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BCR-ABL Assay_multi.book

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1. Limit of Detection and Linearity Average Delta Ct Selected Data Excluded from Curve 10 Ave Delta Ct Excluded Data 54 Ave Delta Ct Linear Ave Delta Ct Pr 2 i 3 of 1 Concentration lev e d ABL poussant z le AC vers o e 5 E 3 10 2 15 4 K562 RNA K562 Cells Dropouts Sopg Approx 2 0 6 21 30pg Approx 1 1 6 25 r i 10 pg lt 1 3 6 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Log K562 RNA pg Figure 4 Limite de donn es de d tection de lin arit 300 4073 Rev B F vrier 2006 25 Frangais R f rences TJemal A Murray T Ward E et al Cancer Statistics 2005 CA Cancer J Clin 2005 55 10 30 2 Rowley JD A new consistent chromosomal abnormality in chronic myelogenous leukemia identified by quinacrine fluorescence and Giemsa staining Nature 1973 243 290 293 3 NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology Chronic Myelogenous Leukemia Version 1 2006 n Deininger M Buchdunger E Druker BJ The development of imatinib as a therapeutic agent for chronic myeloid leukemia Blood 2005 105 7 2640 2653 3 Kantarjian HM Talpaz M Cortes J et al Quantitative polymerase chain reaction monitoring of BCR ABL during therapy with imatinib mesylate STI571 Gleevec in chronic phase chronic myelogenous leukemia Clin Cancer Res 2003 9 1 160 6 6 Gabert J et al Standardization and quality control studies of real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fus
2. Negative lt 0 01 BCR ABL detected e Low positive 0 01 to 0 05 BCR ABL detected High positive gt 0 05 BCR ABL detected 10 300 4073 Rev B February 2006 Performance Characteristics Table 2 Assay performance Test results Number of CML Samples Negative by both methods 17 Negative by the laboratory developed method but low positive by the GeneXpert 3 Low positive by both methods 8 High positive by both methods 18 Agreement of negative results 17 20 85 Agreement of positive results 26 26 100 Specificity The specificity of the assay was tested using 44 normal citrate and EDTA blood specimens from four sites All normal samples were negative for BCR ABL yielding a specificity of 100 The specificity of the assay was also tested at three sites using a collection of 12 blood specimens from patients with other hematologic disorders including acute myelogenous leukemia acute lymphocytic leukemia Hodgkin s lymphoma multiple myeloma and follicular lymphoma All these samples were negative for BCR ABL yielding a specificity of 100 Limit of Detection and Linearity Figure 4 shows limit of detection and linearity data generated from a single run of 44 cartridges The procedure described in this package insert was used with the following exceptions A dilution series of Leukemia K562 Total RNA from Ambion catalog number 7832 was spiked into citrate anti coagulated normal blood after etha
3. 17h00 heure du Pacifique Union europ enne Pour b n ficier d une assistance technique utilisez les informations relatives aux contacts suivantes Tel 33 563 82 53 19 Courrier lectronique techsupport cepheideurope fr Autres sites Contactez votre repr sentant local Cepheid Tableau des symboles y a a a o 3 3 u Signification Reference Appareil a usage m dical de diagnostic n vitro Ane pas r utiliser Fabricant Contenu suffisant pour lt n gt tests Contr le Mandataire de la Communaut europ enne Limitation de la temp rature ASE NS Risque biologique 300 4073 Rev B F vrier 2006 27 Frangais tel Fabricant Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 T l 1 408 541 4191 T l copie 1 408 541 4192 Repr sentant agr Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France T l 33 563 82 53 00 T l copie 33 563 82 53 01 Courrier lectronique cepheid cepheideurope fr C Ho F vrier 2006 28 300 4073 Rev B F vrier 2006 Deutsch Medizinisches In Vitro Diagnostikgerat Markenname Xpert BCR ABL Monitor Ublicher Name Xpert BCR ABL Monitor Verwendungszweck Der Xpert BCR ABL Monitor ist zur Erfassung BCR ABL chromosomaler Translokationen vorgesehen und stellt eine Echtzeit RT PCR Untersuchung RT Reverse Transkription PCR Polymerase Kettenreaktion dar
4. Unterst tzung Wenn Sie Unterst tzung ben tigen wenden Sie sich mithilfe folgender Kontaktdaten an Cepheid Geben Sie bei Ihrem Anruf bzw in Ihrer E Mail auf jeden Fall die Seriennummer des Instruments und die Lot ID des Reagenz an Nordamerika Kontaktdaten f r technischen Support Tel 1 888 838 3222 E Mail techsupport cepheid com Sie k nnen den technischen Support von Cepheid Montags bis Freitags von 6 00 bis to 17 00 Uhr Pazifischer Zeit erreichen m U Kontaktdaten f r technischen Support Tel 33 563 82 53 19 E Mail techsupport cepheideurope fr Andere Standorte Wenn Sie sich an Ihre lokale Cepheid Niederlassung Symboltabelle 7 lt 3 gt Bedeutung Katalog Nr Medizinisches Ger t zur n Vitro Diagnostik Nicht wiederverwenden Hersteller Reicht f r lt n gt Tests Kontrolle Autorisierte Vertretung in der Europ ischen Gemeinschaft Temperaturbegrenzung EE lt E ORE N Biologische Gefahr 300 4073 Rev B Februar 2006 41 Deutsch tel Hersteller Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 Telefon 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Autorisierte Vertretung Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Frankreich Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 E Mail cepheid cepheideurope fr CE vo Februar 2006 42 300 4073 Rev B Februar 2006 Espanol Dispositivo m dico de diagn stico in v
5. also den Beh ltern die die PCR Reagenzien enthalten und in denen der PCR Prozess abl uft Da die Kartuschen in sich abgeschlossen sind werden Kreuzkontaminationen verhindert F r eine vollst ndige Beschreibung des Systems siehe das Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System Der Xpert BCR ABL Monitor ist zusammen mit dem GeneXpert Dx System f r den Nachweis des BCR ABL Translokationstranskripts und der endogenen ABL Kontrollsequenz in peripheren Blutproben ausgelegt 18 Die BCR ABL Primer und die Sonde sind speziell zum Nachweis der BCR ABL p210 b2a2 und b3a2 Major Breakpoint Translokation ausgelegt die ABL Primer und Sonde zum Nachweis der ABL Sequenz Eine Uberlappung der ABL Primer oder Sondensequenz mit einer ABL Kinasemutation ist bis heute nicht beschrieben worden Zur Durchf hrung eines Tests werden die Probenmischung und drei Reagenzien in vorbezeichnete Kammern der Xpert BCR ABL Monitorkartusche gegeben Anschlie end wird die Kartusche in das Instrument geladen und die Testinformation an die Systemsoftware bertragen W hrend des Tests platziert das GeneXpert Dx System 1 die Probe und die Reagenzk gelchen in verschiedene Kammern der Kassette 2 isoliert die gesamte RNA des Vollbluts durch Bindung an die feste Phase 3 w scht und sp lt Inhibitoren aus 4 eluiert die RNA 5 hydriert die Reagenzk gelchen und kombiniert die Mischung mit der eluierten RNA 6 gibt die Probe und Reagenzmischung in das Reagenzglas 7 f
6. en utilisant 20 pl de l chantillon d origine Si la valeur C BCR ABL est sup rieure 32 les produits de la transcription BCR ABL ne sont pas d tect s R sultats qualitatifs Toute valeur C BCR ABL inf rieure 32 et qui a une valeur C ABL valide donnera une d tection positive des produits de la transcription BCR ABL Une valeur C BCR ABL absente ou une valeur BCR ABL sup rieure 32 avec un r sultat ABL valide sera d sign e comme ind tectable pour BCR ABL R sultats quantitatifs Un certificat d analyse est fourni avec chaque kit du dispositif BCR ABL Xpert il contient une courbe standard sp cifique un lot pour le dispositif BCR ABL Xpert et une valeur d efficacit E co La courbe standard d finit AC CyABL Cx BCR ABL comme une fonction de la concentration d ARN K562 dans le contexte d un ARN de sang total normal La valeur d efficacit E Ace est calcul e partir de la pente de la courbe standard comme suit Eac 10 1 pente Tests BCR ABL positifs pour un r sultat de test positif le rapport BCR ABL ABL est calcul Paide de l quation suivante La valeur E cy est obtenue partir du certificat d analyse sp cifique un lot qui est fourni avec le kit de test La valeur AC test est obtenue partir de la fen tre Afficher les r sultats Colonne Target Delta C du logiciel du syst me Dx GeneXpert figure 2 rapport BCR ABL ABL Eyc AC x 100 Exemple E A
7. le de la sonde Aucun contr le externe nest requis Toutefois pour un contr le qualit suppl mentaire deux contr les externes peuvent tre r alis s une fois par mois Contr le endog ne normalise les cibles et garantit une quantit suffisante d chantillon pour utiliser le test Du fait de sa faible variabilit le contr le endog ne peut galement tre utilis pour indiquer la contamination de l chantillon par un inhibiteur Le contr le endog ne provient de l chantillon Contr le de la sonde v rifie la pr sence et l int grit des sondes tiquet es L tat Pass de la sonde indique que les r sultats du contr le de la sonde satisfont aux crit res d acceptation Interpr tation des r sultats C ABL valide C ABL doit tre sup rieur ou gal 12 et inf rieur ou gal 18 avec une valeur finale de fluorescence sup rieure ou gale 200 Sila valeur C ABL est inf rieure 12 si la valeur finale de fluorescence est inf rieure 200 ou si la courbe PCR est d form e recommencez le test en utilisant 20 ul de l chantillon d origine Si la valeur C ABL est sup rieure 18 recommencez le test avec un nouvel chantillon C BCR ABL positif valide C BCR ABL doit tre sup rieur ou gal 12 ou il doit tre inf rieur ou gal 32 avec une valeur finale de fluorescence sup rieure ou gale a 40 Sila valeur C BCR ABL est inf rieure 12 recommencez le test
8. sicos para realizar la prueba Si desea obtener instrucciones detalladas consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx 1 Encienda el equipo y el instrumento GeneXpert Dx 2 En el escritorio de Windows haga doble clic en el icono de acceso directo a GeneXpert Dx 3 Inicie una sesi n en el software del sistema GeneXpert Dx con su nombre de usuario y contrase a 4 En la ventana del sistema GeneXpert Dx haga clic en Define Assays Definir ensayos y aseg rese de que la definici n de ensayo de Xpert BCR ABL Monitor se ha importado al software Consulte las instrucciones suministradas con el CD de ensayos Si no tiene el CD de Xpert BCR ABL Monitor p ngase en contacto con el servicio t cnico de Cepheid En la ventana del sistema GeneXpert Dx haga clic en Create Test Crear prueba Aparece la ventana Create Test Crear prueba 6 Escanee el c digo de barras del cartucho Xpert BCR ABL Monitor El software rellena autom ticamente los siguientes campos Select Assay Seleccionar ensayo Reagent Lot ID Id de lote de reactivos y Expiration Date Fecha de caducidad 7 Seleccione el m dulo del instrumento 8 En el cuadro Sample ID Id de muestra escanee o escriba el Id de muestra Aseg rese de escribir el Id de muestra correcto El Id de muestra est asociado a los resultados de la prueba y se muestra en la ventana View Results Ver resultados y en todos los informes 9 Haga clic en Start Test Iniciar pr
9. ufe mit vier Proben durchf hren musste GeneXpert legte den Level an BCR ABL jeder Probe fest Die Genauigkeit wurde gesch tzt gem der CLSI Richtlinie f r Pr zisionsleistungen von klinischen Chemieger ten 2 Table 1 Untersuchungsgenauigkeit Durchschnittliche BCR ABL ABL Position Probe N BCR ABL ABL Std Abw 95 Cl CV 1 BCR ABL negativ 20 lt 0 000133 negativ u _ 2 BCR ABL negativ 20 lt 0 000175 negativ 3 BCR ABL negativ 20 lt 0 000163 negativ Insgesamt BCR ABL negativ 60 lt 0 000157 negativ 1 BCR ABL niedrig 20 0 00477 0 00477 0 00218 0 00737 100 0 2 BCR ABL niedrig 19 0 00285 0 00285 0 00125 0 00445 100 0 3 BCR ABL niedrig 20 0 00528 0 00528 0 00241 0 00815 100 0 Insgesamt BCR ABL niedrig 59 0 00430 0 00524 0 00273 0 00587 121 8 1 BCR ABL m ig 20 1 003 0 324 0 827 1 179 32 3 2 BCR ABL m ig 20 0 856 0 427 0 624 1 088 49 8 3 BCR ABL m ig 19 1 005 0 433 0 762 1 248 43 1 Insgesamt BCR ABL m ig 59 0 954 0 397 0 835 1 073 41 6 1 BCR ABL hoch 20 12 18 2 40 10 88 13 49 19 7 2 BCR ABL hoch 20 12 34 7 31 8 36 16 32 59 2 3 BCR ABL hoch 20 12 18 4 10 9 95 14 41 33 7 Insgesamt BCR ABL hoch 60 12 24 5 03 10 74 13 73 41 1 Klinische Leistung Die Leistung der Untersuchung wurde in drei Einrichtungen anhand von 46 Proben getestet
10. 13 Fermez le couvercle de la cartouche Assurez vous que le couvercle se ferme bien avec un bruit sec Important Assurez vous de charger la cartouche dans l appareil Dx GeneXpert et de commencer le test au cours des 15 minutes suivant la pr paration de la cartouche 1 R actif de lavage 2 R actif de rincage 3 R actif d lution S Echantillon Figure 1 Chambres de la cartouches du dispositif BCR ABL Xpert R alisation du test Cette section r pertorie les tapes de base de la r alisation du test Pour obtenir des instructions d taill es consultez le Manuel d utilisation du systeme Dx GeneXpert 1 Allumez l ordinateur puis mettez l appareil Dx GeneXpert sous tension 2 Sur le bureau Windows double cliquez sur Picone de raccourci Dx GeneXpert 3 Ouvrez une session du logiciel du systeme Dx GeneXpert en utilisant votre nom d utilisateur et votre mot de passe 4 Dans la fen tre du systeme Dx GeneXpert cliquez sur Define Assays Definir les tests et assurez vous que la d finition de tests du dispositif BCR ABL Xpert est import e dans le logiciel Consultez les instructions fournies avec le CD du test Si vous ne disposez pas du CD du dispositif BCR ABL Xpert contactez l assistance technique de Cepheid 5 Dans la fen tre du syst me Dx GeneXpert cliquez sur Create Test Cr er le test La fen tre Cr er le test appara t 6 Scannez le code barres de la cartouche du dispositif
11. 85 Accord des r sultats positifs 26 26 100 Sp cificit La sp cificit du test a t valu e en utilisant 44 chantillons de sang normal citrat et EDTA provenant de quartre sites Tous les chantillons normaux ont t n gatifs pour BCR ABL donnant une sp cificit de 100 La sp cificit du test a galement t valu e sur trois sites en utilisant une collection de 12 chantillons de sang provenant de patients atteints d autres syndromes h matologique comprenant la leuc mie aigue my loblastique la leuc mie aigue lymphoblastique le lymphome Hodgkinien le my lome multiple et le lymphome folliculaire Tous ces chantillons ont t n gatifs pour BCR ABL donnant une sp cificit de 100 Limite de d tection et de lin arit La Figure 4 affiche les donn es de la limite de detection et de lin arit g n r es partir d une exp rience unique de 44 cartouches La proc dure d crite dans cette notice a t utilis e avec les exceptions suivantes Une s rie de dilution d ARN total de leuc mie K562 d Ambion r f rence 7832 a t tudi e en solution dans du sang citrat apr s que de l thanol ait t ajout la cuve chantillon Quatre r plicats ont t effectu s pour chaque concentration d ARN avec les exceptions suivantes six r plicats ont t effectu s pour des chantillons de 30 pg et 10 pg
12. ABL moderato 20 1 003 0 324 0 827 1 179 32 3 2 BCR ABL moderato 20 0 856 0 427 0 624 1 088 49 8 3 BCR ABL moderato 19 1 005 0 433 0 762 1 248 43 1 Complessivi BCR ABL moderato 59 0 954 0 397 0 835 1 073 41 6 1 BCR ABL alto 20 12 18 2 40 10 88 13 49 19 7 2 BCR ABL alto 20 12 34 7 31 8 36 16 32 59 2 3 BCR ABL alto 20 12 18 4 10 9 95 14 41 33 7 Complessivi BCR ABL alto 60 12 24 5 03 10 74 13 73 41 1 Prestazioni cliniche Le prestazioni del saggio sono state analizzate in tre laboratori utilizzando una raccolta di 46 campioni di pazienti con LMC Entrambi i laboratori hanno eseguito il saggio sviluppato nel proprio laboratorio per un confronto I dati sono stati raggruppati in tre categorie Negativo valore BCR ABL rilevato lt 0 01 e Positivo basso valore BCR ABL rilevato compreso tra 0 01 e 0 05 e Positivo alto valore BCR ABL rilevato gt 0 05 66 300 4073 Rev B Febbraio 2006 Caratteristiche sulle prestazioni Table 2 Prestazioni del saggio Risultati dell analisi Numero di campioni LMC Negativo con entrambi i metodi 17 Negativo con il metodo sviluppato dal laboratorio ma positivo basso con GeneXpert 3 Positivo basso con entrambi i metodi 8 Positivo alto con entrambi i metodi 18 Concordanza di risultati negativi 17 20 85 Concordanza di risultati positivi 26 26 100 Specificit La specificit del saggio stata analizzata utilizzando 44 ca
13. BCR ABL Xpert Le logiciel remplit automatiquement les champs suivants Select Assay Selectionnez le test Reagent Lot ID Numero d identification du lot de r actifs et Expiration Date Date limite d utilisation 7 S lectionnez le module de l appareil 8 Dans la case Sample ID Num ro d identification de l chantillon scannez ou saisissez le num ro d identification de l chantillon Assurez vous de saisir le num ro d identification correct de l chantillon Le num ro d identification de l chantillon est associ aux r sultats du test et il est affich dans la fen tre View Results Afficher les r sultats et dans tous les rapports 9 Cliquez sur Start Test D marrer le test Dans la boite de dialogue qui apparait saisissez votre mot de passe 10 Ouvrez la porte du module de l appareil o le voyant vert clignote et chargez la cartouche Fermez la porte Lorsque le test est termin le voyant du module de l appareil s teint 11 Ouvrez la porte du module de l appareil et tez la cartouche Respectez les directives de s curit de votre laboratoire pour liminer la cartouche 300 4073 Rev B F vrier 2006 19 Frangais Affichage et impression des r sultats Pour obtenir des instructions d taill es sur la mani re d afficher et d imprimer les r sultats consultez le Manuel d utilisation du systeme Dx GeneXpert Contr le qualit Chaque test comprend un contr le endog ne ABL et un contr
14. EN Section10 Section17 Section53 htm 20 U S Centers for Disease Control Morbidity and Mortality Weekly Review 1987 36 suppl 2S 2S 18S 21 NIOSH Publication No 2005 151 NIOSH Pocket Guide to Chemical Hazards September 2005 22 CLSI Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices Approved Guideline CLSI document EP5 A ISBN 1 56238 368 X CLSI 940 West Valley Road Suite 1400 Wayne PA 19087 1898 USA 1999 26 300 4073 Rev B F vrier 2006 Notification de brevet a l acheteur Notification de brevet a l acheteur L achat de ce produit permet 4 l acheteur de l utiliser pour l ex cution des services diagnostics pour les diagnostics in vitro humains Aucun brevet g n ral ou aucune autre licence de quelque sorte que ce soit en dehors du pr sent droit sp cifique d utilisation n est accord e Assistance Pour b n ficier d une assistance contactez Cepheid en utilisant lune des informations relatives aux contacts suivantes Assurez vous de communiquer le num ro de s rie de l appareil et le num ro d identification du lot d agents r actifs lorsque vous appelez ou envoyez un courrier lectronique Am rique du Nord Pour b n ficier d une assistance technique utilisez les informations relatives aux contacts suivantes Tel 1 888 838 3222 Courrier lectronique techsupport cepheid com Vous pouvez joindre l assistance technique de Cepheid par t l phone du lundi au vendredi de 6h00
15. Folgende Felder der Software werden automatisch ausgef llt Select Assay Untersuchung ausw hlen Reagent Lot ID Reagenzienchargen ID und Expiration Date Verfallsdatum Das Instrumentenmodul ausw hlen Die Sample ID Proben ID in das Feld eintippen oder scannen Die Proben ID h ngt mit den Testergebnissen zusammen und wird im Fenster View Results Ergebnisse anzeigen und in allen Berichten angezeigt Auf Start Test Test starten klicken Kennwort in das angezeigte Dialogfeld eingeben Die T r des Instrumentenmoduls mit der gr nen blinkenden Anzeige ffnen und die Kartusche laden T r schlie en Wenn der Test abgeschlossen ist erlischt die Anzeige des Instrumentenmoduls Die T r des Instrumentenmoduls ffnen und die Kartusche entnehmen Bei der Entsorgung der Kartusche die Sicherheitsrichtlinien des Labors beachten 300 4073 Rev B Februar 2006 33 Deutsch Anzeigen und Drucken der Ergebnisse Siehe das Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System f r genaue Informationen ber das Anzeigen und Drucken der Ergebnisse Qualit tskontrolle Jeder Test umfasst eine endogene Kontrolle ABL und eine Sondenpr fungskontrolle Es sind keine externen Kontrollen erforderlich F r zus tzliche Qualit tskontrollen k nnen jedoch einmal pro Monat externe Kontrollen getestet werden Endogene Kontrolle Normalisiert Zielsequenzen und stellt sicher dass beim Test eine ausreichende Probenmenge verwendet wurde Aufgrund ihrer ge
16. after adding sample and reagents can cause the contents to spill into the wrong chambers thus producing invalid results Bent or broken reaction tubes can also produce invalid results Do not shake and avoid dropping the cartridge If the reaction tube is bent or broken do not use the cartridge Specimen Collection and Transport Collect peripheral blood specimens according to standard techniques for RT PCR at each institution Collect blood specimens in tubes containing EDTA or sodium citrate as anticoagulant Store blood specimens at 2 8 C and test within 48 hours of collection Do not use heparin as the anticoagulant because it might inhibit the PCR reaction 300 4073 Rev B February 2006 3 English Procedure Cautions e Follow your laboratory safety procedures for working with chemicals and handling specimens Dedicate a set of pipettes and reagents exclusively to sample preparation Separate used cartridges from unused cartridges and reagents Do not open the Xpert BCR ABL Monitor cartridge lid except when adding sample and reagents Do not shake the cartridge Do not load a Xpert BCR ABL Monitor cartridge that has been dropped or shaken after you have inserted the sample and reagents Do not load a cartridge that has a damaged reaction tube Do not open used Xpert BCR ABL Monitor cartridges Dispose of the used Xpert BCR ABL Monitor cartridges according to your laboratory s safety guidelines Before You Begin Bef
17. campioni ed 8 esegue la PCR nested real time con retrotrascrizione RT PCR Il tempo di analisi per BCR ABL richiede circa 2 ore e 20 minuti 300 4073 Rev B Febbraio 2006 57 Italiano Reagenti e strumenti Materiale fornito Il kit Xpert BCR ABL Monitor BCR 100N 10 contiene reagenti sufficienti per elaborare 10 campioni dei pazienti o di controllo qualit Il kit contiene 10 singoli test Ogni confezione del test contiene il seguente materiale 58 Cartuccia Xpert BCR ABL Monitor Primer diretti e inversi Sonde dNTP Transcrittasi inversa Taq polimerasi Tris HCl pH 8 6 HEPES pH 7 2 KCl MgCl BSA sieroalbumina bovina Reagenti per la preparazione dei campioni di sangue Vaschetta portacampione S Proteinasi K PK 50 pl CaCl Glicerolo Proteinasi K Tris HCl pH 7 5 Reagente di lisi LY 1 8 ml CaCl Guanidina HCl EDTA SDS Tris HCl pH 6 4 Tween 20 Urea Reagente di lavaggio 1 3 3 ml Etanolo Guanidina tiocianato Tris HCl pH 7 0 Reagente di risciacquo 2 1 8 ml Cisteamina HCl EDTA KCI Monotioglicerolo MTG PEG Sodio azide Tris pH 7 0 Tween 20 Acqua Reagente di eluizione 3 1 8 ml Acqua trattata con DEPC Sodio azide 300 4073 Rev B Febbraio 2006 Avvertenze e precauzioni Nota le schede dei dati sulla sicurezza dei materiali MSDS Material Safety Data Sheet per tutti i reagenti forniti
18. directrices actuales del programa europeo contra el c ncer y la National Comprehensive Cancer Network NCCN para el tratamiento de pacientes con LMC se recomienda el uso de los ensayos de reacci n en cadena de la polimerasa de transcripci n inversa TI RCP durante el tratamiento inicial de los pacientes con LMC en fase grave para el control de la enfermedad residual m nima y la identificaci n de pacientes que presenten un alto riesgo de recaida 1 Se ha demostrado que TI RCP es un m todo preciso y de gran sensibilidad para la detecci n del gen de fusi n BCR ABL 4 y mas sensible que la hibridaci n in situ fluorescente FISH o la citogen tica Una ventaja adicional de la RCP cuantitativa frente al m todo FISH y la citogen tica es la alta correlaci n de los resultados de RCP obtenidos de la m dula sea con las muestras de sangre perif rica gt gt 15 Por consiguiente la RCP puede reducir los aspirados medulares necesarios en la actualidad en el caso de los pacientes con LMC Aunque la RCP cuantitativa se va a convertir en el punto de referencia para el control de la enfermedad residual el uso de este m todo a n no es generalizado debido a la variaci n de las t cnicas y los controles y a la ausencia de ensayos comercializados Principio del procedimiento El sistema GeneXpert Dx automatiza e integra la purificaci n de muestras la multiplicaci n del cido nucleico y la detecci n de la secuencia objetivo en muestras sencillas
19. greater than 18 repeat the test with fresh specimen Valid Positive BCR ABL C e BCR ABL C must be greater than or equal to 12 or it must be less than or equal to 32 with an endpoint value greater than or equal to 40 Ifthe BCR ABL C value is less than 12 repeat the test using 20 pl of the original specimen Ifthe BCR ABL C value is greater than 32 the BCR ABL transcripts are not detected Qualitative Results e Any BCR ABL C value less than 32 and has a valid ABL C value results in a positive detection for BCR ABL transcripts The absence of a BCR ABL C value or a BCR ABL value greater than 32 along with a valid ABL result will be called undetectable for BCR ABL Quantitative Results A certificate of analysis is supplied with each Xpert BCR ABL Monitor kit and contains a lot specific standard curve for the Xpert BCR ABL Monitor and an Efficiency value Eycy The standard curve reports AC Cy ABL C BCR ABL as a function of K562 RNA concentration in a background of normal whole blood RNA The efficiency value EA cy is calculated from the slope of the standard curve as follows Eac 10 Vslope BCR ABL Positive Tests For a positive test result the ratio BCR ABL ABL is calculated using the following equation The Ea cy value is obtained from the lot specific certificate of analysis that is supplied with the assay kit The Test AC value is obtained from the View Results window Target Delta Ct column of
20. myeloid leukemia Blood 2000 96 10 3343 56 Goldman JM Kaeda JS Cross NC Clinical decision making in chronic myeloid leukemia based on polymerase chain reaction analysis of minimal residual disease Blood 1999 94 4 1484 6 10 Radich JP The detection and significance of minimal residual disease in chronic myeloid leukemia Medicina B Aires 2000 60 Suppl 2 66 70 11 Hochhaus A Reiter A Skladny H et al Molecular monitoring of residual disease in chronic myelogenous leukemia patients after therapy Recent Results Cancer Res 1998 144 36 45 12 Hochhaus A Reiter A Saussele S et al Molecular heterogeneity in complete cytogenetic responders after interferon alpha thera gt gt Ss y P ytog P P Py for chronic myelogenous leukemia low levels of minimal residual disease are associated with continuing remission German CML Study Group and the UK MRC CML Study Group Blood 2000 95 1 62 6 13 Radich JP Gehly G Gooley T et al Polymerase chain reaction detection of the BCR ABL fusion transcript after allogeneic marrow transplantation for chronic myeloid leukemia results and implications in 346 patients Blood 1995 85 9 2632 8 14 Olavarria E Kanfer E Szydlo R et al Early detection of BCR ABL transcripts by quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction predicts outcome after allogeneic stem cell transplantation for chronic myeloid leukemia Blood 2001 97 6 1560 5 15 Gabert J Beillard E van der Velden VH e
21. non viene rilevato alcun valore BCR ABL utilizzare il valore ABL per determinare se sono necessarie analisi supplementari Ad esempio se il valore ABL C maggiore di 15 il limite di rilevamento potrebbe essere maggiore di 0 001 Nel caso si sospettino bassi livelli di BCR ABL ripetere l analisi Anche i valori ABL C ritardati potrebbero richiedere la ripetizione dell analisi Utilizzare il valore per ABL C Test and Analyte Result Detail Errors History Assay Name Kpert BCR ABL Monitor Version 1 Test Result NEGATIVE Analyte Ct EndPt Analyte Probe Target Name Result Check Delta Ct Result BCR ABL 0 0 1 0 NEG PASS ABL 154 4630 PASS PASS Legend BCR ABL Primary ABL Primary RIRI 500 300 Fluorescence 200 100 10 20 30 Cycles 4 Figure 3 Finestra GeneXpert Dx System Sistema GeneXpert Dx View Results Visualizza risultati risultato negativo 64 300 4073 Rev B Febbraio 2006 Motivi per ripetere il saggio Motivi per ripetere il saggio Un risultato INVALID NON VALIDO e o ND indica che si verificato un errore in uno o entrambi i controlli ABL o Controllo sonda o un problema di elaborazione La corsa non valida e deve essere ripetuta con un campione fresco Per una descrizione dei messaggi di errore e delle informazioni relative alla risoluzione dei problemi ved
22. o complejas mediante una reacci n en cadena de la polimerasa de transcripci n inversa TI RCP en tiempo real El sistema consta de un instrumento un ordenador personal y un software cargado previamente para la realizaci n de pruebas con las muestras recogidas y la visualizaci n de los resultados Este sistema requiere el uso de cartuchos GeneXpert desechables de un solo uso y recipientes para los reactivos y el proceso de RCP Dado que los cartuchos son independientes se elimina el riesgo de contaminaci n cruzada Si desea obtener una descripci n detallada del sistema consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Adem s del sistema GeneXpert Dx se ha dise ado Xpert BCR ABL Monitor para detectar la transcripci n de translocaci n de BCR ABL y la secuencia de control end geno de ABL en las muestras de sangre perif rica gt 18 En concreto los iniciadores y la sonda de BCR ABL se han dise ado para la detecci n de la translocaci n del punto de ruptura principal de BCR ABL p210 b2a2 y b3a2 y los iniciadores y la sonda de ABL se han dise ado para la detecci n de la secuencia de ABL Ninguno de los iniciadores o sondas de ABL se superponen en el sitio de la mutaci n de cinasa ABL seg n los estudios realizados hasta la fecha Para realizar una prueba la mezcla de la muestra y los tres reactivos se transfiere a los compartimentos especificados del cartucho Xpert BCR ABL Monitor el cartucho se carga en el instrumento y la prueba
23. ont t valid es en utilisant uniquement les proc dures fournies dans cette notice Des modifications apport es ces proc dures peuvent modifier les performances du test Les r sultats donn s par le dispositif BCR ABL Xpert doivent tre interpr t s conjointement avec d autres donn es de laboratoire et cliniques 4 la disposition du clinicien Le dispositif BCR ABL Xpert ne detectera pas les translocations BCR ABL p190 ou autres translocations qui peuvent tre presents dans l chantillon de sang p riph rique d un patient atteint de leuc mie Le dispositif BCR ABL Xpert doit tre lanc en utilisant du sang total trait par anticoagulant EDTA ou citrate L h parine ne peut pas tre utilis e en guise d anticoagulant car elle inhibe la r action PCR Chaque cartouche du dispositif BCR ABL Xpert usage unique est utilis e pour effectuer un seul test Ne r utilisez pas les cartouches utilis es 300 4073 Rev B F vrier 2006 23 Frangais Caract ristiques des performances Pr cision La pr cision a t valu e en aveugle au cours d une tude comparative sur trois sites en utilisant quatre chantillons pr sentant des concentrations diff rentes de BCR ABL Au total 240 chantillons ont t tudi s L tude des sp cimens comprend quatre niveaux d chantillon n gatif et 3 niveaux d ARN BCR ABL faible mod r ou lev Ces chantillons ont t pr par s en utilisant du sang total collect av
24. pH 7 5 Reactivo de lisis LY 1 8 ml CaCl Clorhidrato de guanidina EDTA SDS Tris HCl pH 6 4 Tween 20 Urea Reactivo de lavado 1 3 3 ml Etanol Tiocianato de guanidina Tris HCl pH 7 0 Reactivo de aclarado 2 1 8 ml Clorhidrato de cisteamina EDTA KCl Monotioglicerol MTG PEG Azida s dica Tris pH 7 0 Tween 20 Agua Reactivo de diluci n 3 1 8 ml Agua tratada con DEPC Azida s dica 44 300 4073 Rev B febrero de 2006 Advertencias y precauciones Nota Puede solicitar las hojas de datos de seguridad de los materiales MSDS para todos los reactivos suministrados con este ensayo al servicio t cnico de Cepheid La alb mina s rica bovina BSA de este producto ha sido producida exclusivamente a partir de plasma bovino procedente de Estados Unidos La fabricaci n de BSA tambi n ha sido realizada en Estados Unidos Los animales no fueron alimentados con proteinas de rumiantes ni con ninguna otra proteina animal y fueron sometidos a pruebas ante y post mortem Durante el procesamiento el material no se mezcl en forma alguna con ning n otro material procedente de animales Almacenamiento y manipulaci n 24 Almacene el contenido del kit Xpert BCR ABL Monitor a 2 8 C No utilice reactivos o cartuchos despu s de la fecha de caducidad indicada No abra los reactivos hasta que est n listos para su uso Utilice el paquete de
25. resultados U de ABL v lido EIU de ABL debe ser mayor que o igual a 12 y menor que o igual a 18 con un valor de punto final mayor que o igual a 200 Siel valor de U es menor que 12 el punto final es menor que 200 o la curva de RCP es incorrecta repita la prueba con 20 pl de la muestra original Siel valor de U de ABL es mayor que 18 repita la prueba con una muestra nueva U de BCR ABL positivo v lido EIU de BCR ABL debe ser mayor que o igual a 12 y menor que o igual a 32 con un valor de punto final mayor que o igual a 40 Siel valor de U de BCR ABL es menor que 12 repita la prueba con 20 pl de la muestra original Siel valor de U de BCR ABL es mayor que 32 las transcripciones de BCR ABL no se detectan Resultados cualitativos Cualquier valor de U de BCR ABL menor que 32 y con un valor de U de ABL v lido tiene como resultado una detecci n positiva de las transcripciones de BCR ABL La ausencia del valor de U de BCR ABL o un valor de BCR ABL mayor que 32 junto con un resultado de ABL v lido tiene como reusltado una detecci n fallida de BCR ABL Resultados cuantitativos Se suministra un certificado de an lisis con cada kit de Xpert BCR ABL con una curva est ndar espec fica del lote para Xpert BCR ABL Monitor y un valor de rendimiento Ey La curva est ndar indica AU UBL U BCR ABL como una funci n de la concentraci n de ARN K562 concentration en un fondo de ARN de sangre completa normal El va
26. tsgrenzen von Testergebnissen die bei einem einzigen Lauf von 44 Kartuschen erzeugt wurden Die in dieser Packungsbeilage beschriebene Prozedur wurde eingehalten mit Ausnahme folgender Serie Eine Verd nnungsserie aus leuk mischer K562 Gesamt RNA von Ambion Katalog Nr 7832 wurde mit Alkohol versetzt in einem mit Citratblut nachdem Ethanol in den Probenbeh lter gegeben worden war F r jede RNA Konzentration wurden vier Replikate erzeugt jedoch mit folgenden Ausnahmen sechs Replikate wurden f r 30 pg und 10 pg Proben durchgef hrt Limit of Detection and Linearity Average Delta Ct Selected Data Excluded from Curve 10 Ave Delta Ct Excluded Data 54 aveDeltact 4 g Linear Ave Delta Ct Je gr er die Menge an ABL die der F 07 Test einbezieht desto st rker n hert le sich ACt oan e 57 3 10 15 4 K562 RNA K562 Cells Dropouts 5opg Approx 2 0 6 2207 e 30pg Approx 1 1 6 25 i i 10 pg lt 1 3 6 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Log K562 RNA pg Abbildung 4 Nachweis und Linearit tsdatengrenze 300 4073 Rev B Februar 2006 39 Deutsch Quellenangaben TJemal A Murray T Ward E et al Cancer Statistics 2005 CA Cancer J Clin 2005 55 10 30 7 Rowley JD A new consistent chromosomal abnormality in chronic myelogenous leukemia identified by quinacrine fluorescence and Giemsa staining Nature 1973 243 2
27. 0 15 4 K562 RNA K562 Cells Dropouts 5opg Approx 2 0 6 20 4 _ 30pg Approx 1 1 6 25 i 10 pg lt 1 3 6 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Log K562 RNA pg Figure 4 Dati del limite di rilevamento e della linearita 300 4073 Rev B Febbraio 2006 67 Italiano Riferimenti bibliografici TJemal A Murray T Ward E et al Cancer Statistics 2005 CA Cancer J Clin 2005 55 10 30 2 Rowley JD A new consistent chromosomal abnormality in chronic myelogenous leukemia identified by quinacrine fluorescence and Giemsa staining Nature 1973 243 290 293 3 NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology Chronic Myelogenous Leukemia Version 1 2006 n Deininger M Buchdunger E Druker BJ The development of imatinib as a therapeutic agent for chronic myeloid leukemia Blood 2005 105 7 2640 2653 3 Kantarjian HM Talpaz M Cortes J et al Quantitative polymerase chain reaction monitoring of BCR ABL during therapy with imatinib mesylate STI571 Gleevec in chronic phase chronic myelogenous leukemia Clin Cancer Res 2003 9 1 160 6 6 Gabert J et al Standardization and quality control studies of real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia A Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 1 40 7 Sawyers C Chronic Myeloid Leukemia NEJM 1999 340 17 1330 40 8 Deininger MW Goldman JM Melo JV The molecular biology of chronic
28. 00 4073 Rev B Febbraio 2006 61 Italiano Visualizzazione e stampa dei risultati Per istruzioni su come visualizzare e stampare i risultati vedere il Manuale dell operatore del sistema GeneXpert Controllo di qualit Ogni analisi contiene un controllo endogeno ABL e un controllo per il controllo sonda Non sono necessari controlli esterni E tuttavia possibile analizzare due controlli esterni una volta al mese per un ulteriore controllo di qualit Controllo endogeno normalizza il target BCR ABL e assicura l utilizzo di campione sufficiente nell analisi Il controllo endogeno grazie alla sua bassa variabilit pu anche essere utilizzato per indicare la contaminazione da inibitori presenti nel campione Il controllo endogeno viene preso dal campione Controllo sonda verifica la presenza e l integrit delle sonde marcate Uno stato del controllo sonda Pass Ammesso indica che i risultati del controllo sonda soddisfano i criteri di accettazione Interpretazione dei risultati ABL C valido e ABL C deve essere maggiore o uguale a 12 e minore o uguale a 18 con un valore del punto finale maggiore o uguale a 200 Se il valore ABL C minore di 12 il punto finale minore di 200 o la curva PCR deformata ripetere l analisi utilizzando 20 pl del campione originale Se ilvalore ABL C maggiore di 18 ripetere l analisi con un campione fresco BCR ABL C valido positivo BCR ABL C deve essere maggiore o u
29. 90 293 3 NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology Chronic Myelogenous Leukemia Version 1 2006 n Deininger M Buchdunger E Druker BJ The development of imatinib as a therapeutic agent for chronic myeloid leukemia Blood 2005 105 7 2640 2653 3 Kantarjian HM Talpaz M Cortes J et al Quantitative polymerase chain reaction monitoring of BCR ABL during therapy with imatinib mesylate STI571 Gleevec in chronic phase chronic myelogenous leukemia Clin Cancer Res 2003 9 1 160 6 6 Gabert J et al Standardization and quality control studies of real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia A Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 1 40 7 Sawyers C Chronic Myeloid Leukemia NEJM 1999 340 17 1330 40 8 Deininger MW Goldman JM Melo JV The molecular biology of chronic myeloid leukemia Blood 2000 96 10 3343 56 Goldman JM Kaeda JS Cross NC Clinical decision making in chronic myeloid leukemia based on polymerase chain reaction analysis of minimal residual disease Blood 1999 94 4 1484 6 10 Radich JP The detection and significance of minimal residual disease in chronic myeloid leukemia Medicina B Aires 2000 60 Suppl 2 66 70 11 Hochhaus A Reiter A Skladny H et al Molecular monitoring of residual disease in chronic myelogenous leukemia patients after therapy Recent Results Cancer Res 1998 144 36 45 12 Hochhaus A
30. Elution Reagent 3 1 8 ml DEPC treated water Sodium azide 300 4073 Rev B February 2006 Warnings and Precautions Notes Material Safety Data Sheets MSDS for all reagents provided in this assay are available upon request from Cepheid Technical Support The bovine serum albumin BSA in this product was produced exclusively from bovine plasma sourced in the United States The manufacturing of the BSA is also performed in the United States No ruminant protein or other animal protein was fed to the animals the animals passed ante and post mortem testing During processing there was no commingling of the material with other animal materials Storage and Handling DE Store the Xpert BCR ABL Monitor kit contents at 2 8 C Do not use cartridges or reagents that have passed the expiration date Do not open the reagents until they are ready to be used Use the Xpert BCR ABL Monitor assay pack within 30 minutes after opening Except for the Lysis Reagent do not use reagents that have become cloudy or discolored Ifthe Lysis Reagent is cloudy heat at 56 C for 5 minutes before use Material Required But Not Provided GeneXpert Dx System Vortexer e Microcentrifuge 1000 g minimum e Pipettes and aerosol filter pipette tips suggested sizes 200 ul and 1000 pl e 100 ethanol Optional Transfer pipettes Note The GeneXpert Dx System catalog number varies by configuration Contact Cepheid for the de
31. Er dient zur Uberwachung des p210 b2a2 und b3a2 Transkripts in peripheren Blutlymphozyten PBL von Patienten mit chronischer myeloischer Leuk mie CML Eine signifikante Zunahme des p210 Transkripts sollte durch ein anderes Verfahren best tigt werden wie z B einer zytogenetischen Metaphasen Standardanalyse einer Knochenmarksprobe des Patienten Zusammenfassung und Erkl rung Die chronische myeloische Leuk mie CML geh rt zu einer Gruppe von Erkrankungen die als myeloproliferative Erkrankungen bezeichnet werden Im Jahr 2005 betrug die Zahl der Neuerkrankungen sch tzungsweise 4600 die Zahl der Todesf lle 850 Uber 95 der Patienten mit CML besitzen das verk rzte Philadelphia Chromosom Ph1 das aus einer reziproken Translokation zwischen den langen Armen der Chromosomen 9 und 22 stammt Im Verlauf dieser Translokation wird das ABL Gen Abelson von Chromosom 9 auf den BCR Bereich BCR Breakpoint Cluster Region von Chromosom 22 transferiert was zur Entstehung des Fusionsgens BCR ABL f hrt 4 Dieses Fusionsgen produziert das Protein p210 b2a2 und b3a2 Hierbei handelt es sich um eine Tyrosinkinase mit deregulierter Aktivit t die eine Schl sselrolle in der Entwicklung von CML spielt Die aktuellen Richtlinien der EAC Europe Against Cancer und der NCCN National Comprehensive Cancer Network f r die Behandlung von Patienten mit CML fordern den Einsatz des RT PCR Verfahrens bei der ersten medizinischen Untersuchung von Patie
32. GATIVE 000 Analyte Ct EndPt Analyte Probe Target Name Result Check Delta Ct Result BCR ABL 0 0 1 0 NEG PASS ABL 154 4630 PASS PASS Legend vi Z BCR ABL Primary El a vi ABL Primary 8 400 o 300 5 200 100 0 10 20 30 EEE Abbildung 3 Das Fenster GeneXpert Dx System View Results GeneXpert Dx System Ergebnisse anzeigen negatives Ergebnis 36 300 4073 Rev B Februar 2006 Gr nde f r eine Wiederholung der Untersuchung Gr nde f r eine Wiederholung der Untersuchung Ein UNG LTIGES und oder NF Ergebnis zeigt an dass eine oder beide Kontrollen ABL oder Sondenpriifung fehlgeschlagen sind oder ein Verarbeitungsproblem aufgetreten ist Der Lauf ist ung ltig und sollte mit einer frischen Probe wiederholt werden F r eine Beschreibung von Fehlermeldungen und Fehlerbehebungsinformationen siehe das Benutzerhandbuch zum Xpert Dx System Einschr nkungen Die Leistung des Xpert BCR ABL Monitors wurde nur anhand der Prozeduren gepr ft die in der Packungsbeilage beschrieben sind nderungen an diesen Prozeduren k nnen die Leistung des Tests beeintr chtigen Ergebnisse des Xpert BCR ABL Monitors sollten unter Ber cksichtigung anderer Labor und klinischer Daten interpretiert werden die dem Kliniker zur Verf gung stehen Der Xpert BCR ABL Monitor weist die p190 oder andere Translokationen nicht nach die in einer perip
33. GeneXpert Xpert BCR ABL Monitor BCR 100N 10 Gi Cepheid CE 300 4073 Rev C es Cepheid Cepheid Europe 904 Caribbean Drive Vira Solelh Sunnyvale CA 94089 1189 81470 Maurens Scopont France Tel 1 408 541 4191 Tel 33 563 82 53 00 Fax 1 408 541 4192 Fax 33 563 82 53 01 Technical Support toll free 1 888 838 3222 Technical Support 33 563 82 53 19 English In Vitro Diagnostic Medical Device Proprietary Name Xpert BCR ABL Monitor Common or Usual Name Xpert BCR ABL Monitor Intended Use Xpert BCR ABL Monitor which detects the BCR ABL chromosomal translocation is a real time reverse transcription PCR RT PCR assay intended as an aid in the monitoring of the p210 b2a2 and b3a2 transcript in peripheral blood lymphocytes PBL of patients with chronic myelogenous leukemia CML A significant increase in the p210 transcript should be confirmed by another method such as standard metaphase cytogenetic analysis of a bone marrow specimen from the patient Summary and Explanation Chronic myelogenous leukemia CML is part of a group of diseases called the myeloproliferative disorders with an estimated 4600 newly diagnosed cases and 850 deaths in 2005 More than 95 of patients with CML have the distinctive Philadelphia chromosome Ph1 that results from a reciprocal translocation between the long arms of chromosomes 9 and 22 The translocation involves the transfer of the Abelson ABL gene on chromosome 9
34. NFERRED WITH THE PURCHASE OF THIS PRODUCT Assistance For assistance contact Cepheid using one of the following contact details Make sure you provide the instrument serial number and reagent lot ID when you call or email North America For technical support use the following contact details Tel 1 888 838 3222 Email techsupport cepheid com You can reach Cepheid Technical Support by telephone Monday through Friday from 6 A M to 5 P M Pacific time European Union For technical support use the following contact details Tel 33 563 82 53 19 Email techsupport cepheideurope fr Other Locations Contact your local Cepheid representative 300 4073 Rev B February 2006 B English Table of Symbols u lt 3 gt 2 Meaning Catalog number In vitro diagnostic medical device Do no reuse Manufacturer Contains sufficient for lt n gt tests Control Authorized representative in the European Community Temperature limitation EE lt E RE Biological hazard eel Manufacturer Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 Phone 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Authorized Representative Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Email cepheid cepheideurope fr C Ho February 2006 300 4073 Rev B February 2006 Frangais Appareil usage m dical de d
35. R ABL are suspected repeat the test Late ABL C values might also require the test to be repeated Use the value for Test ABL C Test and Analyte Result Detail Errors History Assay Name Xpert BCR ABL Monitor Version 1 Test Result NEGATIVE MANI Analyte Ct EndPt Analyte Probe Target Name Result Check Delta Ct Result BCR ABL 0 0 1 0 NEG PASS ABLE 5 4 4630 PASS PASS Legend Le vi Z BCR ABL Primary I vi ABL Primary 8 2 400 8 300 S 200 100 Figure 3 GeneXpert Dx System View Results window negative result 300 4073 Rev B February 2006 Reasons to Repeat the Assay Reasons to Repeat the Assay An INVALID and or ND result indicates that one or both of the controls ABL or Probe Check has failed or there was a processing problem The run is invalid and should be repeated with fresh specimen For a description of error messages and troubleshotting information see the GeneXpert Dx System Operator Manual Limitations The performance of the Xpert BCR ABL Monitor was validated using the procedures provided in this package insert only Modifications to these procedures can alter the performance of the test Results from the Xpert BCR ABL Monitor should be interpreted in conjunction with other laboratory and clinical data available to the clinician The Xpert BCR ABL Monitor will not det
36. Reiter A Saussele S et al Molecular heterogeneity in complete cytogenetic responders after interferon alpha thera gt gt Ss y P ytog P P Py for chronic myelogenous leukemia low levels of minimal residual disease are associated with continuing remission German CML Study Group and the UK MRC CML Study Group Blood 2000 95 1 62 6 13 Radich JP Gehly G Gooley T et al Polymerase chain reaction detection of the BCR ABL fusion transcript after allogeneic marrow transplantation for chronic myeloid leukemia results and implications in 346 patients Blood 1995 85 9 2632 8 14 Olavarria E Kanfer E Szydlo R et al Early detection of BCR ABL transcripts by quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction predicts outcome after allogeneic stem cell transplantation for chronic myeloid leukemia Blood 2001 97 6 1560 5 15 Gabert J Beillard E van der Velden VH et al Standardization and quality control studies of real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia a Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 17 2318 2357 16 Beillard E Pallisgaard N van der Velden VH etal Evaluation of candidate control genes for diagnosis and residual disease detection in leukemic patients using real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction RT PCR a Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 17 2474 2486 17 v
37. Xpert Dx ventana View Results Ver resultados resultado negativo 50 300 4073 Rev B febrero de 2006 Motivos para repetir el ensayo Motivos para repetir el ensayo Un resultado no v lido o no disponible indica que uno o ambos controles ABL o comprobaci n de sonda ha n fallado o que se ha producido un error de procesamiento El experimento no es v lido y se debe repetir con una muestra nueva Si desea obtener una descripci n detallada de los mensajes de error e informaci n sobre la soluci n de problemas consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Limitaciones El rendimiento de Xpert BCR ABL Monitor se ha validado mediante los procedimientos suministrados con estas instrucciones Las modificaciones de estos procedimientos pueden alterar el rendimiento de la prueba Los resultados de Xpert BCR ABL Monitor se deben interpretar junto con otros datos cl nicos y de laboratorio a disposici n del m dico Xpert BCR ABL Monitor no detecta p190 ni ninguna otra translocaci n que pueda haber en una muestra de sangre perif rica de un paciente con leucemia Xpert BCR ABL Monitor se debe utilizar con sangre completa con EDTA o citrato como anticoagulante La heparina no es apta como anticoagulante en este caso porque inhibe la RCP Cada cartucho Xpert BCR ABL Monitor de un solo uso se utiliza para procesar una prueba No reutilice los cartuchos 300 4073 Rev B febrero de 2006 51 Espanol Caracteristicas de r
38. aible 20 0 00528 0 00528 0 00241 0 00815 100 0 Total BCR ABL faible 59 0 00430 0 00524 0 00273 0 00587 121 8 1 BCR ABL mod r 20 1 003 0 324 0 827 1 179 32 3 2 BCR ABL mod r 20 0 856 0 427 0 624 1 088 49 8 3 BCR ABL mod r 19 1 005 0 433 0 762 1 248 43 1 Total BCR ABL mod r 59 0 954 0 397 0 835 1 073 41 6 1 BCR ABL haut 20 12 18 2 40 10 88 13 49 19 7 2 BCR ABL haut 20 12 34 7 31 8 36 16 32 59 2 3 BCR ABL haut 20 12 18 4 10 9 95 14 41 33 7 Total BCR ABL haut 60 12 24 5 03 10 74 13 73 41 1 Performances cliniques Les performances du test ont t valu es sur trois sites en utilisant une collection de 46 chantillons provenant de patients atteints de LMC Les deux sites ont galement effectu un test d velopp dans leur laboratoire pour comparaison Les donn es ont t regroup es en trois cat gories N gatif lt 0 01 BCR ABL d tect Faiblement positif 0 01 0 05 BCR ABL d tect Haut positif gt 0 05 BCR ABL d tect 24 300 4073 Rev B F vrier 2006 Caract ristiques des performances Table 2 R sultats du test R sultats du test Nombre d chantillons LMC N gatif par les deux m thodes 17 N gatif par la m thode d velopp e en laboratoire mais faible positif par GeneXpert 3 Faible positif par les deux m thodes 8 Haut positif par les deux m thodes 18 Accord des r sultats n gatifs 17 20
39. an der Velden VH Boeckx N Gonzalez M et al Differential stability of control gene and fusion gene transcripts over time may hamper accurate quantification of minimal residual disease a study within the Europe Against Cancer Program Leukemia 2004 18 884 886 18 van der Velden VH Hochhaus A Cazzaniga G Szczepanski T Gabert J van Dongen JJ Detection of minimal residual disease in hematologic malignancies by real time quantitative PCR principles approaches and laboratory aspects Leukemia 2003 17 1013 1034 19 World Health Organization Guidelines on Standard Operating Procedures for HAEMATOLOGY from http w3 whosea org EN Section10 Section17 Section53 htm 20 U S Centers for Disease Control Morbidity and Mortality Weekly Review 1987 36 suppl 2S 2S 18S 21 NIOSH Publication No 2005 151 NIOSH Pocket Guide to Chemical Hazards September 2005 22 CLSI Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices Approved Guideline CLSI document EP5 A ISBN 1 56238 368 X CLSI 940 West Valley Road Suite 1400 Wayne PA 19087 1898 USA 1999 40 300 4073 Rev B Februar 2006 Patent Nachricht zum K ufer Patent Nachricht zum K ufer Der Erwerb des vorliegenden Produkts erm glicht dem K ufer die Erstellung von Diagnosedienstleistungen zur In Vitro Diagnostik beim Menschen Es wird mit Ausnahme des besonderen Verwendungsrechts aus dem Kauf hierdurch weder ein allgemeines Patent noch eine Lizenz anderer Art gew hrt
40. blood by binding the RNA to the solid phase material 3 washes and rinses away inhibitors 4 elutes the RNA 5 hydrates the reagent beads and combines the mixture with the eluted RNA 6 moves the sample and reagent mixture into the reaction tube 7 performs quality checks to ensure that sample preparation is successful and 8 performs RT PCR followed by nested real time PCR The test process for BCR ABL takes approximately 2 hours and 20 minutes 300 4073 Rev B February 2006 1 English Reagents and Instruments Material Provided VW The Xpert BCR ABL Monitor kit BCR 100N 10 contains sufficient reagents to process 10 patient or quality control specimens The kit contains 10 individual assay packs Each assay pack contains the following Xpert BCR ABL Monitor cartridge Primers forward and reverse Probes dNTPs Reverse transcriptase Taq polymerase Tris HCl pH 8 6 HEPES pH 7 2 KCl MgCl BSA bovine serum abumin Blood Sample Preparation reagents Sample Container S Proteinase K PK 50 pl CaCl Glycerol Proteinase K Tris HCl pH 7 5 Lysis Reagent LY 1 8 ml CaCl Guanidine HCl EDTA SDS Tris HCl pH 6 4 Tween 20 Urea Wash Reagent 1 3 3 ml Ethanol Guanidine thiocyanate Tris HCl pH 7 0 Rinse Reagent 2 1 8 ml Cysteamine HCl EDTA KCl Monothioglycerol MTG PEG Sodium azide Tris pH 7 0 Tween 20 Water
41. c in chronic phase chronic myelogenous leukemia Clin Cancer Res 2003 9 1 160 6 6 Gabert J et al Standardization and quality control studies of real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia A Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 1 40 7 Sawyers C Chronic Myeloid Leukemia NEJM 1999 340 17 1330 40 8 Deininger MW Goldman JM Melo JV The molecular biology of chronic myeloid leukemia Blood 2000 96 10 3343 56 Goldman JM Kaeda JS Cross NC Clinical decision making in chronic myeloid leukemia based on polymerase chain reaction analysis of minimal residual disease Blood 1999 94 4 1484 6 10 Radich JP The detection and significance of minimal residual disease in chronic myeloid leukemia Medicina B Aires 2000 60 Suppl 2 66 70 11 Hochhaus A Reiter A Skladny H et al Molecular monitoring of residual disease in chronic myelogenous leukemia patients after therapy Recent Results Cancer Res 1998 144 36 45 12 Hochhaus A Reiter A Saussele S et al Molecular heterogeneity in complete cytogenetic responders after interferon alpha therapy for chronic myelogenous leukemia low levels of minimal residual disease are associated with continuing remission German CML Study Group and the UK MRC CML Study Group Blood 2000 95 1 62 6 13 Radich JP Gehly G Gooley T et al Polymerase chain reaction detection of the BCR ABL fusion tran
42. cid amplification and detection of the target sequence in simple or complex samples using real time RT PCR The system consists of an instrument personal computer and preloaded software for running tests on collected specimens and viewing the results The system requires the use of single use disposable GeneXpert cartridges vessels that hold the PCR reagents and host the PCR process Because the cartridges are self contained cross contamination concerns are eliminated For a full description of the system see the GeneXpert Dx System Operator Manual Used with the GeneXpert Dx System the Xpert BCR ABL Monitor is designed to detect the BCR ABL translocation transcript and the ABL endogenous control sequence in peripheral blood specimens gt ae Specifically the BCR ABL primers and probe are designed for the detection of the BCR ABL p210 b2a2 and b3a2 major breakpoint translocation and the ABL primers and probe are designed for the detection of the ABL sequence None of the ABL primers or probes overlap the site of any ABL kinase mutation reported to date To run a test the sample mixture and three reagents are transferred into designated chambers of the Xpert BCR ABL Monitor cartridge the cartridge is loaded into the instrument and test information is supplied in the system software During the test process the GeneXpert Dx System 1 moves the sample and reagents into different chambers in the cartridge 2 isolates the total RNA from whole
43. contaminazione crociata Per una descrizione completa del sistema vedere il Manuale dell operatore del sistema GeneXpert Dx Xpert BCR ABL Monitor utilizzato con il sistema GeneXpert Dx progettato per rilevare il trascritto con traslocazione BCR ABL e la sequenza del controllo endogeno ABL in campioni di sangue periferico 5 18 In particolare i primer e la sonda BCR ABL sono progettati per il rilevamento della traslocazione MBR major breakpoint region della p210 b2a2 e b3a2 BCR ABL e i primer e la sonda ABL sono progettati per il rilevamento della sequenza ABL Fino ad oggi non stata riportata alcuna sovrapposizione dei primer o delle sonde ABL sul sito di mutazione di qualsiasi chinasi ABL Per eseguire un analisi la miscela di campione e di tre reagenti viene trasferita nelle camere designate della cartuccia Xpert BCR ABL Monitor la cartuccia viene caricata nello strumento e le informazioni sull analisi vengono fornite nel software del sistema Durante il processo dell analisi il sistema GeneXpert Dx 1 sposta il campione e i reagenti nelle diverse camere della cartuccia 2 isola l RNA totale dal sangue intero legando l RNA al materiale in fase solida 3 lava e risciacqua gli inibitori 4 eluisce RNA 5 idrata le microsfere dei reagenti e combina la miscela con l RNA eluito 6 sposta la miscela di campione e reagenti nella provetta di reazione 7 esegue i controlli di qualit per assicurare la riuscita della preparazione dei
44. contengan EDTA o citrato s dico como anticoagulante Conserve las muestras de sangre a 2 8 C y haga una prueba 48 horas despu s de la recogida No utilice heparina como anticoagulante ya que puede inhibir la RCP Procedimiento Precauciones Siga los procedimientos de seguridad del laboratorio para trabajar con productos quimicos y manipular las muestras Utilice un conjunto de pipetas y reactivos s lo para la preparaci n de las muestras Separe los cartuchos usados de los cartuchos y reactivos sin usar No abra la tapa del cartucho Xpert BCR ABL Monitor salvo para afiadir la muestra y los reactivos No agite el cartucho No cargue un cartucho Xpert BCR ABL Monitor que se haya caido o movido despu s de introducir la muestra y los reactivos No cargue un cartucho con un tubo de reacci n dafiado No abra los cartuchos Xpert BCR ABL Monitor usados Deseche los cartuchos Xpert BCR ABL Monitor usados segtin la normativa de seguridad del laboratorio Antes de comenzar Antes de iniciar el procedimiento centrifugue brevemente los siguientes reactivos a 1000 g durante 10 segundos Proteinasa K PK Reactivo de lisis LY Reactivo de aclarado 2 Reactivo de diluci n 3 Preparaci n del cartucho 2 3 4 5 6 7 8 9 Extraiga los reactivos de preparaci n de muestras de la bandeja sellada A ada 40 ul de proteinasa K PK al vial de 5 ml vac o etiquetado como Contenedor de muestras S A ada 200 pl de la muestra
45. cr sp cifique un lot 1 915 AC test 2 9 rapport BCR ABL ABL 1 915 29 x 100 15 195 R sultat Positif pour BCR ABL d tect avec un rapport de 15 195 20 300 4073 Rev B F vrier 2006 Interpr tation des r sultats Utilisez cette valeur pour AC test Figure 2 Syst me Dx GeneXpert fen tre View results Afficher les r sultats r sultats positifs 300 4073 Rev B F vrier 2006 21 Frangais Tests BCR ABL n gatifs pour des valeurs ABL sup rieures 12 mais inf rieures 18 si BCR ABL est ind tectable calculez en premier un rapport th orique BCR ABL avant de donner les r sultats Pour ce faire soustrayez 32 la valeur C ABL test test ABL Ct 32 La valeur C ABL est obtenue a partir de la fen tre Afficher les r sultats Colonne Ct du logiciel du systeme DX GeneXpert figure 3 Calculez le rapport th orique BCR ABL Donnez un r sultat inf rieur au rapport th orique la valeur qui doit tre observ e si une vraie valeur C BCR ABL de 32 tait mesur e Exemple Enc sp cifique un lot 1 915 C ABL test 15 4 A C th orique 15 4 32 16 6 Rapport th orique BCR ABL ABL 1 915 6166 x 100 0 0021 R sultat BCR ABL non d tectable avec une limite de d tection de 0 0021 Si aucun BCR ABL nest d tect utilisez la valeur ABL pour d terminer si des tests suppl mentaires sont requis Par exemple si la valeur C ABL est sup rie
46. de la LMC Les conseils pratiques actuels prodigu s par le programme Europe Against Cancer et le National Comprehensive Cancer Network NCCN afin de g rer les patients atteints de LMC demandent l utilisation des tests de Transcription Inverse Amplification en Cha ne par Polym rase RT PCR au cours du traitement initial des patients en phase chronique de LMC de la surveillance des maladies r siduelles minimales et de l identification des patients qui peuvent pr senter un fort risque de rechute gt 1 Il est prouv que la m thode RT PCR est fiable et tr s sensible pour la d tection du g ne de fusion BCR ABL 4 et quelle est plus sensible que Phybridation in situ fluorescente FISH ou que la cytog n tique Un avantage suppl mentaire de la PCR quantitative par opposition la FISH et la cytog n tique r side dans la forte correspondance des r sultats de la PCR obtenus partir d chantillons de moelle osseuse et de sang p riph rique 15 Par cons quent la PCR peut potentiellement r duire les aspirations de moelle osseuse requises actuellement chez les patients atteints de LMC Il est possible que la PCR quantitative devienne la norme en mati re de surveillance des maladies r siduelles n anmoins la m thode rest actuellement pas largement utilis e cause de la variation des techniques et des contr les ainsi que du manque de tests disponibles dans le commerce Principe du test Le syst me Dx GeneXpert automat
47. de sangre al contenedor de muestras S que contiene proteinasa K Agite durante 5 segundos Incube a temperatura ambiente durante 1 minuto A ada 1 ml del reactivo de lisis LY al contenedor de muestras S Agite durante 10 segundos Incube a temperatura ambiente durante 10 minutos Afiada 1 ml de etanol al 100 al contenedor de muestras S 10 Agite durante 10 segundos Reserve la preparaci n 11 46 Retire un cartucho de la bandeja sellada 300 4073 Rev B febrero de 2006 Procedimiento 12 Abra la tapa del cartucho y transfiera el contenido de los tubos de reactivos y el contenedor de muestras a los compartimentos del cartucho del modo siguiente figure 1 S Pipetee todo el contenido del contenedor de muestras S e 1 Pipetee 2 1 ml como m nimo del contenido del tubo de reactivo de lavado 1 2 Pipetee 1 ml como m nimo del contenido del tubo de reactivo de aclarado 2 3 Pipetee 1 ml como m nimo del contenido del tubo de reactivo de diluci n 3 13 Cierre la tapa del cartucho Aseg rese de que la tapa est bien cerrada Importante Aseg rese de cargar el cartucho en el instrumento GeneXpert Dx e inicie la prueba 15 minutos despu s de preparar el cartucho 1 Reactivo de lavado 2 Reactivo de aclarado 3 Reactivo de diluci n S Muestra Figura 1 Compartimentos del cartucho Xpert BCR ABL Monitor Realizaci n de la prueba En esta secci n se incluyen los pasos b
48. die Xpert BCR ABL Monitorkartusche nicht Entsorgen Sie die Xpert BCR ABL Monitorkartusche gem der Sicherheitsrichtlinien Ihres Labors Bevor Sie beginnen Bevor Sie mit der Prozedur beginnen zentrifugieren Sie die folgenden Reagenzien bei 1000 g f r 10 Sekunden Proteinase K PK Lysereagenz LY Sp lreagenz 2 Elutionsreagenz 3 Vorbereiten der Kartusche SOP 00 CRT E SI a Reagenzien zur Probenvorbereitung aus der versiegelten Schale nehmen 40 pl Proteinase K PK in den leeren und mit S markierten 5 ml Probenbehilter pipettieren In den Probenbeh lter S der bereits Proteinase K enth lt 200 pl der Blutprobe pipettieren 5 Sekunden vortexen 1 Minute Inkubation bei Raumtemperatur 1 ml Lysereagenz LY in den Probenbehilter pipettieren 10 Sekunden vortexen 10 Minuten Inkubation bei Raumtemperatur In den Probenbeh lter S 1 ml 100 Ethanol pipettieren 10 10 Sekunden vortexen Den Probenbeh lter zur Seite stellen 11 Eine Kartusche aus der versiegelten Schale entnehmen 32 300 4073 Rev B Februar 2006 12 13 Prozedur Den Kartuschendeckel und die Inhalte aus den Reagenzgef en und dem Probenbeh lter entnehmen und wie folgt in die Kartuschenkammern f llen Abbildung 1 S den gesamten Inhalt in den Probenbeh lter S pipettieren e 1 mindestens 2 1 ml des Inhalts aus dem Waschreagenzr hrchen 1 pipettieren 2 mindestens 1 ml des Inhalts aus dem Sp lreagenzr h
49. die von 2 Patienten mit CML stammten Beide Einrichtungen f hrten ihre im eigenen Labor entwickelten Untersuchungen zum Vergleich durch Die Daten wurden in drei Kategorien unterteilt Negativ lt 0 01 BCR ABL nachgewiesen Schwach positiv 0 01 bis 0 05 BCR ABL nachgewiesen Stark positiv gt 0 05 BCR ABL nachgewiesen 38 300 4073 Rev B Februar 2006 Leistungsmerkmale Table 2 Untersuchungsleistung Testergebnisse Anzahl der CML Proben Negativ bei beiden Methoden 17 Negativ laut der im Labor entwickelten Methode jedoch schwach positiv mit GeneXpert 3 Schwach positiv nach beiden Methoden 8 Stark positiv nach beiden Methoden 18 Vereinbarung bei negativen Ergebnissen 17 20 85 Vereinbarung bei positiven Ergebnissen 26 26 100 Spezifit t Die Spezifit t der Untersuchung wurde anhand von 44 normalen Citrat und EDTA Blutproben aus vier Einrichtungen getestet Alle normalen Proben waren negativ auf BCR ABL und ergaben eine Spezifit t von 100 Die Spezifit t der Untersuchung wurde dar ber hinaus in drei Einrichtungen anhand von 12 Blutproben von Patienten mit anderen h matologisch Erkrankungen wie akuter myeloischer Leuk mie akuter lymphozytischer Leuk mie Hodgkin Lymphom multiplem Myelom und follikul rem Lymphom getestet Alle Proben waren negativ auf BCR ABL und ergaben eine Spezifit t von 100 Nachweis und Linearit tsgrenzen Abbildung 4 zeigt die Nachweis und Linearit
50. do desarrollado en el laboratorio y positivo con GeneXpert 3 Positivo bajo con ambos m todos 8 Positivo alto con ambos m todos 18 Correspondencia de resultados negativos 17 20 85 Correspondencia de resultados positivos 26 26 100 Especificidad La especificidad del ensayo se analiz con 44 muestras de sangre con citrato y EDTA normales procedentes de cuatro centros Todas las muestras normales fueron negativas para BCR ABL con un resultado de especificidad del 100 La especificidad del ensayo se analiz en otros tres centros con un conjunto de 12 muestras de sangre de pacientes con otros trastornos hematologic entre los que se incluyen leucemia miel gena aguda leucemia linfoc tica aguda linfoma de Hodgkin mieloma m ltiple y linfoma folicular Todas estas muestras normales fueron negativas para BCR ABL con un resultado de especificidad del 100 L mite de detecci n y linealidad En la Figure 4 se muestran los datos de l mite de detecci n y linealidad de un solo experimento con 44 cartuchos Se utiliz el procedimiento descrito en estas instrucciones con las siguientes excepciones Una serie de diluci n de ARN total de leucemia K562 de Ambion n mero de referencia 7832 se a adi a la sangre normal con citrato como anticoagulante despu s de a adir el etanol al contenedor de muestras Se analizaron cuatro muestras duplicadas para cada concentraci n de ARN con las siguientes excepciones se analizaron seis muestras d
51. e e reagenti Conte leucocitarie eccessivamente elevate potrebbero causare un accumulo di pressione nella cartuccia e provocare l interruzione delle corse La caduta o l agitazione delle cartucce Xpert BCR ABL Monitor dopo aver aggiunto campione e reagenti pu causare il versamento del contenuto nelle camere sbagliate producendo risultati non validi Anche le provette di reazione piegate o rotte possono produrre risultati non validi Non scuotere la cartuccia ed evitare di farla cadere Se la provetta di reazione piegata o rotta non utilizzare la cartuccia 300 4073 Rev B Febbraio 2006 59 Italiano Raccolta e trasporto dei campioni Raccogliere i campioni di sangue periferico secondo le tecniche standard per la RT PCR in vigore presso l istituto Raccogliere i campioni di sangue nelle provette contenenti EDTA o citrato di sodio come anticoagulante Conservare i campioni di sangue a 2 8 C e analizzare entro 48 ore dalla raccolta Non utilizzare eparina come anticoagulante poich potrebbe inibire la reazione della PCR Procedura Precauzioni Attenersi alle procedure di sicurezza del proprio laboratorio relative alla manipolazione di sostanze chimiche e di campioni Dedicare un set di pipette e reagenti esclusivamente alla preparazione dei campioni Separare le cartucce usate dalle cartucce non utilizzate e dai reagenti Non aprire il coperchio della cartuccia Xpert BCR ABL Monitor eccetto quando si aggiungono il campione e i r
52. e precauzioni amp Tutti i campioni biologici devono essere trattati come se fossero in grado di trasmettere agenti infettivi Poich amp spesso impossibile sapere quale campione potrebbe essere infettivo tutti i campioni di derivazione umana devono essere trattati adottando le precauzioni universali Le linee guida per la manipolazione dei campioni sono disponibili presso l Organizzazione Mondiale della Sanit OMS o gli U S Centers for Disease Control and Prevention Centri per il controllo e la prevenzione delle malattie 20 Tutti i materiali pericolosi devono essere smaltiti in conformit alle linee guida sulla sicurezza del proprio laboratorio Non sostituire i reagenti Xpert GBS con altri reagenti Per un determinato periodo di tempo la sodio azide pu reagire con rame piombo ottone o leghe per saldatura presenti negli impianti idraulici a formare un accumulo di composti altamente esplosivi di azide di piombo e azide di rame Il reagente di lavaggio contiene guanidina tiocianato che pu formare composti altamente reattivi se combinata con candeggina Se il liquido che contiene questo reagente viene versato pulire l area con acqua e detergente da laboratorio La mancata osservanza delle procedure e delle condizioni descritte in questo documento e l uso di reagenti diversi da quelli forniti in questo kit possono causare risultati non corretti e reazioni avverse Ad esempio non aggiungere pi del quantitativo richiesto di campion
53. eagenti Non scuotere la cartuccia Non caricare una cartuccia Xpert BCR ABL Monitor che caduta o stata scossa dopo aver inserito il campione e i reagenti Non caricare una cartuccia con una provetta di reazione danneggiata Non aprire le cartucce Xpert BCR ABL Monitor usate Smaltire le cartucce Xpert BCR ABL Monitor usate in conformit alle linee guida sulla sicurezza del proprio laboratorio Operazioni preliminari Prima di iniziare la procedura centrifugare brevemente i seguenti reagenti a 1000 g per 10 secondi Proteinasi K PK Reagente di lisi LY Reagente di risciacquo 2 Reagente di eluizione 3 Preparazione della cartuccia DR RU GON QUE Ri et Di A Rimuovere i reagenti per la preparazione dei campioni dal vassoio sigillato Aggiungere 40 pl di proteinasi K PK al flacone vuoto da 5 ml con etichetta Sample Container S Vaschetta portacampione S Aggiungere 200 pl di campione di sangue alla vaschetta portacampione S che contiene gi proteinasi K Vortexare per 5 secondi Incubare a temperatura ambiente per 1 minuto Aggiungere 1 ml di reagente di lisi LY alla vaschetta portacampione S Vortexare per 10 secondi Incubare a temperatura ambiente per 10 minuti Aggiungere 1 ml di etanolo al 100 alla vaschetta portacampione S 10 Vortexare per 10 secondi Mettere da parte 11 Rimuovere una cartuccia dal vassoio sigillato 60 300 4073 Rev B Febbraio 2006 Procedura 12 Aprire il c
54. ebnisse Im Lieferumfang aller Xpert BCR ABL Monitore ist ein Analysezertifikat enthalten das eine chargenspezifische Standardkurve f r den Xpert BCR ABL Monitor und einen Effizienzwert Ep ci enth lt Die Standardkurve ergibt AC Cy ABL C BCR ABL als eine Funktion der K562 RNA Konzentration auf dem Hintergrund normaler Vollblut RNA Der Effizienzwert Eyc wird wie folgt aus der Steigung der Standardkurve berechnet Exc 10 Steigung BCR ABL positive Tests F r ein positives Testergebnis wird das Prozentverh ltnis BCR ABL ABL anhand der folgenden Gleichung berechnet Der Exact Wert wird dem chargenspezifischen Analysezertifikat entnommen das im Lieferumfang des Untersuchungs Kits enthalten ist Der Test AC Wert wird entnommen dem Fenster View Results Ergebnisse anzeigen Zielspalte Delta Ct der GeneXpert Dx Systemsoftware figure 2 Prozentverh ltnis BCR ABL ABL Eyc ACH x 100 Beispiel Chargenspezifischer Ec 1 915 Test AC 2 9 Prozentverh ltnis BCR ABL ABL 1 915 C gt x 100 15 195 Ergebnis Positiv auf BCR ABL ermittelt bei einem Verh ltnis von 15 195 34 300 4073 Rev B Februar 2006 Interpretation der Ergebnisse Verwenden Sie den Wert f r Test AC Abbildung 2 Das Fenster GeneXpert Dx System View Results GeneXpert Dx System Ergebnisse anzeigen positives Ergebnis 300 4073 Rev B Februar 2006 35 Deutsch BCR ABL negative Tests Sollte BCR ABL nicht d
55. ec du citrate anticoagulant partir de donneurs normaux en bonne sant avec un ajout de diff rents volumes d ARN K562 r f rence Ambion n 7832 apr s la lyse des chantillons de sang Chaque site a regu un total de 80 chantillons compos s de lots de 20 chantillons de chacun des 4 niveaux Les chantillons ont t analys s au cours de 20 exp riences de quatre chantillons raison de quatre exp riences par jour pendant cing jours Quatre chantillons un chantillon issu de chaque niveau ont t inclus dans chaque exp rience Deux techniciens provenant de chaque site ont particip l tude chacun effectuant deux exp riences de quatre chantillons chacune par jour Le GeneXpert a d termin le niveau de BCR ABL de chaque chantillon La pr cision a t estim e en accord avec la directive CLSI pour l valuation des performances de la pr cision des appareils usage chimique en clinique 22 Table 1 Pr cision des tests BCR ABL ABL Site Echantillon N moy BCR ABL ABL D v Std 95 CI CV 1 BCR ABL n gatif 20 lt 0 000133 n gatif Er sa 2 BCR ABL n gatif 20 lt 0 000175 n gatif _ 3 BCR ABL n gatif 20 lt 0 000163 n gatif Total BCR ABL n gatif 60 lt 0 000157 n gatif 1 BCR ABL faible 20 0 00477 0 00477 0 00218 0 00737 100 0 2 BCR ABL faible 19 0 00285 0 00285 0 00125 0 00445 100 0 3 BCR ABL f
56. ect the p190 or other translocations that may be present in a peripheral blood sample from a patient with leukemia The Xpert BCR ABL Monitor should be run using EDTA or citrate anticoagulated whole blood Heparin is not suitable as an anticoagulant because it inhibits the PCR reaction Each single use Xpert BCR ABL Monitor cartridge is used to process one test Do not reuse spent cartridges 300 4073 Rev B February 2006 9 English Performance Characteristics Precision Precision was evaluated in a three site blinded comparative study using four specimens with varying concentrations of BCR ABL A total of 240 specimens were included in the study Study specimens consisted of four sample levels negative and one each of low moderate and high BCR ABL RNA levels These specimens were prepared using whole blood collected with citrate anticoagulant from normal healthy donors with different amounts of K562 RNA Ambion Catalog 7832 added after the blood specimens were lysed Each site received a total of 80 specimens consisting of 20 specimens from each of the four different levels The specimens were analyzed in a total of 20 runs of four specimens four runs per day for five days Four specimens one specimen from each level were included in each run Two technologists from each site participated in the study each performing two runs of four specimens each per day The GeneXpert determined the level of BCR ABL in each specimen P
57. endimiento Precision La precision se ha evaluado en un estudio comparativo enmascarado realizado en tres centros con cuatro muestras a diferentes concentraciones de BCR ABL En este estudio se incluy un total de 240 muestras Las muestras de este estudio incluyeron cuatro niveles Niveles negativo bajo medio y alto de ARN BCR ABL Estas muestras se prepararon con sangre completa recogida con citrato anticoagulante de donantes sanos con distintas cantidades de ARN K562 n de referencia 7832 de Ambion afiadidas tras la lisis de las muestras de sangre Cada centro recibi un total de 80 muestras 20 muestras de cada uno de los cuatro niveles Dichas muestras se analizaron en un total de 20 experimentos de los cuatro tipos de muestras cuatro experimentos al dia durante cinco dias En cada experimento se incluyeron cuatro muestras una de cada nivel Dos t cnicos de cada centro participante en el estudio realizaron dos experimentos con las cuatro muestras al dia GeneXpert determin el nivel de BCR ABL de cada muestra La precisi n se calcul de acuerdo con las directrices del CLSI para la evaluaci n del nivel de precisi n de los dispositivos de qu mica clinica 22 Table 1 Precision del ensayo Media porcentual Porcentaje de Centro Muestra N de BCR ABL ABL BCR ABL ABL Desv est 95 Cl CV 1 BCR ABL negativo 20 lt 0 000133 negativo 2 BCR ABL negativo 20 lt 0 000175 negati
58. ensayo Xpert BCR ABL Monitor en un plazo de 30 minutos tras su apertura Salvo en el caso del reactivo de lisis no utilice los reactivos si observa que est n turbios o se han decolorado Si el reactivo de lisis est turbio debe calentarlo a 56 C durante 5 minutos antes de usarlo Material necesario no suministrado Sistema GeneXpert Dx Agitador Microcentrifugadora 1000 g como m nimo Pipetas y puntas de pipeta con filtro de aerosol tama os recomendados 200 ul y 1000 ul Etanol al 100 Opcional Pipetas de transferencia Nota El n mero de referencia del sistema GeneXpert Dx var a seg n la configuraci n P ngase en contacto con Cepheid para consultar la configuraci n que desee y el n mero de referencia correspondiente Advertencias y precauciones amp Todas las muestras biol gicas se deben tratar como posibles agentes de transmisi n de infecciones Dado que es imposible determinar los posibles focos de infecci n todas las muestras de origen humano se deben tratar teniendo en cuenta las precauciones universales Las directrices para la manipulaci n de muestras se pueden consultar en la Organizaci n Mundial de la Salud o en los Centros para el Control y la Prevenci n de Enfermedades de EE UU 29 Todos los materiales peligrosos se deben desechar de acuerdo con las normas de seguridad del laboratorio No sustituya los reactivos Xpert GBS por ning n otro reactivo Durante un periodo de tiempo la azida s dica
59. ere il Manuale dell operatore del sistema GeneXpert Dx Limitazioni Le prestazioni di Xpert BCR ABL Monitor sono state validate con le procedure fornite esclusivamente in questo foglio illustrativo Le modifiche apportate a queste procedure possono alterare le prestazioni dell analisi e I risultati di Xpert BCR ABL Monitor devono essere interpretati contestualmente agli altri dati clinici e di laboratorio a disposizione del medico Xpert BCR ABL Monitor non rilever la p190 o altre traslocazioni che possono essere presenti in un campione di sangue periferico di un paziente affetto da leucemia Xpert BCR ABL Monitor deve essere eseguito utilizzando sangue intero anticoagulato con EDTA o citrato L eparina non adatta come anticoagulante poich inibisce la reazione della PCR s Ciascuna cartuccia Xpert BCR ABL Monitor monouso utilizzata per elaborare un analisi Non riutilizzare le cartucce usate 300 4073 Rev B Febbraio 2006 65 Italiano Caratteristiche sulle prestazioni Precisione La precisione stata valutata in uno studio comparativo condotto in cieco in tre laboratori con l utilizzo di quattro campioni con diverse concentrazioni di BCR ABL Nello studio sono stati inclusi complessivamente 240 campioni I campioni dello studio comprendevano quattro livelli di campioni livelli di RNA BCR ABL negativo basso moderato e alto Questi campioni sono stati preparati con sangue intero raccolto con anticoagulante citrat
60. etektierbar sein und die ABL Werte gr er als 12 aber kleiner als 18 mu zuerst das theoretische BCR ABL Verh ltnis berechnet werden bevor ein Ergebnis berichtet wird Daf r ist vom ABL CT Wert 32 abzuziehen Test ABL CT 32 Der ABL C Wert wird dem Fenster View Results Ergebnisse anzeigen Delta Ct der GeneXpert Dx Systemsoftware entnommen figure 3 Berechnen Sie das theoretische Prozentverh ltnis BCR ABL Melden Sie ein Ergebnis das unter dem theoretischen Prozentverh ltnis liegt d h dem Wert der ermittelt worden w re wenn ein richtiger BCR ABL C Wert von 32 gemessen worden w re Beispiel Chargenspezifischer E gc 1 915 Test ABL C 15 4 Theoretischer A C 15 4 32 16 6 Theoretisches Prozentverh ltnis BCR ABL ABL 1 915 16 6 x 100 0 0021 Ergebnis BCR ABL ist bei einer Nachweisgrenze von 0 0021 nicht nachweisbar Wenn BCR ABL nicht nachgewiesen wird verwenden Sie den ABL Wert falls zus tzliche Tests erforderlich sind Beispielsweise ist dann wenn der ABL C Wert gr er als 15 ist die Nachweisgrenze m glicherweise h her als 0 001 Wenn niedrige BCR ABL Werte vermutet werden wiederholen Sie den Test Sp te ABL C Werte f hren u U ebenfalls dazu dass der Test wiederholt werden muss Verwenden Sie den Wert f r den Test ABL C Test and Analytb Result Detail Errors History Assay Name Kpert BCR ABL Monitor Version 1 Test Result NE
61. ew Results Ver resultados columna Ct Uc del software del sistema GeneXpert Dx figure 3 Calcule la proporci n porcentual te rica de BCR ABL Indique un resultado menor que la proporci n porcentual te rica el valor que se observar a si se hubiera medido un valor de U de BCR ABL de 32 Ejemplo EAU espec fico de lote 1 915 U de ABL de prueba 15 4 AU te rico 15 4 32 16 6 Proporci n porcentual de BCR ABL ABL te rica 1 915 16 6 x 100 0 0021 Resultado BCR ABL no detectable con un limite de detecci n de 0 0021 Si no se detecta ning n valor de BCR ABL utilice el valor de ABL para determinar si es necesario realizar pruebas adicionales Por ejemplo si el valor de U de ABL es mayor que 15 el limite de detecci n puede ser mayor que 0 001 Si se sospecha que los niveles de BCR ABL son inferiores repita la prueba Los valores de U de ABL tard os pueden requerir la repetici n de la prueba Utilice el valor de U de ABL de prueba Test and Analyte Result Detail Errors History Assay Name Xpert BCR ABL Monitor Version 1 Test Result NEGATIVE MAI Analyte Ct EndPt Analyte Probe Target Name Result Check Delta Ct Result BCR ABL 0 0 1 0 NEG PASS ABLE 1154 4630 PASS PASS Legend vi 7 BCR ABL Primary 500 vi ABL Primary 3 400 8 300 S 200 100 Figura 3 Sistema Gene
62. ez pas les r actifs jusqu a leur utilisation Utilisez le test du dispositif BCR ABL Xpert dans les 30 minutes apr s ouverture A l exception du r actif de lyse n utilisez pas les r actifs qui sont devenus troubles ou d color s Si le r actif de lyse est trouble chauffez le 56 C pendant 5 minutes avant de l utiliser Mat riel requis mais non fourni Syst me Dx GeneXpert Vortex Microcentrifugeuse 1000 g minimum Pipettes et embouts avec filtres tailles sugg r es 200 pl et 1 000 pl Ethanol 100 Facultatif Pipettes de transfert Remarque La r f rence du systeme Dx GeneXpert varie en fonction de la configuration Contactez Cepheid pour la configuration souhait e et pour la r f rence correspondante Avertissements et pr cautions amp Tous les chantillons biologiques doivent tre trait s comme s ils taient susceptibles de transmettre des agents infectieux Tous les chantillons humains doivent tre trait s avec des pr cautions identiques car il est souvent impossible de savoir lequel peut tre infectieux L OMS Organisation Mondiale de la Sant ou U S Centers for Disease Control and Prevention Centres am ricains pour le contr le et la pr vention des maladies tiennent disposition des directives concernant la manipulation des chantillons Toutes les substances dangereuses doivent tre limin es conform ment aux directives de s curit de votre laboratoire Ne remplacez pa
63. ferico PBL di pazienti con leucemia mieloide cronica LMC Un aumento significativo del trascritto p210 deve essere confermato da un altro metodo per esempio dall analisi citogenetica standard in metafase di un campione di midollo osseo del paziente Riepilogo e spiegazione La leucemia mieloide cronica LMC rientra in un gruppo di malattie denominate disordini mieloproliferativi con 4600 nuovi casi diagnosticati e 850 decessi nel 2005 Oltre il 95 dei pazienti con LMC presenta il caratteristico cromosoma Philadelphia Ph1 che deriva da una traslocazione reciproca tra le braccia lunghe dei cromosomi 9 e 22 La traslocazione comporta il trasferimento del gene Abelson ABL situato sul cromosoma 9 nella regione BCR breakpoint cluster region del cromosoma 22 dando origine a un gene di fusione BCR ABL 4 Il gene di fusione produce una proteina p210 b2a2 e b3a2 una tirosina chinasi con attivita deregolata che svolge un ruolo chiave nello sviluppo della LMC Le linee guida attuali dell Europe Against Cancer e della National Comprehensive Cancer Network NCCN per la gestione dei pazienti con LMC richiedono l uso di saggi della PCR con retrotrascrizione RT PCR di trascrizione inversa RT PCR all esordio della malattia LMC in fase cronica nel monitoraggio della malattia residua minima e nell identificazione dei pazienti che possono essere a rischio elevato di recidiva 1 La RT PCR si rivelata un metodo accurato ed estremamente se
64. gi e accertarsi che la 9 definizione del saggio Xpert BCR ABL Monitor sia importata nel software Vedere le istruzioni fornite nel CD del saggio Se non si possiede il CD Xpert BCR ABL Monitor contattare l Assistenza tecnica Cepheid Nella finestra GeneXpert Dx System Sistema GeneXpert Dx fare clic su Create Test Crea analisi Verr visualizzata la finestra Create Test Crea analisi Eseguire la scansione del codice a barre della cartuccia Xpert BCR ABL Monitor Il software completa automaticamente i campi seguenti Select Assay Seleziona saggio Reagent Lot ID ID lotto reagenti ed Expiration Date Data di scadenza Selezionare il modulo dello strumento Nella casella Sample ID ID campione eseguire la scansione o digitare l ID del campione Accertarsi di digitare correttamente TTD del campione L ID del campione associato ai risultati dell analisi ed mostrato nella finestra View Results Visualizza risultati e in tutte le relazioni Fare clic su Start Test Avvia analisi Nella finestra di dialogo visualizzata digitare la password 10 Aprire lo sportello del modulo dello strumento con la spia verde lampeggiante e caricare la cartuccia Chiudere lo sportello Al termine dell analisi la spia del modulo dello strumento si spegne 11 Aprire lo sportello del modulo dello strumento e rimuovere la cartuccia Attenersi alle linee guida sulla sicurezza del proprio laboratorio per lo smaltimento della cartuccia 3
65. guale a 12 o deve essere minore o uguale a 32 con un valore del punto finale maggiore o uguale a 40 Se il valore BCR ABL C minore di 12 ripetere l analisi utilizzando 20 pl del campione originale Se il valore BCR ABL C maggiore di 32 i trascritti BCR ABL non vengono rilevati Risultati qualitativi ualsiasi valore BCR ABL C minore di 32 e che presenta un valore ABL C valido produce un rilevamento positivo per i trascritti t P t P P P BCR ABL L assenza di un valore BCR ABL C o di un valore BCR ABL maggiore di 32 insieme a un risultato ABL valido verr classificata non rilevabile per BCR ABL Risultati quantitativi Insieme ad ogni kit Xpert BCR ABL Monitor viene fornito un certificato di analisi che contiene una curva standard specifica per il lotto per Xpert BCR ABL Monitor e un valore di efficienza E ac La curva standard riporta AC Casi Ct BCR ABL come funzione della concentrazione di K562 RNA in un background di RNA di sangue intero normale Il valore di efficienza E Ace viene calcolato dalla pendenza della curva standard nel modo seguente E c 10 1 pendenza Analisi positive BCR ABL per un risultato positivo dell analisi la rapporto BCR ABL ABL viene calcolata con l equazione seguente Il valore E cy si ottiene dal certificato specifico per il lotto dell analisi che fornito con il kit del saggio Il valore AC Analisi si ottiene dalla finestra View Results Visualizza risultati colonna Ta
66. he blinking green light and load the cartridge Close the door When the test is finished 11 the instrument module light turns off Open the instrument module door and remove the cartridge Follow your laboratory safety guidelines for discarding the cartridge Viewing and Printing Results For detailed instructions on how to view and print the results see the GeneXpert Dx System Operator Manual 300 4073 Rev B February 2006 5 English Quality Control Each test contains an Endogenous Control ABL and a Probe Check Control No external controls are required However for additional quality control two external controls can be tested once per month Endogenous Control Normalizes targets and ensures sufficient sample is used in the test Because of its low variability the endogenous control can also be used to indicate sample inhibitor contamination The endogenous control is taken from the specimen sample Probe Check Verifies the presence and the integrity of the labeled probes A probe check status of Pass indicates that the probe check results meet the acceptance criteria Interpretation of Results Valid ABL C e ABL C must be greater than or equal to 12 and less than or equal to 18 with an endpoint value greater than or equal to 200 Ifthe ABL C value is less than 12 the endpoint is less than 200 or the PCR curve is misshaped repeat the test using 20 pl of the original specimen Ifthe ABL C value is
67. he test within 15 minutes of preparing the cartridge 1 Wash Reagent 2 Rinse Reagent 3 Elution Reagent S Sample Figure 1 Xpert BCR ABL Monitor cartridge chambers Running the Test This section lists the basic steps of running the test For detailed instructions see the GeneXpert Dx System Operator Manual 1 2 3 4 Turn on the computer and then turn on the GeneXpert Dx instrument On the Windows desktop double click the GeneXpert Dx shortcut icon Log on to the GeneXpert Dx System software using your user name and password Inthe GeneXpert Dx System window click Define Assays and make sure the Xpert BCR ABL Monitor assay definition is imported into the software See the instructions provided with the assay CD If you do not have the Xpert BCR ABL Monitor CD contact Cepheid Technical Support 5 Inthe GeneXpert Dx System window click Create Test The Create Test window appears 9 Scan the Xpert BCR ABL Monitor cartridge bar code The software automatically fills in the following fields Select Assay Reagent Lot ID and Expiration Date Select the instrument module In the Sample ID box scan or type the sample ID Make sure you type the correct sample ID The sample ID is associated with the test results and is shown in the View Results window and all the reports Click Start Test In the dialog box that appears type your password 10 Open the instrument module door with t
68. heren Blutprobe eines Patienten mit Leuk mie vorhanden sein k nnten Der Xpert BCR ABL Monitor sollte mit EDTA oder mit Citrat antikoaguliertem Vollblut verwendet werden Heparin eignet sich nicht als Antikoagulanz da es die PCR Reaktion hemmt Jede Xpert BCR ABL Monitor Einwegkassette dient zur Durchf hrung eines einzigen Tests Gebrauchte Kassetten nicht erneut verwenden 300 4073 Rev B Februar 2006 37 Deutsch Leistungsmerkmale Genauigkeit Die Genauigkeit wurde in drei Einrichtungen anhand einer einfachblinden Vergleichsstudie von vier Proben mit unterschiedlichen Konzentrationen an BCR ABL gepr ft Es wurden insgesamt 240 Proben f r die Studie verwendet Die untersuchten Proben umfassten vier Probenlevel eine negative und jeweils eine auf niedrigem m igem und hohem BCR ABL RNA Level Diese Proben wurden mit Vollblut vorbereitet und von gesunden Spendern mit Citrat antikoaguliertem Blut entnommen Es wurden unterschiedliche Mengen an K562 RNA hinzugef gt Ambion Katalog Nr 7832 nachdem alle Blutproben lysiert waren Jede Einrichtung erhielt insgesamt 80 Proben die aus 20 Proben von vier verschiedenen Leveln bestanden Diese Proben wurden in insgesamt 20 L ufen mit jeweils vier Proben und t glich vier L ufen ber f nf Tage analysiert Es wurden vier Proben jeweils eine Probe von jedem Level pro Lauf verwendet Zwei Technologen jeder Einrichtung nahmen an der Studie teil wobei jeder t glich zwei Durchl
69. hrt Qualit tskontrollen durch um sicherzustellen dass die Probenzubereitung erfolgreich war und 8 f hrt eine Echtzeit RT PCR durch gefolgt von einer verschachtelten PCR Das Testverfahren auf BCR ABL dauert ungef hr 2 Stunden und 20 Minuten 300 4073 Rev B Februar 2006 29 Deutsch Reagenzien und Instrumente Im Lieferumfang enthaltenes Material VW Das Xpert BCR ABL Monitor Kit BCR 100N 10 enth lt Reagenzien zur Verarbeitung von 10 Patienten oder Qualit tskontrollproben Das Kit enth lt 10 individuelle Untersuchungspackungen Jede Untersuchungspackung enth lt folgendes 30 Xpert BCR ABL Monitorkartusche Primer vorw rts und r ckw rts Sonden dNTPs Reverse Transkriptase Tag Polymerase Tris HCl pH 8 6 HEPES pH 7 2 KCl MgCl BSA Bovine Serum Albumin Blutproben Pr parationsreagenzien Probenbeh lter S Proteinase K PK 50 pl CaCl Glyzerin Proteinase K Tris HCl pH 7 5 Lysereagenz LY 1 8 ml CaCl Guanidin HCl EDTA SDS Tris HCl pH 6 4 Tween 20 Harnstoff Waschreagenz 1 3 3 ml Ethanol Guanidin Thiocyanat Tris HCl pH 7 0 Sp lreagenz 2 1 8 ml Cysteamin HCl EDTA KCl Monothioglyzerin MTG PEG Natriumazid Tris pH 7 0 Tween 20 Wasser Elutionsreagenz 3 1 8 ml DEPC behandeltes Wasser Natriumazid 300 4073 Rev B Februar 2006 Warnungen und Vorsichtshinweise Hinweis F r a
70. iagnostic in vitro Nom d pos Xpert BCR ABL Monitor Nom d usage dispositif BCR ABL Xpert Utilisation pr vue Le dispositif BCR ABL Xpert qui d tecte la translocation chromosomique BCR ABL est un test PCR de transcription inverse en temps r el RT PCR destin aider la surveillance de la transcription p210 b2a2 et b3a2 dans les lymphocytes du sang p riph rique LSP des patients atteints de leuc mie my loide chronique LMC Une augmentation significative de la transcription p210 doit tre confirm e par une autre m thode comme une analyse cytog n tique standard de la m taphase d un chantillon de moelle osseuse du patient R sum et explication La leuc mie my loide chronique LMC fait partie d un groupe d affections appel es syndromes my loprolif ratifs pres de 4 600 nouveaux cas ont t diagnostiqu s en 2005 et le nombre de d c s s est lev 850 cette m me ann e Plus de 95 des patients atteints de LMC possedent le chromosome distinctif Philadelphia Ph1 qui provient de la translocation r ciproque entre les bras longs des chromosomes 9 et 22 La translocation occasionne le transfert du g ne Abelson ABL du chromosome 9 vers la r gion BCR breakpoint cluster region du chromosome 22 aboutissant 4 un g ne de fusion BCR ABL 4 Le g ne de fusion produit une prot ine p210 b2a2 et b3a2 une tyrosine kinase dont l activit d r gl e joue un r le cl dans le d veloppement
71. ico Uni n Europea Para acceder al servicio t cnico utilice los siguientes datos de contacto Tel 33 563 82 53 19 Correo electr nico techsupport cepheideurope fr Otras oficinas P ngase en contacto con su representante local de Cepheid Tabla de s mbolos a 3 o CE o Significado N mero de referencia Dispositivo m dico de diagn stico in vitro No reutilizar Fabricante Contiene suficiente cantidad para lt n gt pruebas Control Representante autorizado en la Uni n Europea L mite de temperatura EE lt E EE ww Riesgo bioldgico 300 4073 Rev B febrero de 2006 55 Espanol tel Fabricante Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 Tel fono 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Representante autorizado Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Francia Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Correo electr nico cepheid cepheideurope fr C vo Febrero de 2006 56 300 4073 Rev B febrero de 2006 Italiano Dispositivo medico per diagnostica in vitro Nome registrato Xpert BCR ABL Monitor Nome comune o usuale Xpert BCR ABL Monitor Uso previsto Xpert BCR ABL Monitor che rileva la traslocazione cromosomica BCR ABL un saggio di PCR real time con retrotrascrizione RRT PCR da utilizzarsi come strumento nel monitoraggio del trascritto p210 b2a2 e b3a2 nei linfociti del sangue peri
72. if BCR ABL Xpert la cartouche est charg e l int rieur de l appareil et les informations relatives au test sont transmises au logiciel du syst me Au cours du processus de test le syst me Dx GeneXpert 1 d place l chantillon et les r actifs dans diff rentes chambres de la cartouche 2 isole PARN complet partir de sang total en liant PARN au mat riau de la phase solide 3 nettoie et d barrasse des inhibiteurs 4 lue PARN 5 hydrate les billes de r actifs et associe le m lange de PARN lu 6 d place le m lange de l chantillon et du r actif dans le tube de r action 7 r alise des contr les qualit afin de garantir que la pr paration de l chantillon est r ussie et 8 proc de des RT PCR suivies par des PCR emboit es en temps r el Le processus du test pour BCR ABL dure approximativement 2 heures et 20 minutes 300 4073 Rev B F vrier 2006 15 Frangais R actifs et appareils Mat riel fourni Y Le kit du dispositif BCR ABL Xpert BCR 100N 10 contient suffisamment de r actifs pour traiter les chantillons de 10 patients ou contr les qualit Le kit contient 10 tests individuels Chaque test contient ce qui suit Cartouche du dispositif BCR ABL Xpert Amorces avant et inverse Sondes dNTPs Transcriptase inverse Polym rase Taq Tris HCl pH 8 6 HEPES pH 7 2 KCl MgCl SAB s rum albumine bovin R actifs de pr paration des chantillons de sang Cuve pour chant
73. illon S Prot inase K PK 50 pl CaCl Glyc rol Prot inase K Tris HCl pH 7 5 R actif de lyse LY 1 8 ml CaCl Guanidine HCl EDTA SDS Tris HCl pH 6 4 Tween 20 Ur e R actif de lavage 1 3 3 ml Ethanol Guanidine thiocyanate Tris HCl pH 7 0 R actif de rincage 2 1 8 ml Cyst amine HCl EDTA KCl Monothioglycerol MTG PEG Azoture de sodium Tris pH 7 0 Tween 20 Eau R actif d elution 3 1 8 ml Eau trait e DEPC Azoture de sodium 300 4073 Rev B F vrier 2006 Avertissements et pr cautions Remarque Les fiches techniques de donn es de s curit Material Safety Data Sheets MSDS de tous les r actifs fournis dans ce test sont disponibles sur demande aupr s de l Assistance technique de Cepheid Le s rum albumine bovin SAB de ce produit a t extrait exclusivement partir de plasma bovin provenant des Etats Unis La fabrication du SAB est galement r alis e aux Etats Unis Les aliments des animaux ne contenaient pas de prot ine de ruminant ou d autre prot ine animale les animaux ont subi des tests ante et post mortem Au cours du processus aucun m lange ne s est produit avec d autres mati res animales Stockage et manipulation DE Stockez le contenu du kit du dispositif BCR ABL Xpert entre 2 et 8 C N utilisez pas les r actifs ou les cartouches dont la date d expiration est d pass e N ouvr
74. in questo saggio sono disponibili su richiesta all Assistenza tecnica Cepheid La sieroalbumina bovina BSA presente in questo prodotto stata prodotta esclusivamente da plasma bovino proveniente dagli Stati Uniti Anche la produzione della BSA viene eseguita negli Stati Uniti Gli animali non sono stati nutriti con proteine bovine o altre proteine animali gli animali hanno superato i test ante mortem e post mortem Durante l elaborazione il materiale non stato miscelato con altro materiale animale Conservazione e manipolazione 24 Conservare il contenuto del kit Xpert BCR ABL Monitor kit a 2 8 C Non utilizzare reagenti o cartucce oltre la data di scadenza Non aprire i reagenti finch non sono pronti per l uso Utilizzare il saggio Xpert BCR ABL Monitor entro 30 minuti dall apertura della confezione Ad eccezione del reagente di lisi non utilizzare reagenti diventati torbidi o scoloriti Se il reagente di lisi torbido riscaldarlo a 56 C per 5 minuti prima dell uso Materiali necessari ma non forniti Sistema GeneXpert Dx Vortex Microcentrifuga minimo 1000 g Pipette e puntali per pipette con filtro resistente all aerosol dimensioni suggerite 200 pl e 1000 ul Etanolo al 100 Facoltativo Pipette di trasferimento Nota il numero di catalogo del sistema GeneXpert Dx varia in base alla configurazione Per la configurazione desiderata e il numero di catologo corrispondente contattare Cepheid Avvertenze
75. ion gene transcripts for residual disease detection in leukemia A Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 1 40 7 Sawyers C Chronic Myeloid Leukemia NEJM 1999 340 17 1330 40 8 Deininger MW Goldman JM Melo JV The molecular biology of chronic myeloid leukemia Blood 2000 96 10 3343 56 Goldman JM Kaeda JS Cross NC Clinical decision making in chronic myeloid leukemia based on polymerase chain reaction analysis of minimal residual disease Blood 1999 94 4 1484 6 10 Radich JP The detection and significance of minimal residual disease in chronic myeloid leukemia Medicina B Aires 2000 60 Suppl 2 66 70 11 Hochhaus A Reiter A Skladny H et al Molecular monitoring of residual disease in chronic myelogenous leukemia patients after therapy Recent Results Cancer Res 1998 144 36 45 12 Hochhaus A Reiter A Saussele S et al Molecular heterogeneity in complete cytogenetic responders after interferon alpha thera gt gt Ss y P ytog P P Py for chronic myelogenous leukemia low levels of minimal residual disease are associated with continuing remission German CML Study Group and the UK MRC CML Study Group Blood 2000 95 1 62 6 13 Radich JP Gehly G Gooley T et al Polymerase chain reaction detection of the BCR ABL fusion transcript after allogeneic marrow transplantation for chronic myeloid leukemia results and implications in 346 patients Blood 1995 85 9 2632 8 14 Olavarria E Kanfer E Szydlo R et al Early detec
76. ise et int gre la purification d chantillons l amplification d acide nucl ique et la d tection de la s quence cible dans des chantillons simples ou complexes en utilisant la RT PCR en temps r el Le syst me est compos d un appareil d un ordinateur personnel et d un logiciel pr install pour effectuer des tests sur des sp cimens collect s et afficher les r sultats Le syst me requiert l utilisation de cartouches jetables et usage unique GeneXpert r ceptacles qui contiennent les r actifs PCR et abritent la proc dure de PCR Les probl mes de contamination crois e sont exclus car les cartouches sont ind pendantes Pour obtenir une description complete du syst me consultez le Manuel d utilisation du systeme DX GeneXpert Utilis avec le syst me Dx GeneXpert le dispositif BCR ABL Xpert est con u pour d tecter la transcription de la translocation BCR ABL et la s quence du contr le endog ne ABL dans des chantillons de sang p riph rique 15 18 En particulier les amorces et la sonde BCR ABL sont con ues pour d tecter la translocation de la rupture BCR ABL p210 b2a2 et b3a2 les amorces et la sonde ABL sont quant elles con ues pour la d tection de la s quence ABL Aucune amorce ou sonde ABL ne chevauche le site d une mutation de kinase ABL signal e jusqu pr sent Pour effectuer un test l chantillon et les trois r actifs sont transf r s dans les chambres d sign es de la cartouche du disposit
77. itro Denominaci n com n Xpert BCR ABL Monitor Nombre com n o de uso frecuente Xpert BCR ABL Monitor Uso previsto Xpert BCR ABL Monitor que detecta la translocaci n cromos mica de BCR ABL es un ensayo de RCP de transcripci n inversa en tiempo real TI RCP utilizado como complemento en el proceso de control de la transcripci n de p210 b2a2 y b3a2 en los linfocitos de la sangre perif rica PBL de paciente con leucemia miel gena cr nica LMC Para confirmar un aumento considerable de la transcripci n de p210 es necesario utilizar otro m todo como por ejemplo el an lisis citogen tico de metafase est ndar de una muestra de m dula sea del paciente Resumen y explicaci n La leucemia miel gena cr nica LMC forma parte de un grupo de enfermedades denominado trastornos mieloproliferativos con un total de 4600 casos nuevos diagnosticados y 850 fallecimientos en el a o 2005 En m s del 95 de los pacientes con LMC se observa un cromosoma Filadelfia Ph1 resultante de una translocaci n reciproca entre los brazos largos de los cromosomas 9 y 22 Esta translocaci n implica la transferencia del gen Abelson ABL del cromosoma 9 a la regi n del grupo de puntos de ruptura BCR del cromosoma 22 lo que tiene como resultado un gen BCR ABL fusionado 4 El gen de fusi n genera una proteina p210 b2a2 y b3a2 que es una tirosinasa con una actividad desregulada con un papel clave en el desarrollo de la LMC En las
78. lisez pas la cartouche 300 4073 Rev B F vrier 2006 17 Frangais Collecte d chantillons et transport Collectez des chantillons de sang p riph rique conform ment aux techniques standard de RT PCR de chaque institution Collectez des chantillons de sang dans des tubes contenant de EDTA ou du citrate de sodium en guise d anticoagulant Stockez les chantillons de sang entre 2 et 8 C et testez les dans les 48 heures suivant leur collecte N utilisez pas d h parine en guise d anticoagulant car cela peut inhiber la r action PCR Proc dure Pr cautions Respectez les proc dures de s curit de votre laboratoire pour la manipulation de produits chimiques et d chantillons Affectez un jeu de pipettes et de r actifs exclusivement 4 la pr paration d chantillons S parez les cartouches usag es des cartouches et des r actifs non utilis s Ne pas ouvrir le couvercle de la cartouche du dispositif BCR ABL Xpert sauf pour ajouter un chantillon et des r actifs Ne secouez pas la cartouche Ne chargez pas une cartouche du dispositif BCR ABL Xpert qui est tomb e ou qui a t secou e apr s avoir ins r l chantillon et les r actifs Ne chargez pas une cartouche dont le tube de r action est endommag N ouvrez pas les cartouches usag es du dispositif BCR ABL Xpert Eliminez les cartouches usag es du dispositif BCR ABL Xpert conform ment aux directives de s curit de votre laboratoire Avant de com
79. lle Reagenzien dieser Untersuchung sind ber den Technischen Support Sicherheitsdatenblatter erh ltlich Das BSA Bovine Serum Albumin in diesem Produkt wurde ausschlie lich aus bovinem Plasma hergestellt das aus den USA stammt Auch die Herstellung des BSA erfolgte in den USA Die Tiere erhielten keinerlei Wiederk uer oder anderes Tierprotein mit dem Futter und wurden ante und post mortem Tests unterzogen Bei der Verarbeitung wurde das Material nicht mit anderen Tiermaterialien vermischt Lagerung und Handhabung DE Den Inhalt des Xpert BCR ABL Monitor Kits bei 2 8 C lagern Reagenzien und Kartuschen die das Verfallsdatum berschritten haben d rfen nicht verwendet werden Die Reagenzien erst ffnen wenn sie verwendet werden Die Xpert BCR ABL Monitor Untersuchungspackung innerhalb von 30 Minuten nach ffnen verwenden Mit Ausnahme des Lysereagenz keine Reagenzien verwenden die tr be oder farblos geworden sind Wenn das Lysereagenz tr be ist vor Verwendung 5 Minuten bei 56 C erw rmen Materialien die nicht im Lieferumfang enthalten sind GeneXpert Dx System Vortexer Mikrozentrifuge mindestens 1000 g Pipetten und Aerosolfilter Pipettenspitzen empfohlene Gr en 200 ul and 1000 pl 100 Ethanol Optionale Transferpipetten Hinweis Die Katalognummer des GeneXpert Dx Systems h ngt von der Konfiguration ab Setzen Sie sich mit Cepheid in Verbindung um die gew nschte Konfiguration und entsprechende Katalognu
80. lor de rendimiento E Aue se calcula a partir de la pendiente de la curva est ndar del modo siguiente Eye 10 pendiente Pruebas positivas de CR ABL para obtener un resultado de prueba positivo la proporci n porcentual de BCR ABL ABL se calcula mediante la siguiente ecuaci n El valor de E y se obtiene del certificado de an lisis espec fico del lote que se suministra con el kit de ensayo El valor de AU de prueba se obtiene de la ventana View Results Ver resultados columna Target Delta Ct Uc delta objetivo del software del sistema GeneXpert Dx figure 2 Proporci n porcentual de BCR ABL ABL Eau AUS x 100 Ejemplo Enuc espec fico de lote 1 915 AU de prueba 2 9 Proporci n porcentual de BCR ABL ABL 1 915 2 x 100 15 195 Resultado positivo para BCR ABL detectado en una proporci n del 15 195 48 300 4073 Rev B febrero de 2006 Interpretaci n de los resultados Utilice el valor para AU de prueba Figura 2 Sistema GeneXpert Dx ventana View Results Ver resultados resultado positivo 300 4073 Rev B febrero de 2006 49 Espanol Pruebas negativas de BCR ABL para los valores de ABL mayores que 12 y menores que 18 si el valor de BCR ABL no es detectable debe calcular primero una proporci n de BCR ABL te rica antes de comunicar los resultados Para ello reste 32 del valor de U de ABL de prueba Ut de ABL de prueba 32 El valor de U de ABL se obtiene de la ventana Vi
81. mencer Avant de commencer la proc dure centrifugez brievement les r actifs suivants 4 1000 g pendant 10 secondes Prot inase K PK R actif de lyse LY R actif de rincage 2 Reactif d elution 3 Preparation de la cartouche E A ai COIN 3 Otez les r actifs de pr paration des chantillons du plateau scelle Ajoutez 40 pl de prot inase K PK a la cuve chantillon marqu e S vide Ajoutez 200 ul d chantillon de sang la cuve chantillon marqu e S qui contient d j la prot inase K Vortexez pendant 5 secondes Incubez a la temp rature de la piece pendant 1 minute Ajoutez 1 ml du r actif de lyse LY la cuve chantillon marqu e S Vortexez pendant 10 secondes Incubez a la temp rature de la pi ce pendant 10 minutes Ajoutez 1 ml d ethanol 100 a la cuve chantillon marqu e S 10 Vortexez pendant 10 secondes Mettez de c t 11 Otez une cartouche du plateau scelle 300 4073 Rev B F vrier 2006 Proc dure 12 Ouvrez le couvercle de la cartouche et transf rez le contenu des tubes de r actifs et de la cuve Echantillon vers les chambres de la cartouche comme suit figure 1 S pipettez le contenu entier de la cuve chantillon marqu e S 1 pipettez au moins 2 1 ml du contenu du tube de r actif de lavage 1 2 pipettez au moins 1 ml du contenu du tube de r actif de rin age 2 3 pipettez au moins 1 ml du contenu du tube de r actif d lution 3
82. mmer zu erfahren Warnungen und Vorsichtshinweise amp Alle biologischen Proben sind als infekti s zu behandeln Da es oft unm glich ist zu bestimmen welche Probe infekti s ist sollten alle Proben vom Menschen mit den blichen Sorgfaltsma nahmen behandelt werden Richtlinien zur Handhabung von Proben sind erh ltlich bei der WHO oder bei der CDC Center of Disease Control 20 Entsorgen Sie alle gef hrlichen Materialien gem der Sicherheitsrichtlinien Ihres Labors Ersetzen Sie Xpert GBS Reagenzien nicht durch andere Reagenzien ber eine l ngere Zeitdauer kann Natriumazid mit Kupfer Blei Messing oder Lotmetall aus Rohrleitungen reagieren und sich als hochexplosiver Bestandteil von Blei und Kupferazid ansammeln 21 Das Waschreagenz enth lt Guanidin Thiocyanat welches hochreaktive Komponenten bilden kann wenn es mit Bleichmittel vermischt wird Sollten Fl ssigkeiten versch ttet werden die dieses Reagenz enthalten reinigen Sie den Bereich mit Laborreinigungsmitteln und Wasser Nichtbeachtung der in diesem Dokument beschriebenen Verfahrensweisen und Bedingungen sowie die Verwendung von anderen Reagenzien die nicht im Kit enthalten sind kann zu falschen Ergebnissen f hren und negative Folgen haben Beispielsweise sollten Sie nicht mehr Proben und Reagenzien hinzuf gen als erforderlich Eine berh hte Zahl an wei en Blutzellen kann zu einem Druckaufbau in der Kartusche und zum Abbruch von L ufen f hren Nach Hinz
83. mpioni di sangue normali con citrato e EDTA provenienti da quattro laboratori Tutti i campioni normali erano negativi per BCR ABL e hanno prodotto una specificit del 100 La specificit del saggio stata analizzata anche presso tre laboratori utilizzando una raccolta di 12 campioni di sangue di pazienti con altri disordini ematologico inclusi leucemia mieloide acuta linfoma di Hodgkin mieloma multiplo e linfoma follicolare Tutti questi campioni erano negativi per BCR ABL e hanno prodotto una specificit del 100 Limite di rilevamento e linearit La Figure 4 mostra i dati del limite di rilevamento e della linearit generati da una singola corsa di 44 cartucce La procedura descritta in questo foglio illustrativo stata utilizzata con le seguenti eccezioni una serie di diluizioni di Leukemia K562 Total RNA di Ambion numero di catalogo 7832 stata aggiunta a sangue normale anticoagulato con citrato dopo aver aggiunto etanolo alla vaschetta portacampione Sono state eseguite quattro repliche per ogni concentrazione di RNA con le seguenti eccezioni sono state eseguite sei repliche per campioni da 30 pg e 10 pg Limit of Detection and Linearity Average Delta Ct Selected Data Excluded from Curve 10 Ave Delta Ct Excluded Data Ave Delta Ct 3 0 Linear Ave Delta Ct Non appena l analisi introduce pi ABL lt AG si avvicina a O e 57 3 1
84. nol was added to the Sample Container Four replicates were run for each RNA concentration with the following exceptions six replicates were run for 30 pg and 10 pg samples Limit of Detection and Linearity Average Delta Ct Selected Data Excluded from Curve 10 Ave Delta Ct Excluded Data 54 AveDelta ct Linear Ave Delta Ct A 3 of ml 1 As the test introduces more ABL Pd ACt approaches o E 34 10 5 2 15 4 K562 RNA K562 Cells Dropouts opg Approx 2 0 6 30pg Approx 1 1 6 25 r r r i 10 pg lt 1 3 6 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Log K562 RNA pg Figure 4 Limit of detection and linearity data 300 4073 Rev B February 2006 n English References TJemal A Murray T Ward E et al Cancer Statistics 2005 CA Cancer J Clin 2005 55 10 30 a Rowley JD A new consistent chromosomal abnormality in chronic myelogenous leukemia identified by quinacrine fluorescence and Giemsa staining Nature 1973 243 290 293 3 NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology Chronic Myelogenous Leukemia Version 1 2006 ij Deininger M Buchdunger E Druker BJ The development of imatinib as a therapeutic agent for chronic myeloid leukemia Blood 2005 105 7 2640 2653 3 Kantarjian HM Talpaz M Cortes J et al Quantitative polymerase chain reaction monitoring of BCR ABL during therapy with imatinib mesylate STI571 Gleeve
85. nsibile per il rilevamento del gene di fusione BCR ABL 4 ed pi sensibile della FISH Fluorescence In Situ Hybridization ibridazione in situ fluorescente o della citogenetica Un ulteriore vantaggio della PCR quantitativa rispetto alla FISH e alla citogenetica la correlazione elevata di risultati PCR ottenuti da campioni di midollo osseo e di sangue periferico gt u Perci la PCR potrebbe potenzialmente ridurre le aspirazioni del midollo osseo attualmente necessarie nei pazienti con LMC La PCR quantitativa diventer probabilmente la tecnica standard per il monitoraggio della malattia residua anche se il metodo attualmente non ampiamente disponibile a causa della variazione delle tecniche e dei controlli nonch della mancanza di saggi disponibili in commercio 3 Principio della procedura Il sistema GeneXpert Dx consente di automatizzare e integrare la purificazione dei campioni l amplificazione degli acidi nucleici e il rilevamento della sequenza bersaglio in campioni semplici e complessi utilizzando la RRT PCR real time Il sistema composto da uno strumento un personal computer e dal software gi installato per l esecuzione di analisi su campioni raccolti e per la visualizzazione dei risultati Il sistema richiede l uso di cartucce GeneXpert Dx monouso nelle cartucce sono contenuti i reagenti per la PCR e sempre nella cartuccia avviene la reazione di PCR Poich le cartucce sono indipendenti non sussiste alcun rischio di
86. nten mit CML im chronischen Stadium bei Kontrolluntersuchungen auf minimale Resterkrankung und bei der Bestimmung von Patienten bei denen ein hohes R ckfallrisiko bestehen k nnte 15 RT PCR ist erwiesenerma en ein pr zises und hochempfindliches Verfahren zum Nachweis des BCR ABL Fusionsgens 14 und empfindlicher als FISH Fluoreszenz In Situ Hybridisierung oder Zytogenetik Ein weiterer Vorteil der quantitativen PCR gegentiber FISH und Zytogenetik ist die hohe Korrelation der PCR Ergebnisse aus Knochenmark und peripheren Blutproben 15 Mit dem PCR Verfahren k nnte m glicherweise die Zahl der Knochenmarkaspirationen verringert werden welche bei Patienten mit CML erforderlich sind Obgleich das quantitative PCR Verfahren aller Voraussicht nach standardm ig zur Kontrolle von minimalen Resterkrankungen eingesetzt werden wird ist es aufgrund unterschiedlicher Techniken und Kontrollen sowie kommerziell nicht erh ltlicher Untersuchungen derzeit nicht fl chendeckend verf gbar Prinzipien der Prozedur Das GeneXpert Dx System automatisiert und integriert die Probenvorbereitung die Amplifizierung von Nukleins uren und die Detektion der Zielsequenz in einfachen und komplexen Proben mittels Echtzeit RT PCR Das System besteht aus einem Instrument und einem PC mit vorinstallierter Software die zur Ausf hrung von Tests an gesammelten Proben und zur Anzeige der Ergebnisse dient Es ist die Verwendung von GeneXpert Einwegkartuschen erforderlich
87. ntiene quantita sufficiente per lt n gt analisi Controllo Rappresentante autorizzato nella Comunit europea Limitazione della temperatura EE lt E EE ww Rischio biologico 300 4073 Rev B Febbraio 2006 69 Italiano tel Produttore Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 Telefono 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Rappresentante autorizzato Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Francia Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 E mail cepheid cepheideurope fr C vo Febbraio 2006 70 300 4073 Rev B Febbraio 2006
88. o da donatori sani normali con quantitativi diversi di K562 RNA Catalogo Ambion Nr 7832 aggiunti ai campioni di sangue lisati Ciascun laboratorio ha ricevuto complessivamente 80 campioni che comprendevano 20 campioni provenienti da ciascuno dei quattro diversi livelli I campioni sono stati analizzati in 20 corse di quattro campioni quattro corse al giorno per cinque giorni Quattro campioni un campione di ogni livello sono stati inclusi in ciascuna corsa Allo studio hanno partecipato due tecnici di ogni laboratorio ognuno ha eseguito due corse di quattro campioni ogni giorno GeneXpert ha determinato il livello di BCR ABL in ogni campione La precisione stata stimata in conformit alle linee guida del CLSI per la valutazione della precisione dei dispositivi di chimica clinica 22 Table 1 Precisione del saggio BCR ABL ABL Sito Campione N Media BCR ABL ABL dev std 95 Cl CV 1 BCR ABL negativo 20 lt 0 000133 negativo z _ 2 BCR ABL negativo 20 lt 0 000175 negativo 3 BCR ABL negativo 20 lt 0 000163 negativo u Complessivi BCR ABL negativo 60 lt 0 000157 negativo 1 BCR ABL basso 20 0 00477 0 00477 0 00218 0 00737 100 0 2 BCR ABL basso 19 0 00285 0 00285 0 00125 0 00445 100 0 3 BCR ABL basso 20 0 00528 0 00528 0 00241 0 00815 100 0 Complessivi BCR ABL basso 59 0 00430 0 00524 0 00273 0 00587 121 8 1 BCR
89. ocedures for HAEMATOLOGY from http w3 whosea org EN Section10 Section17 Section53 htm 20 U S Centers for Disease Control Morbidity and Mortality Weekly Review 1987 36 suppl 2S 2S 18S 21 NIOSH Publication No 2005 151 NIOSH Pocket Guide to Chemical Hazards September 2005 22 CLSI Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices Approved Guideline CLSI document EP5 A ISBN 1 56238 368 X CLSI 940 West Valley Road Suite 1400 Wayne PA 19087 1898 USA 1999 54 300 4073 Rev B febrero de 2006 Aviso de la patente al comprador Aviso de la patente al comprador La compra de este producto permite al comprador utilizar este sistema para el funcionamiento de servicios de diagn stico para diagnosticos in vitro en seres humanos Mediante este documento no se establece ninguna patente general ni se concede ninguna licencia distintas al derecho de uso especifico que se deriva de la compra Asistencia Si desea obtener asistencia puede ponerse en contacto con Cepheid mediante los siguientes datos de contacto No olvide facilitar el n mero de serie del instrumento y el Id del lote de reactivos si realiza una llamada o env a un correo electr nico Estados Unidos Para acceder al servicio t cnico utilice los siguientes datos de contacto Tel 1 888 838 3222 Correo electr nico techsupport cepheid com Puede ponerse en contacto con Cepheid por tel fono de lunes a viernes y de 6 a m a 5 p m hora del Pac f
90. on of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices Approved Guideline CLSI document EP5 A ISBN 1 56238 368 X CLSI 940 West Valley Road Suite 1400 Wayne PA 19087 1898 USA 1999 68 300 4073 Rev B Febbraio 2006 Avviso di brevetto all acquirente Avviso di brevetto all acquirente L acquisto di questo prodotto consente all acquirente di utilizzarlo per le prestazioni dei servizi diagnostici per la diagnostica umana in vitro Con la presente non concesso alcun brevetto generale o altra licenza di alcun tipo al di fuori di questo specifico diritto di utilizzo dall acquisto Assistenza Per ricevere assistenza contattare Cepheid a uno dei seguenti recapiti Quando si contatta l Assistenza tramite telefono o posta elettronica accertarsi di fornire il numero di serie dello strumento e ID del lotto reagenti Nord America Per l assistenza tecnica utilizzare i seguenti recapiti Tel 1 888 838 3222 E mail techsupport cepheid com possibile contattare telefonicamente l Assistenza tecnica Cepheid dal luned al venerd dalle 6 alle 17 Pacifico Unione Europea Per l assistenza tecnica utilizzare i seguenti recapiti Tel 33 563 82 53 19 E mail techsupport cepheideurope fr Altri Paesi Contattare il rappresentante Cepheid locale Tabella dei simboli u 3 o o o Significato Numero di catologo Dispositivo medico per diagnostica n vitro Non riutilizzare Produttore Co
91. operchio della cartuccia e trasferire il contenuto dalle provette dei reagenti e dalla vaschetta portacampione alle camere della cartuccia come riportato di seguito figure 1 e S Pipettare l intero contenuto dalla vaschetta portacampione S 1 Pipettare almeno 2 1 ml del contenuto dalla provetta del reagente di lavaggio 1 2 Pipettare almeno 1 ml del contenuto dalla provetta del reagente di risciacquo 2 3 Pipettare almeno 1 ml del contenuto dalla provetta del reagente di eluizione 3 13 Chiudere il coperchio della cartuccia Assicurarsi che il coperchio scatti in posizione Importante accertarsi di caricare la cartuccia nello strumento GeneXpert Dx e avviare l analisi entro 15 minuti dalla preparazione della cartuccia 1 Reagente di lavaggio 2 Reagente di risciacquo 3 Reagente di eluizione S Campione Figure 1 Camere della cartuccia Xpert BCR ABL Monitor Esecuzione dell analisi Questa sezione elenca i passaggi di base dell esecuzione dell analisi Per istruzioni dettagliate vedere il Manuale dell operatore del sistema GeneXpert 1 Accendere il computer quindi accendere lo strumento GeneXpert Dx 2 Sul desktop di Windows fare doppio clic sull icona di collegamento GeneXpert Dx 3 Connettersi al software del sistema GeneXpert Dx con il proprio nome utilizzatore e la password 4 Nella finestra GeneXpert Dx System Sistema GeneXpert Dx fare clic su Define Assays Definisci i sag
92. ore you start the procedure briefly centrifuge the following reagents at 1000 g for 10 seconds Proteinase K PK Lysis Reagent LY Rinse Reagent 2 Elution Reagent 3 Preparing the Cartridge Remove the Sample Preparation reagents from the sealed tray To the empty 5 ml vial labeled Sample Container S add 40 pl of Proteinase K PK To the Sample Container S already containing Proteinase K add 200 ul of blood specimen Vortex for 5 seconds Incubate at room temperature for 1 minute To the Sample Container S add 1 ml of Lysis Reagent LY Vortex for 10 seconds Incubate at room temperature for 10 minutes DR E O i AID UE To the Sample Container S add 1 ml of 100 ethanol 10 Vortex for 10 seconds Set aside 11 Remove a cartridge from the sealed tray 4 300 4073 Rev B February 2006 12 13 Procedure Open the cartridge lid and transfer the contents from the reagent tubes and the Sample Container to the cartridge chambers as follows figure 1 e S Pipette the entire contents from the Sample Container S e 1 Pipette at least 2 1 ml of the contents from the Wash Reagent tube 1 e 2 Pipette at least 1 ml of the contents from the Rinse Reagent tube 2 e 3 Pipette at least 1 ml of the contents from the Elution Reagent tube 3 Close the cartridge lid Make sure the lid snaps firmly into place Important Be sure to load the cartridge into the GeneXpert Dx instrument and start t
93. puede reaccionar con el cobre el plomo el bronce o las soldaduras de las cafierfas y generar una acumulaci n de compuestos altamente explosivos de azidas de plomo y cobre 21 El reactivo de lavado contiene tiocianato de guanidina que puede formar compuestos altamente reactivos si se combina con lejia Si el l quido que contiene este reactivo se derrama debe limpiar el rea con detergente de laboratorio y agua En caso de no seguir los procedimientos y directrices descritos en este documento o de utilizar reactivos distintos a los suministrados con este kit se pueden generar resultados incorrectos o efectos adversos Por ejemplo no a ada m s cantidad de la necesaria en el caso de la muestra y los reactivos Una cifra de leucocitos excesivamente alta puede aumentar la presi n del cartucho y anular los experimentos Si el cartucho Xpert BCR ABL Monitor se cae o se agita despu s de a adir la muestra y los reactivos el contenido se puede derramar en los compartimentos incorrectos y esto puede generar resultados no v lidos El uso de tubos deformados o rotos tambi n puede generar resultados incorrectos No agite ni deje caer el cartucho Si el tubo de reacci n est deformado o roto no utilice el cartucho 300 4073 Rev B febrero de 2006 45 Espanol Recogida y transporte de muestras Recoja las muestras de sangre perif rica de acuerdo con las t cnicas estandar para TI RCP de cada centro Recoja las muestras de sangre en tubos que
94. rchen 2 pipettieren 3 mindestens 1 ml des Inhalts aus dem Elutionsreagenzr hrchen 3 pipettieren Den Kartuschendeckel schlie en und sicherstellen da der Deckel fest eingerastet ist Wichtig Sicher stellen da die Kartusche in das GeneXpert Dx Instrument geladen ist und den Test innerhalb von 15 Minuten nach Vorbereitung der Kartusche starten 1 Waschreagenz 2 Sp lreagenz 3 Elutionsreagenz S Probe Abbildung Xpert BCR ABL Monitorkassettenkammern Testdurchf hrung In diesem Abschnitt werden die Grundschritte der Testausf hrung beschrieben F r genauere Anweisungen das Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System verwenden 1 2 3 4 Den Computer und anschlie end das GeneXpert Dx Instrument einschalten Doppelklick auf dem Windows Desktop auf das Symbol GeneXpert Dx Mit Ihrem Benutzernamen und Kennwort bei der GeneXpert Dx Systemsoftware anmelden Im Fenster des GeneXpert Dx Systems auf Define Assays Untersuchungen definieren klicken und sicherstellen dass die Xpert BCR ABL Monitor Untersuchung in die Software importiert wird Siehe dazu die Hinweise auf der Untersuchungs CD Sollte kein Xpert BCR ABL Monitor CD zur Verf gung stehen den Technischen Support anrufen 5 Im Fenster GeneXpert Dx System auf Create Test Test erstellen klicken Das Fenster Create Test Test erstellen wird ge ffnet 10 11 Den Strichcode der Xpert BCR ABL Monitorkartusche einscannen
95. recision was estimated in accordance with the CLSI guideline for evaluation of precision performance of clinical chemistry devices 22 Table 1 Assay precision BCR ABL ABL Site Sample N Ave BCR ABL ABL Std Dev 95 CI CV 1 Negative BCR ABL 20 lt 0 000133 negative _ _ 2 Negative BCR ABL 20 lt 0 000175 negative _ 3 Negative BCR ABL 20 lt 0 000163 negative Overall Negative BCR ABL 60 lt 0 000157 negative 1 Low BCR ABL 20 0 00477 0 00477 0 00218 0 00737 100 0 2 Low BCR ABL 19 0 00285 0 00285 0 00125 0 00445 100 0 3 Low BCR ABL 20 0 00528 0 00528 0 00241 0 00815 100 0 Overall Low BCR ABL 59 0 00430 0 00524 0 00273 0 00587 121 8 1 Moderate BCR ABL 20 1 003 0 324 0 827 1 179 32 3 2 Moderate BCR ABL 20 0 856 0 427 0 624 1 088 49 8 3 Moderate BCR ABL 19 1 005 0 433 0 762 1 248 43 1 Overall Moderate BCR ABL 59 0 954 0 397 0 835 1 073 41 6 1 High BCR ABL 20 12 18 2 40 10 88 13 49 19 7 2 High BCR ABL 20 12 34 7 31 8 36 16 32 59 2 3 High BCR ABL 20 12 18 4 10 9 95 14 41 33 7 Overall High BCR ABL 60 12 24 5 03 10 74 13 73 41 1 Clinical Performance The performance of the assay was tested at three sites using a collection of 46 samples from patients with CML Both sites also ran their laboratory developed assay for comparison The data were grouped into three categories
96. rget Delta Ct Delta Ct Obiettivo del software del sistema GeneXpert Dx figure 2 rapporto BCR ABL ABL Eyc Ace 100 Esempi E ace Specifico per il lotto 1 915 AC Analisi 2 9 rapporto BCR ABL ABL 1 915 2 x 100 15 195 Risultato positivo per BCR ABL rilevato ad un livello di 15 195 62 300 4073 Rev B Febbraio 2006 Interpretazione dei risultati Utilizzare il valore per AC Figure 2 Finestra GeneXpert Dx System Sistema GeneXpert Dx View Results Visualizza risultati risultato positivo 300 4073 Rev B Febbraio 2006 63 Italiano Analisi negative BCR ABL per valori ABL maggiori di 12 ma minori di 18 se BCR ABL non rilevabile prima di riportare i risultati calcolare un rapporto teorico BCR ABL Per compiere questa operazione sottrarre 32 dal valore ABL C dell analisi ABL Ct di analisi 32 Il valore ABL C si ottiene nella finestra View Results Visualizza risultati colonna Ct del software del sistema GeneXpert Dx figure 3 Calcolare la rapporto BCR ABL teorico Riportare un risultato minore della del rapporto teorico il valore che sarebbe stato osservato se un valore BCR ABL C vero di 32 fosse stato misurato Esempio Enc specifico per il lotto 1 915 ABL C Analisi 15 4 AC teorico 15 4 32 16 6 rapporto BCR ABL ABL 1 915 6166 x 100 0 0021 Risultato BCR ABL non rilevabile in corrispondenza del limite di rilevamento di 0 0021 Se
97. ringen Variabilit t kann die endogene Kontrolle auch zum Nachweis einer Verschmutzung der Probe mit Hemmstoffen eingesetzt werden Die endogene Kontrolle wird der Objektprobe entnommen Sondenpriifung Dabei werden Vorhandensein und Integrit t der markierten Sonden berpr ft Lautet der Status des Sondentests Pas Bestanden bedeutet dies dass die Ergebnisse des Sondentests die Akzeptanzkriterien erf llen Interpretation der Ergebnisse G ltige ABL C e ABL C muss mindestens 12 oder maximal 18 betragen wobei der Endpunktwert mindestens 200 sein muss Betr gt der ABL C Wert weniger als 12 der Endpunkt weniger als 200 oder ist die PCR Kurve deformiert den Test mit 20 ul der Originalprobe wiederholen Ist der ABL C Wert gr er als 18 den Test mit einer frischen Probe wiederholen Giiltige positive BCR ABL C ABL C muss mindestens 12 oder maximal 32 betragen wobei der Endpunkt mindestens 40 sein muss Wenn der BCR ABL C Wert weniger als 12 betr gt den Test mit 20 pl der Originalprobe wiederholen Ist der BCR ABL C Wert gr er als 32 werden die BCR ABL Transkripte nicht nachgewiesen Qualitative Ergebnisse Jeder BCR ABL C Wert unter 32 mit einem g ltigen ABL C Wert f hrt zu einem positiven Nachweis von BCR ABL Transkripten Das Fehlen eines BCR ABL C Werts oder ein BCR ABL Werts ber 32 zusammen mit einem g ltigen ABL Wert wird f r BCR ABL als nicht nachweisbar bezeichnet Quantitative Erg
98. s Blood 1995 85 9 2632 8 14 Olavarria E Kanfer E Szydlo R et al Early detection of BCR ABL transcripts by quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction predicts outcome after allogeneic stem cell transplantation for chronic myeloid leukemia Blood 2001 97 6 1560 5 15 Gabert J Beillard E van der Velden VH et al Standardization and quality control studies of real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia A Europe Against Cancer Program 16 Gabert J Beillard E van der Velden VH et al Evaluation of candidate control genes for diagnosis and residual disease detection in leukemic patients using real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction RT PCR a Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 17 2474 2486 17 van der Velden VH Boeckx N Gonzalez M et al Differential stability of control gene and fusion gene transcripts over time may hamper accurate quantification of minimal residual disease a study within the Europe Against Cancer Program Leukemia 2004 18 884 886 18 van der Velden VH Hochhaus A Cazzaniga G Szczepanski T Gabert J van Dongen JJ Detection of minimal residual disease in hematologic malignancies by real time quantitative PCR principles approaches and laboratory aspects Leukemia 2003 17 1013 1034 19 World Health Organization Guidelines on Standard Operating Pr
99. s les r actifs GBS Xpert par d autres r actifs Apres un certain temps l azoture de sodium peut r agir avec le cuivre le plomb le laiton ou la brasure dans les plomberies pour former une accumulation de compos s fortement explosifs d azoture de plomb et d azoture de cuivre 1 Le r actif de lavage contient de la guanidine thiocyanate qui peut former des compos s hautement r actifs lorsqu elle est combin e avec de l eau de Javel Si du liquide contenant ce r actif est renvers nettoyez la zone avec du d tergent de laboratoire et de l eau Ne pas suivre les proc dures et les conditions d crites dans ce document et utiliser d autres r actifs que ceux fournis dans ce kit peuvent entra ner des r sultats incorrects et des effets ind sirables Par exemple n ajoutez pas plus d chantillon et de r actifs que le volume requis Des num rations de globules blancs excessivement lev es peuvent faire monter la pression dans la cartouche et conduire des interruptions d exp rience Faire tomber ou secouer les cartouches du dispositif BCR ABL Xpert apr s avoir ajout un chantillon et des r actifs peut entra ner le d versement de son contenu dans les mauvaises chambres entra nant ainsi des r sultats non valides Des tubes de r action tordus ou cass s peuvent galement entra ner des r sultats non valides Ne secouez pas la cartouche et vitez de la faire tomber Si le tube de r action est tordu ou cass n uti
100. script after allogeneic marrow transplantation for chronic myeloid leukemia results and implications in 346 patients Blood 1995 85 9 2632 8 14 Olavarria E Kanfer E Szydlo R et al Early detection of BCR ABL transcripts by quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction predicts outcome after allogeneic stem cell transplantation for chronic myeloid leukemia Blood 2001 97 6 1560 5 15 Gabert J Beillard E van der Velden VH et al Standardization and quality control studies of real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia a Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 17 2318 2357 16 Beillard E Pallisgaard N van der Velden VH et al Evaluation of candidate control genes for diagnosis and residual disease detection in leukemic patients using real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction RT PCR a Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 17 2474 2486 17 van der Velden VH Boeckx N Gonzalez M et al Differential stability of control gene and fusion gene transcripts over time may hamper accurate quantification of minimal residual disease a study within the Europe Against Cancer Program Leukemia 2004 18 884 886 18 van der Velden VH Hochhaus A Cazzaniga G Szczepanski T Gabert J van Dongen JJ Detection of minimal residual disease in hematologic malignancies by real time quantita
101. se introduce en el software del sistema Durante el proceso de prueba el sistema GeneXpert Dx 1 introduce la muestra y los reactivos en los distintos compartimentos del cartucho 2 a sla el ARN total de la sangre completa mediante la uni n del ARN al material en fase s lida 3 lava y elimina los inhibidores 4 diluye el ARN 5 hidrata las perlas de reactivos y combina la mezcla con el ARN diluido 6 introduce la mezcla de la muestra y los reactivos en el tubo de reacci n 7 realiza comprobaciones de calidad para confirmar que la preparaci n de la muestra es correcta y 8 realiza el ensayo TI RCP seguido de una RCP en tiempo real integrada El proceso de prueba para BCR ABL dura aproximadamente 2 horas y 20 minutos 300 4073 Rev B febrero de 2006 43 Espanol Reactivos e instrumentos Material suministrado VW El kit Xpert BCR ABL Monitor BCR 100N 10 contiene reactivos suficientes para procesar 10 muestras de paciente o de control de calidad El kit incluye 10 paquetes de ensayo individuales Cada paquete de ensayo contiene lo siguiente Cartucho Xpert BCR ABL Monitor Iniciadores directo e inverso Sondas dNTP Transcriptasa inversa Polimerasa Taq Tris HCl pH 8 6 HEPES pH 7 2 KCl MgCl BSA alb mina s rica bovina e Reactivos para la preparaci n de muestras de sangre Contenedor de muestras S Proteinasa K PK 50 pl CaCl Glicerol Proteinasa K Tris HCl
102. sired configuration and corresponding catalog number Warnings and Precautions amp All biological specimens should be treated as if they are capable of transmitting infectious agents Because it is often impossible to know which might be infectious all human specimens should be treated with universal precautions Guidelines for specimen handling are available from the World Health Organization or U S Centers for Disease Control and Prevention 2 All hazardous materials should be disposed of according to your laboratory s safety guidelines Do not substitute Xpert EV reagents with other reagents Over a period of time sodium azide may react with copper lead brass or solder in plumbing systems to form an accumulation of the highly explosive compounds of lead azide and copper azide The Wash Reagent contains guanidine thiocyanate which can form highly reactive compounds when combined with bleach If liquid containing this reagent is spilled clean the area with laboratory detergent and water e Failure to follow procedures and conditions described in this document and use of reagents other than those provided in this kit can cause incorrect results and adverse effects For example do not add more than the required amount of sample and reagents Excessively high white blood cell counts might cause pressure to build in the cartridge and lead to aborted runs Dropping or shaking the Xpert BCR ABL Monitor cartridges
103. t al Standardization and quality control studies of real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia a Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 17 2318 2357 16 Beillard E Pallisgaard N van der Velden VH etal Evaluation of candidate control genes for diagnosis and residual disease detection in leukemic patients using real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction RT PCR a Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 17 2474 2486 17 van der Velden VH Boeckx N Gonzalez M et al Differential stability of control gene and fusion gene transcripts over time may hamper accurate quantification of minimal residual disease a study within the Europe Against Cancer Program Leukemia 2004 18 884 886 18 van der Velden VH Hochhaus A Cazzaniga G Szczepanski T Gabert J van Dongen JJ Detection of minimal residual disease in hematologic malignancies by real time quantitative PCR principles approaches and laboratory aspects Leukemia 2003 17 1013 1034 19 World Health Organization Guidelines on Standard Operating Procedures for HAEMATOLOGY from http w3 whosea org EN Section10 Section17 Section53 htm 20 U S Centers for Disease Control Morbidity and Mortality Weekly Review 1987 36 suppl 2S 2S 18S 21 NIOSH Publication No 2005 151 NIOSH Pocket Guide to Chemical Hazards September 2005 22 CLSI Evaluati
104. the GeneXpert Dx System software figure 2 ratio BCR ABL ABL Eyc ACH 100 Example Lot specific EAc 1 915 Test AC 2 9 ratio BCR ABL ABL 1 915 62 x 100 15 195 Result Positive for BCR ABL detected at the ratio of 15 195 6 300 4073 Rev B February 2006 Interpretation of Results Use the value for Test AC Figure 2 GeneXpert Dx System View Results window positive result 300 4073 Rev B February 2006 English BCR ABL Negative Tests For ABL values greater than 12 but less than 18 if BCR ABL is undetectable first calculate a theoretical BCR ABL ratio before reporting the results To do this subtract 32 from the test ABL C value test ABL Ct 32 The ABL C value is obtained from the View Results window Ct column of the GeneXpert Dx System software figure 3 Calculate the theoretical ratio BCR ABL Report a result as less than the theoretical ratio the value that would have been observed if a true BCR ABL C value of 32 were measured Example Lot specific EAc 1 915 Test ABL C 15 4 Theoretical A C 15 4 32 16 6 Theoretical ratio BCR ABL ABL 1 915 16 x 100 0 0021 Result BCR ABL not detectable at a detection limit of 0 0021 If no BCR ABL is detected use the ABL value to determine if additional testing is required For example if the ABL C value is greater than 15 the limit of detection might be greater than 0 001 If low levels of BC
105. tion and quality control studies of real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia A Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 1 40 7 Sawyers C Chronic Myeloid Leukemia NEJM 1999 340 17 1330 40 8 Deininger MW Goldman JM Melo JV The molecular biology of chronic myeloid leukemia Blood 2000 96 10 3343 56 Goldman JM Kaeda JS Cross NC Clinical decision making in chronic myeloid leukemia based on polymerase chain reaction analysis of minimal residual disease Blood 1999 94 4 1484 6 10 Radich JP The detection and significance of minimal residual disease in chronic myeloid leukemia Medicina B Aires 2000 60 Suppl 2 66 70 11 Hochhaus A Reiter A Skladny H et al Molecular monitoring of residual disease in chronic myelogenous leukemia patients after therapy Recent Results Cancer Res 1998 144 36 45 12 Hochhaus A Reiter A Skladny H et al Molecular heterogeneity in complete cytogenetic responders after interferon alpha therapy for chronic myelogenous leukemia low levels of minimal residual disease are associated with continuing remission German CML Study Group and the UK MRC CML Study Group Blood 2000 95 1 62 6 13 Radich JP Gehly G Gooley T et al Polymerase chain reaction detection of the BCR ABL fusion transcript after allogeneic marrow transplantation for chronic myeloid leukemia results and implications in 346 patient
106. tion of BCR ABL transcripts by quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction predicts outcome after allogeneic stem cell transplantation for chronic myeloid leukemia Blood 2001 97 6 1560 5 15 Gabert J Beillard E van der Velden VH et al Standardization and quality control studies of real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia a Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 17 2318 2357 16 Beillard E Pallisgaard N van der Velden VH etal Evaluation of candidate control genes for diagnosis and residual disease detection in leukemic patients using real time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction RT PCR a Europe Against Cancer Program Leukemia 2003 17 2474 2486 17 van der Velden VH Boeckx N Gonzalez M et al Differential stability of control gene and fusion gene transcripts over time may hamper accurate quantification of minimal residual disease a study within the Europe Against Cancer Program Leukemia 2004 18 884 886 18 van der Velden VH Hochhaus A Cazzaniga G Szczepanski T Gabert J van Dongen JJ Detection of minimal residual disease in hematologic malignancies by real time quantitative PCR principles approaches and laboratory aspects Leukemia 2003 17 1013 1034 19 World Health Organization Guidelines on Standard Operating Procedures for HAEMATOLOGY from http w3 whosea org
107. tive PCR principles approaches and laboratory aspects Leukemia 2003 17 1013 1034 19 World Health Organization Guidelines on Standard Operating Procedures for HAEMATOLOGY from http w3 whosea org EN Section10 Section17 Section53 htm 20 U S Centers for Disease Control Morbidity and Mortality Weekly Review 1987 36 suppl 2S 2S 18S 21 NIOSH Publication No 2005 151 NIOSH Pocket Guide to Chemical Hazards September 2005 22 CLSI Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices Approved Guideline CLSI document EP5 A ISBN 1 56238 368 X CLSI 940 West Valley Road Suite 1400 Wayne PA 19087 1898 USA 1999 12 300 4073 Rev B February 2006 Patent Notice to Purchaser Patent Notice to Purchaser Purchase of this product from Cepheid authorizes the purchaser to use this product one time for the purchaser s own internal use in conjunction with a Cepheid GeneXpert instrument under the following U S Patents and their foreign equivalents 6 374 684 6 878 540 6 818 185 6 881 541 5 958 349 6 391 541 6 887 693 6 431 476 and 6 739 531 THE PURCHASE OF THIS PRODUCT ALLOWS THE PURCHASER TO USE IT FOR THE PERFORMANCE OF DIAGNOSTIC SERVICES FOR HUMAN IN VITRO DIAGNOSTICS NO GENERAL PATENT OR OTHER LICENSE OF ANY KIND OTHER THAN THIS SPECIFIC RIGHT OF USE FROM PURCHASE IS GRANTED HEREBY NO OTHER RIGHTS ARE CONVEYED EXPRESSLY BY IMPLICATION OR ESTOPPEL TO ANY OTHER PATENTS FUTHERMORE NO RIGHTS FOR RESALE ARE CO
108. to the breakpoint cluster region BCR of chromosome 22 resulting in a fused BCR ABL gene 4 The fusion gene produces a protein p210 b2a2 and b3a2 a tyrosine kinase with deregulated activity that plays a key role in the development of CML Current Europe Against Cancer Program and National Comprehensive Cancer Network NCCN practice guidelines for management of patients with CML call for use of reverse transcription Polymerase Chain Reaction RT PCR assays during the initial workup of patients with chronic phase CML in monitoring for minimal residual disease and in identifying patients who may be at a high risk for relapse gt 15 RT PCR has been shown to be an accurate and highly sensitive method for detection of the BCR ABL fusion gene 14 and is more sensitive than Fluorescence In Situ Hybridization FISH or cytogenetics An additional advantage of quantitative PCR versus FISH and cytogenetics is the high correlation of PCR results obtained from bone marrow and peripheral blood samples 15 Therefore PCR could potentially reduce the bone marrow aspirations currently required in patients with CML Although quantitative PCR will likely become the standard for monitoring residual disease the method is currently not widely available because of variation in techniques and controls and the lack of commercially available assays 3 Principle of the Procedure The GeneXpert Dx System automates and integrates sample purification nucleic a
109. ueba En el cuadro de di logo que aparece escriba la contrase a 10 Abra la puerta del m dulo del instrumento mientras la luz est parpadeando en verde y cargue el cartucho Cierre la puerta Una vez finalizada la prueba la luz del m dulo del instrumento se apaga 11 Abra la puerta del m dulo del instrumento y retire el cartucho Siga las normas de seguridad del laboratorio para desechar el cartucho 300 4073 Rev B febrero de 2006 47 Espanol Visualizaci n e impresi n de los resultados Si desea obtener instrucciones detalladas sobre c mo ver e imprimir los resultados consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx Control de calidad Cada prueba contiene un control end geno ABL y un control de comprobaci n de sonda No se necesita ning n control externo No obstante si desea realizar un control de calidad adicional puede analizar dos controles externos una vez al mes Control end geno normaliza los objetivos y garantiza el uso de una cantidad de muestra suficiente en la prueba Debido a su escasa variabilidad el control end geno tambi n se puede utilizar para indicar la contaminaci n del inhibidor y la muestra El control end geno se toma de la muestra Comprobaci n de sonda se confirma la presencia e integridad de las sondas etiquetadas El estado de comprobaci n de sonda de aprobado indica que los resultados de dicha comprobaci n cumplen los criterios de aceptaci n Interpretaci n de los
110. uf gen der Probe und Reagenzien kann der Beh lterinhalt in die falschen Kammern gelangen und somit zu ung ltigen Ergebnissen f hren wenn die Xpert BCR ABL Monitorkartusche herunterf llt oder gesch ttelt wird Auch verbogene oder besch digte Reaktionsgef e k nnen ung ltige Ergebnisse hervorrufen Kartusche nicht sch tteln oder fallen lassen Die Kartusche nicht verwenden falls zerbrochen oder verbogen zerbrochen oder verbogen 300 4073 Rev B Februar 2006 31 Deutsch Probensammlung und transport Periphere Blutproben sammeln gem den Richtlinien der einzelnen Institutionen f r RT PCR Blutproben in R hrchen sammeln die EDTA oder Natriumcitrat als Antikoagulanz enthalten Blutproben bei 2 8 C lagern und innerhalb von 48 Stunden nach der Entnahme testen Heparin nicht als Antikoagulanz verwenden da es die PCR Reaktion hemmen kann Prozedur Vorsichtshinweise Halten Sie sich an die Sicherheitsprozeduren Ihres Labors f r den Umgang mit Chemikalien und der Handhabung von Proben Bestimmen Sie 1 Pipetten und Reagenziensatz f r die Probenvorbereitung Trennen Sie gebrauchte Kartuschen von ungebrauchten Kartuschen und Reagenzien ffnen Sie den Xpert BCR ABL Monitorkartuschendeckel nur um Proben und Reagenzien hinzuzuf gen Sch tteln Sie die Kartusche nicht Laden Sie keine Xpert BCR ABL Monitorkartusche die hinuntergefallen ist oder gesch ttelt wurde Laden Sie keine Kartusche die besch digt ist ffnen Sie
111. uplicadas para las muestras de 30 pg y 10 pg Limit of Detection and Linearity Average Delta Ct Selected Data Excluded from Curve 10 Ave Delta Ct Excluded Data Ave Delta Ct Linear Ave Delta Ct s 5 0 __ 21 A medida que la prueba introduce m s ABL AUc se aproxima a o g 5 3 10 15 4 K562 RNA K562 Cells Dropouts 5opg Approx 2 0 6 20 4 _ 30pg Approx 1 1 6 25 i 10 pg lt 1 3 6 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Log K562 RNA pg Figura 4 Datos de limite de detecci n y linealidad 300 4073 Rev B febrero de 2006 53 Espanol Bibliografia TJemal A Murray T Ward E et al Cancer Statistics 2005 CA Cancer J Clin 2005 55 10 30 7 Rowley JD A new consistent chromosomal abnormality in chronic myelogenous leukemia identified by quinacrine fluorescence and Giemsa staining Nature 1973 243 290 293 3 NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology Chronic Myelogenous Leukemia Version 1 2006 n Deininger M Buchdunger E Druker BJ The development of imatinib as a therapeutic agent for chronic myeloid leukemia Blood 2005 105 7 2640 2653 3 Kantarjian HM Talpaz M Cortes J et al Quantitative polymerase chain reaction monitoring of BCR ABL during therapy with imatinib mesylate STI571 Gleevec in chronic phase chronic myelogenous leukemia Clin Cancer Res 2003 9 1 160 6 6 Gabert J et al Standardiza
112. ure 15 la limite de d tection peut tre sup rieure 0 001 Si des niveaux faibles de BCR ABL sont suspect s recommencez le test Des valeurs de C ABL lev es peuvent galement imposer de recommencer le test Utilisez cette valeur pour le C ABL test Test and Analyte Result Detail Errors History Assay Name Xpert BCR ABL Monitor Version 1 Test Result NEGATIVE MANI Analyte Ct EndPt Analyte Probe Target Name Result Check Delta Ct Result BCR ABL 0 0 1 0 NEG PASS ABLE 5 4 4630 PASS PASS 500 300 Fluorescence 200 100 Legend Z BCR ABL Primary 7 ABL Primary ISI is Figure 3 Syst me Dx GeneXpert fen tre View results Afficher les r sultats r sultats n gatifs 22 300 4073 Rev B F vrier 2006 Raisons pour lesquelles le test doit tre recommenc Raisons pour lesquelles le test doit tre recommenc Un r sultat INVALID et ou ND non d termin indique que l un des contr les ou les deux ABL ou contr le de la sonde a chou ou qu un probl me lors du process est survenu Lexp rience est non valide et doit tre recommenc e avec un nouvel chantillon Pour obtenir une description des messages d erreur et des informations de d pannage consultez le Manuel d utilisation du syst me DX GeneXpert Restrictions Les performances du dispositif BCR ABL Xpert
113. vo _ 3 BCR ABL negativo 20 lt 0 000163 negativo _ General BCR ABL negativo 60 lt 0 000157 negativo 1 BCR ABL bajo 20 0 00477 0 00477 0 00218 0 00737 100 0 2 BCR ABL bajo 19 0 00285 0 00285 0 00125 0 00445 100 0 3 BCR ABL bajo 20 0 00528 0 00528 0 00241 0 00815 100 0 General BCR ABL bajo 59 0 00430 0 00524 0 00273 0 00587 121 8 1 BCR ABL medio 20 1 003 0 324 0 827 1 179 32 3 2 BCR ABL medio 20 0 856 0 427 0 624 1 088 49 8 3 BCR ABL medio 19 1 005 0 433 0 762 1 248 43 1 General BCR ABL medio 59 0 954 0 397 0 835 1 073 41 6 1 BCR ABL alto 20 12 18 2 40 10 88 13 49 19 7 2 BCR ABL alto 20 12 34 7 31 8 36 16 32 59 2 3 BCR ABL alto 20 12 18 4 10 9 95 14 41 33 7 General BCR ABL alto 60 12 24 5 03 10 74 13 73 41 1 Rendimiento cl nico El rendimiento del ensayo se analiz en tres centros con un conjunto de 46 muestras de pacientes con LMC Ambos centros realizaron adem s un ensayo desarrollado en laboratorio a modo de comparaci n Los datos se agruparon en tres categor as Negativo lt 0 01 de BCR ABL detectado e Positivo bajo de 0 01 a 0 05 de BCR ABL detectado Positivo alto gt 0 05 de BCR ABL detectado 52 300 4073 Rev B febrero de 2006 Caracteristicas de rendimiento Table 2 Rendimiento del ensayo Resultados de pruebas Numero de muestras de LMC Negativo con ambos m todos 17 Negativo con el m to

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