estriol saliva - X-Lab Solutions SRL
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1. 0 4 Conjugu 1 flacon 1 mL Conjugu d cestriol avec peroxydase de raifort HRP DCE002 2602 0 5 Microplaque coat e 1 microplaque s cable Anticorps anti cestriol adsorb e sur microplaque DCE002 2603 0 6 Solution de lavage conc 50X 1 flacon 20 mL NaCl 45 g L Tween 20 55 g L DCE006 0 7 Substrat TMB 1 flacon 15 mL H 05 TMB 0 26 g L viter tout contact avec la peau DCE004 0 8 Solution d arr t 1 flacon 15 mL Acide sulfurique 0 15M viter le contact avec la peau DCE005 0 3 2 R actifs n cessaires non fournis dans le coffret Eau distill e 3 3 Mat riaux et instruments auxiliaires Distributeurs automatiques Lecteur pour microplaques 450 nm Dispositif de pr l vement de salive DKO063 R F 51 1534 500 Salivette Sarstedt Remarques Conserver tous les r actifs 2 8 C l abri de la lumi re N ouvrir le sachet du R actif 5 Microplaque Coat e qu apr s l avoir ramen temp rature ambiante et refermez le tout de suite apr s avoir pr lev les bandes utiliser une fois ouvert il est stable jusqu la date d ch ance du coffret Eviter de d tacher la feuille adh sive des bandes qui ne sont pas utilis es pendant l analyse en cours AVERTISSEMENTS Ce coffret est exclusivement pour usage in vitro et l essai doit tre ex cut par un personnel expert e Utilisez les dispositifs de protection individuelle pr vus pendant toute op ration avec les r actifs2. de striol dans les chantillons de salive Il est conseill pour le pr l vement de l chantillon d utiliser les tubes des Dispositifs de pr l vement de salive Diametra ou des Salivette Sarstedt REF 51 1534 500 6 4 1 M thode et limites Recueillir les chantillons de salive dans les temps prescrits Pour une meilleure reproductibilit et pr cision il est conseill de pr lever au moins 3 chantillons dans un intervalle de temps non inf rieur 2 heures et de constituer un pool avec ces sp cimens avant de les tester En l absence d indications sp cifiques aux fins du pr l vement de la salive il est possible de recueillir les chantillons tout moment en tenant toutefois en compte les facteurs suivants a Si le pr l vement de la salive doit tre effectu le matin il faut le faire avant de se laver les dents b Pendant la journ e attendre au moins une heure apr s avoir mang ou bu avant de recueillir les chantillons de salive c Il est tres important d obtenir un chantillon liquide non contamin par la nourriture des produits cosm tiques du sang du chewing gum ou d autres mati res trang res 6 4 2 Traitement de la salive A Dispositif de pr l vement de salive Diametra Faire passer la salive travers la paille et jusque dans l prouvette en verre 1 Centrifuger l chantillon pendant 15 minutes 3000 t min 2 Le d poser 20C pendant au moins 1 heure 3
3. fournis e Certains r actifs contiennent de petites quantit s de Proclin 300 comme conservateur Eviter tout contact avec peau et les muqueuses e Le Chromog ne TMB contient un irritant qui peut tre nocif si inhal ing r ou absorb travers la peau Pour emp cher des l sions viter toute inhalation ou ingestion par la peau ou les yeux et tout contact cutan ou oculaire e La solution d arr t est constitu e d une solution d acide sulfurique dilu L acide sulfurique est poison et corrosif et peut tre toxique s il est ing r Pour pr venir toute br lure chimique possible viter le contact avec la peau et les yeux e viter l exposition du r actif TMB H20 la lumi re directe du soleil aux m taux et aux substances oxydantes Ne pas congeler la solution e Cette m thode permet de d terminer des concentrations d striol de 2 5 4000 pg mL e L administration de st ro des naturels ou synth tiques peut alt rer les taux salivaires d striol PR CAUTIONS D USAGE Observer rigoureusement l ordre des passages indiqu dans le pr sent protocole e Tous les r actifs doivent tre conserv s une temp rature contr l e de 2 8 C dans leurs conteneurs originaux Les exceptions sont clairement marqu s e Avant usage laisser reposer tous les l ments des coffrets et les chantillons temp rature ambiante 22 28 C et m langer avec soin e Ne pas changer des l ments du coffret p
4. veloppement de l enfant Les taux d striol sont comparables chez les femmes non enceintes ou en m nopause et chez les hommes 2 PRINCIPE DE LA M THODE L striol antig ne pr sent dans l chantillon rentre en comp tition avec l antig ne marqu la peroxydase par rapport l anticorps anti oestriol adsorb sur microplaque phase solide Apr s une p riode donn e d incubation la s paration libre li est obtenue par simple lavage de la phase solide L enzyme pr sent dans la r action li e catalyse la r action entre le substrat H202 et le substrat TMB TMB en d veloppant une coloration bleue qui vire au jaune apr s ajout de la solution d arr t H2501 L intensit de la couleur d velopp e est inversement proportionnelle la concentration d striol dans l chantillon oC rc 96 tests DKO026 La concentration d oestriol dans l chantillon est calcul e sur la base d une s rie de Etalons 3 REACTIFS MATERIAUX ET INSTRUMENTS 3 1 R actifs et mat riaux fournis dans le coffret 1 talons d striol 6 flacons 1 mL chaque STDO R F DCE002 2606 0 STD1 R F DCE002 2607 0 STD2 R F DCE002 2608 0 STD3 REF DCE002 2609 0 STD4 REF DCE002 2610 0 STD5 R F DCE002 2611 0 2 Contr les 2 flacons 1 mL chaque Contr le L DCE045 2601 0 REF Contr le M DCE045 2602 0 3 Tampon d incubation 1 flacon 30 mL Tampon phosphate pH 7 5 BSA 1 g L agents de conservation DCE010
5. D congeler l chantillon 4 Centrifuger encore pendant 15 minutes 3000 t min 5 L chantillon de salive est alors pr s pour tre test 6 Conserver l chantillon 2 8 C pendant une semaine ou 20C pendant une p riode de temps plus longue B Salivette Sarstedt voir ifu 6 5 Proc dure Puisqu il faut op rer en double pr parer deux puits pour chaque point de la courbe d talonnage So Ss deux pour chaque contr le deux pour chaque chantillon et un pour le blanc talon DE chantillon cn talon So Ss Conjugu dilu 100 uL 100 uL s Laisser incuber 1h temp rature ambiante 22 28 C is E contenu de chaque puits laver les puits trois fois avec 300 uL de solution de lavage dilu e Substrat TMB 100 uL 100 uL 100 uL Laisser incuber 15 minutes temp rature ambiante 22 28 C l abri de la lumi re Solution ns ll Agiter doucement la microplaque Lire l absorbance E 450 nm en mettant z ro avec le blanc 7 CONTR LE DE QUALIT Chaque laboratoire devrait analyser les chantillons dans la gamme des niveaux lev s normaux et bas d striol pour v rifier les prestations de l analyse Ces chantillons devraient tre trait s comme inconnus et les valeurs d termin es devraient tre dans chaque test effectu Les tableaux de contr le de la qualit devraient tre observ s afin de suivre les prestations des r actifs fournis Des m thodes stati
6. DiaMletr ESTRIOL SALIVA CE pour analyses de routine D termination immunoenzymatique directe d cestriol dans la salive LOT IVD Ca Voir l tiquette externe USAGE PR VU M thode immunoenzymatique colorim trique par comp tition pour la d termination quantitative d striol dans la salive Le kit Estriol Saliva est destin exclusivement un usage en laboratoire 1 SIGNIFICATION CLINIQUE L oestriol est l un des trois strog nes principaux produits par le corps humain Il est produit avant tout pendant la grossesse partir s une unit materno placento f tale La production foeto placentaire d striol entra ne une augmentation progressive des niveaux circulants maternels atteignant un pic en fin de gestation consid rablement sup rieurs aux niveaux des femmes non enceintes Dans la circulation maternelle l striol est rapidement conjugu dans le foie et excr t par voie urinaire avec une demi vie de 20 minutes environ Puisque la production normale de l striol d pend d une circulation materno placento f tale intacte et d un m tabolisme foetal fonctionnel les taux maternels d striol servent contr ler l tat du f tus pendant la grossesse en particulier pendant le troisi me trimestre La DHEA S produite par le cortex de la surr nale du f tus est converti en striol par le placenta Les niveaux anormalement bas peuvent indiquer chez une femme enceinte un probl me dans le d
7. MATION RR pregazione dei simboli xplanation of symbols xplication des symboles 1gnificado de los simbolos Verwendete Symbole Explica ao dos simbolos In vitro Diagnostikum Producto sanitario para diagn stico 1n vitro Dispositif m dical de diagnostic 1n vitro In vitro Diagnostic Medical Device Dispositivo medico diagnostico 1n vitro Dispositivos medicos de diagnostico in vitro Bestellnummer N mero de cat logo R f rences du catalogue Catalogue number Numero di Catalogo N mero do cat logo Verwendbar bis Establa hasta usar antes de ltimo d a del mes Utiliser avant dernier jour du mois indiqu Use by last day of the month Utilizzare prima del ultimo giorno del mese Utilizar antes ultimo dia do m s Gebrauchsanweisung beachten Consultar las instrucciones Consulter le mode d emploi Consult instructions for use Consultare le istruzioni per l uso Consultar instru es para uso Ausreichend f r n Tests 22 4722 Contenido suficiente para n tests 66 499 Contenu suffisant pour n tests 66 499 Contains sufficient for n tests Contenuto sufficiente per n saggi 66 499 Cont m o suficiente para n testes Temperaturbereich Limitaci n de temperatura Limites de temp rature de conservation Temperature limitation Limiti di temperatura Temperaturas limites de conserva o Hergestellt von Elaborado por Fabriqu par Manufacturer Produttore Produzido
8. ents lavages insuffisants conjugu non enti rement aspir CVS intra essai lev les r actifs et ou les bandes n ont pas atteint la temp rature ambiante avant usage le dispositif de lavage pour microplaques ne lave pas correctement suggestion nettoyer la t te du dispositif de lavage CV inter essai lev conditions d incubation non constantes temps ou temp rature contr les et chantillons non distribu s en m me temps avec les m mes intervalles contr ler l ordre de distribution variabilit intrins que des op rateurs
9. et al J Clin Endoc Metab 56 454 CHARLES ON 4 Bagger P V et al Acta Obstet Gynec Scand 60 187 1981 5 Osterman T M et al Clin Chem 25 5 716 1979 10 PARAMETRES CARACT RISTIQUES 10 1 Pr cision 6 Wisdom G B Clin Chem 22 8 1243 1255 10 1 1 Intra essai 1976 La variabilit l int rieur du m me coffret a t d termin e en r pliquant 16x la mesure de deux contr les salivaires diff rents La variabilit intra d 10 2011 DCM026 10 essai est lt 9 7 10 1 2 Inter essai La variabilit entre coffrets diff rents a t d termin e en r pliquant 10x la mesure de deux s rums de contr le diff rents avec des coffrets appartenant des lots diff rents La variabilit inter essai est lt 13 7 10 2 Exactitude L preuve de r cup ration conduite sur un chantillon de salive enrichi avec 50 300 2000 pg mL d striol a donn une valeur moyenne SD de 100 6 14 6 10 3 Sensibilit La concentration minimale d oestriol mesurable qui pouvant tre distingu es par l talon z ro est de 1 0 pg mL avec une limite de confiance de 95 DiaMetra S r l Si ge social Via Garibaldi 18 20090 SEGRATE Ml Italie T l 0039 02 2139184 02 26921595 Fax 0039 02 2133354 Fabricant Via Giustozzi 35 35a Z I Paciana 06034 FOLIGNO PG Italie T l 0039 0762 24851 Fax 0039 0762 316197 Courriel info diametra com O DIA METRA SRL o ii NOTICE D INFOR
10. on Abraham 8 3 Calcul des r sultats Sur le graphique faire une interpolation des valeurs d absorbance relatives chaque chantillon et en lire la concentration correspondante en pg mL 17 pi oestriol lt 1x10 striol 3a glucoronate lt 1x10 striol 16a glucoronate lt 1x10 9 VALEURS DE R F RENCE Du fait que les valeurs d striol salive ont un rythme circadien nous sugg rons de recueillir les chantillons la m me heure 8 h A M Les valeurs suivantes peuvent servir d indication pr liminaire jusqu ce que chaque laboratoire tablisse sa propre fourchette de valeurs normales CC SD absolue pg mL pg mL 0 32 0 Pr m nopause 0 8 9 D 3200 1300 4100 1600 4500 1700 5000 2000 o Prednisone lt 1x10 lt 1x10 10 5 Corr lation Le coffret d striol salive Diametra a t compar un coffret disponible en commerce 30 chantillons de salive ont t test s La courbe de r gression est y 1 03x 0 68 r 0 988 y Coffret Diametra Elisa pou l striol salive x Coffret Salimetrics Elisa pou l striol salive 11 DISPOSITIONS RELATIVES L LIMINATION DES D CHETS Les r actifs doivent tre jet s conform ment aux lois en vigueur BIBLIOGRAPHIE 1 Fisher Rasmussen W et al Acta Obstet Gynecol Scand 60 417 420 1981 2 Truran P L et al Clin Chem 28 12 2393 5300 2000 3 Hi R F
11. por Herstellungs datum Fecha de fabricacion Date de fabrication Date of manufacture Data di produzione Data de produ o Biogef hrdung Riesgo biol gico Risque biologique Biological risk Rischio biologico Risco biol gico Chargenbezeichnung Codigo de lote Num ro de lot Batch code Codice del lotto Codigo do lote Inhalt Contenido del estuche Contenu du coffret Contents of kit Contenuto del kit Conte do do kit ee DIA METRA SRL 2 SUGGESTIONS POUR LA R SOLUTION DES PROBL MES D PANNAGE ERREUR CAUSES POSSIBLES SUGGESTIONS Aucune r action colorim trique du dosage non distribution du conjugu contamination du conjugu et ou du substrat erreurs dans l ex cution du dosage par ex distribution accidentelle des r actifs dans le mauvais ordre ou en provenance des mauvais flacons etc R action trop faible DO trop basse conjugu non appropri par ex ne provenant pas du coffret original temps d incubation trop court temp rature d incubation trop basse R action trop intense DO trop lev e conjugu non appropri par ex ne provenant pas du coffret original temps d incubation trop long temp rature d incubation trop lev e mauvaise qualit de l eau utilis e pour la solution de lavage bas degr de d ionisation lavages insuffisants conjugu non enti rement aspir Valeurs inexplicablement hors plage contamination des pipettes embouts ou r cipi
12. rovenant de lots diff rents Les dates d ch ance rapport es sur les tiquettes des r cipients d exp dition et sur celles de tous les ampoules doivent tre observ es Ne pas utiliser d l ments au del de leur date d ch ance e Si vous utilisez des quipements automatis s est de la responsabilit de l utilisateur de s assurer que le kit a t correctement valid es e Un lavage incomplet ou peu soign et une aspiration insuffisante du liquide dans les puits des tests ELISA peuvent provoquer un manque de pr cision et ou un arri re plan lev e Il est important de maintenir constants les temps de r action dans chaque puits afin d obtenir les e a r sultats susceptibles d tre r p t s Le pipetage des chantillons ne doit pas durer plus de 10 minutes afin d viter tout r sultat incorrect S il se prolonge au del des 10 minutes il est recommand de suivre l ordre de distribution Si vous devez utiliser plus d une microplaque il est conseill de r p ter la courbe dose r ponse e L ajout de la solution de substrat donne lieu une r action cin tique qui est interrompue par l ajout de la solution de blocage Par cons quent il est n cessaire d ajouter le substrat et la solution bloquante dans la s quence m me afin d liminer toute variation temporelle pendant la r action e Observer les instructions relatives l ex cution du contr le de qualit dans les laboratoires cliniques en testan
13. stiques appropri es devraient tre employ es pour v rifier la tendance Le laboratoire devrait d finir des limites d acceptabilit des prestations d analyse Les autres param tres qui devraient tre contr l s incluent les interceptions de 80 50 et 20 de la courbe d talonnage pour valuer la reproductibilit De plus la capacit d absorption maximale devrait tre constante avec l exp rience pr c dente La d viation Significative par rapport aux prestations tablies peut indiquer un changement non observ des tats ou une d gradation exp rimentale des r actifs du coffret Des r actifs frais doivent tre utilis s pour d terminer le motif des variations 7 1 Interpr tation des r sultats Si un ordinateur a t utilis pour calculer les r sultats il faut imp rativement que les valeurs des calibrateurs tombent dans les 10 des concentrations assign es 8 R SULTATS 8 1 Extinction moyenne Calculer l extinction moyenne Em de chaque point de la courbe d talonnage So S5 et de chaque chantillon 8 2 Courbe d talonnage Sur un graphique des valeurs d absorbance tracer les valeurs calcul es des extinctions moyennes Em de chaque talon SoS5 en fonction des concentrations Tracer la meilleur courbe passant par les points d talonnage par ex logistique quatre param tres 10 4 Sp cificit L anticorps employ pr sente les r actions crois es suivantes calcul es 50 sel
14. t les contr les et ou les groupes de s rum e Observer la plus grande pr cision dans la reconstitution et la distribution des r actifs e Ne pas utiliser des chantillons microbiologiquement contamin s ou des chantillons hautement lip miques ou h molys s e Les lecteurs de microplaques mesurent dans le sens vertical Ne pas toucher le fond des puits 6 PROC DURE 6 1 Pr paration des talons So S5 Avant utilisation laisser sur l agitateur rotatif pendant au moins 5 minutes Les concentrations suivantes d oestriol correspondent aux talons ISIS Se S S S pg mL O 25 15 100 600 4000 Stables 6 mois 2 8 C compter de l ouverture des flacons Pour Unites SI pg mL x 3 5 pmol L 6 2 Pr paration de la solution de lavage Avant l usage diluer le contenu de chaque flacon de solution de lavage concentr e et tamponn e 50x avec de l eau distill e jusqu un volume de 1000 mL Pour pr parer des volumes moindres respecter le rapport de dilution de 1 50 La solution de lavage dilu e est stable 2 8 C pendant au moins 30 jours 6 3 Pr paration du conjugu dilu Pr parer imm diatement avant l usage Diluer 10 uL de Conjugu r actif 4 1 mL de Tampon d incubation r actif 3 Mettre agiter d licatement sur un agitateur rotatif Stables pendant 3 heures temp rature ambiante 22 28 C 6 4 Pr paration de l chantillon Ce kit permet la d termination
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