mobile rimangono producendo un segnale SSC mec positivo A questi isolati si fa a volte riferimento come varianti a cassetta vuota e sono non poco comuni nell ambiente clinico Il senso di questi isolati quindi quello di confondere potenzialmente un saggio per MRSA che non rilevi direttamente il gene mecA Il saggio Xpert MRSA SA SSTI progettato per
238. ts escompt s r p tez le test de contr le externe et ou contactez Cepheid pour obtenir de Paide Pour r p ter un test Pour la r p tition d un test dans les 3 heures suivant un r sultat ind termin 1 Transf rez le reste du contenu de la chambre vers un nouveau r actif d lution l aide d une pipette de transfert jetable 2 Vortexez et ajoutez le contenu complet du r actif d lution dans la chambre S de la nouvelle cartouche de test MRSA SA SSTI 3 Fermez le couvercle et d marrez le nouveau test Si le test ne peut pas tre r p t dans les 3 heures utilisez un nouvel chantillon Restrictions Les performances du test Xpert MRSA SA SSTI ont t valid es en utilisant uniquement les proc dures fournies dans cette notice Des modifications apport es ces proc dures peuvent modifier les performances du test Les r sultats du test Xpert MRSA SA SSTI doivent tre interpr t s conjointement avec d autres donn es de laboratoire et cliniques la disposition du clinicien Le test Xpert MRSA SA SSTI peut d tecter l ADN de SARM et ou de SA partir d organismes non viables Cette probabilit augmente chez les patients sous antibiotiques Dans l essai clinique cl le taux de faux r sultats positifs par rapport la culture de d tection de SA chez des patients sous antibiotiques dans les 3 semaines pr c dant le test Xpert MRSA SA tait de 13 8 Le taux de faux r sultats positifs par rapport
239. ur MRSA SA MRSA Neg Kein Insgesamt Wachstum MRSA 47 0 4 51 8 SA MRSA 2 45 8 55 SA 1 2 91 94 Insgesamt 50 47 103 200 In 2 der 47 F lle lagen Mischinfektionen mit MRSA und SA vor Prozentuale positive Ubereinstimmung MRSA 94 0 95 Konfidenzintervall 83 5 98 7 Prozentuale negative Ubereinstimmung MRSA 97 3 95 Konfidenzintervall 93 3 99 3 Prozentuale positive Ubereinstimmung SA MRSA 96 9 95 Konfidenzintervall 91 2 99 4 Prozentuale negative bereinstimmung SA MRSA 88 3 95 Konfidenzintervall 80 5 93 8 Von den Patienten bei denen nicht bekannt war ob sie innerhalb von 3 Wochen vor der Probenentnahme Antibiotika genommen hatten wurden von der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung 94 0 der MRSA positiven Proben und 97 3 der MRSA negativen Proben im Verh ltnis zum Referenzkulturverfahren und 96 9 der SA positiven Proben und 88 3 der SA negativen Proben im Verh ltnis zum Referenzkulturverfahren erkannt Von diesen Fallen mit unbekanntem Antibiotikaeinsatz ergab sich bei 97 0 194 von 200 mit der Xpert MRSA SA SSTI Untersuchung beim ersten Versuch erfolgreich ein Ergebnis In den tibrigen 6 Fallen ergaben sich beim ersten Versuch unbestimmte Ergebnisse 2 INVALID UNGULTIG 3 ERROR FEHLER und 1 NO RESULT KEIN ERGEBNIS F r alle 6 F lle die beim ersten Versuch unbestimmte Ergebnisse ergaben wurde beim zweiten Versuch ein Ergebnis erzielt Ta
240. uschen und nicht verwendeter Reagenzien fragen Sie bitte den Umweltbeauftragten Ihrer Einrichtung Dieses Material kann nach dem f deralen EPA Resource conservation and Recovery Act RCRA Eigenschaften von Sonderm ll besitzen der besondere Entsorgungsbedingungen vorschreibt Einrichtungen au erhalb der USA m ssen ihre l nderspezifischen Entsorgungsbedingungen f r Sonderm ll konsultieren Pr fen Sie bitte auch die regionalen und L ndervorschriften da diese von den Entsorgungsvorschriften des Bundes abweichen k nnen Das Xpert MRSA SA SSTI Untersuchungs Kit bei 2 28 C lagern ffnen Sie den Deckel der Kartusche erst wenn Sie bereit sind die Testung durchzuf hren Das Elutionsreagens enth lt Guanidininthiocyanat H402 EUH301 das f r aquatisches Leben sch dlich ist und bei Ber hrung giftige Gase entwickelt Reagens 2 enth lt Natriumhydroxid H314 das tzend auf Augen und Haut wirkt Augen und Hautschutz ist erforderlich Probenentnahme Transport und Lagerung Abstrichproben von Haut und Weichgewebeinfektionen k nnen mit dem Cepheid Abstrichtupfer gem den in der anwendenden Institution blichen Standardverfahren entnommen werden Die Abstrichproben werden wieder in das Plastiktransportr hrchen gelegt fl ssiges Medium Cepheid Abstrichtupfer oder Copan Produkt empfohlen bei Raumtemperatur gelagert und zur Verarbeitung innerhalb des n chsten Tages dorthin gesendet wo der GeneXpert Test durchgef hrt werden sol
241. ut pas tre d termin e r p tez le test conform ment aux instructions de la section suivante Le CTE ne satisfait pas aux crit res d acceptation l chantillon n a pas t trait correctement ou la PCR tait inhib e INVALID NON VALIDE impossible de d terminer la pr sence ou absence d ADN de Staphylococcus aureus SPC FAIL CTE ECHEC le r sultat cible du CTE est n gatif le Ct du CTE nest pas compris dans la gamme valide et sa valeur finale se situe au dessous de la valeur finale minimale requise Probe Check PASS Contr le de la sonde r ussi tous les r sultats du contr le de la sonde sont r ussis ERROR ERREUR La presence ou Pabsence de s quences d ADN cibles du SARM SA ne peut pas tre d termin e r p tez le test conform ment aux instructions de la section suivante L chec du contr le de la sonde est probablement d au remplissage incorrect du tube r actionnel un probl me d int grit de la sonde a t d tect ou les limites maximales de pression ont t d pass es MRSA SARM NO RESULT PAS DE R SULTAT SA NO RESULT PAS DE R SULTAT SPC NO RESULT CTE PAS DE R SULTAT Probe Check Contr le de la sonde FAIL ECHEC chec d un ou de plusieurs r sultats de contr le de la sonde Si le contr le de la sonde a r ussi l erreur est provoqu e par l chec d un composant du syst me NO RESULT pas de r sultat La presence ou Pabsence de s quence
242. v v Whole Blood MRSA SA free N A 50 v v Plasma N A 50 v v Neosporin 400 units Bacitracin 1 and 5 w v 5 000 units Polymyxin B 3 5 mg Neomycin StaphA Septic 0 2 Benzethonium 1 and 5 W v Chloride 2 5 Lidocaine HCl Hydrocortisone 1 Hydrocortisone 1 and 5 w v Boil Ease 20 Benzocaine 1 and 5 w v lodine Tincture 2 lodine 50 v v Table 2 Potential Interfering SSTI Substances Tested Substance Active Ingredient Tested TET Buffer control Control Control Mupirocin 0 2 Benzethonium 5 w v Chloride 2 5 Lidocaine HCI Whole Blood MRSA SA free N A 50 v v Saline 0 65 Sodium Chloride 50 v v Antibacterial hand sanitizer 62 Ethyl alcohol 1 and 5 w v 70 Isopropyl alcohol 70 Isopropyl alcohol 50 v v 0 301 0190 Rev C February 2012 Expected Values Expected Values In the Xpert MRSA SA SSTI clinical study a total of 848 SSTI specimens were included from four large hospitals across the United States The number and percentage of positive cases by the reference culture method calculated by age group are presented in Table 3 Table 3 Observed Prevalence of MRSA and SA by Culture MRSA By Culture SA By Culture siii ail fine nigi Poni ei Ages Less Than 3 34 11 32 4 21 61 8 Ages 3 to 18 100 25 25 0 55 55 0 Ages 19 to 65 614 188 30 6 300 48 9 Ages 66 and over 100 22 22 0 35 35 0 Performance Characteri
243. y SCC mec Una cepa que sea positiva para spa y SCCmec pero no para mecA recibe la consideraci n de SA por ser sensible a la meticilina Esta situaci n se puede producir cuando se extirpa la porci n del elemento del SCCmec que porta el mecA pero los extremos de este elemento m vil siguen en su sitio lo que produce una se al positiva de SCCmec Estas cepas a veces se conocen como variantes de casete vac o y no son raras de encontrar en el entorno cl nico La importancia que tienen estas cepas es su potencial para confundir un ensayo para MRSA que no detecte directamente el gen mecA El Ensayo Xpert MRSA SA SSTI se ha dise ado para identificar correctamente estas variantes como SA Entre las muestras aptas incluidas en los an lisis de datos presentados en este informe un total de 16 cepas coinciden con el perfil de casete vac o que produce resultados positivos de spa y SCC mec pero sin detectar mecA Uc 0 tal y como se muestra en la tabla 7 De las 16 cepas de MRSA se identificaron 15 verdaderas positivas con respecto al cultivo Una cepa se identific como MRSA en el cultivo y 2 cepas eran negativas tanto en MRSA como en SA en el cultivo 301 0190 Rev C February 2012 75 Espa ol Tabla 7 Rendimiento de MRSA SA SSTI frente a cultivo de referencia variantes de casete vac o Xpert spa mecA SCCmec Xpert frente a cultivo Sujeto n Resultado Uc Uc Uc Cultivo MRSA SA
244. ystems ist im Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System zu finden Der Xpert MRSA SA SSTI Test beinhaltet Reagenzien zum Nachweis von MRSA und SA sowie eine Probenverarbeitungskontrolle SPC zur Sicherstellung der korrekten Verarbeitung der Zielbakterien und berpr fung ob Inhibitoren in der PCR Reaktion vorhanden sind Die Probenverarbeitungskontrolle stellt auch sicher dass die PCR Reaktionsbedingungen Temperatur und Zeit f r die Amplifikationsreaktion korrekt und die PCR Reagenzien funktionst chtig sind Mit der Sondenpr fungsfunktion PCC werden die Rehydrierung der Reagenzien die Bef llung des PCR Gef es in der Testkartusche die Sondenintegrit t und die Farbstabilit t berpr ft 301 0190 Rev C February 2012 41 Deutsch Mit den Primer und Sonden des Xpert MRSA SA SSTI Tests lassen sich Sequenzen nachweisen die dem Staphylokokkenprotein A spa dem Gen f r die Methicillin Resistenz mecA und der in die SA Chromosomenstelle attB eingef gten Staphylokokken Genkassette SCC mec eigen sind Reagenzien und Instrumente Im Lieferumfang enthaltenes Material Das Xpert MRSA SA SSTI Untersuchungs Kit enth lt Reagenzien zur Verarbeitung von 10 Proben oder Qualit tskontrollproben Das Kit enth lt Folgendes Xpert MRSA SA SSTI Untersuchungs Testkartusche mit integrierten 10 Reaktionsgef en K gelchen 1 2 und 3 gefriergetrocknet 1 pro Kartusche MRSA SA SSTI Untersuchungsreagenz 1 2 8 ml pro Kartusche Xpert MRSA SA SS
245. ze Materials Available but Not Provided KWIK STIKs from MicroBiologics catalog 0158MRSA and catalog 0360SA as external positive controls and 0371MSSE methicillin sensitive Staphylococcus epidermidis as external negative control 301 0190 Rev C February 2012 Warnings and Precautions Warnings and Precautions amp Treat all biological specimens including used cartridges as if capable of transmitting infectious agents Because it is often impossible to know which might be infectious all biological specimens should be treated with standard precautions Guidelines for specimen handling are available from the U S Centers for Disease Control and Prevention and the Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards In a mixed culture containing MRSA SA and other organisms e g Gram negative bacilli yeast results can be false negative or variable depending on the concentration of MRSA SA present particularly if the concentration of MRSA SA is close to the LoD of the assay Follow your institution s safety procedures for working with chemicals and handling biological samples The Xpert MRSA SA SSTI Assay can detect MRSA and or SA DNA from non viable organisms The probability of this occurring increases for patients on antibiotics The Xpert MRSA SA SSTI Assay does not provide antimicrobial susceptibility testing results Additional time is required to culture and

Xpert MRSA/SA SSTI - Diagnostic Technology

Contents

Download Pdf Manuals

Related Search

Related Contents